Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Теоретическое и практическое обоснование новых подходов профилактики и лечения бактериальных маститов у коров в сухостойный период

На правах рукописи

ВОРОБЬЕВА Нелли Васильевна

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ НОВЫХ ПОДХОДОВ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ МАСТИТОВ У КОРОВ В СУХОСТОЙНЫЙ ПЕРИОД

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Курск - 2006

Работа выполнена в лаборатории ветеринарной медицины Курского федерального государственного научно-исследовательского института агропромышленного производства, на кафедре эпизоотологии и паразитологии ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И.Иванова»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Евглевский Алексей Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Мищенко Владимир Александрович

кандидат ветеринарных наук Епифанов Александр Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»

Защита состоится «<К<\ » года в « (^ » часов на за-

седании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.ИИванова» (305021, Курск, ул. К.Маркса, 70).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И.Иванова».

Автореферат разослан « » ¡¿ОЛ^^и] 2006

Ученый секретарь диссертационного совета

Рыжкова Г.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Важнейшей ветеринарной проблемой являются маститы у коров, характеризующиеся повсеместным распространением, массовостью заболеваний и огромным экономическим ущербом. По данным Международной молочной федерации, маститом ежегодно болеет в среднем около 25% коров (Bardon В.Е., Ebeid A.B., 1990). При этом экономический ущерб, наносимый хозяйствам, складывается из снижения на 10-15% годового надоя, качества молока и производимых из него продуктов, преждевременной выбраковки животных и расходов на организацию и проведение про-тивомаститных мероприятий (Ивашура А.И., 1991; Карташова В.М., Ивашу-ра А.И.,1988). Следствием заболевания маститом является преждевременное прекращение эксплуатации коров, снижение молочной продуктивности, развитие желудочно-кишечных заболеваний у телят (Кузьмин Г.Н., Семенов С.Н., 1999; Трошин А.Н., 1996).

В этиологии воспалительных процессов в молочной железе, как правило, участвуют многочисленные представители условно-патогенной микрофлоры (Ивашура А.И., 1991; Париков В.А.1990; Петров В.А., Парахин А., 2002; Слободяник В.И., 1994 и др.), при доминирующей роли кокковой микрофлоры (Ивченко В.М., 1991; Карташова В.М., Касянчук В.В., 1993; Кузьмин Г.Н., 1995; Mattews K.R., Harmon R.I., Smith В.А.,1990; Watts I.L., 1985).

Бактериальная полиэтиологичность маститов существенно затрудняет внедрение в производство средств специфической профилактики.

Вплоть до последнего времени разработка мер профилактики и лечения мастита у коров основывалась на массовом применении средств химио- и ал-тибиотикотерапии (Слободяник В.И., 1994; Ходаков A.B., Ковальчук A.A., 1994; Юрков В.М., Демодов Л.Д., 1997; Craven N.. 1987).

К сожалению, нерациональное и зачастую бессистемное применение антибиотиков и химиотерапевтических средств обусловило рост лекарственной резистентности условно-патогенных микроорганизмов (Зенкин А.П., Войлошников Д.С., 2001; Логвинов Д.Д., 1979; Костромитинов Н.А, 2001; Париков В .А., 1990; Слободяник В.И., 1994; Цветков Е.И., Чумкин Н.В., 1979).

Более того, в последние годы отмечается рост вирулентности возбудителей гнойно-септических заболеваний. Вследствие этого проводить их эффективную химио- и антибиотикотерапию становится все труднее и труднее (ВОЗ, 1995). Все это обусловливает необходимость поиска и разработки препаратов с иным механизмом действия (Акатов В.Н., Париков В.А., 1970; Бал-ковой И.И., Иноземцев В.П., 1993; Казеев Г.А., Старченкова A.B., 1994).

В последние годы для решения данной проблемы большое значение придается разработке и внедрению в производство экологически безопасных средств лечения и профилактики гнойно-септических заболеваний животных, в том числе и маститов у коров. Для этих целей широко испытываются про-биотики (Ивановский A.A., 1996; Платов A.B., 1985; Тараканов Б.В., 2000; Fuller R., 1989; Kalmokoff M.L., Teather R.M., 1997); препараты растительного происхождения (Гаммерман А.Ф., 1990; Завражнов В.И., Китаева Р.И., 1993;

Ростовский А., 2000); препараты пчеловодства (Андреева A.B., Маннапова Р.Т., 2002; Иванов В.В., 1996; Соколовская H.H., 1992).

При разработке профилактики и лечения мастита у коров большое значение должно придаваться состоянию иммунной системы. Хорошо известно, что на фоне иммунодефицитов происходит активация жизнедеятельности условно-патогенной и патогенной микрофлоры, персистирующей в организме здоровых животных (Александров И.Д., 1993; Андреева H.JI., 1997; Воронин Е.С., Дервишов Д.А., 1989; Гугушвили H.H., 2003; Дранник Г.Н., Гриневич Ю.А., Дизик Г.М., 1994; Новиков О.Г., 2002; Слободяник В.И., Париков В.А., Сапожников H.A. и др., 1995; Топурия Г.М., 2002; Ostensson К., 1993; Reth М., 1995).

Исходя из вышеизложенного вопросы поиска и разработки эффективных, экологически безопасных средств и методов профилактики и лечения воспалительных заболеваний молочной железы по-прежнему актуальны и востребованы производством.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящей работы являлась разработка и усовершенствование безантибиотиковых методов и средств профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период.

Для достижения этой цели, с учетом состояния изученности вопросов по теме диссертации были поставлены следующие основные задачи:

1. Выявить спектр основных бактериальных возбудителей мастита у коров в сухостойный период и изучить их биологические свойства;

2. Теоретически обосновать, экспериментально изучить, в производстве апробировать возможность применения низких концентраций формалина для профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период;

3. Теоретически обосновать, экспериментально изучить, в производстве апробировать возможность применения янтарного апистимулина для профилактики и лечения мастита у коров;

4. Определить экономическую эффективность новых подходов профилактики мастита у коров в сухостойный период.

Научпая новизна. Впервые научно обосновано и экспериментально подтверждены новые перспективные направления в лечении и профилактике бактериального мастита у коров с применением низких концентраций формалина;

Впервые изучена эффективность применения янтарного апистимулина для лечения и профилактики мастита и нормализации нарушенных звеньев иммунитета у коров в сухостойный период.

Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований дополняют современные данные по вопросам этиологии, лечения и профилактики мастита у коров. Для усовершенствования лечебных мероприятий при воспалении вымени у коров предложены экономически выгодные, простые, эффективные и доступные способы профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на

защиту:

1. Видовой состав и биологические свойства основных возбудителей мастита у сухостойных коров.

2. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения низких концентраций формалина для обезвреживания условно-патогенной микрофлоры молочной железы при внутрицистернальном методе введения коровам в сухостойный период.

3. Теоретическое и экспериментальное применение янтарного аписти-мулина для профилактики мастита у коров в сухостойный период и ускорения процесса нормализации нарушенных звеньев иммунитета.

Апробация и публикация результатов исследований.

Материалы диссертационного исследования доложены и одобрены на ученом совете ГНУ Курского НИИ агропромышленного производства РАСХН (2005-2006 г.); на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава Курской ГСХА (2003-2004г.).

По материалам, представленным к защите диссертации опубликовано 14 научных работ; получено два патента на изобретение: «Способ профилактики мастита» № 2239422 от 10.11.04 и «Способ лечения мастита у коров» № 2230571 от 20.06.04.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, изложения результатов исследований с их обсуждением, выводов, списка используемой литературы. Работа изложена на 137 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 4 рисунка. Указатель используемой литературы включает 216 источников, в том числе 49 зарубежных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Исследования проводились с 1997 по 2005 гг. в Курском НИИ АЛЛ, в соответствии с планом НИР лаборатории «ветеринарная медицина».

Мастит, его формы диагностировали по результатам клинических исследований животных и вымени согласно «Методическим указаниям по диагностике, лечению и профилактике мастита у коров» (ГУВ МСХ СССР,1977).

Субклинические формы мастита выявляли физико-химическими методами, путем исследования секрета молочной железы 5%-ным водным раствором димастина и бактериологическим методом.

Прямой подсчет соматических клеток в молоке проводили методом Прескотга и Брида.

Для изучения микробного состава, при развитии мастита у коров, производили посев секрета молочных желез на универсальную питательную среду - 5% кровяной МПА, с последующей идентификацией изолированных микробных культур по культуральным, биохимическим, морфологическим

свойствам, позволяющим отнести их к тому или иному виду. Для идентификации выросших культур изучали их свойства. Крупные выпуклые колонии вне зависимости от наличия зоны гемолиза, ориентировочно относили к Staphylococcus; мелкие росинчатые к Streptococcus; серые круглые колонии (блестящие и плоские) обычно указывали на рост бактерий группы кишечной палочки. Появление колоний с зеленым оттенком давали основание предполагать наличие синегнойной палочки. Из колоний, одинаковых по морфологическим свойствам, делали мазки для окрашивания по Граму и последующей микроскопии.

Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью определителя Берджи (1997), методических пособий по диагностике стафилококко-за и стрептококкоза (Есепенок В. А. с соавт., 1997).

Чувствительность изолированных культур к антимикробным препаратам определяли методом индикаторных бумажных дисков в чашках Петри на МПА. Результаты оценивали по величине зоны задержки роста.

Патогенпость выделенных культур определяли на белых мышах. Для этого их заражали взвесью бактерий в дозе 500 млн. микробных клеток.

Титр иротивосальмоиеллезных агглютининов в сыворотке крови подопытных животных определяли в реакции агглютинации (РА) классическим пробирочным методом, используя антиген, включающий 2,0 млрд. микробных тел культуры S. dublin убитых кипячением и 0,2% формалином. Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считаются тигром.

Иммунный статус организма коров изучали на разных стадиях инфекционного процесса, а также у здоровых животных.

Для оценки иммунологических изменений определяли классы иммуноглобулинов М и G методом прямой радиальной иммунодиффузии (Мап-chini, 1965) с использованием моноспецифических антисывороток, приготовленных в ВИЭВе.

Выделение лимфоцитарных клеток проводили путем определения количества Т- и B-лимфоцитов по методике разработанной Коромысловым Г.Ф. и Солодовниковым В.Л. (1982); в частности: Т-клетки методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана; В-клетки - в реакции ком-плементного розеткообразования с эротроцитами мышей, образующими иммунные комплексы с иротивоэритроцитарными антителами и комплементом.

Эффективность применения низких концентраций формалина и янтарного апистимулина изучали при профилактике и лечении маститов у коров в сухостойный период. Оценку эффективности проводили по результатам бактериологических исследований и на основе степени редуцирования воспалительного процесса.

Статистическую обработку полученных данных проводили согласно методических указаний Баюн Ю.К. (1988).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Этиология бактериального скрытого мастита коров в сухостойный период

Изучение частоты обнаружения и видового состава, бактериальных патогенов в секрете вымени больных скрытым маститом коров провели на базе двух хозяйств: учхозе «Знаменский» и ЗАО «Содружество».

Молочное стадо учхоза «Знаменский» представлено чернопестрой породой скота с ежегодным удоем на одну корову порядка 6000 литров молока.

Молочное стадо ЗАО «Содружество» представлено сборным беспородным поголовьем коров, имеющих среднюю продуктивность 2400-2500 литров молока на одну корову.

Таким образом, оба стада были весьма контрастными по уровню продуктивности и породного состава коров.

Результаты исследования нами представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 - Распределение больных субклиническим маститом коров в сухостойный период (с декабря по май 2004 г.)___

Количество Абсолютное коли- Относительное коли-

Месяц года обследованных чество больных чество больных мас-

коров скрытым маститом титом (%)

Учхоз «Знаменский»

Декабрь 72 18 25,0

Январь 74 23 31,1

Февраль 48 21 43,7

Март 36 22 61,1

Апрель 29 18 62,1

Май 22 9 40,9

ЗАО «Содружество»

Декабрь 22 6 27,3

Январь 18 5 27,7

Февраль 24 9 37,5

Март 22 9 40,9

Апрель 12 4 33,3

Май 10 2 20,0

Исходя из видового состава возбудителей скрытого мастита следует, что на протяжении всего стойлового периода среди условно-патогенных микроорганизмов доминирующее положение занимал золотистый стафилококк. У высокопродуктивных коров его удельный вес в этиологии мастита колебался от 19,0% до 30,0%, а у низкопродуктивных от 16,6% до 25,7%.

Второе место по частоте выделения микроорганизмов занимали эпи-дермальный стафилококк и агалактийный стрептококк. Следует отметить, что в последние годы в медицине эпидермальный стафилококк все чаще стали относить к патогенным, поскольку, попадая в иммунно - слабый организм они способны вызывать тяжелые гнойно-септические процессы. Аналогичные сведения появились и среди ветеринарных исследователей (Кузьмин Г.Н., Казаков С.М., 1999; Морозов А.Ф., Акатов А.Ф., 1991; Смертина Е.Ю., 1998 и др.).

Таблица 2 - Видовой состав возбудителей бактериальных маститов у коров в сухостойный период (с декабря по май 2004 г.)_

Месяцы года Этиологические патогенны (количество / %)

8.аигсиз в.ерМег-ш1с1|'$ БларгорЬу-йсия 81г.а£а1ас-П'ае Str.dysga!a-сНае в^.иЬспэ Б.соН

Учхоз «Знаменский»

Декабрь 6/30,0 5/25,0 - 4/20,0 4/20,0 1/5,0 -

Январь 6/27,3 5/22,7 1/4,5 5/22,8 3/13,6 2/9,1 -

Февраль 7/25,9 6/22,3 1/3,7 5/18,5 4/14,8 2/7,4 2/7,4

Март 6/21,4 5/17,9 1/3,6 4/14,3 4/14,3 2/7,1 6/21,4

Апрель 4/19,0 4/19,0 1/4,8 4/19,0 2/9,5 1/4,8 5/23,9

Май 3/23,1 3/23,1 - . 2/15,4 2/15,4 - 3/23,0

ЗАО «Содружество»

Декабрь 7/22,6 6/19,4 4/12,9 5/16,1 4/12,9 1/3,22 4/12,9

Январь 7/23,3 6/20,0 3/10,0 4/13,3 3/10,0 2/6,7 5/16,7

Февраль 9/25,7 8/22,9 3/8,6 4/11,4 4/11,4 2/5,7 5/14,3

Март 8/24,2 6/18,2 3/9,0 5/15,2 5/15,2 - 6/18,2

Апрель 6/20.0 5/16,6 2/6,7 6/20,0 5/16,7 - 6/20,0

Май 3/16,6 2/11,2 1/5,6 4/22,2 3/16,6 1/5,6 4/22,2

Значительно меньше и редко из секрета молочной железы больных маститом коров изолировали сапрофитный стафилококк (от 3,6% до 4,5%).

Частота выделения маститного стрептококка также возрастала к концу стойлового периода. У высокопродуктивных коров частота выделения маститного стрептококка в декабре составила 20,0%, в марте 14,3%, апреле 19,0%. Аналогичная картина наблюдалась и у коров с низкой молочной продуктивностью - 16,1%; 15,2%; 20,0% соответственно.

Обращает на себя внимание частота выделения кишечной палочки. Если среди высокопродуктивных коров в начале стойлового периода нам не удалось ее выделить, то в его конце выделяемость зшерихий из секрета больных долей вымени составила в марте 21,4%, в апреле 23,9%. Следует отметить, что в стаде ЗАО «Содружество» случаи выделения кишечной палочки были постоянными и весьма высокими от 12,9% до 22,2%. По всей видимости, это было связано с весьма плохими условиями содержания коров в этом стаде.

Следует отметить, что па фоне увеличения количества маститов к концу стойлового содержания значительно возросла роль ассоциаций бактериальных патогенов. Если этиология скрытого воспалительного процесса в декабре - январе обусловливалась ассоциацией из двух, реже трех видов микроорганизмов, то в марте - апреле преобладали ассоциации из трех и даже четырех видов микроорганизмов. В порядке этиологической значимости ассоциации возбудителей распределились следующим образом (рис. 1 /а, б/).

Наши материалы исследований согласуются с данными других исследователей отмечавших преобладание этих патогенов в этиологии скрытого бактериального мастита.

а) учхоз «Знаменский»

Вв.аигеиз ПЕ.соИ ОЗ^аегтаб'га 031г.адз1ас11ае ОР8.аегид1по8а ;

б) ЗАО «Содружество»

Рис. 1 (а, б) Соотношение групп микроорганизмов, выделенных из секрета молочной железы коров при мастите в сухостойный период

Теоретическое обоснование и экспериментальная оценка возможности применения низких концентраций формалина для обезвреживания микрофлоры и инактивации ее токсинов при мастите у коров

Основными возбудителями мастита у коров в большинстве случаев являются стафилококки, стрептококки, кишечная палочка. Эти микроорганизмы способны продуцировать токсичные вещества - экзотоксины. Известный принцип, лежащий в основе получения всех убитых вакцин и анатоксинов, основан на обезвреживании формалином микроорганизмов и инактивации их токсичных продуктов жизнедеятельности - экзотоксинов. Как известно основные возбудители мастита у коров активно продуцируют экзотоксины. В этой связи возникает идея об использовании формалина для обезвреживания микрофлоры при маститах и инактивации их токсичных продуктов жизнедеятельности непосредственно в пораженной доле вымени. В свою очередь можно предположить, что инактивация формалином токсичных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов при мастите обеспечит получение специфических веществ, обладающих иммунногенной активностью.

С учетом вышеизложенного, в условиях in vitro были поставлены опыты по определению обезвреживающего действия низких концентраций формалина в отношении секрета вымени при клинических формах мастита.

Таблица 3 - Результаты бактериологического исследования секрета больных маститом коров и биопробы до и после внесения в него формалина^ _____

Клиническая форма мастита Количество животных (п=3) До внесения формалина Спустя час после внесения формалина

Характер роста на МПА Выделены культуры Биоироба (заражено/ пало) Характер роста на МПА Биопроба (заражено/ пало)

Серозно-катаралышй 1 сплошной E.coli; Str.agalactiae 3/1 роста нет 31-

2 тоже E.coli; S.epidermidis 3/1 -II- 31-

3 то же E.coli; Str.agalactiae 3/2 -II- 31-

Гнойно-катаральный 1 сплошной S.aureus; Str.agalactiae 3/3 -II- 31-

2 то же P.aeruginosa; E.coli 3/3 -II- 31-

3 то же S.aureus; Str.agalactiae 3/3 -II- 31-

Примечание: числитель - заражено мышей; знаменатель - из числа зараженных пало в течение 24 часов.

Исходя из проведенных нами исследований, можно сделать заключение о том, что применение низких концентраций формалина, в частности, в нашем случае она составляет 0,3%, позволяет быстро обезвредить условио-патогснпую микрофлору относительно большого объема секрета вымени. При этом есть все основания полагать, что обезвреженная мшсрофлора и частичная инактивация ее продуктов жизнедеятельности, могут обладать имму-ногенной активностью, что очень важно в вопросе формирования локальной иммунной защиты молочной железы в сухостойный период. Именно эти предположения и послужили основанием для проведения следующей серии опытов непосредственно на коровах с диагнозом мастита.

Влияние низких концентраций формалина на микрофлору вымени коров при клиническом мастите

Полученные в ходе предыдущего опыта экспериментальные данные дали основание для проведения исследований непосредственно на коровах больных серозно-катаральным и катаральным маститом.

Был апробирован водный раствор, включающий 0,3% формалин и 0,5% новокаин при трехразовой кратности введения в объеме 5,0мл в больные доли вымени.

Данные бактериологических исследований при изучении бактерицидного действия формалина на микрофлору маститов представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Бактерицидное действие 0,3% формалина на микрофлору при клиническом мастите коров_

коровы Видовой состав микрофлоры

До введения формалина В процессе введения спустя

день 2 дня 3 дня 4 дня

№ 1 Е.соН S.aureus S.aureus S.aureus S.aureus -

№2 S.aureus Str.dysgalactiae S.aureus - - -

№3 Str.dysgalactiae Str.agalactiae Str.agalactiae ; - -

№4 Ps.aeruginosa Str.agalactiae E.coli Ps.aeruginosa Ps.aeruginosa Ps.aeruginosa -

№5 S.aureus Str.dysgalactiae S.aureus - : -

№6 S.aureus S.aureus S.aureus S.aureus -

№7 S.aureus Str.agalactiae S.aureus S.aureus _ _

Результаты бактериологических исследований показали, что на вторые сутки произошло значительное уменьшение выделения исходных культур. Особенно выражено это проявилось в отношении кишечной палочки и стрептококков. Повышенную устойчивость демонстрировали лишь стафилококки и синегнойная палочка. Ростовая активность культур также выражено снизилась. Если до введения формалина при посеве секрета на МПА наблюдали обильный и даже сплошной рост культур, то на вторые сутки выделялись уже мелкие колонии. Это, безусловно, свидетельствовало об уменьшении микрофлоры в секрете вымени. На это же и указывали результаты характера выделяемого секрета из пораженных долей вымени. В большинстве случаев на вторые сутки секрет приобретал консистенцию близкую к молоку.

На 3 сутки секрет вымени из больных долей практически не отличался от молока из здоровых долей. Однако у трех особей из секрета вымени были выделены 2 культуры S.aureus и одна Ps.aeruginosa.

На 4 сутки результаты бактериологических исследований были отрицательными.

Таким образом, проведенные бактериологические исследования и результаты клинических наблюдений свидетельствовали о быстром обезвреживающем действии формалина на микрофлору при клиническом мастите. Это дало нам основание для расширения объема исследований по применению формалина при маститах.

Эффективность применения низких концентраций формалина при субклиническом мастите коров в сухостойный период

Оценку лечебно-профилактической эффективности низких концентраций формалина при интрацистернальном методе введения в сравнении с мас-тисаном-А провели на коровах учхоза «Знаменский».

Таблица 5 - Эффективность формалина и мастисана-А при субкли-

ническом мастите в сухостойны» период в начаче запуска

Группы больных и кол-во коров препараты положительная проба секрета на димастин (доли вымени) Заболело клиническим маститом после родов

до введения после введения на

3 день 7 день 14день коров %

1(п=30) Формалин 74 29 6 - 2 6,6

2(п=30) Мастисан 76 42 23 18 5 16,6

3(п=24) контроль 48 54 62 64 9 37,5

Таблица 6 - Эффективность формалина и мастисана-А при субклн-

ническом мастите за 15 дней до родов

Группы больных и кол-во коров препараты Положительная проба секрета на димастин после родов Заболело клиническим маститом

коров долей вымени коров %

1(п=18) Формалин 3 6 - -

2(п=16) Мастисан 5 12 2 12,5

3(п=24) контроль 14 28 9 37,5

Влияние низких концентраций формалина при внутрицистерналышм введении на иммунный статус коров при клиническом мастите

Таблица 7 - Показатели иммунного статуса коров при клиническом мастите в процессе лечения формалином и мастисаном-А_

Исследуемые показатели Средние показатели животных После курса лечения (п=6)

здоровых (11=5) больных(п=12) 0,3% формалин Мастисан-А

Т-лимфоциггы,% 42,5 ±0,31 39,2 ± 0,86 41,4 ± 1,40 40,8 ± 1,30

тыс/мкл 2,80 ± 0,40 2,28 ±0,21 2,48 ± 0,40 2,41 ±0,12

В-лимфоциты% 17,3 ±0,28 15,2*0,51 15,9 ±0,30 15,7 ±0,40

тыс/мкл 1,25 ± 0,01 0,94 ± 0,05 0,97 ±0,04 0,95 ±0,06

^ в, мг/см3 21,8 ± 0,16 19,4 ± 0,11 20,9 ± 0,32 19,9 ±0,45

М, мг/см3 2,66 ±0,09 2,54 ±0,10 2,56 ±0,18 2,54 ±0,12

Таким образом, анализ показателей иммунологического статуса больных маститом коров позволяет сделать заключение о наличии у них признаков дефицита в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета. Это в свою очередь обусловливает необходимость применения средств повышения резистентности организма, как в период проведения лечения, так и после клинического выздоровления.

Влияние внутрнцистернальной иммунизации сухостойных коров формолвакциной на заболеваемость маститом

В неблагополучных по колибактериозу и сальмонеллезу хозяйствах широко используется вакцинация коров в сухостойный период соответствующими вакцинами. Для этих целей, в основном, используются «убитые» вакцины, содержащие в своем составе формалин. Вакцинацию проводят подкожно, не менее двух раз. Объем вводимых вакцин довольно большой, до 15,0 мл. Исходя из того, что в убитых вакцинах содержится формалин возникла идея апробировать на группе глубокостельных коров внутрицистер-нальный метод вакцинации для профилактики мастита. Сам по себе этот ме-

тод введения вакцин хорошо известен. В ветеринарной практике давно апробирована внутрицистернальная вакцинация (Бурсуков В.В., 1994). Метод внутрицистернального введения в молочную железу коров убитых нагреванием энтеропатогенных кишечных палочек за несколько недель до отела позволяет получить в высоком титре антитела, что нашло применение и в медицинских целях для предупреждения эшерихиозов у детей (Хазенсон Л.Б., 1985).

Придерживаясь принципа аналогов, по мере перевода коров в запуск, были сформированы следующие подопытные группы. Для проведения одной серии опытов использовали коров секрет вымени которых не имел положительной реакции с димастином. В другой серии опытов использовали коров с положительной реакцией секрета вымени на димастии. Клинически здоровым коровам в каждую долю вымени ввели по 2,0 мл вакцины. В больные доли вымени объем вводимой вакцины увеличили до 5,0 мл. Увеличение объема вводимой вакцины диктовалось необходимостью обезвреживания микрофлоры, вызвавшей воспалительный процесс в долях вымени. Каких-либо осложнений, после введения вакцины, не наблюдалось, что свидетельствовало о безвредности данного метода их применения. В качестве контроля служили коровы, которым вакцину не применяли (таблица 8). Спустя 15 дней, после введения вакцины, провели исследование сыворотки крови на содержание в ней иммуноглобулинов и специфических агглютининов. Последний тест использовали и у телят на 7 сутки после рождения.

Таблица 8 - Результаты бактериологического исследования секрета вымени коров___ ■_

количество микрофлора количество микрофлора

группа больных коров/далей

и кол- долей пе- кол-во больных кол-во

во ко- ред запус- культур вид маститом культур вид

ров ком после отела

1 опыт- 15 5 Б-аигеив 1 Б-аигеиз

ная 3 $1г.а£а1асиас 2/3 1 Е.соН

(п=7) 2 Str.dysgalactiae 1 Яй-^а^сйае

2 кон- 14 4 З.аигеия 2 Б-аигеив

троль- 2 З.ертёеггшсНз 4/9 1 Бй^аксНае

ная 2 Бй^аЬсй'ае 1 Str.dysgalactiae

(п=7) 2 Stг.dysgaIactiae 1 Е.соН

1 Рз.аеги^поБас

3 опыт- 1 З.аигсиэ

ная - - - 3/4 2 51г^а1асУае

(1и=10) 1 Str.dysgalactiae

2 Е.соН

4 кон- 3 Б.аигеиз

троль- - - - 4/8 2

ная 2 8йг.ёуз£а1ас^ае

(п-10) 2 Е.соН

Анализируя результаты клинических и бактериологических исследований можно сделать вполне определенное заключение о том, что внутрицис-тернальное разовое введение сухостойным коровам формолвакцины как больным субклиническим маститом, так и клинически здоровым способство-

вало снижению инфицированности молочной железы и как следствие, уменьшило показатели заболеваемости маститом в послеродовой период

По-нашему мнению, основываясь на результатах опытов по применению низких концентраций формалина, проявление антибактериального эффекта связано с наличием в данном вакцинном препарате формалина.

Следует отметить еще одно обстоятельство, связанное с лечением коров этих групп больных маститом в послеродовой период. Для лечения коров мы применили мастисан-А. Эффективность лечения была высокой. По всей видимости, это было связано с тем, что мастисан ранее не применялся. Это и обусловило повышенную чувствительность микрофлоры к данному препарату, если принять во внимание пониженную лечебную эффективность данного препарата в предыдущей серии опытов по профилактике субклинического мастита с применением мастисана.

Влияние внутрицистернального метода введения формолвакцины на иммунологические показатели коров и новорожденных телят При контрольном исследовании сыворотки крови у подопытных коров уходящих в запуск установлено, что у больных субклиническим маститом показатели содержания иммуноглобулинов класса М и в были несколько выше, чем у клинически здоровых (таблица 9).

Пятикратное увеличение татра специфических агглютининов в крови новорожденных подопытных телят по отношению к сверстникам из контрольной группы убедительно свидетельствовало о проявление локальной иммунной реакции в молочной железе.

Таблица 9 - Влияние интрацистернального метода введения формолвакцины против сальмонеллеза на содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови коров и специфических аггютинитов у новорожденных телят

Группа Содержание иммуноглобулинов (мт/мл) Средний титр агглютининов к сальмонеллезному антигену у новорожденных

В начале запуска Спустя 15 дней после вакцинации

М О М в

1 опытная 2,87±0,24 22,34±0,42 2,85±0,34 21,36±0,53 1:100

2контрольная (не вакцинированная) 2,79±0,32 22,48±0,76 2,84±0,28 21,1540,62 1:20

3 опытная 2,58±0,18 20,62±0,34 2,56±0,23 20,75±0,18 1:100

4контрольная (не вакцинированная) 2,52±0,26 20,44±0,25 2,48±0,24 20,32*0,16 1:20

Теоретическое обоснование и экспериментальная оценка возможности

применения янтарного апистимулина для лечения мастита у коров и повышения гас иммунного статуса

В последние годы вопросам повышения неспецифической резистентности животных, ранее рассматривавшихся как вспомогательные, занимают существенно важное значение в системе профилактики инфекционных болезней

Янтарный апистимулин - иммунотропный препарат разработан коллективом научных сотрудников Курского НИИ АЛЛ и Курской ГСХА (Патент РФ № 2264222).

В основу получения янтарного апистимулина положен кислотный гидролиз пчелиной перги янтарной кислотой, проводимый при температуре 100°С. Повышенная кислотность гидролизата нейтрализована гидроокисью натрия. Конечный продукт - янтарный апистимулин - представляет собой уникальный комплекс биологически активных веществ. Нейтральная реакция препарата (рН-7,0) позволяет применять его при парентеральном методе введения.

Бактерицидная активность янтарного апистимулина изучалась в тесте по обезвреживанию секрета вымени от коров больных гнойно-катаральным маститом.

Результаты проведенных бактериологических исследований секрета пораженных маститом долей вымени с постановкой биопробы на белых мышах представлены в таблице 10.

Таблица 10 - Результаты бактериологических исследований секрета пораженных маститом долей вымени до и после внесения янтарного апистимулина с постановкой биопробы_

До внесения После внесения спустя

№ харак- выде- вирулент 3 часа 6 часов остаточ-

п/ тер лены ность харак- выделе- виру- харак- выде- ная

п роста культу- тер ны лент- тер лены виру-

на ры культур роста культу- ность роста куль- лент-

МПА млн.м.т. па ры культур на туры ность

МПА млн.м.т МПА культур

млн.м.т

сплош E.coli 750млн. едипич E.coIi авиру- едннич

1 НОИ ные лентная ные

S.aurc- 500млн.м S.aure- 750млн. S.au- >1

us .т. коло- us коло- rcus млн.м.т.

нии нии

сплош S.aure- 500млн.м то же S.aure- 750млн. то же S.au- 1

2 ной us .т. us rcus млн.м.т.

Str.aga- 750млн. Str.aga- авиру-

Iactia lactiae лентная

сплош E.coli авиру- то же то же

3 НОИ лентная

S.aure- 500млн.м S.aure- 750млн. S.au- > 1

us -Т. us reus млн.м.т.

В результате бактериологических исследований нами установлено, что янтарный апистимулин оказывает определенное бактериостатическое действие на микрофлору молочной железы.

При этом антибактериальное действие наиболее выражено против стафилококков и кишечной палочки. В отношении золотистого стафилококка это действие проявилось выраженной тенденцией к снижению его вирулентных свойств.

Эффективность внутрицистернального применения янтарного апистимулина при клиническом мастите коров

Для более детального изучения возможности применения янтарного апистимулина при патологии вымени был проведен опыт в учебно-опытном хозяйстве «Знаменский» Курской ГСХА.

Изучение безвредности препарата провели на клинически здоровых коровах. Внутрицистернальное введение янтарного апистимулина в объеме 10,0мл не вызвало какого-либо клинического осложнения, за исключением роста числа соматических клеток с ЗООтыс. до 400тыс. По-нашему мнению это вполне допустимая реакция молочной железы на введение лечебного антигена.

Для изучения лечебной эффективности янтарного апистимулина объектом испытания служили больные клиническим маститом коровы в предверии запуска.

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что янтарный апи-стимулин обладает выраженным терапевтическим действием при клинической форме мастита у коров.

Таблица 11 - Эффективность янтарного апистимулина при клиническом мастите в зависимости от способа введения _

Группа животных и метод введения препарата Кол-во коров/долей с признаками мастита Кол-во долей с признаками мастита Эффективность лечения, % Средний период (ыздоровления, дней

До лечения После лечения

1. апистимулин внутрицистернально 7/8 2 75,0 4,8

2. апистимулин в/ц + в надвыменную складку 7/9 1 88,9 3,5

3. мастисан внутрицистернально 7/8 3 62,5 6,4

Влияние янтарного апистимулина на показатели иммунологической реактивности и заболеваемость маститом коров в сухостойном и раннем послеродовом периодах

Как известно, в последние месяцы беременности на развитие плода затрачивается до 50% энергетического потенциала материнского организма. Этот период считается наиболее кризисным для материнского организма, так

как нарушаются практически все виды обмена веществ, развивается общий и локальный иммунодефицит. На таком фоне неизбежна активация условно-патогенной и патогенной микрофлоры, закономерно переживающей как в организме, так и в молочной железе. Не случайно в сухостойный период заболеваемость маститом бывает самой высокой. Это связано с тем, что молочная железа в этот период находится в состоянии пониженной резистентности.

С учетом вышеизложенного мы поставили перед собой задачу провести научно-производственные опыты по изучению взаимосвязи иммунных изменений у сухостойных коров с заболеваемостью маститом и определить эффективность разных методов применения янтарного апистимулина в профилактике и лечении данной патологии. Объектом проведения опытов служили уходящие в запуск клинически здоровые коровы, больные хроническим маститом, и больные субклиническим маститом.

Иммунологические исследования включали определение функциональной активности клеточной и гуморальной систем иммунитета за 45, 30 и 15 дней до отела. Результаты исследований отражены в таблице 12.

Таблица 12 - Влияние янтарного апистимулина и тетравита при внутримышечном введении на содержание Т- и В-лимфоцитов в крови глубокостельных клинически здоровых коров (п=20)_

Группа Сроки исследований

коров В начале запуска | За 30 дней до родов | За 15 дней до родов

Т-лимфоциты, % (М ± т)

| 50;8± 1,8 1 49,5 ±1,6 | 48,7 ± 1,5

5з ¥ Т-хелперы

щ § 23,3 ±0,26 | 22,9 ± 0,26 | 21,5 ±0,37

& 5? в Т-супрессоры

я р 11,9 ±0,23 | 11,9 ±0,24 | 11,5 ± 0,16

« В-лимфоциты, %

18,7 ±0,44 | 17,9 ±0,62 | 18,3 ±0,25

Т-лимфоциты, % (М ± т)

50,2 ± 1,7 1 44,8 ±1,6 | 42,3 ± 1,8

в Т-хелперы

й 23,6 ±0,27 | 20,8 ±0,32 | 18,4 ±0,23

Т-супрессоры

(Я 11,8 ±0,14 | 12,2 ±0,25 | 12,4 ±0,15

см В-лимфоциты, %

18,9 ±0,26 ( 16,8 ±0,54 | 17,5 ±0,29

Т-лимфоциты, % (М ± ш)

<и 50,5 ± 1,6 1 42,6 ±1,9 | 42,6 ± 1,8

1 & Т-хелперы

§ 8 23,6 ± 0,24 | 18,4 ±0,16 | 17,8 ±0,24

8 О. м 8 Т-супрессоры

11,9 ±0,23 | 12,8 ±0,32 | 12,8 ±0,35

В-лимфоциты, %

18,9 ±0,26 | 16,8 ±0,52 | 17,4 ±0,48

Таблица 13 - Влияние янтарного апнстимулина и тетравита на уро-

Группа (п=5) Ig M, мг/мл I 5 G, мг/мл

Исходные данные За 30 дней до родов За 15 дней до родов Исходные данные За 30 дней до родов За 15 дней до родов

1 2,67 ±0,18 2,58 ± 0,24 2,34 ± 0,22 183 ±0,23 18,4± 0,32 17,8 ± 0,16

2 2,4 ±0,25 2,32 ±0,12 2,10 ± 0,16 18,2 ±0,34 17,3 ±0,28 16,0 ± 0,32

3 2,62 ±0,34 2,24 ± 0,10 2,0 ±0,14 18,3 ±0,25 15,9 ± 0,23 15,2 ± 0,12

Таблица 14 - Влияние апистимулииа и тетравита на заболеваемость

Кол-во коров/ Среднее кол- Микрофлора

Группа долей вымени с во соматиче-

коров положительной ских клеток Количество Вид

(п=20) реакцией на (тыс/мл) культур

димастин

1 3/5 700 3 S.aureus

Str. agalactiae

2 5/8 1200 6 S.aureus

Str. agalactiae

Str.dysgalactiae

3 7/11 1500 9 S.aureus

S.epidermidis

Str. agalactiae

Str.dysgalactiae

Эффективность применения янтарного апистимулииа при субклиническом мастите коров в сухостойный период

Исходя из ранее полученных данных об антимикробной активности янтарного апистимулииа мы провели серию опытов испытания апистимулина при субклиническом мастите коров в сухостойный период.

Отобрав по принципу аналогов 16 коров давших положительную реакцию с димастином, разделили их на две группы.

В первой группе больным животным (п=10) вводили янтарный аписти-мулин внутрицистернально в дозе 5,0мл.

Второй (контрольной, п=6) группе вводили мастисан. Препараты вводили в начале сухостойного периода, учет результатов производили после отела.

Анализируя данные таблицы следует, что внутрицистернальное введение янтарного апистимулина позволило уже на 3-й день уменьшить количество пораженных воспалительным процессом долей вымени с 11 до 4. На 7-й день в этой группе положительно реагирующих на димастин было две коро-

вы с двумя пораженными долями, что составило 81,8% эффективности лечения апистимулином. После отела у одного животного диагностировали клиническую форму мастита.

Таблица 15 - Эффективность янтарного апистимулина и мастисана при субклиническом мастите коров в сухостойный период_

группа больных коров и их кол-во препарат положительная проба секрета на ди-мастин (доли вымени) заболело клиническим маститом

до лечения после введения после отела коров %

3 день 7 день

1. п=10 янтарный апи- 11 4 2 2 1 10,0

стимулин

2. п=6 мастисан 6 3 2 3 2 33,3

Таким образом, в ходе проведенной серии опытов нами получены убедительные данные, свидетельствующие об эффективности применения янтарного апистимулина для лечения и профилактики мастита в сухостойный и в ранний послеродовой периоды.

ВЫВОДЫ

1. В возникновении и развитии инфекционного процесса в молочной железе коров принимают участие различные ассоциации условно-патогенных микроорганизмов, при доминировании грамположителыюй кокковой флоры и E.coli.

2. Развитие воспалительного процесса в молочной железе у коров в сухостойный период проходит на фоне снижения функционирования клеточной и гуморальной систем иммунитета.

3. В опытах in vitro добавление к секрету молочной железы 0,3% формалина обеспечивает в течение часа полное обезвреживание микрофлоры и частично инактивацию их токсинов, что создает перспективу применения низких концентраций формалина для ускоренного формирования локального иммунитета при мастите.

4. Внутрицистернальное введение низких концентраций формалина не оказывает отрицательного влияния на клиническое состояние коров и обеспечивает быстрое подавление жизнедеятельности патогенной микрофлоры молочной железы, инактивацию их токсинов, полное клиническое выздоровление на 3-4 день.

5. Внутрицистернальное введение формолвакцины против сальмопел-леза в объеме 2,0мл в здоровые и 5,0мл в инфицированные доли вымени сухостойным коровам обеспечивает в 2-3 раза снижение заболеваемости маститом в ранний послеродовой период при пятикратном роете титра специфических антител у новорожденных телят.

6. Внутрицистернальное введение янтарного апистимулина вызывает незначительный рост числа соматических клеток в здоровых долях вымени и выраженное бактерицидное действие на микрофлору пораженных маститом долей.

7. Внутрицистернальное введение янтарного апистимулина в объеме

5,0мл в каждую больную долю вымени сухостойным коровам обеспечивает на 90,0% снижение показателя заболеваемости клиническим маститом в ранний послеродовой период.

8. Двукратное с интервалом 15 дней внутримышечное введение янтарного апистимулина коровам в сухостойный период профилактирует риск развития иммунологического криза и снижает до 15% заболеваемость маститом в ранний послеродовой период.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать производству внутрицистернальный способ введения формолвакцины сухостойным коровам, обеспечивающий быстрое подавление жизнедеятельности условно-патогенной микрофлоры в молочной железе и высокие показатели специфического колострального иммунитета у новорожденных телят.

2. Для профилактики развития иммунологического криза и повышения устойчивости молочной железы сухостойных коров к действию условно-патогенной микрофлоры рекомендуем сочетать внутрицистернальное и внутримышечное применение янтарного апистимулина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Воробьева Н.В. Влияние стафилококкового и стрептококкового анатоксинов на факты естественной резистентности у коров, при маститах кокковой этиологии / Н.В.Воробьева, А.А.Евглевский, В.НЛетрова, О.А.Ляхова. - Курск: ЦНТИ, 1997. - №141. - 4с.

2. Воробьева Н.В. Оптимизация способа выращивания стафилококков на жидкой синтетической среде / Н.В.Воробьева, А.А.Евглевский, Е.П.Евглевская, В.Н.Петрова // Повышение продуктивности, воспроизводительной способности, профилактика и лечение сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф., посвященной 25-летию факультета ветеринарной медицины КГСХА. - Курск: КГСХА, 1997. - С.14-17.

3. Воробьева Н.В. Влияние микробной обсемененности молока на заболеваемость коров маститами и телят диареей / Н.В.Воробьева, Е.П.Евглевская, А.А.Евглевский // Улучшение продуктивных качеств, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф. проф.-препод. состава и аспирантов... за 2001г., г. Курск, 4-7 марта 2002 г. - Курск: КГСХА, 2003. - С.32-33.

4. Воробьева Н.В. Способ лечения мастита кокковой этиологии / Н.В.Воробьева, Е.П.Евглевская, В.Н.Петрова. - Курск: ЦНТИД998. - №183.-2с.

5. Воробьева Н.В. Эффективность использования стрептококкового и стафилококкового анатоксинов при лечении специфических маститов в сравнении с традиционными методами лечения / Н.В.Воробьева, Е.П.Евглевская, В.Н.Петрова П Мат. 10 междунар.,межвуз. науч.-практ. конф. — СПб.: Санкт-Перетбургская академия, 1998. - С. 12-13.

6. Воробьева Н.В. Эффективность применения стафилококкового и стрептококкового анатоксинов при мастите у коров / Н.В.Воробьева, З.И.Федорова. - Курск: ЦНТИ, 2000. - № 139. - 2с.

7. Воробьева Н.В. Влияние применения стафилококкового и стрептококкового анатоксинов на содержание иммуноглобулинов в крови сухостойных коров, больных маститом кокковой этиологии / Н.В.Воробьева, А.А.Евглевский, О.А.Ляхова, В.Н.Петрова, Е.П.Евглсвская // Улучшение продуктивных качеств, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф. проф.-препод. состава и аспирантов... за 2001г., г. Курск, 4 -7 марта 2002 г. - Курск: КГСХА, 2003. - С.123-124.

8. Воробьева Н.В. Преодоление резистентности гнойно-септической инфекции / Н.В.Воробьева, З.И.Федорова, Е.П.Евглевская, А.Н.Лоторев, А.А.Евглевский // Улучшение продуктивных качеств, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф. проф.-препод. состава и аспирантов... за 2001г., г. Курск, 4-7 марта 2002 г. -Курск: КГСХА, 2003. - С.63-64.

9. Воробьева Н.В. Характеристика иммунной системы коров с разным клиническим статусом / Н.В.Воробьева, М.Г.Лебедева, А.А.Евглсвский, А.Ф.Лебедев // Улучшение продуктивных качеств, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф. проф.-препод. состава и аспирантов... за 2001г., г. Курск, 4 -7 марта 2002 г. - Курск: КГСХА, 2003. - С. 44-45.

10. Воробьева Н.В. Экспериментальные предпосылки применения активной иммунизации для повышения антиинфекционной резистентности при гнойно-септических заболеваниях / Н.В.Воробьева, А.А.Евглевский, М.Г.Лебедева // Улучшение продуктивных качеств, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных: мат. науч.-практ. конф. проф.-препод. состава и аспирантов... за 2001г., г. Курск, 4-7 марта 2002 г. - Курск: КГСХА, 2003. - С. 21-22.

11. Воробьева Н.В. Новое средство профилактики мастита в сухостойный период / Н.В.Воробьева // Повышение продуктивных качеств, улучшения профилактики и лечения животных: мат. Всероссийской науч.-практ. копф., г. Курск, 21-25 марта 2005 г. ч.1. - Курск: КГСХА, 2005. - С. 11-13.

12. Воробьева Н.В. Разработка сред для выращивания кишечной палочки и способ получения колибактериозного анатоксина / Н.В.Воробьева, С.КХПанькова // Повышение продуктивных качеств, улучшения профилактики и лечения животных: мат. Всероссийской науч.-практ. конф., г. Курск, 21-25 марта 2005 г. ч.1. - Курск: КГСХА, 2005. - С. 20-23.

13. Воробьева Н.В. Эпизоотологическая оценка микробной обсеменсн-ности секрета молочной железы коров в послеродовой период / Н.В.Воробьева, Е.П.Евглевская, А.А.Евглевский // Повышение продуктивных качеств, улучшения профилактики и лечения животных: мат. Всероссийской науч.-практ-. конф., г. Курск, 21-25 марта 2005 г. ч.1. - Курск: КГСХА, 2005. -С. 106-107.

14. Воробьева H.B. Достижения, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки в Курском НИИ агропромышленного производства / В.А.Демин, А.А.Евглевский, О.М.Швец, Н.В.Воробьева, С.НЛапиков // Достижения науки и техники АПК. - 2006. - № 10. - С. 14-15.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Пат. 2230571 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/085, 39/09. Способ лечения мастита у коров / Евглевская Е.П., Евглевский A.A., Воробьева Н.В., Галкин В.В.; заявитель и патентообладатель Курск, гос. сельхоз. акад. - № 2002114565/13; заявл. 03.06.02; опубл. 20.06.04, Бюл. №17(Ич.). -5с.: ил.

2. Пат. 2239422 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 31/00, А 61 Р 31/00. Способ профилактики мастита / Евглевский A.A., Воробьева Н.В., Евглевская Е.П., Евглевский Д.А.; заявитель и патентообладатель Курск, гос. сельхоз. акад. - № 2003108277/13; заявл. 25.03.03; опубл. 10.11.04., Бюл. №31(1 ч.).-5с.: ил.

Сдано в набор 07.11.2006 г. Подписано в печать 07.11.2006 г. Формат 60x84 1/16. Бумага Lomond. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 328.

Отпечатано: ПБОЮЛ Киселева О.В. ОГРН 304463202600213

Актуальность темы. Важнейшей ветеринарной проблемой являются маститы у коров, характеризующиеся повсеместным распространением, массовостью заболеваний и огромным экономическим ущербом. По данным Международной молочной федерации, маститом ежегодно болеет в среднем около 25% коров (Bardon В.Е., Ebeid А.В., 1990). При этом экономический ущерб, наносимый хозяйствам, складывается из снижения на 10-15% годового надоя, качества молока и производимых из него продуктов, преждевременной выбраковки животных и расходов на организацию и проведение про-тивомаститных мероприятий (Ивашура А.И., 1991; Карташова В.М., Ивашу-ра А.И.,1988). Следствием заболевания маститом является преждевременное прекращение эксплуатации коров, снижение молочной продуктивности, развитие желудочно-кишечных заболеваний у телят (Кузьмин Г.Н., Семенов С.Н., 1999; Трошин А.Н, 1996).

В этиологии воспалительных процессов в молочной железе, как правило, участвуют многочисленные представители условно-патогенной микрофлоры (Ивашура А.И., 1991; Париков В.А.1990; Петров В.А., Парахин А., 2002; Слободяник В.И., 1994 и др.), при доминирующей роли кокковой микрофлоры (Ивченко В.М., 1991; Карташова В.М., Касянчук В.В., 1993; Кузьмин Г.Н., 1995; Mattews K.R., Harmon R.I., Smith В.А.,1990; Watts I.L., 1985).

Бактериальная полиэтиологичность маститов существенно затрудняет внедрение в производство средств специфической профилактики.

Вплоть до последнего времени разработка мер профилактики и лечения мастита у коров основывалась на массовом применении средств химио- и ан-тибиотикотерапии (Слободяник В.И., 1994; Ходаков А.В., Ковальчук А.А., 1994; Юрков В.М., Демодов Л.Д., 1997; Craven N., 1987).

К сожалению, нерациональное и зачастую бессистемное применение антибиотиков и химиотерапевтических средств обусловило рост лекарственной резистентности условно-патогенных микроорганизмов (Зеньсин А.П.,

Войлошников Д.С., 2001; Логвинов Д.Д., 1979; Костромитинов Н.А, 2001; Париков В.А., 1990; Слободяник В.И., 1994; Цветков Е.И., Чумкин Н.В., 1979).

Более того, в последние годы отмечается рост вирулентности возбудителей гнойно-септических заболеваний. Вследствие этого проводить их эффективную химио- и антибиотикотерапию становится все труднее и труднее (ВОЗ, 1995). Все это обусловливает необходимость поиска и разработки препаратов с иным механизмом действия (Акатов В.Н., Париков В.А., 1970; Валковой И.И., Иноземцев В.П., 1993; Казеев Г.А., Старченкова А.В., 1994).

В последние годы для решения данной проблемы большое значение придается разработке и внедрению в производство экологически безопасных средств лечения и профилактики гнойно-септических заболеваний животных, в том числе и маститов у коров. Для этих целей широко испытываются про-биотики (Ивановский А.А., 1996; Платов А.В., 1985; Тараканов Б.В., 2000; Fuller R., 1989; Kalmokoff M.L., Teather R.M., 1997); препараты растительного происхождения (Гаммерман А.Ф., 1990; Завражнов В.И., Китаева Р.И., 1993; Ростовский А., 2000); препараты пчеловодства (Андреева А.В., Маннапова Р.Т., 2002; Иванов В.В., 1996; Соколовская Н.Н., 1992).

При разработке профилактики и лечения мастита у коров большое значение должно придаваться состоянию иммунной системы. Хорошо известно, что на фоне иммунодефицитов происходит активация жизнедеятельности условно-патогенной и патогенной микрофлоры, персистирующей в организме здоровых животных (Александров И.Д., 1993; Андреева H.JL, 1997; Воронин Е.С., Дервишов Д.А., 1989; Гугушвили Н.Н., 2003; Дранник Г.Н., Гриневич Ю.А., Дизик Г.М., 1994; Новиков О.Г., 2002; Слободяник В.И., Париков В.А., Сапожников Н.А. и др., 1995; Топурия Г.М., 2002; Ostensson К., 1993; Reth М., 1995).

Исходя из вышеизложенного вопросы поиска и разработки эффективных, экологически безопасных средств и методов профилактики и лечения воспалительных заболеваний молочной железы по-прежнему актуальны и востребованы производством.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящей работы являлась разработка и усовершенствование безантибиотиковых методов и средств профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период.

Для достижения этой цели, с учетом состояния изученности вопросов по теме диссертации были поставлены следующие основные задачи:

1. Выявить спектр основных бактериальных возбудителей мастита у коров в сухостойный период и изучить их биологические свойства;

2. Теоретически обосновать, экспериментально изучить, в производстве апробировать возможность применения низких концентраций формалина для профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период;

3. Теоретически обосновать, экспериментально изучить, в производстве апробировать возможность применения янтарного апистимулина для профилактики и лечения мастита у коров;

4. Определить экономическую эффективность новых подходов профилактики мастита у коров в сухостойный период.

Научная новизна. Впервые научно обосновано и экспериментально подтверждены новые перспективные направления в лечении и профилактике бактериального мастита у коров с применением низких концентраций формалина;

Впервые изучена эффективность применения янтарного апистимулина для лечения и профилактики мастита и нормализации нарушенных звеньев иммунитета у коров в сухостойный период.

Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований дополняют современные данные по вопросам этиологии, лечения и профилактики мастита у коров. Для усовершенствования лечебных мероприятий при воспалении вымени у коров предложены экономически выгодные, простые, эффективные и доступные способы профилактики и лечения мастита у коров в сухостойный период.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Видовой состав и биологические свойства основных возбудителей мастита у сухостойных коров.

2. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения низких концентраций формалина для обезвреживания условно-патогенной микрофлоры молочной железы при внутрицистернальном методе введения коровам в сухостойный период.

3. Теоретическое и экспериментальное применение янтарного аписти-мулина для профилактики мастита у коров в сухостойный период и ускорения процесса нормализации нарушенных звеньев иммунитета.

Апробация и публикация результатов исследований.

Материалы диссертационного исследования доложены и одобрены на ученом совете ГНУ Курского НИИ агропромышленного производства РАСХН (2005-2006 г.); на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава Курской ГСХА (2003-2004г.).

По материалам, представленным к защите диссертации опубликовано 14 научных работ; получено два патента на изобретение: «Способ профилактики мастита» № 2239422 от 10.11.04 и «Способ лечения мастита у коров» № 2230571 от 20.06.04.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, изложения результатов исследований с их обсуждением, выводов, списка используемой литературы. Работа изложена на 137 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 4 рисунка. Указатель используемой литературы включает 216 источников, в том числе 49 зарубежных авторов.

5.0. Выводы

1. В возникновении и развитии инфекционного процесса в молочной железе коров принимают участие различные ассоциации условно-патогенных микроорганизмов, при доминировании грамположительной кокковой флоры и E.coli.

2. Развитие воспалительного процесса в молочной железе у коров в сухостойный период проходит на фоне снижения функционирования клеточной и гуморальной систем иммунитета.

3. В опытах in vitro добавление к секрету молочной железы 0,3% формалина обеспечивает в течение часа полное обезвреживание микрофлоры и частично инактивацию их токсинов, что создает перспективу применения низких концентраций формалина для ускоренного формирования локального иммунитета при мастите.

4. Внутрицистернальное введение низких концентраций формалина не оказывает отрицательного влияния на клиническое состояние коров и обеспечивает быстрое подавление жизнедеятельности патогенной микрофлоры молочной железы, инактивацию их токсинов, полное клиническое выздоровление на 3-4 день.

5. Внутрицистернальное введение формолвакцины против сальмо-неллеза в объеме 2,0мл в здоровые и 5,0мл в инфицированные доли вымени сухостойным коровам обеспечивает в 2-3 раза снижение заболеваемости маститом в ранний послеродовой период при пятикратном росте титра специфических антител у новорожденных телят.

6. Внутрицистернальное введение янтарного апистимулина вызывает незначительный рост числа соматических клеток в здоровых долях вымени и выраженное бактерицидное действие на микрофлору пораженных маститом долей.

7. Внутрицистернальное введение янтарного апистимулина в объеме 5,0мл в каждую больную долю вымени сухостойным коровам обеспечивает на 90,0% снижение показателя заболеваемости клиническим маститом в ранний послеродовой период.

8. Двукратное с интервалом 15 дней внутримышечное введение янтарного апистимулина коровам в сухостойный период профилактирует риск развития иммунологического криза и снижает до 15% заболеваемость маститом в ранний послеродовой период.

6.0. Практические предложения

1. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать производству внутрицистернальный способ введения формолвакцины сухостойным коровам, обеспечивающий быстрое подавление жизнедеятельности условно-патогенной микрофлоры в молочной железе и высокие показатели специфического колострального иммунитета у новорожденных телят.

2. Для профилактики развития иммунологического криза и повышения устойчивости молочной железы сухостойных коров к действию условно-патогенной микрофлоры рекомендуем сочетать внутрицистернальное и внутримышечное применение янтарного апистимулина.