Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Усовершенствование методов контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых от птиц

На правах рукописи

НОВИКОВА ОКСАНА БОРИСОВНА

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ

ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИ ОПАСНЫХ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЯЕМЫХ ОТ ПТИЦ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и ИММУНОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена в отделе микробиологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства

Научный руководитель ■

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Борисенкова Адель Наумовна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Калишин Николай Михайлович

кандидат ветеринарных наук Персов Аркадий Семёнович

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко

Защита состоится « » СС^ОиЫК^ 2004 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» (196084, Санкт-Петербург, Черниговская ул., д. 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан И » ММЛ, 2004 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

О.В.Узюмова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

з

Актуальность темы. Птицеводство - наиболее наукоёмкая и динамичная отрасль мирового и отечественного сельского хозяйства. За последние 20 лет среднегодовой прирост яиц в мире составил 4,4%, а мяса птицы - 5,2%. По расчётам специалистов в 2022 году по удельному весу мясо птицы будет занимать первое место среди всех видов животных (Фисинин В.И., 2004). В условиях экономической реформы, в агроценозах повышается риск возникновения и распространения инфекционных, и, в частности, бактериальных болезней птиц. Наличие их в хозяйстве негативно сказывается не только на эпизоотической ситуации, но и на экономике предприятия. Возбудители бактериальных болезней в отдельности или в ассоциации оказывают существенное влияние на падёж птицы при остром или подостром течении заболевания (пастереллёз, колибактериоз, стафилококкоз и другие). При хронических, вялотекущих болезнях бактериальной этиологии отмечают неравномерный или низкий прирост массы бройлеров, повышенную чувствительность птицы к стрессам, снижение яйценоскости и выводимости цыплят, ухудшение биологических качеств эмбрионов, низкую конверсию корма, снижение поствакцинального противовирусного иммунигета (Борисенкова А.Н., 2001).

Бактериальные болезни птиц следует рассматривать в двух аспектах - с позиции опасности для сельскохозяйственной птицы, т.е. в аспекте противо-эпизоотической защиты и предотвращения экономических потерь как основного показателя эффективности птицеводства, и с позиции возможности заболевания людей, т.е. в аспекте противоэпидемиологической защиты, защиты здоровья людей (Борисенкова А.Н., 1998). Имеется достаточно широкий спектр микроорганизмов, персистирующих в организме кур в основном в кишечнике, не вызывающих клинического заболевания их, но эпидемиологически опасных. Птицы могут быть носителями многих зоопатогенных микроорганизмов, таких как Escherichia coli, Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Особое внимание должно быть обращено на то, что сельскохозяйственные птицы могут являться носителями эпидемиологически опасной кишечной микрофлоры, ведущими представителями которой являются Salmonella enteritidis и Campylobacter jejuni. При нарушении санитарных правил получения птицеводческой продукции происходит контаминация её, что может в конечном итоге привести к заболеванию людей, и особенно детей (Максимова З.Н., 1987; Козак С.С., Гусев А.А., Лищук А.П., Берлова Г.А, 1992; Борисенкова А.Н., 1995; Waldroup A.I., 1996; Каф-тырева Л.А., 1999 и др.). Одним из таких заболеваний является кампилобак-териоз.

Возбудитель кампилобактериоза является комменсалом желудочно-кишечного тракта птиц. Это определяет бессимптомное течение инфекции и возможность реализации населению контаминированной птицеводческой продукции кур без ограничения, что способствует распространению кампи-лобактериоза. Эпидемиологическая что даже незначительная его

1 г мяса) может быть опасной для человека (Черкасский Б.Л., Минаев В.И., 1993).

В этой связи изучение спектра микроорганизмов, выделяемых от разных видов и кроссов сельскохозяйственной птицы в хозяйствах различного технологического направления, усовершенствование методов контроля и профилактики бактериальной инфицированности птиц является объективной необходимостью.

Цель работы. Целью настоящих исследований явилось изучение спектра микрофлоры, выделяемой от разных видов птиц на птицефабриках различного технологического направления и усовершенствование методов контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов -возбудителей бактериальных болезней.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

- выделить, идентифицировать и выявить доминирующие виды микроорганизмов от птиц разных видов и возрастов на птицефабриках различного технологического направления и изучить их вирулентные свойства;

- освоить и модифицировать методы лабораторной диагностики кампи-лобактериоза птиц, изучить уровень инфицированности кур кампилобакте-риями на различных птицефабриках и определить удельный вес кампилобак-терий в спектре микрофлоры, выделяемой с помётом птиц;

- изучить микрофлору, выделяемую в смывах с тушек кур и воде из ванн охлаждения на различных технологических этапах процесса убоя;

- определить эффективность препарата энрофлоксацина отечественного производства в отношении микроорганизмов, выделяемых о птиц;

- усовершенствовать методы контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых от птиц.

Научная новизна. Изучен спектр эпидемиологически опасной и условно-патогенной микрофлоры, выделяемой от кур яичных и бройлерных пород, индеек, гусей. Из различных объектов выделены микроорганизмы 19-ти видов. Впервые от птиц выделены культуры микроаэрофильного стрептококка, относящегося к роду Melissococcus. Установлена идентичность микрофлоры, выделяемой из трупов цыплят и кур и групповых проб помёта.

Предложена ускоренная схема идентификации энтеробактерий, выделяемых от птиц.

Изучены вирулентные свойства 46 микроорганизмов 8-ми видов, выделенных из помёта и трупов птиц на модели интраорбитального заражения цыплят первых дней жизни и на модели внутривенного заражения цыплят и кур. Впервые получены данные по вирулентности культур Citrobacter freundii.

Модифицирована методика выделения кампилобактерий из помёта птиц, внутренних органов, смывов с тушек и ванн охлаждения. Впервые в качестве компонента среды для выделения кампилобактерий использована кровь нового биологического объекта - птицы.

Впервые-выявлен-удельный вес кампилобактерий на фоне микрофлоры, выделяемой из помёта кур.1 i

Проведены бактериологические исследования смывов с тушек кур на различных технологических этапах процесса убоя и проб воды из ванн охлаждения, установлена идентичность микрофлоры, выделяемой из групповых проб помёта птиц и в убойном цехе птицефабрики.

Для снижения бактериальной инфицированности птиц эпидемиологически опасной и условно-патогенной микрофлорой показана эффективность препарата отечественного производства из группы энрофлоксацинов.

Предложен прижизненный метод контроля инфицированности птиц бактериальной микрофлорой с использованием исследований мазков из трахеи и групповых проб помёта.

Практическая значимость. Предложенные методы исследования мазков из трахеи и групповых проб помёта можно рекомендовать как эффективные прижизненные способы контроля птицы на наличие патогенных и опасных для человека микроорганизмов, что позволяет выработать дальнейшую стратегию проведения оптимальных мероприятий при выращивании и убое птицы с целью снижения контаминации тушек на выходе готовой продукции. Разработанные «Методические рекомендации по выделению кампилобакте-рий и другой кишечной микрофлоры из групповых проб помёта птиц» могут быть использованы в работе врачами-бактериологами лабораторий птицефабрик и бактериологических отделов ветеринарных лабораторий.

Основные положения, выносимые на защиту:

- спектр микрофлоры, выделяемой от птиц разных видов и возрастов в птицехозяйствах различного технологического направления;

- прижизненный метод контроля инфицированности птиц бактериальной микрофлорой с использованием исследований мазков из трахеи и групповых проб помёта;

- модифицированный метод выделения кампилобактерий и уровень инфицированности ими птиц.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований заслушаны на заседаниях Методических Советов отделов микробиологии и паразитологии ВНИВИП (2000-2004 гг.); Учёных Советов ВНИВИП (20002004 гг.); на Городской научно-практической конференции эпидемиологов, микробиологов, педиатров, санитарных и ветеринарных врачей «Проблема диагностики кампилобактериоза, проявления эпидемического и эпизоотического процессов, профилактика» (Санкт-Петербург, 2001 г.); на Международной конференции-выставке «Птицеводство: мировой и отечественный опыт» (Зеленоград, 2002 г.); на Научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2002 г.); на X и XII Московских Международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2002, 2004 гг.); на Всероссийской конференции молодых учёных и аспирантов по птицеводству (Сергиев Посад, 2002 г.); на Конференции национального комитета по сотрудничеству птицеводов России с Всемирной научной ассоциацией по птицеводству (Зеленоград, 2003 г.); на IV Украинской конференции по птицеводству с международным участием «Птицеводство» (Алушта, 2003 г.); на второй международной межву-

зовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург, 2004 г); на Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина 2004: современные аспекты разработки, маркетинга и производства ветеринарных препаратов» (Феодосия, 2004 г.); на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей во ВНИВИП (2000-2004 гг.), региональном семинаре (Екатеринбург, 2003 г.), в Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории (Москва-Косино, 2004 г.) и на координационных совещаниях специалистов птицеводства во ВНИВИП (2000-2004 тт.).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, 1 сдана в печать.

Структура и объём работы. Диссертация изложена в одном томе на 168 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 12 таблицами, 5 диаграммами, 4 гистограммами, 4 фотографиями, 5 рисунками и 1 графиком, Список использованной литературы включает 211 источников, в том числе 79 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Исследования проводили с 2000 по 2004 год в отделе микробиологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства (ВНИВИП) в соответствии с программой НИР, в 30-ти птицехозяй-ствах различного технологического направления, в том числе птицефабрики по производству яйца - 20, птицефабрики по производству мяса бройлеров -5, хозяйства по выращиванию гусей - 3, индейководческие птицефабрики - 2.

В лабораторных опытах для определения вирулентных свойств выделенных культур использован 121 цыпленок, в том числе 86 цыплят суточного возраста, 35 цыплят 60-120-дневного возраста.

В работе нами из различных объектов выделено и идентифицировано 1174 культуры 19-ти видов микроорганизмов. Объектами исследований были поражённые органы павших и вынужденно убитых птиц разных видов и возрастов, мазки из трахей клинически здоровых особей, групповые пробы помета, смывы с тушек и пробы воды из ванн охлаждения в убойных цехах птицефабрик

В работе для выделении и идентификации микроорганизмов были использованы общепринятые микробиологические методики с применением простых и дифференциально-диагностических питательных сред, биохимических тестов. Для идентификации энтеробактерий, выделяемых от птиц, нами предложена ускоренная схема. Для выделения кампилобактерий использовали среду, применяющуюся в медицинской практике, в нашей модифика-

ции. Модификация заключалась в использовании крови новою биологического объекта - птицы (курицы)

Чувствительность выделенных штаммов различных культур к энроф-локсацину определяли двумя методами: методом серийных разведений и методом дисков, основанным на диффузии антибиотика в питательную среду

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Спектр микрофлоры, выделяемой от птиц в хозяйствах различного технологического направления

Спектр микрофлоры, выделяемой от птиц, достаточно широк и представлен 19-ю видами (гистограмма 2 2.1.1) Наибольший удельный вес приходится на кишечную палочку - 41,6% Значительный процент составляет кокковая микрофлора - 24.4?о, протей - 12,5% и синегнойная палочка - 6,2% В 3,7-2,8% случаев были выделены культ>ры зпидемиологически опасных видов микроорганизмов - Salmonella ententidis и Camp>lobacter jejuni соответственно.

Из 20-ти хозяйств по производству яйца выделено 435 культур микроорганизмов 17-ти видов, доминирующими из которых являются Ebchenchia cob (38,2%), Slaphylococcus aureus (8,3%), Pseudomonas aeuiginosa (8%) и Proteus vulgans (7,8%) Из 5-ти хозяйств по производству мяса бройлеров выделено 617 культур 15-ти видов микроорганизмов, из которых наибольший процент выделения приходится на Eschenchia coli (47%), Staphylococcus auieus (14,4%), Proteus vulgans (13,5%) и Staphylococcus epidermidis (7%). Из двух хозяйств по производству мяса индеек выделено 74 культуры 6-ти видов микроорганизмов, наибольший процент которых также приходится на Escherichia coli (39,2%). Pseudomonas aerugmosa (21.6%), Slaphylococcus auieus (14,4%) и Citiobacter freundii (13.5%) Из трех хозяйств по выращиванию гусей выделено 48 культур 6-ти видов микроорганизмов, ведущими яв-

ляются Proteus vulgaris (43,75%), Pseudomonas aeruginosa (39,58%) и Escherichia coli (6,25%). Из полученных нами результатов исследований видно, что, независимо от специализации хозяйств, доминирующими видами микроорганизмов являются Escherichia coli, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Однако процентное соотношение различно и обусловлено различной эпизоотической ситуацией в исследуемых хозяйствах.

2.2.1.1 Микрофлора, выделяемая из трупов птиц

Нами были проведены бактериологические исследования трупов птиц разных видов и возрастов на птицефабриках различного технологического направления и патологического материала, поступившего из птицехозяйств различных областей для проведения бактериологических экспертиз. Всего исследовано 298 трупов павших и вынужденно убитых птиц из 24-х птицефабрик. Высевы делали из крови сердца, лёгких, печени, желчного пузыря, селезёнки, яичников, желтка, перитонеальной жидкости, глаз, синусов, носового экссудата, суставов, подошв лапок. Всего был сделан 651 высев из разных органов и выделено 677 культур 16-ти видов микроорганизмов. Доминирующими видами являются Escherichia coli, удельный вес которой составляет 44,3%, Staphylococcus aureus - 14,3% и Proteus vulgaris - 11,7%. Также из органов были выделены эпидемиологически опасные виды Salmonella enteritidis (4,7%) и Campylobacter jejuni (1,33%).

Культуры Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis выделяли из многих органов, что свидетельствует о генерализованности инфекционного процесса. Культуры Klebsiella pneumoniae были выделены из лёгких и носового экссудата, культуры Campylobacter jejuni - из печени, Streptococcus zooepidemicus -из суставов и подошв лапок, что указывает на органотропность этих видов микроорганизмов.

2.2.1.2 Микрофлора, выделяемая из мазков с трахеи

В работе впервые использован прижизненный метод контроля бактериальной инфицированности птиц: бактериологическое исследование мазков из трахеи. Мазки брали с верхней части трахеи стерильными ватными палочками. Первоначально этот метод предложен для мониторинга на микоплазмоз, посевы делали на транспортную среду для микоплазм. Далее пробы пересевали на мясо-пептонный бульон и исследовали по общепринятым микробиологическим методикам. Всего было исследовано 134 мазка из трахеи клинически здоровых взрослых птиц (100-300-дневного возраста) из 5-ти птицефабрик: 4-х по производству яйца и одной по производству мяса бройлеров. Из 134 мазков с трахеи в 36 пробах (26,9%) выделены микроорганизмы 4-х видов. Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus spp., Streptococ-

cus spp Доминирующим видом является Streptococcus spp. удельный вес которого составляет 66,1%. что указывает на ею органотропность

Из результатов полученных нами в исследованиях видно, что почти 30% птицы являются носителями условно патогенных микроорганизмов сел-тико-токсического действия Выделение из трахеи таких видов микроорганизмов как Pseudomonas aerugmosa и Eschericlua coh указывает на дыхательные пути как одни из возможных ворот инфекции, вызываемой этими возбудителями

2.2.1.3 Микрофлора, выделяемая из помёта птиц

Параллельно с бактериологическими исследованиями трупов в отдельных хозяйствах были проведены бактериологические исследования групповых проб помета Вся птица была клинически здорова

Всего была исследована 181 групповая проба помета от двух видов птиц (курица и индейка) разного возраста из 9-ти хозяйств различного технологического направления, в том числе хозяйства по производств}' яйца - 4, хозяйства по производству мяса бройлеров - 4 и 1 индейководческая птицефабрика Всего из помета выделено 367 культур 12-ти видов микроорганизмов (диаграмма 2 2 13 1) Доминирующими являются Escherichia coli. удельный вес которой составил 40,9%, Pioteus vulgaus - 14,99%. Citiobactei fieundii -12,3% и Staph)lococcus aurens - 9.5%

Из 4-х птицефабрик по производств) яйца из 56-ти проб выделено 109 культур 9-ги видов микроорганизмов, из 4-х по производству мяса бройлеров из 115-ти проб - 225 культур 10-ти видов, из индейководческой из 10-тп проб - 33 культуры 4-х видов Доминирующими видами как в хозяйствах по производству яйца, так и по производств} мяса бройлеров и индеек явились Es-chenchia coli, кокковая микрофлора, микроорганизмы родов Pioteus и Citro-bactei

Следует отметить, что из групповых проб помёта были выделены и эпидемиологически опасные виды микроорганизмов Campylobacter jejuni (5,7%) и Salmonella enteritidis (2,2%), которые выделяются как в хозяйствах по производству яйца (15,6% и 1,8% соответственно), так и мяса бройлеров (1,7% и 2,75%).

Нами установлено, что у цыплят раннего возраста (до 10 суток) видовой состав микрофлоры представлен 1-3-мя видами микроорганизмов. У цыплят более старшего возраста спектр выделяемой с помётом микрофлоры представлен большим количеством видов (4-6), в том числе высоким процентом выделения протея, как и у маленьких цыплят. Выделение большого количества протея указывает на нарушение нормального микробиоценоза кишечника цыплят.

Спектр микрофлоры, выделяемой из помёта, в каждом отдельном хозяйстве, был различен и зависел от эпизоотической ситуации на данной птицефабрике.

Полученные данные позволяют утверждать, что микроорганизмы, выделяемые из групповых проб помёта, в большинстве случаев идентичны выделяемым из трупов: 10 нозологических единиц микроорганизмов в одних и тех же хозяйствах выделяются как из помёта, так и из трупов цыплят и кур. Следовательно, метод исследования групповых проб помёта можно использовать как эффективный прижизненный метод контроля живой птицы на но-сительство зоопатогенных и эпидемиологически опасных микроорганизмов. Это позволяет выработать дальнейшую стратегию проведения оптимальных мероприятий при выращивании и убое птицы с целью снижения контаминации тушек на выходе готовой продукции, что особенно актуально для хозяйств по производству мяса бройлеров.

2.2.2 Изучение вирулентных свойств культур микроорганизмов, выделенных из помёта и трупов птиц

Вирулентные свойства были изучены на моделях интраорбитального заражения суточных и внутривенного заражения 60-дневных цыплят у 46 культур 8 видов, в том числе Escherichia coli - 17 культур, Salmonella enteritidis - 3 культуры, Citrobacter freundii- 2 культуры, Providensia stuartii - 2 культуры, Proteus - 6 культур, Escherichia coli+Proteus - 5 культур, Pseudomonas aeruginosa - 4 культуры, Staphylococcus aureus - 3 культуры, Enterococcus - 4 культуры. При этом 22 культуры были выделены из внутренних органов трупов птиц (сердце, лёгкие, печень, глаза), 24 культуры - из групповых проб помёта.

Из 24-х культур, выделенных из помёта, 13 (6 Escherichia coli, 4 Proteus vulgaris, 3 Escherichia coli + Proteus vulgaris) при интраорбитальном и 3 (2 Es-cherichia coli, Citrobacter freundii) при внутривенном заражении были вирулентны и вызывали гибель цыплят в течение 1-5 суток, на вскрытии отмечали признаки острого сепсиса - серозный перикардит, катаральную пневмонию, геморрагический энтерит; 2 (Escherichia coli, Escherichia coli + Proteus

vulgaris) при интраорбитальном и 1 (Escherichia coli) при внутривенном были слабовирулентны и вызывали заболевание цыплят, при убое их через 10 суток из всех внутренних органов были выделены культуры исходного заражающего штамма; 5 (2 Escherichia coli, Escherichia coli + Proteus vulgaris) были авирулентны и не вызывали гибели цыплят или заболевания цыплят.

Из 22-х культур, выделенных из внутренних органов, 7 при интраорби-тальном заражении (2 Escherichia coli, 3 Salmonella enteritidis, 2 Pseudomonas aeraginosa) и 7 при внутривенном заражении (3 Escherichia coli, Citrobacter freundii, 2 Pseudomonas aeraginosa, Staphylococcus aureus) были вирулентны и вызывали гибель цыплят в течение 1-5 суток, на вскрытии отмечали признаки острого сепсиса - серозный перикардит, катаральную пневмонию, геморрагический энтерит; 4 (2 Proteus vulgaris, 2 Staphylococcus aureus) при интра-орбитальном заражении были слабовирулентны и вызывали заболевание цыплят, при убое их через 10 суток из всех внутренних органов были выделены культуры исходного заражающего штамма; 4 (4 Enterococcus) были авиру-лентны и не вызывали гибели или заболевания цыплят.

Из результатов проведённых исследований видно, что все культуры, причём даже одного и того же вида, имеют различную степень вирулентности: встречаются как вирулентные, так и слабовирулентные и авирулентные штаммы. Вирулентные и слабовирулентные штаммы как патогенных, так и условно патогенных микроорганизмов вызывают или гибель цыплят в первые несколько суток, или заболевание, вследствие которого птица отстает в росте и развитии.

2.2.3 Выделение кампилобактерий из различных объектов 2.2.3.1 Освоение и модификация методики выделения кампилобактерий

При отработке методики выделения кампилобактерий применяли методику, используемую в медицине, руководствуясь «Инструкцией по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза» (1989). В качестве транспортной среды использовали физиологический раствор, в качестве питательной среды для выращивания кампилобактерий - плотную среду - кро-вяно-угольный эритрит-агар с добавлением антибиотиков и пирувата натрия (смесь Буцлера). Для создания микроаэрофильных условий (в атмосфере из 85% N2, 10% СО2 и 5% O2) использовали эксикатор с плотно притертой крышкой со сжиганием в нём кислорода. Посевы культивировали в термостате при температуре 42°С в течение 48-72 часов. По истечении этого времени проводили визуальную оценку выросших колоний и микроскопию при окрашивании по Граму. Исследуемые микроорганизмы при микроскопии представляли собой грамотрицательные, спиральноизгонутые палочки шириной 0,2-0,5 мкм и длиной 0,5-0,8 мкм, образовывали один или несколько витков, чаще имели вид запятой, буквы S или крыльев летящей чайки, спор и капсул не образовывали. После изучения морфологических свойств для дальнейшей родовой дифференциации проводили тесты на способность к продукции цитохромоксидазы и каталазы, температурный тест, тест на спо-

собность к росту на среде Ресселя. Культуры были каталазо- и оксидазопо-ложительные, не росли на среде Ресселя. Таким образом, выделенные культуры по морфологическим и культурально-биохимическим свойствам соответствовали признакам рода Campylobacter.

Для определения вида кампилобактерий использовали тест на способность быстро гидролизовать гиппурат натрия, который позволяет дифференцировать термофильные кампилобактерий различного происхождения на два вида - C.jejuni и C.coli. Исследуемые культуры обладали способностью гидролизовать гиппурат натрия, таким образом, выделенные культуры были отнесены к виду Campylobacter jejuni.

В методике, применяемой в медицине, в качестве одного из компонентов среды для выделения кампилобактерий используется кровь человека. В связи с тем, что объект наших исследований птица, кровь человека была нами заменена на кровь родственного биологического объекта - курицы в том же объёме (соотношении). Было проведено исследование внутренних органов (печени) трупов кур из птицефабрики по производству яйца. Среда с кровью птицы показала себя эффективной для выделения кампилобактерий. Из всех 9-ти проб печени были выделены культуры Campylobacter jejuni.

Также на среде для выделения кампилобактерий при тех же условиях культивирования впервые нами были выделены культуры микроаэрофильно-го стрептококка, относящегося к роду Melissococcus.

2.2.3.2. Выделение кампилобактерий из помёта кур

При использовании вышеизложенной методики с целью выделения кампилобактерий были проведены исследования групповых проб помёта на птицефабриках различного технологического направления. На яичной птицефабрике было происследовано 30 групповых проб помёта от взрослых кур 500-дневного возраста. На бройлерной птицефабрике происследовано 40 групповых проб помёта 5-ти залов одного птичника (по 8 проб из каждого зала) от цыплят 31-дневного возраста.

В результате исследований на яичной птицефабрике от кур 500-дневного возраста из 30 групповых проб помёта было выделено 17 культур кампилобактерий, что составило 57% от общего количества проб. На бройлерной птицефабрике от цыплят 31-дневного возраста из 40 групповых проб помёта кампилобактерий были выделены в 4-х пробах, что составило 10% от общего числа проб.

Также на птицефабрике по производству яйца при исследовании из 30 групповых проб помёта было выделено 22 культуры (73,3%) Melissococcus, относящихся к зоопатогенным микроорганизмам, удельный вес которых составил 5,99%.

Для выявления удельного веса кампилобактерий нами проведено изучение спектра патогенной и условно-патогенной микрофлоры, выделяемой из помёта от птиц. Удельный вес кампилобактерий на фоне микрофлоры, выде-

ляемой из групповых проб помета птиц на птицефабрике по производств) яйца составил 24,6% по производству мяса бройлеров - 4 7°о

Выделение кампилобактерии из гр>пповы\ проб помета подтверждает факт носигельства кампилобактерий у птиц

2.2.3.3 Выделение кампилобактерии со смывов с тушек и воды из ванн охлаждения в убойных цехах птицефабрик

Учитывая, что из трупов и помета кур выделен достаточно широкий спектр патогенной и условно-патогенной микрофлоры, было целесообразно изучить микрофлору выделяемую из смывов с тушек на разных технологических этапах процесса убоя, в том числе и на выходе готовой продукции, и проб воды из ванн охлаждения, так как инфицированность птицы данными микроорганизмами увеличивает риск обсеменения ими тушек кур при убое

Всего было исследовано 52 смыва с тушек и 28 проб воды из ванн охлаждения на двух птицефабриках очной по производству яйца и одной по производству мяса бройлеров

Из смывов с тушек и воды из ванн охлаждения выделены микроорганизмы 9-ти видов (диаграмма 2 2 3 3 1). наибольший удельный вес из которых у Eschenchia coli - 39,4%, Klebsiella pneumoniae - 26,6% Staphylococcus aiuens - 10,6% Также выделены эпидемиологически опасные виды - Salmonella eiitentidis и Camp>lobacter jejuni - по 3,2% каждого

Дивершта 2 2 3 3 1 Спектр микрофлоры, вьдоляемои со смывов с тушек

Salmonella ententidu 3 2 , , Providentia Stuart,.

Campylobacter jejuni 3 2

<3 f '

MellSSOCOCCUS I i' ^y

4 зА В I ЧГ \ Proteus vulgaris УЯ 1 ' \

\ 39 4

Citrobacter freundn / ^Säi^t .. \ Escherichia coli

10 E

Staphylococcus aureus

2ББ

Klebsiella pneumoniae

Из смывов с тушек в }бойном цехе пишефабрике по произволегву яйца из 20-ти проб выделено 39 микроорганизмов 6-ти видов Наибольший процент выделения приходится на Eschenchia coli удельный вес которой составил 43,6%, и Klebsiella pneumoniae - 33 3% Также были выделены культу -ры эпидемиологически опасного вида Campylobacter jejuni - 7,7% Из 20-ти проб воды из ванн охлаждения той же птицефабрики было выделено 16 микроорганизмов 3-х видов наибольший процент из которых приходится на

Klebsiella pneumoniae - 56,25% Также были выделены культуры эпидемиологически опасного вида Salmonella enteritidis -18,75%.

На бройлерной птицефабрике из 40 проб, взятых в убойном цехе на различных этапах технологического процесса убоя и воды из ванны охлаждения выделено 39 культур 6-ти видов микроорганизмов. Наибольший процент выделения приходится на Escherichia coli - 41% и Staphylococcus aureus -25,6%

Наибольший процент - 35,9% - и количество видов (6) микроорганизмов выделено на втором этапе наших исследований - после потрошения. Это, вероятно, связано с тем, что при потрошении микроорганизмы из кишечника птицы (через клоаку или разрывы кишечника при ручном потрошении) попадают на поверхность тушки. После выхода из ванных охлаждения обсеме-ненность тушки несколько снижается (17,9%), и наименьшая обсеменённость на последнем этапе - выходе готовой продукции (10,3%).

Выделение кампилобактерий из смывов с тушек отмечено нами только на одной птицефабрике - по производству яйца. В ваннах охлаждения кампи-лобактерии выделены не были, так как пробы были взяты в начале технологического процесса при охлаждении не более 5% убойных кур.

На второй птицефабрике (по производству мяса бройлеров) кампило-бактерии были выделены только из групповых проб помёта. Ни из смывов с тушек, ни из ванн охлаждения кампилобактерии выделены не были. Вероятно, это связано, с одной стороны, с уровнем ветеринарно-санитарных условий в убойном цехе, с другой стороны, возможно, это обусловлено меньшим наличием кампилобактерий в кишечнике птицы. Об этом свидетельствует количественная разница в выделении кампилобактерий из групповых проб помёта. Если на одной птицефабрике - 57%, то другой - 10%, т.е. в 5,7 раза меньше. На птицефабрике, где кампилобактерии в групповых пробах помета выделены в 57% случаев, возбудитель был выделен и из смывов с тушек.

Выделение условно-патогенной, а также эпидемиологически опасной микрофлоры (сальмонелл и кампилобактерий) при наших исследованиях в ваннах охлаждения и на выходе готовой продукции доказывают существование перекрёстной контаминации доброкачественной продукции в ваннах охлаждения, куда данные микроорганизмы попадают из помёта птиц. Полученные данные указывают на то, что присутствие зоопатогенных микроорганизмов в кишечнике птиц, выделяемых из помёта, увеличивает риск обсеменения ими тушек при убое.

2.2.4 Испытание препаратов неспецифической защиты для снижения инфицированности птицы кишечной микрофлорой

2.2.4.1 Определение чувствительности выделенных культур к энрофлоксацину отечественного производства

С целью поиска препаратов неспецифической защиты, эффективных при бактериальных болезнях птиц, нами была испытана эффективность препарата из группы фторхинолонов - энрофлоксацина отечественного произ-

водства (группа компаний ВПК) в отношении микроорганизмов, выделяемых от птиц.

В работе было использовано 60 культур 9-ти видов микроорганизмов, в том числе Escherichia coli - 22 культуры, Salmonella enteritidis - 6 культур, Citrobacter freundii - 7 культур, Klebsiella pneumoniae - 7 культур, Providencia stuartii - 1 культура, Pseudomonas aeruginosa - 1 культура, Proteus vulgaris - 9 культур, Staphylococcus aureus - 5 культур, Streptococcus zooepidemicus - 2 культуры, выделенных из поражённых органов трупов павших и вынужденно вынужденно убитых птиц, из групповых проб помёта от живых кур, от здоровых кур (смывы с тушек в убойном цехе), а также музейные культуры, хранящиеся в отделе института.

При определении чувствительности к энрофлоксацину методом дисков 13 культур микроорганизмов (25,49%) имели зону задержки от 25 до 35 мм, 19 культур (37,25%) имели зону задержки 18-24 мм. Наибольшая зона задержки выявлена у Klebsiella pneumoniae - 35 мм, 24-26 мм у Streptococcus zooepidemicus и музейных штаммов Escherichia coli и Salmonella enteritidis.

13 культур (25,49%) имели зону задержки 14-16 мм. Это культуры эн-теропатогенной микрофлоры, выделенной в основном из групповых проб помёта цыплят и кур. 6 культур (11,77%) имели зону задержки 11-13 мм. При вычислении % результаты чувствительности протея были исключены.

Средние статистические данные по видам микроорганизмов получены путём математической обработки данных. С этой целью была использована компьютерная программа расчета средних значений - М, среднеквадратичных отклонений ошибок оценки среднего значения - а, доверительного интервала для среднего значения - m и проверки достоверности различия средних значений по критерию Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

Методом серийных разведений была определена минимальная подавляющая концентрация антибиотика (МПК) культур Escherichia coli, Salmonella enteritidis и Staphylococcus aureus (музейные штаммы, давшие зоны задержки 26-28 мм при оценке методом дисков) и одна культура Escherichia coli, выделенная из помёта, давшая зону задержки 15 мм.

В работе использовали 10% раствор Энрофлона, было сделано 21 разведение от 5% (10000 у активного вещества) до 0,0 0 0 0 ;(0,0625 у: и в н о -го вещества).

У трёх культур (Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus), давших зону задержки 26-28 мм, МПК была в два раза выше и составила 0,00025% (25 гамм).

Следует отметить, что в пробирках, следующих за теми, разведение препарата в которых соответствовало МПК, отмечали рост культуры менее интенсивный, чем в контрольных без добавления энрофлона. При подсчёте колоний из этих пробирок было установлено, что в 1 мл Escherichia coli содержится 17,3x10^ микробных клеток, Salmonella enteritidis ■ 24x105, Staphy-lococcus aureus - 48x104 микробных клеток против микробных

клеток в контроле. Очевидно, что при уменьшении дозы энрофлона ещё имеет место бактериостатический эффект.

Из представленных данных видно, что использование препарата эн-рофлоксацина в птицеводстве перспективно, так как 88,23% штаммов были чувствительны и высокочувствительны и только 11,77% культур - малочувствительны. Исключение представляют только культуры протея. Однако, при применении в птицеводстве препарата в каждом отдельном случае необходимо проверять его чувствительность к исследуемым культурам.

4. ВЫВОДЫ

1. Спектр микрофлоры, выделяемой от разных видов птиц на птицефабриках различного технологического направления достаточно широк, включает в себя 19 видов микроорганизмов. Доминирующими являются Es-cherichia coli, удельный вес которой составляет 41,6%, Staphylococcus aureus -12%, Proteus vulgaris - 11,8%. Также от птиц выделяются и эпидемиологически опасные виды Salmonella enteritidis - 3,7% и Campylobacter jejuni - 2,8%. Видовой состав выделяемой микрофлоры обусловлен эпизоотической ситуацией в каждом отдельном хозяйстве, следствием чего является различное процентное соотношение доминирующих видов.

2. Из 134 мазков из трахеи от клинически здоровых кур в 26,9% случаев выделены микроорганизмы 4-х видов: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus spp, Streptococcus spp. Доминирующим видом является Streptococcus spp., удельный вес которого составляет 66,1%.

- 3. Из помёта клинически здоровых птиц выделено 12 видов микроорганизмов, наибольший удельный вес из которых у Escherichia coli - 40,9%, Proteus vulgaris - 14,99%, Citrobacter freundii - 12,3%. Культуры, выделяемые из помёта в большинстве случаев идентичны культурам, выделяемым из трупов.

4. Культуры, выделяемые от птиц, даже одного и того же вида, имеют различную степень вирулентности: встречаются как вирулентные, так и слабовирулентные и авирулентные штаммы. Вирулентные и слабо вирулентные штаммы как патогенных, так и условно-патогенных микроорганизмов вызывают или гибель цыплят в первые несколько суток, или заболевание, вследствие которого цыплята отстают в росте и развитии.

5. Модифицированная нами методика выделения кампилобактерий с использованием в качестве одного из компонентов крови птицы показала себя эффективной для выделения кампилобактерий из различных объектов: трупов, групповых проб помёта, смывов с тушек, воды из ванн охлаждения.

6. Кампилобактерии вида jejuni циркулируют в птицеводческих хозяйствах как по производству яиц, так и мяса бройлеров. Удельный вес Сатру-lobacter jejuni, выделенных из групповых проб помёта птиц в хозяйстве по производству яйца составил 24,6%, в птицехозяйстве по производству мяса

. бройлеров - 4,7%. Удельный вес Campylobacter jejuni, выделенных из смывов с тушек составил 3,2%. Выделение кампилобактерий из групповых проб помёта подтверждает факт носительства кампилобактерий у птиц. Из внутренних органов (печень) было выделено 9 культур Campylobacter jejuni (100%).

7. Впервые от птиц выделены культуры микроаэрофильного стрептококка, относящегося к роду Melissococcus. Удельный вес Melissococcus, выделенного из групповых проб помета на птицефабрике по производству яйца составил 5,99%, из смывов с тушек в убойном цехе - 7,3%.

8. Со смывов с тушек и воды из ванн охлаждения выделены микроорганизмы 9-ти видов, наибольший удельный вес из которых у Escherichia coli -39,4%, Klebsiella pneumoniae - 26,6%, Staphylococcus aureus - 10,6%. Также выделены эпидемиологически опасные виды - Salmonella ententidis и Campylobacter jejuni - то 3,2% каждого. Выделение условно-патогенной, а также эпидемиологически опасной микрофлоры (сальмонелл и кампилобактерий) в ваннах охлаждения и смывах с тушек доказывают существование перекрёстной контаминации доброкачественной продукции в ваннах охлаждения, куда данные микроорганизмы попадают из помета птиц.

9. Доминирующая в хозяйстве микрофлора (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa и др) выделяется из всех исследованных нами объектов (трупы, помёт, смывы с тушек).

10. Перспективно использование в птицеводстве при бактериальных болезнях птиц препарата энрофлоксацина отечественного производства. При исследовании чувствительности микроорганизмов, выделенных от птиц, к энрофлоксацину 88,23% штаммов были чувствительны и высокочувствительны, и лишь 11,77% культур - малочувствительны.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Для оценки эпизоотической ситуации в отношении бактериальных болезней птиц можно рекомендовать исследования мазков из трахеи и групповых проб свежего как эффективные и безопасные прижизненные методы контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых от птиц, что дает возможность выбора средств для нормализации микробиологического статуса кишечника и профилактики заболеваний бактериальной этиологии.

2. Для контроля бактериальных болезней птиц проводить исследования не только на факультативные анаэробы, но и на микроаэрофилы. При выделении микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae проводить идентификацию не только до рода, но и до вида.

3. Для контроля за кампилобактериозом проводить исследование не только групповых проб помета, но и смывов с тушек и воды из ванн охлаждения.

4. Для снижения бактериальной инфицированности птицы эффективно использовать препарат отечественного производства энрофлоксацин.

5. Разработанные «Методические рекомендации по выделению кампи-лобактерий и другой кишечной микрофлоры из помета птиц» могут быть использованы в работе врачами-бактериологами лабораторий птицефабрик и бактериологических отделов ветеринарных лабораторий

в

6 Материалы, изложенные в диссертации могут быть использованы в учебном процессе на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Борисенкова А Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. О выделении кампилобактерий от кур // Международная конференция-выставка «Птицеводство: мировой и отечественный опыт». - Москва, Россия, 28-31 января 2002.-С. 19.

2. Новикова О.Б Методика выделения кампилобактерий из помёта кур // Материалы 54-й научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ. - Санкт-Петербург, 2002. - С. 66-68.

3. Новикова О.Б., Хорева Е.В., Головещенко Л.В. Изучение микрофлоры цыплят раннего возраста // Тезисы докладов Всероссийской конференции молодых учёных и аспирантов по птицеводству. - Сергиев Посад, 2002. - С. 32-33.

4. Новикова О.Б. Выделение микроаэрофильной микрофлоры из кишечника кур // Тезисы докладов Всероссийской конференции молодых учёных и аспирантов по птицеводству. - Сергиев Посад, 2002. - С. 33-35/

5. Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., Елисеева Е.Н Определение активности энрофлона при бактериальных болезнях птиц // Журнал «Ветеринария». - 2002. -№ 6. - С. 15-17.

6. Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. О кампило-бактериозе кур // Конференция по птицеводству, Материалы национального комитета по сотрудничеству птицеводов России с Всемирной научной ассоциацией по птицеводству. - Зеленоград, 2003. - С 202-203.

7. Борисенкова А.Н., Коровин Р.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., Чавгун В.А., Головещенко К.А. Спектр микрофлоры, выделяемой от птиц, в хозяйствах различного технологического направления // Журнал «Ра-цВетИнформ». - 2003. - № 9. - С. 3-6

8. Новикова О.Б. Сравнительная характеристика микрофлоры, выделяемой из помёта кур, ванн охлаждения и смывов с тушек // Тезисы докладов второй международной межвузовской научно-практической конференцию аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке». - Санкт-Петербург. - 2004.- С. 90-91.

9. Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. Бактериальные болезни птиц, вызываемые зоопатогенными и эпидемиологиески опасными микроорганизмами // Материалы Всероссийского ветеринарного конгресса. - Москва, 2004. - С. 34-37.

Отпечатано в ООО «АкадемПринт». С-Пб. ул. Миллионная, 19 Тел.: 315-11-41. Подписано в печать 26.05.04. Тираж 100 экз.

»1 24 5 4

Актуальность темы. Птицеводство - наиболее наукоёмкая и динамичная отрасль мирового и отечественного сельского хозяйства. За последние 20 лет среднегодовой прирост яиц в мире составил 4,4%, а мяса птицы - 5,2%. По расчётам специалистов в 2022 году по удельному весу мясо птицы будет занимать первое место среди всех видов животных (Фисинин В.И., 2004). В условиях экономической реформы, в агроценозах повышается риск возникновения и распространения инфекционных, и, в частности, бактериальных болезней птиц (Слизнёва И.В., 1996). Наличие их в хозяйстве негативно сказывается не только на эпизоотической ситуации, но и на экономике предприятия. Возбудители бактериальных болезней в отдельности или в ассоциации оказывают существенное влияние на падёж птицы при остром или подостром течении заболевания (пастереллёз, колибактериоз, стафилококкоз и другие). При хронических, вялотекущих болезнях бактериальной этиологии отмечают неравномерный или низкий прирост массы бройлеров, повышенную чувствительность птицы к стрессам, снижение яйценоскости и выводимости цыплят, ухудшение биологических качеств эмбрионов, низкую конверсию корма, снижение поствакцинального противовирусного иммунитета (Борисенкова А.Н., 2001).

Распространение во внешней среде условно-патогенной микрофлоры создаёт предпосылки для её циркуляции и рециркуляции в организме птиц. Широкое применение в производстве антибиотиков и дезосредств способствуют снижению вирулентности микроорганизмов, их ассоциативному воздействию на организм птицы (Борисенкова А.Н. с соавт., 2003).

Бактериальные болезни птиц следует рассматривать в двух аспектах - с позиции опасности для сельскохозяйственной птицы, т.е. в аспекте противо-эпизоотической защиты и предотвращения экономических потерь как основного показателя эффективности птицеводства, и с позиции возможности заболевания людей, т.е. в аспекте противоэпидемиологической защиты, защиты здоровья людей. Имеется достаточно широкий спектр микроорганизмов, персистирующих в организме кур в основном в кишечнике, не вызывающих клинического заболевания их, но эпидемиологически опасных. Птицы могут быть носителями многих зоопатогенных микроорганизмов, таких как Escherichia coli, Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Особое внимание должно быть обращено на то, что сельскохозяйственные птицы могут являться носителями эпидемиологически опасной кишечной микрофлоры, ведущими. представителями которой являются Salmonella enteritidis и Campylobacter jejuni. При нарушении санитарных правил получения птицеводческой продукции происходит контаминация её, что может в конечном итоге привести к заболеванию людей, и особенно детей (Максимова З.Н., 1987; Козак С.С., Гусев А.А., Лищук А.П., Берлова Г.А., 1992; Борисенкова А.Н., 1995; Waldroup A.I., 1996; Кафтырева Л.А., 1999 и др.). Одним из таких заболеваний является кампилобактериоз.

Возбудитель кампилобактериоза является комменсалом желудочно-кишечного тракта птиц. Это определяет бессимптомное течение инфекции и возможность реализации населению контаминированной птицеводческой продукции кур без ограничения, что способствует распространению кампилобактериоза. Эпидемиологическая опасность мяса возрастает в связи с тем, что даже незначительная его контаминация кампилобактериями (4 К.О.Е. на 1 г мяса) может быть опасной для человека (Черкасский Б.Л., Минаев В.И., 1993).

В этой связи изучение спектра микроорганизмов, выделяемых от разных видов и кроссов сельскохозяйственной птицы в хозяйствах различного технологического направления, усовершенствование методов контроля и профилактики бактериальной инфицированности птиц является объективной необходимостью.

Цель работы. Целью настоящих исследований явилось изучение спектра микрофлоры, выделяемой от разных видов птиц на птицефабриках различного технологического направления и усовершенствование методов контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов - возбудителей бактериальных болезней.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

- выделить, идентифицировать и выявить доминирующие виды микроорганизмов от птиц разных видов и возрастов на птицефабриках различного технологического направления и изучить их вирулентные свойства;

- освоить и модифицировать методы лабораторной диагностики кампи-лобактериоза птиц, изучить уровень инфицированности кур кампил о бактериями на различных птицефабриках и определить удельный вес кампилобак-терий в спектре микрофлоры, выделяемой с помётом птиц;

- изучить микрофлору, выделяемую в смывах с тушек кур и ванн охлаждения на различных технологических этапах процесса убоя;

- определить эффективность препарата энрофлоксацина отечественного производства в отношении микроорганизмов, выделяемых о птиц;

- усовершенствовать методы контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых от птиц.

Научная новизна. Изучен спектр эпидемиологически опасной и условно-патогенной микрофлоры, выделяемой кур яичных и бройлерных пород, индеек, гусей. Из различных объектов выделены микроорганизмы 19-ти видов. Впервые от птиц выделены культуры микроаэрофильного стрептококка, относящегося к роду Melissococcus. Установлена идентичность микрофлоры, выделяемой из трупов цыплят и кур и групповых проб помёта.

Предложена ускоренная схема идентификации энтеробактерий, выделяемых от птиц.

Изучены вирулентные свойства 46 микроорганизмов 8-ми видов, выделенных из помёта и трупов птиц на модели интраорбитального заражения цыплят первых дней жизни и на модели внутривенного заражения цыплят и кур. Впервые получены данные по вирулентности культур Citrobacter freundii.

Модифицирована методика выделения кампилобактерий из помёта птиц, внутренних органов, смывов с тушек и ванн охлаждения. Впервые в качестве компонента среды для выделения кампилобактерий использована кровь нового биологического объекта — птицы.

Впервые выявлен удельный вес кампилобактерий на фоне микрофлоры, выделяемой из помёта кур.

Проведены бактериологические исследования смывов с тушек кур на различных технологических этапах процесса убоя и проб воды из ванн охлаждения, установлена идентичность микрофлоры, выделяемой из групповых проб помёта птиц и в убойном цехе птицефабрики.

Для снижения бактериальной инфицированности птиц эпидемиологически опасной и условно-патогенной микрофлорой показана эффективность препарата отечественного производства из группы энрофлоксацинов.

Предложен прижизненный метод контроля инфицированности птиц бактериальной микрофлорой с использованием исследований мазков из трахеи и групповых проб помёта.

Практическая значимость. Предложенные методы исследования мазков из трахеи и групповых проб помёта можно рекомендовать как эффективные прижизненные способы контроля птицы на наличие патогенных и опасных для человека микроорганизмов, что позволяет выработать дальнейшую стратегию проведения оптимальных мероприятий при выращивании и убое птицы с целью снижения контаминации тушек на выходе готовой продукции. Разработанные «Методические рекомендации по выделению кампилобактерий и другой кишечной микрофлоры из помёта птиц» могут быть использованы в работе врачами-бактериологами лабораторий птицефабрик и бактериологических отделов ветеринарных лабораторий.

Основные положения, выносимые на защиту:

- спектр микрофлоры, выделяемой от птиц разных видов и возрастов в птицехозяйствах различного технологического направления;

- прижизненный метод контроля инфицированности птиц бактериальной микрофлорой с использованием исследований мазков из трахеи и групповых проб помёта;

- модифицированный метод выделения кампилобактерий и уровень инфицированности ими птиц.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований заслушаны на заседаниях Методических Советов отделов микробиологии и паразитологии ВНИВИП (2000-2004 гг.); Учёных Советов ВНИВИП (20002004); на Городской научно-практической конференции эпидемиологов, микробиологов, педиатров, санитарных и ветеринарных врачей «Проблема диагностики кампилобактериоза, проявления эпидемического и эпизоотического процессов, профилактика» (Санкт-Петербург, 2001 г.); на Международной конференции-выставке «Птицеводство: мировой и отечественный опыт» (Зеленоград, 2002 г.); на Научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2002 г.); на X и XII Московских Международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2002, 2004 гг.); на Всероссийской конференции молодых учёных и аспирантов по птицеводству (Сергиев Посад, 2002 г.); на Конференции национального комитета по сотрудничеству птицеводов России с Всемирной научной ассоциацией по птицеводству (Зеленоград, 2003 г.); на IV Украинской конференции по птицеводству с международным участием «Птицеводство» (Алушта, 2003 г.); на второй международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург, 2004 г.); на Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина 2004: современные аспекты разработки, маркетинга и производства ветеринарных препаратов» (Феодосия ,2004 г.); на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей во ВНИВИП (2000-2004 гг.), региональном семинаре (Екатеринбург, 2003 г.), в Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории (Москва-Косино, 2004 г.) и на координационных совещаниях специалистов птицеводства во ВНИВИП (2000-2004 гг.).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, 1 сдана в печать.

Структура и объём работы. Диссертация изложена в одном томе на 168 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, библиографического списка использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 12 таблицами, 5 диаграммами, 4 гистограммами, 4 фотографиями, 5 рисунками и 1 графиком, Список использованной литературы включает 211 источник, в том числе 79 иностранных авторов.

4. ВЫВОДЫ

1. Спектр микрофлоры, выделяемой от разных видов птиц на птице- «V/ фабриках различного технологического направления достаточно широк, включает в себя 19 видов микроорганизмов. Доминирующими являются Escherichia coli, удельный вес которой составляет 41,6%, Staphylococcus aureus -12%, Proteus vulgaris - 11,8%. Также от птиц выделяются и эпидемиологически опасные виды Salmonella enteritidis - 3,7% и Campylobacter jejuni - 2,8%. Видовой состав выделяемой микрофлоры обусловлен эпизоотической ситуацией в каждом отдельном хозяйстве, следствием чего является различное процентное соотношение доминирующих видов.

2. Из 134 мазков из трахеи от клинически здоровых кур в 26,9% случаев выделены микроорганизмы 4-х видов: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Доминирующим видом является Streptococcus spp., удельный вес которого составляет 66,1%.

3. Из помёта клинически здоровых птиц выделено 12 видов микроорга- ^J низмов, наибольший удельный вес из которых у Escherichia coli - 40,9%, Proteus vulgaris - 14,99%, Citrobacter freundii - 12,3%. Культуры, выделяемые из помёта в большинстве случаев идентичны культурам, выделяемым из трупов.

4. Культуры, выделяемые от птиц, даже одного и того же вида, имеют различную степень вирулентности: встречаются как вирулентные, так и слабовирулентные и авирулентные штаммы. Вирулентные и слабовирулентные штаммы как патогенных, так и условно-патогенных микроорганизмов вызывают или гибель цыплят в первые несколько суток, или заболевание, вследствие которого цыплята отстают в росте и развитии.

5. Модифицированная нами методика выделения кампилобактерий с использованием в качестве одного из компонентов крови птицы показала себя эффективной для выделения кампилобактерий из различных объектов: трупов, групповых проб помёта, смывов с тушек, воды из ванн охлаждения.

6. Кампилобактерии вида jejuni циркулируют в птицеводческих хозяйствах как по производству яиц, так и мяса бройлеров. Удельный вес Campylobacter jejuni, выделенных из групповых проб помёта птиц в хозяйстве по производству яйца составил 24,6%, в птицехозяйстве по производству мяса бройлеров - 4,7%. Удельные вес Campylobacter jejuni, выделенных из смывов с тушек составил 3,2%. Выделение кампилобактерий из групповых проб помёта подтверждает факт носительства кампилобактерий у птиц. Из внутренних органов (печень) было выделено 9 культур Campylobacter jejuni (100%).

7. Впервые от птиц выделены культуры микроаэрофильного стрептококка, относящегося к роду Melissococcus. Удельный вес Melissococcus, выделенных из групповых проб помёта на птицефабрике по производству яйца составил 5,99%, из смывов с тушек в убойном цехе - 7,3%.

8. Со смывов с тушек и воды из ванн охлаждения выделены микроорганизмы 9-ти видов, наибольший удельный вес из которых у Escherichia coli -39,4%, Klebsiella pneumoniae - 26,6%, Staphylococcus aureus - 10,6%. Также выделены эпидемиологически опасные виды - Salmonella enteritidis и Campylobacter jejuni - по 3,2% каждого. Выделение условно-патогенной, а также эпидемиологически опасной микрофлоры (сальмонелл и кампилобактерий) в ваннах охлаждения и смывах с тушек доказывают существование перекрёстной контаминации доброкачественной продукции в ваннах охлаждения, куда данные микроорганизмы попадают из помёта птиц.

9. Доминирующая в хозяйстве микрофлора (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa и др) выделяется из всех исследованных нами объектов (трупы, помёт, смывы с тушек).

10. Перспективно использование в птицеводстве при бактериальных болезнях птиц препарата энрофлоксацина отечественного производства. При исследовании чувствительности микроорганизмов, выделенных от птиц, к энрофлоксацину 88,23% штаммов были чувствительны и высокочувствительны, и лишь 11,77% культур - малочувствительны.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для оценки эпизоотической ситуации в отношении бактериальных болезней птиц можно рекомендовать исследования мазков из трахеи и групповых проб свежего как эффективные и безопасные прижизненные методы контроля эпидемиологически опасных и условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых от птиц, что даёт возможность выбора средств для нормализации микробиологического статуса кишечника и профилактики заболеваний бактериальной этиологии.

2. Для контроля бактериальных болезней птиц проводить исследования не только на факультативные анаэробы, но и на микроаэрофилы. При выделении микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae проводить идентификацию не только до рода, но и до вида.

3. Для контроля за кампилобактериозом проводить исследование не только групповых проб помёта, но и смывов с тушек и воды из ванн охлаждения.

4. Для снижения бактериальной инфицированности птицы эффективно использовать препарат отечественного производства энрофлоксацин.

5. Разработанные «Методические рекомендации по выделению кампилобактерий и другой кишечной микрофлоры из помёта птиц» могут быть использованы в работе врачами-бактериологами лабораторий птицефабрик и бактериологических отделов ветеринарных лабораторий

6. Материалы, изложенные в диссертации могут быть использованы в учебном процессе на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства.