Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
- Ученая степень
- кандидата ветеринарных наук
- ВАК РФ
- 16.00.03
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
ВАЗИР ЯСЕР
Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного
рогатого скота
16.00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
□□3171532
003171532
ВАЗИР ЯСЕР
Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного
рогатого скота
16.00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ)
Научный руководитель доктор ветеринарных наук, профессор,
Заслуженный работник высшей школы РФ, Лауреат премии правительства РФ Белоусова Раиса Васильевна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук
Соколова Надежда Львовна; доктор ветеринарных наук, профессор, Лауреат Государственной премии РФ Сухарев Олег Иванович.
Ведущая организация, государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИТИБП).
Защита состоится «до » 2008 г. в /о часов на засе-
дании диссертационного совета Д 220 042.01 в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И. Скрябина» (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23), тел (495) 377-93-83.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ.
Автореферат разослан ц » 2008 года
Ученый секретарь
диссертационного совета, профессор
Т.Н. Грязнева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Аденовирусная инфекция и вирусная диарея крупного огатого скота (ВД КРС) - широко распространены в странах с развитым живот-оводством и занимают одно из ведущих мест в патологии респираторного и же-удочно-кишечного тракта новорожденных телят По данным отчетности научно-етодической лаборатории в России в 60-100 % случаев при заболеваниях телят с имптомами диареи, выделяют аденовирус, ВД или их ассоциацию (Сюрин В Н ДР 1998)
Величина экономического ущерба при аденовирусной инфекции и ВД РС, складывающаяся из падежа телят, снижения мясной и молочной продук-ивности, выбраковки животных, абортов, бесплодия и т д, огромна, а тера-евтические меры борьбы с уже возникшим заболеванием малоэффективны оэтому в комплексе противоэпизоотических мероприятий при этих инфек-иях ведущее место занимает специфическая профилактика
В арсенале биологической промышленности имеется большое количество репаратов, предназначенных для специфической профилактики респираторных желудочно- кишечных заболеваний телят, которые широко используются в ве-финарной практике Массовое применение иммунобиологических средств за-,иты животных требует особого контроля на всех этапах их изготовления, про-зводства и использования. Особенно это касается ассоциированных препаратов, оскольку их конструирование из различных антигенов является сложной зада-ей и предполагает получение вакцины, обладающей высокими антигенными и шмуногенными свойствами по каждому из компонентов.
В последние годы значительно увеличился интерес к проблеме иммунокоррек-ии, что связано с ухудшением экологической ситуации и воздействием неблаго-риятных факторов на организм животных Кроме того, интерес к иммуномодуля->рам со стороны практикующих ветеринарных врачей обусловлен возрастающей отребностью в высокоэффективных средствах профилактики вирусных инфекций
В настоящее время в распоряжении ветеринарных специалистов имеются моно-I поливалентные вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи РС, однако на отечественном рынке ветеринарных препаратов отсутствуют ассо-
циированные вакцинные препараты против указанных инфекций Поэтому разработка отечественных препаратов против указанных инфекций является своевременным и актуальным.
Цель и задачи исследований.
Целью исследований являлась разработка ассоциированной инактивиро-ванной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1 Оптимизировать условия культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи КРС с получением инфекционной активности не ниже Ю60ЦТД5</мл
2 Отработать оптимальные условия инактивации полученных вирусов
3 Получить концентрированные вирусные антигены и изучить их антигенную активность
4 Изготовить экспериментальные серии моно- и ассоциированных вакцин и определить антигенные свойства на разных видах животных
5 Испытывать ассоциированную вакцину на естественно восприимчивых животных
6 Исследовать влияние иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины.
Научная новизна работы
Впервые разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Предложена модифицированная методика получения очищенных и концентрированных препаратов аденовирусов и вируса вирусной диареи КРС, пригодных для создания вакцин
Дано научное обоснование и показана эффективность применения иммуномодуляторов и ассоциированной инакгивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
Практическая значимость работы. Результаты исследований вошли в нормативную техническую документацию' временная инструкция по изготов-
лению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактиви-рованной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота, технические условия изготовления и контроля вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; наставление по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований механизмов и закономерностей формирования поствакцинального противовирусного иммунитета у КРС и могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза инфекций, вызываемых аденовирусами и вирусом вирусной диареи КРС
Полученные результаты используются в учебном процессе по дисциплине «Молекулярная биология вирусов» для студентов 4 и 5 курсов ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ
Апробация работы. Результаты работы доложены на международной научной практической конференции молодых ученых ВНИиТИБП, (Щелково, 2004), 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2006), конференции по актуальным проблемам инфекционной патологии и иммунологии животных (Москва, 2006), конференции «Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии» (Москва, 2006)
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных статей, в т.ч 8 статей в сборниках научных трудов, 3 статьи - в научных журналах, рекомендованные ВАК РФ
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 145 страницах и содержит следующие разделы введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, приложения Список использованной литературы включает 297 источников, из которых 198 - иностранных авторов Работа иллюстрирована 14 рисунками и 17 таблицами
Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно В выполнении отдельных этапов, связанных с культивированием, очисткой и концентрированием вирусов, принимали участие к б н доцент И.В Третьякова, к.б н Т П Лобова, д б н., профессор Е И Лрыгина, за что автор приносит им благодарность
Основные положения и результаты, выносимые на защиту.
- технология очистки и концентрирования вирусов аденовирусной инфекции и ВД КРС;
- условия приготовления экспериментальных серий моно- и ассоциированных вакцин и результаты изучения их антигенных свойств на разных видах животных;
- схема введения ассоциированной вакцины,
- результаты исследований по оценке влияния иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины
СОТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена в период с 2004 по 2008 гг. на кафедре ветеринарной
вирусологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ
Материалы и методы исследований
В работе использованы аденовирус, штамм Bovin-10 и вирус вирусной диареи КРС, штамм Origon с инфекционными титрами 10625 ЦТД50/мл и 107'75 ЦТД50/мл, соответственно
Культуры клеток почки теленка Таурус-1 (Т-1) и коронарных сосудов сердца теленка (КСТ) получали на кафедре ветеринарной вирусологии МГАВМиБ им К И Скрябина Культуры клеток Т-1 и КСТ заражали аденовирусом и вирусом ВД КРС в дозах 0,1 и 0,03 ЦТД50/клетку, соответственно Вирусы титровали микро- и макрометодами на соответствующих культурах клеток.
Для концентрирования вирусов использовали полиэтиленгликоль с молекулярной массой 6000 Дальтон (ПЭГ-6000), гексаметафосфат натри ГМФ-Na
Для инактивации вирусных антигенов применяли формалин 40 %, а в качестве адъюванта использовали гидроокись алюминия
Полноту инактивации вирусов оценивали путем проведения трех слепых пассажей на соответствующей культуре клеток
Экспериментальные образцы биопрепаратов проверяли на стерильность и без-
6
вредность общепринятыми методами
В качестве иммуномодуляторов в работе использовали. 0,4% раствор фоспре-нила и 0,2% раствор гликопина
Изучение антигенной активности вакцин проводили на 206 белых крысах, 46 кроликах, 12 козах и 20 телятах.
Определение титра антител в сыворотке крови животных проводили в реакциях нейтрализации (РН), непрямой гемагглютинации (РНГА) и диффузионной преципитации (РДП)
Математическую обработку результатов проводили с использованием персонального компьютера и пакета прикладных программ Microsoft Developer Studio Для аппроксимации результатов вычислений применяли математический метод наименьших квадратов. Достоверность результатов оценивали по методу Стьюдента-Фишера.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Отработка культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи с инфекционными титрами не ниже 106 0 ТЦДя/мл.
В предварительных опытах было установлено, что в высоких титрах (10625
ТЦЦ50/Мл) аденовирус стабильно накапливается в культуре клеток Т-1 через 72
часа после заражения при дозе 0,1 ТЦД50 на клетку, а вирус ВД КРС (10775
ТЦД5о/мл) в культуре клеток КСТ через 48 часов при дозе 0,03 ТЦД50 на клетку
Очистка и концентрирование аденовируса КРС и вируса вирусной диареи КРС.
Для концентрирования в 10 раз вирусных антигенов методом осаждения использовали ПЭГ - 6000 в различных концентрациях (6, 8, 10 и 12 %), а при изо-фокусировании - раствор гексаметафосфата натрия (ГМФ-Na) с разными значениями pH (3,5, 4,4,5,5, 5,5)
Установлено, что оптимальная конечная концентрация ПЭГ 6000 для концентрирования аденовируса КРС составила - 10 %, а вируса ВД КРС - 8 %, при этих концентрациях потеря инфекционной активности была минимальной (10,09 % и 10,87 %, соответственно), при этом, очистка от балластных белков была максимальной и составляла 73,26 % и 85,49 %, соответственно При концентрировании аденовируса и вируса ВД КРС изофокусированием с помощью ГМФ-Na установили, что значения pH для аденовируса, равное 4,5, а для ви-
руса ВД КРС - 4,0, являются оптимальными (потеря инфекционности 20,57 % и 20,57%, а степень очистки составила 69,76 и 82,85 %, соответственно) Антигенную активность культуральных и концентрированных препаратов аденовируса и вируса вирусной диареи КРС определяли в конкурентном варианте ИФА со специфическими гипериммунными сыворотками КРС. Планшеты сенсибилизировали аффинно - очищенным антигеном аденовируса или вируса ВД КРС В результате проведения конкурентного ИФА показано, что концентрирование аденовируса и вируса ВД КРС методом изофокусирования позволяет получать вирусные препараты с наименьшей потерей антигенной активности в сравнении с методом концентрирования с помощью ПЭГ-6000.
Отработка оптимальных условий инактивации аденовируса и вируса вирусной диареи КРС.
В качестве инактиванта вирусов использовали 40%-ный раствор формалина в
конечной концентрации 0,1%, 0,2 % и 0,3 % Полноту инактивации оценивали на соответствующих культурах клеток путем проведения трех слепых пассажей
Результаты проведенных пассажей позволили сделать заключение, что для инактивации образцов аденовируса и вируса ВД КРС концентрация формалина 0,1 % недостаточна При применении в качестве инактиванта формалина в концентрации 0,2 % и 0,3 % достигалась полная инактивация, в культурах клеток на протяжении трех пассажей не было зарегистрировано цитопатиче-ского действия вирусов.
Антигенную активность инактивированных вакцинных препаратов определяли на 35 белых крысах Кровь для исследования получали на 30 день после иммунизации.
Титр нейтрализующих антител к аденовирусу при концентрации формалина 0,3 % был меньше, чем при концентрации 0,2 % на 0,24 log2, а разница титров антител в РНГА составила 0,2 log2 Титр антител к аденовирусу снижался после проведения инактивации на 1,5 log2 в РН, на 2,2 log2 в РНГА. Разница в титре антител к вирусу ВД КРС при использовании формалина в конечной концентрации, равной 0,3 % и 0,2 %, была незначительна, и составила в РН 0,13 log2 Титр антител к вирусу ВД КРС после инактивации формалином снижался на 1,5 log2B РН, на 2,0 log2 в РНГА
Таким образом, результаты определения антигенной активности инакти-
8
вированных препаратов указывают на то, что концентрация формалина практически не влияла на уровень антител к аденовирусу и к вирусу ВД КРС, что позволило в дальнейшем для приготовления вакцинных препаратов использовать наименьшую концентрацию формалина, равную 0,2 %
Изготовление экспериментальных серий моно- и ассоциированных вакцин и сравнение их свойств на разных видах животных.
Вирусы концентрировали двумя методами 1) осаждением с помощью по-
лиэтиленгликоля и 2) изофокусированием с помощью гексаметафосфата натрия (ГМФ-Na)
При получении вирусной суспензии разделяли ее на 3 части Первую часть оставляли для приготовления культуральной вакцины, вторую концентрировали в 5 раз осаждением с помощью полиэтиленгликоля Третью часть концентрировали в 5 раз методом изофокусирования т к известно, что эффективным адъювантом для одноименных моновакцин является гидрат окиси алюминия, для приготовления вакцин добавляли его в установленной оптимальной концентрации,равной 1,3 %
Таким образом, были получены шесть образцов экспериментальных моновакцин три вакцины против аденовирусной инфекции КРС - культуральная и концентрированные ПЭГ-6000 и ГМФ-Na, и 3 вакцины против вирусной диареи
Антигенную активность экспериментальных серий вакцин оценивали на 60 белых крысах Животным вводили культуральные вакцины в дозе 1,0 мл, а образцы концентрированных вакцинных препаратов в 3-х дозах 0,1,0,2 и 0,5 мл.
Установлено, что антигенная активность культуральной вакцины против аденовирусной инфекции КРС в дозе 1,0 мл оказалась выше, чем у препаратов, сконцентрированных ПЭГ и ГМФ-Na и примененных в дозе 0,2 мл (титр антител к указанным препаратам составил в РН 10,0; 8,38 и 9,01 log2, соответственно) Титр поствакцинальных антител к концентрированным ПЭГ препаратам при дозе 0,1 и 0,2 мл составил в РН 9,07 и 8,38 log2, соответственно
Титр вируснейтрализующих антител при использовании концентрированной ГМФ-Na вакцины достиг значения 9,17 и 9,01 log2 при дозах введения 0,1 и 0,2 мл соответственно
При введении концентрированных ПЭГ-6000 или ГМФ-Na вакцин в дозе
0,5 мл титр антител у животных соответствующих групп был ниже на 1,74 log2
9
и на 0,55 1о£2, чем в контрольной группе, в которой животным вводили куль-туральную вакцину Различия в антигенной активности культуральной вакцины против ВД КРС и концентрированных с помощью ПЭГ и ГМФ-Ш вакцин, примененных в дозе 0,2 мл, также незначительны на 0,7-0,9 при концентрировании ПЭГ и на 0,4-1,5 log2, при концентрировании ГМФ-Ыа
Было установлено, что антигенная активность концентрированных вакцин практически не зависела от способа концентрирования вирусных антигенов
Таким образом, культуральные вакцины, введенные в дозе 1,0 мл, и концентрированные моновакцины против аденовирусной инфекции и ВД КРС в дозе 0,1, 0,2 и 0,5 мл обладали высокой антигенной активностью при введении крысам
При применении концентрированной ПЭГ или ГМФ-Ыа вакцины в дозе 0,1 мл титры антител в РН были достаточно высоки, как к аденовирусу (9,07 и 9,17 так и к вирусу ВД КРС (8,07 и 7,92 1о§2), но незначительно отличались от титров при введении препаратов в дозах 0,2 и 0,5 мл р (> 0,05)
По результатам проведенных исследований сделано заключение о целесообразности применения на крысах ассоциированной концентрированной вакцины в дозе 0,1 мл, тк она с точки зрения эффективности и экономичности является наиболее оптимальной
При выборе способа концентрирования вакцинных препаратов были учтены следующие показатели сохранность антигенной активности концентрированных препаратов; технологичность в применении; экономичность, а также тот факт, что ПЭГ применяется на биофабриках для очистки и концентрирования вирусов при производстве различных вакцин, а ГМФ-Ыа лучше использовать в процессе приготовления диагностических препаратов Поэтому в дальнейшей работе для очистки и концентрирования вирусов в процессе конструирования вакцин мы использовали полиэтиленгликоль
На следующем этапе работы изучали антигенную активность инактивиро-ванной ассоциированной культуральной вакцины против вирусной диареи и аденовирусной инфекции КРС. Для этого образцы моновакцин объединяли в соотношении 1 1 Антигенную активность ассоциированных и монопрепаратов определяли на 25 белых крысах. Животным вводили моновакцины в дозах 1,0 мл, а ассоциированную вакцину в дозах 1,0 или 2,0 мл Сыворотку крови
исследовали в РН, РНГА и РДП, а также определяли относительное количество В- и Т-лимфоцитов в реакции розеткообразования
Титры антител к аденовирусу и вирусу ВД КРС при введении ассоциированной вакцины в дозе 2,0 мл составили 9,45 log2H 9,65 log2 в РН, 10,2 и 10,0 Iog2, в РНГА, соответственно, а при введении моновакцин - 8,9 log2 и 9,3 Iog2 в РН и 9,2 и 10,0 log2 в РНГА, соответственно
Следовательно, антигенная активность ассоциированной культуральной вакцины по отношению к аденовирусу и вирусу вирусной диареи КРС в дозе 2,0 мл и моновакцин указанных вирусов в дозе введения 1,0 мл достоверно не различалась (р > 0,05)
Однако, сокращение дозы введения ассоциированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС до 1,0 мл значительно снижает ее антигенную активность (на 4,26 log2 в РН и 4,4 log2 в РНГА к аденовирусу и 4,5 log2 в РН и 4,4 log2 в РНГА к ВД КРС) (р < 0,01)
Экспериментальная ассоциированная вакцина стимулировала также и клеточный иммунитет, что подтверждается увеличением относительного количества Т- и В-лимфоцитов у животных опытной группы после введения препарата по сравнению с контрольными группами, животным которых вводили плацебо (на 15,92 % для Т-лимфоцитов и на 2,66 % для В-лимфоцитов)(р <0,01)
Концентрированные ПЭГ образцы моновакцины против аденовирусной инфекции и ВД КРС объединяли в соотношении 1 1. Антигенную активность микросерий вакцины оценивали на 16 крысах Животным вводили культу-ральную ассоциированную вакцину в дозе 2 мл, а концентрированную ассоциированную вакцину в дозах 0,2 и 0,4 мл
Титр вируснейтрализующих антител к аденовирусу и вирусу ВД КРС при доза введения концентрированного препарата - 0,2 мл, был соответственно ниже на 1,J4 log2 и 0,62 log2 по сравнению с группой, где крыс иммунизировали культуральной ассоциированной вакциной в дозе 2,0 мл При дозе введения 0,4 мл титр антител з РН к аденовирусу и вирусу ВД КРС снижался На 0,79 и 0,91 log2, соответственно.
Таким образом, концентрированная ассоциированная вакцина против аденовирусной инфекции и ВД КРС обладает высокой антигенной активностью
и ее использование в практике предпочтительнее по сравнению с культураль ной вакциной, поскольку позволяет уменьшить дозу введения без потери ан тигенной активности (р > 0,05)
Культурапъные и концентрированные ассоциированные вакцины испытали н козах. Животным вводили культуральную вакцину в дозе 5,0 мл, а концентриро ванные вакцины по 1,0 мл Кровь получали на 15 и 30 день после вакцинации
Наиболее высокий титр антител к аденовирусу был, достигну! при исполь зовании вакцины, полученной из культуральных вирусов, его значения на 3 день составили 8,0 log2 в РН и 8,5 log2 в РНГА. При применении концентриро ванных препаратов титры антител были ниже и составили 7,39 log2 в РН и 8, logî, в РНГА
Титр антител к вирусу вирусной диареи КРС также был максимален ripi введении культуральной вакцины по сравнению с концентрированной вакци ной значения титров составили в РН 9,04 и в РНГА 10,0
Несмотря на тот факт, что при использовании концентрированной вакци ны уровни специфических поствакцинальных антител были ниже на один log по сравнению с применением культуральной вакцины, мы рекомендуем при менять именно концентрированную вакцину, т к в процессе концентрирова ния в препарате было значительно уменьшено содержание культуральны белков, что позволило снизить риск проявления аллергических реакций поел вакцинации, а также в 5-10 раз уменьшить дозу препарата.
Оптимизация схемы введения ассоциированной вакцины. На следую щем этапе работы оценивали антигенную активность ассоциированных куль туральной и концентрированной вакцин против аденовирусной инфекции вирусной диареи КРС на телятах при введении различных доз препаратов Животных иммунизировали в дозах 10 мл культуральной вакциной и концен трированными препаратами в дозах 3,2, 1 мл Кровь получали на 0, 15, 30; 10 и 240 день после иммунизации
Наивысший уровень антител к аденовирусу в РН после однократного введет культуральной вакцины отмечали на 15-й день (6,63 log2) по сравнению с концен трированной в дозах 3,0,2,0 и 1,0 мл (6,13, 5,88 и 4,9 log2, соответственно) К виру су ВД КРС уровень поствакцинальных антител гакже достигал максимума поел введения культуральной вакцины (8,5 log2,).
— культу ралыш вакцина по 10 мл —и— концентрированная по 3 мл -к— концентрированная по 2мл —X— концентрированная по 1 мл
Рис. 1. Титр нейтрализующих антител в сыворотке крови телят к аденовирусу КРС
Титры антител после применения концентрированных препаратов в дозах 3,0, 2,0 и 1,0 мл составил 6,88, 7,25, 6,0 log2, соответственно. На 30-й день уровни поствакцинальных антител повысились и достигали в РН значений. 9,63, 9,25; 9,13 и 8,25 log2 к аденовирусу, а к вирусу ВД КРС - 11,0, 10,38; 10,12 и 8,5 Iog2 (при применении культуральной вакцины и концентрированной в дозах 3,0, 2,0 и 1,0 мл
культуральная вакцина по 10 мл —■—концентрированная по 3 мл концентрированная по 2мл X концентрированная по 1 мл
Рис. 2. Титр нейтрализующих антител в сыворотке крови телят к вирусу ВД КРС
Титры антител оставались на достаточно высоком уровне и через 105 дней от начала вакцинации и составляли в РН от 7,3 до 8,5 log2 к аденовирусу и от 6,6 до 7,1 log2 к вирусу ВД КРС, и в РНГА от 8,5 до 9,0 log2 к аденовирусу и от 7,7 log2 и до 8,2 log2 к вирусу ВД КРС
Поствакцинальные антитела сохранялись на высоком уровне спустя 8 месяцев от вакцинации, к 240-му дню, титр нейтрализующих антител к аденовирусу составлял 6,50 1о§2 при введении ассоциированной культуральной вакцины и 8,5, 7,38 и 7,5 1о§2 при введении концентрированной вакцины в дозах 3,0; 2,0 и 1,0 мл, соответственно Разница в титре нейтрализующих антител к аденовирусу при введении ассоциированной культуральной вакцины и концентрированной в дозе 1,0 мл была не достоверной (р >0,05) Титр нейтрализующих антител к вирусу ВД КРС составлял 5,63, 5,40, 5,15 и 5,22 1о§2, соответственно Также титры антител к вирусу ВД КРС при введении культуральной и концентрированной вакцин в разных дозах достоверно не отличались (р >0,05).
Динамику антител, индуцированных экспериментальной ассоциированной концентрированной вакциной, изучали на 5 кроликах, которым препарат водили в дозе 0,4 мл, кровь получали до вакцинации и в различные сроки до 420-
Дней
Рис. 3. Титр поствакцинальных антител в сыворотке крови кроликов к аденовирусу и вирусу диареи КРС
Таким образом, ассоциированная инактивированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС вызывает синтез нейтрализующих антител в высоких титрах, которые в течение длительного времени пер-систируют в организме лабораторных животных
Влияние иммуномодуляторов на активность экспериментальных moho- и ассоциированных вакцин.
Влияние иммуномодуляторов (фоспренил и гликопин) на антигенную активность культуральных моновакцин против аденовирусной инфекции и ВД КРС
14
изучали в опытах на 70 крысах Животным вводили культуральную вакцину против аденовирусной инфекции КРС, а также культуральную вакцину против ВД КРС Фоспренил (ФП) в дозе 0,05 мг и гликопин (ГП) в дозе 0,03 мг вводили крысам соответствующих групп, однократно с первой иммунизацией
При введении вакцины против аденовирусной инфекции без иммуномоду-лятора относительное количество Т- и B-лимфоцитов составляло 53,36 и 11,6 %, соответственно Применение фоспренила одновременно с вакциной приводило к повышению относительного количества Т- и B-лимфоцитов на 4,44 и 4,14 %, а при применении гликопина- на 4,52 и 4,00 %, соответственно.
Применение фоспренила и гликопина с вакциной против ВД КРС способствовало увеличению относительного количества Т-лимфоцитов на 6,54 % и 7,02 % и B-лимфоцитов на 4,40 % и 4,58 %, соответственно
Использование иммуномодуляторов с моновакцинами против ВД КРС и аденовирусной инфекции практически не оказывало влияния на уровень специфических антител
Таким образом, применение иммуномодуляторов фоспренила и гликопина с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС практически не оказывало влияния на уровень специфических антител (р > 0,05), но активизировало факторы клеточного иммунитета
Испытание культуральной ассоциированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС с иммуномодуляторами провели на 42 кроликах Фоспренил в дозе 0,2 мг/кг и гликопин в дозах 0,12 мг/кг и 0,25 мг/кг, вводили одновременно с вакциной
Анализ полученных данных (см табл) показал, что на 14 день после иммунизации титр антител к аденовирусу увеличивался, но не более чем на 0,5 1о& по сравнению с контролем, и снижался к вирусу ВД КРС в переделах от 0,3 до ,77 log2 На 14 день после ревакцинации регистрировали повышение уровня антител у всех животных к аденовирусу и вирусу вирусной диареи в переделах 0,48 - 1,54 log2 и 0,1 - 0,77 log2, соответственно
При одновременном использовании с вакциной иммуномодуляторов наблюдается тенденция к повышению у кроликов уровней антител к обоим вирусам При однократном введении фоспренила титр антител увеличился на 0,98 logj к аденови-
русу (р > 0,05) и 0,471о& к вирусу ВД КРС (р > 0,05). Гликопин в дозе 0,12 мг/кг при двукратном введении вызывал увеличение титра антител на 0,88 к аденовирусу и на 0,77 1о& к вирусу ВД КРС (р > 0,05).
Титр антител в сыворотке крови кроликов, иммунизированных ассоциированной культуральной вакциной против аденовирусной инфекции и ВД КРС с использованием иммуномодуляторов фоспренила и гликопина
№ п/п Вводимые препараты титры нейтрализующих антител в 1о§2 (М ± ш)
перед вакцинацией перед ревакцинацией (на 14 день) через 14 дней после ревакцинации
аденовирус ВД аденовирус ВД аденовирус ВД
1 Вакцина <1,0 <1,0 6,06± 0,61 7,0± 0,52 7,23± 0,94 7,92± 0,94
2 Вакцина + ФП 0,2 мг/кг (однократно) <1,0 <1,0 6,25± 0,80 6,4± 0,52 8,21± 0,8 8,59± 0,36
3 Вакцина + ФП 0,2 мг/кг (двукратно) <1,0 <1,0 6,5 9± 0,87 5,83± 0,76 8,42± 0,13 7,82± 0,28
4 Вакцина+ ГП 0,12 мг/кг (однократно) <1,0 <1,0 6,46± 0,55 6,72± 0,56 7,71± 0,50 8,42± 0,65
5 Вакцина+ ГП 0,12 мг/кг (двукратно) <1,0 <1,0 6,2± 0,34 6,67± 0,31 8,16± 0,71 8,69± 0,56
6 Вакцина + ГП 0,25 мг/кг (однократно) <1,0 <1,0 6,59± 0,64 6,17± 0,28 8,77± 0,50 8,11± 0,42
7 Плацебо <1,0 <1,0 <1,0 <1,0 <1,0 <1,0
Примечания: ФП - фоспренил; ГП - гликопин При изучении влияния иммуномодуляторов на относительное количество Ти В-лимфоцитов установлено, что наибольшее увеличение относительного количества Т-лимфоцитов отмечено у кроликов, иммунизированных ассоциированной вакциной с ГП в дозе 0,12 мг/кг двукратно (на 5, 56 %) или дозе 0,25 мг/кг однократно (на 5,98 %) (р <0,01) Двукратное видение фоспренила повышало относительное количество Т- и В-лимфоцитов на 5,52 % (р <0,01)
У животных контрольной группы, которых вакцинировали без иммуномодуляторов, повышение относительного количества Т- и В-лимфоцитов было значительно ниже (0,76 % и 1,88 %, соответственно)
Таким образом, совместное введение ассоциированной культуральной вак-
цины с ФП или ГП достоверно увеличивает их количество Т-лимфоцитов на 2,33-6,52 % и B-лимфоцитов на 1,38-3,0 Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение иммуномодуляторов фоспренила и гликопина совместно с ассоциированной инактивированной культуральной вакциной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС стимулирует как клеточный, так и гуморальный иммунитет
ВЫВОДЫ
1. Разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота В опытах на лабораторных животных и телятах препарат оказался безвредным, обладая выраженной антигенной активностью, которая сохранялась 14 месяцев (срок наблюдения)
2 Аденовирус первого серотипа (шт Bovine-10) и вирус диареи КРС (шт Origon) в перевиваемых культурах клеток почки теленка и коронарных сосудов теленка вызывают цитопатический эффект и репродуцируются стабильно с инфекционным титром 106,25 ЦТД50/мл и 107'75 ЦТДя/мл, соответственно
3 Формалин в конечной концентрации, равной 0,2%, является универсальным инактивантом для аденовируса и вируса вирусной диареи КРС при экспозиции 72 часа и температуре 37 °С; с концентрацией адъюванта (гидроокись алюминия) -1,3 %.
4. Способ концентрирования аденовируса и вируса вирусной диареи КРС ПЭГ с молекулярной массой 6000 в конечной концентрации, равной 10,0 % и 8,0 %, соответственно, является унифицированным, оптимальным для получения вирусов с высокой антигенной активностью
5 Наличие двух компонентов (в соотношении 1 1) в ассоциированной вакцине не снижает ее антигенную активность в отношении аденовируса и вируса диареи КРС.
6 Концентрированные моно - и ассоциированная вакцины индуцировали синтез нейтрализующих антител к аденовирусу и вирусу вирусной диареи КРС у лабораторных животных в высоком титре от 9 5 log2 до 10 0 Iog2> которые сохранялись на уровне не ниже 5,0 log2 до 420 дней (срок наблюдения)
7 Установлена оптимальная доза ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины для естественно восприимчивых животных, которая соста-
вила 1,0 мл, что в 10,0 раз меньше по сравнению с ассоциированной культуральной вакциной. При этом сохранялась высокая активность вакцинного препарата
8 Двукратное введение ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины телятам в дозе 1,0 мл стимулирует синтез высокого уровня антител к аденовирусу и вирусу ВД КРС (8,25 и 8,5 в РН и 8,75; 9,0 1о& в РИГА, соответственно), и их сохранение в течение 8 месяцев в титрах 6,17, 5,22 1о§2 в РН и 7,5, 5,75 в РНГА, соответственно
9. Иммуномодуляторы фоспренил в дозе 0,2 мкг/кг и гликопин в дозе 0,12 мкг/кг при однократном введении с ассоциированной вакциной оказывают влияние на факторы клеточного и гуморального иммунитета относительное количество Т- и В-лимфоцитов увеличивается в среднем на 7,0 % и 3,0 % , соответственно, при этом титр нейтрализующих антител повышается в среднем на 2,0
10 Сочетанное применение ассоциированной инактивированной вакцины с иммуномодуляторами, повышает антигенную активность вакцинных препаратов против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ Разработан проект нормативной документации на вакцины 1. Временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
2 Технические условия ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
3. Инструкция по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Результаты исследований используются в учебном процесс в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Ветеринарная вирусология»
РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ 1 После проведения широкомасштабных испытаний ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС рекомендуется для применения в скотоводстве.
2 Полученные результаты по очистке и концентрированию вирусов рекомендуются для использования в высших учебных заведениях по курсу дисциплин «Вирусология, Молекулярная биология вирусов и Биотехнология» СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Распространение респираторно-кишечных инфекций в условиях республики Таджикистан /3 Д. Курбонбекова, М Косумбеков, Я Вазир, Р В Бело-усова и др //Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Сб науч тр ВНИТИБП -Щелково ВНИиТИБП -2004 -С 143-147
2 Влияние иммукомодуляторов на антигенную активность вакцины против аденовирусной инфекции крупного рогатого скота /Я Вазир, М.В Третьякова, Т П Лобова, и др //Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов Сб науч тр ВНИТИБП. - Щелково: ВНИиТИБП - 2004 -С 147-151
3. Выделение и идентификация вирусов парагриппа-3 и вирусной диареи от молодняка крупного и мелкого рогатого скота с респираторно-кишечной патологией /3 Д Курбонбекова, Я Вазир, И В. Третьякова и др //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии Сб науч тр МГАВМиБ - М-МГАВМиБ.- 2006 - С 103-110
4 Изучение антигенной активности моновалентной и бивалентной вакцины против аденовирусной вирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота /Я. Вазир, 3 Д. Курбонбекова, И.В. Третьякова и др //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии- Сб научтр МГАВМиБ - М МГАВМиБ-2006-С 100-103
5 Снижение заболеваемости, повышение сохранности и привесов животных и птицы при применении Фоспренила - стимулятора естественной резистентности и иммунитета /А В Деева, М Л Зайцева, Г Г Мехдиханов, Т П. Лобова, И В. Третьякова., П А Ростроса, Я Вазир и др //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии Сб науч тр. МГАВМиБ - М: МГАВМиБ - 2006.- С. 95-99.
6. Эпизоотическая ситуация среди молодняка крупного и мелкого рогатого скота с респираторно-кишечной патологией в Центральных районах Таджикистана /ЗД Курбонбекова, Г Бобоев, Я. Вазир и др. //Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных- Сб. науч тр ВИЭВ-М ВИЭВ - 2006,- С 84-87
7. Полипренилфосфаты растительного происхождения подавляют накопление белков вируса инфекционного ринотрахеита и аденовируса крупного рогатого скота в чувствительной культуре клеток /С В Ожерелков, Т Н. Кожевникова, Р С Годунов, Я. Вазир и др. //Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных Сб науч тр. ВИЭВ - М ВИ-ЭВ - 2006 - С 643-647
8 Влияние иммуномодуляторов на антигенную активность моновалент ных вакцин против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС /Я Ва зир, И В. Третьякова, Г И Устинова и др //Материалы 3-й конференции п учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГО ВПО МГАВМиБ - 2006 - часть 1 - С 230-233
9. Циркуляция вирусов парагриппа-3, вирусной диареи и хламидии у рога того скота с респираторно-кишечной патологией в центральных районах Таджи кистана /3 Д Курбонбекова, Я Вазир, Т П Лобова и др //Международный науч но-практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветери нарии «Ветеринарнаяпатология» -2007. -№ 1 (20) -С 137-139
10 Испытание бивалентной вакцины против аденовирусной инфекции ^ вирусной диареи крупного рогатого скота на кроликах с использованием имму номодуляторов/Я Вазир, Р В Белоусова, Г И Устинова и др //Международны! научно-практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ве теринарии «Ветеринарная патология». - 2007. - № 3 (22) - С. 199-202
11 Антигенные свойства экспериментальной ассоциированной вакцин против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота /Я Вазир, И В Третьякова, Е И Ярыгина и др //Ветеринария - 2008 - № 4 - С 23-26.
Оглавление диссертации Вазир Ясер :: 2008 :: Москва
Список условных обозначений и сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Вирусная диарея крупного рогатого скота.
1.1.1. Таксономическое положение и основные биологические свойства вируса вирусной диареи крупного рогатого скота.
1.1.2. Структурная характеристика вируса вирусной диареи крупного рогатого скота.
1.2. Аденовирусная инфекция КРС.
1.2.1. Общая характеристика аденовирусов.
1.2.2.Сведения об аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.
1.2.3. Структурная характеристика аденовириона, структура вирусного нуклиокапсида.
1.2.4. Основные структурные белки аденовириона.
1.2.5. Антигенная структура белков.аденовирусов.
1.3.К линико-эпизоото логические особенности и патогенез вирусной диареи КРС.
1.4. Клинико-эпизоотологические особенности и патогенез аденовирусной инфекции КРС.
1.5. Специфическая профилактика ВД КРС.
1.6. Специфическая профилактика аденовирусной инфекции КРС.
1.7.Иммуномодуляторы, их природа и иммуномодулирующий эффект.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы и методы и исследования.
2.2гРезультаты исследований.• ■ —
2.2.1. Отработка культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи с инфекционными титрами не ниже 10б'°ТЦД5о/мл.
2.2.2. Очистка и концентрирование аденовируса КРС и вируса вирусной диареи КРС.
2.2.3. Отработка оптимальных условий инактивации полученных вирусов.
2.2.4. Изготовление экспериментальных серий моно- и ассоциированных вакцин и сравнение их свойств на разных видах животных.
2.2.5. Оптимизация схемы введения ассоциированной вакцины.
2.2.6.Влияние срока хранения на антигенную активность ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
2.2.7.Исследование влияния иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4. ВЫВОДЫ.
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Вазир Ясер, автореферат
Актуальность проблемы. На протяжении многих лет животноводство всех стран мира, в том числе и России, несёт значительные экономические потери от респираторных и желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят. В основе сложившейся неблагоприятной ситуации лежит целый ряд неспецифических предрасполагающих факторов, среди которых наиболее важными являются содержание большого поголовья скота на ограниченном пространстве, механизация методов содержания и кормления, что ведет за собой ограничение двигательной активности у животных, возникновение стрессов, усложнение микробного и вирусного пейзажа в хозайствах и комплексах, снижеиие иммунитета. В этих условиях, особенно при нарушении санитарно-гигиенических норм, несвоевременной выпойки молозива телятам, а также при отсутствии на станциях исскуственного осеменения должного контроля за возможной контаминацией спермы вирусами, нередко возникают и очень быстро распространяются инфекционные заболевания, в том числе вирусной природы.
Аденовирусная инфекция и вирусная диарея крупного рогатого скота широко распространены во всем мире, в том числе и в России. Их возбудители занимают одно из ведущих мест в патологии респираторного и желудочно-кишечного тракта новорожденных телят. По данным отчетности последних годов по России, в 60-100% случаев при заболеваниях телят диареей, выделяют аденовирус и вирус ВД или их ассоциацию (Сюрин В. Н. и др 1998).
Величина экономического ущерба при этих заболеваниях, складывающаяся из падежа телят, снижения мясной и молочной продуктивности, уменьшения привесов, выбраковки животных, убытка от абортов, бесплодия и.т.д., огромна, а терапевтические меры борьбы с уже возникшим заболеванием малоэффективны. Поэтому в комплексе противоэпизоотиче-ских мер борьбы с аденовирусной инфекцией и вирусной диареей КРС специфическая профилактика является ведущей.
В арсенале биологической промышленности во всем мире имеется большое количество препаратов, предназначенных для специфической профилактики респираторных и кишечных заболеваний телят, которые широко используются в ветеринарной практике Массовое применение иммунобиологических средств защиты животных требует особого контроля на всех этапах их изготовления, производства и использования. Особенно это касается ассоциированных препаратов, поскольку их конструирование из различных антигенов является сложной задачей и подразумевает получение вакцины, обладающей высокими иммуногенными свойствами по каждому из компонентов.
В связи с этим изучение противоэпизоотической эффективности и иммуногенных свойств вакцинных препаратов, включающее количественное определение уровня специфических антител у животных, их динамику, а также влияние иммунизации на заболеваемость и сохранность поголовья, является главным практическим критерием оценки вакцин против вирусных инфекций телят, и, в конечном итоге, подтверждает или опровергает целесообразность их применения.
В последние годы значительно возрос интерес к проблеме иммуно-корекции, что связано с усилением экологического неблагополучия и возрастающей нагрузкой на организм животных Кроме того, интерес к имму-номодуляторам со стороны практикующих ветеринарных врачей обусловлен возрастающей потребностью в высокоэффективных средствах профилактики вирусных инфекций
Вирусная диарея крупного рогатого скота заболевание КРС, преимущественно молодых животных, характеризующееся широким спектром клинических проявлений, способное протекать в различных формах, как в острой с летальным исходом, так и латентной — вызывая у животного се-роконверсию без каких- либо клинических проявлений. Возбудителем данного заболевания является вирус вирусной диареи КРС, который относится к роду pestivirus семейство Flaviviridae. В настоявшее время компанией НАРВАК выпускается ассоциированная вакцина инактивированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 и лептоспироза крупного рогатого скота, а также сотрудникам института экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского (Белоруссия) разработаны ассоциированная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота; ассоциированная инактивированная культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-и коронави-русной инфекций крупного рогатого скота.
Аденовирусная инфекция, зарегистрированная преимущественно у молодняка крупного рогатого скота характеризуется острым течением и поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитом. В 1982 г была разработана моновакцина против аденовирусной инфекции КРС и бивакцина, содержащая аденовирус и возбудитель пастереллеза, в которых были использованы в качестве инактиванта - димерэтиленимин, и адъю-ванта - аэросил (Сюрин В.Н., Литвинов О.Б., Белоусова Р.В).
Установлено, что вирус ВД КРС и аденовирусы являются иммуноде-прессантами и способствуют развитию вторичной инфекции.
В настоящее время в распоряжении ветеринарных специалистов имеются моно- и поливалентные вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС, однако на отечественном рынке ветеринарных препаратов отсутствуют ассоциированные вакцинные препараты против указанных инфекций. Поэтому разработка отечественных препаратов против указанных инфекций является своевременным и актуальным.
Целью исследований являлась разработка ассоциированной инакти--вированной-концентрированной-вакциныпротиваденовируснойинфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Оптимизировать условия культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи КРС с получением инфекционной активности не ниже Ю60ТЦД50/мл.
2. Отработать оптимальные условия инактивации полученных вирусов.
3. Получить концентрированные вирусные антигены и изучить их антигенную активность.
4. Изготовить экспериментальные серии моно- и ассоциированных вакцин и определить антигенные свойства на разных видах животных.
5. Испытывать ассоциированную вакцину на естественно восприимчивых животных.
6. Исследовать влияние иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины.
Научная новизна работы:
Впервые разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Предложена модифицированная методика получения очищенных и концентрированных препаратов аденовирусов и вируса вирусной диареи КРС, пригодных для создания вакцин.
Дано научное обоснование и показана эффективность применения иммуномодуляторов и ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Практическая значимость работы. Результаты исследований вошли в-нормативную техническую, документацию :временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; технические условия изготовления и контроля вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; наставление по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований механизмов и закономерностей формирования поствакцинального противовирусного иммунитета у КРС и могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза инфекций, вызываемых аденовирусами и вирусом вирусной диареи КРС.
Полученные результаты используются в учебном процессе по дисциплине «Молекулярная биология вирусов» для студентов 4 и 5 курсов ветер инарно-био логического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ.
Апробация работы. Результаты работы доложены на международной научной практической конференции молодых ученых ВНИиТИБП, (Щелково, 2004), 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2006); конференции по актуальным проблемам инфекционной патологии и иммунологии животных (Москва, 2006), конференции «Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии» (Москва, 2006).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных статей, в т.ч. 8 статей в сборниках научных трудов, 3 статьи — в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 145 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, приложения. Список использо
Заключение диссертационного исследования на тему "Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота"
4. Выводы
1. Разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота. В опытах на лабораторных животных и телятах препарат оказался безвредным, обладая выраженной антигенной активностью, которая сохранялась 14 месяцев (срок наблюдения).
2. Аденовирус первого серотипа (шт. Bovine-10) и вирус диареи КРС (шт. Origon) в перевиваемых культурах клеток почки теленка и коронарных сосудов теленка вызывают цитопатический эффект и репродуцируются стабильно с инфекционным титром 106'25 ЦТДзф/мл и 107'75 ЦГДзо/мл, соответственно.
3. Формалин в конечной концентрации, равной 0,2%, является универсальным инактивантом для аденовируса и вируса вирусной диареи КРС при экспозиции 72 часа и температуре 37 °С; с концентрацией адъюванта (гидроокись алюминия) — 1,3 %.
4. Способ концентрирования аденовируса и вируса вирусной диареи КРС ПЭГ с молекулярной массой 6000 в конечной концентрации, равной 10,0 % и 8,0 %, соответственно, является унифицированным, оптимальным для получения вирусов с высокой антигенной активностью.
5. Наличие двух компонентов (в соотношении 1:1) в ассоциированной вакцине не снижает ее антигенную активность в отношении аденовируса и вируса диареи КРС.
6. Концентрированные моно - и ассоциированная вакцины индуцировали синтез нейтрализующих антител к аденовирусу и вирусу вирусной диареи КРС у лабораторных животных в высоком титре от 9.5 log2 до 10.0 log2, которые сохранялись на уровне не ниже 5,0 log2 до 420 дней (срок наблюдения).
7. Установлена оптимальная доза ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины для естественно вослриимчивых животных,„кото^ рая составила 1,0 мл, что в 10,0 раз меньше по сравнению с ассоциированной культуральной вакциной. При этом сохранялась высокая активность вакцинного препарата.
8. Двукратное введение ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины телятам в дозе 1,0 мл стимулирует синтез высокого уровня антител к аденовирусу и вирусу ВД КРС (8,25 и 8,5 в РН и 8,75; 9,0 к^2в РИГА, соответственно), и их сохранение в течение 8 месяцев в титрах 6,17; 5,22 в РН и 7,5; 5,75 в РИГА, соответственно.
9. Иммуномодуляторы фоспренил в дозе 0,2 мкг/кг и гликопин в дозе 0,12 мкг/кг при однократном введении с ассоциированной вакциной оказывают влияние на факторы клеточного и гуморального иммунитета: относительное количество Т- и В-лимфоцитов увеличивается в среднем на 7,0 % и 3,0 % , соответственно, при этом титр нейтрализующих антител повышается в среднем на 2,0 1о§2"
10. Сочетанное применение ассоциированной инактивированной вакцины с иммуномодуляторами, повышает антигенную активность вакцинных препаратов против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
5. Практическое использование полученных научных результатов
Разработан проект нормативной документации на вакцины.
1. Временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
2. Технические условия ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
3. Инструкция по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.—
Результаты исследований используются в учебном процесс в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Ветеринарная вирусология».
6. Рекомендации по использованию научных выводов
1. После проведения широкомасштабных испытаний ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС рекомендуется для применения в скотоводстве.
2. Полученные результаты по очистке и концентрированию вирусов рекомендуются для использования в высших учебных заведениях по курсу дисциплин «Вирусология, Молекулярная биология вирусов и Биотехнология».
110
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Вазир Ясер
1. Белоусова, P.B. Профилактика аденовирусной инфекции крупного рогатого скота /Р.В.Белоусова //Информ. листок /Моск. обл. террит. центр, науч.- тех. информации и пропаганды.- 1988.- № 413-88.
2. Белоусова, P.B. Инактивированная вакцина против аденовирусной инфекции крупного рогатого кота /Р.В.Белоусова //Вестн. с.-х. науки- 1989.-№8.-С. 91-95.
3. Белоусова, Р.В. Лабораторная диагностика и специфическая профилактика аденовирусной инфекции крупного рогатого скота: автореф. дис. док. вет.наук/Р.В.Белоусова.-М., 1989.
4. Белоусова, Р.В. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота /Р.В.Белоусова, Р.З. Нургазиев, B.C. Фролов //Ветеринария 1989.- № 1.- С. 2930.
5. Белоусова, Р.В. Иммуноферментный метод диагностики аденовирусной инфекции КРС /Р.В.Белоусова, И.В. Третьякова//Достижения науки и техники АПК.- 1990.- № 1.- С.25-27.
6. Быкова, Л.А. Концентрирование и очистка вируса классической чумы свиней /Л.А.Быкова, А.И.Егорова //Акт.вопросы вет.вирусологии.-Покров.-1995.-С.22.
7. Виткова О.Н. Повышение эффективности специфической профилактики против гриппа птиц /О.Н.Виткова, М.В.Калмыков //Ветеринария.- 2007.- № 10.- С. 14-16.
8. Воронин Е.С. Иммуномодуляторы и пробиотики при болезнях молодняка преспективное направление в ветеринарной медицине /Е.С.Воронин, Р.В.Петров, Д.А.Деврешов //Иммунодефицита с.-х. животных: тез. докл. науч. конф.- М.- 1994,- С.4-5.
9. Ю.Георгис, М.М. Изучение антигенной активности инактивированных препаратов вируса диареи крупного рогатого скота: авотореф. дис. канд.биол.наук/М.М.Георгис.- 1981.- 18 с.
10. Головещенко, A.A. Применение фоспренила при откорме цыплят -бройлеров /А.А.Гловещенко, А.В.Деева //Ветеринария.- 2002.- № 12.- С. 2325.
11. Голубничий, В.П. Динамика образования иммуноглобулинов при аэрозольной вакцинации птиц /В.П.Голубничий, Б.Я.Бирман, В.М.Исавленко // Ветеринария.- 1983.- №2.- С.31-32.
12. Грберг, Ц.Д. Ветеринарная иммунология / Ц.Д.Грберг.- М.: Колос, 1974.-310 с.
13. Н.Григорьев, В.Т. Условия стабильности четвертичной структуры и антигенной активности гексона аденовируса /В.Т.Григорьев В.Т., С.Н.Хилько, Т.П.Тихоненко //Биохимия.- 1985.- Т. 50, Вып. 2.- С. 258-263.
14. Гуненков, В.В. Основные направления изучения вирусных пневмоэнтеритов /В.В.Гуненков, Р.В.Белоусова, В.Н.Сюрин //Ветеринария.-1982.- № 4.- С. 65-66.
15. Деева, A.B. Средство для профилактики и лечения фоспренил. Свойства, механизмы биологического действия и клинические эффекты в ветеринарии /А.В.Деева, М.Л.Зайцева, Е.А.Григорьева //Вет. патология.-2003,-№3.- С.20-31.
16. Деева, A.B. Эффективность применения фоспренила для повышения неспецифической резистентности организма и лечения острых вирусных инфекций у молодняка КРС /А.В.Деева, Т.Н.Ракова, Т.П.Лобова, Р.В.Белоусова//Вет. патология.- 2005.- № 1. С. 96-98
17. Деева, А.В. Применение фоспренила. Механизм повышения продуктивности, профилактического и терапевтического действия /А.В.Деева. Р.В.Белоусова //Ветеринария.-2004.- № 2.- С. 9-13.
18. Дементьева, В.А. Аэрозольное применение фоспренила при респираторных болезнях птиц /В.А.Дементьева, И.Ф.Амзорова, Г.Г.Мехдиханов и др. //Ветеринария.- 2007.- № 12.- С. 16-17.
19. Дженсон, Р. Болезни крупного рогатого скота при промышленном откорме /Р.Дженсон, Д.Маккей.- М.: Колос, 1977.- 357с.
20. Дьяконов, Л.П. Культивирование клеток и тканей животных: учеб. пособие /Л.П.Дьяконов, В.Ф.Глухов, А.А.Поздняков.- Ставрополь.- 1986.-С.56-59; 61-63.
21. Дяченко, Н.С. Новые подходы к совершенствованию диагностики аденовирусной инфекции /Н.С.Дяченко, Н.П.Ванцак, Л.А.Тарасишин //Тез. докл. XI Укр. респ. съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов.-Киев.- 1985.-С. 59-60.
22. Дяченко, Н.С. Аденовирус, клетка, организм /Н.С.Дяченко, Л.Н.Носач, Д.Беренчи.- Киев: Наук. Думка, 1988.- 23 с.
23. Дяченко, Н.С. Пути использования гексона аденовирусов в диагностической практике /Н.С.Дяченко, Л.Н.Носач, Н.П.Ванцак //Вопр. вирусологии и гигиены в Лит. ССР.- 1979.- С. 194-195.
24. Дяченко, Н.С. Патогенные вирусы человека /Н.С.Дяченко, К.М.Синяк, С.С.Дяченко.-Киев: Наук, думка.- 1980,- С. 112-132.
25. Жидков, С.А. Эффективность сывороточных препаратов при вирусных респираторных заболеваниях телят /С.А.Жидков, Н.Н.Крюков, З.Ф.Зудилина //Бюл. /ВИЭВ.- 1975,- Вып. XXII.- С. 38-41.
26. Жидков, С.А. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота: автореф. Дис.док. /С.А.Жидков.- М. 1994.
27. Жумабаев, Х.Ж. экспериментальные исследования по разработке инактивированной вакцины против адено и хламидий крупного рогатого скота: дис.канд. вет. наук/Х.Ж.Жумабаев,- М., 1993.
28. Зудилина, З.Ф. Выделение и идентификация вируса диареи крупного рогатого скота /З.Ф.Зудилина, Н.Н.Крюков //Бюл. /ВИЭВ.- 1971.- Т. II.- С. 1112.
29. Илясова, Л.С. Вирус диареи болезни слизистых оболочек в патологии беременности крупного рогатого скота: дис. канд. вет. наук /Л.С.Илясова.- М., 1987.- С. 116.
30. Исакова, В.Р. Получение и характеристика иммунологической специфичности моноклинальных антител против структурных белков аденовирусов: автореф. дис. канд. биол. наук/В.Р.Исакова.- 1991.- С.-14.
31. Кис, В.И. Серопрофилактика вирусных пневмоэнтеритов телят в промышленных хозяйствах: автореф. дис. канд. вет. наук /В.И.Кис.-1986.-С. 16.
32. Ковалишин, Г.Г. Сравнительное изучение гексонов некоторых аденовирусов рода Mastadenovims /Г.Г.Ковалишин, С.Н.Хилько, Б.С.Народицкий //Микробиолог, журн.- 1986.- Т. 48, № 2.- С. 50-55.
33. Коленкова, Л.М. Выделение идентификация аденовирусов крупного рогатого скота /Л.М.Коленкова, Р.В.Белоусова, Б.Е.Блехерман, О.Б.Литвинов //Теорет. профилактики инфекц. и инваз. болезней животных: сб. науч. тр /Моск.вет. акад.- 1985.- С. 8-11.
34. Коленкова, Л.М. Патогенность полевых изолятов аденовирусов телят /Л.М.Коленкова, Р.В.Белоусова, В.Н.Сюрин //Проблемы вет. биологии: сб. науч. тр. /Моск. вет. акад.- 1984.- С.23-28.
35. ВНИТиБП.- Щелково, 2004.- С. 20-23
36. Кругляк, В.А. Клонирование фрагментов ДНК аденовирусов крупного рогатого скота ВАУЗ в. плазмиде рИС 19/В.А.Кругляк, Р.В.Белоусова, Б.С.Народицкий, В.Н.Сюрин //Сб. науч. тр. /ВАСХНИЛ.-1997.-№11.-С. 41-43.
37. Кузнецов, Д.П. Очистка и концентрирование вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота осаждением на градиентную интерфазу /Д.П.Кузнецов //Науч. основы пр-ва вет. биол. препаратов.-Щелково, 2000.- С. 203-204.
38. Куликова, И.Л. Культура клеток сосудов сердца телёнка и чувствительность этой культуры к вирусу диареи крупного рогатого скота /И.Л.Куликова, Л.П.Дьяконов, С.А.Жидков //Цитология.- 1992.- Т.34, № 9.-.-С. 75.
39. Куликова, И.Л. Культуральные, морфологические, и биологические свойства культуры клеток коронарных сосудов эмбриона коровы (КСТ) /И.Л.Куликова, С.А.Жидков //Культура клеток животных в ветеринарии и биотехнологии: тез. докл. НПК.- М., 1993.
40. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета /Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин.- М.: Медицина, 1985.- 265с.
41. В.Н.Сюрин //Проблемы вет. иммунологии: тр. /ВИЭВ,- 1983.-Т. 57.- С. 116119.
42. Литвинов, О.Б. Экспериментальные исследования по разработке инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции курупного рогатого скота: автореф. Ди. канд. вет. наук/О.Б.Литвинов.- М., 1984.- 287с.
43. Лобова Т.П. Усовершенствование лабораторной диагностики Аденовирусной инфекции крупного рогатого скота: автореф. Дис.канд.вет. наук / Т.П.Лобова.- М., 2006.
44. Луговцев, В.Ю. Метод концентрирования и очистки вируса пограничной болезни овец /В.Ю.Луговцев //Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзот. болезнями животных.- Покров, 1998.-С. 118-120.
45. Макаревич, В.Г. Вирусная диарея крупного рогатого скота /В.Г.Макаревич //Малоизвест. зараз, болезни животных.- М: Колос, 1973.- С. 73-91.
46. Макаров, В.В. Вирусная диарея крупного рогатого скота /В.В.Макаров //Карантин, и малоизвест. болезни животных.- М.: Колос, 1983.- С. 85-90.
47. Манько, В.М Иммунология /В.М.Манько, В.Скворцов, Т.Б.Мастернак.- 1989.- Т.2.- С.23-26.
48. Манько, В.М Иммунология /В.М.Манько, В.Скворцов, Т.Б.Мастернак.- 1989.- Т.1.- С.38-41.
49. Михайлова, Э.Г. Сравнение специфичности и чувствительности реакции пассивной гемагглютинации и других методов индикации антител к аденовирусам /Э.Г.Михайлова, Н.С.Дяченко, Л.А.Тарасишин //Микробиолог, журн.- 1986.- Т.48, N.6,- С. 80-82.
50. Михалишин, В.В. Концентрирование вируса ящура для изготовления ващин1Гдлительного хранения /В.В.Михалишин //Акт. проблемы инфекц. патологии животных.- Владимир, 2003.- С. 490-492.
51. Носач, JI.H. Характеристика внутриядерных включений, образующихся при репродукции аденовирусов крупного рогатого скота /Л.Н.Носач, Р.Б.Белоусова, Н.С.Дяченко //Цитология и генетика.- 1986.- Т. 20, N. 1.-С. 51-54.
52. Носач, Л.Н. Цитопатология аденовирусной инфекции/Л.Н.Носач, Н.С.Дяченко .- Киев: Наук. Думка, 1982.- С. 124.
53. Носач, Л.Н. Изучение антигенного родства аденовирусов человека и крупного рогатого скота методом флуоресцирующих антител /Л.Н.Носач, Л.М.Коленкова //Микробиол. журн.- 1985.- С.67-70.
54. Носков, Ф.С. Иммунология /Ф.С.Носков, Л.Е.Никитина, Л.К.Масленникова, Е.А.Ридман.- 1984.- Т.4.- С.38-41.
55. Обухов, И.Л. Влияние инактиваторов на антигенную активность различных штаммов вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней /И.Л.Обухов; ВГНКИ вет. препаратов.- М, 1990,- 9 с.-Библиогр. 1.- Деп. в ВНИИТЭИагропром, 14.05 1990.
56. Ожерелков, C.B. Роль естественных иммуномодулирующих факторов в патогенезе экспериментальных вирусных инфекций: дис. докт. биол. наук /C.B.Ожерелков.- М., 2003.
57. Панасюк, С.Д. Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота (некробактериоз, копытная гниль): дис. докт. вет. наук / СтД:Панасюк^М.72007: "" ~~
58. Пацула, Ю.И. Содержание Т- и В- лимфоцитов в крови телят после введения бруцелл /Ю.И.Пацула, Б.И.Кондауров //Ветеринария.- 1981.- №1.-С.30-32.
59. Перчиков, И.В. Применение лигногумата калия в качестве иммуномдулятора для специфической профилактики болезни Марека у цыплят: дис. канд. вет. наук /И.В.Перчиков.- М., 2005.
60. Петров, Р.В. Иммуномодуляторы /Р.В.Петров, Б.Ф.Сменов //Сб. тр. М., 1987.- С.198.
61. Петрова О. Т. Острые респираторные вирусные инфекции КРС в Свердловской области (ИЭВ Сибири и Дальнего Востока) /О.Т.Петрова, А.Т.Татарчук, Н.Л.Сапожникова // Ветеринария.- 2002.- №2.
62. Пономарев, А.П. Регенерация ПЭГ-115 для повторного использования при концентрировании вируса ящура /А.П.Пономарев, С.Г.Баранов //Вирус, болезни с.-х. животных.- Владимир, 1995.- С. 139.
63. Ракова, Т.Н. Влияние фоспренила на неспецифическую резистентность и иммунологическую реактивность телят /Т.Н.Ракова, А.В.Деева //Эколог, аспекты эпизоотологии и патологии животных: международ, конф., май 1999г., Воронеж,- 1999.- С. 260-272.
64. Ревякина, Е.М. Иммупогенные и реактогенные свойства ассоциированной трёхвалентной вакцины против инфекционного ринотрахиета, парагриппа и вирусной диареи КРС: дис. канд. вет. наук /Е.М.Ревякина.- 1998.
65. Романов, Е.А. Эффективность ассоциированной вакцины против диареи телят смешанной этиологии /Е.А.Романов, Е.П.Гаффаров, Г.Н.Матвеева//Ветеринария,- 2000.- №.12.- С.23-26.
66. Сатина, Т.А. Очистка и концентрирование культурального вируса диареи крупного рогатого скота /Т.А.Сатина, В.В.Борисов, Н.А.Перевозчикова //Вирус, болезни с.-х. животных,- Владимир, 1995.- С. 142.
67. Свистунова, A.C. Клиническая и иммунологическая эффективность иммуномодулятора ликопида при туберкулезе легких /A.C.Свистунова, С.С.Аршинова, С.В.Климова //Иммунология.- 2000.- №5.- С. 59-62.
68. Сидорова, Е.В. Механизм синтеза и секреции иммуноглобулинов. Роль различных классов субклеточных фракций /Е.В.Сидорова //Успехи, соврем, биологии.- 1974.- Т. 78(28), Вып 2(5).- С.234-253.
69. Соколов, В. Д. Клиническая фармакология и фармакотерапия /В.Д.Соколов.- СПБ: Эврика, 2006.- 132 с.
70. Сомова, A.B. Оценка чувствительности и специфичности теста агглютинации частиц латекса для выявления антигена гепатита А /А.В.Сомова, В.А.Бурлев, А.И.Сперанский //Эпидемиология и профилактика вирусного гепатита.- Таллин, 1976.- С. 134-135.
71. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных /В.Н.Сюрин, А.Я.Самуйленко, В.Б.Соловьев.- М.: ВНИТИБП, 1998.
72. Сюрин, В.Н. Ветеринарная вирусология /В.Н.Сюрин, Р.В.Белоусова, Н.В.Фомина.-М: Колос, 1991.- 431с.
73. Сюрин, В.Н. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных /В.Н.Сюрин, Р.В.Белоусова, Н.В.Фомина.- М.: Наука, 1986.- С.
74. Сюрин, В.Н. Достижения биотехнологии в диагностике и профилактике вирусных болезней животных /В.Н.Сюрин, В.П.Карелин, И.В.Непоклонова //Вестн. с.-х. науки.- 1984.- № 3(330).- С. 106-114; 116.
75. Тарасишин, JI.A. Иммунохимический анализ гексона аденовируса крупного рогатого скота типа 3 /Л.А.Тарасишин, С.Н.Хилько, Р.В.Белоусова //Сб. науч. тр. /Ин-т молекуляр. биологии и генетики; АН УССР.- Киев, 1986.-С. 90-91.
76. Третьякова, И.В. Разработка технологии иммуноферментной тест-системы для выявления антител к аденовирусам крупного рогатого скота: дис. канд. биол. наук/И.В.Третьякова.- М.,2001,- 127 с.
77. Третьякова, И.В. Использование ИФА для серодиагностики аденовирусной инфекции КРС /И.В.Третьякова, Р.В.Белоусова, Т.П.Лобова //Ветеринария.- 1989.-№8.-С. 28-32.
78. Фомин, К.Ю. Разработка РНГА для широкомасштабной диагностики вирусной диареи /ВД/ крупного рогатого скота: автореф. дис.канд. вет. наук /К.Ю.Фомин; МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.- М.,1998.- 20 с.
79. Фомина, Н.В. Аденовирусная инфекция животных /Н.В.Фомина.-М.: Колос, 1995.
80. Фролов, B.C. Динамика антител у коров и телят, вакцинируемых против аденовирусной инфекции /В.С.Фролов, Р.В.Белоусова //Ветеринария.-1985.-№ 5.- С. 38-42.
81. Халенев, Г.А. Разработка методов производства диагностикумов и усовершенствование лабораторной диагностики вирусной диареи и респираторно-синцитиальной инфекций крупного рогатого скота: дис. канд. вет. наук /Г.А.Халенев.- М., 1976.- 270 с.
82. Харламбиев, X. Етиологията и профилактиката на респираторните заболивания по телятата у нас /Х.Харламбиев, Д.Белчев, И.Иванов //Вет. мед.науки.-7! 973;-~№ 107-СГ79-9Т.
83. Харламбиев, X. Вакцинация телят бивакциной против парагриппа-3, аденовирусов /Х.Харламбиев //Ветеринария.- 1974.- № 5.- С. 111-112.
84. Харламбиев, X. За организирена респираторните заболевания по телятата /Х.Харламбиев //Вет. сб.- 1973.- Т.71, Вып.4.- С. 3-11.
85. Харламбиев, X. Иммунитет и иммунопрофилактика при вирусных респираторных заболеваниях по телятам и условиях на промышлен /Х.Харламбиев //Вет. мед. наук,- 1979.- Т. 12, Вып.1.- С.7-9.
86. Хилько, С.Н. Иммуноферментный анализ гексона аденовирусов. Идентификация ихарактеристика кроличьих и мышиных антител против гексонов /С.Н.Хилько, М.А.Кирасова, В.Р.Исакова //Молекул, генетика, микробиология и вирусология.- 1989.
87. Хилько, С.Н. Гексон аденовирусов: Структура., изменчивость и антигенные детерминанты /С.Н.Хилько, В.Г.Гриорьев, О.В.Чайка //Молекул, генетика, микробиология и вирусология.- 1984.- №1.- С. 15-19.
88. Хилько, С.Н. Специфичность и выраженность отдельных антигенных детерминант в гексонах аденовирусов /С.Н.Хилько, Е.К.Киселева, М.А.Кирасова //Вирусы и вирус, заболевания.- Киев: Наук. Думка, 1988.-Вып. 16.- С. 49-60.
89. Хилько, С.Н. Способ получения аденовирусных антигенов: а.с. 1364342 /С.Н.Хилько, Т.И.Пономарева, В.Г.Григорьев.- М., 1986.
90. Шульпин, М.И. выявление возбудителя вирусной диареи КРС с помощью полимеразной цепной реакции и генотипирование изолятов, циркулирующих на территории Российской Федерации: автореф. дис. канд. /М.И.Шульпин,- Владимир, 2004.
91. Adam, Е. Delineation of antigenic determinants of. adenovirus hexson by monoclonal antibodies /Е/Adam, J. Erdei, Lengyel A //Intervirology.- 1985.- V.28, № 4.- P. 222-227.
92. Aldasy, P. Pneumoenteritic in calves caused by adenoviruses /P.Aldasy, A.Bartha//Acta. Vet. Hung.- 1965.-V. 15.-P. 167-175.
93. Alenius, S. Bovine virus diarrhoea virus (BVDV) in cattle: Symptoms, diagnosis, prophylaxis and eradication /S.Alenius, B.Larsson, R.Niskanen //Svensk Veterinartidning.- 1992.- V.44.- P. 51-62.
94. Alenius, S. A national approach to the control of bovine viral diarrhoea virus /S.Alenius, A.Lindberg, B.Larsson //Proceedings of the Third ESVV Symposium on pestivirus Infections.- 1996.-V. 19-20 (sept.).- P. 162-169.
95. Alenius, S. A national approach to the control of bovine viral diarrhoea virus /S.Alenius, A.Lindberg, B.Larsson //In 3rd ESVV symposium pestivirus infection, The Netherlands.- 1997.- P.162-169.
96. Aly, N.M. Bovine viral diarrhoea, bovine herpesvirus andparainfluenza-3 virus infection in three cattle herds in Egypt in 2000 /N.M.Aly, G.G.Shehab, I.H.A.Abd El-Rahim //Rev. sci. tech. Off. int. Epiz.- 2003.- V.22(3).- P. 879-892.
97. Andronova, T.I The structure and immunological function of glucosaminylmuramyl peptides /T.I.Andronova //Sov.Medical Reviews.D.Immunology.- 1991.- V.4.- P. 1-63.
98. Baber, D. Isolation of bovine adenovirus type 3, 4 and 8 from free-living African buffaloes /D.Baber, J.Condy // Res.Vet.Sci.- 1981.- V.31.- P.69-76.
99. Baker, J.C. Bovine viral diarhea virus: a review /J.C.Baker //J. Am. Vet. med. Ass.- 1987.-V.190.-P. 1449-1458.
100. Baker, J.C. Clinical aspects of bovine virus diarrhoea virus infection /J.C.Baker //Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epis.- 1990.- V.9, № 1.- P. 25-41.
101. O.Baker, J.C. The clinical manifestations of bovine viral diarrhea infection /J.C.Baker //Vet. Clin. North Am Food Anim. Pract.- 1995.- V.l 1.- P.425-445.
102. Barber, D.M.L. Disease in dairy heard associated with the interdiction and spread of bovine viral diarrhea virus /D.M.L.Barber, P.F.Nettleton, J.A.Herring //Vet.Rec.- 1985.- V.l 17.- P.459-464.
103. Barlow, R.M. Morphogenesis of hydranencephaly and other intracranial malformations in progeny of pregnant ewes infected with pestiviruses /R.M.Barlow //Comp. Pathol.- 1980,- V. 90.- P. 87-98.
104. Bartha, A. Further two serotypes of bovine adenoviruses (serotype 4 and 5)/ATBartha //Acta^i.Acli^ P 10 7 108.
105. Bartha, A. Proposal for sub grouping of bovine adenoviruses /A.Bartha //Acta. Vet. Acad. Sci. Hung.- 1969.- V. 19(3).- P. 319-321.122-.i
106. Bartha, A. Isolation of adenovirus strains from calves with virus-diarrhea1./A.Bartha;.P:Aldasy //Acta Vet: Acad. Sei. Hung.- 1964.- V. 3 .- P. 239-245.f ■ '• . ' ■ .■■'■"
107. Bartha, A. New serotype 8 of bovine adenoviruses /A.Bartha, S.Mathe,
108. Belak ,S. Experimental infectiomof calves with adenovirus isolatedifromi1: ' 'i sheep and related to bovine adenovirus type 2 /S.Belak, V. Palti, T.Szekeres1.//Vet.Hed.- 1977.- V.24, № 6.- P.542-547.
109. Benk6, M: Family Adenoviridae /M.Benko, BiHarrach, G.W.Both, W.G. | Russell //Virus Taxonomy., VHIth Report of the International? Committee on;.
110. Taxonomy of Viruses.- Elsevier, New York.- 2005,- P. 213-228.1. S ' ■ ■ ,
111. Bielefeldt, Ohmann II. The pathologies of bovine viral dian'hea vims-nfection. A^. window on4 the\ pathogenesis- /QiHiBielefeldt; //Vet;. Glim. North-. Am';,
112. Food.Anim. Pratt.- 1995.- V. II.- P. 447-476..
113. Binkhorst, G.T. Neurological disorders, virus persistence andhypomyelination in calves due to intrauterine infection with bovine virus diarrhoeav virus. I Clinical symptoms and morphological lesions /G.T.Binkhorst,i.;^•;
114. DiL.HiToarnee, W.Wouda //Vet.O.- 1983.-V. 5:-P. 145-155.
115. Bitsch, V. Experiences from the Danish programme for eradication off ■bovine viral diarrhea (BVD) 1994-1998 with special1 reference to legislation and;causes of infection /V.Bitsch, K-EL.Hansen, L.Ronsholt //Vet. Microbiol.- 2000.-V.77.- P.137-143.
116. Bolin, S.R. Effects of bovine viral diarrhea virus on the percentages and absolute numbers of circulating B and T lymphocytes in cattle /S.R.Bolin, A.W.McClurkin, M.F.Coria //Am. J. Vet. Res.- 1985.- V. 46.- P. 884-886.
117. Bolin, S.R. Giycoprotein E 2 of bovine viral diarrhea vims expressed in insect cells provides calves limited protection from systemic infection and disease /S.RJBolin, J.F.Ridpath//Arch. Virol.- 1996.- V.141.- P. 1463-1477.
118. Bolin, S.R. Control of bovine viral diarrhea infection by use of vaccination /S.R.Bolin //Vet. Clin.North Am.Food Anim.- 1995,- V.ll.- P. 615625.
119. Bolin S.R. Serologic detection and practical consequences of antigenic diversity among bovine viral diarrhoea virus in a vaccinated herd /S.R.Bolin, E.T.Littledike, J.F.Ridpath //Am J. Vet. Res.- 1991.- V.52.- P.1033-1037.
120. Bolin, S.R. Differences in virulence between two noncytopathic bovine viral diarrhea viruses in calves /S.R.Bolin, J.F.Ridpath //Am J. Vet. Res.- 1992.- V. 53.- P.2157-2163.
121. Bolin, S. R. Specificity of neutralizing and precipitating antibodies induced in healthy calves by monovalent modified live bovine viral diarrhea virus vaccines /S.R.Bolin, J.F.Ridpath //Am J. Vet.Res.- 1989,- V.50.- P. 817-821.
122. Bomford, R. The control of antibody isotype response to recombinant human immunodeficiency virus gp 120 antigen by adjuvants /R.Bomford, M.Stapleton, S.Winsor//AIDS Res.Human/Retrov.S.p.- 1992.-P.1765-1771.
123. Boudin, M. Izolation and characterization of adenovirus type 2 (penton base ) /M.Boudin, M.D.Moncany //Birology.- 1979. V. 92.- P. 125-138.
124. Brar, J. S. Maternal immunity to infectious bovine rhinotracheitis and bovine viral diarrhea viruses: duration and effect on vaccination in young calves /J.S7Brar7 D^W Johnson, C C .Mus coplat // Am. J. Vet. Res.- 1978.- V.39.- P.241-244.
125. Brock ,K. V. Changes in levels of viremia in cattle persistently infected with bovine viral diarrhea virus /K.V.Brock, D.L.Grooms, J.Ridpath //J. Vet .Diagn. Invest.- 1998.- V.10.- P. 22-26.
126. Brownlie J. Protection of the bovine fetus from bovine viral diarrhoea virus by means of a new inactivated vaccine /J.Brownlie, M.C.Clarke, L.B.Hooper //Vet. Rec.- 1995.- V.137.- P. 58-62.
127. Brownlie, J. Experimental production of fatal mucosal disease in cattle /J.Brownlie, M.C.Clarke, C.J.Howard //Vet. Rec.- 1984,- V. 114.- P.535-536.
128. Bruschke, C.J. Glycoprotein Erns of pestiviruses induces apoptosis in lymphocytes of several species /C.J.Bruschke, M.M.Hulst, R.J.Moormann //J. Virol.- 1997.- V. 71, № 9.- P.6692-6696.
129. Burki, J. Experimental Adenovirus vaccine in cattle /J.Burki, S.Gillespie, N. Comments //J. Amer. Vet. Med. Assoc.-1973.- V.103, № 7,- P. 867-901.
130. Can, J. Comp. The propertyies and classification of bovine viral diarrhea virus /J.C.Can //Med. Vet. Sci.- 1964.- V.28(6).- P. 148-152
131. Canal, C.W. Detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus (BVDV) and characterization of genomes of BVDV from Brazil /C.W.Canal //Veterinary Micrbiology.- 1998.- V.63.- P.85-97.
132. Carman, S. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario 1993-1995/S.Carman, T.Van Dreumel, J.Ridpath //J. Vet. Diagn. Invest.- 1998.- V.10.-P. 27-35.
133. Charistiane, S. Prevalence of antibodies to bovine viral diarrhea virus in Namibian wildlife. Trop /S.Charistiane, G.Uatanaua, K.R.Depener //Anim. Hilth Prod.-1992.-V.24.-P. 125-126.
134. Christopher, C.L. Chase. Trends in the BVDV Serological Response in the Upper Midwest /C.L.Chase Christopher, K.Stephanie, L.Fawcett //Biologicals.-2003.-V.31.-P. 145-151.
135. Clarke, M.C. Isolation of cytopathic and noncytopathic bovine viral diarrhoea virus from the tissues of infected animals /M.C.Clarke, J.Brownlie, C.J.Haward //CEC Seminar-. Brussels.- 1985.- P. 3-12.
136. Collett, M.S. Molecular cloning and nucleotide sequence of the pestivirus bovine viral diarrhea virus /M.S.Collet, R.Larson, C.Gold //Virology.- 1988.- V. 165.-P. 191-199.
137. Collett, M.S. Molecular genetics of pestiviruses /M.S.Collett //Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.- 1992.- V. 15.- P. 145-154.
138. Collett, M.S. Genomic Structure of BVDV.// in symposium on bovine viral diarhhoea virus /M.S.Collett //A 50 year review; College of vet. medicine. Cornel University .- 1996.- P.79-88.
139. Comeck, G. Characterization of adenovirus type 5 hexon /G.Comeck, P.Sigler, H.Ginsberg//Mol. Biol.- 1971,- V. 57.- P. 397- 401.
140. Corapi, W. Thrombocytopenia and hemorrhages in veal calves infected with bovine viral diarrhea virus /W.Corapi, D.Elliot, T.W.French //J. Am Vet. Med .Assoc.- 1990.- V.196.- P. 590-596.
141. Corapi, W.V. Severe thrombocytopenia in young calves experimentally infected with noncytopathic bovine viral diarrhea virus /W.V.Corapi, T.W.French, E.Dubovi //J. Virol.- 1989.-V. 63.- P 3934-3943.
142. Coria M.F. Specific immune tolerance in an apparently healthy bull persistently infected with BVD virus /M.F.Coria, A.W.Meciurkin //J. Am Vet. Med. Ass.- 1978.- V.172.- P.449-451.
143. Cortese, V.S. Clinical and immunologic response of vaccinated and unvaccinated calves to infection with a virulent type-II isolate of bovine viral diarrhea virus /V.S.Cortese, K.H.West, L.E.Hassard /J. Am Vet. Med. Assoc.-1998.- V. 213.-P. 1312-1319.
144. Couvreur, B. Genetic and antigenic variability in bovine viral diarrhea virus (BVDV) isolates from Belgium /B.Couvreuer, C.Letellier, A.Collard //Virus Research. 2002.- V. 85.- P. 17-28.
145. Curran, U. studies on the cytopathology of bovine adenoviruses in calf testis and calf kidney cell cultures /U.Curran //Vet.Microbiol.- 1979.- V.3, № 4,- P. 241-254.
146. Dean, H. J. Cross-protective efficacy of a bovine viral diarrhea virus (BVDV) type 1 vaccine against BVDV type 2 challenge /H.J.Dean, R.Leyh //Vaccine .- 1999,- V.17.- P. 1117-1124.
147. Deng, R. Molecular cloning and nucleotide sequence of a pestivirus genome, noncytopathic bovine viral diarrhea virus strain SD-1 /R.Deng, K.V.Brock//Virology.- 1989.- V. 191.-P. 867-869.
148. Docrfler, W. Adenovirus DNA the viral genome and its expression /W.Docrfler.- 1986,- P. 485.
149. Done, J.T. Bovine virus diarrhoea-mucosal disease virus: pathogenicity for the fetal calf following maternal infection /J.T.Done, S.Terlecki, C.Richardson, J.W.Harkness //Vet. Rec.- 1980.- V.106.- P. 473-479.
150. Donis, R. O. Characterization of bovine viral diarrhea-mucosal disease virus-specific proteins in bovine cells /R.O.Donis, E.J.Dubovi //Journal of General Virology.-1987,- V. 68,- P. 1597-1605.
151. Donis, R.O. Molecular biology of bovine viral diarrhea virus and its interactions with the host /R.O.Donis //Vet. Clin. North Am Food Anim. Pract.-1995,- V.ll.-P. 393-423.
152. Duffell, S.J. Bovine virus diarrhoea-mucosal disease virus-induced fetopathy in cattle efficacy of prophylactic maternal pre-exposure /S.J.Duffell, M.WSharp7/Vet7R^ ~
153. Edwards, S. Antigenic differences among pestiviruses /S.Edwards, D.Paton //Vet. Clin. North Am Food Anim. Pract.- 1995.- V. 11.- P. 563-577.
154. Endsle, J.J. BHV-1-Specific CD4+, CD8+, and T cells in calves vaccinated with one dose of a modified live BHV-1 vaccine /J.J.Endsley, M.Quade, B.Terhaar //Viral. Immunol.- 2002.- V.15(2).- P. 385-93.
155. Engler, J. The nucleotide sequence of the polypeptide IX gene of human adenovirus types 3 /J.Engler//Gene.- 1981.- V. 13.- P. 387-392.
156. Enomoto, N. Mutations in the nonstructural protein 5A gene and response to interferon in patients with chronic hepatitis C virus lb infection /N.Enomoto, I.Sakuma, Y.Asahina//N.Engl.J.Med.- 1996.- V. 334.- P. 77-81.
157. Falcone 1, E. Genotyping of Bovine Viral Diarrhoea Viruses Isolated from Cattle in Northern Italy /E.Falconel, P.Cordioli, G.Sala //Vet. Research Communications.- 2001.- V. 25.- P. 161-167.
158. Fenan, J. Avian adenoviruses a review /J.Fenan, B.Adair //Avian Pathol.- 1977.-V. 6.-P. 189-217.
159. Fernelius, A.L. Evaluation of a soluble antigen vaccine prepared from bovine viral diarrhea-mucosal diseases virus-infected cell cultures /A.L.Fernelius, L.G.Classick, R.L.Smith //Am J. Vet. Res.- 1971.- V. 32(12).- P. 1963.1979.
160. Fliut, S. Adenovirus cytopathology /S.Fliut //Cor. Virol.- 1984.- V. 19.-P. 297-358.
161. Francki, R.T.B. Classification and nomenclature of viruses. Filth report of the .International Commetee on Taxonomy of Viruses. Flaviviridae /R.T.B.Francki, C.M.Fanquet, D.U.Knudson //Arsh. Virol.- 1991.- V.2.- P. 223233.
162. Frei, H.-R. Pravalenz und klinische Simptomatik persistenter BVD-Virusinfektionen in Rinderbestanden Niedersachsens /H.-R.Frei, U.Flebbe, B.Liess //Der praktische Tierarzt.- 1996.- №1.- P. 49-52.
163. French, E.L. Infection of pregnant ewes with mucosal disease virus of ovine origin /E.L.French, D.E.Hore, W.A.Snowdon //Australian Veterinary Journal.- 1974.- V. 50.- P. 45-54.
164. Frerking, H. BVD/MD eine vielseitige Geisel der Rinderzucht /H.Frerking //Tiergesundheit.- 1998.- V.30, №2.- P. 43-45.
165. Frey, FI. R. Investigations on the efficacy of an inactivated BVD vaccine for improving the safety of a live BVD vaccine /H.R.Frey, K.Eicken //Tierae. rztl. Umschau.- 1995.- V. 50.- P. 86-93.
166. Fritzemeier, J. Experimentally induced "late-onset" mucosal disease-characterization of the cytopathogenic viruses isolated /J.Fritzemeier, I.Greiser-Wilke, L.Haas //Vet. Microbiology.- 1995,- V. 46.- P. 285-294.
167. Fulton, R.W. Bovine viral diarrhea virus antigenic diversity: impact on disease and vaccination programs /R.W.Fulton, J.F.Ridpath, A.W.Confer //Biological.- 2003.- V. 31.-P. 89-95.
168. Ginsberg, H. Adenovirus structural proteins /H.Ginsberg //Comprehensive Virology. Plenum Press.- 1979,- V. 13,- P. 409-475.
169. Graham, D.A. Birth of persistently infected calves in two herds using inactivated BVDV vaccines /D.A.Graham, P.S.Valle, C.Fourichon //Second European Symposium on: BVDV control:- Porto: Paulo Costa, 2004.- P. 87.
170. Graham, D.A. Bovine viral diarrheoa virus (BVDV) on cattle farms -disease and control /D.AGraham //Cattle practice.- 2001,- V. 9.- P. 111-118.
171. Grahn, T.C. Nature ofearly reproductive failure caused by bovine viral diarrhoea virus /T.C.Grahn, M.L.Fahring, R.Zemjanis //J. am Vet. Med. Ass.1984.- V. 185.- P.429-432.
172. Greiser-Wilke, I. RNA insertions and gene duplications in the nonstructural protein pi25 region of pestivirus strains and isolates in vitro and in vivo /I.Greiser-Wlke, L.Haas, K.E.Dittmar //Virology.- 1993.- V. 193.- P. 977980.
173. Grooms, D.L. Detection of cytopathic bovine viral diarrhea virus in the ovaries following immunization with a modified live bovine viral diarrhea virus vaccine /D.L.Grooms, K.V.Brock, L.A.Ward // J. Vet. Diagn. Invest.- 1998.- V. 10.-P. 130-134.
174. Grummer, B. Der Einflus der Infektion mit dem Virus der Bovinen Virusdiarrhoe auf die Wirtzelle: diss. /B.Grummer.- 1999.- S. 118-119.
175. Grunder, H. Zur diagnose der bovinen virus diarrhoe mucosal disease (BVD) unter Beracksichtigung der deszeitigen epizootologie /H.Grunder, W.Hofmann, R.R.Gossler //Dtec.Tierartz.Wochensehr.- 1981.- Bd.88, N 3.- S.94-97.
176. Hamers, C. Virus Neutralizing Antibodies Against 22 Bovine Viral Diarrhoea Virus Isolates in Vaccinated Calves /C.Hamers, E.Di Valentin, C.Lecomte //The Vet. Journal.- 2002.- V. 163.- P. 61-67.'
177. Harkness, J.W. Serological studies of mucosal disease virus in England and Wales /J.W.Harkness, J.J.Sands, M.S.Richards //Res. Vet. Sei.- 1978.-V. 24.- P. 98103.
178. Harpin, S. Immune response to vaccination with DNA encoding the bovine viral diarrhoea virus major glycoprotein gp53 (E2) /S.Harpin, B.Talbot, M.Mbikay //FEMS Microb. Lett.- 1997.- V. 146.- P.229-234.
179. Herst, I.E. Characterization of murine lung and peritoneal macrophages /I.E.Herst //Beticuloendothel.Sol.- 1980.t V. 27, № 5.- P.443-454.
180. Hertig, C. Detection of apparently bovine viral diarrhoea (BVD) virus using the polymerase chain reaction /C.Hertig, U.Pauli, R.Zanovi //Vet. Microbiol.- 1991.- V. 26.- P. 65-76.
181. Hochsteiner, W. Bovine Virusdiarrhoe (BVD) und Mucosal Disease (MD): eine Ubersicht /W.Hochsteiner, K. Mostl, S. Franz //Wien. Tierarztl. Mschr.- 2002.- V. 89.- P. 270-280.
182. Hofmann, W. Angeborene ZNS-Storungen bei Kalbern /W.Hofmann, H.Weiler, H.-P. Heskert //Collegium Veterinarium XXIV.- 1993.- P. 45-48.
183. Horzinek, M.C. The structure of Togaviruses /M.C.Horzinek //Prog.med.Virol.- 1973.-V. 16.- P. 109-156.
184. Howard, C.J. Systemic vaccination with inactivated bovine virus diarrhoea virus protects against respiratory challenge /C.J.Howard, M.C.Clarke, P.Sopp P. //Vet Microbiol.- 1994.- V. 42.- P. 171-179.
185. Janice, J. Maternal antibody blocks humeral but not T cell responses to BVDV /J.Janice, J.Endsley, A.James //Biologicals.- 2003.- V. 31.- P. 123-125.
186. Kato, N. Hepatitis C virus nonstructural region 5A protein is a potent transcriptional activator /N.Kato, K.H.Lan, S.K.Ono-Nita //J.Virol.- 1997.- V. 71.-P. 8856-8859.
187. Klein, M. Isolation from cattle vims relative to Human adenoviruses /M.Klein, E.Ear ley, G.Zellat //Proc. Soc. Exptl. Biol. Med.- 1959.- V. 102.- P. 1-4.
188. Kummerer, B.M. The genetic basis for cytopathogenicity of pestiviruses /B.M.Kummerer //Vet Microbiol.- 2000.- V. 77,- P.l 17-128.
189. Larsson, B. Natural infection with bovine vims diarrhoea vims in a dairy herds a spectrum of symptoms including early reproductive failure and retained placenta /B.Larsson, R.Niskanen, S.Alenius //Anim. Rep. Sei.- 1994,- V. 36.- P. 37-48.
190. Laude, H. Properties of Border disease virus as studied in a sheep cell line /H.Laude, J.Gelfi //Arch Virol.- 1979.- V. 62.- P.341-346.
191. Lee, K. Propagation of virus diarrhea virus of cattle in tissue culture /K.Lee, J.Gillespie //Am J. Vet. Res.- 1957,- V. 18.- P. 952-955.
192. Liess, B. Embratransfer und BVD-Virusinfektion bei Rindern /B.Liess, H.R.Frej, H.Grambow //Dt. Tierarztl. Umsch.- 1987.- V. 94.- P. 506-508.
193. Lindberg, A. Principles for eradication of bovine viral-diarrhoea virus (BVDV) infections in cattle populations /A.Lindberg, S.Alenius //Vet. Microbiol.-1999.-V. 64.-P. 197-222.
194. Lowings, P. Classical swine fever virus diversity and evolution /P.Lowings //J. Gen.Virol.- 1996.-V. 11.- P. 1311-1321.
195. Luzzago, C. Study on prevalence of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) antibodies in 29 Italian dairy herds with reproductive problems /C.Luzzago, R.Piccinini, A.Zepponi //Vet. Microbiology.- 1999.- V. 64, № 2.- P. 247-252.
196. Makoschey, B. An inactivated bovine virus diarrhoea virus (BVDV) type 1 vaccine affords clinical protection against BVDV type 2 /B. Makoschey, M.G.Janssen, M/P.Vrijenhoek //Vaccine.- 2001.- V. 19.- P.3261-3268.
197. McClurkin, A.W. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) serotiters stimulated in cattle in isolation and under field conditions by inactivated BVDV vaccine /A.W.McClurkin, M.F.Coria //Proc. Annu. Meet. US Anim. Health Assoc.- 1980.- V. 84.- P. 223-231.
198. Meciurkin, A.W. Reproductive performance of apparently healthy cattle persistently infected with bovine viral diarrhoea virus /A.W.Meciurkin, M.F.Coria, R.C.Cutlip //J. Am. Vet. Med. Ass.- 1979.- V. 174,- P. 1116-1119.
199. Meuling, A. Epidemiology of bovine virus diarrhoea virus /A.Meuling, H.Houe, A.M.Tensen //Rev. sci. Off. Int. epiz.- 1990.- V.9, № 1.- P. 75-93.
200. Minta, J.O. Study on the subunit structure of human properdin /J.O.Minta, L.H.Lepov //Imunochemistry.- 1974,- № 10.- P. 361-368.
201. Moennig, V. Implementation of two-step vaccination in the control of bovine viral diarrhoea (BVD) /M.Moennig, K.Eicken, U.Flebbe //Preventive Vet. Medicine.- 2005.- V. 72,- P. 109-114.
202. Moennig, V. BVD control in Europe: current status and perspectives /V.Moennig, H.Houe, A.Lindberg //Anim. Health Res. Rev.- 2005.- V. 6.- P. 6374.
203. Moennig, V. Pathoge nesis of intrauterine infections with bovine viral diarrhea virus /V.Moennig, B.Liess //Vet. Clin. North Am Food Anim. Pract.-1995.-V. 11.-P. 477-487.
204. Moritz van Vuuren. Bovine viral diarrhea virus infection in livestock in southern Africa /Moritz van Vuuren //Perspectives in Agriculture, Veterinary Science, Nutrition and Natural Resources.- 2006,- № 9.- P. 1-5.
205. Munir, I. Interactions of bovine viral diarrhea virus glycoprotein Ems with cell surface glycosaminoglycans /I.Munir, H.Flick-Smith, J.W.McCauly //Journal of General Virology.- 2000.- V. 81.- P. 451-459.
206. Murphy, F.A. Veterinary Virology /F.A.Murphy, E.P.Gibbs, M.C.Horzinek.- London: Academic Press, 1999.
207. Nagai, M. Genomic and serological diversity of bovine viral diarrhea virus in Japan /M.Nagai, T.Ito, S.Sugita //Archives of Virology.- 2001.- V. 146.-P. 685-696.
208. Nermut, M. The architecture of adenoviruses /M.Nermut //Arch. Virol.-1980,-V. 64.-P. 175-196.
209. Nettleton, P.F. Ruminant pestiviruses /P.F.Nettleton, G.Entrican //Br. Vet. J.- 1995.- V. 151.- P. 615-642.
210. Nishimori, T. Production of monoclonal antibodies against classical swine fever virus and their use for antigenic characterization of Japanese isolates /T.Nishimori, S.Yamada, M.Shimizu //J. Vet. Med. Sci 1996.- V. 58.- P. 707710.
211. Patel, J.R. Prevention of transplacental infection of bovine foetus by bovine viral diarrhoea virus through vaccination /J.R.Patel, R.W.Shilleto, J.Williams //Arch. Virol.- 2002.- V. 147.- V.12.- P. 2453-2463.
212. Paton, D.J. Prevalence of antibodies to bovine virus diarrhoea virus and other viruses in bulk tank milk in England and Wales /D.J.Paton, K.H.Christiansen, S.Alenius //Vet Rec.- 1998.- V. 142.- P. 385-391.
213. Paton, D.J. Pestivirus diversity /D.J.Paton //J. Comp. Pathol.- 1995,- V. 112.- P. 215-236.
214. Paton, D.J. Identification of herd specific bovine viral diarrhoea virus isolates from infected cattle and sheep /D.J.Paton, U.Carlsson, J.P.Lowings //Vet. Microbiology.- 1995.- V. 43,- P.283-294.
215. Paton, D.J. Evaluation of the quality and virological status of semen from bulls acutely infected with BVDV /D.J.Paton, R.Goodej, S.Brockman //Vet. Rec.-1989,-V. 124.-P. 63-64.
216. Pellerin, C. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities /C.Pellerin, J. van den Hurk, J.Lecomte //Virology.- 1994.- V. 203.- P. 260-268.
217. Perdrized, J.A. Bovine virus diarrhea: clinical syndromes in dairy herds /J.A.Perdrized, W.C.Rebhun, E.J.Dubovi //Cornell, vet.- 1987.- V. 77.- P.46-74.
218. Peters, W. Preliminary serological characterization of bovine viral diarrhoea virus strains using monoclonal antibodies /W.Peters, I.Greiser-Wilke, V.Moennig //Vet.Microbiol.- 1986.-V. 12.-P. 195-200.
219. Pocock, D.H. variation in the intracellular polypeptide profiles from different isolates of bovine viral diarrhoea virus /D.H.Rocock, CJ.Howard, M.C.Clarke //Arch.Virol.- 1987.- V. 94,- P. 43-53.
220. Potgieter, L.N.D: Experimental production of bovine respiratory tract disease with bovine viral diarrhea virus /L.N.D.Potgieter, M.D.Mecracken, F.M.Hopkins //Am J. Vet. Res.- 1984.- V. 45.- P. 1582-1585.
221. Prichett, R.F. Structural proteins of bovine viral diarrhea' virus /R.F.Prichett, Y.C.Zee //Amer. J. Vet. Res.- 1975.- V. 36, № 12.- P. 1731-1734.
222. Quade, MJ. Antigen-specific in vitro activation of T-lymphocyte subsets of cattle immunized with a modified live bovine herpesvirus- 1 vaccine /M.J.Quade, J.A.Roth //Viral. Immunol.- 1999.- V. 12.- P.9-21.
223. Radostits, O.M. Veterinary Medicine //A Textbook of the Diseases of Cattle, Sheep, Swine, Goats and Horses /O.M.Radostits, C.C.Gay, D.C.Blood. London: WB Saunders, 2000.- 9th Ed.- P. 1085-1104.
224. Radostits, O.M. New concepts in the pathogenesis, diagnosis and control of diseases caused by bovine viral diarrhea virus /O.M.Radostits, J.R.Littlejohns //Vet. Rec.- 1988.-P. 123-125.
225. Rebhun, W.C. Thrombocytopenia associated with acute bovine virus diarrhea infection in cattle /W.C.Rebhun, T.W.French, J.A.Ferdrizet //J. Vet. Int.
226. Med.- 1989,-V. 3.-P. 42-46.
227. Reed, D.E. Infectious bovine rhinotracheitis virus induced abortion: rapid diagnosis by fluorescent antibody technique /D.E.Reed, E.T.Bicknell, C.A.Larson //Amer. J. Vet. Res.- 1971,- V. 32, № 9.- P. 1423-1426.
228. Reed, D.E. A diagnostic survey of bovine viral infection in the northern plain states /D.E.Reed, J.M.Mattson, L.McCrow //Proc.Annual Meet. As. Vet. Lab. Diagn.- 1974,- V. 17.- P. 199-206.
229. Revell, S.G. Some observations on the semen of bulls persistently infected with bovine virus diarrhoea virus /S.G.Revell, D.Chasej, T.W.Drew //Vet. Rec.- 1988.-V. 123.-P. 122-125.
230. Ridpath, J.F. BVDV genotypes and biotypes: practical implications for diagnosis and control /J.F.Ridpath //Biologicals.- 2003.-V. 31.- P. 127-131.
231. Ridpath, J.F. The genomic sequence of a virulent bovine viral diarrhea virus (BVDV) from the type 2 genotype: detection of a large genomic insertion in a noncytopathic BVDV /J.F.Ridpath, S.R.Bolin //Virology.- 1995.- V. 212(1).- P. 3946.
232. Ridpath, J.F. Segregation of bovine viral diarrhea viruses into genotypes /J.F.Ridpath, S.R.Bolin, E.J.Dubovi //Virology.- 1994.- V. 205,- P. 66-74.
233. Ridpath, J.F. Phylogenetic, antigenic and clinical characterization of type 2 BVDV from North America /J.F.Ridpath, J.D.Neill, M.Frey //Vet. Microbiol.-2000.-V. 77.-P. 145-155.
234. Ridpath, J. Effect of passive immunity on the development of a protective immune response against bovine viral diarrhea virus in calves /J.Ridpath, J.D.FNeill, J.J.Endsley //Am J. Vet. Res.- 2003.-V. 64.- P.65-69.
235. Ridpath, J.F. sequence diversity and genotyping in symposium on bovine viral diarhhoea virus /J.F.Ridpath //A 50 year review /College of vet. Medicine; Cornel university.- 1996.- P. 39.
236. Riviere, Y. Adenoviruses: Genes, proteins and Expression /Y.Riviere.-Berlin, 1987.-P. 68, 525.
237. Rosen, L. Iemagglytination of adenoviruses /L.Rosen //Virology.- 1985.1. V. 5.-P. 574-577.
238. Rossmanith, W. Untersuchungen uber das Vorkommen von BVD-Virusinfektionen in niedero sterreichischen Milchviehbetrieben /W.Rossmanith, M.Deinhofer //Deutsch Tieraerztl. Wschr.- 1998.-V. 105.-P.333-364.
239. Shimazaki, T. Segregation of bovine viral diarrhea virus isolated in Japan into genotypes /T.Shimazaki, H.Sekiguchi, S.Nakamura //J. Vet. Med. Sci.- 1998.-V. 60.-P. 579-583.
240. Shimazaki, T. Efficacy of bovine viral diarrhea vaccine used in Japan against bovine viral diarrhea virus type 2 strain 890 /T.Shimazaki, N.Shigeyuki, T.Kunihiko //J. Vet. Med. Sci.- 2003.- V.65(2).- P. 263-266.
241. Shimizu, Y. Identification of the sequence on NS4A required for enhanced cleavage of the NS5A/5B site by hepatitis C virus NS3 protease /Y.Shimizu, K.Yamaji, Y.Masuho //J.Virol.- 1996.- V. 70,- P. 127-132.
242. Shimizu, T. Combined effects synthetic lipid A analog or bacterial lypopolysaccharide with glucosaminylmuramyl dipeptide on antitumor activity against meth A fibrosaracoma in mice /T.Shimizu //Int.Immunopharmac.- 1992.-V. 14.- P.1415-1420.
243. Snodgrass, D.R. Passiveimmunity in calf diarrhes: vaccination with K99 antigen of enterotoxigenic E. Coli and rotavirus /D.R.Snodgrass, L.K.Nagy, D.Sherwood //Infect. Immun.- 1982.- V.37.- № 26.- P. 586 -591.
244. Stott, E.J. A survey of virus infections of the respiratory tract of cattle and their association with disease /E.J.Stott, L.H.Thomas, A.F.Collins A.F. //J. Hyg., Camb.- 1980.- V. 85.- P. 257-270.
245. Straver, P.T. Neurological disorders, virus persistence and hypomyelination in calves due to intrauterine infections with bovine virus diarrhoea virus /P.T.Straver, D.L.H.Tournee, G.T.Binkhorst //Virology and epizootiology.- 1983.-V. 5.-P. 156-164.
246. Sulilvan, G.G. Genetic characterization of ruminant pestiviruses, sequence analyses of viral genotypes isolated from sheep /G.G.Sulilvan, J.G.Chang, R.K.Akkina //Virus. Research.- 1997.- V. 47.- P. 19-29.
247. Tajima, M. Attempt to discriminate between bovine viral-diarrhoea virus strains using polymerase chain reaction /M.Tajima, R.Kirisawa, M.Taguchi //Zentralbl .Vet. Med.- 1995.- V. 42.- P.257-265.
248. Tajima, M. Prevalence of genotypes 1 and 2 of bovine viral diarrhea virus in Lower Saxony, Germany /M.Tajima, H.R.Frey, O.Yamato //Virus. Res.-2001,-V. 76.-P. 31-42.
249. Tautz, N. Pathogenesis of mucosal disease, a deadly disease of cattle caused by a pestivirus /N.Tautz, G.Meyers, H.J.Thiel //Clin. Diagn. Virol.- 1998.-V. 10.-P. 121-127.
250. Thomas, P.C. Duration of immunity afforded by one dose of killed-virus bovine viral diarrhea vaccine /P.C.Thomas, R.H.Jones //Agric. Pract.- 1985.- V. 6.-P. 34-37.
251. Timothy, J. Genetic analysis of bovine viral diarrhea viruses from Australia /J.Timothy, F.Mahony, McCarthy //Vet. microbiology.- 2005.- V. 106.-P. 1-6.
252. Valle, P.S. Ten years of bovine virus diarrhoea virus (BVDV) control in Norway: a cost-benefit analysis /P.S.Valle, E.Skjerve, S.W.Martin //Preventive Vet. Medicine.- 2005.- V. 72.- P. 189-207.
253. Van Oirschot, J.T. Vaccination of cattle against bovine viral diarrhea /J.T.Van Oirschot, CJ.M.Bruschke, P.A.Van Rijn //Vet. Microbiol.- 1999.- V. 64.-P. 169-183.
254. Van Rijn, P. A. Subdivision of the pestivirus genus based on envelope glycoprotein E2 /P.A.Van Rijn //Virology.- 1997.- V. 237.- P. 337-348.
255. Vega, S. Antigenic Characterization of Bovine Viral Diarrhoea Virus Isolates from Spain with a Panel of Monoclonal Antibodies /S.Vega, R.Rosell, D.J.Paton //Journal of Vet. Ser. B.- 2000.- V. 47, № 9.- P. 701-706.
256. Vilcek, S. Genetic typing of bovine pestiviruses from England and Whales /S.Vilcek, T.W.Drew, A.McGoldrick //Vet. Microbiol.- 1999.-V. 69.- P. 227-237.
257. Vilcek, S. Molecular characterization of ovine pestiviruses /S.Vilcek, P.F.Nettleton, D.J.Paton //J. Gen. Virol.- 1997.- V. 78.- P. 725-735.
258. Vilcek, S. Bovine viral diarrhoea virus genotype 1 can be separated into at least eleven genetic groups /S.Vilcek, D.J.Paton, B.Durkovic //Arch. Virol.-2001.-V. 146.-P. 99-115.
259. Von Schmitt, D. Untersuchungen zur Verbreitung von BVD-Virusinfektionen bei Schalenwild in Bayern /D. Von Schmitt, G.Wittkowski //Tierarztl. Umsch.- 1999.- V. 54,- P. 284-288.
260. Von Marschang, F. BVD/MD. Schutzimpfen wozu /F. Von Marschang //Tierarztl. Umschau.- 1995.-V. 50,- P. 554-557.
261. Von Marschang, F. Pathologische Aspekte im BVD/MD-Kuhbestand /F. Von Marschang //Tierarztl. Umschau.- 1994.- V. 49.- P. 412-414.
262. Von Buckner, R. Mucosal Disease bei einem Rind unter Isolations bedingungen /R. Von Buckner //Tierarztl. Umschau.- 1995.- V. 50.- P. 394-396,.
263. Von Buckner, R. Klinische, serologische und virologische Befunde bei der Mucosal Disease mit acutem, subacutem und- chronischem^ Verlauf /R. Von Buckner, H.-D. Grunder //Tierarztl. Umschau.- 1994.- V. 49.- P. 619-623.
264. Weber, H. Die virus diarrhea mucosal disease der rinder und ihre medizinisohn dubien in stadium kbarsteblung /H.Weber //Pract.Tierarst.- 1975.-Bd. 56, №3.-S. 142-145.
265. Wengler, G. Flaviviridae. In Virus Taxonomy /G.Wengler, D.W.Bradley, M.S.Collett //Sixth Report of the International Commitee on Taxonomy of Viruses.- 1995.- P. 415-427.
266. Wensvoort, G. Production of monoclonal antibodies against swine fever vims and their use in laboratory diagnosis /G.Wensvoort, C.Terpstra, J.Boonstra //Vet. Microbiol.- 1986.-V. 12.-P.101-108.
267. Whitmore, H.L. Inoculation of bulls with bovine "vims diarrhea vims:excretion of virus in semen and effect on semen quality /H.L.Whitmore, B.K.Gustafsson, P.Havareshti //Theriogenology.- 1978.- V. 9,- P. 153-169.
268. Wigland, R. Classification and epidemiology of adenoviruses Adenovirus DNA7 /R.Wigand, T.Adrain, Fd.W.Deerfler//Vijnoff Publ.- 1986.- P. 409-441.
269. Wigland, R. Adenoviridae: Second Report /R.Wigland //Interviriology.-1982.-V. 18.-P. 169-176.
270. Wolfmeyer, A. Genomic (50- UTR) and serological differences among German BVDV field isolates /A.Wolfmeyer, G.Wolf, M.Beer //Arch. Virol.1997,- V. 142.-P. 2049-2057.
271. Zaghawa, A. Prevalence of antibodies to bovine viral diarrhea virus and or border disease virus in domestic ruminants /A.Zaghawa //Zentralbl. Vet. Med.1998,- V. 45.-P. 345-351.
272. Zhang, G. Cell death induced by cytopathic bovine viral diarrhoea virus is mediated by apoptosis /G.Zhang, S.Aldridge, M.C.Clarke //Journal of General Virology.- 1996.- V. 77.- P. 1677-1681.