Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Сравнительная характеристика хромосом клеток системы крови здоровых, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и больных лейкозом овец

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ им. К. И. СКРЯБИНА

На правах рукописи МАРЧЕНКО Галина Ивановна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ХРОМОСОМ КЛЕТОК СИСТЕМЫ КРОВИ ЩОРОВЫХ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ ОВЕЦ

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1991

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Крг ного Знамени ветеринарной академии им. К. И. Скрябина.

Научный руководитель — академик ВАСХНИЛ, докт< ветеринарных наук, профессор Шишков В. П.

Официальные оппоненты: доктор биологических на; Дедух Н. В., кандидат биологических наук Разинкова Г. А.

Ведущая организация: Московский ордена Трудово Красного Знамени институт прикладной биотехнологии.

Защита состоится « /С? в час. на заседании специализированного сове:

Д 120.36.01 по защите диссертации на соискание ученой ст пени доктора наук в Московской ордена Трудового Красно! Знамени ветеринарной академии им. К. И. Скрябина (10947 .Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке акад мии.

Автореферат разослан « "/р. » . 1991

Ученый секретарь специализированного совета Слесаренко Н. }

ОНЦйЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тощ. Большой экономический ущерб :кивотновод-ству наносят злокачественные заболевания сельскохозяйственных животных, ведущее место среда которых занимают лейкозы.

Лейкозы относятся к заболеваниям опухолевой природы -гемобластозам, основным признаком которых.является злокачественное разрастание меток кроветворной ткани и нарушение их созревания. По выдвинутой академиком ВАСХНМ, профессором В.П.Шишковым вирусо-ишуно-генетической теории этиологии, патогенеза и профилактики лейкозов сельскохозяйственных животных, ваши звеном в цепи изменений, происходящих в клетке в процессе злокачественной трансформации, является геном.

Экспериментально показано, что числовые и структурные отклонения в кариотипе от норш являются характерной чертой большинства спонтанных и индуцированных опухолей и лейкозов. Интерес к цитогенетическому изучению злокачественного роста клеток особенно повысился в связи с обнаружением .специфического маркёра ("филадельфийской хромосомы") при хроничеотом миелоидном лейкозе человека.

Вштенлв сходства в развитии и клиннко-морфологическом проявлении лейкозов и других гемобластозов у человека и животных вызывает необходимость выведения общих закономерностей, лежачих в основе возникновения опухолевых заболеваний. Изучение природа антологического роста клеток связано .с разработкой многих проблем и необходимостью дальнейшего совершенствования экспериментальных работ в онкологии сельскохозяйственных животных.

Установлено, что вирус лейкоза крупного рогатого скота {Ш КРС) и ретровирус типа С <НГ1) Т-клеточного лейкоза человека имеют большое сходство: не имеют в своём геноме ни онко- ни дейкогенов. Они вызывают заболевание после длительного латентного периода» Большой вклад в изучение этиологии и патогенеза ' лейкозов сельскохозяйственных животных внесли опыты по экспериментально^ воспроизведению лейкоза крупного рогатого скота на овцах.и'ягнятах, так как воспроизведение заболевания у этого вида животных осуществляется с большим постоянством и в более короткие сроки, чем у крупного рогатого скота и имеют общебиоло-гзческое значение в решении вопроса о потенциальном использо-

Еании их как модели для изучения лейкогенеза и вирусного канцерогенеза человека.

Несмотра на расширение экспериментальных работ по исследованию наследственной изменчивости соматических клеток в лейкоз-ном процессе у лабораторных животных, всё же у сельсгсохозяистве них животных, карлологические исследования гемопоэтических клеток проводились недостаточно, а работы цитогенёгалеского характера при изучении экспериментального лейкоза овец в нашей . стране не проводились.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить изменения в харнотнпе клеток системы крови здоровых, инфицированных Ж КРС к больных лейкозом овец.

Для достижения намеченной цели перед наш были поставлены следующие задачи:

1. Усовершенствовать способ получения метафазшх хромосом клеток системы крови -и <язуч«ть спонтанный уровень хромосомных аберраций у здоровых -овец,.

2. Идентифицировать хромосомы в кариотипе инфицированных Ш КРС ц больных лейкозом овец о использованием дифференциальной окраски. ■

3. -Изучить изменчивость кариотипа клеток системы крови овец -в динамике развития онкорнавирусной инфекции.

4-. -Изучить уровень структурных аберраций хромосом в метках системы крови овец в процессе лейкогенеза.

Лагяная новизна работа заключается в том, что впервые ■проведено цатогенетнческоа изучение экспериментально индуцированной инфекции у овец.

Впервые вопросы о хромосомной нестабильности у больных экспериментальными лейкозами животных исследованы с применением дифференциального метода окраски хромосом, позволившего на качественно новой уровне изучить не только показатель общей повреждаемости хромосом, но и проанализировать специфичность повреждаемости индивидуальных хромосом в динамике развития онкорнавирусной инфекции..

Разработаны оптимальные условия получения метафазшх хромосом клеток крови овец для патогенетических исследований.

Практическая ценность работы заключается в том, что показала возможность-использования овец-для выявления цитогенети-юских изменений в метках системы крови-больных лейкозом кивотных и как модели для изучения механизма вирусного лейко-генеза.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

1. Всесоюзной научно-технической конференции молодых учёных по актуальным вопросам профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных (май 1985).

2. На отчётных научных конференциях Московской ветеринарной академии им. К.И.Скрябина (февраль,1985» I98Ss 1989).

3. Ш-м Всесоюзном совещании по проблеме повышения резистентности сельскохозяйственных животных {Кострома, IS88).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 научные статьи.

Объём и структура работы. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, иллюстрирована таблицами

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсундения полученных результатов, выводов, списка литературы, вкшочащего 267 источников,, з том числе 193 зарубежных авторов.

2, СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы, методы и условия проведения исследований

Проведённые исследования является самостоятельшм разделом комплексной теш, разрабатываемой с целью изучения различных аспектов экспериментально индуцированного лейкоза овец.

Изучение проводили на овцах романовской порода, находящихся в виварии Московской ветеринарной академии ям.К.И.Скрябина (ИВА) • и прекос, содержащихся на базе опорного пункта Украинского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (Укр.ШИЭВ). Заражение и серологический анализ проводили заведующий лабораторией лойкозов и рздиоишунологии, староий научный'сотрудник МВД. В.А.Ярикун и старший научный сотруд!шк Укр.ШШЭЗ Е.А.Авдриян, гематологпчесшй - старшй научный сотрудник ММ

Г.С.Петровский. Патологоанатомический диагноз у исследованных :шзотшх устанавливали старший научный сотрудник МВА Г.В.Сноз и старщий научный сотрудник Укр.ШИЭБ Е.А.Андриян. "

животных заракали культурой лейкоцитов крови и кровью от больных лейкозом коров и овец.

Работа по изучению хромосом клеток системы крови была проведена на клинически здоровых, инфицированных Ш КРС и больных экспериментальными лейкозами животных. Костный мозг был взят у 15, пробы крови у 38 овец.

2.2. Проведение хромосомного анализа

Цитогенетический анализ проводили каждое 4-8 месяцев от овец и баранов в возрасте от 3 месяцев до 5 лет. У.всех изучен йарютип клеток костного мозга к периферической крови, культи-'йированной с фнтогемагглютинином (ФГА), а у лейкозных животных ■без него, культивированной по С.С.Бирбину (1984). В каздом случае старались анализировать не менее 50 клеток, ¿сего исследо--вано 21255 метафазных пластинок. В ходе анализа учитывали числовые аномалии и структурные аберрации хромосом: хроматидные и изохроматвдше разрывы, обмены хромосом различного типа. Аномальной считали клетку с наличием дополнительной хромосомы или структурной перестройка в двух или более метафазах, или отсутствие одной и той ае хромосомы. Для выявления клинико-морфолоп ческих особенностей групп нивотных с идентичными или сходными хромосомными аномалиями учитывали первичные данные серологического и гематологического исследования ±дювя от животных, отрицательных по гематологии на лейкоз и на наличие антител к и по реакции шмунодиффузии в агаровом геле.

Для исследования препаратов хромосом использовали метод простой окраски красителем Гимза и 6-метод дифференциальной окраски но и. Ееиьпеьг (1971), при анализе дифференциально окрг иенных хромосом использовали принципы дифференциально окрашенных хромосом 039Ц ПО У. 1^е4ка4 Й.Р, Ог1Ыи (1587) .

Препараты хромосом тщательно просматривали под микроокою» фиксировали структурные аберрации» подсчитывали анеу- и:полиплоидные меташазы. Метаф&зные пластинки с хорошим разбросом и оптимальной сшрашзацией хромосом, предназначенные ддя изучения, мйкрофотографировали в иммерсионной системе (объектив ила-

нахромат Е 100x1,30) микроскопа та - 2 ( Carl Zelea, Jens ) с фотонасадкой "nf ". Использовались машсозернистне плёнки "Микрат - 200", ."Микрат - 300". Позитивные отпечатки выполняли предпочтительно на контрастной фотобумаге с конечным увеличением до 3000х.

Для метафазных наборов, соответствующих нашим критериям, были выполнены систематизированные кариотипы.

Накопленный наш материал цитогенетических исследований был подвергнут математическому анализу. Для статистической обработки экспериментальных данных использовали методы Г.Ф.Лаки-на (1980).

2.3. Результаты исследований.

2.3.1. Усовершенствование метода приготовления препаратов хромосом клеток крови овец

Для приготовления препаратов хромосом клеток крови овец, мы использовали модифицированный метод культивирования лимфоцитов крупного рогатого скота (И.Л.Гольдман, 1972; А.Ф.Яковлев, 1976; Л.И.Мутузкин, IS84), состоящий из четырёх этапов: взятие крови, приготовление культуры, культивирование, обработка культуры. Чтобы увеличить количество митозов, для культуры мы брали среду следующего состава: 2 т среды Игла, 2 мл среда 199, I мл крови, ОД мл ФГА и через 20 часов после начала культивирования обрабатывали культуральную смесь в течение 15 -20 мин при температуре от -Io до +1°.

2.3.2. Анализ нариотипа первой группы животных, здоровых, отрицательных по гематологии к серологии на лейкоз

Настоящая работа до изучению хромосом соматически клеток овец при экспериментальном лейкозе проведена на здоровых, инфицированных Ш КРС и больных лейкозом овец»

В первую группу вошли здоровые озвд и бараш» отрицательные по гематологии на лейкоз и на наличие антител к slv и по реакции иммунодис[]фузии в агаровом геле. Лейкететтоз 5,0 - 15,0 тыс„/мкл. Цитогенотически кровь исследована от 33 животных» костный мозг от 15. Всего проанализирован®) 5031 метафазных пластинок.

2.3.2.1. Спонтанные числовые аномалии и структурные аберрации хромосом здоровых овец

При анализе числовых аномалий хромосом клеток пери^юричеС' кой кровк и костного мозга овец учитывали анеу- и полиплоидные кетафазные пластинки. Подавляющее большинство клеток имело нор малыши диплоидный набор хромосом 2п = 5-1. Аутосош были представлены 3 парами мотацентричеоких хромосом, 23 ларами акроцен' рических хромосом и парой полошх, весьма характерных для этого вида живот 1шх. У баранов X - хромосома сходна с таковой у овец, а У - хромосома субмэтацентричоская самая мелкая хромосома набора.

Помимо диплоидного набора хромосом 'нами были обнаружены числовые вариации набора, которые имели место в незначительном проценте и включали клетки с гиподаплоидный набором хромосом, которые в 1ультурах клеток крови составляли 4,81+0,36, костного мозга 6,75+0,65, Полиплоидные клетки 'составляли всего 1,84+, 0,45,

Необходимо отметить, что тфй ^тЬз^нотическом исследование культур клеток крови и костного гкйга. ¡здоровых овец и баранов, ката не бшхи выявлены клетки тайердиплоидшми наборами хромосом.

Исследуя спонтанный -урйвайь структурных аберраций ш установили, что в основном это были разрывы. В культурах клеток крови разрывы хромосом в околоцентроморном районе составляли I,18+0,18, б костном мозге 1,73+0,34. Пробелы в крови составляли 0,93£0Д7, в костном мозге 0,74+0,22, одиночные и парше фрагменты выявляли только в крови 0,82+0,161 0,91+0,16, соответ ственко. При первичном просмотре культур клеток крови и костног мозга здоровых овец и баранов мы заметили большое количество ассоциаций и поэтому решили их фиксировать, так в крови их толп чество было равно 2,60-1.0,27, в костном мозге 3,81+0,49.

Интересно, что разрцщ хромосом чаче происходили в аухрома тичаских районах. Это свидетельствует об определённой хрупкости данных районов,также такие явления опасны для клетки, так как именно в эухроматических районах хромосом расположены актив но фу!шщ01шруодие гены.

Уровень изменчивости хромосом клеток системы овец с

экспериментально ивдущгровашлш лейкозом

: Количество » • Число Клетки, М+ т. Число

группы : лейкоцитов, : : исследован- --------- клеток с

: тыс./мкл. • о : 1 о . о : 6 ; ных метафаэ с числовыми аномалиями : с струк- : ; турными : абершци-* : ЯМП * ; ассоциациям! хромосом, М+т.

I 5,0 - 15,0 кр 3535 6,64+0,42 3,84+0,32 2,60+0,27

- к/м 1496 8,82+0,73 2„77+р,4 3,81+0,49

п 15,0-20,0 + кр 3532 13,9+0,58 7,7+0,44 3,45+0,31

+ к/м 1500 14,531Р83 3,67+0,49 5,6+0,59

Ш 20,0-65,0 + кр 3504 24,49+0„73 15,41+0,61 4,5^0,35

+ к/м 1477 17,87+0,1 6,64+0,65 7,5+0,69

1У 65,0-160,0 + кр 3525 38,75+0,82 18,24+0,65 8,76+0,48

+ к/и 1490 38,05+1,26 15523+0,93 9с79+0„77

хр - 1фОВЬь к/м - костный мозг

I

•<2 (

Для проверки зависимости анеуплоидик и структурных аберраций хромосом от возраста, нами было проведено сравнительное изучение частоты клеток.с аномалиями хромосом крови и костного мозга здоровых животных разного возраста. У овец и баранов младшей возрастной группы (3 - 12 мес.) уровень анеуплоидии составлял 7,0+1,13, среднего возраста (12 мес.- 4года) - 3,5+1,18, старшей возрастной группы (4-5 лет) - 4,7+0,47, в костном мозге соответственно 8,11+0,90, 4,81+0,73, 5,1+0,49. В кавдую группу входило по 10 животных. Структурные'аберрации хромосом составляли у молодых животных в крови 4,7+0,94, среднего возраста - 1,&£ 0,29, старшей возрастной группы - 3,14+0,59, в костном мозге 2,10+0,45, 1,5+0,38, 3,22+0,55, соответственно. При графическом изображении зависимости анеуплоидии и структурных аберраций хромосом от возраста, наблвдали повышенный процент у молодых и старшей возрастной группы, в сравнении с овцами и баранами среднего возраста. Кривая имела параболический характер (рис.1).

2.3.3. Анализ кариотипа второй группы животных, инфицированных ВЯ КРС.'без гематологических изменений

В группу вошли овцы .и бараш серологически положительные в РИД, без гематологических изменений. Лейкоцитоз 15,0 - 20,0 тыо./мкл. Цитогенетйчески кровь и костный мозг исследованы от 10 животных. Всего проанализировано 5032 метафазных пластинки.

У экспериментальных животных, в перше же месяцы инфицирования, в культурах клеток крови и костного мозга наблвдали числовые аномалии и структурные аберрации хромосом. Анеуплоидия в культурах клеток крови достигала 13,9+0,58, большинство составляли гиподишгоидные ыетафазы 7,07+0,43. Наибольшее количество . ишодиплоидных клеток было представлено '51-й хромосомой. В клетках костного мозга типодашюцдия составляла 10,73+0,8. У животных второй группы мы уже фиксировали метафазы с гипердиплоидным набором хромосом, так, из всего количества исследованных мата-фаг культур клеток крови до 4,81^.0,36 были гшшрдишюадшш, в то время, как в костном'мозге"такие клетки отсутствовали. Из гипердиплоидных клеток;наибольшее количество составляли с 65-ю хромосомадш.

Рис. I Изменения хромосом овец в зависимости от возраста а - числовые аномалии, d - структурные аберрации I - кровь, G - костный мозр

Структурные аберрации в культурах клеток крови составляли 7,7+0,44 и были представлены разрывами хромосом в околоцентро-мерном районе 3,43+0,31, пробелами-2,21+0,24, одиночными и парными фрагментами 0,93+0,16, '1,13+0,17, соответственно. В клетках костного мозга структурные аберрации составляли 3,63+0,49'п были представлены только разрывами хромосом в околоцентромерном райош 2,73+0,42, пробела,® 0,93+0,24. Количество ассоциаций в культурах клеток крови достигало 3,45+0,31, костного мозга 5,6+0,59.

2.3.4. Анализ кариотипа третьей группы животных, серологически положительных з РОД, с' гематологическими изменениями крови

• В группу вошли животные серологически положительные в ЩЦ, с лейкоцитозом 20,0 - 65,0 тыс./мкя. Цитогенетически кровь и костный мозг исследовании'от 10 животных. Всего проанализировано 5648 метафазшх пластинок.

Ддя инфицированных животных данной группы характерно постепенное увеличение цитогенетических изменений. Хромосомная характеристика клеток крови и костного мозга имела отличительные особенности не только при сравнительном анализе со здоровыми животными, но и с инфицированными. Имело место увеличение анеуплоид-ных метафаз до 24,49+0„7 в культурах клеток крови и 17,8+0,1 костного мозга. Причём, возрасло количество гипердиплоидных клеток в крови до 10,7+0,52, при значительном появлении метафазнах пластинок с набором хромосом, равном 55. Они составляли 585 от-всех гипердипяоидных меток. В костном мозге животных третьей группы гипердкплоидные наборы хромосом не обнаруживали, однако в нём присутствовали полиплоидные клетки 5,55+0,6.

Структурные аберрации хромосои были разнообразны и достигали з крови 15,41+0,61, костном мозге 6,64+0,65. Разрывы хромосом в-околоцентромерном районе достигали в культурах клеток крови 4,54+0,35, костного мозга 4,05+0,54. Пробелы, одиночные и парше фрагменты выявляли только в крови 3,71+0,32, 2,31+0,25, 2,19+0,25 соответственно. В клетках крови фиксировали дацентрикк и кольца (1,14+0,10, 1,51±0,21), отсутствовавшие в клетках костного моэга.

- и -

Количество ассоциаций в культуре клеток крсвз достигал.; 4,5+0,25, костного мозга 7,5+0,69.

2.3.5. Анализ кариотипа четвертой группы жквотш^с, соро-логически поло:штельшх з HUI, о лейкемическнми показателями крови при развёрнутой стадии забатаза-ния

U группу зоыли овцы серологически положительные в ИИ. Лей-хоцнтоз С5,0 - 160,0 тис./мкл. Цитогенетически кровь исследована от восьми животных, у пяти в динамике к у трёх при убое, костный мозг от пяти. Всего проанализировано 5648 метафазных пластинок.

lb 3525 исследованных метафаз культур клеток крови 61„3>1 были диплоидными. Анализ анеуплоидии показав наличие большого количества гипердиплоидных метафаз 17,08+0,63. Группой клеток по численному преимуществу были с 55-п хромосомами, которые составляли 10,3+0,78 из всех гпперщкплоидных, Б костном мозге анеупло-идия достигала 38,05+1,26, гипердиплоидные матафазы составили 16,78+0,96, гиподнплоидные - 15,17+0,86. Полиплоидные метафазы в культурах клеток крови достигали 7,18+0,43, з костном мозга 6,11+0,62.

Ит структурных аберраций хромосом в культурах клеток крови наиболее частыми были разрнвы хромосом а околоцентромернсм районе 6,21+0,41,113 которых основная масса была представлена разрывом третьей хромосомы в области центромеры. В этой связи возникаем предположение, что аберрации хромосом характеризующиеся paspíBa-ми в определенных сегментах хромосом инфицированных яивотных и с развившиеся лейкозом, являются местом локализации гонов, повреждение которых мокат быть связано с развитием злокачественного процесса. Характерно для данной группы животных наличие в культуре клеток крови кольцевых хромосом 1,95+0,23 и дицентриков . 2,04+0,24, которие отсутствовали у предыдущих груш животных» Общее количество аберраций хромосом а культурах клеток крови составляло 18,1+0,65.

Структурные аберрации хромосом-клеток костного мозга отличались многообразием и достигали 15,2-3+0,93. Представлены 6ms раз]1лВЬ'.и хромосом в околоцентромерном района 5,37+0,58, проба-

лами 3,09+0,49. Кроме того, выявляли одиночные фрагменты 1,41ч 0,31, парные фрагменты 1,54+0,32, дицентрики 1,67+0,33, кольце 2,15+0,38 отсутствовавшие в костном мозге предыдущих групп яш кых. Фиксировали большое количество ассоциаций, в культуре кле ток крови 8,76+0,48, костного мозга 9,79+0,77. .

Цитогенетические исследования культур клеток крови животных с развившимся экспериментальным лейкозом показали, что при экспериментальном заражении.овец Ш КРС могут быть различные типы числовых аномалий и хромосомных аберраций. У одних овец обнаруживали клетки с анеуилоидией преимущественно :гиперцишгои ного типа, у других - преобладали полиплоидные клетки. Так, у восьми обследованных животных к настоящему времени убитых или павших от лейкоза, с диагнозом, подтверждённым гистологически, обращает на себя внимание постоянное наличие в культурах клето крови лейкозных зшвотных меток с "числовыми аномалиями и струн турными аберрациями хромосом. У животных & 289 , 483,' 417, 271, 419 преобладали клетки с~гипердиплоидными наборами хромосом, среди них чаще выявляли с 55-хгхромосомами, разрывом хромосомы 3 в околоцентромерном районе, что видимо характерно для лимфо-вдного лейкоза, так как у этих животных при убое был обнаружен лимфоидный лейкоз. У животных № 424, 290, 251 среди анеуплоид-ных метафазных пластинок преобладали полиплоидные, из* аберраци хромосом, "разрыЕ хромосомы-З^в" околоцентромерном районе. "

ПриЕедёгаше данные изучения культур клеток крови инфицирО' ванных ВЯ КРС и больных лейкозом животных,являются результатом анализа хромосомных наборов в культурах клеток крови, стимулированных фитогемагглютинином. Без добавления митогена у животных первой, второй и третьей груш митозы не выявляли, но при кратковременном культивировании нультур клеток крови животных четвёртой группы, с развившимся лейкозом, без:добавления ФГА наблвдали штозы. Относительное число клеток с аберрациями хромосом в некоторых случаях было выше,' чем в культурах'с ФГА, но небольшое количество митозов затрудняло анализ (табл.2). При экспёршентальном лимфоидном лейкозе из анеуплоидии преобладали типердиплоидные клетки, структурные аберрации хромосом, разрывы хромосом в околоцентромерном районе, пробелы, ацентричес-

Таблица 2

Исследование хромосом культур клеток крови овэц с развившимся лейкозом, после инфяцирозашя М КРС, без добавления ФГА

Показатели крош Число Клетки, М+ в Число

-------------- иселедо------------клеток с

п/п лейкоци- лимфо- ванных с чисяовы- с струк- ассоциа-

■ тоз, цитозр мета- ми анома- турныш циямк хро-

тыс./мкл. % ' фаз лиями аберраци- косом,

ями в

ЛимФоидннй лейкоз

289 142,0 98 104 40,0+4,81 15,4*3,50 .9,6+2,98 483 80,0 98 128 . 23,2+3,7 10,3+2,69 9,38+2,5 4X7 160,0 96 185 39,0^,59 16,8+2,75 10,87+2,28 271 58,0 99 50 43|0±7>0 15,3+5,09 8,0+3,84 419 35,0 . 95 94 28,4+4,65 9,0+2,95 8,51+2,88

.Дшйооаркома

424 37,0 95 85 35,8+5,1 13,2±3,7 Ю,59±Э,34

290 18,0 98 50 30,0^6,49 11,6+3,03 10,0*4,24 251 38,0 98 38 36,8±7,8 13,1+5,47 7,9±4,38

кие фрагменты. При экспериментальной лимфосаркоме из анеуплоидщ преобладали полиплоидные' клетки, разрывы хромосом в околоцентро-меряом районе, дидентрики, кольца. Число клеток с ассоциациями хромосом было велико, у животных $ 417, 424, 290 достигало 11%.

ВЫВОДЫ

I, Усовершенствован способ получения метафаз для исследования хариотипа клеток крози озец.

2 о В хромосомных наборах культур клеток крови и костного мозга здоровых овец отмечена анеуплоидш с преобладанием гипо-дипловдных метафаз и абзрраций хромосом, з основном хроматид-ного типа»

3„ Определена динамика "числовой и структурной изменчивости яаркотипа клеток системы крови здоровых овец в зависимости от возраста. Установлено, что уровень изменчивости хромосом у животных разных возрастов имеет параболический характер«

4. Впервые прослежены изменения хромосом при развитии ин-" .фекции у заражённых ВП КРС овец. Установлена прямая коррелятивная зависимость уровня числовых аномалий и структурных аберраций хромосом от стадии заболевания, .

'5, Отличительной патогенетической характеристикой клеток крови и костного мозга овец с развившимся экспериментальным лейкозом было наличие ашуплоидии с преобладанием гипердиплоидных метафаз и аберраций дроносо""., а именно: разрыва третьей хромосомы в околоцентромерком районе, кольцевых хромосом, дицентриков.

6„ Показано, что з краткосрочных црьтурах клеток крови больных лейкозом-овец при"культивировании без митогэна (ФГА) присутствуют митозы'с больпшм количество® аберраций хромосом,' из этого следует, что при более длительном культивировании

часть аномальных клеток не доходит до-митоза.

7. Установлено »• что гипецдашкоиднаэ '¡клетки и структурные аберрации, хромосом, выявляемые при лейкозе; появляются з кост-'ном мозге в развёрнутой стадии заболевания.,, что свидетельствуем о его вовлечении в злокачественный процесс з последкш очередь.

8. Цитогенетическйе изменения могут иметь прогностическое значение при развитии лейкоза. Отмечено, что у овец в первые 3 -6 месяцев после инфицирования появляется числовые аномалии к ' структурше"аберрации хромосом/характерные для животных больных лейкозом, которые отсутствовали у .здоровых.

— ......"Сведения о практическом использовании полученных

научных результатов.

1. Научша данные кандидатской диссертации внедрены в учэ(1-аый процесс при чтении лекций студентам ветеринарного факультета, слушателям ФСК, при- проведении лабораторко-практжчэских занятий. Утверждено Советом ветеринарного факультета, протокол й 10 о? июня 198Э года,

: ■ ■ ■ 2. По материала!,I диссертации получено полоантальнсе решение о признания"изобретения заявка й -4.67522? от 27 сентября -1989 года'на"Способ солучэкяя препаратов хромосом клеток крови аивотных".■

Перечень опубликованных работ

1. Тареева И.Г.» Мутузюш Л.И., Марченко 2'.И. Возрастная изменчивость кариотипа клеток системы крови крупного рогатого скота //Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий с.-х„ аивотных: Сб.науч.тр. /Моск.вет.акад. им.К.И.С» бина,- Ц., 1984.- С.28-33.

2. Марченко Г.И» Цитологический анализ клеток костного моз га к лейкоцитов крови овец //Актуальные вопросы'профилактики и лечения болезней с.-х. животных: Тез.докл. Всес, научно-техшч. кокф„ молодых учёных, Москва, 21-23 мая 1985.- С.34.

3. Марченко Г.И., Строльченко Н„С» Способ получения препаратов хромосом из кровк животных //Проблемы'лейкоза и инфекци-он аи заболеваний с.-х. аивотных: <36.науч. тр. /Мсюк.вет.акад. им. К.И.Скрябина,-Ш, 1988.- С.57-59.......

4 „ Марченко' Г.И» "Идентификация хромосом в караотшю овец '//Селекция с.-х., жив-х на устойчивость к бслезютя-и иошашшю резистентности в условиях'срагшиенаой биотехшшзггшт Сб .катар. Ш'ВсеСоСОВ. по вройяше пошл» резаотенигоетн с.-х. гивотшх.-И., .1988.- С.14-15. ' ;