Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Стрептококкоз нутрий

МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Московский Государственный университет / прикладной биотехнологии

На правах рукописи

Есепёнок Виктор Арсентьевич.

СТРЕПТОКОККОЗ НУТРИЙ: ДИАГНОСТИКА, МЕРЫ БОРЬБЫ

И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА. £

ли

16.00.03,- ветеринарная микробиология, вирусология, ^4рй0|Мрлогйя, -микология и иммунология^. 0 у

И

/

1

ДИССЕРТАЦИЯ

В ВИДЕ НАУЧНОГО ДОКЛАДА НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА ВЕТЕРИНАРНЫХ НАУК.

Работа выполнен» в научно-исследовательском институте пушного звероводства и кролиководство им. В.А. Афанасьева и в Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Н.Т. Татаркнцев (ВГНКИ) доктор ветеринарных наук, профессор Д.И. Скородумов (МГУПБ)

доктор ветеринарных наук, профессор В.А. Бурлаков (МГАВ-МиБ)

Ведущая организация: Всероссийский и /чио-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства им. Б.М. Жит-никова, г. Киров

: / /ч

f'' Защита состоит,- . i года

час. на заседание " :серт a-z Д.063.46.03.

при Московской Госу<, решен-.. ■ ríeme приклад-

ной биотехнологии (¡093!? Moer па, 33)

С диссертацией можно ознакомиться ^ библиотеке института.

Автореферат разослан С&Ч _

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеривариых наук

1998 г

■y'J.í у И.Г. Серегин

i ! ¿HH

Q ^

é

и

I. Общая характеристика работы

Диссертационная работа представлена в виде научного докладам является результатом 16-летних исследований по изучению клиникозпизо-отологических характеристик стрептококкоза нутрий, выяснению этиологического агента, усовершенствованию диагностики, и разработке общих и специфических мер борьбы и профилактики данной болезни. Работа выполненав соответствии с инициативной, хоздоговорной и государственной программами для решения научно-технической проблемы задания.

1.1 Актуальность проблемы. Стрептококков сельскохозяйственных животных, птиц, пушных зверей и грызунов остается недостаточно изученной инфекцией, энизоотологически не контролируемой, в результате животноводству наносится огромный ущерб. По данным Долганова В.А. (1988) в хозяйствах заболевает сгрептококкозом до 75% телят, с летальным исходом до 65%.

Патогенные стрептококки довольно широко распространены в природе и их относят к убиквитарныи микроорганизмам, способным как самостоятельно, так и в ассоциации с другими мнкрооргнизмами вызывать всевозможную массовую патологию (аборты, метриты , маститы, олфалн-ты, пневмонии, сепсис, энтериты, циститы, лимфадениты, артриты и др.). Широкому распространению стрептококкозов способствуют слабая изученность этиологической структуры болезни и не разработанность'надежных средств ее профилактики. В связи с этим остается актуальной ветеринарной проблемой изучение эпизоотологической значимости кон^-кретных серогрупп стрептококков, изыскание надежны* методов их идентификации, атакже средств специфической профилактики стрептококкозов.

Впервые обнаружил стрептококки в крови жешц ииы СогеаРеН? , (1869). Роль стрептококков в возникновении мыта лошадей устанр»ил Я1УоИа(1873). Ву1го1 (1874) обнаружил стрептококки в гнойном эксудате при рожистом воспалении, а через 5 лет Пасгеру (1879) удалось выделить к впервые культивировать стрептококки на искусственной питательной среде.

В бывшем СССР стрептококкоз телят впервые установил Дышелес-ский С.Н. (1932). Чепуров К.П. (1943) разработал и внедрил формол-яакцину, а Малявин А.Г. (1956) предложил ассоциированную вакцину против диплококкоза, сальмонелеза и пастерелеза. В последние годы большой вклад в изучение эпизоотологии и в разработку ¡средств специфической профилактики стрептококкоза внесли российские ученые: Ас-В.К. (1990); Панин А.Н. (1992); Сансыбаев А.Р., Юров К.П.(1993; п'сгроев М.П., Юров К.П. (1996).

Современная классификация стрептококков представлена в 9-ом издании "Руководства по систематике бактерий" (Bergey 1986 г. том 2) и наиболее полно охватывает всех представителей рода Streptococcus.

Согласно этой классификации, все стрептококки делятся на шесть категорий, на оснований - их обычных мест обитания: гноеродные, оральные, молочные, энтерококки, анаэробные и другие стрептококки, объединяющие 29 видов.

Огромна и социальная значимость стрептококков. По данным Винсент А. Фишетти (1991) ежегодно только в США наблюдается от 20 до 30 млн. случаев инфекций, вызываемых стрептококками группы А. В это время в Индии около 6 млн. детей школьного возраста страдает ревматическими заболеваниями сердца.

Наши исследования посвящены изучению стрептококкоза нутрий. Нутриеводство - молодая отрасль животноводства. Нутрия (Myocastor Coypus Molinä) - крупный полуводный грызун, обитающий в естественных, условиях в субтропических странах южной Америки. Впервые был завезен в СССР в начале 30-х гг. и тогда же были организованны первые совхозы с клеточным разведением нутрий. В настоящее время этих растительноядных животных разводят повсеместно, так как большкм спросом пользуются ценные шкурки и диетическое мясо. Серьезным препятствием на пути развития нутриеводства является стрептохоккоз -болезнь, наносящая хозяйствам огромный экономический ущерб за счет падежа молодняка и абортов у самок во второй половине беременности, запрещения продажи зверей, выделения дополнительных средств на проведение лечебно-профилактических мероприятий. Ветеринарная практика не обладала специфическими средствами профилактики стрептококкоза. Более того, стрептококкоз нутрий оказался слабо изученной формой , а в отечественной и зарубежной литературе имеются лишь несколько сообщений по отдельным вопросам эпизоотологии (Baldelli В., 1956; Cerrutig, 1956; Абовян A.B.,1981). Поэтому актуальность работы не вызывает сомнения.

1.2 Цель работы - изучить распространенность болезни и этиологическую • значимость различных серогрупп стрептококков, разработать методы диагностики, меры борьбы и специфическую профилактику стрептококкоза нутрий.

Основные задачи исследований:

- изучить эпизоотическую ситуацию по стрёптококкозу в нутриводческих фермах;

- 'изучить клинические и патологоморфологические изменения при стрептококкозе нутрий;

- изучить свойства патогенных стрептококков, выделенных от нутрий;

-1 разработать методы диагностики и борьбы при стрептококкозе нутрий;

разработать средства специфической профилактики стрептококкоза;

- разработать систему мероприятий по борьбе со стрептококкозом нутрий.

Научная з новизна. Впервые изучены основные характеристики клинического и эпизоотологического проявления стрептококкоза у нутрий на территории' СНГ. Установлено эпизоотологическое значение стрептококка серогруппы С, при массовом поражении стрептококкозом всех возрастных групп нутрий. Экспериментальная инфекция у нутрий клинически и патологоморфологически не отличается от спонтанного стрептококкоза, протекающего остро и иодостро, в септической и легочной формах.

Дано научное обоснование систем^мер борьбы при стрептококкозе нутрий.

Научная новизна работы подтверждена следующими документами:

- авторское свидетельство № 1506617 "Способ профилактики и лечение при стрептококкозе нутрий " от 8 мая 1989 года.;

- справка о депонировании штамма микроорганизмов " Штам К-ДЕП" представитель стрептококков серогруппы С, предлагается для производства вакцины против стрептококкоза нутрий, преднаначенный для специфической профилактики стрептококковой инфекции у нутрий" ВГНКИ от 28 апреля 1993 г.;

- ПАТЕНТ № 2097422 на Изобретение "Штамм бактерий Str. Zooepidemicus, используемый для. изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против стрептококкоза нутрий" от 27 ноября 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099081 на Изобретение "Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий " от 20 декабря 1997г.;

- ПАТЕНТ № 2099084 на Изобретение "Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий" от 20 декабря 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099083 на Изобретение "Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий" от 20 декабря 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099083 на Изобретение "Вакцина против стрептококкоза нутрий " от 20 декабря 1997г. v

Практическая значимость. Выделены штаммы стрептококков, циркулирующие в нутриводческих хозяйствах. • й изучены их морфологические, биохимические, антигенные и иммуногенные свойства, доказана патогенность для нутрий и лабораторных животных (белые мыши, морские свинки). Штаммы селекционированы и явились

производственными для изготовления диагностических сывороток и вакцин:

- вакцины против стрептококкоза нутрий формодгидроокись-алюминивой,

вакцины против стрептококкоза и - пастереллеза сапонииформолгидроокисьалюминивой.

Разработана и внедрена система мер борьбы со стрептококкозом нутрий, включающая:

- лабораторную диагностику стрептококкоза, обеспечивающую идентификацию возбудителя до серогруппы;

- меры общей и специфической профилактики болезни;

- мероприятия по ликвидации заболевания.

Перечисленные мероприятия опробированы в широкой производственной практике и положены в основу, соответствующих документов, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода Р Ф.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: отчетных конференциях сотрудников НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева (1982-1985 г. г.); отчетных конференций Московской ветеринарной академии, им.К.И. Скрябина (1986-1996 г.г.); совещании отделения ВАСХНИЛ по Нечерноземной зоне РСФСР "Интенсификация животноводства и кормопроизводства в Нечерноземной зоне РСФСР" (18-19 ноября 1986 г.) часть III; конференции, посвященной 70-летию МВА "Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки животноводства" (24-26 ноября 1989 г.); Всесоюзный научно- технической конференции "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной клеточной инженерии в ветеринарной медицине"(5-7 декабря 1990 г., Г. Нижний Новгород); Третьей Всесоюзной конференции по эпизоотологии. Новосибирск (24-26 сентября 1991 г.); Всесоюзной научной конференции "Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве", г. Витебск (11-12 сентября 1992 г.); Второй международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля <сельскохозяйственной продукции". Девиз: ' "Здоровое животное - здоровая пища - здоровый человек ".

Разработки по материалам диссертационной работы демонстрировались на ВДНХ СССР и удостоены Золотой медали '' (удостоверение №542 от 10; сентября 1991 г.).

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 30 работ. Получены: одно авторское свидетельство и пять ' ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: результаты изучения этнологщ^ркой структуры стрептококкоза нутрий, создание средств и системы мер борьбы при стрептококкозе нутрий в Российской Федерации.

Объем и структура научного доклада. '...,.

Научный доклад изложен,jja,f,3Q. страницах, содержит 5 таблиц и включает следующие разделы: общая характеристика работы, материалы и методы исследований, результаты исследований, выводы, практические предложения, список работ, опубликованных по теме. ,диссертационного доклада.

Собственнее исследования.

Материалы и методы.

Работа выполнена в 1981-1997 г.г. в отделе ветеринарии Всероссийского научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства им. Афанасьева и на кафедре эпизоотологии Московской Государственной .академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. ,'„,,

Эпизоотологические исследования проведены в 14 нугриеводческих фермах Московской и Тамбовской' областей, Краснодарского и Ставропольского краев, и в бывших республиках СССР: Армянской, Казахской, Эстонской, Кабардино-Балкарской и Татарской АССР, в которых под наблюдением находилось около 400 тыс. натрий.

В каждом хозяйстве анализировали эпизоот><ггическую ситуацию, условия содержания и кормления, данные производственной деятельности. Климатические исследования с учетом течения и формы стрептококкоза дополняли патологоанатомическими и патогистологическими исследованиями материалов, полученных от павших и специально убитых нутрий в динамике ¡заболевания. Патологоанатомическому исследованию подвергли 415 животных.

Патологоанатомические вскрытия, исследования и взятия проб материала для гистологического исследования проводили по общепринятым методикам с учетом анатомических особенностей организма нутрий (Bergnoff P.C., 1989). Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Срезы окрашивали гемотоксилинэозином. Исследовано 156 срезов из внутренних органов < (селезенка, почка, печень, лимфатические узлы).

Материалом для бактериологического исследования служили головной мозг, кровь из сердца, легкие, печень, почки, селезенка, абортированные, плоды. Всего было исследовано. 661 труп нутрий, из которых 101 - щенки и 560 - молодняк после отсадки.

й

Выделение и исследование стрептококков' вели с использованием мясо-пептонного бульона (МПБ), мясо-пётонного агара (МПА), полужидкого агара (ПЖА) ,кровяного агара (КА), среды Китта-Тароцци. Во все среды добавляли 0,5-1% глюкозы. Эту работу проводили согласно "Рекомендаций по индикации и идентификации стрептококков" (1976) и "Методических указаний по лабораторной диагностике Стрептококкоза животных" (1983).

Наличие инфекционного агента в исходном материале выявляли путем высева из материала на вышеуказанные питательные среды. Посевы инкубировали в термостате при 37-38°С в течение 24 час. Учитывали характер роста на всех использованных средах.

Морфологические свойства выделенных стрептококков изучали путем микроскопии мазков, приготовленных из различных питательных сред и окрашенных по Граму. Патогенность чистых культур стрептококков, выделенных от нутрий , проверяли на белых мышах ,вводя им внутрибрюшинно 0,2 мл 18-24 - часовых культур, на морских свинках (доза 0, 5 мл).

Для определения вирулентности использовали белых мышей, которых заражали 18-20 - часовыми культурами, внутрибрюшинно последовательно десятикратными разведениями исходной (10 м.т./мл) взвеси стрептококков в физиологическом растворе в объеме ОД мл. Среднюю смертельную дозу

(1д 50) микробов определяли по методу Спирмена-Кербера ( Закс Л., 1976).

При дифференциации стрептококков, выделенных из патологического материала нутрий, использовали тесты: 11) выявление гемолитической активности на 5% кровяном агаре;

2) рост в глюкозасывороточном бульоне в присутствии 10 и 40 % желчи;

3) рост на среде с 6,5 % поваренной соли (ИаС1);

4) рост в натуральном молоке;

5) обесцвечивание молока с 0,2% раствором метиленовой сини;

6) рост в желатине;

7) рост при 10 и 45°С

8) рост в среде с рН 9,6;

9) определения терморезистентности;

10) выявление ферментации на цветных средах с лактозой, глюкозой, мальтозой, сахарозой, арабинозой, сорбитом, маннитом, дульцитом, инозитом, галактозой, рафинозой, ксилозой.

Дифференциацию стрептококков от стафилококков проводили по каталазной пробе и способности стафилококков расти на средах, содержащих 10% хлорида натрия (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, 1982; "Методическое указание по лабораторной диагностике стрептококкоза животных", 1983).

Серологическую дифференциацию выделенных культур стрептококков осуществляли с помощью реакции кодьцепреципиТации (РКП) по методу Lencefield (1928, 1933) в модификации института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалея АМН СССР и в реакции диффузной преципитации по методу Оухтерлони (1948) с помощью изготовленных нами преципитирующих иммунных сывороток.

С целью серологического группирования стрептококков, выделенных от нутрий, мы получили группоспецифические антистрептококковые преципитирующие сыворотки путем иммунизации кроликов. Использовали кроликов породы советская шиншилла, массой 2,5-3,5 кг. Антиген для иммунизации кроликов готовили из эталонных штаммов стрептококков групп А,В,С,Д и из пяти полевых, свежевыделанных штаммов. Сыворотки крови получали по общепринятой методике, расфасовывали в пенициллиновые флаконы по 0,5 мл и хранили до использования при температуре - 10 - 18°С. -

Для получения высокоактивных и специфических сывороток в сравнительном аспекте, антиген для гипериммунизации кроликов готовили по методу, предложенному Москаликом P.C. (1974) и по методу, описанному Бородюком К.А. и Лямпертом П.М.(1986). Также в сравнительном аспекте испытали 4 схемы гипериммунизации, отличающихся количеством и качеством вводимого антигена, числом инъекций и ,интервалом между ними.

Активность и специфичность полученных гипериммунных сывороток была испытана в перекрестных реакциях преципитации с антигенами из эталонных штаммов разных групп стрептококков.

Групповой полиса