Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

¿і-гєзбд

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ В. И. ЛЕНИНА (ВАСХНИЛ)

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ (ВИЭВ)

На правах рукописи

Аспирант КОЗИН Александр Иванович

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

(II).00.03 — ветеринарная микробиология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1075

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУ-К НЛЕНИ В. И. ЛЕНИНА (ВАСХИИЛ)

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ <ВИЭВ)

На правах рукописи

Аспирант КОЗИН Александр Иванович

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

(16.00.03 — ветеринарная микробиология)

Автореферат диссертации .на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1975

Работа выполнена в лаборатории по изучению туберкулеза и паратуберкулеза Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии (Директор — доктор ветеринарных наук, академик ВАСХНИЛ, профессор Я. Р. Коваленко).

Материалы диссертации изложены на 130 страницах машинописи и содержат: введение — 4 стр., обзор литературы— 33 стр., собственные исследования — 47 стр., обсуждение полученных результатов — 15 стр., выводы — 2 стр., список использованной литературы — 26 стр., который содержит 316 наименований работ, из них 134 иностранных.

Работа иллюстрирована 20 таблицами.

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук. про-_ фессор В. Е. Щуревскнй.

Официальные оппоненты:

1. Зав. отделам противобактермальных препаратов Всесоюзного научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности МСХ СССР, доктор вет. наук, Никаноров Борис Андреевич.

2. Старший научный сотрудник лаборатории по контролю ветгорепаратое ВЕНКИ, кандидат вет. >наук Шаров Александр Николаевич.

Ведущее учреждение — Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.

Автореферат разослан ъ197^г.

Защита диссертации состоится «^ £¿¿.(10^(1 года на заседании Ученого совета Всесоюзного ор^на Ленина института экспериментальной ветеринарии, по--адресу: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

Ученый секретарь ВИЭВ, кандидат биологических наук

в.: в;: Калугин

В связи с развитием животноводства в нашей стране и созданием крупных комплексов по производству продуктов, животноводства на промышленной основе, требуется особое внимание ло охране jix ют многих инфекшганных болезней, и з частности от туберкулеза, который приносит большие экономические убытки и представляет реальную угрозу для людей.

Своевременной диагностике туберкулеза, в проведении противотуберкулезных мероприятий, принадлежит исключительная роль.

Ведущим методом диагностики является аллергическая проба, однако, показания аллергической реакции зависит от многих причин: физиологического состояния (А. И. Протасов, I960; А. А. Банников с соавт., 1968) условий содержания, кормления, времени года [Шпришак, iKpayc с соавт. (Sprys-zak А., Kraus S., Salevski, 1967), И. Ф Жогов (1968), А. С. Латышев (197,1)]; возраста животного (П. П. Вишневский, 1937; М. К. Юсковец, 1953 и др.).

Возможна также сенсибилизация крупного рогатого скота млкобактерпямн птичьего типа [Фельдман и Карлсон (Feldman, Karison, 1939), Плюм (Plum, 1952), Фннчер с соавт. (Fincher et aL, il954)], мпкобактериямн ларатуберкулеза (И. В. Поддубский с соавт., 1966), а также некоторыми атипичными н отдельными видами кислотоустойчивых сапрофн-тов (Б. П. Домнин, 1967; Н, К. Чурбаков и В- И. Бондаренко,. 1971; X. Г.Гизаттулнн » Б. А. Мазур с соавт., 1972 и др.).

Вопрос о пара аллергических реакциях особенно остро встает в связи с успешной борьбой с туберкулезом крупного рогатого скога. При проверке туберкулином в некоторых благополучных по туберкулезу стадах, выявляются реагирующие животные, у которых на вскрытии н-е обнаруживают туберкулезных изменений н ннфицировапиость возбудителем туберкулеза не подтверждается при бактериологическом, гистологическом исследованиях, а также применением бнопробы. Убой таких реагирующих животных ведет к неоправданным экономическим затратам.

Поэтому в настоящее время возникает потребность в разработке новых и усовершенствовании старых методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. В последние годы в периодической печати опубликованы работы отечественных

и зарубежных авторов об использовании для диагностики туберкулеза РСК, РДСК, РИГА, РПГ.

Внимание многих и с ел ед о в а тел е к привлекла реакция связывания комплемента (РСК) н ее разновидность — реакция длительного связывания комплемента (РДСК)- С целью диагностики туберкулеза РСК впервые испытали Видаль Лесур (1901), которые обнаружили специфические антитела в сыворотке больных туберкулезом. При постановке РСК использовались различные антигены, наибольшее распространение получили антигены Кальметта и Массолп (1911), Безредка (1913). Бокке и Негрн (1921), Вассерм,ана (1923) и в последние го.чы комплексный туберкулезный антиген (КТА) У,НИИЭ,В, предложенный Ю. Я. Кассич (1967).

Относительно 'диагностической ценности РСК, до настоящего времени нет единого мнения. А, И. Каркадпновская (1953—1959), Б. П. Вдовин (1967), Ю. Я Кассич (1967), Христофоров н Сивовски (1963), 3, Д- Лакмли, И. В. Шлыпш (1972), В. И. Ротав, С. В. Кдыш (1973) считают целесообразным .использование РСК у животных с сомнительной реакцией па туберкулин. Однако С. Н. Вышелесскнй (1913), А. М. Преображенский (1924), А. М. Говоров (1933) указывают, что РСК в качестве самостоятельного диагностического теста использоваться не может. Низкую диагностическую ценность. РСК отмечали И. И. Лукашев (1948), М. М. Иванов (1952). П. Л. Т>плепко (1961), А. Ф. Кочмарскпп, Ф. Д, Лукашенко {1908) и др. исследователи.

Изучением РДСК при туберкулезе занимались Т. А. Лу-цеико (1953), Г. А. Козловский "(1959), А. И. Кузин (1961), М. А. Журил ков а (1963), К. Б. Дюсембаев (1973) и др. исследователи. На пригодность РДСК для практического применения указывают Г. А. Козловский (1959), Н. Д. Фомин (1963), В. И. Ротов, С. В.- Кныш (1973). В то же время А. Т. Ярмоленко, С. П. Гефтер (1959), П. А. Трпленко (1961) считают РДСК мало пригодной для практического применения, В. А. Колокшанскнй, В. А. Кузяев (1968). А. Н. Борнсенкова (1968) рекомендуют применять РДСК для ранисн диагностики туберкулеза, а М. И, Образцова, А. К. Анищенко, Г. А. Объедков (1969) —для установления диагноза при труд-нооцениваемых туберкулиновых реакциях.

Применительно к диагностике туберкулеза реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА) изучали Миддлбрук и Дюбо (1946), Бойден (1951) и др.

И. П. Ситало (1954), Г. В, Дунаев (1958), Е. И. Буряк (1972) испытывали в качестве антигенов гретые и не гретые туберкулнны. Полнсахарндную фракцию микобактерий проверяли" Милдлбрук—Дюбо (1948), Гейн. и Срока (1953), а 4

фосфаIндные антигены — 'Гакахашн, Оно (1961)» И. П. Зыков с соазт. (1966, 1971), Югп и Ноцаки (1972).

Мнения о ценности РНГЛ для диагностики туберкулеза расходятся 'Хартвпг ,и Вайихольд (1953), И. П. Ситал» (1954), Г. В. Дунаев (1958), Е. И. Буряк (1972), А. С. Жума-шев (1973) считают ее ценной, а Эндо (1952), Грен (1953), В. В. Судаченков (1963) указывают па ее ограниченную диагностическую ценность,

Кремер, Кремер (1954;, Бертран (1956), Бохдалек (1966), применяли РНГА при установлешш степени активности и распространения туберкулезного процесса, а Джонс н Хннсон (1953), Ш.ифф (1955), Н. А. Матыко (1,956) отринаютэтувоз-

можность.

В последние годы ряд исследователей для диагностики туберкулеза применилн реакцию диффузионной преципитации в геле (РПГ). Реннс с соавт, (1956), Парлетт, Юмаис (1956), Р. О, Драбкнна, О. Марова (1965) применяли РПГ для изучения антигенного состава мпкобактерий.

Парлетт (1964), П. Е. Савченко (1965) считают РПГ пригодной для диагностики туберкулеза, а Алшабкун с соавт. (1960). Лонг, Топ (1964), Е. II Буряк (1968) считают, что показания ее не высокие.

Таким образом, литературные данные по указанным вопросам весьма противоречивы, что по-видимому зависит от следующих обстоятельств: 1) отсутствия высокоспецифнчного и активного антигена; 2) серологической ареактпвностн в тяжелых случаях болезни; 3) непостоянного,наличия и небольшого кк.'.шн'С.тва циркулирующих антител в сыворотке крови больных туберкулезом животных; 4) отсутствия единой методики постановки перечисленных реакции.

Указанные причины препятствуют внедрению серологических реакций >в практику и обязывают к дальнейшему .их изучению и получению более стабильных ■результатов при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.

Учитывая литературные данные о возможности использования отмеченных серологических реакций для диагностики ту беркулеза п наличие противоречий о их диагностической цен-■ности, .перед нами были поставлены задачи:

1. Изыскать способ получения активных п специфичных антигенов нз мпкобактернй туберкулеза бычьего типа, атипичных микобактерий и кислотоустойчивого сапрофита.

2. Изучить специфичность РСК, РДСК, РНГА и РПГ с сыворотками крови животных благополучных по туберкулезу хозяйств,

3. Выяснить диагностическую ценность применяемых реакции с сыворотками кроен животных с наличием туберкулезных изменений при послеубопном осмотре.

4. Сравнить показания аллергической пробы и серологи--ческих реакції!].

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работу выпал-тли в течение 1972—1975 гг- >в лаборатории но изучению туберкулеза л иаратуберкулеза ВИЭВ, а также в благонюлучрных ,и неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.

Для работы использовали:

— 1537 сывороток крови от крупного рогатого скота, а том числе^

—' 534 сыворотки крови из благополучных по туберкулезу крупного рогатого скога хозяйств;

— 213 сывороток крови от животных с туберкулезными изменениями, установленными при послеубойном осмотре;

— 790 сывороток крови от животных туберкулезных изоляторов, с различными показаниями аллергической реакции на Г1ПД туберкулин для млекопитающих.

Сыворотки крови от благополучного по туберкулезу крупного ірогагого скота получали из хозяйств, в которых последние 10 лет заболевание животных туберкулезом не регистрировалось.

Сыворотки от животных, реагирующих на туберкулин, с наличием туберкулезных изменении взяли при убое 74 голов крупного рогатого скота на Московском мясокомбинате и от 139 животных на Целиноградском мясокомбинате.

Сыворотки крови от животных с различными аллергическими реакциями на введение туберкулина брали в туберкулез-пых изоляторах, а также от животных с ферм, где имелись реагирующие на туберкулин животные и, где туберкулез впоследствии был установлен лабораторными методами исследование.

Для получения гипериммунных сывороток использовали 01 кролика, Гнпернммуиные сыворотки получали по методу Фрейпда,

Антигены готовили из культур мпкобактерпй туберкулеза бычьего типа (М. Ьоуїь-8)> атипичных міпкобактерий (М. ЬаЬ іеу) и кислотоустойчивого сапрофита (М., тіпеШ), полученных пз Центрального института туберкулеза Министерства здравоохранения СССР.

Посев и выращивание культур проводили на синтетической среде Сотона с рН 7,2—7,4 н картофельной среде Павловского вря температуре 37—38°С, в течение 2—2,5 .месяца .с последующим автокла:ви,ровашіем .пр:и 120СС >в течение 30 минут.

Из полученной бактериально» массы каждого вида мико-бактерий приготовили по 2 серии антиген,а, методом экстрагирования 40% раствором фенола, кроме того, одну серию по методу Бокке — Негри из штамма Л1. Ьо^чб-З.

Приготовили две серии полпсахарндного антигена из мп-кобактернЛ туберкулеза бычьего типа (М, Ьо\ч5-8) и по одной серии из атипичных мпкобактерий (М. ЬаКеу) н кислотоустойчивого сапрофита (М. ттеШ) по методу Блинова.

Феиольные антигены с сыворотками крови от животных, имеющих туберкулезные изменения,, оказались серологически не активными, по наличие комплементсвязывающих антител в сыворотках доказали применением антигена УНИИЭВ (КТА) серия 14, изготовленной 5.У-69 г., серии 32, изготовленной 26.IV-73 г. с ■рабочжм титром 1 : 160. Поэтому при изучении РСК. и РДСК применяли лишь антиген УНИИЭВ (КТА).

Антиген Бокке—Негри не использовали, так как он улавливал антитела при разведении сывороток лишь 1 :5. Фенолъ-пые и полпсахарпдные антигены использовали в РНГА и РПГ, в которых они обладали хорошей серологической активностью.

Для сравнительного изучения диагностики туберкулеза использовали следующие серологические реакции:

1. Реакцию связывания комплемента (РСК).

2. Реакцию длительного связывания комплемента (РДСК) но методике Г1. А. Триленко,

3. Реакцию непрямой гемагглютпнацнн (РНГА) по методике. Мнддлбрук и Дюбо с физиологическим раствором.

4 4. Реакцию диффузионной преципитации в агаровом геле (РПГ) по методу Оухгерлонн.

После взятия крови, проводили туберкулннизацню крупного рогатого скота туберкулином ППД для млекопитающих согласно наставлению то его применению.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение значения режима инактивации сывороток для постановки РСК и РНГА

Изучение режима инактивации сывороток было связано с тем. что при постановке РСК наблюдали задержку гемолиза в кош ролях сыворотки без антигена, при инактивации сыво-. роток при температуре 58° С. Особенно это заметно на гнпер-пммунных сыворотках кроликов н некоторых сыворотках крупного рогатого скота. Поэтому провели ннактивпрование сывороток при температуре 58°, 60—61° и 62—63° С и уста-' повили, что инактивация сывороток при 62° и 63° .ведет к потере задерживающих овойств сывороток, но вместе с тем

наблюдается некоторое снижение их активности, однако основная часть сывороток сохраняла диагностический тнтр РСК-■которым считаем разведение сыворотки ) : 10 н выше. - - Проверили также ¡режим ин-а ктивации сывороток крови: и для постановки реакции непрямой гемагглютииации (РНГА), где одновременно проверили полисахарндлые антигены из М. Ьоу1э-8 и атипичных мнкобактерий М. Ьа^еу.

■ При этом установили, что сыворотки, инактивнрованные' при 66° в течение 20 минут, теряли свою активность как к гомологичным, так н гетерологнчным антигенам.

Сьиворотки, и на ктиш ир оваї ш ые при 62°, несколько снизили' свого активность к гомологичным антигенам, оставаясь в пределах диагностического титра, г. е. 1 ;16, но при исследовании этих сывороток с антигенами, полученными из атипичных' мико'бактерий М- ЬаЦеу, не получали положительных результатов, а показали лишь слабую агглютинацию с оценкой в один крест с сыворотками, разведенными 1:8 н 1-16. Сыворотки крови, инактивнрованные при температуре 58° С, сохраняли высокую активность, но давали перекрестные реакции ■с антигеном из атипичных мнкобактерий в диагностическом, титре. На основании проведенной проверки сочли целесообразным проводить инактивацию сывороток для РСК п РИГА при температуре 61—62° С.

Испытание применяемых антигенов в РСК и РДСК, РИГА и РПТ с различными в эпизоотическом отношении сыворотками крови крупного рогатого скота

а) результаты применения РСК, РДСК, РИГА и РПГ в благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота ; хозяйствах

Вопрос о специфичности показаний РСК, РДСК, РНГА и РПГ до сих лор остается спорным, так как различные исследователи, применяя указанные реакции ® благополучных по; туберкулезу хозяйствам, получали весьма противоречивые результаты.

Для выяснения этого вопроса нами исследованы- в этих реакциях более 500 сывороток ¡крови из благополучных по туберкулезу хозяйств. Результаты исследования представлены в таблице 1, где приводится средний процент неспецифических показании реакций.

Нами проведено исследование сывороток в РСК и РДСК" с антигеном (КТА) УНИИЭВ серии 14, изготовленной 5.05.69 г.. и серии 32, изготовленной 26.04.73 г. Рабочий титр антигенов этих серий составлял 1 : 160. Всего исследовали 534 сыворотки крови крупного ірогатото скота из благополучных по тубер— 8

кулезу хозяйств, в том числе 20 сывороток от больного пиро-. 'плазмозом крупного рогатого скота.

Таблица I

Результаты исследования сывороток крови крупного рогатого скота из благополучных по туберкулезу хозяйств

Наименование реакций Исследовано сывороток Име.іи положительные показания в диагностическом титре

количество ни

РСК 5Я Т6 2,9 ' "

РДСК 534 14 2,6

РНГА 535 15 2Л>

РПГ 514 21 4,03

За диагностический титр в РСК л РДСК брали разведение сывороток 1 : 10 и выше, горл которых ¡положительные результаты в РСК получили в среднем в 2,9%, а в РДСК в 2,6% случаев. Необходимо отметить, что количество положительных результатов РС1< и РДСК в различных хозяйствах не одинаковое п колеблется в РСК от 3,07% до 6,9%, а в РДСК от 0,9% до 6,6%. Титр комплементсвязывающнх антител с РСК достигал порой разведении 1 :40, а в РДСК в одном случае 1 : 80. С сыворотками крови от крупного рогатого скота больного пироплазмозом положительных показаний не получили.

В реакции непрямой гемагглюишашш (РНГЛ) исследовали 535 сывороток крови из 'благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйств. Из ішх 223 сыворотки исследовали с феполышм аитигелом из ЛІ. Ьоуій-8 и 312 сывороток — с полнсахарндным антигеном из того же штамма. За диагностический титр приняли разведение 1 :32 с фенолыгым и.!: 16 с полнсахарндным антигенами.

При исследовании 213 сывороток крови с фенольним антигеном неспецнфические показания РНГА получили« 6случаях. (2,8%), но при исследовании установили, что число неспеци-флческпх показаний РНГА в отдельных хозяйствах достигает 5.7% от количества проверяемого поголовья, причем в одном случае титр достиг 1 : 128. При исследовании 20 сывороток крови от животных, бальных пироплазмозом, положительный результат в РНГА полугчлли только с одной сывороткой® разведении 1 :32.

При исследовании в РНГА с полисахарпдным антигеном из М. ЬоуІв-8 312 сывороток крови крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств положительные показания РНГА в среднем составили 3,2%, колебание же несиецп-фических результатов РНГА составили от 2,6% до -{,9°/о. Как и с фенольним антигеном, титр гем.агглютмнинов в отдельных сыворотках достигал разведения 1 : 128.

В реакции диффуз-иовной преципитации в агаровом геле (РГ1Г) исследовали 514 сывороток крови с фенольным антигеном и получили неапецифнческие показания от 1,8% до 9,3% в отдельных хозяйствах. Средний же процент неспецифнче-,скпх показаний от животных из 'благополучных .по-туберкулезу хозяйств в данной реакции составил 4,08.

На основании .праведешгых исследований установили, что ¡«специфические .показания РСК, РДСК, РНГА и РПГ колеблются в среднем от >2,6% до 4%. Совпадающих показаний по ряду серологических реакций с сьгворотками крови от благополучного по туберкулезу скота .не установили.

б) результаты исследования в РСК, РДСК, РНГА и РПГ сывороток крови от животных с туберкулезными изменениями

Для того чтобы выяснить диагностическую ценность РСК, РДСК, РНГА и РПГ, нами проведено исследование 21всывороток '.<рови от крупного рогатого скота с наличием туберкулезных изменений различной тяжести. Из них, с.туберкулезными изменениями в отдельных органах и лимфоузлах, исследовали 195 сывороток, а 18 сывороток взяли от жнвотных с генерализованной фермой туберкулеза.

При исследовании в РСК 195 сывороток крови от жнвотных с туберкулезными изменениями в отдельных органах и лимфоузлах комплементсвязывающне антитела выявили в 67 случаях (34,35%). Из них в диагностическом титре I *. 10 и выше в 26 случаях ИЗ-З^/с), а в 41 случае титр комплемент-связывающих антител составил' разведение не выше 1:5. В 128 (65,6"о) случаях комплементсвязывающне антитела не выявили.

При исследовании 18 сывороток крови от животных с генерализованной формой туберкулеза положительный результат в РСК получили только с одной сывороткой в разведении 1 : 10.

Всего же из 2(3 сывороток крови комплементсвязывающне антитела 'выявили 'В 68 сьшцротках (31,9%), в том числе при разведении сыворотки 1:5 — 41Л : 10—16, I ;20—7, 1 ;40—3 и 1 - 30 -— 1 случай. Из них в диагностическом титре положительные результаты получили лишь в 27 случаях (12,6е/«-).

Исследуя© РДСК те же 195 сы.вороток крови, положительные показании в диагностическом титре 1 : 10 и выше получили в 13 случаях (6,8%), а с 30 сыворотками имели задержку гемолиза эритроцитов в разведении 1 :5, с остальными сыворотками получили отрицательные показания.

При исследовании 18 сывороток от жнвотных с генерализованной фермой туберкулеза получили задержку гемолиза 10

1) РДСК лишь в четырех случаях при'разведении сывороток .1:5- В диагностическом тит>ре 1 : 10 и выше положительных результатов не получили.

Проведенные исследования показали, что титр антител в -РСК и РДСК у животных с наличием туберкулезных изменений не превышает разведения 1 :80 и не отражает тяжести течения болезни, так как сыворотки животных с генерализованным процессом чаще давали показания в низких и средних . титрах..

Эти же 195 сывороток крови от животных -с туберкулезными .изменениями исследовали в РИГА с полнсахарндным антигеном из М. 1скпчй-8 и положительные результаты получили в (36 случаях (69,7%). В остальных 59 случаях (30.3®/*)-■отметили отрицательные показания. При исследовании 18 сывороток от животных с генерализованной формой туберкулезного процесса, положительные результаты получили в 12 случаях. Всего же положительных результатов РИГА с полнсахарндным антигеном из 213 исследуемых сывороток получили в 148 случаях (69,1%), 30,животных остались иедовыяв-ленным.и данной .реакцией. Основное количество положительных результатов в РНГА—79 случаев получено в титрах 1:128 И 1:512, в титрах 1 :32 и 1 :64 — 67 случаев п в титре 1:16 всего лишь 2 случая.

Проведенные исследования по РНГА указывают на возможность ее использования для выявления крупного рогатого скота с наличием туберкулезных изменений в отдельных органах н лимфоузлах, и животных с генерализованной формой туберкулеза. Использование РНГА поможет установить степень распространения туберкулезной инфекции в стаде.

При сравнительном изучении в РНГА чувствительности фепольпого н полисахарпдного антигенов на 65 сыворотках крови от животных с наличием туберкулезных изменений установили, что наиболее чувствительном антигеном оказался полисахарпдный антиген, С ннм показания РНГА были выше на 10,8%. чем -с фенольным.

Применяя реакцию преципитации в агаровом геле (РПГ) ■по методу Оухтерлони для .исследования тех же 195 сывороток от животных с туберкулезными изменениями, положительные результаты получили в 122 случаях (62,5%). При исследовании 18 вывороток от животных с генерализованным ту-беркулезом положительные -результаты получили в 13 случаях. Всего из 213 сывороток крови от животных с туберкулезными изменениями положительные показания в РПГ получили (в 135 случаях (63,3%).

Необходимо отметить, что во всех четырех реакциях величина титра антител сывороток при положительных показа-

ннях не всегда соответствовала тяжести туберкулезного процесса.

Сравнительные данные исследования 213 сывороток крови по ряду серологических реакций ,ог животных с наличием туберкулезных изменении прнзедены в таблице 2.

Таблица 2

Сравнительные данные серологических реакций с сыворотками кроен от животных с наличием туберкулезных изменений

Исследовано сывороток Положительные показания реакций Выя члени комплексом реакций Выявлено ТОЛЬКО РИГА и РПГ

РСК ( РДСК | РНГЛ РПГ

213 27 12,6Н 13 6.ЇЙ № 69,1 ?ч 135 63, 187 87.7% 183 85,9«/»

Сравнение показаний >ряда серологических реакций, полученных при исследовании 213 сывороток крови от животных с туберкулезными изменениями, показало наличие положительных показаний РС1\-27 (12.6%), РДСК—13 (6.1а/а), РНГЛ— 148 (69,1%), РПГ— 135 (63,3%) случаев. Всего нз 213 сывороток от животных с наличием туберкулезных изменений комплексом серологических реакций положительные результаты получили со 187 сыворотками (87,7%), а с использованием РИГА п РПГ в 183 случаях (85,9%).

в) исследование сывороток крови крупного рогатого скота туберкулезных изоляторов и неблагополучных по туберкулезу хозяйств с различным» результатами туберкулиновой реакции

Мнения многих исследователей о сравнительной ценности аллергического и серологических .методов диагностики туберкулеза не совпадают. Поэтому нам!! проведено сравнение аллергической диагностики с результатами серологических методов исследований. Туберкулннизацню ¡проводили перед;каж-дым взятием крови. При проведении туберкулшшзацпн получили результаты, приведенные в таблице 3.

Сыворотки кровн от этих животных проверили в РСК, РДСК, РИГА и РПГ, а также провели сравнение результатов этих реакции между собой и с результатами аллергической пробы.

При исследовании 448 сывороток кровн от животных с положительной реакцией на туберкулин для млекопитающих в РСК задержку гемолиза получили в 173 случаях (30,8в/о)* 12

Таблиці З

Результаты туберкулиннзацнн крупного рогатого скота туберкулезных изоляторов и неблагополучных по туберкулезу хозяйств

Наименование Количество исследованных животных Результаты туберкули-низации + ! ±1 -

СовхЪз Омский 92 92

, Власть труда 102 82 1 19

» Михайловсчий 5 8 48 4 6

„ Софиевский 200 81 — 119

Касимовский 155 145 1 9

■ , Гиарлсец 183 8 175

Всего 790 448 J4 323

нз ][і!х в диагностическом титре 1:10 и выше — 79 случаев (17,6% ). При этом в титрах 1 : 10—1 :20 положительные результаты получили в 57, случаях, а в титрах 1 : 40 и I : 80 — 22 случая.

Из 14 сывороток кроши от животных с сомнительной реакцией на туберкулин имели положительную РСК при разведении 1:10 с 2 сыворотками, и 1:80 с одной сывороткой. Всего положительный результат получили с тремя сыворотками.

При исследовании 325 сывороток крови от животных, нере-агирующих на туберкулин, комплеменсвязывающие антитела выявили в 68 случаях. Из них в разведении 1:10 и 1:20—9 случаев, 1:40 — 1:80—3 случая, а остальные 56 сывороток имели задержку гемолиза при разведении сывороток 1:5. Таким образом, показания РСК в диагностическом титре имели 12 сывороток (3,6%). Всего нз 790 сывороток крови положительные показання в РСК получили в 94 случаях (П.в'/о).

При исследовании этих же сывороток крови в РДСК задержку гемолиза в диагностическом титре получили: в группе реагирующих на туберкулин животных лишь с 73 сыворотками (16%); а группе с соміштельньгм.и реакциями я а туберкулин положительные результаты получили с 2 сыворотками; от не-реагирующих животных в РДСК положительные результаты получили из 328 сывороток в 17 случаях (5,1%). Таким образом, в.РДСК нз 790 сывороток крови положительные .результаты при ,разведении 1:10 -и выше получили с 92 сыворотками (11,0 "о).

При исследовании в РИГА этих 790 сывороток крови положительные результаты получили в 352 случаях (45,4%), из них в титрах 1 : 16-— 22. 1:32—119, 1:64—103, 1:128 — 69,

іЗ

1:256 — 31, 1:512 — 8 случаев. При этом из 448 сывороток;, ' крови от реагирующих на туберкулин животных .положіітель:^'',"ї'"',,-г' лыс результаты в РИГА получили в 244 случаях; (54,4%),'в средних и высоких титрах; из 14 сывороток крови от животных о сомнительной реакцией положительные результаты РНГА получили с пнтыо сыворотками; из 328 сывороток крови от нереагнрующнх на туберкулин животных имели положительные показання РНГА в 103 случаях (31,470).

В реакции диффузионной .преципитации в -агаровом геле (РПГ) положительные результаты получили в 316 случаях (40%). Из них 232 (51,7%) от животных с положительной туберкулиновой пробой; 2 сыворотки от животных с сомнительной реакцией па туберкулин, и в 82 случаях от животных, не ¡реагирующих на туберкулин.

Сравнительные данные серологических исследований от указанных животных обобщены в таблице 4, из которой видко, ЧТ'і комплекс серологических реакций позволяет выявить. 77,4Ш животных с положительной реакцией на туберкулин ППЯ, & из 1 І сывороток от животных с сомнительной реакцией положительные показатели серологических реакций получили с шестью сыворотками.

Из неблагополучных хозяйств среди не 'реагирующих -на туберкулин животных, серологическими реакциями обнаружили 156 животных (47,5%). РНГА н РПГ выявили 148 животных (45,1%).

Таблица 4

Сравнительные данные сер стогн чески х исследований сывороток крови ■;

от животных из туберкулезных изоляторов и неблагополучных по туберкулезу хозяйств с различными результатам» аллергического

исследования

Животные, реагирующие на ППД туберкулин

Положительно 443 79 73 244 232 347 317

17,6«/» 16*/«'¡54,4% 51,7% 77,4% 70,7%

Сомнительно 14 3 2 і 5 2 6 6

12 17 103 82 І'>6 148

Отрицательно 328 3.64 5,1«/. 31.4*/« 25% 47,5% 45.1 »/о

Всего 790 94 92 І 352 316 509 471

11,8» 11,6*/* 45,4» 40*/. 64.4*/« 59.4*/,

Некоторые сыворотки имели положительные показания в отдельных реакциях, другие имели совпадающие положительные показания по ряду серологических реакций. В 30 случаях отмечали совпадающие положительные результаты во всех. 14

Исследовано сывороток

Имели положительные показания реакции

РСК ІРДСК'РНГАІ РПГ

Выявили комплексом реакций

Выявили < только РНГА и РПГ

четырех используемых реакциях. Всего из 790 сывороток положительные результаты по комплексу серорёакцнй получили' в 509 ?луиаях (64,4 ^ч«), с 281 сывороткой (35,6%) положительных результатов не получили^ РИГА іг РПГ выявили 47Е случай (59^4 %).

Сранннтелсная диагностическая оценка аллергического и серологических исследований в неблагополучных но туберкулезу хозяйствах показали результаты, приведенные в таблице 5.

Таблица 5

Сравнительная диагностическая ценность сероаллергического исследования в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах

Исследовано ЖИВОТНЫХ Реагировали на ППД туберкулин Дали положительные показания в Выявлено С П!>!1МЄНЄНИЄК-аллергии и серологии

РСК РДСК РНГА РПГ

790 448 1 94 I 92 56.ІИ,8%І 11,6% 352 1 316 | 610 -0% 1 77,2%

При зтом установили, что число реагирующих животных на' аллерген значительно превосходит показання серологических, реакций и толі.ко лишь РНГА и РПГ приближаются к показаниям аллергичиской реакции.

Однако. ни одна из изучаемых серологических реакций не* дает возможности полностью выделить всех животных, реагирующих на туберкулин. Комплексное применение аллергического и серологических исследований .позволяет более полновыделите возможно инфицированных животных. Так, если на аллерген ві делили только 56,7%, то при аллергическом исследовании и серологических реакциях: число выделенных, животных составило 77.21/(р. Сопоставить полученные результаты, с данными нослеубойного осмотра не предоставилось возможности, так как исследованных животных убить не разрешили

Нам удалось провестисравненпе аллергического и серологических показании с послеубойным осмотром на 10 животных, -у которых установили туберкулезные изменения. Результаты исследования представлены в таблице 6.

Из 10 животных, имевших туберкулезные изменения, 4 положительно реагировали на туберкулин, а другие 6 не реагировали. При комплексном исследовании от них сывороток крови положительные результаты получили в восьми случаях. Как видно из таблицы, ни одна из применяемых на.ми реакций ие позволили полностью выявить воех животных с туберку—

Таблица 6

Сравнительные данные аллергического и серологического исследования жцаотных с наличием туберкулезных изменений, выявленных при поелеубойном осмотре

Угзулътат аллергической К-во животик С положительными показаннями ПО

РСК РДСК ІРМГА РПГ

Пи.Юл и тельный Отрицательный 4 і 2 6 І І 2 — 3 43

Всего ІО І 3 І 2 І 6 7

лєзішмн ¡[змєнєішяміі, только лишь комплекс серологических г .реакций 'позволил бол-ее полно выявить ^больных туберкулезом животных.

Больше положительных результатов получили в РНГА п РГІГ, которые заслуживают внимания для дальнейшего изучении.

ВЫВОДЫ

1. Показания серологических реакции по своим результатам не совпадают с данными аллергической пробы, так как отражает различные состояния организма.

2. При проверке специфичности РСК, РДСК, РНГА и РПГ с сыворотками крови от животных из благополучных по туберкулезу хозяйств наличие неспецнфпческпх показаний этих реакции колебалось от 2,4 до 9,3%,

3. Антигены, приготовленные по »методике Бокке—Негри, выявлчют кимнлементсвязыватощпе антитела при разведении сывороток не выше чем 1 :5.

4. Серологические реакции не имеют корреляции между бєлнчіним титра антител и тяжестью туберкулезного процесса.

5. Комплексом РСК. РДСК, РНГА и РПГ можно выявить до 87,7% крупного рогатого скота с наличием туберкулезных пз\егх'кий, и"; общего числа животных с туберкулезными изменениями,

6. Наиболее чувствительными реакциями, по нашим данным, для выделения больных туберкулезом животных являются РНГА с по.'шеахарпдным антигеном, которая позволяет выявит:, на ІО^/о больше животных с туберкулезными изменениями в сравнении с фенольным антигеном и РПГ с феноль-ным антигеном. РСК н РДСК в наших исследованиях оказались малочувствительными.

7. РНГА и РПГ дают возможность более полно выявить

больных туберкулезом жнвотных, в том числе при сомнительных реакциях .па туберкулин, а также -при -наличии аиертаи.

8, Положительные показания РИГА совпадают с данными послеубойного осмотра в 69% случаев. Реакция диффузионной преципитации и агаровом геле (РПГ) является более чувствительной, чем другие серологические реакции для выделения жнвотных с генерализованной формой туберкулеза.

9. Проведешпые исследования указывают на возможность использования РИГА и РПГ для выявления крупного ■рогатого скота с наличием туберкулезных .изменений в органах и лимфоузлах, а также и для выделения животных с генерализованной формой туберкулеза. Это дает возможность использовать указанные реакции для ныявлеппя степени распространения туберкулезной инфекции в стаде.

с п и со к

работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Использование РИГА для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, «Ветеринария», 1975. 3, стр. 110—111.

2. Сравнительная опенка некоторых серологических реакций -при диагностике т\'берк\'леза V крупного рогатого скота?' Тр. ВИЭВ, т. 43, стр. 161 — ¡67.

Материалы диссертации доложены:

Нп ученом совете Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии в декабре 1974 года.

ОгветРгпениыи за выпуск доктор ветеринарных наук, профессор В. Е. Щуревский.

Пили, в поч, 21.Х—75 г. Злк. 1609—150

Типография Московском ордоиа Трудового Красного Яніімо:ш ветеринарної! академии имени к. [Т. Скрябина