Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Усовершенствование методов постановки реакции диффузионной преципитации и встречного иммуноэлектрофореза для выявления антигенов и антител при пастереллезе

;

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО XGUFÍCTBA РОССИЙСКОЙ «ВДВРАЩ1И

мосяоваия ветеринарная а:сад5-шя шиая а.И.скрявш

Не правах руяопиоп

МАКСУД 1ШИР

TUOFSPQKHCTBûQAIinS МЕТОДОВ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИЯ ДПМУШОНЮа ПГЕЦИПИШШ И ЗСГГРЕЧНОГО ИШУ-НОЗЛХТГСФОРШ m ВЧЯВ1ЕШ АНТИГ2НСВ ¡I АНТИТМ ПРИ ПАСТКГОШВВ

16.00.03 - лвмргнарсая илкробиоюг'ш, iHpjooiorxs* &пиооюжогия, мякояогня и юшуяэяогия

i в i о р « 9 9 р a t исоергаци» за оояагпниа ученой огвпзая кпнцядага вегвринзрншс на$х

Моовва - 1992

Работа выполнена в Московской ордена Трудового• Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И.' Скрябина.

Научный руководитель:.доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

Офицаадыше оппонент: доктор ветеринарных наук, профессор Сидоров U.A.;

кандидат ветеринарных наук^ доцент Маоимов U.A.

Ведущая'организация: Всероссийский государственный научно-контрольный институт отендартивации и сертификации ветеринарных препаратов.

Защита диссертации состоится н % " июля 1992 года в 10 часов на заседании специализированного совета K-I20.36.05 в Московской ордена Трудового. Краоного Знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина по адресу: 1(М72, Москва, у п. Академика .Скрябина, 23, тел. 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке UBA.

Автореферат разослан «¿г« июня 1992 Г.

Ученый секретарь специализированного совета <&CL£&е&ос* Федооеева Т.Н.

¡■fíi;:?^ г

■ ' : .¡;

Обцак харякгсрчсгика рабом Дкгуаикаоогь м.тн. Ияогочяоданные крвонянакяо хо-

!аа не всегда йогу г расочипшагь но вогарипарнуп по-иозд я овоавроыанну» даагноогику за^олэвааиЛ. Окшш из аабоваваяяЯ соеьмохсзй;отпош1ШС aiiuornuXs оооСонно крупного рогатого окога и п*иц, праяосяциэс знечнгольцый ущорб мелких и крупный флриорокяи хозяйогяаи, явлтоя пасю -роялсз. Однако* дифференциация ряаншс иицунолотчооякх гипоя so воех о гранах довольно эагрудиигольиа. Ангигопм, обуоповдивавдло аацлгяыо овойогяа, явдяюгоя предмагол диокуссиИ иослэдова«елой, и вакцинные препараты а ряда ограа гогояягоя ис едкого только гипа В р.тггиЦо Oda • обуояовливаюздв оогроа гечапив заболевания, с.е. rai:op-рагячэокуи оепсяцешга.

3 целой прогивсласгерадившито биопрппграги, гоговя-цизоя баспромшнэниоогьо, несовершенна а ив обеопечиваюг Вяагноогиху, яадэхнув дчфгороццкацап sanos в профашист« rj ваболавоаая пояигштозой природы. Серсяогкчиоаие реакции несовершенна a но нааси тирогого прилегания а прак -гяка.

На ооновании извоженного, исследования по ооверизн-освовантэ лоогачоакв тшунодиффузношшх ыагодов при пао-мрепааав являюгоя акгуагг.книа.

Даль и зо»та иоопедоезяиа. Целью работ яядяьось уоовершояогвованав мегодоа постановки и оравайгвльпая оценка прзгодкооги реакции диффузионной прэципигации (РДП) в во г речи о го шшуноэлекгрофорееа (ШШ) для вила -авяия ангигва > аигигеноа воабудигалай паогорбжеааа. В »ton п&ане розавиоь сводувэдв задачи:

I. Пояучигь капоушща, ооиагичаокиа цальноиакроб-вые аяжгави паогереава мулыоцнге «unos А, В a Д a ооосаегосаупщю специфические оиворогки на нгас.

2. Окрпбога*» негодшш РДЦ и ЕйЭО, обеопвчаваифм вьшипвнио а ыикоинпльнцх гигуах нолучошшх ангш'снэд я ангнгая,

3, Иэучлгь к оражыголвном еопвкге паронакгиэц уоос&рщаизгвоваикшс Увгоцоз РЛП а ШЭФ для вшаиатп

л гкакпх экопэриыенсально оараженишс в цнгиген у прази-хых просив паогерзягоьа ниаогшдс» ах опоцифлчаоогь.

Но.учиця ноднг.иц. йэучэиы различные рэшиы поого -исшки РЛП и ВИ8Ф (рН, геш1эрагура( концеиграцм агара, вопичгша о:\пы и их влияние на чуаогвимпьноогь иогоцов при выявлении снгигик и ингиг&иоа паогерапгш - ыупыоциад. С иопопьзоьоняои .уооверибнсгзовашщх иагодов РДП и ВЛЭФ проадысисгрирэлэна вовиоаиоогь лш.еео -ния анпи'оп у ипоииков и крупного рогасогэ слога и ап-гкгэноя пазгврош} иупысциад шюв А, В а'Д нопоород-сгвоино з суопеазкях органов окопэршлаагалько зарахзн-иик кроликов. и бояыюс книг. Позучияы ценные к взашио-олношвнкгас пнгаганоп раваячньвс гидов паогероБЖ. Данныо мвгоцы ыогуг прлиоияльоя в практической работе вэгери-нарншс паборагррай для копгродя ишуного огвега и выяэ-пиния акгкгонов во8буци*апя.

|1рок1кчоокз)1 зэниооеь пабогы» Иа оонозапиа нрэво-цоинрх иоолед&ваннй преипсгеяы уоовершэногвоваяние катоды лоогааовки РДП в ВЛЭФ и опредолены оптимальные реалии юс поосаповхи, поээагшсцкв вдавил» л мскошадь -пых тиграх витала в антигены паотерелла иуяыоцида.

АпроДгшкп работы. Материалы цолокены в о добрели, на отчетной научной конференции-Кооковокой ветеринарной акадешш в 1991 г*

По теме днооертация очана в начать да пубжияацш в хрупах иооковской ветеринарной владении ии.К.И.Скряби-па отагья "Ивучонив оеротипов паогвродла муяыоцща я реакция диффумонной лрецилвгацкя".

2

Объеи и структура шооерташп. Диооергвциоинея patota извожена на 99 о границах иамшопйонпго токота п оооюит иа введения, обзора гигорогурк, ооботввнних ис-оивпована!!, обоужцэния и выводов. Описок использованной «игврагури вкл»чьэг 132 публикации по тематике иоолэгде-вашей, Материалы иплюогрированц 13 габаицэия в Ч фо:о -графилля.

Соботвенпид иоолееовдгглд

Материала и цагогя гтосябцоЕьгай

Работа Еьггюяквча в период 1989-1992 г?« з соогаег-огяиа о н&анаш научных исспэцованаЯ Мооковозой Doropa-иарной акпцэпп! mi,К,И.Скрябина на кафчдро микробиологии, влруоодогчи я бкогохнологш:.

В эполерки&цтальноа работа яо получоппо аитигачо» и онвороюк, проверка сзоЦогл используемых ппинов я обцаЯ опэяяоогл яолодьзоЕало бопво 500 бояих шизй, 105 кроги-коз, 10 норопих озгаок, 50 иипчлг. Кромо того, НС1Ш бцлц подучзпа иа хогяйогв Московской и Бзнгсроцокой облаомй Россия оыяороткч or нииулдгироганаого против паогоралло-30 крупного рогатого окота я бояоа 50 проб патиагорлалоа (з ооногнон пробы легкого, плчфэуалов а селоаонкл) ое гедяг, у когорт бы а зыдопоп возбудитель naorapoлпоаа в исследованиях У.Б.Тсубаева и З.А.Впадиннроза,

niatiuu, В исопадовагельокэЯ работа копольаоваял птаы-иц паоторолл, хранящиеся в коллекциях пафздр рирусологки, микробиологии и биотехнологии, и эпизоотологии 1!оскоаокоЯ леюргаорной акадвши, вцгсчал полученниа ша ц га или пао-геренд шов А, В а Д.на кодпэкцнй ВоеросоиИокого паучио-яоодоцоэйгельояого иноштута вкопэраиепхапыюа ветеринарки пи. Я.Р.Коваденко и ВзерссоиЯокого государственного научно-контрольного ¡¡нотитуга стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, Оснознлиа при проведении иоодо -дованпй била nraumi 3 £683 (тал А),й 662 (тип В) а Т-80 (Г!Ш Д), 3

\

Дкя купьпшфовшшя посгэ'<вцд, их овяакцаи я па* копно.чия о цаиьв псолоздш.ого поЕучэнля бзкмазоы цпя aunáronos кспопьзоваил раапичние лдлгздьиыо орэда ыясоявягоаныИ б^пьт (1ЛПБ), ияоосоахсший arap (1ША), породар Хоггикгара а оо'огааадкив среды Хот.чгзрз,сра-вд üqk-Kchjc! ¡i кровяной urap ерйхрсдагоз барана) и др, При выращмяапчи оакмассы идя нопучааия екгигвноа в пшагопьпив срази обипно доЗазляпи яошадияую иди яротхчыо сывэрогку (5-1 ($). Для поучения вигягввод бвхшозу конццнгрироваэд оСично в 10 раз но объему центрифугированном иna пугои спонтанного oteros в при-сугогсни IC^ помэтидаагликодя (ПЗГ-б.ООО) (cu,/.Б, Таубавв, I9í»l).

Дяя ввдоввкия ччогых куяьгур прииаияги ивсоц Дри-газьокого с прерывао.тм вноовои шшегкоВ Павмра.цвог-» wjio'A a вице шшгегв, m 3-4 чаша Еагра о апотиаЯ ая-гагельноЛ средой.

Т&к зав опиты по прцксичвохоК проверке опмиов nao» repesa ь сиаороЕов ot кругшого poruraro cuota na г ивовую ариаацпохяоохь била з ряцо' оплгов неогаидлргны, впрочем xas в у других наовоцавахикай, прихоуисоь проц-варигввьпо селекционировать -озрааупедав Форш кого -на! генов Д (П, Ш, £/), 3 (1)'я Д (/} па кяаосифиюцвд Каргера иш Робвргса.

Саавицлоиировааниз куяьхури, хранавизвея в аапаян-пше аилу а ах в кяофзжтаировеннои оостояши, иопосьвоваш! ?пя пояучвння раопкогцок а uazoaxews башаоои о цэсьв посяецунцего пощучакся капсуяышх иди воиагичвояах.ваи цешвоиякробошс антигенов «ого еш нцуго сипа паогвресв.

Таяоопецпфцчеокке Ьиворохш на кааоуяшыв антигена поручали оОичао аа крояяках по походов МД.Свцорова (1979)х В upoqecoe пшвртшуе&эащк Г Ерояшоя браки проби кров* на уаши вен ш покучешя одворосож

(1-2 ш) о цемв опреивеняя уровня бнмм* я РД1. Вря

*

получении доогагочяо екгивнья сыворогок (1:8) кропиков обескровливали через глазную аргерио (удппаьиэ глазного яблока); Сыворотку па крови п с пуча л л по обцеярлнягой иогоцпке* по осязагапыю сливала яидкув фракции из огср~ чувиойоя кровя перед пореязоои юс в холодильник для раг-ракции огуогка на 24-43 часов.

0ра1щ»он1-ревшшз енитаясв яаогералд на колонках о оефадэкоом Q >200 проводили яо мигодика, ошюанноЛ а.М.АгаввоЯ (1979).

РЕЗУЛЬТАТЫ иссвдоашз Пол.учорив антигояов в оапороюц

Аягпгени гоювиля ив кульгур яроивБодсгвоянш: игаи-цоа типов А (Ö 8683), В (й 601) и Д (Р-20 и Т-8). Лиофл-диаирозанныа штаты первоначально оовонали выращквениоц . qä бульона Xomnrepa о добаллониаи 5,» оы^орогки попадай. В пооладуэдем внращивала нсобходшоа еоличомво овахих «ульгур дпя получения каяоульиого, ооиагичвского п пэжь-цокикробаого англгаков о цальи ишуиааацаи хрояяков и поогаяоЕКИ РДП я ЕйЭФ (по 150-200 ыя).

Для получения капоульнего антигена иояольвовзпа вон-центрнрозазяув бахмаооу (концентрированна IQ5 ПЭГ а гочо-цие 2-3 дноЗ при ташорагуро 0+4°С) о оодарвсниои бзкга -рпЯ на исноо АО клрд. в I мл, понгроль по стандарту нуг -ноога иди внсовси па поаледовагальных 10-лрагпах рцзвода-кп.1. Бакыаооу прогревали при +56°С в точепио 30 шга,посла чего пантриОугкровалл (4000об/30 ции) и из падооадоч-яой гядкоогп (наочицеянцй капоусьпгй антиген) получали капоульннй англген nyioti фракционирования на колонках о авфэдокоом Q -200).

Соматические антягвян получали по методике Иамиопа л Июрага о 16-чаоовой обработкой бакааооа I N HCl о поояедуюцкц окшяашкш форма лаякзировапнш фоофагяо -

Z-52Z 5

бзфернш растэсрси о рИ ■ 7,4. Концентрация бактерий в ноходшгс еитигенэх колебалась or 8 до 40 мнрд/мп.

ЦальногкнрсЛные дефроотироааапые антигоны готовим по методика, описанной Таубасвии (19?1){ антигены ков» цэцгриронапи ПЗГ, я 10 роз по обьоиу хонцектрьцвя бактерий была os 20 до 60 млрд/мя, активность а РДП or 1:2 до Its.

Лей попучакик антшвороток на цвдьпоиикробные он tero ни пркаонялл уокоронную стацу гллоршиуииаацил о шестикратным вводэниеи антигенов анутравенао а обгоне 8,3 ив антигена каждому кролику в гочекиэ месяца.

При получении atitücHsopoíoK ¿a капоувьныя антенн при 10-кратной KOM'JuHHpojsauHofl (подкохко, внутривенно в подкожно) иноку дяцш суииерко 20,1 мл антигена в течение 25 дней. •

Coubu'U'icokhs антагепи в процеооо 6-кратных квокудд-циИ в оушшркои ойьоые 12,5 мл за 45 дней вводили только внутривенно, Тотальное ооеозровпизанио проводили черев 10-15 цной пооле заключительной иггьекцли антигенов.

Результаты поодедугщей сценки активности пояученша оэрий вывороток о Гомологичными антигенами в РДП првдотаа-гены в таблице.

Каз видно но данных, продохавявшшх в гебвдв, анпн те да па антигены пвотералд удзаавооь выявлять в ГЛП у отдельных кроликов черов 2 дхецвли поолв начала гипераиму-ниэацки, Черов месяц отмечали увеличение активнооти антител у гшшриш<униоируеыш: крошдеов (qo II32 - ItI28)| пракхипаоки о подобной икгав.шотьв и биде получены обор-ние серии оыворогок (по 2 оории каждой оыворопси) api тотальном обескровливании кроликов через 40-60 дней псом начального цикла гипериццуниаации. Таким обрезом, нам уда-дооь подучить активные антигены паотередла мультоцида трех типов и ооответотвуюоде аатиоыворотки к ним.

6

Табляцг

Првципигирувдзя акгиэшшь ангионворогоп не цельноцикробино, капсюльные и ооиам-чоокла ангиганы лао^аредя

i», а .. - Акгизяо<чь англоиворо^ок в различные"'

«и гнокунпруеинв ороки пооде качала гиперцииу1шэаци1(оуг)

Ш1 (ШТИГвНи

_7 14-15 20-21 23-30 40-60

I. ЦвпьноинкроЛша

шш & 0 0 If2—1*4 1:8-1:3?. It 32

Я О О-Ц 1:2-1:4 1:8-1:64 1132-1:64

Д 0 0 1:2-118 H8-U64 1:32-1:64

2« Капоухыгае - ГШК21 к В

Д

О

о о

о

о о

Ц-И4 Il2-It 8 H2-I1-V

I:4~Ii32 1:8-1:64 I? 8-1:3?

изг

Il64

Il 32-1г 64

3* Сомагнчоокио

sinai

А В

д

О 0-Ц 1:2-118 0 О-Ц U2-U8 О О Iî 2—11 в

H8-II64 1164 П8-П64 II 64-11128 IH6-HI28 II64

4* Пв вводили

(конгрояь) О О

Омабогкз опгималвкцх решающ пэоганояки Р Д Ц Двд яыяонания оапшаньныг уововвй роакцяа пиЭДузноЯ врвцшшацни проводила в плоской опое (г им) агара Дафко на чатах Пагря оря оподующих рахитах:

- мнпэрагура! 37-38°С, 20-25°С, 0-4°0|

• концентрация arspai 0,8-I/í, 1,5)4, 2£$

- pHl 7-7,5» 8-8,5»

?

• Уеоультагц oipaíoiai оп дальних реаиаээ постановки реакции о цепьр ьчязлшкш шшчыацышх концектрицпИ энгпголоа и сиг лгал Сили оходкшк во всех о лигах перо -крестного нитрования о коупокенгаия тяпоз А, В и Д изотера лда ыуЕЬГоцицэ.

Паилучлао ровультакы РДГ1 волучаны при ташшрагурв 37-33°С, при кончен грации avapa 0,8-1,^5 и рЯ 7-7,5, 1.0. данные решшн nooiano>nuJ РДЕ яядяатоя олпшапыиши дав выявления антигенов (unriii.es) паогэрэлла иулыоцида!» В низких s:irpax оылэротож цо 1:6 вое гипы яаогерелд А, В и Д дазела порекреохицз реакции, т.е. лолохигельнцо реакции о хорпуокуляриыии аншонпиш и сос-тдагогвусь^дш оызэроткаиз, Но папин преципитации быви ке ицонтичпа» менее четки, а ыеньаеи количество и в иеньшоы разведении, чей в реакции о гоиологзчнцш! коипокбнтаия (Кшопогкчные антигены я ансвгола)» При виачодинх pll, гемперавури к концентрациях агара, не являющихся опятальнши, анм -тела и антигены выявляли, но я моныяих разведолшгх ( ва 1-2 порядка).

Реакция встречного имиуноолектрофорева (ВИЭФ)

Данную раакцик» апробировали Сидоров 11. А. (I9SI) я Руогаиов (1933).

С цель» оозершежохвоваяия ие годики ее поогаиовки нообходпао било опроданиг^ оптикаяыще температурные редиаы, концентрацию агора, рН, оиву »ока и вреая проведения реекциц.

Шши иопышзаяаоь приеипеноегь применения оиям ео-ка на одцу отевпяниу» пдаошшл 3*5 u A, 10-12 ик я 15-20 иА.

Иодытанныо высокие показатели сока веприемвиы щ поотвноввв ВИЗ», тая как шеек ыаохо равогрвв а дефор -цация агара, чго ооаохняот уча! раауныатов. Ори оам кока 3-5 ni 0ТЧ011ИВШ пояоон преципитации начивам

8

просматриваться чороз 1,5-2 U нас больше устраивая рвжи?», когда учет реаульх-атоа был не солохаея ua<¿op-мццией геля ai'apa з чагхкм проявлением подэо преципитации черэз I ч, т.е. при силе хохэ 10-12 ui.

В пооледувщэи иы аытаиаеь уоолеривлогвовагь реакции аа очес кодбора таипаратуры возле сваогян о peas -цией, но технику ноогаяовки реакции изменить не удалоом

- подогрев подо^аьки о пластинками до 30-35°С за очет уволпчения оилы тока вкаывсл деформации агарового ге-

. зя (раоплаЕдесне агара), хоря поесзы првцяптации появлялись чероз 30-W мин;

- охлесдан^б подсгаэки водопроводной ьоцой олшяясц ооложлляо технику псюганавки реакщы, а отчетливого повышения чувзтштальяоогц рля уокорашш учета реву л ь-

- raros не огмочаля;

- оптима&ышК ra^noparypiiL-a ресик оиреденикоя на практических уоловкй без охлаждения и подогрева при тешера-vype буфера в камере 25-ЗЭ°С.

В посдедувцен мы проводили эксперименты о вышеуказанными окворогкаии н анмгенаии по испытанcu вллянпя рЯ на чувотвитеяьвоогь реакции в окорооть проявления преципитационних полос. Резуяыаты овиаегальогвоваьи о сон, что в данной рзакции, когда иоповьаувтоя антигены я оыаорогки оо значительной буферное емкое г ыэ, pH буферных раотворов для приготовлении агара не овазывава оу -цеотвенного влияния на реакцию. В какой-то маре полосы преципитации были более отчетливы в яегче учитывала при pH of 7,0.до 7,5.

Необходимо быяо еца проверить ахваяве концентрация агара в rose на чувопщмльцоо» реакции. 1 «тих опытах реакции отавихв прв рЯ агара я буферных раотворов 7,07,2, овяо тока 10-12 iii.

9

При скотном окоа агара (I,5-2,Q») *и}фуаия гмру*« ней« a рмультвти ВЙЭФ ь ороди учета (1-1,5 ч) Оцпя отрицательными в боьышогве опытов* Существенной равняця а результатах не огаЛинн яри иопопшовании агарг я коа-цеятрацяя 0,6 ■ ОД при концентрации агара I,2¡* в сроки учета линии преципитации были мааео отчотшш я тигра вывороток на 1-2 порядка ниад. l'a¿ как 0,QS агаровый osoft в отдельна опытах поц/чадоя рыхяш, иногда олоя-- мп, во воах цоомдуюдих сайтах яопоЕьзодааи его концеа-tpaom I*.

. Выявление антитаг а оыаороткох взкшпированящ; кроликов и крупного рогатого окота я РДП и В11ЭФ

Нами было привито 15 ерслшсов акоперпыентальлой гядроокгоьзлшгаяевоа вакциной против пастсредлеаа ого» ней яа типов А, В и Д биофабрвчного проибьодотаа (г.Цал-ково) в цпльп ивучендя динамики виявазнгя антител в усо-ворпенотвованных нами реакциях РДЕ я ВйЭФ. От привитых я допрядвых кромков брадв прсбы крови ив упниа вов черев каждые xas недели. Такке аооледовали оыворотки ох вакцхнированного крупного рогатого окота не хоояйотв Ыоо-ковокой я Белгородской областей в предоотавеэнеих шш У.ВЛаубаавым я В, А. Владимировым.

Установлено, что у вакцинированных кроликов покоя* пум антител кндуцируетоя чорев 1,5-2,0 ыео, (6-8 вафель) поо£в 2-кратной прививка яяоктявирсванной вакципш уровень антител овххавоя в пооледувдна оровв, во быв оуо-отванным дао черев 5 мае* (12 во цель) яооса вакцинации, В выворотках крупного рогатого окота яа неблагополучных хоаяйотв Мооковокой я Бевгородокой облсотей выяа-вяля антитела в нооковысо неньшос тиграх, чей у привитых кроликов, во в данной оаучае веяавеогын были орохи вакцинации или пере боле ваши животных. Так со как в в шоео -довашшх У.БДаубаева в В, А. Владимирова, в реакциях щ-

10

гвкоаггзвгяс&щн* и ингибвцзг роога оиворотка or круп-ноге porasoro око ra проявим бйхьяу» «ямвноохх о аягигекаин шюэ ¿ ■ Д я бнви меяоо акгишы о ангигв-нпш гяпа В.

В целой реакция ШЭФ Сыза бовее чувогвямпьяой, чем РДК дня выявления антеи (на 2-J-wyкраше рае- . ведения оыворохок).

Иэ,7Чони9 вэсаодьооги выявнешш внгигепов g о.уо'ля»з!:яу. осгаков кронлков, пагзях доогя рхопорлионхалы'ого ¿арашнзя и у хепяг пси еогоргвваизц пррцяеяид

До наохоящего врвивяп на практик? во яопоамусгол оврохогнчеокгв реакцяи цвя пряшго выявления аяхягеаов щ хканях бояышх идя пашшс жиэохшлс»

Нк рошявз пвучах» соадюжнооть выявшнпя яаогера*-ввэшхх антигенов в хканях экоаерлиенхельяо вараженше кроеккоз. Селачцийнированруии шхашакя лаохерелл ranos А, 3 я Д варэхали кропиков и поопе гибихя ах через 4896 ч провоняй вокригяэ» брали хуоочвд паренхииахоянюс органов, роховяхи 2QÎ суоаенаии, когорья поцворгазя J-S-крахноау ааиоражгвпшт я оггаавашш.

Даsoо оуопонвия ценхрифугяровали в геченяе 30 кхя при 3000 об/кан я кахооацочяее «ицкоохи ясаосмоваяи а качеогве иопыгу8шос антигенов в РДИ я Ш99. Яря постановке реакции в erou пване яопользовам антизивороги, полученные на ценьношкробние антигены; оиворохии при» иеняддя а разлепаяхюс, ооцераасщх 4-крагкуи хо»у,иахо*я ив предеяьного тигра в РДП, • •

Полояахедьные ревувьхахы подучаяя а 2Q£ оуопвиоия-мя оелевенкв я печеня вкопчрпнеягапыю варажанних крояж-жов, причем и очех бохывей чувохваыиноотя в »t«x целях реакция ВйЭФ била црецпочгихвжввбв.

IX

3 дальнейшей ын собрали пробы органов (оелаеашса» печень, легкое, оврэдэ) га ляг после гибели, у ко горах в хозяйствах 11эсзоеоко<1, Бодгородокой и Тульской обсс-омй был Пйдгз9гадэн' бакгериодогичео1.и диагноз на пво-гереяяэ». При еотеогвепном гечснии заболевания в og-poíi форме у te«яг антигены поогоянни выявляли в оуонензиях ив печени а легкого (у вот б тесят ив Ч хоаяйив) а ВИЭФ, что важно учитывать при отборе проб материалов в уоьовиях практической диагностики, В ГДП количество по* длительных а роб было меньше па 2Q5,

Сравнитзльное испцганяе чуссгвпгольнооти и опеж-Цщчлооги роа^дай РДЛ и ВКЭФ

При ивученаи преципитирущей акгивнооги онвороток, подученных на цасьноиикробные, гапоульные я ооипгичео-гае антигены, было показано, что они реагировал« о гоыо-логачгыш ангзгоаэии в рааводекикх Il3¿ - 2iI28, т.е. была подтверсдона удовлетворительная для прохтькя чув -отвнтедьнооть* Опыты по научения динамики выработки ант»-тел у вакцинированных кроликов а по аооьошюоги выяьло -нля антигенов в тканях экспериментально аарахенных кро -ликов я иоолвдованяях пвшатеркаяов os телят о подтвор -«денным диагноноы на паотереллев (тип Д или тип А) т наблюгаля яорокроотные реакции при использовании сывороток 0 полученных на жюбце паотореллоэш» антигоны (цодь -ноиикробнывс каиоуяьные иди ооматичеокие).

Необходимо было подтвердить специфичность уоовор -ненотвованнцх наш методов постановки данных реакций и воэможнооть их иоподьвования Д1ш неученая антигенного различия (или родства) между типами во8будагавя0

11« учитывали результаты опытов Таубаосв У0Б* (1991)е когда автор,иопоиьвуя аыоокочувотвигевыщй ив -зоц Еатеко-аггю>тияациив не гиявсяд неолецаЗичоошс: реакций при проверке воевовмохных антигенов„ но подучнд

12

вояожигеяьяыв ровуя tmit а вне tua разаадаявях ара про~ верхе оборпых ousoporos крупного рсгаюго око га я cmsо-poros прогяэ ттроког.кЬво& тгфвкцям, Кроме гсго, при проверка спвцпфичноогя ми провэря» ря* «pyrex биспре-порагоз фабричного лроивьедогаа.

Рааулгпск огсков овидчдедьегьовавя, чго обо реакции P2JI а МЭФ специфична я ях иепошошши» пожег яоэ-вояиг* вадвягьоя на обнаружение госысо внгамво» пзоге-раяяа иугягоцяца* Во зоох итаччах пазяреш мумговдад выяваяяя ррцв'оенныа иахгткюив (родовые) авмгева. Подобные якгигаяя (алгигааа) моруг &г» стзмни о w~ попьзованиви оыгорогок (ентиггнов) на цезыкшкробкив, капсуиши в ля осцагпче<шго он ture ни я РДП км "Однако, акгявносхь а реакции а юто10гк<шииа noiftoiiaa« raun, особенно при шяюшовашш юшуяавого аыгагвна в ооомегомукдос енгкгияовых оыворомк, пратшаг ьа 1-4 равв одевая рогу«íü tu, вовучеещ» ш ?Ш я ШдЪ при яопожмовавия гви>рохоги<шпх кшпокеягоя (во гвяу вовбу-дягалл яш по природа ви гитова), Ваал ^мякв ояядага»-освугж о ч*о зроогиа уооварвэвогэовавдоа реакция гшиуяоднффуэяя иояяо уояаигю пркимяг» два гшшшя паогерепв (оадекгаввоогь ад.8С&),

bu9vu

I, Понучвнн вясив>ша яааоуввыэ, оомагячаош* я цояьноинкробяыа аямгева я ооогвемгвукцла пшаряммуи-ныв крошчья оывороскв пая РД1 я В1Ш (три авгягевоа Zt2 - ИЗ« г игры ансигая а гивараинунша оиаорогках крошшя - It 32 - It256),

2» Гвоварявномовааи масодоя поо rcaos fá УДК к ВИЭФ; ваябсямая чуаогмгея&воог» оЛмвадваамя овин зевавши режимами ях ооогаяоаян

II

- до РДЦ| paoosoявит между яункаш 4-5 мн{ вонцентра-ция агара - I?» рй - 7,0-7,5j температура - 37~33°С* учет розу ям* тоя ва нанизка линий врециизтацяи черев 24 «саое;

- для ВЛ?4< расотэянив между яункамв ва пгаотанах' 2,5 он 7,0 оя - 4-5 мм; ояка *о*а 10-12 концентрация агара - Utj тьмпература а камера - 25-30°С;

pH » 7,0-7,5j учет реаугматоа ва наличие вяняй преципитации - чсрее 60 минут,

3, Метод ЫШ более чувотвятеяен при выявлении антител в онвэрогках о антителоа а культурах и тканях боавных животных; оба serosa специфична в не выявлено перекрестных реакций при иооаодовавия ангиоыворотэх н ' ~~ ьнгигенов hü аоабудитедг или ткспя животных,

4» Уотановнсна вовшжцоогь;лря1Ю?о выявления антигенов даоюрен» а РДП я ДОЭФ a 2Q5 двфроогкрованккх суспензиях тканей печени, оалевонги и легкого экоаоримея -тально зараженных кроликов или телят, паюих при еога -огвешшх вопыхках ваболевания в хсвлАотвах.

5. В РД1 и КШ вышшяомя перекрестное антягешгоо родотво ыехду гипаип А, В я Д naorepeaat для выявления сбцях антигенов наиболее пригодны цевьпошкроЗныо антигены в кроличьи шииоыворопи на них.

6. При иоподьэовашш капоувьшяс и ооиагичеокшс антигенов и соответствуют«: гилершшунпьа: сывороток з.РДЯ к ВИЭФ иохно вшшвять типовые рааличия иаогорода» полооы вимунодиЭДуони мохду гоиологвчныии он гитана ии в оыворот-хаии провшасг таковые между геторояогичшшп коипонанта-ик ва 2-4 рааведепшц при неаьпей разницы в трах оташш паотерепа очитали нетширозантш.

14

Ревоиензаели по иопольеованив научных выводов

Целесообразно иаедрокпе усовершенствованных ивгодов поотаноски УШ и ЕИЭФ в правтичу работы ветеринар-шас ааборагорий дпл выявления антагел у привитых хивот-ных я аягигенов в гканял больных в павшк животных.

При разработке наставлений ао диагностика паотв-реллеаа вивотных прадуоиотреть а качеогве проб для исследования взятие ярсб :ыччни, легкого и оелеаашеи.

Сятоок работ по теиэ дяооергсдии

I. Ыаксуд Цунир. Научение серогипоа паотерелла иульго-цлдз в реакции диЗДувионяой дрвцлпигацкк // Сб.вауч. гр.Иоок.вет.акадоияи ии.К.И.Скряоина (оадна в печать).