Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Реактогенность и иммуногенные свойства инактивированной вакцины против стрептококкоза нутрий

Государственная комиссия Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ им. К. И. СКРЯБИНА

На правах рукописи

Инсуасти Паредес Карл ос Артуро

УДК 619:616.98:579.862.1:636.22/28

РЕАКТОГЕННОСТЬ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА НУТРИЙ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

М О С К В А — 1 990

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К. И. Скрябина.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор КОНОПАТКИН А. А.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией ВГНКИ ТАТАРИНЦЕВ Н. Т.

2. Кандидат ветеринарных наук,' доцент СКОРОДУМОВ Д. И.

Ведущая организация: научно-исследовательский институт пушного звероводства' и кролиководства.

Защита состоится « » 1990 г. в часов

на заседании специализированного совета К. 120.36.05 по присуждению ученой степени кандидата наук в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К. И. Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МВА.

Автореферат разослан „_"_;_1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета ФЕДОСЕЕВА Т. Н.

I. ОЗЗГаД ХШМЗРИСТККА FABÜÍU

Актуальность темк, Нугркозодсфзо л пшзк молодея отрасль Езотноводстаа в СССР» Ну-грзя • (Hy^i^i« Coyyu* Molina) крупный лолузоди;й грызун» обптаю^й s зо&годаших усдовиях а субтрошпгск:^ сгранга К>'?:гоЗ Дыерп^зг-. <5им завезен в

ЗССР в на чело 30-х гг.,, и тогда де бнда* грганязованк первые cosco зы с клегоччим разведена®« иутр:й » ^йргязский" в Азербяй-дане и пСрБэрхщс5лй:г в Кродящрсзод пело.

.Совегскяй Соз^ч es ЮГДЗ г., стал сско;1 .крупной: з rape страной, зашлакщейся раззедегаш пуашх зверзй - корок, собачей, лнегц, ¿есцев, хорькоЕ, г:то'"ов5 пугрвй. Егогодао в стране заготавливается около 15 млн,, гхх зкурод, За рубеазм зэероводетвем янген-ísdko здтшажея в стрпнах Скандинава! " Скверней 4марз1кн, б Ьтхщцщ, Дшгнд., Франция, terae, Норэ&пзц йадерлан-

rax, ФРГ f Японца, ГДР у. Чеяооловакзк,. ¡Огосйэвел,, Погода,- Болгарии-

Серьегзнхг? апзпягсгвие?* its путл рзз.гжхк Еугр^йБодсгзй з г с"4 V« -г f с тчяоисоз - оойвгзь бак^есявльняН

4 о оч- » ** , f •» зяп'^ггсалг.шй экета^ттосгна

V"'' сг i т * лосло o?os;u"H z яоор^о- само'*

о -»со. 1 m - vi** геярвщеанг: идогглродакл

$ico*n • . i и 73 аа нрогзздэтт'; лочгйио-црофз»

о с , т «л оз нутрий оставался шдосту-

i в»', и i чг "легругцил о ^йропрнл^кх по щ».

г-tí-iío - 15" ' "и ч ЩТОКГ!* йкз ууз-зргдййз

.1 .'грсисл С > ■> > г., з скецяфгческке ерезс-гач ¡реерлзвзжп: оякетк нсразрясотзгаяаЕГ.

В 1281 г, л Е:К зв,?пов'\дотб^ л хфооко.^одег;^ с'ила иачкга isjpadoffixa ннзкхлзгфовежой закщяа врсизз «fpctnoxoicsosa яу?-¡зй (Есспенсл 2,А» it др*К Б резулыато йда$ no.-:y*io~c такая :акш5ш и долаззяз лргта^гигал^кая ъпгчожзспь к хг^алгщяц ЕЙ (изобретите 5 3931399Д5t I2Í-6D7 оз 03 ДО .64*;, Наставал istícia восэдгяа кзучаш® ревк jrorszmc-ffn: ж п«згкс?жюдас ceoücsb Ешйкезрозсушоз ьаздгк протав схрептоЕоякэяс аухркй,

I» Изучать общго состояние оргашпда nycpt'S я«?, взедеяго гкцдин (повадеиас, ^е^тггора^ура тега, частота ву^ез а днхакэ!,

аппэтгя» язаенеяне масса тела) к ее безвредность для молодняка е боре:лзянн:с нутрнй,

2, Изучкгь шрюодоютескЕй сослав кроны (количество гемоглобина, эритроцитов, лёйкохщтов и лейкоформула) в динамике формирована юмунияета. ■ ■

3. Изучеть фагоцитарную активность а интенсивность нелтрофа-.~ов крозз з отношении возбудителя стрептококкоза .нутрий (стреп-

5юк0езе 1'ругшы с).

4. В дааннкв Ештунсгенеза проследить количественные вгае-ненгя Т- и В-саю^оддаов» цгтоморфологическу® реакцию лтафоузлов л селезенка:, а гавгэ накоплена^ в сыворотке крови прецЕПЕжрую-цгю аататед-

5, Проворзгь состояние ЕьиуЕжте^а у- вакцинированных гавот— Ш2.з различию срока после шы/назацка путем экснеримеБтальног вараконЕЕ' вкрулеатио£ аультурой возбудителя етрептококкоза луг-

,рпй, (сзтоптакокки грушиа С).

• .Няудягя новизна,» Ноучззк -.рэактдГбНЕОсгь 2 тчуногевныэ своё о-гга гзшктишровакяо! ЮА~вакцина -аротЕВ .стрентококкоза вутрЕй, заерзав раарабр?ашо£ ъ СССР. Установлено,что биопрепарат бззвр дэн а слабо сзактох'знеЕ,,' шзазает умеренный лейксцЕтоа и вейтро ^гагаЗГсдаг влево. Ижяунологаческгя церзсаройз® проявляется •02гчетлнзо£ фагоцмаркоё реакцшё, увеличением количества • В-дак-фацнтоа» кролгйсрацзсй е да££ерэнцировкой ¿леток плазмоцктарног ряда в •дазфозяческпх узлах и селезенке, накоплением в савороткс крови •прецЕшганов. В результате двукратная вакцинация с -интервалов -в 7 дней обзспзчжвала форхлнрозаяае шжунатета у нутрий цсодолхш.'ельностью до б месяцев (срок наблзщоаня)..

Пэдзуетхокак деннос-.та работн- Безвредность, слабая реакто-генноеть г достаточно виракеннаа икмуноггнность вакщтнн в лабораторных условиях является щмшш доказательстве« защитной (ЕхзгуЕоаогпческоё) эффективности разрабатываемого бдопрзпарата и■основой для его апробации в производственных условиях зверо-.. зодческих ХОЗЯЙСТВ.

: ' ' Доеа вакцган, яратаасгь вакцинации и сроке ревакснкацда-гггтлзтся. базовыми кри-хер&аш рззработки схеш прагеневия икая-^"хоЕакной вакцины против етрегоококкоза иутриЕ с профшак-цагш.

Лпгобэдш работе« Оеяоы-ые иолоаени« дзссертэции была до-лоионн е обвуздевн на отчотшх Еаучанх конференциях МЖ в 1883

з

539 гг., на заседаниях ученого совета Ш. в 1986-1989 гг., :3 лек-сахедральнои совещанан кафедр инфекционного профиля АША 1990 г.).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертационных исследований опубликовано 2 стргьи и 2 находятся з [ечатя.

• рб'ьегл и структура диссертации. Диссертация азложена на ¡трагащах магаинсписного текста 2 состоит из введения, обзора нтературц, собственных исследований, обсуждения полученных »езультатов исследований, выводов, практических предложений, шнека литературы. Работа содержат 13 таблиц,32 рисунка, •низок литературы включает 169 источников, из них - 86 совет-газ: з 33 иностранных.

2, СОБСТВЕННЕЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материала к метода

Работа вцежена на кафедре эпизоотологии Московской зете-■днарной акаде*.:ш:1 ,К»И .Скрябина з IS85-IS89 гт.

Методическую разработку поставленных задач.вели с позиций ••озретенвоЗ вегераяариой иглмуиологаи (Холяков Я.Е» ,1988,J.Tiaard, :Э87). Для этого подобрали ряд общих и специфических методов наследования, при пшоад-которах мопео "было наиболее полно су-•дта о реактогешшх, антигенных и ипуногеюшх свойствах вав» rinn, изменениях гуморальных я клеточных факторов загати ор-•ашкааа лабораторных кавотных и нутрий з динамике Еакщшацщ, ! такке о состоянии ииглушгеета к стрептококкозу.

Кшшсо-гзматологический метод: а) этническое наблюдение за аязотйимп о ежедневник »знием тешературн тела - до закцанацни и з течение 80 дней ¡осле вакгщнацга а контрольного заражения;

о) изучение морфологического состава крови g определажеь-т

хшгеества гшоглобиш (з v%), эритроцитов {илн/мкл), лейкоцитов (тыс/ыкл) ц лейкоцитарной форауды (Кудрявцев A.A. я др., :эб9).

!, йдшюлогизвекяе матодц:

а) определение фагоцитарной реакции неЁтрофилов крови по тетодаке Берман В.М., Славской H Л. (IS58), be-(.rer R. et al. (1907)

в шдафзкапап Клзчшюва 1,5, (1967).

Дйе о той peaigiae использовали 500 шнЛгл мккробяок. зэззеи суточной бульонной культура стрептококка z I га cEss&it гзаа-раннЗЕрованной яровк а в течение 20 мле в^церягздлк в тгрыостг-хе tips 39°С. Ез лейлИщгаркоЁ пленки, полученной иугеы цгнтрн-футнрованиа смеси в теченне 5 ш при 3000 обДлш s двукратного отмываннг осадаа 0,85,? раствором хлорида негряя,. гого&хшг мазкы, которнэ. факсцровалк метанолод! в resease 10 шк и окгз-игвали. смесью азур-возЕЕВ«. Определяли фзгоцагврную ак^вноггъ

(ФА), фагоцитарную натексязность (ФИ) к елдз&ц заврошжжсг:« фагоцих-оза. Порвварнвасщую способность опроделялк у экеплакпг-рованннх ЕайтрофЕлоз после гякубащш ах нэ агара £ гречанка 90 айн в условиях термостата (33°0), после которого с поизрл.--HocsH.ifflA хохоаюш ыазки-охпечаткг, гёиксжровгяи е окрагова® по шЕзохшсааной методике.

б)_олродзлоняз .количества е соотаоашж Т-д Вглн-г{.ох;ров . кровЕо Их ьндалешаэ проводила Hi! градаенге am'ECrova &и:оль--Варогоашзка(Soya A-Scaieo 1 J*СИп.Is--о.Tnvet;i.-1968sv»2 <»o-sppl 6? Плотность храдЕен-га 1,030 стабкнгхзЕроБаж водой к 60& раствором верографша,

ОяредеденЕе. содаргзЕзя Г-*. * г<чл и a i i it гаянсго рогез^ообразсзанжс с ^ i "т" - t

1972), основанного на несл ц. .ir'iOv, i w^w-' . < - * ч рана :> поверхностной иелбр'i о '-l с пи »

ток" ''Ха-ь'Г<>ег!| С.В,, ISo1) 1 с <\Ь t . ' i" j фвзнодсгаческш раствором л.' xquzlc ¡гвд f„j с „<■•> i рана швубгроаала 40 шта при +-25°С в присутствие Хкзл.хе: фофлоте а I кеилн эибраовальаой сызорстки телят,. .'iotoo^d spes-варитедьно адсорбировала эритроцита:,ta барана so язбвгзшгк ее>-

саецифкч&ской ахтлзквнащи. £злс|зофлот был аспользсван ддк бодав длительного предогвращзяяя оседакЕЕ клеток, а ЗА;6р:аок=.д^ну)о сыворотку - для лодлернанш кквяедбягздсьностЕ клеток с

Взвзсь .клеток оставляли на 12 час в тгюдальккке npz. -и1с0. фаяоаровзлЕ 0,6% расчворога глятараладехвда Х0 отдавала фигаолохетзакш раствором 10 мен при ISC0 со/ггин.: Затед то-товеля мазка, которые шеушвадз на воздухе, факсдровздя т иетанолв 10 ш, и окрашззлк по Ра^овскоау-Гтагв« Поес^ут ютато.к Ероводаия. под световая гзи-фоскочсга.

ПокулЕцг» В-®аф0ДЕГ0Б определяли ;летодш кокйдсавауарло го розеткоойразоваЕЦЯ ( Bianco С. eS al.JSTO), чего гс-еобеле ЕАС-кс1.шлекс, состоящей нз эрзтроцетоз озргна, антя-

f

сыворотки к ним и комплемента.. В качестве комплемента исполь-" зовали сыворотку морской свинки.. Равные объема отмытых трижды физиологически?,! раствором лимфоцитов .и ЕАС-комплемента инкубировали 40 мин при +37°С. Приготовление м&зков и подсчет клеток проводили так ке, как и при определении Т-клогок. 0

в) .серологическое исследование с использованием двойной радиальной реакции диффузионной преципитации (РДП).. Сыворотки получали по общепринятой методике и хранили в морозильной камере при -5°С. Реакцию ставили одновременно со .всеми сыворотками с использованием одной серии приготовленного антигена — солянокислого .экстракта стрептококков. Убедившись в стерильности приготовленного антигена (в течение 10 суток), проверяли .сыворотки на наличие антител в ¡РДП. Контролем специфичности служили нормальные сыворотки, полученные от клинически здоровых морских свинок и нутрий, и гипериммунная кроличья сыворотка на.групповой С-полисахарэд. Результаты оценивали .непосредственно по вланному препарату не ранее 24 часов ^-течение • 2-3 суток.

3. Цитологические метода

Определяли плазмоцитарнне клеточные реакции в селезенке и лимфоузлах .(подчелюстных, бронхиальных). ¡Латериал фиксировали агшсоетыо Карнуа в течение 3-4 часов, обезвоживали в спиртах от 70° до 30° в течение 24 часов, затем заливали его в парафин'по общепринятой методике. Из парафиновых блоков на микротом? •'•1С-1 получали гпстосрез'а толщиной 4-6 мкм, окрашва-ли ло Возив и .тематоксилин-эозиногл (Покровская ;.1.!1., 1965.; Меркулрз СЛ., 1969).. " "'

4. Контрольное заражение животных с целью проверки иммунитета к возбудителю стрептококкоза. проводили путем зараяенш опит1Шх (вакцинированных) и контрольных (интактных) животных 10 м50 вирулентным стрептококком группы С штамма "К". В опытах при определении вирулентности названного штамма суточнуй ' бульонную культуру (2,0 млрд.м.г./мл) разводили в 0,85$ растворе хлористого натри;! до предела, достаточного для заболевания и падежа хотя бы одного животного (максимальное рачв&де- • ние). Из каццдй пробирки (после разведения) заракзля по 6 морских свинок. Врали животных-аналогов по живой массе в 6-месячном возрасте и заражали внутрибршанно в объеме 1,0 мл. Одновременно ставили контроль на стерильный мясо'пептонный бульон

и физиологический раствор.

Используя вышеописанную методику, проводили контрольное

заражение нутрий суточной бульонной культурой стрептококка в объеме 1,0 мл (2 ылрд/мл). Исследовали на 21-й, 30-й дни и затем через 2, 3, 4, 5 и 6 изо. после вакцинации (по 3 гм» в 'кавдай срок).

5. 3 зависимости от поставленных задач в нашей работе использовали следующие ¿микроорганизмы и биопрепараты';

а) инактивироваянуи вакцину против стрептококкоза нутрий, приготовленную на кафедре эпизоотологии ЦВА доцентом Ecenei-ii^ В.А. совместно с нами согласно "Временной инструкции по изготовлению и контролю ГОА-формолвакцина против стрептококкоза нутрий". Вакцину стандартизировали по концентрации стрептококков, которая составляла 6,0 млрд.м.т./мл;

б) эпизоотический' игаш стрептококка серогрулпы С, изолированный в 1981 г. от больных стрептококковом нутрии в зверосовхозе "Кощаковсюш" Татарской АССР. Этот штамм стрептококка депошрован в Институте ревматология А.'Ш СССР от 22 июня 1984г.

в) солянокислый экстракт стрептококков,, содержащей групповой. С-полисахарид;

г) гиперишунную кроличью сыворотку, полученную на' групповой -С-полисахарид;

д) нормальную саворотку крови, полученную от клинически . здороанх морских свинок и нутрий, не содержанию йммуиотела к стрептококкам группы С.

Экспериментальные исследования'били проведете на нутриях -60 гол., 70-ти морских свинках и 190 белых мышах. Пробы дли • гематологического и серологического исследований у морских-свинок брали до вакцинации животных и затем на 7-й, 14-й, 21-й, 30-й и 60-й дни после первого введения биопрепарата, а у нутрий - до 6' месяцев. Кроме того, у нутрий определяли количество •Т- к В-ликфоцитов до вакцинации, на 7-й, 14-й и 21-й дай после введения биопрепарата. В результате было взято 1580 проб крови В эти у.о сроки проводили убой вакцинированных животных (нутрий) и взяли 120 проб материала (селезенка, лимфоузлы)'для цитоморфологического исследования. Цифровой материал подвергнут статистической обработке на ЭВМ с целью определения его достоверности по методике Лакина Г.Ф. (1968).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3,1. Безвредность ГОАнТтовмолвакнинн для лабораторных яивотннх

Определяли безвредность оштной серии J5 5. ГОА-форглолвакцин: путем внутрибрюшинного введения нарастающих доз препарата до

4-5-кратного превышения .отлуногенной дозк (от 1,5 и.*. до 6 млрдл.:«т„) За аивотнши зели .кжничвсжов наблюдение в точение 10 дней. Вамгэду ясгштзли в трех объемах: для шшей -0,25 мл, 0,5 мл и 1,0 мл (от 0,Г5 лирд.дг.т. до 0,5 х

-I010 млрд.м.т.) к для морских свипок - 0,,3 Ш, 0,5 «i/1, 1,5 мл .(oír D.,13 х Ю10 млрд„м.т. до 0,9 х Ю^млрд.м.т.). lía каэддй £йъвм заяцины брала: по 10 гол, белых кашей завой массой 16-18 З1 'Л\ жо 5 гол. морскгх свинок 5-6 месячного Еозраста, Зэ втот дериод признаков общего угнетения, организма ейвотных не оше-йнли, они свободно .перемещались ло клетке и поедали кори Все

дсвытуеше гивотные внвие ез опыта клинически здоровыми»

'3.2» Безвредность ТОА^дрлдолвзашш'для нутрий

3 эксперимент были взяты 27 нутрий, в тем числе 18 нутрий 2-х »месячного возраста (сразу se после отсадки от матери) и 3 'беременных самок (30-40 .-дней' беременности). Вакцину вводили .одним группам зшзкшкх вкутрибрЕпдано ,а другим - внутришшеч-но -В объема от 1,0 мл до 6 мл, перекрывая тем самым еммуноч генную дозу почта э 6 раз.

При -внутримышечном введения вакцины (наружная сторона бед-' ,ра) у зверей отмечала в .течение 5-7 дней припухлость .тестоза-"той 'консастейциа .з жесте вьедеаж препарата, Зираяенног.о до-знЕения-тестературы й-зстнон я общей) не хтечалось. В течение I мес, йе бало отмечено отказа от.корма, угнетения, проявления кайзх^либо клинических признаков .-забояааазЕЯ, .падаю жолодздка нутрий л абортов у взрсаак'-жЕзаишхг температура .тела те цревашала-37,6-08ГС°Д." От казной 'csmee получили физиологв-•чеокадайШВДй, -йлишгчески здоровий иркплод .Св средне;.? ло 3-4 iiraJ).,

-3,3., 'Результата изучения рез.ктогекности к камуногеняоега

вакцин?! против стрептококкоса нутрии • на мо'оеккх свинках

Для опыта взяли 40* гларскЕХ свинок 'в возрасте 6 :део.,, кзвой. массой по 350-400 г, Пододатнкм животным (30 гол.) заяцину взодзди Внутри,ышечне в области бедра двагды с 'интервалом 7 дней в объеме 0,2 и.0,5 мл (1,2 мдрд.м.т. и 3 млрд.ц.т. соответственно), а контрольна: (1С.гол.) - стерильный мясопептснныи бульон з тех se объемах и промэкутка:: времена. Дрос-а крови брала для гематологического и серологического исследований до вакцанация и затем - на 7, 14, 21, 30 ir SC-й дне после первого введении йшпропарага. Лосле закщшацЕП проЕелд контрольное заражение.

.3.3.1,-Результаты гематологического исследования морских.евино двукратно привитых против стрептококкоза инактквиоовакн вакциной

У вакцинированных животных в течение всего срока наблюдения количество гемоглобина и эритроцитов было несколько уменьшенный! по сравнению с исходным (13,4 * 0.12 т/% и 5,29 2 0,11 млн/ил)Этот процесс особо проявился после второй прививки: количество гемоглобина снижалось до 11,4 - 0,40 т/% (Р<£0,05) и эритроцитов - до 4,50 ~ 0,16 млн/ш (Р4 0,05). Ко в эти ке сроки такая ке тенденция к развитию анемии была зарегистрирована н у.непривитых кнвотных. Разница этих показателей мевду . подопытными и контрольными оказалась недостоверной (Р>0,05),

Количество лейкоцитов после некоторого уменьшения до 8,3 -0,33 тыс/цл (исходное - 9,9 - 0,27) на 14 день и затем на 21-й увеличилось до 10,6 - 0,33 тыс/ш (Р4 0,05); Во все сроки исследования, кроме 60-го дня, этот показатель был выше, "чем у кш1Тр6>^янх"'шшотных, при этом разница оказалась достоверной (Р<-5,05) на 14, 21 я 30 дни после вакцинация. . Срашштелышй лейкоцитоз у привитых морских свинок сопро-Еоздался сдвигом нейтрофильного ядра елэво, в результате в крови увеличивалось общее количество нейтрофияов и количество иалочкоядерных. При этом,на 7-й день сешентоядреные нейтрофи-лн составили 33,30 2 1,58^ (контроль - 36,31 ¿.2,01; /Р>0,05/ .на 14 день - 34.33 ± 1,61% и на 21-й день - 33,90 ± 2,04%.,

.Лишь на. 14 день после первичной иммунизации лейкоцитарный профиль крови становился нейтрсфильным (количество лимфоцитов -49,0 — 2,56/2)„ Количество моноцитов во все сроки исследования у привитых швэтных было несколько повышенным: на 7-й день -до 4,51 -0,21%, на 14-й - до 4,6 - 0,23^ и на 60-й - до 4,4 ^ 0,41* '(исходные - 3,10 ± 0,15; Р^0,С5).

3.3.2. Серологические исследования (Р.ЩТ) крови морских свинок, двукратно нривиткх против стрептококкоза ияактивиоован--—^—шаваишш——---

Во все сроки исследования у непривитых до вакцинации и ко* трольных животных працтштины в сыворотке крови отсутствовали (разведение 1:2 и выше). На 7-й день прививки сыворотки в РДП таксе оставались'отрицательными. На 14-й день у 21-го привито! животного РДП была положительной в разведении 1:2, у остальные 9 животных антитела не были обнаружены. На 21-2 день прививки сыворотки всех нивотных (30 гол.) вмели антитела: у 9 живот-' ных - в разведении 1:8. у 14 киеотных •» 1:4, у 7 кивотшх -

i:2* Ha 40-й день титр антител составил: 1:8 - у 13 зз 20 исследованных морских свинок и в разведаны 1:4 - у остальных 7 янлот-шх.

Спустя 2 месяца лишь у одной из 10 морских сг'здок етгср прзципитинов равнялся разведении 1:8, а у осталъшяс 9 Наступило снижение до 1:4(5 проб) к до 1:2 (4' тробы). Следовательно, судя по таким результатам активность антйтелсобразования к этому сроку замётко снижается.

з-.з.з Контрольное - зараязкде морских свииор возбудителем стреаток окказз " "

Животных зарагалн внутрншвечно lObi^Q /мл, что соответствовало .разведению культуры 10"°.- В каздай срок исследования брали по 10 гривитих н по 3 (контроль) морских свк;:ок.

При контрольном заражении йа Ü1-&, 40-3 н €С-й дни ( по 10 гол.) после первой прививки только -одна йдрская- сванка заболела а пала от стрептококкоза (второй срс-й исследования) ¿'етальше 29 привитых не заболевала и вкшлп из опыта &доровнмй» Нёпривитые морские свинки во всех случаях заболевали на 2-3 дай пселе зэрзжегшя. Проявилось угнетение оо'щэгс состояния, вз^срсигнность коетого покроза, з начале уменьшение, а -затем отказ от корья а гибель з течение 2-5 дней после заболеваний-. При пзтолого'анатогялческом вскрытия находили картину гемфо-гаческого даатеза-, перитонит, кровенаполвенлость печеня и увеличение селезенки а 2^3 раза. При бактериологическом ясследавании во всех JQQ% случаев из крови сердца, печени и селезенка выделяла чистув культуру-стрептококка'.•

Таким образом, ишунологкчесзгперестройка организма морских сванок на'внактизированнув ГОА-вакцану против стргптококзо-за нутрий была подтаерддена и биологической пробой - -прямим зарааонием впрулентнкм стрептококком. Вакцинированные морские свинки теш активный тамунитет, з&гетащиЗ ах от IOld ^q воз- . будателп стрептококка при гибели- контрольных.

3-4, Изучение Формирования иммунитета v яутоаЗ. двукратао привитых вакциной против стрептбзовкоза

В опыт взяли 37 нутрий 2-х месячного возраста, 27-ш из-которых двукратно внутримидечно з области бедра ввела по 1,0 я 1,5 «а (8 млрд.м.т. и 9 илрд.м.т. соответственно) инактиаи-роваЕкой ГОА-взкциш против стрептококкоза нутрий. Остальных 10 зиготных оставили в качестве. контроля н им внутримниочн^1..

ТГ!

-л, О

ввели стерильный мяссдептонный бульон з тех -.объемах и -Инте? лзх времени.

При клиническом наблюдении у дрквиднх животных откльненй! от нормы не отмечено. Только на месте 'иньекгрш вакцины прощупь дались тестоватне уплотнения, которне --на 3-5 день после вакцинации исчезаж (у контрольных - нерзз 1—2 дал)..

3.4.1 Результаты гематологического ксслэдования-ЛСолинзство гемоглобина во все сроки исследования у привитых -нутрий сущесаШё но не отличались от-показателей контрольных животных .(Р->.0,Ш) Количество эритроцитов' имело лишь незначительные асолебакия. "Фг касается количества лейкоцитов, то на 7-й день после вакцинацн оно увеличивалось до 11,8 - 0,4 тнс/ш (контроль - 7,7 ± Р^0,05), на 14 день - до 12,6 - 0,7 тыс/ет (контроль - 8,2 -2,0; Р<0,05) и на 21-й день - до 11*0^ 0,8 (контроль Р4-0„05 Спустя I, 2, 4 мес. у привитых также отменили^некоторый -лейкоцитов, но 'разница показателей с показателями контрольных иивс-Т них была несущественной. .

На 21-й день у привитых животных был отмечен умеренный не: профильный сдвиг влево. В результате количество сегментоядерны: неТлрофилов увеличивалось до 37,1 - 2,о% (контроль - :30.,0 — 3,81; Р>0,05) и палочкоядарных - до 4,61 ± Х.,2 (контроль -2,80 - 1,6; Р^0,05).

Резко лиыфоцатаршй профиль крови, .у Еещшзитых нутрий (66,2 ± 4,01%) и на 7-й день прививки (68,0 - Р-> 0,05).

на 14-й день стал нейтрофильным (48,0 - I,750 и оставался таковым. в последующие сроки исследования.

Изменение лейкоцитарной формулы в поствакцярнвдьннй период происходило^ основном,за счет увеличения количества гагменто-ядеркых нейтрофилов (до 4С,1 - 3,4% на 30-й день), эозинсфилов от 1,25 ± 0,2% до 3,80 * 0,8$ на 180-й день (контроль — 0,6 — 0,3 и 2,4 ± 1,0%% Р>0,05), появления базофилов (0,5 ± 0,б£) к существенного моноцитоза - 8,2 ± 1,155 (контроль - 3,4 ± 0,715 Р<£0,05). ' •

3.4.2 Результаты изучения йагоцптауной реакгахи нейтрофилов крог

Фагоцит-арная активность (ФА), фагоцитарная интенсивность (ФИ),возросла уже после первой прививки (ФА - до 16,0 ± I,СЗ и ФИ - до 0,19 - 0,012; контроль соответственно - 8,6 ± 1,90 и 0,22 ± 0,029; Р<0,05), а завершенность фагоцитоза несколько снижалась - 0,22 ± 0,028; контроль 0,12 ± 0,053; Р>0,05). . После второй прививки все три показателя, характеризующие фаго-

цитарнув-реакцию, резко увеличились, достигнув к оО-му дню максимальной значимости: ЗА - 70,2 ± 1,9, контроль - 13,6 '- 2,04; . ФИ - 0,87 i Ü,G24, контроль - 0,16 ± 0,022-, завершенность фаго-" цитоза - 0,30 ± 0,008, контроль - 0,18.± 0,037; F^O.OI). 7 при- . витнх нутрий и в последуюшие сроки исследования чорез 2, 3, 4, 5 н 6 мес. фагоцитарная реакция нейтройилов крови проявлялась на , значительно высоком уровне, чем у контрольных животных. Разница' показателей ФА, Ж и завершенности фагоцитоза оставалась достоверной (?¿0,05), что подтверждало значимость фагоцитарного иммунитета при стрептококкозе нутрий.

3»4,3'Результаты изучения количества Т- к В-лкмфсцптов нутрий

Во все сроки исследования у непривитых .нутрий количество Т-лимфоцнтов существенно не изменялось и составляло от 54,3 -1,47% (2-е исследование) до 59,0 - 1,61% (1-е исследование), у вакцинированных нутрий на 7-й и 14-й день количество Т-лимфоцитов -уменьшилось до 53,9 - 1,21% и 52,4 - 0,82?, а-затем повысилось до 57,1 - 1,80, ко не достигло исходной величины (59,0 -1,6155). Разница сказалась достоверной (P¿0,01). Количественные ' : изменения Б-лшлфоцитов характеризовались достоверным накоплением таких клеток а крови: на 7-й день прививки - до 28,1 ~ I,11$, аа 14-й день - до 25,6 ± 0,77% и на 21-й - до 29,1 ± 1+03% (исходное - 20,8 - С,92%; Р<0,01 и 0,001). В контрольной группе зарегистрировали лишь незначительные колебания в пределах от ■20,3 ± 1,05% до 22,5 ± 0,99%).

3,4.4 Результаты цитсморДологического исследования лимфоузлов к селезенки

Цитоморфологически исследовали препараты селезенки, подчелюстных и' бронхиальных лнмфотнческих узлов нутрий до вакцинации а затем - на 7-й, 14-й и 21-й день после вакцинация. Для зтого в каждый срок исследования убивали по два животных.

В этих органах удалось проследить процесс активизации иро-яиферативянх слабодафференцированкых процессов лнифовдворетану-лярных клеток, макрофагов, клеток лимфоидного и плазмоцзтарного рядов уже на 7-й день прнвивки. Эти процессы нарастали до 14-го дна и одновременно заметно проявилась дифференцировка клеток . плазматического ряда в сторону зрелых форм. Дегенеративные к альтеративнно процессы в лимфоузлах л селезенке привитых нутрий не развились. ;

На 21-й день после вакцинации лишь несколько уменызилабь пролиферация незрелых, слабодкфференцированных клеток по типу

лиыфоретикулярной гиперплазии. Особенно заметной стала диффе-ренцировка клеток плазмоцитарного ряда, в результате в этой группе клеток стали преобладать зрелые плазмоциты.

■3.4.5 Результаты серологического исследования

Для серологического исследования пробы крови в объеме 2,0 мл брали из сердца II невакцинированнкх и 3»% интактнщ (контроль) нутрий - до вакцинации, на 7-й (2-я прививка), 14~*1, 21-й и 30-й дни и затем - через 2, 3, 4, 5 и 6 мес.

У привитых нутрий серологический ответ по сравнению с таковым у морских свинок был выражен сильнее. У большинства нутрий на 14-й день после первой прививки (на 7-й день после второй уровни антител равнялись разведению 1:1, на 21-й день - разведению 1:8 и даже 1:16, а спустя месяц - 1:16. А спустя 2 и 3 месяца титры составили 1:32. Только на 4-й, 5-й и 6-й месяцы заре- " гкстржровали обратный процесс, но их уровни не ниже разведения 1:8. ' ~ •

3.4,6 Результаты"контрольногб за-разпния нутрий, двукратно

привитых против стрвптококкозгГТшактпвированнои вакциной

'Проварку состояния иммунитета на фоне изучения' иммунологической перестройки организма нутрий на 2-кратное введение ГОАтформолвакцнны против строптококкоза нутрий проводили путем прямого заражения (биологическая проба) вакцинированных против' стрептркоккоза и интактных нутрий в различные сроки после при- , вивки: через 21 и 30 дней, а затем ежемесячно в течение 6 мес. Животных заражали внутрибршинно суточной бульонной культурой в объеме 1,0 мл (20тыс.нУмл), что составляло 10 iiDgg.

Напривитые нутрии заболевали на 2-3 день после заражения, У них развивалось общее угнетение, анорексня, взъерошенкодть ко&ного покрова; частота пульса доходила до 90-110 (норма 60-80), дыхание - до 65-76 движений (норм! 45-55), температура тела - до 37,8-38,6 (норма 37,0т38,0). Больные животные забивались в угол клетки и погибали в течение 4-5 дней.

При патологоанатомическом исследовании павших нутрий устанавливали картину геморрагического диатеза (множественные кровоизлияния, на слизистых и серозных оболочках), перитонит, крове^ наполненность печени, геморогическув пневмонию и увеличение селезенки в 2-3 раза. При бактериологическом исследовании крови сердца, селезенки и печени с использованием МПА, МПБ и среды Китт-Тароццп выделяли исходную культуру стрептококка.

Вакцинированные нутрии, взятые по 3 гол. в каждый срок

коследоваюгя, на зарэЕекие клинически на реагировали, а тачешэ" 7.С дней набждвйзя оставались клзкаческж здоровий! (срок наблюдения). Эти данные позволяют считать, что ка 21-й день после при-швки у вакдикпосванннх нутрий оформился проча тй иммунитет против-возбудггалд стрептскоккоза, который сохранялся в течение 6 мае. (срок яабл»Д5вля)

4. ШВОЛУ

I, екгяеримеьтальшщ ннактиЕирозанная вакцина против стрэп-тококкоза путркЗ, приготозлевяая аз вирулентного для нутрий стрептококка группа С з соответствии с <рсрмулой авторской заявка от Э октября 1534 г. а полученной приоритетно! справкой от ¿.Г:„С6,85, является безвредная и слабореактогевным биопрепаратом для лаборатория: ь'лвсткызсхС белых гкпей, морских сванок) я нутрий, включая ыододвяк с 2-угсячиого всзраста_н беременных самок.

- 2. КнактЕйЕроданная-вакщжа против стрептокэккоза нутрий з пзрвыа 2-3 недели после двукратной с интервалом в 7 дней пра-шазж знзнвает в организме кивотннх незначительную анемию я неи-трс^лльнкй .льЕхс-цетсз, в го время как относительное количество В-^псгожгов достсБорао увеличивается, а количество Т-лиироцатов не изшяяэгек,

3. ;1нуупобЕСлог5Е2еская перестройка организме, нутрий на двукратную прививку г::актквированной ГСЛ-фсрмслваквдной против отрэптококпоза проявляется достоверным повышением фагоцитарной рзакда, аоявгюкхем е затем постепенным нарастанием в сыворотке аровл количества лрехЕшитанов до разведения 1:16 л 1:32. Серологический ответ ирениузбетвзк:)о развивается посла второй црлвнв-т.:п и сохраняется в течение 5 месяцев (срок наблюдения).

4» Штоморфологическае исследования селезенки, подчелюстных и легочных лимфоузлов нутрии з поствакциональкый период (на 7, 14, 21-й дай после прививки) свидетельствуют о развитии в них соодб-ссов пуолйфера'ик и дафферешщроакп клеток по типу иммуно-шрфолсггчэско?. реакции с последующей плазматЕзацией ткани в ранние сроки (на 7-14-й дни посла прививки) за счет незрелых ."ллазмоцгтоа, а з белее поздний (21-й день) - за счет зрелых плаз-моцдтоз „

5. Иммунобиологическая перестройка организма морских свинок к нутря5, двукратно привитых ТОА-форыолвакццяой против стрептоко-ккоэз, приводит к формирована» актазного иммунитета через 21 день исслэ прививки и продолжительностью до 6 месяцев (сроки жсследова-

14 ' -

нет/.Привитые животные в этот период-времени противостоят

контрольному заражению 10.« вирулентного штамма стрепто-

' ¡."50

кокка группы С.

6.Лабораторные исследования иммунобиологической пзре-с тройки организма морских сзкнок и нутрий и результаты контрольного заражения дают основание считать,что инактивирован-ная ГОА-формолвакцяна против стрептококкоза нутрий обладает достаточной ишуногенностыо.что позволяет отнести изучаемую вакцину к нммунобиотогическл эффективным биопрепарата!.!.

. 5.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ '

Результаты лабораторного изучения иммунологической эф-"фектявкости"экспериментальных' серий икактизированкой ГОА^-фор-молвакцкны'йротив стрептококлюза нутрий использованы" при .разработке "Временного наставления по применению вакцины против стрептококкоза нутрий /одобрена научно-методической комиссией МЗА и" утвэрндзка проректором по научной работе, профессором А.В.КароЕым 11.02.88г.Авторы вакцины к названия доцент В.А.Есепенок.проф.Конопаткян A.A./.

6.СПИСОК РАБОТ.ОПУБЛИКОВАННЫХ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Carlos А. Insuasly Psredes.la mim alinsni а fMf.

//KevistoM0ra.y.24 - 4. - iss?. - p.53-55.

2,'Есеченок В. А. .Инсуасти Паредес К.А.Реактогеннк-э^ и антигенные свойства вакцины против стреитороккоза нутрий //Реферативный журнал. - Инфекционные болезни етво'тннх. -

2. - 1989. - С.27. ЗЛ£сепеноЕ В.А.,Инсуасти Паредес К.А..Данилова f.LH. Изучение Т- и В-лпкфоцитов крови у вакцинированных нутрий против стрептококкоза //Тезисы всесоюзной конференции по иммунологии / в печати /.

4.ГСойопаткия А.А.,Есёпзнок В.А.,Ичсуастч Парезес К.А. Фагоцитарная реакция нейтрофялов крови нутрий после вакцинации против стрептококкоза //Тезисн всесоюзной конференции по иммунологии / в печати/.

Тйр.МО

Типография АГО

Бак«1155