Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы при описторхозе

На правах рукописи

Адиатулин Ильяс Фаритович

□ОЗ165029

Ветерипарно-санитарная экспертиза рыбы при описторхозе

16.00.06. - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и Ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

О 6 т иов

Москва-2008

003165029

Работа выполнена в лаборатории ветеринарной санитарии на государственной границе, транспорте и мясоперерабатывающих предприятиях Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ РАСХН)

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

М П Бутко (ВНИИВСГЭ)

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор В И Белоусов

(Россельхознадзор)

доктор биологических наук, профессор В В Светличкин

(ВНИИВСГЭ)

Ведущая организация: Всероссийскийнаучно-исследовательский институт гельминтологии им К И Скрябина

Защита состоится «20» февраля 2008 г в 10 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д 006 008 01 при Всероссийском научно-исследовательском институ те ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе,5)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии

Автореферат разослан «]£» января 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Е С Майстренко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Одной из основных задач ветеринарной службы является обеспечение населения безопасной и качественной рыбопродукцией (Борисова М Н, Яковлев С С, 2004) Рыба, являясь ценным пищевым продуктом, может стать причиной заболевания человека серьезными гельминтозами Наиболее тяжелым гельминтозом из числа трематодозов, распространенных на территории России, является описторхоз

Описторхоз — пероральный биогельминтоз, вызываемый трематодой из семейства ОркйюгсЬёае, Ор^ЙюгсЫй ГеЬпеиэ (Шуока, 1884) Заражение человека, кошек, собак, лисиц, песцов, свиней и некоторых других плотоядных животных (окончательных хозяев данного паразита) происходит при употреблении в пищу инвазированной личинками описторхисов рыбы семейства карповых (язь, елец, чёбак, вобла, лещ, красноперка и др) (Герасимов АС, 1999, Грищенко ЛИ, 1999, Соторов ПП, 1999, Акбаев М Ш., Быков В П, 2001, Судариков В Е , 2002; Фаттахов Р Г, 2004, Беэр С А,2005)

Ареал возбудителя описторхоза простирается практически непрерывно от Байкала до западных границ России с наивысшей интенсивностью циркуляции паразита в Обь-Иртышском бассейне, где сложилась наиболее неблагополучная эпидемиологическая и эпизоотическая ситуация Волжско-Камский бассейн является второй после Западной Сибири эндемичной по описторхозу территорией России (Никитин В В, Куимова Р Т, 1992, Довгалев А С, 1999) Выявлены очаги описторхоза и степень заражения в них людей (Успенский А В , Малахова Е И, Шубадеров В Я, 2007) По данным Всемирной Организации Здравоохранения за 1995 год заболело описторхозом, вызываемым О ГеЬпеиэ, более 2 млн человек По данным Роспотребнадзора, ежегодно на территории Российской Федерации регистрируется до 40 тыс больных описторхозом людей Выявлен описторхоз среди населения практически всех субъектов Российской Федерации, а заболеваемость описторхозом на 2005 год составила 30,5

человек на 100 тыс населения, а на долю описторхоза от всех биогельминтозов в год приходится 77,2% (Онищенко Г Г, 2002)

При ветеринарно-санитарной экспертизе рыбы описторхоз регистрировался в 2005 году 6,7%, в 2006г — в 5,4% случаев

В связи с этим в целях повышения эффективности ветеринарного контроля за рыбой и качеством пищевой продукции, получаемой из рыб, как возможных источников инвазионных заболеваний, необходимо, прежде всего, улучшить проведение ветеринарно-санитарной экспертизы и оценки рыб и рыбопродуктов, в частности, при описторхозе

Этим обосновывается выбор и актуальность исследовательской работы

Цель и задачи исследований. Целью настоящего исследования является разработка вопросов ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе с решением следующих задач

1 Изучить распространенность описторхоза среди рыб в различных регионах Российской Федерации

2 Провести сравнительную оценку паразитологических методов исследования рыб при описторхозе

3 Провести исследования по изучению органолептических и физико-химических показателей мяса рыб, пораженных описторхозом, с учетом интенсивности инвазии

4 Изучить общий химический состав и биологическую ценность мяса рыб, пораженных описторхозом

5 Провести микробиологические исследования мяса рыб при данном заболевании

6 Изучить устойчивость метацеркарий описторхисов к воздействию ряда физических и химических факторов

7 На основании проведенных исследований подготовить «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе»

Научная новизна. Изучена зараженность описторхозом различных видов пресноводных рыб бассейнов рек Обь (среднее течение в районе г. Ханты-Мансийска), Волга и Большой Могой (в районе г Астрахани) и Тавда (приток Тобола в районе г Тавда) с определением экстенсивности (ЭИ) и интенсивности инвазии (ИИ)

Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме с другими метацеркариями трематод, а именно Paracaenogommus ovatus (сем. Prohemistomidae), Bolbophorus confusus (сем Posthodiplostomidae) и Hysteromorpha tribola (сем Diplostomidae)

С учетом интенсивности инвазии определены органолептические, физико-химические и микробиологические показатели рыб, пораженных описторхозом

При описторхозе с высокой интенсивностью инвазии из мяса рыб выделяется сопутствующая микрофлора (Е coli)

Впервые выявлена зависимость, что повышение интенсивности инвазии, сопровождающееся повышением влаги в мясе рыб, сопровождается уменьшением содержания белка, жира, золы, кальция и фосфора, что снижает его (мяса) калорийность в сравнении со здоровой рыбой

Гистологическими исследованиями установлено, что заболевание рыб описторхозом сопровождается образованием в местах локализации метацеркарий капсул из соединительной ткани и поражением мышечной ткани в виде дегенеративных изменений

Проведенными исследованиями разработаны (в дополнение к существующим) режимы обезвреживания мяса рыб, пораженных описторхозом, в частности замораживание при —18 °С и экспозиции 7 суток и -20 °С - 48ч, воздействие высокими температурами (+60 °С и экспозиции 35 мин, варка — 10 мин и жарка - 15 мин), посол рыбы при применении хлорида натрия в концентрации 50 г/л в течение 30 суток, 100 г/л - 21 сутки и 150 г/л - 10 суток, применение СВЧ при мощности 900 Вт и экспозиции 3,5 мин и 600 Вт и экспозиции 4,5 мин

Установлено, что применение процессов вяления и воздействие ультразвуком не приводят к обезвреживанию от описторхисов

Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований подготовлены предложения по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыб при описторхозе и определению устойчивости описторхисов к физическим и химическим факторам, которые включены в разработанные нами «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе» (Утв Отделением ветеринарной медицины РАСХН 04 09 2007 г )

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на

- заседаниях ученого совета ВНИИВСГЭ (2006-2007 г ),

Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» (Улан-Удэ, 5-10 09 2006 г.),

- межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2007 г ) Публикации. По результатам выполненных исследований

опубликовано 5 научных стагей

Объем и структура работы. Диссертация изложена иа 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы и приложений Работа содержит 21 таблицу, 11 рисунков, в том числе 2 диаграммы Список литературы включает 126 источников отечественных и зарубежных авторов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы. Диссертационная работа выполнена в период с 2004 по 2007 гг, в лаборатории ветеринарной санитарии на государственной границе, транспорте и мясоперерабатывающих предприятиях ГНУ ВНИВСГЭ РАСХН, в бассейнах рек Обь, Волга с ее притоками и Тавда (приток Тобола), а также ГУ АО «Астраханская областная ветеринарная лаборатория», ГУ «Ханты-мансийская окружная ветеринарная лаборатория»,

ФГУ ЦНМВЛ, ГНПЛ «Дельта» (Москва), сотрудникам которых выражаем искреннюю благодарность за организационно-техническое содействие

Материалом для исследований служили рыбы, выловленные в акваториях рек Обь, Волга и Тавда Всего было исследовано 195 экземпляров рыб 4 отрядов, 6 семейств, 18 видов, а именно 40 - язя, 29 - красноперки, 5 -густеры, 3 - чехони, 27 - леща, 45 - воблы, 2 - чебака, 3 - линя, 9 -серебристого карася, 5 - карпа из отряда карпообразные (СурпшАогтеБ), семейства карповые (Сурптс1ас), 5 - осетра русского, 1 - осетра сибирского, 5 - стерляди из отряда осетрообразные (Аарепзспйэгтез), семейства осетровые (Асфепэепёае), 5 - налима из семейства тресковые (СасМае) отряда трескообразные (васЬ Гогтез), 5 - форели радужной из семейства лососевые (5а1тошс1ае), 1 - нельмы из семейства сиговые (Соге§ошс1ае), 5 - щуки из семейства щуковые (Езоск1ае) отряда лососеобразные (8а1тошГогшез) Обследованию была подвергнута рыба-сырец (свежая), охлажденная, свежемороженая и вяленая

Вид рыбы определяли по атласу «Определитель рыб» (Мягков НА., 1994) и учебному пособию «Система промысловых рыб» (Азизов Н А, Моисеев П А, 1996).

Материал исследован комплексно с использованием паразитологических, органолептических, микробиологических, физико-химических, химических и гистологических методов исследования Для полноты оценки по всем этим показателям с учетом интенсивности инвазии нами рыба условно была разделена на 4 группы 1) Неинвазированные, 2) С низкой ИИ (до 25 экз ), 3) Со средней ИИ (от 26 по 50 экз ), 4) С высокой ИИ (свыше 51 тез )

При паразитологических исследованиях для диагностики и выявления рыб с наличием метацеркарий О 5е1шеиз, дифференциальной диа1 ностики описторхоза пользовались Методическими указаниями МУК 3 2 988-00 «Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных и продуктов их переработки», а также МУК по

определению возбудителей гельминтозоонозов в пресноводных рыбах, Методическими указаниями МУ 3 2 1756-03 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями»

Гистологические исследования Для исследования использовали рыб (язь), выловленных из реки Тавда с высокой ИИ, от которых отбирали пробы мышечной ткани из среднеспинной мускулатуры Препараты готовили согласно «Методических указаний по патогистологической технике», основанных на методе парафиновой проводки и окраски гематоксилин-эозином

Для исследования на органолептические и физико-химические показатели использовали язей с разной интенсивностью инвазии, выловленных из реки Обь в районе г Ханты-Мансийск Органолептическую оценку и отбор проб для лабораторных исследований проводили согласно ГОСТ 7631-85 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний» (переиздан с изменениями в 1991 г )

Физико-химические исследования и определение химического состава мяса рыб проводили согласно ГОСТ 7636-85 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки Методы анализа» и «Правилам ветеринарно-санитарной экспертизы пресноводной рыбы и раков» (1989) Определение фосфора проводили молибден-ванадиевым методом (ГОСТ Р 51482-99) Определение кальция проводили методом титрования трилоном Б

Микробиологические исследования проводили согласно «Инструкции по санитарно-микробиолог ическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных» (Сазонова А С, Мухина Л Б., Крылов В А, 1991 г) Для исследования использовали пробы из спинной мускулатуры красноперки (неинвазированные и с низкой интенсивностью инвазии) и язя (со средней и высокой интенсивностью

инвазии), выловленных из реки Обь в районе г Хангы-Мансийск и реки Волга в районе г Астрахань

Определение относительной биологической ценности (ОБЦ) проводили согласно «Методических рекомендаций для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов (Беленький Н Г и др, 1990)» Материалом для определения ОБЦ служила рыба (красноперка и язь), пораженная описторхозом, от которой отбирали пробы мышечной ткани в области спинной мускулатуры Гоксико-биологическая оценка рыбы, пораженной описторхозом была проведена с применением культуры Те^аЬутепа рупбэгтш согласно вышеуказанных Методических указаний и культуры Со1ро<За з1етп (ГОСТ 13496 7-97 «Зерно фуражное, продукты его переработки и комбикорма Методы определения токсичности») и, имели в виду, 41 о она испытана на мясе, колбасах, куриных окорочках и рекомендована для определения токсичности продуктов из мяса, птицы и рыбы, где взяты за основу данные этих НД (Виноходов В О , 2006), а также при постановке биопробы на белых мышах (Методические указания по определению токсичности кормов, кормовых добавок и сырья для производства кормов в биопробе на лабораторных животных (2003)»)

Методы обезвреживания рыбы, пораженной описторхозом Материалом для опытов служила рыба (язь), выловленная из рек Обь, Волга и Тавда При каждой серии опытов проводили исследования на наличие метацеркарий описторхисов и их жизнеспособность до и после обеззараживания Обезвреживание путем замораживания проводили при температуре -18 °С, -20 °С и -28 °С в морозильной камере, где рыбу пораженную описторхозом укладывали поштучно Обеззараживание при воздействии высоких температур проводили при обработке рыбы путем варки и прожаривания Варка в воде проводилась при достижении в толще куска температуры + 80 °С в течение 15 минут Прожарку рыбы проводили в жире на открытых противнях в распластанном виде кусками массой 100 г при температуре 150 °С Также проводили подогревание рыбы в условиях

термостага при +60 °С в течение 1 часа При обезвреживании рыбы посолом использовали растворы натрия хлорида при концентрации 50, 100, 140 и 150 г/л Посол рыбы проводили в ее пластованном виде При обезвреживании рыбы в СВЧ - печах использовали микроволновую печь Samsung electronics CK99FSR при мощности 900 Вт и экспозиции 3, 3,5 и 4 мин, а также при мощности 600 Вт при экспозиции 4, 4,5 и 5 мин Вяленье язя проводили при температуре 25 °С на открытом воздухе в течение 21 суток после предварительного посола 4% раствором хлорида натрия в течение 2 суток при температуре 20 °С (без предварительного замораживания) При изучении воздействия ультразвука на метацеркарий в водной среде использована ультразвуковая установка УЗГ-04 с выходной мощностью 30 Вт и с тремя вибраторами из пъезокерамики марки ЦТБС-7 040мм с частотой излучения 22 кГц

Статистическую обработку ряда данных исследований проведена с определением доверительного интервала (tpn =4,303, п=5) Полученные результаты статистически достоверны (Р<0,05) (JIН Брянский, А С Дойников, 1991)

Результаты исследований.

1. Анализ распространенности онисторхоза рыб.

Так, среди рыб по рыбоводным хозяйствам на территории Российской Федерации показатель распространенности гельминтозов составляет 85% Удельный вес описторхоза по сравнению с другими гельминтозами сосгавляет 2,33% Было зарегистрировано неблагополучных пунктов (рыбопромысловых водоемов и рыбоводных хозяйств) по описторхозу рыб (но годам) 2005 год - 268, 2006 г - 303 пунктов

Результаты наших исследований по изучению распространенности описторхоза показали, что речная рыба важнейших рыбопромысловых бассейнов России, в частности рек Обь, Волга и Тавда в значительной степени заражена метацеркариями описторхисов, опасных для человека и животных, с весьма значительным уровнем интенсивности инвазии Так,

высокая экстенсивность инвазии (ЭИ) отмечена среди язя реки Обь - 71,05%, при средней интенсивности (ИИ) 39,04 экз и красноперки реки Волга ЭИ 30,77% и ИИ 2-8 экз Зараженность речных рыб рек Обь, Волга и Тавда метацеркариями О ГеЬпеш представлена в таблицах 1 и 2

Таблица 1

I Распространенность описторхоза среди рыб бассейна реки Обь (в районе г Ханты-Мансийск)

Вид рыбы Исследовано, Инвазировано, Экстенсивность Интенсивность

экз экз инвазии, % инвазии, экз

Язь 38 27 71,05 39,04

Лещ 7 0 0 0

Чебак 2 0 0 0

Карась 6 0 0 0

Осетр 1 0 0 0

сибирский

Нельма 1 0 0 0

Налим 5 0 0 0

Щука 5 0 0 0

И Распространенность описторхоза среди рыб реки Тавда

(в районе г. Тавда, Свердловская область)

Вид рыбы Исследовано, Инвазировано, Экстенсивность Интенсивность

экз экз инвазии, % инвазии, экз

Язь 7 7 100 28,75

При изучении зараженности рыб метацеркариями ОГеЪпеиз нас не могло не заинтересовать их обнаружение в различных органах и тканях (мускулатуре, сердце, селезенке и др ), что было проведено на примере язей, выловленных в реке Обь в районе г Ханты-Мансийска Метацеркарии были обнаружены только в мышечной ткани В дру1 их органах и тканях метацеркарий обнаружено не было Обобщив все случаи обнаружения метацеркарий О Гекпеиз в мышечной ткани, определили их процент в различных группах мышц, что показано на Рис 1 Как видно из этих данных, наибольший процент обнаружения метацеркарий падает на среднеспинную (51,52%) и переднеспшшую мускулатуру (28,84%)

Таблица 2

Распространенность описторхоза и других грематодозов рыб в дельте реки Волга (Астраханская область).

Икрянмнский район (основное руою реки Волга)

Вид рыбы Вид паразита Исследовано, рыб Инвазировано, рыб Экстенсивность инвазии, % Интенсивность инвазии, экз.

Красноперка О. feíineus 0 0 0

Р. оуаШэ 6 6 100 1-29

Густера О. £е1теиз 0 0 0

Р. оуаи^ 5 4 80 1-1'

Н. гг-;Ьо!а 3 60 1-3

Володарский район (река Б. Могой)

Красноперка 0.1е1теиг 0 0 0

Р. оуаШз 10 6 ЬО 1-26

В. сопйкш 4 40 1-11

Володарский район, рукав Волги (Мало-Белинский банк)

Краснонерка О. ГеНпеий 4 30,77 2-8

Р. оуаШв 13 1 1 84.62 2-30

В. соп&зив 5 38,46 2-8

Лещ О. felitleus 1 8,33 1

Р. оуаШэ 12 6 50 1-5

В. соп&зиз 1 8,33 1

Вобла О. Ге1 ¡пеия 0 0 0

Р ОУаШв 5 1 20 2

В. сопГизив 1 20 !

Чехонь О. ГеЦпеиз 3 0 0 0

Рис. 1

Частота обнаружения метацеркарий О.ГеНпеиз (в %) в мышечной ткани исследованных рыб.

1. среднеспинная мускулатура - 51.52%, 2. переднеспинная мускулатура - 28,84%, 3. верхнехвостовая мускулатура - 15,94%, 4. грудная мускулатура - 1,52%, 5. брюшная мускулатура - 1,33%, 6. нижнехвостовая мускулатура — 0,85%.

2. Клинический осмотр и патологоморфологические исследования больной рыбы.

Клинический осмотр У рыб, пораженных метацеркариями О ГеЬлеиБ заболевание протекает в субклинической форме, а поэтому внешне симпгомы практически не проявляются Вместе с тем, проведенные нами клинические наблюдения за пораженной описторхозом рыбой (высокая степень инвазии) позволили установить, что последняя отстает в росте в

I

сравнении со здоровой Так, установлено на примере рыбы язя трехлетнего возраста ее вес был на 1,5% меньше, а длина тела на 7,4% от непораженной Пораженность рыб описторхозом подтверждали обнаружением личинок О ГеЬпеиэ в их мышечной ткани

Патологоана гомические исследования При патологоанатомическом вскрытии больной рыбы (30 экз ) при внешнем осмотре внутренних органов (печень, желчный пузырь, селезенка, желудочно-кишечный тракт, почки, сердце, плавательный пузырь, половые железы, мочевой пузырь), а также кожи с чешуей и мышц никаких патологических изменений не было отмечено

Гистологические исследования При исследовании гистологических срезов мышечной ткани в местах локализации метацеркарий отмечено образование капсул из соединительной ткани Отмечено также повреждение мышечной ткани, которое выражается в виде зернистой дистрофии (де1 енеративных изменений) — небольших участков мышечной ткани с утраченной поперечной исчерченностью, границы клеток и очертания ядер не различимы

3. Исследования по сравнительной оценке методов индикации, определения жизнеспособности и дифференциальной диагностики метацеркарий О.ГеЬпедо

Выявление метацеркарий О ГеЬпсиа в рыбе На наличие метацеркарий описторхисов исследовали только верхний слой мышечной ткани - мест наиболее вероятной их локализации Использовали методы компрессорный

и переваривания в искусственном желудочном соке, которые оценивали по их эффективности Метод переваривания более затратный, требуется пепсин, соляная кислота, хлорид натрия, один из аппаратов для выделения личинок «Гастрос», «АВЛТ» или «Авта-3», время проведения более трех часов) Кроме того, если исследуется общая проба от партии рыбы, то при ее положительном результате, следует исследовать каждую пробу по отдельности Это удлиняет время экспертизы Для проведения компрессорного метода необходим компрессориум и трихинеллоскоп, время на просмотр одной пробы 10 минут По эффективности обнаружения эти два метода одинаковы В дальнейших исследованиях нами использовался компрессорный метод, как менее затратный и не требующий много времени для ответа

Дифференциальная диагностика О ГеЬпеш по анатомо-морфологическим признакам Стоить отметить также, что большинство из исследованных нами рыб были инвазированы другими мегацеркариями трематод, а именно Рагасаепо£ошшиз оуаПдэ (сем РгоЬет^отк^е), Во1Ьор1югиз сопНхэиз (сем РозЙюсЬрк^юпнёае) и Нуз1еготогрЬа 1.пЬо1а (сем В1р1оБ1от^ае), как моноинвазия, так и в смешанной форме Так, для Р оуаШэ ЭИ у красноперки составила 60-100%, ИИ 1-30экз , у густеры - ЭИ 80%, ИИ 1-11экз, у леща - ЭИ 50%, ИИ 1- 5экз, у воблы - ЭИ 20%, ИИ 2экз Для В сопГизиэ у красноперки ЭИ составила 38,46-40%, ИИ 1-11экз , у леща - ЭИ 8,33%, ИИ 1 экз , у воблы - ЭИ 20%, ИИ 1 экз , для ШпЬо1а для густеры ЭИ составила 60%, ИИ 1-3 экз

Видовую принадлежность метацеркарий определяли по Сударикову В Е (2002) Приведенные авюром описание метацеркарий свели в единую таблицу, так как мы считаем, что их нужно дифференцировать исходя из анатомо-морфологических признаков, и, имея в виду, что до наших исследований не указывалось на необходимость исследования наличия этих трематод Принцип дифференциации указанных видов трематод основан на

строении метацеркарий, размеру и форме цист, размеру и форме метацеркарий, освобожденных из цисты

Сравнительная оценка методов определения жизнеспособности метацеркарий О ГеЬпеиз При обнаружении личинок в рыбе, в том числе при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определять их жизнеспособность Нами проведена сравнительная оценка ряда методов определения жизнеспособности личинок описторхисов При определении жизнеспособности личинок наиболее эффективным является биопроба, которая, однако, не дает быстрого ответа Наиболее практичным является механическое воздействие и желчью, менее эффективными являются воздействие трипсином, окрашивание розоловой кислотой, и наименее приемлемым является определение жизнеспособности по морфологической структуре, который является трудоемким и длительным по времени получения результата

4. Органолсптические показатели мяса рыб

При органолептическом исследовании рыб с разной интенсивностью инвазии учитывали состояние кожных покровов, их окраску, наличие наружных повреждений, состояние слизи, чешуи, глаз, брюшка, цвет жабр, запах рыбы, консистенцию мышечной ткани и пробу варкой В результате проведения органолептической оценки рыб, пораженных опис горхозом, установлено, что рыбы как со слабой, средней, так и сильной интенсивностью инвазии О ГеЬпеиБ по органолептическим показателям практически не отличаются от здоровых рыб и находятся в пределах нормы, за исключением длины и массы рыб с высокой ИИ, а также гистологических изменений в мышечной ткани рыб с высокой ИИ

5. Физико-химические показатели мяса рыб

Исследования проводили с определением аммиака и сероводорода (качественные реакции), реакции на пероксидазу, реакции с сернокислой медью и концентрации водородных ионов (рН), что показано в таблице 3

16

Таблица 3

Физико-химические показатели мяса рыб, пораженных метацеркариями

О fellneus

Физико-химический показатель С низкой ИИ до 25 экз Со средней ИИ от 26 по 50 экз С высокой ИИ свыше 51 экз Неинвазированные (контроль)

рН вытяжки из мышечной ткани (в норме рН до 6,9) 6,58±0,03 п=3 6,54±0,02 п=3 6,61 ±0,04 п- 3 6,53±0,08 п=3

Реакция на пероксидачу (в норме почожительная) Вытяжка из жаберной ткани приобретает синий цвет, переходящий в коричневый за 1 минуту (положительная) Вытяжка из жаберной ткани приобретает синий цвет, переходящий в коричневый за 1 минуту (положительная) Вытяжка из жаберной ткани приобретает синий цвет, переходящий в коричневый за 1 минуту (положительная) Вытяжка из жаберной ткани приобретает синий цвет, переходящий в коричневый за 1 минуту (положительная)

Определение продуктов первичного распада белка в бульоне с сернокислой медью (в норме отрицательная) Бульон слегка мутный (отрицательная) Бульон слегка мутный (отрицательная) Бульон слегка мутный (отрицательная) Бульон слегка мутный (отрицательная)

Качественная реакция на сероводород (в норме отрицательная) Реакция со свинцовой солью не происходит — фильтровальная бумага не изменяет свой цвет (отрицательная) Реакция со свинцовой солью не происходит — фильтровальная бумага не изменяет свой цвет (отрицательная) Реакция со свинцовой солью не происходит -фильтровальная бумага не изменяет свой цвет (отрицательная) Реакция со свинцовой солью не происходит -ф ильтровал ьиая бумага не изменяет свой цвет (отрицательная)

Качественная реакция на аммиак (в норме отрицательная) Отсутствует реакция образования облачка хлористого аммония при взаимодействии соляной кислоты и пробы мяса (отрицательная) Отсутствует реакция образования облачка хлористого аммония при взаимодействии соляной кислоты и пробы мяса (отрицательная) Отсутствует реакция образования облачка хлористого аммония при взаимодействии соляной кислоты и пробы мяса (отрицательная) Отсутствует реакция образования облачка хлористого аммония при взаимодействии соляной кислоты и пробы мяса (отрицательная)

Как видно из приведенных в таблице 5 данных, у рыб,

инцистированных метацеркариями О 5е1шеиз, физико-химические показатели находятся в пределах требований к доброкачественной рыбе и не зависят от интенсивности инвазии

6. Саннтарно-микробиологический контроль рыб, пораженных описторхозом.

В этой связи были проведены микробиологические исследования на наличие в мясе больных рыб количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), бактерий

1руппы кишечной палочки (БГКП), золотистого стафилококка, сальмонелл и листерий Результаты этих исследований показаны в таблице 4

Таблица 4

Микробиологические показатели рыб, пораженных личинками О fellneus

Микробиологический показатель Норма для свежей рыбы по СанПиН 2 3 2 1078-01 (п 1 3 1 1 ) Неинвазиро ванные (контроль) п-3 Пораженные описторхозом

ИИ до 25 экз п=3 ИИ 26- 50 экз п=3 ИИ свыше 51 экз п-3

КМАФАнМ KOE/г не более 5x104 1,6x10" 1,7x10" 2,8x10" Выделены 5,5x104

БГКП (колиформы) в 0,01 г не допускается ■ - Е coli 019

S aureus в 0,01 г не допускается - - - -

Salmonella в 25 i не допускается - - - -

L monocytogenes в 25 г не допускается - - - -

♦Примечание «-» — микробов не выделено

Проведенные исследования позволили получить следующие результаты

- при определении КМАФАнМ отмечено превышение этого показателя в одной пробе мяса рыбы с высокой ИИ, что выше допустимой нормы (КОЕ/г должно быть не более 5x10"),

- при определении БГКП была выделена культура кишечной палочки серо типа 019 в пробе мяса рыбы также с ИИ более 51 экз ,

- при исследовании мяса рыб на наличие стафилококка, сальмонелл и листерий, последние в мясе рыб, пораженной описторхозом, независимо от степени инвазии, не были обнаружены

7. Изучение химического состава мяса рыб, пораженных метацсркариями 0.1е1теи8

Были определены массовые доли воды, белка, жира, содержание золы, фосфора и кальция На основании этих показателей расчетным путем определена энергетическая ценность мяса рыб, пораженных описторхозом с учетом степени инвазии В качестве контроля исследовано мясо здоровой рыбы (язя). Результаты этих исследований представлены в таблице 5

18

Таблица 5

Химический состав (%) мяса рыб, пораженных О Ге1теиз

Показатель неинвазирова Пораженные описторхозом

иные с низкой ИИ до со средней ИИ с высокой ИИ

(контроль) 25 экз от 26 до 50 экз свыше 51 экз

п=5 п=5 п=5 п=5

Влага 7б,24± 0,47 77,5± 0,1 77,6± 0,52 79,3± 0,39

Белок 20,5±0,07 19,25±0,12 19,83±0,25 18,08±0,19

Жир 2,2±0,17 2,1±0,22 1,7±0,17 1,65±0,29

Зола 1,048±0,069 0,989±0,027 0,966±0,062 0,871±0,049

Фосфор 9,43±0,15 9,07±0,29 8,77±0,42 8,57±0,57

Кальций 1,28±0,57 0,94±0,37 0,78±0,12 0,38±0,09

Энергетическая ценность на 1ООг 101,8 95,9 94,62 87,17

мяса, ккал

Процент снижения 100% «исходные -5,8% -7,1% -14,4%

калорийности данные»

Примечание 1 г белков = 4,0 ккал, 1 г жиров = 9,0 ккал

Как установлено исследованиями, мясо рыб, пораженных описторхозом, характеризуегся более повышенным содержанием влаги в сравнении со здоровой рыбой при низкой ИИ на 1,26%, при средней ИИ — на 1,36% и при высокой — на 3,06%-тов В этой связи отмечается зависимость, что чем выше ИИ и содержание влаги, тем меньше уровень содержания белка, жира, золы, кальция и фосфора соответственно Так, например, - при высокой ИИ отмечено снижение белка на 2,42%, жира - на 0,55%, золы - на 0,177%, фосфора - на 0,86%, кальция - на 0,90%-та

Расчетным путем, исходя из таблицы Покровского К С (1971) по определению пищевой ценности продуктов, было определено, что энергетическая ценность на 100 г мяса (ккал) рыб, пораженных описторхозом в сравнении со здоровой рыбой составляет при низкой ИИ - 95,9, при средней ИИ - 94,62 и при высокой ИИ - 87,17 ккал, что указывает на снижение их калорийности соответственно на 5,8%, 7,1% и 19,9% в сравнении с контролем

Данные обработаны методом определения достоверности различий между двумя средними величинами с использованием I критерия Различие статистически значимо с вероятностью 95% Расчеты по снижению веществ в

мышечной ткани проведены по определению абсолютного снижения, тк считаем этот подход показывает более объективно изменения по химическому составу

Таким образом, исходя из полученных данных, рыба, инвазированная О ГеЬпеш, особенно при высокой ИИ, имеет более низкую энергетическую ценность в сравнении со здоровой рыбой

8. Биологическая оценка мяса рыб при описторхозе Определение относительной биологической ценности ("ОБЩ Материалом для определения ОБЦ служила рыба (красноперка и язь), пораженная описторхозом, от которой отбирали пробы мышечной ткали в области спинной мускулатуры Данные по определению ОБЦ приведены в таблице 6, из которой видно, что в мясе рыб, пораженных описторхозом, имеется тенденция снижения его биологической ценности Так, при низкой и средней ИИ относительная биологическая ценность ниже на 1-1,7%, что недостоверно Что касается мяса рыб с высокой ИИ, то снижение относительной биологической ценности составляет 2,7%, что является достоверным показателем и указывает на пониженную его биологическую ценность

Таблица 6

Относительная биологическая ценность мяса рыб, пораженных описторхозом

Показатель Неинвазирован-ные (контроль) п=5 С низкой ИИ до 25 экз п=5 Со средней ИИ от 26 до 50 экз п=5 С высокой ИИ свыше 51 экз п—5

Количество клеток в 1мл среды 300x10" 297x10^0,49 295х103±0,25 292x10^0,37

Относительная биологическая ценность в % к контролю 100 99 98,3 97,3

Токсико-биолошческая оценка Токсико-биологическая оценка рыбы, пораженной описторхозом, была проведена с применением культур

Те1гаЬушепа рупГогсшБ и Со1рос1а 51ешп, а также при постановке биопробы на белых мышах Результаты исследований представлены в таблице 7

Таблица 7

Токсико-биологическая оценка мяса рыб, пораженных описторхозом

Показатель Неинвазирован-ные (контроль) п-5 С низкой ИИ до 25 экз п=5 Со средней ИИ от 26 до 50 экз п=5 С высокой ИИ свыше 51 экз п=5

Функциональные показатели Тей-аЬушепа рутПогти Морфологических изменений нет, гибели клеток не отмечено Морфологических изменений нет, гибели клеток не отмечено Морфологических изменений нет, гибели клеток не отмечено Морфологических изменений нет, гибели клеток не отмечено

Функциональные показатели Со1рос)а 51стн В течение часа все инфузории остаются подвижными В течение часа все инфузории остаются подвижными В течение часа все инфузории остаются подвижными В течение часа все инфузории остаются подвижными

Биопроба на белых мышах Гибели животных и патологических изменений не отмечено Гибели животных и патологических изменений не отмечено Гибели животных и патологических изменений не отмечено Гибели животных и патологических изменений не отмечено

В результате проведенных исследований установлено, что выживаемость тетрахимен и колпод в среде была одинаковой как в опыте, так и в контроле Не обнаружено отрицательного влияния опытных образцов мяса рыб, пораженных описторхозом, на морфологические и функциональные показатели инфузорий, независимо от степени инвазии В опытах на белых мышах гибели животных и патологических изменений не было отмечено

9. Обезвреживание рыб, пораженных описторхозом Нами проведены исследования по применению ряда новых режимов обезвреживания рыбы с применением физических и химических факторов, в том числе обработка в СВЧ печи и УЗ установке и уточнены некоторые из существующих режимов Результаты исследований представлены в таблице 8

Таким образом, было установлено в трехкратной повторности экспериментов (в комиссионных опытах), что эффективное обезвреживание рыбы, пораженной описторхозом, нами получено при следующих факторах и условиях

21

Таблица 8

Режимы обезвреживания рыб при описторхозе

№ п/п Физические и химические факторы Время обезвреживания (экспозиция), п=3

1 Замораживание рыбы при - 18 "С 7 суток

2 Замораживание рыбы при - 20 "С 48 часов

3 Замораживание рыбы при - 28 "С 32 часа

4 Выдержка в устовиях термостата при +60±1"С 35 минут

5 Проварка рыбы п воде (при достижении температуры в толще куска рыбы не менее + 80 °С) 10 минут (с момента закипания)

6 Прожарка рыбы в лсире на открытых противняч в распластанном виде кусками массой 100г при температуре 150 °С 15 минут

7 Посол рыбы с применением хлорида натрия 50 г/л (5%) 30 суток

8 Посол рыбы с применением хлорида натрия 100 г/л (10%) 21 сутки

9 Посол рыбы с применением хлорида натрия 140 г/л (14%; 15 суток

10 Посол рыбы с применением хлорида натрия 150 г/л (15%) 10 суток

П Обработка микроволнами в СВЧ печах при мощности 900 Вт 3,5 мин

12 Обработка микроволнами в СВЧ печах при мощности 600 Вт 4,5 мин

Не достигнуто обезвреживания

13 Вяленье без предварительного замораживания (предварительное соление 4% раствором хлорида натрия в течение 2 суток при температуре 20 °С) при температуре 25 °С на открытом воздухе В течение 21 суток(срок наблюдения) не достигнуто обезвреживание язей от личинок описгорхоза

14 Обработка ультразвуком при мощности 30 Вт и частоте 22 кГц В течение 1 часа не достигнуто обезвреживание рыбы

- при минусовых температурах -18°С, -20°С и -28°С, среди которых первая предлагается впервые, а -28°С при экспозиции 32 ч подтверждается (согласно СанПиНу 3 2 1333-03), в тоже время режим при экспозиции 18 ч (согласно «Правил ветеринарпо-санитарной экспертизы пресноводной рыбы и раков») — не эффективен, эффективный режим -20°С при экспозиции 48 ч вместо 72 ч согласно «Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний гельминтозами,

- при посоле с применением хлорида натрия получен эффективный режим обезвреживания при массовой доле соли 5%, 10% и 15%, при посоле рыбы при массовой доле соли 14% уточнена экспозиция обработки вместо 14сут рекомендуется 15сут,

- при прожарке рыбы в жире на открытых противнях положительный эффект обезвреживания получен при экспозиции 10 мин вместо 20-25 согласно Правил ветеринарно-санитарной экспертизы пресноводной рыбы и раков

Таким образом, проведенные исследования позволяют констатировать, что обезвреживание рыбы, пораженной описторхозом, является эффективным при применении режимов замораживания, высоких температур, микроволновой печи, технологического процесса посолом хлоридом натрия Методы вяления рыб и воздействие ультразвуком не приводят к ее обезвреживанию и нами не рекомендуются к применению, так как в противном случае может привести к заражению человека при употреблении в пищу такой рыбы

С ветеринарно-санитарной точки зрения и приемлемости технологического процесса, на наш взгляд, в первую очередь заслуживают применения режимы низких и высоких температур Применение СВЧ печей является перспективным технологическим процессом и рекомендуется его применение, в том числе в домашних условиях

Выводы

1. При анализе эпизоотической ситуации в рыбоводных хозяйствах Российской Федерации и собственными исследованиями установлено, что описторхоз рыб имеет значительное распространение Его удельный вес среди гельминтозов рыб составляет не менее 2,33%, а пораженность метацеркариями Ofelineus составляет у язя 71,05-100%, красноперки -30,77% и леща - 8,33% при интенсивности инвазии 1-92 метацеркария

2 Проведенными исследованиями определено, что процент обнаружения метацеркарий О felineus в разных группах мышц неодинаков и составляет в среднеспинных мышцах - 51,52%, переднеспинных - 28,84%, верхнехвостовых 15,94%, грудных - 1,52%, брюшных - 1,33% и нижнехвостовых - 0,85%

3 Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме (в большинстве случаев) с поражением мстацеркариями других трематод, в частности Рагасаеш^оттш оуаШэ, ВоШорЬошБ сопГизш и Нуя1еготофЬа 1пЬо1а, что необходимо учитывать при постановке диагноза на описторхоз

4 Наиболее результативными и наглядными методами определения жизнеспособности метацеркарий О ГеЬпеш являются методы с использованием желчи и механического воздействия, которые рекомендуются использовать как при проведении паразитологических исследований рыбы, так и после ее обезвреживания

5 При внешнем осмотре и патологоанатомическом исследовании рыб, пораженных описторхозом, клинических симптомов болезни и видимых патологических изменений в органах и тканях не отмечается, за исключением отставания в росте на 7,4% и уменьшении массы тела на 1,5% у рыб с высокой интенсивностью инвазии в сравнении со здоровой, а также наличия дегенеративных изменений в виде зернистой дистрофии небольших участков мышечной ткани с утраченной поперечной исчерченностью и разрастанием соединительной ткани вокруг метацеркарий

6 Установлено, что по органолептическим и физико-химическим показателям мясо рыб, пораженных описторхозом, находится в пределах требований к доброкачественной рыбе и не зависит от ее интенсивности инвазии

7 По результатам санитарно-микробиологического исследования мясо рыб с низкой и средней интенсивностью инвазии соответствуют требованиям существующих нормативов содержания микрофлоры, а при высокой интенсивности отмечено превышение уровня содержания КМАФАнМ и выделение Е сок (серотип 019)

8 При изучении химического состава мяса рыб, пораженных описторхозом, выявлена зависимость, что чем выше интенсивность инвазии, тем больше содержание влаги в нем и тем меньше белка, жира, золы, кальция

и фосфора и ниже калорийность, что указывает на более низкую энергетическую ценность, особенно мяса рыб с высокой ИИ (87,17 ккал) в сравнении со здоровой рыбой

9 Проведенными исследованиями определена тенденция достоверного снижения относительной биологической ценности (на 2,7%) мяса рыб, пораженных описторхозом, при высокой степени инвазии Не обнаружено отрицательного влияния образцов мяса рыб, пораженных описторхозом, на жизнеспособность инфузорий ТеЦ-аЬутепа рулГотиэ, Со1рос1а з1етн и белых мышей

10 Испытаны и предложены режимы по эффективному обезвреживанию рыб, пораженных описторхозом (в дополнение к существующим), с применением низких температур замораживание при -18 °С и экспозиция 7 суток, при плюсовых температурах, проварка (при достижении температуры в толще куска рыбы не менее 80 °С) - 10 минут (с момента закипания), выдержка в условиях термостата при +60±1°С - 35 мин, прожарка рыбы в жире на открытых противнях в распластанном виде кусками массой 100 г при аемпературе 150 °С — 15 мин, посол с применением массовой доли хлорида натрия 5% - 30 суток, при 10% - 21 сутки, при 15% -10 суток, СВЧ-излучение при мощноеги 900 Вт - 3,5 мин и 600 Вт - 4,5 мин.

11 Не обеспечивается обезвреживание язей, пораженных О 1Ышеш, при вялении в течение 21 суток (с предварительным посолом 4% раствором хлорида натрия) на открытом воздухе, а также при обработке ультразвуком при мощности 30 Вт и частоте 22 кГц в течение 1 часа

12 На основании проведенных исследований предложены «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе»

Практические предложения.

1 «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе» (Утв Отделением ветеринарной медицины РАСХН 04 09 2007 г )

Список опубликованных работ,

1 Зимин Н Л, Адиатулин И Ф Профилактика описторхоза и дифиллоботриоза // Ветеринарный консультант Москва - 2005 - №20 - с 24-25

2 Адиатулин ИФ Зараженность рыб описторхозом и ветеринарно-санитарное и социальное значение заболевания // Сб научных трудов ВНИИВСГЭ Москва -2006 -т 118 -с 265-273

3 Адиатулин И Ф Изучение распространенности описторхоза среди рыб бассейна реки Обь // Тезисы Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» /Материалы симпозиума «Паразиты и болезни гидробионтов Ледовитоморской провинции» Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН Улан-Удэ - 2006 т 2. - с 131

4 Адиатулин И Ф Описторхоз рыб и их ветеринарно-санитарная оценка с учетом интенсивности инвазии // Практик -Санкт-Петербург - 2006 -№6 - с 36-42

5 Адиатулин И Ф Распространение описторхоза и определение качественных показателей мяса рыб// Ветеринарная патология Москва -2007 - № 3 -с 7-10

ВНИИВСГЭ, 2008 г Москва, Звенигородское шоссе, 5 Заказ 268/1 Тираж 80 экз

Актуальность темы. Рыба, являясь ценным пищевым продуктом, может стать причиной заболевания человека серьезными гельминтозами. На территории России регистрируется целый ряд паразитарных болезней, возбудители которых передаются человеку через рыбу, ракообразных, моллюсков и продукты их переработки. Наиболее тяжелым гельминтозом из числа трематодозов, распространенных на территории России, является описторхоз.

Описторхоз — пероральный биогельминтоз, вызываемый трематодой из семейства Opisthorchidae, Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884). Заражение человека, кошек, собак, лисиц, песцов, свиней и некоторых других плотоядных животных (окончательных хозяев данного паразита) происходит при употреблении в пищу инвазированной личинками описторхисов рыбы семейства карповых (язь, елец, чебак, вобла, лещ, красноперка и др.) При попадании в желудочно-кишечный тракт личинки, называемые метацеркариями, эксцистируются в двенадцатиперстной кишке и мигрируют через желчный пузырь во внутрипеченочные желчные протоки, где достигают половой зрелости и начинают откладывать яйца. У инвазированных лиц в 20-40% случаев описторхисы также обнаруживаются в протоках поджелудочной железы и желчном пузыре (Герасимов A.C., 1999; Грищенко-Л.И., 1999; Соторов П.П., 1999; Акбаев М.Ш.; Быков В. П., 2001; Судариков В.Е., 2002; Фаттахов Р.Г., 2004; Беэр CA., 2005).

Ареал возбудителя описторхоза простирается практически непрерывно от Байкала до западных границ России с наивысшей интенсивностью циркуляции паразита в Обь-Иртышском бассейне, где сложилась наиболее неблагополучная эпидемиологическая и эпизоотическая ситуация. Волжско-Камский бассейн является второй после Западной Сибири эндемичной по описторхозу территорией России (Никитин В.В., Куимова Р.Т., 1992, Довгалев А.С, 1999). Выявлены очаги описторхоза и степень заражения в них людей (Успенский A.B., Малахова Е.И., Шубадеров В.Я., 2007). По данным Всемирной Организации Здравоохранения за 1995' год заболело описторхозом, вызываемым O.felineus, более 2 млн. человек. По данным Роспотребнадзора, ежегодно на территории Российской Федерации регистрируется до 40 тыс. больных описторхозом людей. Выявлен описторхоз среди населения практически всех субъектов Российской Федерации, а заболеваемость описторхозом на 2005 год составила 30,5 человек на 100 тыс. населения, а на долю описторхоза от всех биогельминтозов в год приходится 77,2% (Онищенко Г.Г., 2002).

При ветеринарно-санитарной экспертизе рыбы описторхоз регистрировался в 2005 году 6,7%, в 2006г. — в 5,4% случаев.

Основными задачами ветеринарной службы в рыбоводческих хозяйствах является охрана гидробионтов от инфекций, контроль за состоянием объектов аквакультуры, своевременное проведение лечебно-профилактических обработок, обеспечение населения безопасной и качественной рыбопродукцией (Борисова М.Н., 2004).

В связи с этим в- целях повышения эффективности ветеринарного контроля за рыбой и качеством пищевой продукции; получаемой из рыб, как возможных источников инвазионных заболеваний, необходимо, прежде всего, улучшить проведение ветеринарно-санитарной экспертизы и оценки рыб и рыбопродуктов, в частности, при описторхозе.

Этим обосновывается выбор и актуальность исследовательской работы.

Цель и задачи исследований. Целью настоящего исследования является разработка вопросов ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе с решением следующих задач.

1. Изучить распространенность описторхоза среди рыб в различных регионах Российской Федерации.

2. Провести сравнительную оценку паразитологических методов исследования рыб при описторхозе.

3. Провести исследования по изучению органолептических и физико-химических показателей мяса рыб, пораженных описторхозом, с учетом интенсивности инвазии.

4. Изучить общий химический состав и биологическую ценность мяса рыб, пораженных описторхозом.

5. Провести микробиологические исследования мяса рыб при данном заболевании.

6. Изучить устойчивость метацеркарий описторхисов к воздействию ряда физических и химических факторов.

7. На основании проведенных исследований подготовить «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе».

Научная новизна. Изучена зараженность описторхозом различных видов пресноводных рыб бассейнов рек Обь (среднее течение в районе г. Ханты-Мансийска), Волга и Большой Могой (в районе г. Астрахани) и Тавда (приток Тобола в районе г. Тавда) с определением экстенсивности (ЭИ) и интенсивности инвазии (ИИ).

Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме с другими метацеркариями трематод, а именно: Рагасаегк^оштиз оуайхБ (сем. РгоЬегшБитпёае), Во1ЬорЬогиз сопйдзиэ (сем. РоБ1:110с11р1о81;огтс1ае) и Нуз1еготофЬа 1:пЬо1а (сем. О1р1оз1:о1шс1ае).

С учетом интенсивности инвазии определены органолептические, физико-химические и микробиологические показатели рыб, пораженных описторхозом.

При описторхозе с высокой интенсивностью инвазии из мяса рыб выделяется сопутствующая микрофлора (Е.соН).

Впервые выявлена зависимость, что повышение интенсивности инвазии, сопровождающееся повышением влаги в мясе рыб, сопровождается уменьшением содержания белка, жира, золы, кальция и фосфора, что снижает его (мяса) калорийность в сравнении со здоровой рыбой.

Гистологическими исследованиями установлено, что заболевание рыб описторхозом сопровождается образованием в местах локализации метацеркарий капсул из соединительной ткани и поражением мышечной ткани в виде дегенеративных изменений.

Проведенными исследованиями разработаны (в дополнение к существующим) режимы обезвреживания мяса рыб, пораженных описторхозом, в частности: замораживание при —18 °С и экспозиции 7 суток и -20 °С - 48ч; воздействие высокими температурами (+60 °С и экспозиции 35 мин, варка — 10 мин и прожарка — 15 мин); посол рыбы при применении хлорида натрия в концентрации 50 г/л в течение 30 суток, 100 г/л — 21 сутки и 150 г/л - 10 суток; применение СВЧ при мощности 900 Вт и экспозиции 3,5 мин и 600^ Вт и экспозиции 4,5 мин.

Установлено, что применение процессов вяления и воздействие ультразвуком не приводят к обезвреживанию от описторхисов.

Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований подготовлены предложения по улучшению проведения ветеринарно-санитарной экспертизы и оценке рыб при описторхозе и определению устойчивости описторхисов к физическим и химическим факторам, которые включены в разработанные нами «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе». (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 04.09.2007 г.).

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 5 научных статей.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы и приложений. Работа содержит 21 таблицу, 11 рисунков, в том числе 2 диаграммы. Список литературы включает 126 источников отечественных и зарубежных авторов.

Выводы

1. При анализе эпизоотической ситуации в рыбоводных хозяйствах Российской Федерации и собственными исследованиями установлено, что описторхоз рыб имеет значительное распространение. Его удельный вес среди гельминтозов рыб составляет не менее 2,33%, а пораженность метацеркариями О^еПпеиБ составляет у язя 71,05-100%, красноперки - 30,77% и леща -8,33% при интенсивности инвазии 1-92 метацеркария.

2. Проведенными исследованиями определено, что процент обнаружения метацеркарий О^еНпеш в разных группах мышц неодинаков и составляет в среднеспинных мышцах - 51,52%, переднеспинных - 28,84%, верхнехвостовых 15,94%, грудных -1,52%, брюшных - 1,33% и нижнехвостовых - 0,85%.

3. Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме (в большинстве случаев) с поражением метацеркариями других трематод, в частности Рагасаеш^опипш оуаШэ, ВоШорЬошБ сопНюш и Нуз1еготогр11а 1;иЬо1а, что необходимо4 учитывать при5 постановке диагноза на описторхоз.

4. Наиболее результативными и наглядными методами определения жизнеспособности метацеркарий О.ГеНпеш являются методы с использованием желчи и механического воздействия, которые рекомендуются использовать как при проведении паразитологических исследований рыбы, так и после её обезвреживания.

5. При внешнем осмотре и патологоанатомическом исследовании рыб, пораженных описторхозом, клинических симптомов болезни и видимых патологических изменений в органах и тканях не отмечается, за исключением отставания в росте на 7,4% и уменьшении массы тела на 1,5% у рыб с высокой интенсивностью инвазии в сравнении со здоровой, а также наличия дегенеративных изменений в виде зернистой дистрофии небольших участков мышечной ткани с утраченной поперечной исчерченностью и-разрастанием соединительной ткани вокруг метацеркарий.

6. Установлено, что по органолептическим и физико-химическим показателям мясо рыб, пораженных описторхозом, находится в пределах требований к доброкачественной рыбе и не зависит от ее интенсивности инвазии.

7. По результатам санитарно-микробиологического исследования мясо рыб с низкой и средней интенсивностью инвазии соответствуют требованиям существующих нормативов содержания микрофлоры, а при высокой интенсивности отмечено превышение уровня содержания КМАФАнМ и выделение Е.соН (серотип 019).

8. При изучении химического состава мяса рыб, пораженных описторхозом, выявлена зависимость, что чем выше интенсивность инвазии, тем больше содержание влаги в нем и тем меньше белка, жира, золы, кальция и фосфора и ниже калорийность, что указывает на более низкую энергетическую ценность, особенно мяса рыб с высокой ИИ (87,17 ккал) в сравнении со здоровой рыбой.

9. Проведенными исследованиями определена тенденция достоверного снижения относительной биологической ценности (на 2,7%) мяса рыб, пораженных описторхозом, при высокой степени инвазии. Не обнаружено отрицательного влияния образцов мяса рыб, пораженных описторхозом, на жизнеспособность инфузорий Те^аЪушепа руготне, Со1роёа и белых мышей.

10. Испытаны и предложены режимы по эффективному обезвреживанию рыб, пораженных описторхозом (в дополнение к существующим), с применением низких температур: замораживание при -18 °С и экспозиция 7 суток; при плюсовых температурах: проварка (при достижении температуры в толще куска рыбы не менее 80 °С) - 10 минут (с момента закипания); выдержка в условиях термостата при +60±1°С — 35 мин; прожарка рыбы в жире на открытых противнях в распластанном виде кусками массой-100 г при температуре 150 °С — 15 мин; посол с применением массовой доли хлорида натрия 5% - 30 суток, при 10% - 21 сутки, при 15% -10 суток; СВЧ-излучение при мощности 900 Вт - 3,5 мин, при мощности 600 Вт - 4,5 мин.

11. Не обеспечивается обезвреживание язей, пораженных-О^еНпеш, при вялении в течение 21 суток (с предварительным посолом 4% раствором хлорида натрия) на открытом воздухе, а также при обработке ультразвуком при мощности 30 Вт и частоте 22 кГц в течение 1 часа.

12. На основании проведенных исследований предложены «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при описторхозе».

Практические предложения.

1. «Методические рекомендации по проведению ветеринарно-санитарной экспертизе рыб при описторхозе». (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 04.09.2007 г.).