Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Лечебная и профилактическая эффективность и фармакологические свойства доксимаста при субклиническом мастите у коров

На правах рукописи

АЛИЕВ Аюб Юсупович

ЛЕЧЕБНАЯ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДОКСИМАСТА ПРИ СУБКЛИНИЧЕСКОМ МАСТИТЕ У КОРОВ

16 00 07 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных 16 00 04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж 2007

Работа выполнена на кафедре паразитологии, ветсанэкспертизы, акушерства и хирургии Дагестанской ГСХА, в отделах патологии молочной железы у коров, фармакологии и токсикологии Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии

Научные руководители заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Париков Виталий Александрович

заслуженный деятель науки РД, заслуженный ветврач РД, доктор ветеринарных наук, профессор Устарханов Пайзудин Джамалудинович

Официальные оппоненты заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Мисайлов Владимир Дмитриевич

кандидат ветеринарных наук, доцент Кочетов Иван Алексеевич

Ведущая организация ФГОУ ВПО Ставропольский

государственный аграрный университет

Защита состоится «15» ноября 2007 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220 010 05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки» (394087, г Воронеж, ул Мичурина, 1, тел (4732) 53-86-51)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки»

Автореферат разослан « » Р —V г^Р 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Хромова Л Г

1 .ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Среди многих болезней коров, обуславливающих снижение молочной продуктивности, качества молока и его технологических свойств, а также вызывающих расстройство воспроизводительной функции и преждевременную выбраковку особое место занимает воспаление молочной железы- мастит В течении года им переболевают от 20-25% до 60-70% животных От переболевших маститом коров недополучают до 15-20% годового удоя (Н В Притыкин, В И Михалев, В М Бирюков, Ю В Сергеев, 2005)

Наибольшую хозяйственно-экономическую проблему представляет субклинический (скрытый) мастит, котоый встречается в 4-7 раз чаще, чем клинически выраженный (А П Береснева, 1976, В И Слободяник, 1982, 1994, Н К Оксамитный, 1983) При однократном исследовании выявляется от 20 до 80% больных скрытым маститом лакирующих коров (Е В Копылова с соавт, 2002, В А Париков и др , 2005 и др )

0 распространении мастита в разные физиологические периоды у коров приводят данные как отечественные так и зарубежные авторы Во время запуска и сухостоя о заболеваемости маститом его терапии и профилактике сообщают (И И Архангельский с соавт, 1973, О А Симецкий, 1976, 1982, В И Рубцов, 1979, М Edmonds, 1979, Ю Н Полянцев, 1985, А Н Савостин, 1988, Р К Renau, 1983, Г В Зверева, В Н Олескив,1984, В А Париков с соавт, 2001, В К Понамарев, 2002)

В тоже время о распространении различных форм мастита у коров в различные физиологические периоды молочной железы и его этиологии в условиях хозяйств Республики Дагестан публикаций за последние 15 лет не имеется В годовых отчетах нет сведений о скрыто протекающем мастите

В настоящее время нет также единого мнения о дозах, кратности и сроках интрацистернального введения антимикробных средств с целью профилактики и лечения мастита у коров в периоде запуска и сухостоя (ИИ Архангельский, 1973, Е Висьневски, 1979, Н Г Гасанов, И Н Есин, 1980, Г Ф Коган, А Н Семенова, 1982, Э П Орлова, 1984, В М Морев, А П Береснева, А Р Корягина, 1984, Ю Н Полянцев, 1984, А Н Савостин, 1988, Н И Полянцев, 1997) Выпускаемые препараты для лечения и профилактики мастита все еще недостаточно эффективны

В связи с этим изыскание новых высокоэффективных научно обоснованных способов и лекарственных средств для профилактики и лечения мастита у коров является актуальной задачей ветеринарной науки

Учитывая изложенное, можно заключить, что профилактика и лечение мастита у коров в сухостойный период не достаточно разработаны и требуют совершенствования

1.2 Цель и задачи исследований Целью работы явилось изучение распространения мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан и разработка эффективного нового препарата для лечения и профилактики субклинического воспаления вымени в периоде сухостоя

Для проведения исследований были поставлены следующие задачи

1 Выяснить формы проявления и степень распространения мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан

2 Изучить заболеваемость коров маститом в периоде лактации, запуска, сухостоя и после родов

3 Разработать новый препарат доксимаст для лечения и профилактики мастита у коров в периоде сухостоя и изучить его влияние на организм и молочную железу лактирующих коров

4 Определить сроки нахождения 'активнодействующего вещества в молочной

железе коров находящихся в периоде сухостоя

5 Установить эффективность доксимаста для терапии и профилактики мастита у коров в сухостойном периоде

1.3 Научная новизна. В хозяйствах Республики Дагестан проведены диагностические исследования коров на субклинический мастит и установлена высокая заболеваемость их во все физиологические периоды молочной железы Разработана лекарственная форма нового более эффективного препарата доксимаст для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период, показана его высокая антимикробная активность, а также терапевтическая и профилактическая эффективность

1 4. Практическая значимость. Проведенными исследованиями выявлена высокая заболеваемость коров субклиническим маститом в хозяйствах республики Дагестан которые, послужили основанием для разработки и утверждения рекомендаций по диагностике, терапии и профилактике субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах республики Дагестан Разработан новый препарат доксимаст для лечения и профилактики мастита у коров в сухостойном периоде

1.5. Внедрение результатов исследований Материалы исследований вошли в «Рекомендации по диагностике, терапии и профилактики субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах республики Дагестан», утверждены и одобрены научно-техническим советом Департамента по ветеринарии при Минсельхозе Республики Дагестан (протокол №2 от 14 02 2007г)

1.6. Апробация работы Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены в годовых отчетах Дагестанской ГСХА и научно-практических конференциях академии 2005-2007гг, материалах республиканской научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения профессора Ивана Филипповича Заянчковского «Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных» Уфа, 2007, на Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию кафедры акушерства Ставропольского ГАУ «Актуальные проблемы ветеринарного акушерства, гинекологии и биотехники размножения животных», Ставрополь 2007, на первом съезде ветеринарных фармакологов России « Достижения ветеринарной науки -на вооружение практическому животноводству», Воронеж 2007

17. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 работы в центральной печати и рекомендации по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах Республики Дагестан

1.8. Объем и структура диссертации. Материал диссертации, изложен на 123 страницах компьютерного текста, включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения Список литературы включает 263 источника, в том числе 70 зарубежных авторов Диссертация иллюстрирована 31 таблицах и 3 рисунками

1.9 На защиту выносятся следующие положения.

1 Заболеваемость коров субклиническим масгитом в периоде лактации, запуска, сухостоя и после родов

2 Разработка и изучение нового препарата для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя

3 Терапевтическая и профилактическая эффективность нового препарата для лечения и профилактики мастита укоров в сухостойном периоде

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2004-2007 годах на кафедре паразитологии, ветсанэкспертизы, акушерства и хирургии Дагестанской ГСХА, в отделах патологии молочной жел'езьт «коровД^^УфЙрМкб^огии и токсикологии Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии

Распространенность и формы проявления мастита у коров в периоде запуска, после родов и во время лактации изучали путем сдаивания секрета молочной железы в молочно-контрольную пластинку МКП-2 с добавлением равного количества 2%-ного раствора мастидина Всех положительно реагирующих животных исследовали повторно с интервалом 48 часов для дифференциации раздражения вымени Сухостойных коров исследовали аналогично, но с добавлением 5%-ного раствора мастидина Всего было проверено 4079 коров Клиническое исследование животных проводили путем визуального осмотра, пальпации, обращали внимание на дыхание, руминацию, пульс, частоту сердечных сокращений и температуру тела

Более тщательному обследованию подвергали молочную железу проводили наружный осмотр, пальпацию и пробное сдаивание

От коров больных субклиническим маститом взято 65 проб секрета молочной железы для проведения бактериологических исследований с целью выявления видового состава микроорганизмов и определения их чувствительности к антибиотику доксициклин и другим антимикробным веществам, а также бактериостатической и бактерицидной активности доксимаста Бактериологические исследования нами проведены в Республиканской ветеринарной лаборатории в отделе бактериологических исследований методом высева секрета вымени по 0,1 мл на 5%-ный кровяной агар После 24-часов инкубации в термостате при 37° С учитывали характер роста микроорганизмов Для дифференциации стафилококков, микрококков и стрептококков применяли методику, предложенную сотрудниками института ВНИВИПФиТ (В А Париков, В И Слободяник, Г Н Кузьмин и др, 1981)

Антимикробную активность препарата изучали методом серийных разведений (В И Антонов, 1986) в отношении референтных и толевых штаммов микроорганизмов - основных возбудителей мастита, типированных по морфологическим, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам Минимальную бакгериостатическую концентрацию (МБсК) выявляли в мясопе! [тонном бульоне, минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) путем высева из пробирок с МПБ на плотные питательные среды Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 200 тыс рН мясопептонного агара и мясопептонного бульона составляла 7,2-7,6

Чувствительность стафилококков, стрептококков к доксициклину определяли с помощью приготовленных бумажных дисков

Изучение острой токсичности препарата проводили общепринятыми методами (М П Беленький, 1963, О Н Елизарова, 1971, ИВСаноцкий, 1970) Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (191 гол) и белых крысах с массой тела 200-225 г (132 гол ), разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии

Определение параметров токсичности препарата в остром опыте проведены при однократном внутрижелудочном и подкожном введении

Среднелетальную дозу - 1ЛЭ50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин ГФ, 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003» Величины 1Х>|6 и и)84 для белых мышей и белых крыс "определяли графически на основании

соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - 8Ш50 - аналитически и графически

Подострую токсичность препарата изучали на беспородных белых крысах обоего пола массой 100-110 г Препарат вводили ежедневно один раз в день в течение 14 суток

Раздражающее действие препарата на кожу изучали в опытах на кроликах, которым наносили препарат в чистом виде Площадь нанесения составляла 80-82 см2 (5% от общей поверхности тела животных)

Для изучения влияния препарата на конъюнктиву глаз кролика были проведены опыты на животных породы белый великан

Аллергенность препарата определяли с помощью кожнопровокационной пробы (О Л Алексеева, Л А Дуева, 1978) при накожной аппликации, реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб (С В Суворов, 1974)

Общее действие на организм животных изучали в опытах на кроликах при одно- и многократном подкожном введении препарата с учетом клинического состояния животных, гематологических, биохимических и иммунологических показателей

Кровь для проведения биохимических исследований у крыс получали из сердца у наркотизированных животных, а у коров из яремной вены, утром перед кормлением В качестве антикоагулянта использовали ЭДТА-Ма2 или гепарин

Опыт по установлению времени нахождения доксимаста в секрете молочной железы и в крови проведен на 17 коровах симментальской породы в сухостойный период Опытным коровам (15 гол) вводили доксимаст внутрицистернально однократно по 10 мл Две коровы служили контролем, им препарат не вводили

У коров опытной (по 3 гол) и контрольной групп брали секрет молочной железы и кровь для определения доксициклина гидрохлорида через 2, 4, 6, 8 недель после введения препарата Определение содержания доксициклина проводили методом диффузии в агар При проведении исследований руководствовались "Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства" № 3049-84 от 29 06 84

Подсчет соматических клеток в молоке проводили методом Прескотта и Брида Пробу отстаивания учитывали через 16-18 часов после выдержки пробирок с секретом в холодильнике при 4-8°С по В И Мутовину (1974),

Изучение влияния нового препарата на молочную железу лактирующих коров изучали на 3 клинически здоровых коровах на 3-5 месяце лактации

Через 3, 6, 12, 24, 48, 72 и 96 часов после интрацистернального введения препарата в дозе 10 мл определяли состояние опытных и контрольных четвертей вымени визуально и с помощью пальпации, а также исследовали внешний вид молока и секрета молочной железы, его цвет, залах, количество соматических клеток, пробу отстаивания, реакцию с 2%-ным раствором мастидина

Изучение терапевтической эффективности различных доз доксимста при субклиническом мастите у коров проводили на 40 больных коровах

Диагноз на мастит в период запуска ставили на основании клинического обследования животных и молочной железы, а также ее секрета с 2%-ным раствором мастидина и пробой отстаивания

Всех больных животных по принципу парных аналогов разделили на 2 группы Коровам первой группы (п=20) вводили препарат в дозе 5 мл внутривымянно в подогретом до 37°С, а второй группе (п=20) - 10 мл Перед введением соски вымени обрабатывали 70°С спиртом

Выздоровевшими считали тех коров, у которых при клиническом обследовании организма и молочной железы не обнаруживали признаки воспаления Была отрицательной реакция молозива с 2%-ным раствором мастидина Количество соматических клеток менее 500 тыс через 24 часа после

отела, при отрицательной пробе отстаивания

Установление оптимальных доз нового препарата для профилактики субклинического мастита проведено на 57 клинически здоровых животных, разделенных по принципу аналоговлна 3 группы,,которые в период лактации переболели маститом, но при исследовании молока в конце запуска реакция с 2%-ным раствором мастидина была отрицательной

Коровам первой группы (п=20) вводили препарат в дозе 10 мл интрацистернально в подогретом до 37°С виде, коровам второй группы (п=20) -5 мл , а коровам третьей группы (п=17) - 2,5 мл

Учет профилактической эффективности препарата проводили также в первые сутки после отела путем поставки реакции молозива с 2%-ным раствором мастидина и пробы отстаивания

Для широких производственных испытаний по изучению терапевтической эффективности нового препарата было подобрано 73 коровы, у которых в период запуска был диагностирован субклинический мастит Животных по принципу аналогов распределили на 3 группы

Коровам первой группы (п=28) вводили препарат интрацистернально в дозе 10 мл подогретый до 37°С, второй (п=30) вводили тетрамаст в дозе 10 мл подогретый до 37°С, а третьей группе (п=15) орбенин DC 3 мл

С целью изучения эффективности нового препарата для профилактики мастита у сухостойных коров переболевших в период лактации было подобрано 100 животных, разделенных по принципу аналогов на четыре группы Коровам первой группы (п=27) - вводили новый препарат в дозе 10 мл - второй (п=29) -тетрамаст в дозе 10 мл, третьей группе (п=15) - орбенин DC в дозе 3 мл, а четвертая группа (п=29) - препарат не вводили (отрицательной контроль)

Учет терапевтической и профилактической эффективности нового препарага доксимаста, в сравнении с тетрамастом и орбениномОС проводили в первые сутки после отела

Расчет экономической эффективности препаратов при лечении и профилактике мастита у коров в сухостойный период проводили в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» ( Ф Ф Белоусов, В А Чулков, 1984)

Статистическая обработка полученных данных проведена методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Г Ф Лакин, 1973, Е В Гублер,1978), а также с использованием прикладных программ «Statistica 5 0» и «Microsoft Excel» на PC «Pentium III»

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение и экономический ущерб от мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан

В Дагестане ведущей отраслью сельского хозяйства было и остается животноводство Оно составляет в среднем 65-80% прибыли от всех доходов хозяйств

В новых рыночных условиях увеличение объема валовой продукции животноводства будет осуществляться не за счет роста численности поголовья, а главным образом за счет повышения его продуктивности

Опыт развития сельского хозяйства свидетельствует о том, что исторически сложившееся направление молочного скотоводства является наиболее выгодным и целесообразным в хозяйствах Республики Дагестан Здесь создан уникальный генофонд таких молочно-мясных пород, как красная степная -66%, симментальская - 15% , кавказская бурая- 13% , щвицкая - 5,0% , черно-пестрая-1,0% Животные этих пород" отличаются высокой мясной и молочной

продуктивностью, лучше приспособлены к местным природно-климатическим условиям

Для выяснения распространения и форм проявления мастита у коров в хозяйствах республики нами были получены данные из комитета по ветеринарии, которые и приведены в таблице 1

Приведенные выше данные свидетельствуют только о клиническом мастите у лактирующих коров, поэтому мы изучили заболеваемость коров субклиническом маститом в периоде запуска, сухостоя, после родов и во время лактации в 6-ти хозяйствах

Не зависимо от физиологического состояния молочной железы скрытое воспаление ее встречается во все периоды

- лактация - 23,6%,

-запуск - 27,1%

- сухостой - 22,6%,

- после родов - 20,6%,

Общее состояние коров при субклиническом мастите находилось в пределах физиологической нормы, не отмечалось изменений внешнего вида молочной железы При пальпации ткань долей вымени, была упруго-эластичной и безболезненной

По общероссийской статистике (Бойко А В, Волкова М Н, 2004) недополучение молока по причине заболевания коров маститом составляет в среднем 10-15% от годового удоя В основном потери происходят во время болезни и в последующий период выздоровления, кроме того, у части коров из-за длительного лечения возникают необратимые изменения тканей молочной железы, вследствии чего резко снижается продуктивность

Хозяйства республики недополучали тысячи тонн молока, ухудшались его качество и технологические свойства

3.2.Разработка нового препарата доксимаст для терапии и профилактики

субклинического мастита у коров в период сухостоя Терапия и профилактика мастита в периоде сухостоя коров является наиболее рациональной по сравнению с периодом лактации В это время может достигаться не только санация молочной железы, но и лечение хронически протекающего мастита, который трудно излечим в период лактации

Профилактика и терапия мастита в периоде сухостоя является также и наиболее экономичной, так как не производится браковка молока, по причине наличия в нем ингибирующих веществ, что необходимо делать в период лактации после лечения мастита Поэтому в период сухостоя можно применить препараты, содержащие антибиотики и другие ингибирующие вещества на пролонгированной основе

Учитывая выше изложенное, нами совместно с сотрудниками отдела фармакологии и токсикологии, и отдела патологии молочной железы у коров Всероссийского НЙВИ патологии, фармакологии и терапии разработан новый препарат, содержащий активно действующее вещество доксициклин и основу, в которую в качестве пролонгатора включен алюминия стеарат

Заболеваемость коров маститом в хозяйствах Республики Дагестан

Таблица 1

№ п/п Формы проявления клинического мастита

Годя Количество корин Больных маститом серозный катаральный гно йио-катаралыл.ш фибринозный

коров % коров % коров % коров %

1 1999 379643 24050 7611 31,6 6357 26,5 6887 28,6 3195 133

2 20«) 362545 21184 7401 34,9 5540 26,2 5330 25,2 2909 13.8

3 2001 365753 19191 5350 27.8 4943 25,7 4895 25,5 4003 20,8

4 2002 371105 17553 5375 30.6 4547 25,9 5007 28,5 2624 1.5,0

5 2003 379990 18795 7214 38,4 4243 22,5 534) 28,5 1997 10,6

6 2004 37907! 19500 6993 35,8 5405 27,7 6113 3.1,4 989 5,1

7 2005 385424 18881 6657 35,2 4997 26,4 5382 28,6 1845 9,8

8 2006 390050 19373 6651 34,3 5(20 26,5 5782 29,8 1820 9,4

■

4

1

3.2 1 Антимикробное действие препарата доксимаст

При бактериологическом исследовании секрета молочной железы больных субклиническим маститом коров в периоде запуска в Республиканской ветеринарной лаборатории нами в 86,2% выделена различная микрофлора Наибольшее число проб секрета содержит золотистый стафилококк - 32,1%, эпидермальный стафилококк - 23,2%, сапрофитный стафилококк - 19,6%, агалактийный стрептококк - 17,9% и стрептококк вымени - 7,2%

Результаты определения чувствительности выделенных микроорганизмов к антибиотикам и другим антибактериальным средствам приведены в таблице 2

Таблица 2

Чувствительность микрофлоры, выделенной из секрета вымени больных субклиническим маститом коров, к антибактериальным средствам

№ п/п Антибактериальные средства Зона задержки роста

5(арЬ аигсий 81арЬ ерк!ег ткЬв $1арИ заргорЫ йсив эй- а§а1ас11е эй" иЬеш

1 геомицин 10,0±0,71 19,4*1,66 12,5*0,67 13,7*1,33 17,2*1,46

2 певомицитин 21,3*1,95 8,6*1,45 21,3*1,89 20,1*1,19 8,0*0,56

3 гтрептомицин ^6*0,21 15,7*1,07 12,6*0,73 7,1*0,67 19,4*0,73

4 гентамицин 21,6*1,80 19,9*1,43 25,2*2,09 7,9*0,71 12,0*1,46

5 шпицилин 18,6*1,35 24,6*2,43 8,9*0,71 11,7*0,54 13,8*0,78

6 канамицин 8,4*0,53 7,2*0,46 11,3*0,13 5,3*0,17 10,2*0,46

7 эритромицин 18,6*1,17 17,8*0,82 9,1*0,77 19,6*1,72 20,7*1,73

8 Ьуразолидон 21,8*1,47 20,2*1,87 20,8*1,74 10,1*1,53 19,7*1,47

9 тетрациклин 28,7*2,48 26,7*1,96 25,3*2,06 23,6*1,76 20,5*0,78

10 цоксициклин 30,2*2,91 27,3*2,30 24,9*2,17 28,7*2,29 29,3*2,77

11 анрофлоксоцин 18,6*1,73 16,7*0,62 20,6*1,73 13,4*0,96 20,1*1,19

12 1>уракрилин 22,6*0,96 21,6*1,82 17,6*1,17 20,5*1,83 20,8*1,97

13 эензилпенициллин 8,1±0,26 10,3*0,73 8,6*0,43 12,3*0,11 7,9*0,42

Приведенные в таблице данные свидетельствуют, что золотистый стафилококк и агалактийный стрептококк, являющиеся основными возбудителями мастита, более чувствительны к доксициклину, левомицитину и тетрациклину и малочувствительны к канамицину, бензилпенициллину и неомицину

Полученные нами данные о чувствительности микрофлоры к антибиотикам и другим антибактериальным препаратам свидетельствуют о том, что изолируемые из секрета молочной железы коров больных субклиническим маститом, микроорганизмы обладают наибольшей чувствительностью к доксициклину и тетрациклину

Изучение антимикробной активности нового препарата проведено на патогенных культурах микробов выделенных из секрета вымени больных маститом коров, а также на музейных штаммах

Данные по определению антимикробной активности приведены в таблице 3

Таблица 3

Антимикробная активность нового препарата доксимаст (мкг/мл)

№ п/п Культура микроба МБсК МБцК

1 ста<| шлококк золотистый-209 Р 7,8 7,8

2 ста< шлококк золотистый - 589 3,9 7,8

3 стрептококк агалактийный- 586 3,9 7,8

4 стрептококк агалактийный - 587 3,9 3,9

5 стрептококк гр Б-588 7,8 250,0

6 стрептококк гр 0-640 31,25 31,25

7 кишечная палочка -643 7,8 250,0

Как следует из таблицы 3 новый препарат доксимаст, содержащий в своем составе доксициклин, обладает широким спектром и высоким бактерицидным действием в отношении возбудителей мастита Так, доксимаст подавляет рост кокковой микрофлоры в концентрации 3,9-7,8 мкг/мл, более устойчивым оказался стрептококк группы V - 31,25 мкг/мл Бактерицидное действие в отношении стафилококка золотистого и стрептококка агалактийного препарат проявил в дозе лишь в два раза превышающей бактериостатическую Тогда как в отношении кишечной палочки и стрептококка группы Б бактерицидная концентрация составила 250 мкг/мл

3.2.2. Острая и подострая токсичность препарата доксимаст Определение параметров токсичности нового препарата в остром опыте при однократном внутрижелудочном и подкожном введении выполнили на двух видах лабораторных животных белых крысах и белых мышах Одновременно у этих животных изучили симптомы острого экспериментального отравления препаратом, содержащим доксициклин Павших животных и особей, перенесших отравление препаратом, подвергали патологоанатомическому вскрытию

В первой серии опытов препарат испытан при однократном внутрижелудочном введении, который вводили в дозах от 5000,0 до 30000,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения) Высшие дозы для белых мышей и белых крыс свыше 15000 мг/кг вводили в два приема, по половине дозы с интервалом 2 часа

Гибели животных при введении препарата в изученных дозах за весь период наблюдения за животными (14 дней) не отмечено

Среднелетальную дозу- ЬБ50 препарата, доксимаст при пероральном введении определить не удалось, так как при введении препарата в максимально возможных дозах 30000,0 мг/кг - белым мышам и белым крысам, не отмечалось гибели животных Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12 1 007-76)

Во второй серии опытов по изучению острой токсичности препарат вводили подкожно в объеме для белых мышей - 1,0 мл, для белых крыс - 5,0 мл

На основании результатов первичных токсикометрических исследований были получены данные позволившие определить параметры острой токсичности препарата при подкожном введении, которые представлены в таблице 4

Таблица 4

Параметры острой токсичности препарата для лабораторных животных при однократном подкожном введении (мг/кг)__

Вид животных Параметры токсичности 81£>50

МПД 1£>1б иэ84 ЬВюо

белые мыши 4000,0 6177,3 12706,1 (10600-14800) 19278,8 21500,0 ±1038,0

белые крысы 4500,0 8118,7 13841,9 (11900-15800) 19701,5 22000,0 ±968,0

Изучение подострой токсичности нового препарата проводили на 40 белых крысах самцах с массой тела 100-110 г при подкожном введении препарата в течении 14 дней

Проведенными исследованиями установлено, что многократное парентеральное применение нового препарата дозе 276,8 мг/кг массы тела (1/50 Ы)50, полученной при изучении острой токсичности), а также в дозе 692,1 мг/кг

массы тела и 1384,2 мг/кг массы тела (1/20 и 1/10 Ы)50 в остром опыте) не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных поведение, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения препарата, так и в течение недели после окончания его применения оставались в пределах нормы

Препарат не оказывает влияние на гематологические показатели животных Об этом свидетельствует отсутствие различий в содержании гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов, а также в лейкоцитарной формуле у крыс контрольной и опытной групп

При исследовании крови животных, получавших препарат в дозах 276,8 и 692,1 мг/кг массы тела, не отмечено достоверных изменений в биохимических показателях и показателях иммунного статуса по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы

При увеличении дозы препарата отмечалась устойчивая тенденция к более напряженному функционированию выделительной системы и печени

При 14-ти дневном применении препарата в дозе 1384,0 мг/кг массы тела (1/10 иЭ50 полученной при определении острой токсичности) у крыс достоверно возрастало содержание в сыворотке крови мочевины на 30,0%, креатинина - на 15,5%, активность АлАТ- на 27,1% Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы находилось в пределах нормы для данного вида животных С увеличением дозы препарата наблюдалось также достоверное возрастание бактерицидной активности на 20,1%

3.2.3. Раздражающее и аллергенное действие препарата доксимаст Опыты по изучению раздражающего действия на кожу тела проведены на крочиках с массой тела 2,2-2,4 кг Количество животных в опытных и контрольных группах составляло по 6 особей Исследуемый препарат наносили в «чистом» виде Площадь нанесения составляла для кроликов 80-82 см2 (5% от общей поверхности тела животных), однократного нанесения

Согласно полученным данным при однократной аппликации на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,020 до 0,10 г/см2 препарат на основе доксициклина не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков

Изучение действие доксимаста при многократном применении проводили путем нанесения его на правый, выстриженный и выбритый, участок опытных животных в течение 15 дней по 1 разу Контрольным животным на правую сторону наносили основу

Опыт показал, что длительное накожное применение основы и препарата не приводит к изменению контролируемых показателей Выстриженные и выбритые участки в период наблюдений у животных опытной группы заросли молодой шерстью, которая не отличалась по густоте от шерсти животных контрольной группы

Не установлено изменений поведения и аппетита животных Не отмечено различий температуры тела и живой массы в обеих группах кроликов Толщина складки выстриженной и выбритой кожи животных контрольной и опытной групп на протяжении 20-ти дневного срока наблюдения не отличалась

Опыты по изучению аллергенных свойств препарата проведены на белых беспородных крысах массой 200-220 г при накожном применении в чистом виде Препарат наносили на протяжении трех недель по 6 раз в неделю Первое тестирование путем нанесения препарата содержащего в своем составе доксициклин в дозе в 5 раз превышающую сенсибилизирующую

В эксперименте установлено, что 20-тикратная аппликация препарата не вызывает явлений сенсибилизации

3.2.4. Фармакокинетические параметры препарата доксимаст

Опыт проведен на 17 коровах симментальской породы в сухостойный период. Опытным коровам (15 гол.) внутрицистернально вводили однократно препарат, содержащий в своем составе доксициклин, по 10 мл. Две коровы служили контролем, им препарат не вводился.

У коров опытной (п =3.) и контрольной групп (п=3) брали секрет молочной железы и кровь для определения доксициклина гидрохлорида через 1; 2; 4; 6; 8 недель после введения препарата. Определение содержания доксициклина проводили микробиологическим методом диффузии в агар. При проведении исследований руководствовались "Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства" № 3049-84 от 29.06.84.

Однократное внутрицистернальное введение препарата на основе доксициклина в дозе 10 мл обеспечивает сохранение препарата в секрете молочной железы и соответственно в доле вымени в течение 6 недель (рис. 1). Содержание доксициклина в крови у коров через 1, 2, 4 и 6 недель составляло соответственно 4,12; 7,64; 3,75 и 0,72 мкг/мл (рис.2).

Рис. 1. Содержание доксициклина в секрете молочной железы

■в крови

Рис. 2. Содержание доксициклина в крови

1*4

Через 8 недель после введения препарата доксимаст в дозе 10 мл доксициклин не детектируются как в секрете молочной железы, так и в крови Таким образом, остаточные количества препарата не обнаруживаются через 8 недель после применения доксимаста

3.3.6. Изучение влияния нового препарата доксимаст на молочную железу и организм лактирующих коров Проведенными исследованиями в период 3-96 часов после интрацистернального введения нового препарата в дозе 10 мл 3 клинически здоровым коровам на 3-4 месяце лактации, не установлено заметных изменений со стороны общего состояния организма животных таблице 5

Таблица 5

Влияние доксимаста на показатели общего состояния организма коров

Сроки исследования, час Показатели

Т°С пульс дыхание руминация

до введения 37,9±0,06 76,0+0,78 15,7+0,20 4,7+0,20

3 38,7±0,06 74,3+0,98 17,0+0,40 4,7+0,20

6 37,9±0,08 74,7+1,37 16,0+0,78 4,3+0,20

12 38,0+0,04 75,0+1,37 16,7+0,20 4,0+0,00

24 38,0+0,19 75,0+0,98 15,7+0,78 4,3+0,20

48 37,9+0,06 75,6+1,17 16,3+0,40 4,7+0,20

72 37,8+0,04 71,3+2,40 18,0+0,40 4,3+0,20

96 37,7+0,06 76,3+0,98 17,0+0,78 4,3+0,20

Из приведенных в таблице данных следует, что температура тела, частота пульса, количество дыхательных движений, сокращение рубца оставались в пределах физиологической нормы Местная температура опытных симметричных четвертей молочной железы не повышалась Надвымянные лимфатические узлы по консистенции, подвижности и величине соответствовали исходным данным Кожа осталась эластичной, безболезненной

В период 3-48 часов после введения препарата в пробирке, при проведении пробы отстаивания, плазма молока и сливки из левых передних - опытных долей имели бледно желтоватые капельки на поверхности (примесь препарата) В дальнейшем выдаиваемое молоко из всех четвертей вымени было внешне нормальным по цвету, консистенции, запаху и однородности

Реакция секрета молочной железы из опытных долей с 2%-ным раствором мастидина в течение 48 часов была положительной Проба отстаивания во все периоды исследования была отрицательной

Количество соматических клеток (таблица 6) в секрете опытных долей вымени коров после введения доксимаста содержащим доксициклин, увеличивалось через 3 часа в 1,93 раза (с 206,3+19,4 тыс /мл до 399,7+33,9), через 6 ч - в 3,59, через 12 ч - в 7,9, через 24 ч - 9,11, через 48 ч - 3,41 раза и к 72 ч -приближается к исходному уровню (228,7+23,8 тыс /мл)

Установленное нами повышение количества соматических клеток после интрацистернального введения нового препарата свидетельствует о незначительном его раздражающем действии на молочную железу животных По данным R Miller (1977) вводимые внутривымено лекарственные средства, вызывающие незначительное раздражение тканей молочной железы, со сроком не более 96 часов, пригодны для интрацистернального введения при лечении коров, больных маститом

Таблица 6

Количество соматических клеток тыс/мл после интрацистернального введения нового препарата

Сроки исследования, час №1 №2 №3 В среднем

опыт (Л/П) контроль (п/п) опыт (Л/П) контроль (п/п) опыт (Л/П) КОНТрОЛ! (П/П) опыт (л/п) контроль (п/п)

до введения 184 219 156 187 279 309 206,3± 19,34 238 3± 27,4

3 293 351 472 212 434 373 399 7± 33 9 312 3± 36 8

6 760 564 813 471 654 522 742 3± 53 6 519 0± 26 2

12 1491 721 2129 564 1298 553 1639,3± 256 2 612,7± 74,3

24 1627 771 2245 809 1767 460 1879,6± 185 3 680,0± 29 3

48 906 485 583 601 626 530 704,6± 98,5 538,7± 20,7

72 310 329 249 261 127 343 228 7± 23,8 311 0± 14 3

Учитывая отсутствие отрицательного влияния на молочную железу, при интрацистернальном введении нового препарата, мы решили применить его для лечения и профилактики мастита у коров в сухостойный период

3.4. Изучение эффективности нового препарата доксимаст для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период Терапевтическую эффективность нового препарата при субклиническом мастите у коров изучили на 40 больных коровах Животных по принципу парных аналогов разделили на 2 группы Коровам первой группы (п=20) вводили препарат в дозе 5 мл интрацистернально в подогретом до 37°С виде, а второй - (п=20) в дозе 10 мл перед введением соски вымени обрабатывали 70°этиловым спиртом Препарат вводили после последней дойки коровам, уходящим в сухостой

Результаты терапевтической эффективности различных доз нового препарата при субклиническом мастите у коров приведены в таблице7

Таблица 7

Терапевтическая эффективность различных доз нового препарата при

субклиническом мастите у коров в сухостойный период

Дозы препарата Подвергнуто лечению Выздоровело Осталось больных

коров долей коров % долей % коров % долей %

5 мл 20 76 14 70,0 60 79,0 6 30,0 16 21,0

10мл 20 78 17 85,0 69 88,4 3 15,0 9 11,6

Препарат доксимаст в дозе 10 мл при однократном интрацистерналльном введении в конце запуска по сравнению дозой 5 мл оказывает наибольший терапевтический эффект Лечебная эффективность препарата в дозе 10 мл составила при субклиническом мастите 85,0%, что выше на 15,0% по сравнению с коровами первой группы При этом пораженность долей молочной железы субклиническим маститом снизилась на 9,4%

Отработка оптимальных доз препарата для профилактики субклинического мастита проведена на 57 клинически здоровых животных, разделенных по принципу аналогов на 3 группы, которые в период лактации переболели маститом, но при исследовании молока в конце запуска реакция с 2%-ным раствором мастидина была отрицательной

Коровам первой группы (п=20) вводили новый препарат в дозе 10 мл интрацистернально в подогретом до 37°С виде, а коровам второй группы - (п = 20) 5 мл, а коровам третьей группы (п = 17) в дозе 2,5 мл

Как следует из таблицы профилактическая эффективность доксимаста, введенного в дозе 10 мл, составляет 95,0% Эффективность препарата в дозе 5 мл на 15% ниже, а в дозе 2,5 мл на 24,5% ниже в сравнении с дозой 10 мл

Таблица 8

Эффективность различных доз доксимаста для профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период

Дозы препа -рата Подвергнуто обработке Выздоровело Осталось больных

коров долей коров % долей % коров % долей %

2,5мл 17 65 12 70,5 53 81,5 5 29,5 12 18,5

5мл 20 74 16 80,0 63 85,1 4 20,0 9 14,1

10мл 20 76 19 95,0 73 96,0 1 5,0 3 4,0

Таким образом доза 10 мл доксимаста является более оптимальной

3.4. Результаты производственных испытаний препарата доксимаст

Результаты изучения терапевтической эффективности препарата доксимаст в производственных условиях при субклиническом мастите у коров представлены в таблице 9

Из таблицы следует, что однократное внутрицистернальное введение нового препарата в конце запуска коровам, больным субклиническим маститом, способствует выздоровлению 85,7% животных и 83,6% долей молочной железы, в то время как после применения тетрамаста выздоровление наступает только у 73,3% животных и 76,0% долей молочной железы В результате применения орбенина ДС, выздоровление наступило у 93,3% коров и 95,2% долей молочной железы

Таблица9

Терапевтическая эффективность нового препарата при субклиническом мастите у коров

Препараты Количество Не заболело Заболело Атрофия

коров долей коров % долей % коров % долей % долей %

доксимаст 28 55 24 85,7 46 83,6 4 14,3 9 16,4 0 0

тетрамсат 30 71 22 73,3 54 76,0 8 26,7 17 24,0 0 0

эрбенин ДС 15 42 14 93,3 40 95,2 1 6,7 2 4,8 0 0

Таким образом, проведенные нами исследования в производственных условиях по лечению субклинического мастита в начале сухостойного периода показали, что новый противомаститный препарат на пролонгированной основе при однократном интрацистернальном введении превосходит терапевтическую эффективность тетрамаста на 12,7%, но уступает орбенину ДС в среднем на 7,6% Однако стоимость дозы, предлагаемого препарата в среднем в 4-5 раз дешевле орбенина ДС

Результаты производственных испытаний нового препарата для профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период представлены в таблице 10

Таблица 10

Профилактическая эффективность нового препарата при субклиническом мастите у коров в сухостойный период

Препараты Количество Не заболело маститом Заболело Атрофия

коров долей коров % долей % коров % долей % долей %

Доксимаст 27 97 25 92,5 92 94,8 2 7,5 5 5,2 0 0

Тетрамаст 29 109 24 82,7 98 89,9 5 17,3 11 10,1 0 0

Орбенин DC 15 57 14 93,3 55 96,4 1 6,7 2 3,6 0 0

Контроль 29 108 21 75,0 87 80,5 8 25,0 17 19,5 4 3,7

Как следует из таблицы 10 профилактическая эффективность нового препарата введенного во все доли вымени коров, переболевших в период лактации субклиническим маститом, составила 92,5%, что выше на 9,8% по сравнению с применением тетрамаста и на 17,5%, по сравнению к контрольной группой животных (без введения препаратов) и только на 0,8% уступает орбенину ДС

Таким образом, нами установлено, что введение препарата доксимаст в дозе 10 мл интрацистернально в начале сухостойного периода переболевшим маститом коровам в периоде лактации, во все доли экономически оправдано, так как обеспечивает достаточно высокую профилактику мастита в послеродовом периоде

Экономическая эффективность от применения доксимаста для терапии субклинического мастита на одну корову составляет 44,4 руб на 1 рубль затрат, а профилактическая - 54,6 руб на 1 рубль затрат

4. Выводы

1 Субклинический мастит у коров в хозяйствах республики Дагестан имеет широкое распространение во все периоды физиологического состояния молочной железы Он выявлен у 23,6% коров - во время лактации, 27,1%- во время запуска, 22,6% - сухостоя и 20,6% - послеродовом периоде

2 У коров больных субклиническим маститом в 86,2% выделена различная микрофлора в том числе Staph aureus - 32,1%, Staph epidermidis - 23,2%, Staph saprophiticus - 19,6%, Str agalactiae -17,9%, Str ubens-7,2%

3 Разработаный препарат доксимаст для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период содержит активнодействующее вещество доксициклин и основу включающую в качестве пролонгатора алюминия стеорат

4 Бактерицидное действие доксимаста в отношении основных возбудителей мастита золотистого стафилококка и агалактийного стрептококка составляет (3,97,8 мкг/мл)

5 Препарат оказывает умеренное раздражающее действие на молочную железу лактирующих коров, проходящее через 72 часа и относится к противомаститным препаратам с малой токсичностью LD50 при внутрижелудочном введении превышает ЗООООмг/кг, а при подкожном введении составляет 12706,1 мг/кг (4 класс токсичности)

6 Доксимаст после однократного интрацистернального введения в дозе 10 мл удерживается в молочной железе сухостойных коров в течении 42-50 дней, в бактерицидной концентрации

7 Терапевтическая эффективность препарата введенного в пораженные

субклиническим маститом доли молочной железы в дозе 10 мл в конце запуска (после последнего доения) составила- 85,7%, а профилактическая 92,5%

8 Экономическая эффективность применения нового препарата для терапии субклинического мастита на одну корову составляет 44,4 руб на 1 рубль затрат, а профилактическая - 54,6 руб на 1 рубль затрат

5. Практические предложения

1 В период запуска проводить исследования всех коров на заболеваемость субклиническим маститом

2 Для профилактики и терапии субклинического мастита у коров в периоде сухостоя вводить (после последнего доения) во все четыре доли вымени препарат доксимаст в дозе 10 мл

б.Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Алиев А.Ю. К ситуации по маститам в агрофирме «Дарада-Мурада» Гергебильского района/ А Ю Алиев // Сборник материалов региональной научно-практической конференции студентов, аспирантов, молодых ученных «Молодые ученные - АПК Республики Дагестан» посвящается 60- летаю победы в Великой Отечественной войне Махачкала 2005 С 176-177

2. Алиев А.Ю. К вопросу лечения и профилактики мсатитов коров в Дагестане/ А Ю Алиев, П Д Устарханов, В А Париков// Международная научно-практическая конференция, основные проблемы, тенденции и перспективы устойчивого развития сельскохозяйственного производства Юбилейная, посвященная 80-летию члена корреспондента РАСХН, Заслуженного деятеля науки РСФСР и РД, профессора М М Джамбулатова Махачкала 2006 С 53-54

3 Париков В А Антимикробная активность и раздражающее действие препарата для лечения и профилактики мастита у коров в сухостойный период /В А Париков, Н Т Климов, Г А Востраилова, Л Е Ефанова, А.Ю.Алиев// Материалы республиканской научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения профессора ИВАНА ФИЛИППОВИЧА ЗАЯНЧКОВСКОГО 8 февраля 2007 года Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных Уфа 2007 С 38-42

4 Париков BAO нозологии скрыто протекающих патологий в молочной железе коров/ В А Париков, Н Т Климов, Н В Притыкин, Д М Пониткин, А.Ю.Алиев, В И Зимников, А М Модин, А В Чурсин// Российский ветеринарный журнал Сельскохозяйственные животные Специальный выпуск май- 2007 -С 29

5 Алиев А.Ю Маститы коров в хозяйствах Республики Дагестан/ А Ю Алиев// Региональная научно-практическая конференция студентов, аспирантов и молодых ученных ЮФО, посвященная ФГОУ ВПО «Дагестанская ГСХА» Махачкала 2007 С 206-208

6 Шабунин С В Антимикробная активность и раздражающее действие нового препарата для терапии мастита у коров в период лактации/ С В Шабунин, Н Т Климов, Н В Притыкин, А В Чурсин, Г А Востроилова, Л И Ефанова, А М Модин, В И Зимников, А.Ю.Алиев// Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России 21-23 июня 2007 года Воронеж 2007 С 65654

7 Пониткин Д М Предупреждение мастита у коров - основа повышения продуктивности и качества молока/ Д М Пониткин, Н Т Климов, Н В Притыкин, А Ю Алиев, В И Зимников, А М Модин, А В Чурсин// Зоотехния №7 2007 С 2123

8. Алиев А.Ю Рекомендации по диагностике, терапии и профилактике субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах Республики Дагестан / А Ю'Алиев, 3 М Джамбулатов, П Д Устарханов Махачкала 2007

Формат 60x84'/16

Гарнитура Тайме. Печать офсетная. П. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 2103

отпечатано в типографии ООО «Формат», г. Воронеж, Московский пр-т, 36-а

Среди многих болезней коров, обусловливающих снижение молочной продуктивности, качества молока и его технологических свойств, а также вызывающих расстройство воспроизводительной функции и преждевременную выбраковку особое место занимает воспаление молочной железы - мастит. В течение года им переболевают от 20-25% до 60-70% животных. От переболевших маститом коров недополучают до 15-20% годового удоя (Н.В. Притыкин, В.И. Михалев, В.М. Бирюков, Ю.В. Сергеев, 2005).

Мастит коров широко распространен и представляет одну из сложных проблем в ветеринарии, так как его причины многообразны, терапия не всегда эффективна, профилактика сложна. Мастит крайне отрицательно влияет на продуктивность коров, их воспроизводительную функцию, состояние здоровья телят и качество молока.

Наибольшую хозяйственно-экономическую проблему представляет субклинический (скрытый) мастит, который встречается в 4-7 раз чаще, чем клинически выраженный (А.П. Береснева, 1976; В.И. Слободяник, 1982; 1994; Н.К. Оксамитный, 1982). При однократном исследовании выявляется от 20 до 80% больных скрытым маститом лактирующих коров (Е.В. Копылова с соавт., 2002; В.А. Париков и др., 2005 и др.). У коров переболевших маститом не только снижается их молочная продуктивность, но и ухудшаются санитарные и технологические свойства молока (А.П. Солдатов с соавт., 1986; И.С. Загаевский, 1986.).

Экономический ущерб усугубляется еще и тем, что в результате лечения больных маститом коров лекарственными препаратами увеличиваются сроки браковки молока, ограничивающие использование его для питания людей.

Молочная железа инфицируется, как правило, галактогенно- через сосковый канал особенно после доения, когда он в течении 1-2 часов остается открытым, а местная противомикробная защита оказывается сниженной (А.Г. Шахов, В.А. Париков, Н.В. Притыкин, В.И. Слободяник, 2005).

О распространении мастита в разные физиологические периоды у коров как отечественные так и зарубежные авторы приводят данные: во время запуска (И.И. Архангельский с соавт.,1973; О.А. Симецкий, 1979; В.И. Рубцов, 1979; А.П. Береснова, 1976; Ю.В. Велесте, 1980; О.А. Симецкий, 1982; Ю.А. Забелин, 1982; Ю.П. Полянцев, 1985; А.Н. Савостин, 1988; В. Шевкопляс, Н. Филиппов, А. Смеянов, 2000), в сухостойный период (В. Rindsig, с соавт., 1978; О.А. Симецкий, 1980; О.А. Симецкий, 1982; Н.М. Хилькевич, С.Х. Икаев, 1982; Р.К. Renau, 1983; В.М. Морев, А.П. Береснова, А.Р. Корягина, 1984; Г.В. Зверева, В.Н. Олескив,1984; Ю.Н. Полянцев, 1985), а также после родов (О.А. Симецкий, 1982; В.М. Морев, А.П. Береснова, А.Р. Корягина, 1984; Г.В. Зверева, В.Н. Олескив, 1984; Н.И. Полянцев, А.Н. Синявин, 1985; В.А. Париков с соавт., 2001; В.К. Понамарёв, 2002).

В то же время о распространении различных форм мастита у коров в различные физиологические периоды молочной железы и его этиологии в условиях хозяйств Республики Дагестан публикаций за последние 15 лет не имеются. В годовых отчетах за последние 8 лет т (1999 по 2006 гг.) нет сведений о скрыто протекающем мастите.

В настоящее время нет также единого мнения о дозах, кратности и сроках интрацистернального введения антимикробных средств с целью профилактики и лечения мастита у коров в периоде запуска и сухостоя (И.И. Архангельский, 1973; Е. Висьневски, 1979; Н.Г. Гасанов, И.Н. Есин, 1980; Г.Ф. Коган, А.Н. Семенова, 1982; Э.П. Орловой, 1982; В.М. Морев, А.П. Береснева, А.Р. Корягина, 1984; Ю. Н. Полянцев, 1985; А.Н. Савостин, 1988; Н.И. Полянцев, 1997). Выпускаемые препараты для лечения и профилактики мастита все еще недостаточно эффективны.

В связи с этим изыскание новых высокоэффективных научно обоснованных способов и лекарственных средств для профилактики и лечения мастита у коров является актуальной задачей ветеринарной науки.

Учитывая изложенное, можно заключить, что профилактика и лечение мастита у коров в период сухостоя не достаточно разработаны и требуют совершенствования.

1.1. Цель и задачи исследований

Целью работы явилось изучение распространения мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан и разработка эффективного нового препарата для лечения и профилактики субклинического воспаления вымени в периоде сухостоя.

Для проведения исследований были поставлены следующие задачи:

1. Выяснить формы проявления и степень распространения мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан.

2. Изучить заболеваемость коров маститом в периоде лактации, запуска, сухостоя и после родов.

3. Разработать новый препарат доксимаст для лечения и профилактики мастита у коров в периоде сухостоя и изучить его влияние на организм и молочную железу лактирующих коров.

4. Определить сроки нахождения активнодействующего вещества в молочной железе коров находящихся в сухостойном периоде.

5. Установить эффективность доксимаста для Терапии и профилактики мастита у коров в периоде сухостоя.

1.2. Научная новизна

В хозяйствах Республики Дагестан проведены диагностические исследованиями коров на субклинический мастит и установлена высокая заболеваемость их во все физиологически периоды молочной железы. Разработана лекарственная форма нового более эффективного препарата доксимаст для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период, показана его высокая антимикробная активность, а также терапевтическая и профилактическая эффективность.

1.3. Практическая значимость

Проведенными исследованиями выявлена высокая заболеваемость коров субклиническим маститом в хозяйствах Республики Дагестан, которые послужили основанием для разработки и утверждения рекомендаций по диагностике, терапии и профилактике субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах Республики Дагестан. Разработан новый препарат доксимаст для лечения и профилактики мастита у коров в сухостойный период.

1.4. Внедрение результатов исследований

Материалы исследований вошли в «Рекомендации по диагностике, терапии и профилактики субклинического мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах республики Дагестан», утверждены и одобрены научно-техническим советом Департамента по ветеринарии при Минсельхозе Республики Дагестан (протокол №2 от 14. 02. 2007г.).

1.5. Апробация работы

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены: годовых отчетах Дагестанской ГСХА и научно-практических конференциях академии 2005-2007гг.; материалы республиканской научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения профессора Ивана Филипповича Заянчковского «Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных». Уфа, 2007; на Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию кафедры акушерства Ставропольского ГАУ «Актуальные проблемы ветеринарного акушерства, гинекологии и биотехники размножения животных», Ставрополь. 2007; на первом съезде ветеринарных фармакологов России. «Достижения ветеринарной науки - на вооружение практическому животноводству», Воронеж. 2007.

1.6. Публикации

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 работы в центральной печати и рекомендации по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров в периоде запуска и сухостоя в хозяйствах Республики Дагестан.

1.7. Объем и структура диссертации

Материал диссертации, изложен на 123 страницах компьютерного текста, включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и список использованной литературы и приложения. Список литературы включает 263 источников, в том числе 70 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 31 таблицами и 3 рисунками.

5. Выводы

1. Субклинический мастит имеет широкое распространение во все периоды физиологического состояния молочной железы. Он выявлен у 23,6% коров - во время лактации; 27,1%- во время запуска; 22,6%> - сухостоя и 20,6% - послеродовом периоде.

2. У коров больных субклиническим маститом в 86,2% выделена различная микрофлора в том числе: Staph. Aureus -32, 1%; Staph. Epidermidis - 23, 2%; Staph. Saprophiticus - 19, 6%; Str. Agalactiae - 17, 9%; Str. Uberis -7, 2%.

3. Разработанный препарат доксимаст для лечения и профилактики субклинического мастита у коров в сухостойный период содержит активнодействующее вещество доксициклин и основу включающую в качестве пролонгатора алюминия стеорат.

4. Бактерицидное действие доксимаста в отношении основных возбудителей мастита золотистого стафилококка и агалактийного стрептококка составляет (3,9-7,8 мкг/мл).

5. Препарат оказывает умеренное раздражающее действие на молочную железу лактирующих коров, проходящее через 72 часа и относится к противомаститным препаратам с малой токсичностью. Его LDso при внутрижелудочном введении превышает 30000 мг/кг, а при подкожном введении составляет 12706,1 мг/кг. (4 класс токсичности).

6. Доксимаст после однократного интрацистернального введения в дозе 10 мл удерживается в молочной железе сухостойных коров в течении 42-50 дней, в бактерицидной концентрации.

7. Терапевтическая эффективность препарата введенного в пораженные субклиническим маститом доли молочной железы в дозе 10 мл в конце запуска (после последнего доения) составила - 85,7%, а профилактическая -92,5%.

8. Экономическая эффективность применения нового препарата для терапии субклинического мастита на одну корову составляет - 44,4 руб. на 1 рубль затрат, профилактическая - 54,4 руб. на 1 рубль затрат.

6. Практические предложения

1. В период запуска проводить исследования всех коров на заболеваемость субклиническим маститом.

2. Для профилактики и терапии субклинического мастита у коров в периоде сухостоя и после родов, в периоде запуска (после последнего доения) вводить во все четыре доли препарат пролонгированного действия в дозе 10 мл.

4. Заключение

Мастит - широко распространенное заболевание коров. Наибольшую хозяйственно-экономическую проблему представляет субклинический (скрытый) мастит, который встречается в 4-7 раз чаще, чем клинически выраженный (А. П. Береснева, 1976; В. И. Слободяник, 1982; 1994; Н. К. Оксамитный, 1982). При однократном исследовании выявляется от 20 до 80% больных скрытым маститом лактирующих коров (Е. В. Копылова с соавт., 2002; В. А. Париков и др., 2005 и др). У коров переболевших маститом не только снижается их молочная продуктивность, но и ухудшаются санитарные и технологические свойства молока (А. П. Солдатов с соавт., 1986; И. С. Загаевский, 1986).

Экономический ущерб усугубляется еще и тем, что в результате лечения больных маститом коров лекарственными препаратами увеличиваются сроки браковки молока, ограничивающие использование его для питания людей.

В тоже время о распространении различных форм мастита у коров и его этиологии в условиях хозяйств Республики Дагестан публикаций за последние 15 лет не имеются.

Экспериментальные исследования, клинические наблюдения и статистические данные свидетельствуют о существенном распространении мастита у коров в хозяйствах Республики Дагестан.

В годовых отчетах за последние 8 лет с 1999 по 2006гг нет сведений о скрыто протекающем мастите. Ветеринарные специалисты хозяйств и работники районных и городских ветеринарных станций и управлений как бы исключают данную форму мастита. Незная о последствиях и о наносимом экономическом ущербе от данной патологии.

Проведенные исследования во все физиологические периоды молочной железы у коров свидетельствуют о высокой степени распространения субклинически протекающего и клинически выраженного воспаления вымени во все периоды физиологического состояния молочной железы:

- лактация -29,6% - субклинический - 23,6% - клинический - 6,0%

- запуск - 31,4% - субклинический - 27,1 % - клинический - 4,9%

- сухостой - 29,4% - субклинический - 22,6% - клинический - 6,8%

-после родов - 27,2% - субклинический - 20,6% - клинический - 6,6%

Полученные нами данные о заболеваемости коров маститом согласуются с данными В. А. Парикова, 1990; и Г. И. Сергеева, 1992, Которые регистрировали субклиническое течение воспаления в 3-6 раз чаще, чем клинически выраженный.

По общероссийской статистике (Бойко А. В., Волкова М. Н.,2004) недополучение молока по причине заболевания коров маститами составляет в среднем 10-15% от годового удоя. В основном потери происходят во время болезни и в последующий период выздоровления, кроме того, у части коров возникают необратимые изменения ткани молочной железы, следствием чего резко снижается продуктивность.

Профилактика и терапия мастита в периоде сухостоя являются экономически выгодными, так как не производится браковка молока, по причине наличия в нем ингибирующих веществ. Поэтому в периоде сухостоя можно применять препараты, содержащие антибиотики и другие ингибирующие вещества на пролонгированной основе.

По данным большинства исследователей в период перестройки тканей молочной железы более эффективно действует антимикробный препарат. В этот период можно достичь санацию молочной железы и излечение хронически протекающего мастита, который практически не излечим в периоде лактации.

Бактериологические исследования секрета вымени коров в хозяйствах Республики Дагестан свидетельствуют о доминирующей роли в качестве основных возбудителей мастита у коров стафилококков (74,9%) по сравнению с стрептококками (24,1%).

Все выделенные возбудители мастита у коров оказались чувствительными к доксициклину, входящему в новый препарат.

Преимуществом доксициклина, по сравнению с другими препаратами этой группы, является его повышенная растворимость в жирах, вследствие чего он быстрее и равномернее всасывается, обладает выраженным тропизмом в отношении репродуктивных органов.

Проведенными исследованиями на лабораторных животных установлено, что доксимаст по степени токсичности относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества) обладает, умерено раздражающим действием, но не оказывает влияния на гематологические и биохимические показатели крови животных, по сравнению с показателями крови животных контрольной группы.

Доксимаст не оказывает аллергенного действия. 20-ти кратная аппликация препарата не вызывает явлений сенсибилизации.

Новый препарат доксимаст при интрацистернальном введении оказывает кратковременное раздражающее действие на молочную железу коров выражается в повышении количества соматических клеток в секрете вымени проходящее к 72 часам и может использоваться для внутрицистернального введения с целью лечения и профилактики мастита у коров в периоде запуска и сухостоя. По данным R. Miller (1977) вводимые внутривымено лекарственные средства, вызывающие незначительное раздражение тканей молочной железы, со сроком не более 96 часов, пригодны для интрацистернального введения при лечении коров, больных маститом.

Однократное внутрицистернальное введение препарата на основе доксициклина в дозе 10 мл обеспечивает сохранение препарата в секрете молочной железы и соответственно в доле вымени в течении 6 недель. Содержание доксициклина в крови у коров через 1, 2, 4, и 6 недель составляло соответственно 4,12; 7,64; 3,75 и 0,72 мкг/мл.

Исследования по лечению субклинического мастита в начале сухостойного периода показали, что новый противомаститный препарат на пролонгированной основе при однократном введении превосходит по своей терапевтической эффективности тетрамаст на 12,7%, но уступает орбенину ДС в среднем на 7,6%. Однако стоимость дозы препарата «доксимаст» предположительно будет в 4-5 раз дешевле орбенина ДС.

Экономическая эффективность от применения доксимаста для терапии субклинического мастита на одну корову составляет - 44,4 руб. на 1 рубль затрат, а профилактическая - 54,6 руб. на 1 рубль затрат.