Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологическая и экологическая характеристика микроорганизмов, выделенных у диких птиц

На правах рукописи

ПЕТРУЕВДОРЖАНИМАЕВИЧ о л „. „___

■рк О Л

• ьаЛР ¿ииу

БИОЛОГИЧЕСКАЯ И ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ

У ДИКИХ ПТИЦ

I ■'

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

V

г. Благовещенск, 2000

Работа выполнена в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р.Филиппова..

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РБ, доктор ветеринарных наук, профессор Кандидат ветеринарных наук, доцент

Цыдштов В.Ц. Будаев Ю.Ж.

Официальные оппоненты:

Ведущая организация

доктор ветеринарных на профессор, член корреспондент РАСХ Н Ю.А. Макаров кандидат ветеринарных на заслуженный вет. врач РФ Я.Г. Диких

Научно-исследовательский институт ветеринарии Восточной Сибири (г. Чита)

Защита состоится" /" а а 2000 г. в &

час на

заседании диссертационного совета К 120.07.01 в Дальневосточном Государственном Аграрном университете (675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Д&пьГАУ.

Автореферат разослан " " и/см-А 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

ЛП/МО

Н.М. Ман;

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

1.1. Актуальность темы. Роль птиц в эпизоотологии и эпидемиологии бактериальных инфекций в значительной мере определяется биологическими особенностями экологии. Птицы населяют все зоогеографические области и используют аэросферу, гидросферу и педосферу, что отразилось на разнообразии их связей с другими организмами. Птицы в эволюционном плане являются одним из древнейших резервуаров возбудителей болезней вирусной, бактериальной, грибковой и протозойной природы. Плотность населения популяций многих видов очень высока, что является одним из условий развития эпизоотии. Миграцию многих миллионов пернатых можно сравнить с гигантским насосом, дважды в год перекачивающим адаптированных к ним возбудителей инфекций с континента на континент (Львов Л.К., Ильичев В Л,, 1979).

Таким образом, проведение бактериологического мониторинга по патогенным микробам птиц в особоохраняемых природных зонах является актуальной задачей в оценке эпизоотической и эпидемической ситуации и в предупреждении заноса в заповедную зону возбудителей инфекций, порожденных эволюцией в эпоху научно-технического прогресса XX века, н в предупреждении распространения возбудителей инфекций из природных очагов, сформированных птицами-мигрантами. Анализируя накопленные материалы о роли птиц-мигрантов в заносе и распространении возбудителей инфекций, нельзя не заметить, что большинство исследований в этом направлении завершены констатацией фактов, подтверждающих вышесказанное. При этом отсутствуют данные по биологической, экологической и персистентной характеристикам патогенных микробов, циркулирующих и резервирующих в организме диких птиц, в том числе особоохраняемой зоны Национального парка "Тункинский" Республики Бурятия и Даурской степи Читинской области.

1.2. Цель исследования. Провести бактериологический мониторинг среди птиц-мигрантов Национального парка "Тункинский" РБ и диких птиц Даурской степи Читинской области. Дать полную биологическую, экологическую и Патогенную характеристику микроорганизмов, выделенных от них.

13. Задачи исследований:

1. Провести бактериологический мониторинг в условиях особоохраняемой зоны Национального парка "Тункинский" РБ и в условиях полевой экспедиции в Даурской степи Читинской области.

2. Выявить спектр выделяемых от диких птиц патогенных и потенциально-патогенных микробов.

3. Дать биологическую характеристику полученным микробным культурам.

4. Изучить экологическую характеристику и определить патогенные свойства полученных микробных культур.

1.4. Научная новнзна исследования. Впервые в условиях особоохраняемой зоны Бурятии и полевой экспедиции в степи Даурии проведен бактериологический мониторинг у птиц. Определены технические и организационные возможности путей его реализации. Определен спектр выделяемых патогенных микробов. Изучены биологические и персистентные характеристики выделенных патогенных и потенциально-патогенных

микроорганизмов с позиции экологического подхода, с определением их экологически характеристик.

1.5.- Теоретическая и практическая значимость работы. Освоена методик проведения бактериологического мониторинга в условиях особоохраняемой зоны Бурятии степи Даурии. Дан спектр выделяемости болезнетворных бактерий у птиц-мигранта Материалы могут быть использованы:

1. В диагностической работе специалистами ветеринарных лаборатори республики и ветеринарно-санитарной экспертизе при лицензионном отстреле пта

2. При разработке профилактических мероприятий в случае заноса распространения инфекционных болезней в Национальном парке "Тункинский" Даурской степи Читинской области.

3. В учебном процессе при чтении лекций и проведении лаборатори практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.

1.6. Основные положения, выносимые на защиту: Биологические, персистентные экологические свойства патогенных и потенциально-патогенных микроорганизме выделенных у диких птиц.

1.7. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены 1 научно-практических конференциях факультета ветеринарной медицины Бурятск« Государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 199 2000); на международной научной конференции, посвященной 125-летию Казанск< ветеринарной академии (Казань, 1998); на конференции БГСХА им. В.Р.Филиппо "Биология на пороге XXI века" (Улан-Удэ, 1999); на научной конференции ДальГА (Благовещенск, 1999).

1.8. Внедрение. Полученные результаты используются в учебной и научной работе кафедрах: патоморфофизнологии, терапии, акушерства и хирургии; биологии, охотоведен и морфологии животных Дальневосточного государственного аграрного университет микробиологии Алтайского государственного аграрного университета; .Монгольскс Национального сельскохозяйственного университета, а так же в лаборатори Дальневосточного зонального научмо-исследовательского ветеринарного института; бактериологическом отделе Зональном научно-исследовагельского института ветеринар Восточной Сибири; сотрудниками музея природы и Национального парка «Тункинский» Р]

1.9. Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в пя статьях.

1.10. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена .■^?странидах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственн исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, спис использованной литературы и приложения. Работа включает 8 таблиц, 51 рисунок. Спис литературы включает 164 источников, из них 19 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Исследования проводи ли с 1997 по 2000 год на кафедре микробиологии, аирусоло! и ВСЭ ВГСХА им. В.Р.Филиппопа, в бактериологическом отделе нпуччо-протиодстпст

ветеринарной лаборатории Бурятии, в Гункинской районной ветеринарной лаборатории, в бактериологическом отделе Тункинской районной СЭС.

В целях взятия материала участвовали в трех научных экспедициях в Национальный парк "Тункинский" Бурятии и одновременно вели работу совместно с орнитологами музе* природы РБ.

Во время экспедиционных работ отработали методику взятия материала из органов птиц в стационарных и полевых условиях.

Для бактериологического исследования отобрали 156 проб паренхиматозных органов (печень, сердце, селезенка, почки, легкие, кишечник) диких птиц (чирок-свистун - б, лысуха • 2, гоголь - 1, кряква - б, шилохвость - 6, кулик - 2, красноносый нырок - 1, сорока - 5). Совместно с сотрудниками музея природы РБ отобрали 100 проб паренхиматозных органов диких птиц Даурской степи Читинской области (полевой жаворонок - 4, монгольский жаворонок • 3, дубровник - 4, малый зуек - 1, желтоголовая трясогузка - 2, речная крачка - 3, белопоясничный стриж - 2, озерная чайка -1, малый скворец - 1, сибирский жулан - 1, серый жаворонок -1, бурокрылая ржанка - 2, азиатский бекас - 1).

На питательные среды, приготовленные заранее, проводили посевы паренхиматозных органов птиц на местах отбора проб. Для консервирования проб органов птиц использовали стерильный 30%-ный водный раствор глицерина.

Изучение культуральных, морфологических, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств выделенных микроорганизмов производили методами общей микробиологии (Биргер М.О., 1983; Герхард Ф., 1983; Антонов Б.И., 1986). .

Культуральные свойства изучали на следующих средах: МПА, МПБ, МППБ, МПЖ, глюкозно-глицериновый и кровяной МПА, Эндо, Левина, Плоскирева, Клиглера, Олькеницкого и висмут-сульфит агар.

Протеолитические свойства микроорганизмов выявляли на МПЖ и молоке. Степень протеолиза и глубину расщепления белка определяли по образованию микроорганизмами индола и сероводорода с помощью индикаторных бумажек.

При определении каталазной активности использовали 3%-ный раствор перекиси водорода. . ..

В целях идентификации и дифференциации микробных культур изучали биохимические свойства. При этом применяли систему индикаторных бумажек (СИБ) для идентификации микроорганизмов семейства Еп1егоЬас1епасеае Горьковского НИИ эпидемиологии Минздрава РФ, пластины ММТ Е1 и ММТ Е2 (система мультимикротестов) для биохимической идентификации энтеробактерий Ставропольского научно-производственного объединения "Аллерген" согласно инструкций, а также использовали среды Гисса.

Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики. (Чайковская С.М., Гивенталь Н.И., Резван С.П., 1984).

При изучении патогенных свойств микроорганизмов, кроме постановки биопробы, выявляли гемолитические и плазмокоагулирующие (у кохковидных форм бактерий) способности. Для исследования гемолитических свойств, кроме кровяного агара, применяли

б

"нефелометрический метод определения гемолитической активности микроорганизм« (Сологуб В.В., Рожавин М.А., 1987), заключающийся в определении изменения степс мутности суспензии эритроцитов под воздействием культуральной жидкости исследуемс микроорганизма. Измерения проводили на ФЭК-56М в кювете с длиной оптического пуп мм при зеленом светофильтре. В качестве субстрата использовали суспенз! (приблизительно 0,5%) трижды отмытых физиологическим раствором эритроцитов крол! или барана Для сокращения времени на опыт и быстроты определения ОП смеси субстрата и культуральной жидкости (от 30-40 культур) использовали 10 мл. одноразов медицинские шприцы.

Плазмокоагулирующее свойство определяли путем эмульгирования суточной агаров культуры в 1 мл свежей цитратной плазмы кролика, разведенной в отношении 1:5 инкубировали при 37°С. Результаты учитывали через 1, 2, 4, 8 и 24 часа. Любую степе свертывания плазмы расценивали как положительный результат.

Для характеристики персистентных свойств определяли антилизоцимную (АЛ, антикомплиментарную (АКА), антиинтерфероновую (АИА), РНК-азную и ДНК-аз н; активности микроорганизмов.

Проанализировав несколько методов постановки АЛА микроорганизмов (Бухарин О. Васильев Н.В., Усвяцов БЛ., 1984; Иванов Ю.Б., Черкасов C.B. и др., 1997), использовал! исследованиях модифицированную нами методику постановки опыта на проявление AJ бактерий. При этом в стерильные чашки Петри разливали по 20 мл расплавленного МПА. 1 поверхность уплотнившейся среды наливали 1 мл взвеси (в 0,9% растворе NaC.1) суточн агаровой культуры с концентрацией 10 ед. (по стандарту мутности). Легким покачивали чашки взвесь культуры равномерно распределяли по поверхности агара. Излишек жидкое отсасывали стерильной пастеровской пипеткой. Чашки подсушивали в термостате при 37°С течение 15-20 минут или при комнатной температуре 30-40 минут. Затем на поверхнос засеянной среды (на равном расстоянии друг от друга) стерильным пинцетом накладыва (прижимали) стерильные диски фильтровальной бумаги диаметром 0,8 см, предваритель пропитанные раствором лизоцима в соответствующем разведении (диск из фильтровальн бумаги диаметром 8 мм впитывал в себя в среднем 0,01 мл рабочего раствора лизоцима). опыте использовали диски с содержанием лизоцима 2,5; 5; 10; 20; 40 мкг. Затем чаш оставляли на 2 часа при комнатной температуре. После чего, перевернув их вверх дне помещали в термостат на 18-24 часа при 37°С. К культурам, обладающим АЛА, относили культуры, рост которых не подавлялся вокруг дисков с лизоцимом. Контролем служи диски, пропитанные стерильным физиологическим раствором. Учет контрольного опы проводили по наличию зоны задержки роста исследуемой культуры вокруг диска лизоцимом.

Изучив методы определения АИА микроорганизмов (Печеркина С.А., Малеева Л.1 Щицина И.В., 1982; Варганов А.И. и др., 1990; Соколов В.Ю., Тарасевич А.В., 199 использозали метод на базе из перечисленных выше методов. Постановка и учет реакщ схожи с модифицированной нами методикой определения АЛА. Различие же состоит в тс что бумажные диски пропитывали в различных разведениях-препаратом человеческс

лейкоцитарного интерферона (производство ГП НПО "Вирион", Томск) и диски содержали 2,5; 5; 10; 20; 40 МЕ.

К обладающим АИЛ относили те культуры, рост которых не подавлялся вокруг дисков с интерфероном. Контролем служили диски, пропитанные стерильным 0,85%-ным физиологическим раствором. Учет контрольного опыта проводили по наличию зоны задержки роста исследуемой культуры вокруг диска с интерфероном.

АКА микроорганизмов определяли по методу парциального гемолиза в геле (Бухарин О.В., Брудастов Ю.В., Дерябин Д.Г., 1992). К 98 мл расплавленного и охлажденного до 45-50°С МПА добавляли 2 мл взвеси сенсибилизированных эритроцитов барана. Смесь осторожно взбалтывали, избегая образования пены или пузырей и разливали в стерильные чашки Петри. На поверхность предварительно охлажденного до 4°С комплемент чувствительного слоя (КЧС) по шаблону на расстоянии 10 мм друг от друга наносили бактериологической петлей капли исследуемых суточных бульонных культур или их супернатантов. После впитывания капель на КЧС в те же точки наносили бактериальной петлей комплемент (сыворотка крови морской свинки). Чашки Петри .помещали для диффузии в холодильник (4°С) на 18-24 часа и затем "проявляли" зоны гемолиза в течение 35 часов при 37°С. Контролем служили на КЧС только капли комплемента. Учет реакции проводили по зоне просветления вокруг точки нанесения капель. Культуры, обладающие АКА, не имели зону просветления.

Метод постановки ДНК-азноЙ активности основан на свойстве исследуемых микроорганизмов образовывать фермент ДНК-азу, который деполимеризует содержащуюся в среде натриевую соль ДНК. Это выявляли после обработки поверхности среды с выросшей культурой 1Н соляной кислотой. При деполимеризации натриевой солн ДНК вокруг колоний образуется прозрачная зона. Данный метод позволяет изучать на одной чашке Петри одновременно 30-60 культур (Карпов В., 1985).

Наличие РНК-зной активности определяли на чашках Петри с МПА, содержащим 2 мг/мл РНК и 0,8 мг/мл СаС12. После посева чашки Петри инкубировали при 37°С в течение 24 часов. Для проявления зон деградации РНК вокруг выросших колоний на поверхность питательного агара с бактериальным ростом наливали 5-10 мл 1Н раствора соляной кислоты. Через 10 минут соляную кислоту сливали и учитывали результат, измеряя ширину . прозрачной зоны вокруг выросших колоний изучаемых культур, в которых под воздействием ферментов произошла деградация РНК. По ширине этой зоны судили об активности РНК-аз (Бойко A.B., Бойко О.В., 1997).

Для изучения экологической характеристики микроорганизмов использовали температурную вариабельность, различные концентрации NaCl и различные pH среды по отношению к динамике роста микроорганизмов. Для этого производили посев испытуемых культур на МПБ с pH 7,2-7,4; 4,2-4,4; 8,2-8,4; с концентрацией NaCl 0,05%; 0,85%; 8,5%, и инкубировали в термостате при различных температурах: 19-20°С, 37-38°С, 41-42°С. Через каждые 4 часа определяли оптическую плотность бульонных культур с помощью фотоэлекгроколориметра КФ-77 при светофильтре 480 нм с кюветой рабочей длины 10 мм. Наблюдение вели в течение 48-72 часов (Н.Г. Гайдукова Н.Г., 1993).

Постановку бнопроб проводили на белых мышах. Заражение животных производил взвесью суточной испытуемой культуры (на физиологическом растворе) внутрибрюшинно дозе 0,5 мл в концентрации 500 млн. бактериальных клеток на 1 мл. Контрольным животны внутрибрюшинно вводили стерильный физиологический раствор. За опытными животные вели наблюдение в течение 15 суток. Трупы погибших животных вскрывали, I паренхиматозных органов делали мазки-отпечатки, фиксировали спирт-эфиром соотношении 1:1, окрашивали по Граму и просматривали под микроскопом. Посевы ] паренхиматозных органов производили на МПА, МПБ и инкубировали в термостате пр 37°С в течение 24 часов с последующей идентификацией культуры.

Идентификацию выделенных культур микробов проводили по определителям бактери Берджи (1997) и Циона (1948).

Экспериментальный материал, обрабатывали методом вариационной статистики > кафедре информатики и вычислительной техники БГСХА им. В.Р. Филиппова.

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Культурально-морфологическая характеристика выделенных культур Бактериологическим исследованием из 256 проб паренхиматозных органов 21 вщ диких птиц были выделены 54 культуры, из них 19 (35,2%) - птиц Даурской степ Изучением морфологических свойств выделенных микроорганизмов обнаружили, что ^ (37,1%) культур кокковидной формы, грамположительные, 18 (33,3%) - палочковидно формы, грамотрицателькые и 16 (29,6%) - палочковидной формы и грамположительны Исследованием живых микробных клеток установили, что из всех выделенных бактерий : культуры (42,9%) обладали подвижностью.

Анализируя полученные данные, можно сказать, что большинство бактериальнь культур изолированы из печени (14 культур, что составляет 25,9% от всех выделеннь микробов), сердца (13 культур - 24%), кишечника (И культур - 20,4%), легких (7 культур 13%), селезенки (5 культур - 9,3%) и яичника (1 культура - 1,9%). По культуральны свойствам определили, что культуры № 8, 20, 36, 38 и 39 имели колонии Я-формы, э: составило 9,6%, а остальные выделенные культуры (90,4%) колонии обладали 5-формой.

2.2.2. Биохимическая характеристика выделенных культур По результатам постановки биохимических тестов провели анализ ферментативнь свойств. Из сводных данных таблицы 1 видно, что с отрицательным результате большинство (более 50%) из количества исследованных культур заканчивались тесты ] фенил ал аниндезаминазу - 96,3% (52 культуры), на аргининдигидролазу и с цитратом натр] - 92,6% (50 культур), на свертывание молока и на образование индола - 88,9% (48 культу! с малонатом натрия - 81,5% (44 культуры), с рафинозой - 81,3% (39 культур), с дульцитом 75% (36 культур), на лизиндекарбоксилазу - 74,1 (40 культур), на орнитиндекарбоксилазу 72,2% (39 культур), с ыаннитом - 70,4 % (38 культур), на утилизацию мочевины - 68,4% (: культур), на гидролиз желатины - 64,8% (35 культур), с инозитом - 62,5% (10 культур из 1< с салицином - 54,2% (26 культур) и на ферментацию сахарозы - 51,9% (28 культур).

Результаты опытов на ферментацию углеводов с образованием кислоты с арабинозой 100% (48 культур), с сорбитом - 98,2% (53 культуры), с рамнозой-91,7%(49 культур), с

Положительная Отрицательная Сомнительная

№

кол-во, культур % кол-во, % кол-во, %

культур культур

1 Окраска по Граму 36 66,7 18 33,3 - -

2 Образование индола 5 9,3 48 88,9 1 1,8

3 Цитрат натрия 3 5,6 50 92,6 1 1,8

4 Образование НгЭ 18 33,3 26 48,1 10 18,5

5 Утилизация мочевины 9 23,7 26 68,4 3 7,9

б Фенилаланиндезаминаза 2 3,7 52 96,3 . -

7 Лизиндекарбоксилаза 14 25,9 40 74,1 - -

8 Аргияиидигидролаза 4 7,4 50 92,6 - -

9 Орнитиндекарбоксилаза 15 27,8 39 72,2 - -

10 Подвижность 22 40,7 26 48,1 6 11,1

11 Гидролиз МПЖ 13 24,1 35 64,8 6 11,1

12 Малонат натрия 9 16,7 44 81,5 1 1,8

Образование кислоты из:

13 Глюкозы 41 75,9 1 1,8 12 22,2

14 Арабинозы 48 100 - - - -

15 Дульцита 9 18,8 36 75 3 6,2

16 Инозита б 37,5 10 62,5 - -

17 Лактозы 30 55,5 7 13 17 31,5

18 Мальтозы 32 66,6 8 16,7 8 16,7

19 Маннита 7 13 38 70,4 9 16,6

20 Гамнозы 44 91,7 - - 4 8,3

21 Рафииозы 5 10,4 39 81,3 4 8,3

22 Салицина 15 31,3 26 54,2 7 14,5

23 Сахарозы 22 40,7 28 51,9 4 7,4

24 Сорбита 53 98,2 1 1,8 - -

25 Образование каталазы 23 45 27 53 1 1,8

26 Свертывание молока 6 11,1 48 88,9 - -

Примечание: (%) - процентное соотношение от общего количества исследуемых культур

глюкозой - 75,9% (41 культура), с мальтозой - 66,6% (32 культуры), с лактозой - 53,7% культур) были положительными.

Пробы на сбраживание мальтозы - 16,7% (8 культур), маннита - 16,6% (9 культ салицина - 14,5% (7 культур), рамнозы - 8,3% (4 культуры), сахарозы - 7,4 (4 культу, дульцита - 6,2% (3 культуры), а также опыты на выявление сероводорода составляли 18 (10 культур), на определение желатиназы - 11,1% (6 культур), на использование цит] натрия и на регистрирование катал азы - 1,8% (1 культура) случаях были сомнительными.

По результатам проведенных исследований культуральных, морфологичем биохимических и патогенных свойств выделенные культуры нами были идентифнцирог по определителям бактерий Циона (1948) и Берджи (1997) как представители различ таксономических групп. Так, из грамположительных микроорганизмов выявлены в следующих родов:

1. Enterococcus - культуры: № 8 (Enteroc. durans), №35 (Enteroc. faecali

2. Micrococcus - культуры: № 2 (Micr. candidus), № 38 (Micr. halobius);

3. Staphylococcus - культуры: Ns 9 и № 29 (St. kloosii), № 11 (St. hyii патогенный)^ 14 и № 39 (St. caseolyticus), № 15 (St. lentus), № 21 24 (St. auricularis), № 22 и № 25 (St. saccharolyticus);

4. Streptococcus - культуры: № 12 (Str. milleri), № 13 и № 19 (Str. sobri № 16 (Str. acidomlnicus), № 51 (Str. bovis);

5. Vagococcus - культура Jfe 34 (Vagoc. fluvialis);

6. Bacillus - культуры: № 6 (В. subtilis), № 20 (Bjnyxodens), № 4.' retiformis), Jé 47 (B. brachispcrus), № 50 (полученные результаты не, определить его место в систематике бацилл);

7. Bacterium - культуры: № 28 (В. ochraceum), № 32 (В. proteus zenker 33 (В. cocciformis), № 36 (В. subtyphosum), Ка 37 (В. aurantiacum);

8. Corynebacterium - культура № 52 (С. vitarumen);

9. Camobacterium - культура № 17 (С. mobile);

10. Erysiopelothrix - культура № 1 (непатогенный вид);

11. Listeria - культура № 5 (L. monocitogenes);

12. Культура № 18 отнесена к группе кокардиоформных актиномм (вид не удалось определить).

Культура № 44 не идентифицирована. Из грамотрицательных бактерий идентифицированы виды: семейства Eaterobacteriaceae родов:

1. Citrobacter - культуры: № 10, № 42 и № 43 (С. freundii), № 53 (в: удалось идентифицировать);

2. Edwardsiella - культура № 27 (Е. tarda);

3. Enterobacter - культура № 54 (Enterobac. agglomerans);

4. Escherichia - культуры: № 26 (E. coli - патогенный), Ka 31 (E. coli);

5. Klebsiella - культуры: № 3 (К. ozaenae), Хг 4 (К. rhinoscleromatis);

6. Proteus - культура № 41 (Pr. Mirabilis - патогенный);

И

семейства Vibrionaceae род Vibrio - культуры: К» 23 (V. metschikovii), № 30 (V.

fluvialis), № 48 (V. damsela).

Культуры № 40 и № 47, к сожалению, не удалось определить.

2.2^Чувствительность выделенных культур к некоторым антибиотикам

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам приобретает важное теоретическое, а еще больше практическое значение в вопросах изучения устойчивости возбудителей к действию факторов внешней среды, выборе препаратов химиотерапии и в создании питательных селективных сред на основе одного или рада антибиотиков, которые бы подавляли роет одних, а на другие бы не действовали.

По данным таблицы 2 все исследованные культуры, выделенные из разных внутренних органов диких птиц, проявляли различную степень чувствительности к антибиотикам.

К левомицетину имели достаточную чувствительность 26% культур, нз них: 14% -грамотрицательные, 8,5% - грамположительные кокковидные к 4% - /рамположительные палочковидные микроорганизмы. Высокую чувствительность к эритромицину проявляли грамположительные палочковидные микробные изоляты (12,5%), затем бактерии кокковидной формы (8,3%), после - грамотрицательные палочковидные микробы.

Неомицин подавлял рост у 12,5% микробов из всех изолятов, из них: 6,4% -грамположительные палочковидные, 4,0% - грамположительные кокковидные, 2,1% -грамотрицательные культуры.

Тетрациклин давал эффективную зону задержки роста колоний, как грамотрицательлых, так и кокковидных форм бактерий (10,4%).

Наибольший процент чувствительности к стрептомицину давали кокковидные бактерии (10,4%), в равной степени - грамположительные и грамотрицательные палочки (по 6,3%).

6,3% грамположительных палочковидных и 4,2% кокковидных микробных культур имели достаточно хорошую чувствительность к олеандомицину. На грамотрицательные микроорганизмы данный антибиотик не оказывал ожидаемого результата.

Мономицин был эффективен только для 8,5% бактерий кокковидных форм, 6,4% • грамположительных палочковидных и 2,1% - неотрицательных видов микроорганизмов.

Низкий одинаковый процент чувствительности (по 2%) показали все виды микробов по отношению к полимгассину.

Наименее активен был бензилпенициллин, умеренную устойчивость х нему далн 6,3% грамположительных палочковидных изолятов и по 2% - грамотрицательных палочковидных и грамположительных кокковидных форм бжгернй.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что процент соотношений к адаптация^ различных видов и форм бактерий был неодинаков. По таблице 2 видно, что общий процент чувствительности наиболее высок, независимо от вида и формы бактерий, к тетрациклину (29,1%), левомицетину (26,5%), эритромицину (25%) и стрептомицину (23%). Очень низкий показатель чувствительности к бензилпенициллину.

Таким образом, различная зона задержки роста микроорганизмов свидетельствует о различной чувствительности и устойчивости к определенным видам антибиотиков. Определение чувствительности условно-патогенных микробов к антибиотикам

СВОДНЫЕ ДАННЫЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ВЫДЕЛЕННЫХ КУЛЬТУР К АНТИБИОТИКАМ

Таблица 2

Виды Левоми- Эритро- Неомицин Тетра- Стрепто- Олеандо- Мономицин Поли- Б/пенициллин

форм цитин мицин циклин. мицин мицин миксии

бактерий к/к ' % к/к % к/к % к/к % к/к % к/к % к/к % к/к % к/к %

Гр-

палочко-

видные:

+ + 7 14,3 2 4Д 1 2,1 5 10,4 3 6,3 - - 1 2,1 1 2,1 - -

+ 5 10,6 2 4Д 11 23,4 2 4,2 7 14,6 1 2 3 6,4 9 19,1 1 2

- 5 10,6 13 27,1 5 10,6 10 20,8 7 14,6 16 33,3 13 27,7 7 14,9 16 33,3

Гр+

палочко-

видные:

+ + 2 4 6 12,5 3 6,4 4 8,3 з- 6,3 3 6,3 3 6,4 1 2,1 - -

+ 3 6,4 3 6,3 4 8,2 2 4,2 1 2 4 8,3 2 4,2 1 2,1 3 6,3

- 9 19 5 10,4 7 14,3 8 16,7 10 20,8 7 14,6 9 19,1 12 25,5 11 22,9

Гр+

Кокко-

видные:

+ + 4 8,5 4 3,3 2 4 5 10,4 5 10,4 2 4,2 4 8,5 1 2,1 - -

+ 3 6,4 11 22,9 3 6,4 3 63 1 2 2 4,2 1 2,1 2 4,2 1 2

- 9 19 2 V 11 23,4 9 18,7 11 22,9 13 27,1 11 23,4 13 27,7 16 33,3

Всего

исследо- 47 48 47 48 48 48 47 47 48

вано

Примечание: к/к - количество культур

(++) - чувствительные к данному антибиотику , (+) - умеренно устойчивые к данному антибиотику _(-) - устойчивые к данному антибиотику'_

обусловливает выбор эффективных препаратов из числа рекомендуемых при инфекциях, вызываемых вышеуказанными бактериями.

2.2.4. Персистентная характеристика выделенных культур

По результатам проведенных опытов видно, что не все исследуемые культуры обладали персиегентными свойствами.

По данным исследований у культур № 1, 10, 11, 29, 30, 42, 43, 54 зарегистрировали антилизоцимную активность (АЛА); антиинтерфероновую активность (АИА) и антикомплементарную активность (АКА). Одновременно, ДНК - азную активность наблюдали у культур № 11, 15, 28, 41, 43,45,47,48, 49, 50, 51, 54. РНК - азную активность проявляли только культуры № б и № 28, гемолитическим свойством обладали культуры № 3, 4,5, б, 7, 8,9,11,17, 20,30, 31,40,41,42,43,44,45,48,53,54.

Так, например, культура № 3 проявляла только гемолитическую активность, а № 15, не обладая персистентными свойствами, имела ДНК - азную активность. У микробных клеток культур № 35 и № 38 не регистрировали ни персистентных, ни патогенных свойств.

По данным таблицы 3 из 18 исследованных грамотрицательных бактерий АЛА обладали 17 культур (94,4%), АИА - 11 (61,1%), АКА - 9 (50%), ДНК - азной активностью -б (33,3%) и гемолитической активностью -11 (61,1%).

Из грамположительных палочковидных бактерий (у 16 изученных культур) АЛА обладали 9 культур (56,3%), АИА-10 (62,5%), АКА- 7 (43,8%), ДНК - азной активностью -3 (18,8%), РНК-азной активностью - 2 (12,5%) и гемолитической активностью - 6 (37,5%).

У грамположительных кокковидных бактериальных клеток (табл. 3) из 20 исследованных культур АЛА зарегистрировали у 7 (35,5%), АИА - 10 (50%), АКА - 10 (50%), ДНК - азную активность - 3 (15%) и гемолитическую активность-4 (20%).

Таким образом, из всех выделенных 54 культур наибольшим процентным соотношением по аятилизоцимной активности обладали грамотрицательные палочковидные бастерки (31,5%), по АИА - также грамотрицательные микроорганизмы (20,4%), по АКА -грамположительные кокковидные бактерии (18,5%), по ДНК - азной активности -грамотрицательные бактерии (11,1%), по РНК - азной активности - только грамположительные палочковидные бактерии (3,7%) и по гемолитическим свойствам -грамотрицательные палочки (20,4%).

По данным эксперимента можно сделать вывод, что наиболее выраженными адаптационными свойствами к защитно-фегуляторным системам иммунитета макроорганизма являются культуры изолированных грамотрицательных бактерий из организмов изученных диких птиц и они также являются потенциально - патогенными микроорганизмами.

1аолица л

СВОДНЫЕ ДАННЫЕ ПЕРСИСТЕНТНЫХ И ПАТОГЕННЫХ ФАКТОРОВ ИССЛЕДОВАННЫХ КУЛЬТУР

АЛА АИА АКА ДНК-азная РНК-азна* Гемолитичес.

№ Морфологи* активность активность активность

к/к % к/к V. к/к ' % к/к % к/к к/к %

1 Грамотрицательные

палочковидные:

Обладающие 17 31.5 П 20,4 9 16,7 б 11,1 - - 11 20,4

(94,4) (61.1) (50) (33,3) (61.1)

Не обладающие I I.* 7 13 6 11,1 12 22,2 18 33,3 7 12,9

(38,9) (33,3) (66,7) (100) (38,9)

Сомнительные - - - - 3 5,6 - - - -

(26,7)

Количество иссле-дованных

культур: 18

2 Грамположительные

палочковидные:

Обладающие 9 16,7 10 18.5 7 13 3 5,6 2 3.7 б 11,1

(56,3) (62,5) (43.8) (18,8) 02,5) (37,5)

Не обладающие 6 И,1 5 9,3 8 14,8 13 24,1 ' 14 23;9 10 18,5

(37,5) (31.3) (50) (81.3) (87,5) (62,5)

Сомнительные 1 1,8 1 1,8 1 1,8 - - - - - -

(6,3) (6,3) (6.3)

Количество иссле-дованных

культур: 16

3 Грамположительные

кокковндные:

Обладающие 7 13 10 18,5 10 18,5 3 5,6 ■ 4 7,4

(35) (50) (50) (15) (20)

Не обладающие 10 18,5 10 184 10 18,5 17 31,5 20 37 16 29,6

(50) (50) (50) (85) (100) (80)

Сомнительные • 3 5,6 - - - - _ - - - - .

(15)

Количество иссле-дованных

культур: 20

Всего исследовано культур: 54

2.2.5. Биологическая характеристика отобранных культур

Обнаружение тех или иных патогенных микроорганизмов в организме птиц, определение их биологической характеристики является одной из сторон изучения возбудителей в паразитической фазе существования. Ниже приводим биологические характеристики изученных микроорганизмов.

Культура № 1. Изолирована из сердца полевого жаворонка. (Читинская область, Даурия).

Морфологические свойства. В мазках из суточных агар<)вых культур обнаружены палочки длиной 0,8-1,2 мкм и шириной 0,3-0,5 мкм, располагающиеся одиночно или попарно. По Граму охраиивались положительно. Спор и капсул не образовывали. Подвижные.

Культуральные свойства. При посеве в МПБ вызывали помутнение без образования пристеночного кольца и пленки. На дне пробирки образовывали осадок, который при встряхивании поднимался в виде "косички". На МПА в чашках Петри проявляли умеренный рост, образовывая мелкие круглые сероватые с ровными краями колонии (Б-форма). Поверхность колонии была выпуклой.

Биохимические свойства. Ферментировали глюкозу, лактозу, сахарозу, сорбит, арабинозу, рамнозу, мальтозу, адонит, салицин. Дульцит, рафинозу, маннит, уреазу, цитрат натрия не сбраживали. Образовывали сероводород. Мочевину не разлагали. Не обладали протеолитическими свойствами.

Персистентпые свойства. Давали реакцию на антилизоцимную (АЛА), антиинтерфероновую (АИА) и антикомплементарную (АКА) активности. РНК-азная активность была отрицательной.

Факторы патогенности. Лизис эритроцитов в суспензиин на кровяном агаре не наблюдали. ДНК-азная активность - отрицательная.

На основании определения морфологических, культуральных, биохимических свойств данная культура отнесена к роду ЕгуэюреЬЛпх, к непатогенному виду.

Культура № 6. Выделена из сердца дубровника. (Читинская область, Даурия).

Морфологические свойства. Прямые палочки с закругленными концами, размером 1,8-2,0 х 0,5-0,бмкм. Располагались одиночно, беспорядочно. Грамполозкительные. Образовывали споры. Подвижные.

Культуральные свойства. При культивировании в МПБ вызывали слабое помутнение со слизистым осадком. На МПА проявляли сплошной рост, образовывая серые Б-формы колонии. Поверхность колонии была гладкой и матовой.

Биохимические свойства. С образованием кислоты ферментировали глюкозу, лактозу, сахарозу, сорбит, арабинозу, рамнозу, мальтозу, салицин. Маннит, цитрат натрия, дульцит, рафинозу не разлагали. Сероводород и индол не выделяли. Давали положительную реакцию на катал азу и разжижали желатин.

Устойчивость. Вегетативные клетки сравнительно неустойчивы к воздействию высоких температур. При температуре 60°С погибали через 20 минут. Устойчивы к некоторым антибиотикам: олеандомицину, полимиксину и бензилпенидаялину. Умеренно

устойчивы к эритромицину и мономицииу. Чувствительны к левомицетину, неомицин тетрациклину, стрептомицину.

Персистентные свойства. Отмечали антилизоцимную, антиинтерферонову: антикомплементарную и РНК-азную активности.

Патогенные факторы. Лизировали эритроциты барана на кровяном агаре и суспензии.

Биологическая проба. При внутрибрюшинном введении белым мышам 0,5 мл взве суточной агаровой культуры микроорганизмов (на физрастворе) из расчета 500 млн. кл.Л гибель животных не вызывали.

На основании определения морфологических, культуральных, биохимических свойс данную культуру отнесли к роду Bacillus, к виду В. subtilis.

Культура J6 11. Изолирована из сердца белопоясничного стрижа (Читинская облас Даурия).

Морфологические свойства. В мазках обнаружены сферические клетки диаметром ( - 0,5 мкм, располагающиеся одиночно или в виде небольших скоплен! Грамположитеяьные. Спор и капсул не образовывали. Неподвижные.

Культуральные свойства. При посеве в МПБ вызывали помутнение среды последующим выпадением осадка, который при встряхивании поднимался в виде облач На МПА в чашках Петри проявляли умеренный рост, образовывая мелкие, кругл: серовато-белые с ровными краями колонии. Поверхность колоний была выпуклой, гладко! блестящей.

Биохимические свойства. Ферментировали глюкозу, мальтозу, лазстозу, сорб] арабинозу, рамнозу. Дульцит, маннит, рафинозу и салицин не сбраживали. Мочевину разлагали, незначительно образовывали сероводород и слабо створаживали молоко, МПЖ разжижали, давали положительную реакцию на катал азу.

Устойчивость. При 60°С пчгибали через один час. Чувствительны к левомицети: эритромицину, тетрациклину, стрептомицину и мономицииу.

Персистентные свойства. Отмечали АЛА, АИА и АКА.

Патогенные факторы. На кровяной среде не образовывали зону гемолиза, отмечали в суспензии лизис эритроцитов кролика. Свертывали цитратную плазму крол! (плазмокоагулирующие). Реакция на ДНК-азную активность - положительная.

Биологическая проба. Внутрибрюшшшое введение белым мышам "суточг культуры микроорганизмов в концентрации 500 млн. клУкл вызывало их гибель на втор супсн. В мазках-отпечатках из внутренних органов трупов мышей при микроског наблюдали грамположительные кокковидные бактерии.

Исходя из вышеизложенных результатов исследований, данная культ идентифицирована как Staphylococcus hyicus.

Культура Л» 17. Изолирована из легкого дубровника (Читинская область, Даурия).

Морфологические свойства. В мазках из суточных .бульонных и агаровых куль обнаружены овоидные палочки размером 0,9-1,0 х 0,4-0,5, располагавшиеся чаще попарнс старых агаровых культурах - кокковые формы. По Граму окрашивались положнтель Бактериальные клетки двигались вокруг своей оси. Спор и капсул не образовывали.

Культуральные свойства. Хорошо росли на МПА и в МПБ. На твердых средах образовывали мелкие круглые прозрачные с сероватым оттенком S-формы колонии. Вызывали незначительные помутнения МПБ с последующим выпадением хлопьевидного осадка.

Устойчивость. При 60"С микробные клетки сохраняли свою жизнеспособность в течение часа. Резистентен к исследованным антибиотикам.

Перснстентные свойства. Обладали АЛА и АИА.

Патогенные факторы. На кровяном агаре образовывали узкую зону гемолиза.

Биологическая проба. При подкожном введении белым мышам 0,5 мл суточной культуры клеток гибель подопытных животных не отмечали в течение 7 суток (срок наблюдения).

На основе проведенных исследований по изучению свойств микроорганизмов данная культура идентифицирована как Caraobacterium mobile.

Культура № 20. Изолирована из кишечника речной утки (чирок свистунок). Национальный парк "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. При микроскопии мазков, приготовленных из суточных агаровых и бульонных культур, наблюдали длинные толстые палочки длиной от 3,6 до 4 мкм и шириной 0,9 - 1,0 мкм с закругленными концами. Палочки располагались чаще одиночно. Грамположительные, подвижные, спорообразующие.

Культуральные свойства. На МПА вырастали мелкие, сероватые колонии S-формы с выпуклой и блестящей поверхностью. При культивировании в МПБ вызывали незначительное помутнение среды с образованием осадка в виде комочков ваты.

Биохимические свойства. Ферментировали сорбит, арабинозу, рамнозу, мальтозу, салицин. Слабо сбраживали глюкозу и лактозу. Сахарозу, маннит, дульцит, адонит, рафннозу не ферментировали. Не выделяли сероводород и индол, разжижали желатин в МПЖ, не свертывали молоко. Каталазоположительные.

Устойчивость. При температуре 60°С сохраняли свою жизнеспособность в течение одного часа. Устойчивы к левомицетину и полимиксину, умеренно устойчивы к неомицину, тетрациклину и бензилпекициллину. Чувствительны к эритромицину, стрептомицину, олеандомицину, мономицину.

Перснстентные свойства. Зарегистрировали АЛА и АИА.

Проведенные исследования по изучению свойств микроорганизмов позволяют отнести данный микробный изолят к роду Bacillus, к виду В. Myxodens.

Культура № 26. Выделена из кишечника дикой утки (чирок-свистунок). Национальный парк "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. Мелкие палочки с закругленными концами размером 13 - 1,6 х 0,5 -0,6 мкм. Грамотрицательные. Спор и капсул не образовывали. Подвижные. Располагались одиночно, беспорядочно.

Культуральные свойства. Хорошо росли на МПА, МПБ, средах Эндо и Плоскирева. На МПА образовывали мелкие, круглые, серовато-белые, блестящие колонии. Вызывали умеренное помутнение МПБ с последующим выпадением слизистого осадка. На среде Эндо вырастали колонии красноватого цвета, на среде Плоскирева - с желтоватым оттенком, на

висмут-сульфитном агаре - бесцветные, на среде Левина - фиолетовые колонии с розоваты* оттенком.

Биохимические свойства. С образованием кислоты ферментировали глюкозу, лактозу сорбит, арабинозу, мальтозу. Рамнозу ферментировали не постоянно. Сероводород и индо; не выделяли, не створаживали молоко, желатин не разжижали. Каталазоположительные.

Устойчивость. Бактериальные клетки малоустойчивы к температурным факторам, таз при 60°С микроорганизмы в жидкой среде погибали через 15 минут. Данны микроорганизмы устойчивы ко всем примененным нами антибиотикам кром стрептомицина.

Персистентные свойства. Наблюдали антилизоцимную, антиинтерфероновую i антикомплементарную активности.

Биологическая проба. Подкожное введение белым мышам 0,5 мл взвеси суточно: агаровой культуры (на 0,85%-ном физиологическом растворе) из расчета 500 млн. клЛи вызывало гибель животных на 7-10 сутки.

На основании проведенных исследований при изучении биологических свойст микроорганизмов данная культура идентифицирована как Escherichia coli патогенны вариант.

Культура № 30. Выделена из кишечника птицы (лысуха). Национальный пар "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. В мазках из суточных агаровых и бульонных культу обнаружены мелкие с закругленными концами палочхи длиной от 0,7 до 0,9 мкм и ширино от 0,3-0,5 мкм, располагавшиеся в основном одиночно или попарно. Грамотрицательньи Спор и капсул не образовывали. Подвижные.

Культуральные свойства. На МПА через 24 ч образовывали точечные серовато-бель: колонии. В МПБ - интенсивное помутнение бульона с образованием осадка слизнстог характера. На среде Плоскирева - колонии, окрашенные в тон среды розового цвета, a i средах Эндо, Левина, висмут-сульфитном агаре не росли.

Биохимические свойства. Ферментировали глюкозу, лактозу, сахарозу, сорби арабинозу и мальтозу, слабо - рамнозу. Выделяли индол, незначительно образовывал сероводород. Каталазоположительные. Молоко не свертывали. Разжижали желатин на МШ

Устойчивость. Культура сравнительно неустойчива к воздействию высок! температур. При температуре 60°С погибали через 12 минут.

Персистентные свойства. Микробные клетки обладали АЛА, АИА и АКА.

Патогенные факторы. На кровяном агаре образовывала узкую зону гемолиза, так» лизировали эритроциты кролика в суспензии.

На основании результатов исследованных свойств данная культура идентифицирова] как Vibrio fluvialis.

Культура № 31. Изолирована из яичников самки лысухи. Национальный па] "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. Мелкие с закругленными концами палочки длиной 0, 0,9 мкм и шириной 0,4 мкм. Грамотрицательные. Подвижные. Спор и капсул i образовывали.

Культуральные свойства. На МПА образовывали мелкие, серовато-белые, блестящие S-формы колонии. Вызывали умеренное помутнение МПБ с последующим выпадением осадка, который при встряхивании давали равномерную муть бульона.

Биохимические свойства. С образованием кислоты и газа ферментировали глюкозу и лактозу. Расщепляли сорбит, арабинозу, рамнозу и мальтозу. Не сбраживали сахарозу, адонит, рафинозу и салицин.

Устойчивость. При температуре 60вС микробные клетки сохраняли жизнеспособность в течение часа. Умеренно устойчивы к левомицетину, стрептомицину и полимиксину.

Персистенткые свойства. Проявляли АЛА, АИА и АКА.

Патогенные факторы. ДНК-азную активность яе регистрировали. Давали незначительную зону гемолиза на кровяном агаре, а также лизировали эритроциты барана в суспензии.

На основании определения морфологических, культуральных и биохимических свойств данная культура отнесена к роду Escherichia, виду E.coli.

Культура № 41. Выделена из сердца кулика Национальный парк "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. В мазках обнаружены палочки с закругленными концами длиной от 1,8 до 2,0 мкм и шириной от 0,4 до 0,6 мкм. Грамотрицательные. Неподвижные. Бактериальные клетки располагались чаще одиночно или попарно. Спор и капсул не образовывали.

Культуральные свойства. При посеве в МПБ вызывали интенсивное помутнение с последующим выпадением осадка в виде комочков ваты. На МПА в чашках Петри проявляли умеренный рост, образовывая мелкие круглые, сероватые с ровными краями колонии с выпуклой и блестящей поверхностью.

На средах Эндо, Левина, Плоскирева и висмут-сульфитном агаре не росли.

Биохимические свойства. Ферментировали глюкозу, сорбит, арабинозу, рамнозу, слабо расщепляли лактозу, дульцит, мальтозу, адонит и рафинозу. Не сбраживали сахарозу, маннит и салицин. Выделяли сероводород. Свертывали молоко и разжижали желатин. Каталазоотрицателыше.

Устойчивость. При температуре 60°С погибали через 5 минут. Весьма чувствительны к левомицетину, эритромицину и тетрациклину, умеренно устойчивы к неомицину, олеандомицину, мономицину, полимиксину и бензилпенициллину.

Персистентные свойства. Наблюдали АЛА й АКА.

Патогенные факторы. На кровяном агаре образовывали зону гемолиза, а также лизировали в суспензии эритроциты кролика. Проявляли ДНК-азную активность.

Биологическая проба. При внутрибрюшинном заражении белых мышей в дозе 0,5 мл взвеси бактериальных клеток из расчета 500 млн. кл./мл, гибель животных вызывали на 4-5 сутки.

Проведенные исследования по изучению свойств микроорганизмов позволяют отнести данный микробный изолят к роду Proteus и к виду Proteus mirabilis.

Культура Xf 54. Выделена из кишечника речной утки (чирок-свистунок). Национальный парк "Тункинский" РБ.

Морфологические свойства. В мазках из суточных бульонных и агаровых кул! обнаружены палочки с закругленными концами длиной от 3,6 до 4,0 мкм и шириной 0,4 мкм. Грамотрицательные. Капсул и спор не наблюдали. Подвижные.

Кулыуральные свойства. При посеве в МПБ отмечали слабое помутнеки последующим выпадением осадка слизистого характера. На поверхности МПА вырает серовато-белые S-формы колонии. На средах Эндо, Левина и Плоскирева образовьи колонии с розоватым оттенком, на висмут-сульфитном агаре - колонии зеленоватого цвет

Биохимические свойства. Ферментировали глюкозу, сахарозу, маннит, сор дульцит, арабинозу, рамнозумальтозу, адониг, слабо расщепляли лактозу и салицин.

Устойчивость. При температуре 60°С погибали через 30-40 минут. Обладали высо чувствительностью к левомицетину и тетрациклину, были устойчивыми к эритромшц стрептомицину, олеандомицину, мономицину и бензилпеннциллину.

Персистентные свойства. Проявляли АЛА, АИА и АКА.

Патогенные факторы. На кровяном агаре давали незначительную зону гемолиз также лнзировали в суспензии эритроциты кролика. Обладали ДНК-азной активностью.

На основании вышеизложенных результатов исследований данная культура кле идентифицирована как Enterobacter agglomerans.

2.2.6. Экологическая характеристика отобранных культур

Изучение экологических характеристик микробов имеет, несомненно, большой шгп в определении условий культивирования на искусственных питательных сре, взаимоотношений микроорганизмов в популяции и со средой обитания. Поэтому и исследована динамика роста микробных культур №: 1, б, 11, 17, 20, 26, 30, 31, 41 и взятых для дальнейшего изучения, при различных показателях pH среды (4,2; 7,4; ! температуры инкубирования (t 19; 37; 42°С) и концентрации хлорида натрия (0,05; 0 8,5%).

В ходе экспериментов установлено, что большая часть отобранных культур наилучи образом развивается при концентрации ионов водорода, близких к pH 7,2, что характе для многих природных сред (Кашнер Д., 1981). Также отмечали рост отобранных микроб] клеток, выделенных у птиц, и при температуре 41-42°С, эта способность развя встречается у типичных мезофильных бактерий различных видов Bacillus, Clostridi Pseudomonas, Yersinia (Кашнер Д., 1981; Кирьянов Е.А., 1990; Сомов Г.П., 1997). В дан: опыте можно предполагать, что рост исследуемых культур при t 41-42°С идентиче условиями пребывания их в организме птиц, так как температура тела пернатых состаы 41-42°С. Высокая концентрация NaCl в среде задерживала развитие бактериальных куш № 1, б, 17, 20, 26, 30, 31, 41 и 54, а у № 11 (St. hyicus) отмечали толерантность, подтверждается данными литературы (Акатов А.К., Зуева B.C., 1983). Более благоприя действовало на рост отобранных культур низкое содержание хлорида натрия в МПА.

3. ВЫВОДЫ

1. Проведение бактериологического мониторинга среди птиц-мигрзд Национального парка «Тункинский» РБ и Даур4кой степи. Читинской облг

позволило оценить эпизоотическую ситуацию в этих зонах, которые сегодня находятся в состоянии определенного благополучия.

2. Из 21 исследованного вида птиц 18 определенны носителями патогенной и потенциально-пагегенной микрофлоры.

3. Биологические свойства выделенных микроорганизмов у диких птиц соответствовали свойствам классических вариантов 16 родов: Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Micrococcus, Vagococcus, Bacillus, Corynebacterium, Erysiopelothrix, Listeria, Citrobacter, Edwarsiella, Enterobacter, Esherichia, Klebsiella, Proteus и Vibrio. Все это определяет спектр выявляемых бактерий в паразитической фазе существования у пернатых.

4. Общий процент чувствительности наиболее высок, независимо от вида и формы бактерий, к тетрациклину (29,1%), левомицетину (26,5%), эритромицину (25%) и стрептомицину (23%).

5. Изучение экологических характеристик выделенных микробных культур позволило считать, что не исключается проявление паразитизма при изменении условий их существования.

6. Изучение патогенных свойств выделенных культур, позволило отнести их к потенциально-патогенным микроорганизмам.

7. Выделение патогенных и потенциально-патогенных бактерий требует ежегодного проведения бактериологического мониторинга в целях контроля за эпизоотической ситуацией, которая может изменяться в зависимости от уровня циркуляции я резервации возбудителей инфекционных болезней в организме мигрирующих птиц.

4, ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Материалы могут быть использованы:

1. В диагностической работе специалистами ветеринарных лабораторий республики и ветеринарно-санитарной экспертизе при лицензионном отстреле птиц. .

2. При разработке профилактических мероприятий предупреждающих в случаи заноса и распространения через птиц - мигрантов инфекционных болезней в Национальном парке "Тункинский" и Дурской степи Читинской области.

3. В учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Петруев Д.Н., Цыдыпов В.Ц., Будаев Ю.Ж., Батомункуева Р.Д. Бактериологическое исследование проб органов птиц и ондатр // В сб. "Материалы Международной научной конференции, посвященной 125-летию Казанской ветеринарной академии". Казань, 1998,- 4.1.-С.66.

2. Етобасва И.В., Пструсв Д.П., Цыдыпов В.Ц. Случай пмянлемия возбудителя иерсиннозя // В сб. "Материалы Международной научной

конференции, посвященной 125-летию Казанской ветеринарной академии". Каза 1998.- 4.1. -С.58.

3. Петруев Д.Н., Етобаева И.В., Рыгзынова О.Б., Цыдыпов Е Антилизоцимная активность II Тезисы докладов конференции БГСХА В.Р.Филиппова "Биология на пороге XXI века". Улан-Удэ, 1999. - С.65.

4. Петруев Д.Н., Етобаева И.В., Цыдыпов В.Ц. Чувствительное?! антибиотикам иерсиний, листерий, сальмонелл и возбудителя рожи свш выделенных в Бурятии // В тр. ДальГАУ. Благовещенск, 1999 (в печати).

5. Цыдыпов В.Ц., Етобаева И.В., Петруев Д.Н. Антиинтерферонова антилизоцимная активности патогенных бактерий, выделенных в Бурятии II В ДальГАУ. Благовещенск, 1999 (в печати).

В заключение считаю своим долгом выразить глубокую признательность м научным руководителям: профессору Цыдыпову В.Ц., доценту Будаеву Ю.Ж. и сотрудни кафедры микробиологии, вирусологии и ВСЭ. А также сотрудникам музея природы Р кандидату биологических наук Ешееву В.Е, работникам Национального п; "Тункинский", Республиканской Научно-Производственной лаборатории и Тункин« районной ветеринарной бактериологической лаборатории.

Актуальность темы. Роль птиц в эпизоотологии и эпидемиологии бактериальных инфекций в значительной мере определяется биологическими особенностями экологии. Птицы населяют все зоогеографические области и используют аэросферу, гидросферу и педосферу, что отразилось на разнообразии их связей с другими организмами. Птицы в эволюционном плане являются одним из древнейших резервуаров возбудителей болезней вирусной, бактериальной, грибковой и протозойной природы. Плотность населения популяций многих видов очень высока, что является одним из условий развития эпизоотии. Миграцию многих миллионов пернатых можно сравнить с гигантским насосом, дважды в год перекачивающим адаптированных к ним возбудителей инфекций с континента на континент (Львов Л.К., Ильичев В.Л., 1979).

Таким образом, проведение бактериологического мониторинга по патогенным микробам птиц в особо охраняемых природных зонах является актуальной задачей в оценке эпизоотической и эпидемической ситуации и в предупреждении заноса в заповедную зону возбудителей инфекций, порожденных эволюцией в эпоху научно-технического прогресса XX века, и в предупреждении распространения возбудителей инфекций из природных очагов, сформированных птицами-мигрантами. Анализируя накопленные материалы о роли птиц-мигрантов в заносе и распространении возбудителей инфекций, нельзя не заметить, что большинство исследований в этом направлении завершены констатацией фактов, подтверждающих вышесказанное. При этом отсутствуют данные по биологической, экологической и персистентной характеристикам патогенных микробов, циркулирующих и резервирующих в организме диких птиц, в том числе особоохраняемой зоны Национального парка "Тункинский" Республики Бурятия и Даурской степи Читинской области.

Цель исследования. Провести бактериологический мониторинг среди птиц-мигрантов Национального парка "Тункинский" РБ и диких птиц Даурской степи Читинской области. Дать биологическую, экологическую и патогенную характеристику микроорганизмов, выделенных от них.

Задачи исследований:

1. Провести бактериологический мониторинг в условиях особоохраняемой зоны Национального парка "Тункинский" РБ и в условиях полевой экспедиции в Даурской степи Читинской области.

2. Выявить спектр выделяемых от диких птиц патогенных и потенциально-патогенных микробов.

3. Дать биологическую характеристику полученным микробным культурам.

4. Изучить экологическую характеристику и определить патогенные свойства полученных микробных культур.

Научная новизна исследования. Впервые в условиях особоохраняемой зоны Бурятии и полевой экспедиции в степи Даурии проведен бактериологический мониторинг у птиц. Определены технические и организационные возможности путей его реализации. Определен спектр выделяемых патогенных микробов. Изучены биологические и персистентные характеристики выделенных патогенных и потенциально-патогенных микроорганизмов с позиции экологического подхода, с определением их экологических характеристик.

Теоретическая и практическая значимость работы. Освоена методика проведения бактериологического мониторинга в условиях особоохраняемой зоны Бурятии и степи Даурии. Дан спектр выделяемости болезнетворных бактерий у птиц-мигрантов. Материалы могут быть использованы:

1. В диагностической работе специалистами ветеринарных лабораторий республики и ветеринарно-санитарной экспертизе при лицензионном отстреле птиц.

2. При разработке профилактических мероприятий в случае заноса и распространения инфекционных болезней в Национальном парке "Тункинский" и Даурской степи Читинской области.

3. В учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту: Биологические, персистентные и экологические свойства патогенных и потенциально-патогенных микроорганизмов, выделенных у диких птиц.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях факультета ветеринарной медицины Бурятской Государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 1997-2000); на международной научной конференции, посвященной 125-летию Казанской ветеринарной академии (Казань, 1998); на конференции БГСХА им. В.Р.Филиппова "Биология на пороге XXI века" (Улан-Удэ, 1999); на научной конференции ДальГАУ (Благовещенск, 1999).

Внедрение. Полученные результаты используются в учебной и научной работе на кафедрах: патоморфофизиологии, терапии, акушерства и хирургии; биологии, охотоведения и морфологии животных Дальневосточного государственного аграрного университета; микробиологии Алтайского государственного аграрного университета; Монгольского Национального сельскохозяйственного университета, а так же в бактериологических лабораториях Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института и научно-исследовательского института ветеринарии Восточной Сибири; сотрудниками музея природы и Национального парка «Тункинский» РБ.

Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в пяти статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 157 страницах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Работа включает 8 таблиц, 51 рисунок. Список литературы включает 164 источников, из них 19 иностранных.

5. ВЫВОДЫ

1. Проведение бактериологического мониторинга среди птиц-мигрантов Национального парка «Тункинский» РБ и Даурской степи Читинской области позволило оценить эпизоотическую ситуацию в этих зонах, которые сегодня находятся в состоянии определенного благополучия.

2. Из 21 исследованного вида птиц 18 определенны носителями патогенной и потенциально-патегенной микрофлоры.

3. Биологические свойства выделенных микроорганизмов у диких птиц соответствовали свойствам классических вариантов 16 родов: Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Micrococcus, Vagococcus, Bacillus, Corynebacterium, Erysiopelothrix, Listeria, Citrobacter, Edwarsiella, Enterobacter, Esherichia, Klebsiella, Proteus и Vibrio. Все это определяет спектр выявляемых бактерий в паразитической фазе существования у пернатых.

4. Общий процент чувствительности наиболее высок, независимо от вида и формы бактерий, к тетрациклину (29,1%), левомицетину (26,5%), эритромицину (25%) и стрептомицину (23%).

5. Изучение экологических характеристик выделенных микробных культур позволило считать, что не исключается проявление паразитизма при изменении условий их существования.

6. Изучение патогенных свойств выделенных культур, позволило отнести их к потенциально-патогенным микроорганизмам.

7. Выделение патогенных и потенциально-патогенных бактерий требует ежегодного проведения бактериологического мониторинга в целях контроля за эпизоотической ситуацией, которая может изменяться в зависимости от уровня циркуляции и резервации возбудителей инфекционных болезней в организме мигрирующих птиц.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы могут быть использованы:

1. В диагностической работе специалистами ветеринарных лабораторий Республики и ветеринарно-санитарной экспертизе при лицензионном отстреле птиц.

2. При разработке профилактических мероприятий предупреждающих в случаи заноса и распространения через птиц - мигрантов инфекционных болезней в Национальном парке "Тункинский" и Даурской степи Читинской области.

3. В учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.