Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Стимуляция иммуногенеза при вакцинации кроликов против пастереллеза

РГб од

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ' ' 1,1 '' ' 'имени Н.Э .БАУМАНА

На правах рукописи

МИННЕБАЕВ 1ЖУКАТ ШМХМЕТОВМ

СТИМУЛЯЦИЯ ИММУНОГЕНЕЗА ПРИ ВАКЦИНАЦИИ КРОЛИКОВ ПРОК® ПАСТЕРЕМЕЗА

16.00.03 - ветеринарная микробиология,вирусология, эпизоотология, микология и ишунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань 1993

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Казанского ордена Ленина ветеринарного института имени Н.Э.Баумана

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Госманов Р.Г.

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки Республики

Татарстан, Лауреат Государственной премии СССР, доктор Еетеринарных наук, профессор ХазипоЕ Н.З.; доктор Еетеринарных наук, профессор ГаффароЕ Х.З.

Ведущая организашя: Санкт-Петербургский ветеринарный

институт

Защита состоится 1993 г. в часов

на заседании специализированного совета Д-120.22.01 ПРИ Казанском ордена Ленина ветеринарном институте им. Н.Э. Баумана /420074, Казань-74, ветеринарный институт/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ветеринарного института им. Н.Э.Баумана.

Автореферат•разослан 1993 года

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

Чеботарев В.Е.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

-------Акт у аль нооть т емнОб еспечзние ~ на с ел ения страны' "продуктами животноводства - первостепенная задача аграрного сектора народного хозяйства. Кролиководство одна из эффективных отраслей животноводства, которая способствует решению этой чрезвычайно важной проблемы, производя диетическое мясо и сырье для легкой промышленности. Именно поэтому в настоящее время наряду с крупными промышленными фермами создаются мелкие, частные кролиководческие фермы, где ветеринарно-профилактичесгате работы не всегда проводятся на долкном уровне, что создает опасность возникновения инспекции. А это в свою очередь крайне нежелательно для крупных кролиководческих и звероводческих хозяйств, где концентрировано большое поголовье зверей.

Из инфекционных болезней, в настоящее время, пасте-реллез все еще наносит значительный экономический ущерб кролиководству. В связи с этим как на крупных, так и на мелких фермах возрастает необходимость проведения профилактических прививок против ластералдеза на более качественном уровне.

В неблагополучных по пастереллезу хозяйствах как в нашей стране, так и за рубежом применяются живые и убитые противопастереллезные вакцины. Поэтому и мнения об эффективности той или иной вакцины неоднозначны. Некоторые авторы /А. М^п*.; С. й . Саг*е>с,1989; Б.П.Плеханов, 1986 и др./ считают, что более эффективными являются живые вакцины. Одни исследователи /Я. У. 3)1ь1асото; В.Э.Деев, 1986/ после иммунизации кроликов живой вакшной отмечают недостаточную эффективность вакцинации, а другие /Й.

ЛЛ Са1апа ,1986/ лучшие результаты получали при применении инакгивированной вакшны. В кролиководстве в основном для иммунизации против пастереллеза применяемся противопастереллезная формолвакцина, ¿.отя вакцина им-муногенна, безвредна, но не всегда вызывает образования иммунитета достаточной напряженности и длительности. Поэтому вопрос о стимуляции иммуногенеза кроликов против

пастереллеза остается актуальным. Исходя из этого, возникает . необходимость применения безвредных, легкодоступных, недорогих препаратов для стимуляции иммуногенеза кроликов при вакцинации против пастереллеза.

В специальной литературе имеются сообщения о возможности стимуляции иммуногенеза при ряде инфекционных забалеьа-ний путем применения различных иммуномсщуяямров /А.М.Ьем-сков, IS73; В.И.Литвинов и ооавт.,1980; Э.Н.Шляхов и соавт.» 1Ь84; А.В.Кузьмин, 1985; Д.НЛазаревэи соавт.,1985; Г.Н.Но-вошинов и соавт., IS85; Р.В.Петров, 1987; Г.Н.Спиридонов, 1988/.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось изучение возможности применения ишуномодуляторов для стимулящи иммуногенеза при вакцинации кроликов против пастереллеза. Для ее выполнения был* поставлены следующие задачи:

1. Изыскание новых иммуномодулирующих препаратов для стимуляции иммуногенеза у кроликов при пастереллезе.

2. Провести сравнительное изучение действий яммуномоду-^ лирующих препаратов /дипромоний и витамин U /на поствакцинал а

~ный противопастереллезный иммунитет кроликов.

3. Определить оптимальную схему иммунизации вакциной против пастереллеза «роликов в сочетании с яммуномодулято-рами.

4. Разработать методику приготовления пастередпезного антигена для серологических реакций.

5. Изучить противопастереллезный иммунитет у кроликов» иммунизированных в сочетании е.иммуномодуляторами.

Научная новизна. Подучены* данные о возможности и целесообразности применения иммувомодуляторов /дипромоний и витамин и/ для стимуляции иммуногенеза кроликов при вакцинации против пастереллеза. Установлено, что данные препараты повышают иммуногенез при вакцинации за очет активации как клеточной, так и гуморальной систем иммунитета. Разработана оптимальная схема иммунизации кроликов против пастереллеза в сочетании с дипромонием и витамином U. Раэрабо-

тана методика приготовления и получен пастереллезный антиген для серологических реакций по этой методике.

Практическая ценность. Дано научное обоснование применения иммуномодулирующих препаратов для стимуляции иммуногенеза при вакцинации кроликов против пастереллеза. Предложена схема иммунизации кроликов противопастереллезной вакциной в сочетании с иммуномодуляторами, которая позволяет стимулировать иммуногенез при данной инфекции, а. также повысить напряженность иммунитета, что значительно повышает эффективность противопастереллезных мероприятий. Паотереллезный антиген дает возможность поставить диагноз при помощи диффузионной реакции преципитации как у больных пастерелле-зом кроликов, так и выявлять субклинически больных и пасте-реллоносителей.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и одобрены на ученых советах Казанского ордена Ленина ветеринарного института им. Н.Э.Баумана Д988,1й90,19Ы/.

Публикация. По теме диссертации опубликовано а статьи.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 106 странидах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсувдения полученных результатов, практических предложений. Работа иллюстрирована 6 таблицами, 5 рисунками. Список использованной литературы содержит 184названий работ, в том числе на иностранных языках. 62.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы исследований

Данная работа выполнена в 1587-19У1 годах по тематике кафедры микробиологии и вирусологии КГВИ им. Н.¿.Баумана /№ Гос.регистращи 01910038868/.

В исследованиях использовали производственный штамм па-стерелл - Paslewtelta тиНоеЫа/шат Jf 116/, полученный из

ВГНКИ в IS 88 году, который был выделен из трупа теленка.

Для проведения опытов использовали кроликов-самцов весом 2,5^0,2 кг породы шиншилла - 100 голов и венская голубая - 60 голов.

Кроликов иммунизировали формолвакциной против пастерел-леза кроликов Армавирской биофабрики: серия НО, изг. 10-87г., №),изг. 03-88 г., №8,изг. II-89 г.

Для стимуляции иммуногенеза при пастереллезе использовали дипромоний и витамин U .

Дидромоний - /витамин Bjg/ - пангамовая кислота - дшзо-промиламмония дихлорацетат, разработан научно-производственным ■объединением "Витамины".

Витамин U - метилметионинсульфония хлорид, разработан ордена Ленина институтом биохимии АН СССР им. А.Н.Баха.

Состояние клеточного иммунитета у привитых пастереллез-ной формолвакциной кроликов проводили определением содержания Т-, В-лимфощтов в периферической крови в реакции розетко-образования с гетерологическйми эритроцитами по методике М. Jon da i et at. /1372/ в модификации А.Н.Чередеева /1976/ и J .IUendiS/1973/.

Противопастереллезный гуморальный иммунитет оценивали методом диффузионной преципитации в агаровом геле по Фрай-фельдвр /1980/. В качестве антигена в реакции диффузионной преципитации /РДП/ использовали пастереллезный антиген приготовленный нами /1Ъ88/ для серологической диагностики паст ереллеза.

Белковые Фракции сыворотки крови у животных определяли по-0ллу и Маккорду в модиссикации С.А.Картока /1062/.

Количество общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом.

Для определения напряженности противопастереллезного иммунитета опытным кроликам /через 4 месяца после иммунизации/ вводили смнв суточной агаровой культуры вирулентного штамма pasleuteU a wu I tocicjo/шташ №116/, предварительно оттитрованный на кроликах. С этой целью со смыва суточной агаровой культуры готовшш исходное разведение, применяя стерильный

физколоп'.ческнй раствор и оптический стандарт мутности дая бактериальных суспензий. Определяли г^^. Для контрольного заражения опытным кроликам вводили подкожно в области шеи суспензию Р. ти1косм1с1 вЕГЗ^оо» Перед заражением и после 2 раза в день проводили термометрию. После гибели животных изучали патологоанатомическую картину. Для выделения чистой культуры и для изучения культуральных свойств возбудителя делали посев на простые питательные среды /МПА и ШБ/ из крови, трубчатой кости, головного мозга, паренхиматозных органов и лимфатических узлов.

Статистическую обработку результатов проделали на программируемом микрокалькуляторе типа "Электроника" МК-56 согласно методической рекомендации РД.Тукшаитова и др. /1383/. При этом вычисляли среднюю арифметическую /Ш/ стандартную ~ ошибку /м/, уровень значимости /Р/ по Фишеру-Ствденту. Достоверным считали различия при значении Р<0,05.

9

2.2. Разработка методики приготовления антигена из культуры пастерелл дая серологических реакций

Целью разработки методики приготовления антигена являлось повышение специфичности и упрощение способа получения пасте-реллезного антигена для серологических реакций.

Для выполнения указанной цели мы производили наработку достаточного количества бактериальной массы, которая состоит из трех этапов:

1. Освеженную путем 3-х кратного пассажа через организм белых мышей культуру Ра5ЬеиквИа тывнесли в пробирки с 10 мл МПБ с добавлением £>% глюкозы. Рост пастерелл происходил на вторые сутки в виде тонкой пленки на поверхности бульона и образованием слизистого осадка.

2. После микроскопического контроля проводили пересев выросшей бульонной культуры по 10 мл в 0,5-члитровые колбы, содержащие 490 мл мясопептонного бульона с добавлением 6% глюкоза. Выращивали посевы в течение пяти дней при температуре 37°С с последующим контролем на типичность роста и отсут-

ствие контаминангов.

3. В литровые колбы, содержащие по 860 мл мясопепгонно-го бульона с 6$-ным содержанием глюкозы, вносили по 140 мл выращенной в 0,5-литровых колбах бульонной культуры. Дальнейшее выращивание посевов продолжали 7-10 дней при температуре 37°С. Затем проводили контроль выращенной культуры по общепринятой методике в микробиологии.

После получения чистой пастереллезной культуры в литровых колбах, содержимое емкостей сливали в общий объем /в стерильную 5-литровую бутыль/. Затем проводили концентрацию пастерелл путем осаждения воздействием различных концентраций полиэтилен-гликоля с молекулярной массой 6000 в /%%/ - 1,3,5,7,9,11,13 от общего объема. После добавления полиэтиленгликоля в указанных концентрациях, колбы встряхивались на шуттель-аппарате в течение 1-го часа до полного растворения полиэтиленгликоля и их ставили в холодильник на 24-72 часа при температуре +4°С. За это время вели наблюдение за ходом осаждения пастерелл. В течение суток отстоя полного осаждения пастерелл при использовании полиэтиленгликоля в концентрациях 1,3 и 5% не происходило. Сбор осадка при этих концентрациях полиэтиленгликоля был затруднен, хотя его легко ресуспендировали. При 9,11 и 13?-ной концентрации полиэтиленгликоля возникали затруднения с реоус-пеццированием осадка. 7%~ная концентрация полиэтиленгликоля обеспечивала практически полное осаждение пастерелл из культуры в осадок в течение 24-48 часов. Надосадочную жидкость удаляли, а осадок представлял биомассу. Полученную биомассу проверяли на стерильность и видовую специфичность /посев на питательные среды и микроскопия/. Концентрация бактериальной массы проверяли по оптическому стандарту мутности для бактериальных суспензий и разводили до I млрд микробных тел в I мл 0,3$-ным формализированным стерильным физиологическим раствором, который также и инактивирует пастерелл.

В дальнейших опытах использовали для концентрации антигена полиэтиленгликоль в оптимальной 7%-най концентрации. Антиген, концентрированный сохраняет свои антигенные свойства более года при температуре 0-6°С.

2.3. Испытание специфичности и активности пастерел-

лезного антигена

Для определения активности разработанного нами пасте-реллезгого антигена использовали иммунные сыворотки крови кроликов, полученные после введения ваквдны против пастерелле-за. В реакции диффузионной преципитащи при положительных результатах пастереллезный антиген и специфическая сыворотка образовывали выраженные линии преципитации. А при отсутствии специфичности одного из компонентов такие линии не наблюдались .

В реакции диффузионной преципитации для определения активности антигена мы использовали пастереллезную сыворотку в титре 1:128, а антиген в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:1 б и 1:32. Положительные реакции наблюдали в разведениях 1:2, 1:4, 1:8 и 1:16.

В то же время параллельно ставили реакции для определения специфичности антигена. Для этого использовали стандартные гипериммунные сыворотки противсо1с , Уеъзеша еп^еюсо £Шса,$а1т . Вгысе ¿'^а о^тК'З. Пас-

тереллезный антиген с вышеуказанными сыворотками дал отрицательную реакнию. •

Таким образом, разработанный наш антиген специфичен и имеет титр в реакции диффузионной преципитации 1:16.

2.4. Разработка оптимальной схемы иммунизации вакциной против пастереллеза в сочетании с имму-

номодуляторами

Для выявления иммуностимулирующих свойств при вакцинации кроликов против пастереллеза были взяты следующие препараты: дипромоний, липоевая кислота и витамин и. Оти препараты вводили кроликам /учитывая терапевтические дозы/ внутримышечно и перорально /после предварительной полуголодной диеты/ в дозах 30,0 и 100,0 мг соответственно. Для определения действия препаратов, через 10 дней после их введения, ис-

следовали содержание в периферической крови Т- и В^лимфоцитс и определяли общий белок сыворотки крови. Более выраженные изменения вышеуказанных показателей вызвали дипро'моний и витамин и и менее выраженные - липоевая кислота. Дипромоний и витамин и вызвали достоверное /Р<0,05/ увеличение количества В-лимфоцитов при незначительном колебании Т-лимфоцитов и недостоверное повышение /Р)0,05/ уровня общего белка по сравнению с интакгными животными. При применении пастереллезной формсявакцины в сочетании с дипромонием и витамином и у кроликов на 14-й день после иммунизации наблюдали дальнейшее увеличение количества В-лимфоцитов /от 30 до 55-60%/ и уровня общего белка /от 6,2 до 7,0 г$/, а также образование пре-ципитирующих антител в более выраженных титрах Д: 24/,чем одна вакцинация Д: 8/.

После выявления иммуномодулирующих свойств дипромония и витамина и при вакцинации кроликов против пастереляеза была разработана оптимальная схема иммунизации против пастерел леза в сочетании с иммуномодуляторами. При это® схема Шму-низавди кроликов пастереллезной формол вакциной осталась согласно наставления по применению пастереллезной формойвакшши кроликов /двухкратное введение вакцины - повторно через 7 дней после первого введения/. Для определения оптияаиьиой схемы иммунизации кроликов в сочетании с препаратам, животных иммунизировали после однократного, двухкратного и трехкратного введения препаратов с интервалами 10 дней, в тех же дозах. Наиболее выраженные положительные результаты получены после трехкратного введения препаратов. Поэтому оптяиаяьн схемой иммунизащи кроликов против пастереляеза в сочетании с дипромонием и витамином и является трехкратное введение препаратов/ как внутримышечное, так и пероральное/ до вакцинации с интервалом 10 дней. Дозы препаратов для внутримыте кого введения составляли 30,0 мг на одно животное и 100,0 мг при пероральном введении.

2.¿. Биохимические показатели крови кроликов при

вакцинации"против*пастереллеза под влиянием ----------

иммуномодуляторов

Для изучения иммуномодулирующего действия дипромония ; витамина U были взяты 30 кроликов-самцов породы шиншилла ¡-4-х месячного возраста и живой массой 2-2,5 кг, которые ыли разделены на 6 групп, по 5 голов в каждой.

Кроликам 1-й группы вводили внутримышечно 1$-ный раст-■ор дипромония в дозе 30,0 мг 3 раза с интервалом 10 дней.

Кроликам 2-й группы перорально /после предварительной юлуголодной диеты/ с кормом давали дипромоний в дозе 100,0 ir 3 раза с интервалом 10 дней.

Кроликам 3-й группы вводили внутримышечно 1#-ннй раст-юр витамина U в дозе 30,0 мг 3 раза с интервалом 10 дней.

Кроликам 4-й группы перорально /после предварительной голуголодной диеты/ с кормом давали витамин U в дозе 100,0 ir 3 раза с интервалом 10 дней.

По истечении 10-и дней после последнего введения пре-гаратов опытных кроликов иммунизировали противопастереллез-юй Формолвакциной согласно наставления по применению /се-)ия Н-8/. Кролики 6-й группы являлись контрольными.

Сыворотку крови у кроликов исследовали до я после введения препартов, через 7 дней после 2-й вакцинации и спус-'я 7,14,30,90 и 120 дней после второй ишунизации.

Дипромоний и витамин U как при внутримышечном, так и шроральном введении вызвали некоторое повышение белка сы-юротки крови /Р}0,05/, в то же время белковые фракции ос-•авались без существенных изменений.

После иммунизащи, на седьмой день, наблюдали даль-гейшее повышение уровня общего белка /Р)0,05/, меньше всего ? группе, где животных вакцинировали без стимуляторов. Бел-совые фракции на этот срок имели отклонения от таковых в сонтрольной груше, особенно зэ счет ^и В-глобулиновых Фрак-

Oiii.

На седьмой день после второй иммунизации уровень обще-

го белка по сравнению с предыдущим сроком несколько снизился, а из белковых фракций сыворотки - некоторое повышение альбуминов и сниженение i и В -глобулиновых фракций /Р)0,05/.

Максимальное увеличение уровня общего белка произошло на 14-й день после второй вакцинации за счет абсолютного увеличения всех фракций сыворотки, но особенно в группах со стимуляторами /от 1,3 до 1,9 г$/, а в группе, где одна вакцинация, повышение всего лишь на 0,7 т% /Р 0,005/. Из белковых фракций больше других увеличилась ¡¡- -глобулино-вая фракция /Р<0,05/, от 0,58 до 0,89 iчто говорит об интенсивном ^-глобулиногенезе в ответ на пастереллезную вакцину. Одна вакцина вызвала увеличение f -глобулиновой фракции по сравнению с интакгными животными на 0,31 т%. На этот же срок альбумины увеличились от 0,13 до 0,55 г$,<<-гдк булины от 0,09 до 0,17 ß -глобулины - от 0,22 до 0,38 Г/

На 30-й день после второй вакцинации наблюдали снижение общего белка и ^-глобулиновой фракции сыворотки белка крови при некотором повышении альбуминов.

На дальнейших сроках шли колебания и снижение уровня общего белка, оставаясь достоверно повышенным на 60-й день после второй иммунизащш, где применяли витамин U . В группах, где в качестве стимулятора вводили витамин U, повышение ^-глобулиновой фракции было более значительным, чем в группах с дипромонием и одной вакциной.

Таким образом, витамин U способствует образованию j -глобулиновой фракции в более высоких концентрациях, чем дипромоний.

2.6. Изучение влияния иммуномодуляторов на образование гуморального иммунитета у кроликов при пастереллезе

Специфические антитела обнаруживались в реакции диффузионной преципитации уже на 7-ые сутки после вакцинации.

Хитры.преципитирующих антител в сыворотке крови кроликов

после применения вакцины со стимуляторами-на-этот-срок-------------

доходили от 1:12 до 1:28, а в контрольной группе /без стимуляторов/ - до 1:6.

На 7-ой день после 2-ой иммунизации наблюдалось резкое снижение титра преципитинов, особенно в группе, где животные вакцинировались без стимуляторов. В этой группе положительные реакции получались с цельной сывороткой крови, тогда как в группах, где применялись стимуляторы, положительные реакции обнаружены в различных разведениях сывороток /в группах, где применяли дипромоний внутримышечно и перорально титр преципитинов соответственно снизился до 1:4 и 1:2, а в группах, где витаминидо 1:12 и 1:14/..

Максимальные титры преципитирующих антител наблюдали на 14-й день после 2-ой ваквднации во всех пяти группах. Однако, витамин и как при пероральном, так и внутримышечном введении способствовал образованию более высоких титров преципитинов по сравнению с группами, где применяли дипромоний с вакциной и одну вакцину. При пероральном введении витамина и титр преципитинов составил 1:72, что в три с лишним раза выше /Р<0,05/, чем только вакцинированная группа животных /1:20/.

На 30-ый день после 2-ой иммунизации титры преципитирующих антител несколько снизились, а на 60-ый день они уже в 2 раза были ниже, чем на 14-ые сутки после 2-ой вакцинации.

Резкое снижение титра преципитинов наблюдали на бО-нй день после 2-ой вакцинации во всех иммунизированных группах, особенно в группе, где только одна вакцинация /1:0,4/, тогда как в группах, где применяли дипромоний внутримышечно и перорально титры преципитирующих антител били 1:4 и положительная реакция с цельной сывороткой, а в группах, где стимулировали витамином и , 1:6 и 1:8. На 120-ый день после 2-ой иммунизации ни одна группа не дала положительную реакцию.

Таким образом, внутримышечное и пероральное введения витамина и и дицромония перед вакцинацией кроликов против

пастереллеза способствуют образованию более высоких титров специфических противопастереллезных антител, чем после одной вакцины. Притом, титры прештгтируюош: антител в группах, где применялись стимуляторы, и на поздних сроках оставались более высокими, чем после одной вакцинации. Это указывает на стимулирующее действие этих препаратов на иммунную систему кроликов.

2.?. Изучение влияния иммуномодуляторов на противо-пастереллезный клеточный иммунитет у кроликов

Дипромоний после 3-х кратного введения вызвал достоверное увеличение содержания В-лимфопитов в крови. На седьмой день после 1-ой вакцинации количество В-лимфоцитов увеличилось более, чем в 2 раза по сравнению с контрольной группой.

На 7-ой день после второй ваквднации уровень В-лимфоцит о в снизился до исходных щфр /38,0$/, затем к 14 дню вновь повысился до максимума /65,4%/. На 30,60,^0,120 дни после 2-ой вакцинации шло постепенное снижение уровня В-лимфоцитов до исходных щфр.

Содержание Т-дим<6ощтов после приема дипромония не изменилось, а на 7-ой день после вакцинаши уровень Т-дим-«йоиггов снизился в 4 раза /Р<0,001/, по сравнению с первоначальным показателем.

На 7-ой день после второй иммунизации уровень Т-лим-' фоиитов оставался сниженным в 2 раза. На 14,30,60,90 дни после 2-ой вакцинации он был 1,6-2 раза сниженным.

При пероральном введении дипромония динамика изменений В- и Т-лимфоцитов была аналогичной как и при внутримышечном введении.

Внутримышечное и пероральное введение витамина и на сроках 7 дня после 1-ой и 2-ой вакцинации дало больший эффект, чем дипромоний. Причем, само предварительное введение витамина и также было более эффективное, чем действие дипро

ония на В-лимфоцитах без вакцина щи. Динамика изменения ровня Т-лимфоштов была как и-при дипромонии.-----------------------

Одна вакцинация без применения стимуляторов дала дос-оверно менее выраженные изменения содержания изучаемых леток, хотя стимуляцнонный эффект статически доказан.

2.5. Изучение напряженности иммунитета кроликов при ишунизвгщи против пастереллеза со стимуляторами

На подкожное введение смыва суточной агаровой культу-эн вирулентного шташа Р. ш и Носм!а/штамм №116/ в ! кроликов подопытных групп наблюдали повышение температуры. Однако, повышение температуры тела в разных группах 5вио неодинаковое.

Утром следующего дня после введения пастереллезной культуры животным самая высокая температура тела была у интакгных кроликов, далее в группе одной вакциной / без стимуляции/, что в среднем составляла 40,7° и 40,5°.

В остальных подопытных группах тоже наблюдали повышение температуры тела, в этих группах средняя температура доходила только до 39,0° - 39,8°С. Незначительное повышение температуры тела происходило в группах, где в качестве иммуномодулятора применяли витамин и /39,3°С при внутримышечном введении, в дозе 30,0 мг и 39,0°С при пе-роральном введении, в дозе 100,0 мг/. В двух группах, где в качестве иммуномодулятора применяли дипромоний при таких методах введения и в таких же дозах, средняя температура тела на этот срок повысилась соответственно до 39,8 и ЗЭ,9°С. Вечером этого же дня в подопытных группах наблюдали снижение температуры, а в группе интактных животных пали 3 кролика и 2 - в группе одной вакцинацией.

Утром через 48 часов после введения бактериальной суспензии Р.тиНосЫа пали 2 кролика из шестой и I - из пятой группы /одна вакцинация/. В опытных группах на этот

темпе сатура тела животных снизилась до исходных ве-

'-"ЧИН .

Таким ооразом, при подкожном введении вирулентной пас. .•.;.•. е:«::--г культуры в«С3^00 пали 100$ интактннх и 60$ пятой группы, где применяли одну пастереллезную - отеолквастчзвую вакдану. ч группах, где до вакиинаши кро-.^кай вводили дипромоний 'И витамин и наблюдали некоторое повышение температуры тела, которая снизилась до нормк на вторые .сутки после введения бактериальной суспензии.

Из -.опытных групп самое незначительное повышение температуры'тела /по сравнению с интактными/ наблюдали в группах, где в'качестве иммуномодулятора применяли витамин и, особенно при пероральном его введении в дозе 100,0 мг.

Проведенные опыты показали, что использование иммуно-модуляторов при иммунизации кроликов против пастереллеза способствует образованию напряженного иммунитета.

для выяснения причины гибели кроликов мы изучали пато-логоанатомическую картину у павших животных 'и проводили бактериологическое исследование.

данные патологоанатомических вскрытий и бактериологических исследований показали, что после введения вирулент-- но;: пастереллезной культуры у павших кроликов отмечали типичный шйекционный процесс в виде септицемии, что и явился причиной смерти животных.

ВЫВОДЫ

1. Синтетические препараты дипромоний и витамин и об' ладают иммуномодулирующей активностью при пастереллезе.

2. Усиление иммуногенеза с помощью дипромония и вита* мина-1) при последующей вакцинации происходит за счет активации как клеточного, так и гуморального факторов иммунитета:

а/ повышается количество шркулирующих в крови В-лим-тоштов;

б/ титра'"специфических- антител- я сыворотке крови че->еэ 14 дней после второй иммунизации кроликов против пас-'ереллеэа в сочетании с дипромонием б иди выше в 2 раза, а : витамином I) - в 3,5 раза по сравнению с контрольной груп-гой.

3. Разработана оптимальная схема применения препара-ов /дипромония и витамина и/ для стимуляции иммуногенеза, :оторая заключается в трехкратном введении препаратов с

!0 дневным интервалом перед вакцина шей.

4. Контрольное заражение вирулентным штаммом пастерелл ¡роликов через 4 месяца после иммунизации против пастерел-[еза в сочетании с дипромонием и витамином и показало об->азование напряженного иммунитета.

5. Испытанные иммуномодуляторы не оказывают отрица-■ельного влияния на общее состояние организма животных и [е вызывают воацалительных реакций на месте их введения.

6. Разработана методика приготовления корпускулярно-'о антигена из культур пастерелл для реакций диффузионной фецишггации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предложен способ стимуляции иммуногенеза при вак-щнации кроликов против пастереллеза, который основан на ючетанном применении пастереллезной формолвакцины с им-^номолулятощш, на что получено удостоверение радаонали-¡аторского предложения "Способ стимуляции иммуногенеза при закцинации кроликов против пастереллеза" №313-91.

2. Предложена методика получения пастереллезного антигена дая реакции преципитации путем осаждения полиэти-хенгликолем, на что получено удостоверение рационализаторского предложения "Антиген для диагностики пастереллеза"

Ь 247-89.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕШАДАМ ДШЖРТАЦШ

1. Миннебаев Ш.Г., Госманов Р.Г. Стимуляция иммуногене за при вакцинации кроликов против пастереллеза. - Животноводству - комплексную программу развития: Тезисы докладов Республиканской научно-производственной конференция /24-26 мая 1990 г./. Казань, 1990, 0.42.

2. Миннебаев Ш.Г., Госманов Р.Г. Влияние дипромония

и витамина и на уровень прецилитинов при вакцина дай кроликов против пастереллеза. - Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезней животных. Межвузовский сб.науч.тр. Казань, 1990, с. 53-66.

3. Миннебаев Ш.Г., Госманов Р.Г. Белковые фракция оы-воротки крови кроликов под действием дипромония и яиташна! при вакцанадаи кроликов против пастереллеза. - Достижения Казанской ветеринарной школы - в практику животноводства: Тезисы докладов Республиканской научно-производственной ко* ференции /29-31 мая 1991 г./. Казань, 1991, с.9.

Заказ N 532. Подписано в печать 13.04.93. Формат 60х841/16 Бумага писчая. Печать офсетная. I п.л. Тираж 250 экз. Участок офсетной печати КВИ. Казань-420074. Ветинститут.