Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование средств и методов лабораторной диагностики оспы овец

СГі

О Ш>1 МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН АЛМАТИНСКИЙ ЗООВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КЕРЕМБЕКОВА Ултуган Жаламановна

16.00.03.— ветеринарная микробиология, иммунология, эпизоотология и инфекционные болезни животных

Автореферат

диссертации ка соискание Ученой степени кандидата ветеринарных наук

АЛМАТЫ, 1994

Работа выполнена в лаборатории диагностики вирусных инфекций Научно-исследовательского сельскохозяйственного института Национального центра по биотехнологии Республики Казахстан

Научный руководитель: кандидат биологических наук, заведующий лабораторией Пасечников Леонид Николаевич

Ведущая организация: Институт микробиологии и вирусологии Национальной Академии наук Республики Казахстан

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Сансызбаев Байсал Калабаевич.

- кандидат ветеринарных нкук

Турсункулов Шахайдар Жорабекович

Защита состоится « $ Т'г 1994 г. в« (С^ * часов

на заседании специализированного Совета Д 18.01.02 при Алматинском зооветеринарном институте (480013, Алматы, пр. Абая, 28).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алматинского зооветеринарного института.

Автореферат разослан « » «■*- ( 1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат ветеринарных наук,

Актуальность тега: Оспа озец е иастоядэе зреет регнстрпру-

В странах СИГ с ISC4 года отмечалась лекь отдельные случаи заболевания (Н.В.Я2хачов, Ю.Ф.Борясовпч, 1973), одзако, о 19*73 со 1985 года оспа приобрела характер зевзоотж: в rxzs'x областях Казахстана, респуоллках Среда eli Азаа, Грузгл Ф.Н„1Ъйопоз, 5.П.Л5тэснсза, 1979} А.ГеЯескнго, 1980). Отдельные с.^п ззбопезалля .

ГКЛ5Л5 "50 ТО 3 3 Еоалсдпзс ГОДЫ, 3 ТОМ Ч2СЙЗ 201нжа оспн озщ в Кзкл-ОрдкнскоЁ a Ak'îe6ehcî:o-3 областях в октябре IS33 г. Все это делает необходим разработку ноэнх кла усовершенствованно пто-илхея средств п кетодез лабораторной длагностакп оспы овец в плане познагеняя их сяецнЗлгшостя, акггвностя, зпспрессностз а техня веской простоты постановка. Однако в доступной нам литературе кн-|ор5СТПЕ ао даа?ностзке оспн озец л о методах получения автзрепоз П CHBOpOTOK содоргйг ДПЯЕ ртдзлыше ОТрКЗОЧЗЯв сведения;, Для соо«-такезня разработанных л щяшеаяеюас в ffiïCXîî ссрологнчоспгг: реак-щ& - РСК, РДД, ' Б5Д., Шк пеобходиа mapic-songe, высокоенохе5н^=-ше, аккзааэ дагаос стуки. Каздзя яз перс-чгслбзкых.з'щ-э сероло-?нчесиих редаий наряд?- 0 ноложвтолыша качествада икеет я своя >трпцатеяшыо стороьн з плаке ях эвоноьачзостз, эЕспрессностн v: гехнлчесзтоЗ простоты постановка. РДП и РСК 'алеются достаточно ¡увегавтелькшз, спск2фп<гпшп методемз, ко 'X'DC3,?>jT спсцкзльногс >борудованяя, Ершектш в лпбж ветерпнаркыс лабораториях, однэ-:о недостатков ях является пеэконоютаый расход дяагноетагеезкЕх гоеяарагоэ я относит ошшя продо^-лтелькость зо времени (24-43

3 . ■

Актуальность работы обусловлена также необходимостью обеспечения ветеринарных диагностических лабораторий безопасными да агностическими препаратами и высокочувствительными методами.

^еди и задачи исследования. Целью настоящей работы является совершенствование средств и методов лабораторной диагностики оспы овец. В связи с чем перед нами были поставлены следующие задачи: '

1. Разработать способ получения комплексного культураль-

ного антигена для серологических реакций при оспе овщ я гипер-ищунизацивг яявогных. ■ ■

2. Отработать метод получения специфической сыворотка на взглмурный антиген с целью использования ее в серологических

• реакциях я выделения иммуноглобулинов.

3. Разработать и определить оптимальные условия постановка микрс-РСК и микро-РДСК для диагностики оспы овец.

Научная новизна и практическая значимость. Разработан способ изготовления специфического к вирусу оспы овец комплексного кулмурального антигена, обладающего высокой активностью, спе •=■ цифичностью, пригодного для использования в серологических ре^' акциях и гшериймунизацш животных. ' ■ . • '

■ Отработана схема получения универсальной диагностической ' сыворотки при оспе овец для постановки РДП, РСК, ЬЙА, PH и ги-лериммукизацяг животных с использованием вакцинного, штамыа

. "ГОТСКИ" вируса ост, овец. .

■ Разработаны мякро-РСК и шкро- РДСК дач выявления специфических антигенов и антител при оспе овец в патологическом материале от больных и павших газетных. Ыикоо-РСК предлагается как эксйресс-петод диагностики оспы овец.

Внедрение. Материалы диссертационной paööftä ¥с пользуются в лаборатории диагностики вирусных инфекций ЯЙбХ'Й й в ветеринарных лабораториях Республики Казахстан.

Ад роб алая -работа и публикаппя результатов •> Результаты научных исследований апробированы и подтзерждеяы комиссионными испытаниями (акт '.Ь 09-05/4вн, 24.01.94; акт 09-05/Сян, 11.02.94).

■ Материалы диссертации долонеяы на научной конференция ВШ1ИВЗид{ (Г992 г.) и на заседаниях н^чяо-мегодичесшго'совета НИСКИ {1990-2993 гг.). По теме диссертация опубликовано 4 научные работа. ■ -

Основные положения диссертационной работы, втлноскше на защиту. ’

- Результаты разработай eriööo6a изготовления когжлексного культурального спецлЬячЕСкоГо антигена вируса оспы озец, применяемого постанойкя сер02оГ'лтескйх реакций и гиперЯ:*.униза-ЦЙЗ лИВО’ГЙЙХ» .

-' Результаты йодученйя -ишерим^яной сыворотки при оспе оё1ц-, пригодной дйя ПосТайовки серологических реакций и выделе-нйя Мщгноглобулинов» . , .

*•. РозульТа5н эксперлыентальнш. исследований по разработке ыакр'о-РСХ я ьййро-РДСК для выявления антигенов и антител к вирусу ослы овец, ■ • ■ . \

Обшем работы. Диссертация изложена яа 124 листах машинописного текста а включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, вывода, практические предложения и'' список использованных источников. Работа иллюстрирована 16 таблицами, 3 рисунками и дополнена приложениями. Библиографический . указатель включает 188. источников литературы, В' том числе 93 оте-

чеотвенных и 95 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ;

2.1. Материалы и метода .

Б работе использованы следующие шгамш вируса осш овец: эшзоотические-Афганский, Казахстанский; вакцинные - Афганский, НИСХИ, ВГНКИ, К,:,165, а также полевые штамп вируса, подученные из органов и тканей больных, оспой овец (Грузия, Читинская обл.). Для получения вируссодержащего ьагериала и гипертьунных сывороток в опытах были использованы овцн 1-2-х летнего возраста тонкорунной порода,*козе беспородные того же возраста, ролики &-10 ■месячные, порода белый и серый великан, весом 2,0-2,5 кг и "юрские свинки массой 350-400 г. Для опытов брали только клинически здоровых животных, которых предварительно выдерживали на карантине не мвнёе 15 'сут. ’

Для выделения, культивирования, титрования и изучения' накопления антигена гвруса оспы овед применяли первично-трипоини-зированную культуру клеток почки ягненка (Ш), перевиваемые линии культуры клеток почки овцы (ПО) и почки сирийского хомячка (ВНК). ■ ' . . ' . ’ ' ; ' .

. Б качестве питательных, сред дам культивирования клеток и вирусов использовали: 0,5 % гемогядролизат лактоальбушша (ГЛА) на солевом растворе Хенкса, среды 199, Игла, по^сштетическую. пристеночную ШОП) с содераанием нативной нормальной бычьей сыворотки ох 2 до 10 %. . 1 •

■ ■ Пробы патологического материала брали от больных и экспе-

риментально зараженных' животных с проявлением характерных клинических признаков болезни. Кровь для выделения вируса брали от больных овец в период максимального подъема температуры тела. '

Для обнаружения специфических антител, кровь на сыворотку получали на 3-5 и 12-17 сутки после- снинения температуры тела.

Проверну активности и специфичности антигенов, сывороток и иммуноглобулинов проводили в'РДП, РСК, ИФА, ША, по методикам, разработанным в НИСХЙ. '

В Качестве специфических антигенов использовали вируссодер-гатцую суспензию оргаяоТйанёвого материала и специфические культуральные антигены* приготовленные по ранее разработанной.методи-Ке; • ' , - - .

Специфические сыворотки получ^кяи путем гипериымунизации овец сргакотканезой вйруссодеряащеЗ суспензией на основе эпизоотического штамма оспы овец. 3 качестве контроля • ,

йспользоваля сыворотки от здоровых животных и нормальный антиген, приготовленный из неи'н^яцяроваяной культуры клеток.

Для выделения иммуноглобулинов из гиперимьуных сывороток применяли спиртовой метод по КЬр’ и трехкратное высаливание . общёЗ фракции глобулинов насыщенный раствором сульфата аммония.

. Статистически-обработку полученных данных “проводили разностным методом Стъюдента, описанным Й.Д. Чистяковым. '

8.2. Результаты собственных наследований ' "

2.2.1. Разработка метода приготовления комплексного , • культурального антигена Для серологических ,

реакций при оспе овщ я гицерям^унизации животных

В связи с тем, что использование в'диагностической работе эпизоотических шташов вируса оспы овщ небезопасно, нами проводились, исследования по получению культурального антигена из вакцинных -штаммов названного вируса С НИСХИ,\КЬ^д. ВГНКЯ) .

. С целью определения оптимальной культуральной систем* для инкубирования штёшов-НИСЯСИ,. ВПЖИ вируса-оспы овец ,

и приготовления кошлекснрго культурального антигена для постановки серологических реащи4. 2 гиаерищгни заци животных изучали репродукцию антигена. & культуре клеток Ей и ПО. На основе как. -

кого штамма вируса. приготовлеод от шести до двенадцати серий .

■ . - > ' * ' * • препарата. :

Наиболее стабильные, результаты по накоплению антигена были подучены при ^пользования шшдав НИСХИ и ВЬ^д вируса осш овщ з обоих культурах; щеток-.. Таге- тигр антигенов из штамма В%д,' по -¡ученных на ль тур е клеток' Ш, в. средней составил, в РЦП 1:8,2± 1,5, з РСК - 1:1364 15;; в. ИФА. - 1:;Г250-» Г::2560. Высокий титр антигенов 5ыл такке при вырациванли вируса а кудздгре клеток Ш (РДП 1:8 ;

РСК 1:120; ИФА 1:1280).. Активность здтигенсй,, приготовленных на зснове шташа НИСХИ' з культурах: клеток; Щ; и ПО. составил: в РДП -[:2,6+0,8; 1:10,6*1,7; в РСК; 1;::1;49±Г4^ Г:.Г4?±Г4;; в Й5А- Т:.128С - -

[:5120; 1:2560-1:10240, соответственно. Средний срок- инвубац®- . .

гафицированной культуры йлеток ПЯ до 90/2 по раженяя шнослоя еосг--гавил 5,2+0,4 сут. Для выращивания вкруса в культуре клеток-Ю . >тот срок был 2,92:0,3 сут. "Вышеизложенное свидетельствует о- том,.

1’го культуральный- антиген на оспу овщ можно'получить из вакцин-' шх'шташэв НИСХИ и ВМ^д данного вируса, используя для гультиви- .

ювания как культуру клеток ПН, так и .культуру клеток ПО-. Однако, .

тестабилъность и дороговизна исходного материала для получения ¡ервичяо-тряпсянязированной культуры клеток Ш ограничивает воз- .

ижносгь ее широкого применение. В связи с этим в дальнейшем для еров едения .опытов по приготовлению комплексного культурального .

щтягена использоваяи перевиваемую линию ц/льтуры клеток ГО и ;акцйнный .штамм ПИСКИ вируса оспы овщ, полученный нашим инсти-$?оииз индийского эпизоотического'штамма.- "■ •'

При определения оптимальных' условийштамма НИСХЯ вируса оспы.овец в культуре клеток Й0*Для подучэния высокоактивного вируссодеркащего татериала,дтамйку накопления анти-. гена изучала в зависимости от множеств ейноотй Инфицирующей дозы зируса, способа выращивания, типа питательной бреда, сроков ин-кубировакия и во зраз га руль тури іслеток. " ■ ' .

, В результате проведенных исследований уотайовлено, что для выращивания вируса с целью поучения болёе авизного материала оптимальными условияіди являются І-2-х суточнай фльтура клеток ПО, выращенная в 3-х литровых круговых сосудах роллерным методом с величиной ЩЯ вируса, равной от 0,05 до ОД ЕИ5о/кл 0 приме-неняем питательной среды ПСП, содержащей 5 І Инактивированной нативной бычьей сыворотки, Прй этом максимальное накопление антигена происходит в течение. 3-х суток со дня инфицирования и достигает титра 1:16-2:32.в РДЙ, 1:120—X;320 в РСК й Ї:5Ї20-1:40960 в КФА с активностью вируссодеркащей суспензии 5,5-6,5 2о.ТДДддусмз. Сбор; материала проводила на 3-4 сутки культивирования при поракения- шнослоя на 80-90 % механически стерильным., .шпателем или раствором .версена. \ ' . . ,

Полученный культуральный антиген концентрировала, тремя способами: осаждение сернокислым шаганием, полиэтяленгликолем ЬНЮОО и центрифугированием с последующим термолазйсом осажденных клеток* . . . • - - . - \ -’ - . ■

Антиген, полученный дутем осаждений, сернокислым аммонием,. бйЯ низкоактивен в РДП 1:4 только с гипериммунныш сыворотками При отсутствии комглемент$ккскрувдей активности. Антиген, приготовленный путем сорбцли ПЭГ-6000 давал-неспецифичность в РСК и

ЙФА. Наиболее оптимальным методом концентрирования.антигена ока-

\ • • •' ’ « -

зался метод, осаждения клеточной, фракции суспензия центркйугиро-

ванием с последующим двукратным замораживанием при температуре шцус (20+2% °С и оттаиванием при комнатной температуре. ІЬсле' чего антиген вновь подвергали центрифугирование) при 3500-4000 об/мин в течение 20 шн и надосадок использовали в качестве ан -т иг єна для 'постановки серологических реакций и гшерищт’низадии зевотных. .

Активность и специфичность антигена прозеряли в РДП, РСК и Шк. Специфичность антигена в РДП, РСК испытывали с применением нормальных я гетерогенных сывороток. Результаты исследований представлены в табл. I. '

. Из данных уабл* І вдднб, что использование штамма НИСХИ вируса осш ов&{ для йолучеаия комплексного культурального антигена, вырацёкноГо по разработанной наш методике, позволяет приготовить препараты со средней активностью в РДП 1:19,2+3,2, в РСК 1:198^1,5, в Шк от Ї:І2£0 До 1;40560 и активностью вирусной суспензий 5,7±0,ї6^ТЦі1ддусМз. Достоверность результатов во всех с^чачх составила Р>0,01 (Л-=Ю). .

Антиген в нативном состояїйи при температуре (4+1) °С сохраняет свою активность в 'течение 6-7 мес. и в заморокенном виде более 60 мес. (сроки набходения). Йри этой же температуре, антиген е жофШЕзированяой! виде не снижает свою активность в ■ течение 5 лет (срок наблюдения). .

Основными достоинствам разработанного способа получения культурального антигена являются: •

- использование вакцинного шташа НИСХИ вируса осш овец;

- применение для кульгавтровалия вируса оспы овец перевиваемой ; линии культуры клеток ПО на питательной среде ПСП, приго-товденной на основе компонентов отечественного про язз оде те а;

’ '-'-способ, концентрирования антитела центрифугированием с

. . Таблица І

Оценка активности и специфичности комплексного культурального антигеиа в

серологических реакциях

„Штамм !Возраот!Срок »Активность «»вируса! культу-1 янну-! вярусс одержа-! !ры кле-!бация!щез суспензии

1 *,>1 <№г1

Активность я специфичность антигена в:

РДП

РСК

! ИФА

М

!

! СС !СС !СС ІСН! СС 1 СС ! СС ! СС !СС 1СС !СЩ СС ! СС ! СС ! іЧЖЩЗШіад-1 ! 2-88! 1-90! 6-93! 4,122! ККО! ад-! 12-88! 1-90! 6-93! 1___!___ієн*! 100 ¡00 »00 ! _1_ !енИ_]00 »00 100 !

1. НЙСЭД' .. 2 2

2. ЯИСХИ І 3

3. НЙСХИ І 3

4. НЙСХЯ І 3

5, НЙСХИ ■ 2 2

б. ЇЇЛСШ І • 4

1, жжи 2 4

8,'!И2С? І 3

5. НЙСХІІ 2 4

ТГ, у ».“«Г'Г 2 3

II .^итиоіь ЗО 3

Т2.лсзт:>олг. Ш г

*3, ЇДНТООДЬ ІЗ 4

14.контроль ПО І

5.75

6.5

5.5

5.75

5.25

5.75

5.25

6.5

5.5 5,0

— - . 8 16 16 — м .. _ 120 80 120 5120

— * — — 32 ■33 32 - — • _ — 24С 240 240 20480

— - - — 16 32 32 - — ■ - — 240 240 240 20480

— — ‘ — 32 32 32 - ~ — _ — 320 320 320 40960

— * — *- — • Ї6 16 16 — — — — 240 240 240 10240

- ' — ’ — — 8 8 8 — — — - — 160 120 160 5120 ■

— — — 8 16 16 - _ —. — 120 80 120 1280

— . — 32 32 32 — — ■ — ' — ' 480 320 480 40960

— — 8 ІЗ 16 — — _ .. во_ аз 80 10240

- - — 8 16 16 - -• - - . — ~ — ■ - 5120

- - -** - - - " - ' •- ■ - - - . - - - '

П£>швчакав: активность антигенов показана в обратных величинах СН-- сиворотка нормальная; ■ ■

• СС - .сыворотка специфическая;

^¿22 - чума мелких нвачных штотннх;

КЛО - катаральная лихорадка овед аден. - аденоматоз овец;

(-) - отрицательная реакция.

II . ■

последующим їерісожзисом,' без применения дополнительных концентрирующих реагентов, обеспечивающие-высокую специфичность препарата. • '

Подученный антиген универсален, высокоактивен в серологических реакциях и пригоден для гидершаунизации ннзотных.

2,2.2. Получение диагностической сш оротки при оспе овец

В Литературе ограничены сведения о получении диагностических сывороток. Так, лз нєйшогочислєннкх источников известны попытки получения гиперяг&унной скзороткя против оспы овец, которая использовалась для лечения, профилактики и диагностики болезни, но широкого применения не наділа в связи с невысокой активностью (А. Г.Никонов, Т.Я.Ванновский., 1935; А.И.Ее$едьев, 1972; К.. Рапсіеу є і.аЬ, -1972; А..С.Новохатский, Ш2ф$$Я/Т$ІС([/, £.?.$! пдИ 1980). . . ...

’Б качестве антигена для гиперимкунизации жезотнех использо-валя 20 % органотканевую суспензию экспериментально зараженных оспой овец и комплексный культуральный антиген вируса оспы овец из вакцинного штаїлма .НЯСХИ. Для усиления шлыунного ответа цримб-' кяли биостимуляторы - Г-актизян, сапонин, неполный и полный . адъювантн Фрейнда, гидроксал. ; . • .

Опыты по получению диагностической сыворотка цри оспе овец ' проводили на крошках, козах, морских свинках я овцах с применением от 2-х до 5-ти схем иммунизации, отличавшиеся между собой метода;® еведения антигена, штаммами вируса, интервалам! между 'жъещпят, срохёж цикла шаунизацш. .

• . - При йтом сиворотки, прлученные на кроликах, козах а^морс-ких'.свинках были неспецифичны и низкоактивнн в серологических реакциях. Дальнейшие исследования до полу чета диагностической

сыворотки были продолжены на овцах# '

' Животных, предназначенных- для гмбращ/нйзйдаи предварительно ионизировали дутем подкожного введений айрусйанцины из штамма НИСХИ. После грундимэдунизацяй осїавЯялй йод наблюдением в течение 2S-30 суток. Перед началом гяйбрйм^нйзаЦйй сыворотку крови животных исследовали на наличие айтїеЛ, С&ёмы гшеримл^униза- ' даа и активность полученных сыворотоа йрадаїамейн в табл. 2.

' Гиперятунизацинэ овщ проводили по йёбКОЛьйим схемам с применением в качестве ищуностяьулятороз Т-айТйвШ» сапонин, гддро-ксал* Сапонин и гидроксал брали Из paô4êiâ 8â животное 5-8 мг и I.&-2.6 кг соответственно. Т-актявйн ЗрймШ&М в объема 1 см3 подкоззо. ' _ .

В качестве антигена использовала ôpÿ ал С ткан евую вируссодер-кащую суспензии на основе активного вйруоа. бСйы овщ штаьгл Афганский и комплексный концентрированный .культуральный антиген из вакцинного штаьма НИСХЙ данного вируса (краго товленный по разработанной наш методике). Антиген инъецировали в возраставших дозах от 2-х до 5-тя введеній в комплексе с биостимуляторами, с интервалом между инъекциям 5 я 8 суток. Обескровливание проводили на 7-Ю сутки, после последней нинъекийи. • - ■

Из данных табл. следувт, что наиболее активные сыворотки получены на 3, 4 и 5 схемам имьунизации,- где з качестве антигена применяли- комплексный концентрированный культуральный антиген яз вакцинного штамма НЙСХИ вируса оспы овец* - -

Так, на основании проведенных исследований установлено, . что наиболее специфичные и активные сыворотки. (РДП 1:32-1:64,

РСК Xî240-I‘«480, Шк 1:128^1:256) получены на овцах, где гялер-к:-.'ї.унизааая яивотных состояла из двукратного подкожного введения комплексного концентрированного культурального антигена в-'дозах 20,4.0 ov? соответствешо, с интервалом-между шъекцняш.?-3- ‘ ;

Схемы гицеришунизвции и активность специфических сывороток на овцах

Номер! материал, ясполъ-!Количеот-! ілетод схеми! зуешй для гипер~!во живот-1 вв еде! имкунизации !нык в ! ния

! ¡опыте !

______!__________________!___(гол.) ! .

1 Кратность!Интервал введения ! между '

!и доза ¡инъекциями! ]материала! - (сут.) ‘

Титры сывороток в:

?ДП

РСК

ьМ

1. 20 % суспензия

органстканевого материала, от боль. ных овец, инфициро-

ванных вирусом оспы штамм Афганский -эпизоотический

2. То ко

3. Концентрированный ' культуральный антиген вируса оспы овец из вакцинного штамма НИСХИ Л;

4. То же

5. .

подкожно и внутривенно

подкож-

но

подкож-

но

подкож-

но

подкож-

но

3-х кратно в объеме Т5,253и 40 сиг с Т-акти-вином

2 коатяо в объеме» 20,30 см с сапонином -

двукратно . в объеме о 20, 35 см3 о сапоюшом

двукратно в . объем® 2030 см“ о Т~ актизином • .

двукратно в объеме 30,

40 см3 с . гидроксалом

7-8

7-8

16-32

8-16

32-64.

-16-32

32-64

180-240

128

160 ••

320-430

240-320

240-480•

64-128

12 3-256

128-256

2Е6

Примечание: активность сыворотоа показана в обратных величинах

7

2

4

3

8

суток.

Активность и специфичность полученных сывороток проверяли в РДП, РСК, ІіШ. Дяя оценка спедифячности сывороток в РДП и РСК использовали нормальные ( культуральные и органотнанезые) я гетерогенные ( ЧИШ, ШГО, эктяыа) антигенн. . ‘ ■

В результате проведенных исследований установлено, что спе-

• цинические сыворотки.при оспе овец, полученное на культуральный; антиген, былй'вксокаактивны в РСК от 1:120-1:280, в РДП 1:16 -• ■ 1:32, в Шк 1:128 —‘ 1:256, при отрицательной реакции с нормальными и гетерогенными препаратами. . . ■

Сыворотка, приготовленные по разработанной схеыз, специфичны, высоко актззяя, прггодну дім выделения ящгнних гамла-глобулинса 2 Щ5ЯГОТОВЛЄНИЯ КОНЪЮГаНТСВ для Шк. ■

Технология получения сыворотки является безопасной в вете-ркнаряо-санитарном отношения, не требутдй специальная мер пре-

ДОСТОРОННОСТИ. ■

Выделение ШЩ-^ОТЮбуШВСВ 23Г2Пер2Ь?,унных’ сывороток проводили методом соупенчатого шогократного осаждения' альбумина :, и-И/Буйных глобулине® разлячишг ¿ояцентрацияш охлажденного . этилового спирта по Кону; трехкраташ высаливанием общей фракции глобулинов сульфатом ашенш при- 40$, 35%, а ЪЪ% степени насыщения раствора. • •

' Анализ проведенных исследований свидетельствует о тон,, что активность гашакглобулгаов, выделенных как одним, так и другим методами дочти одинаковая и достигает в РДП от 1;8 до 1:32, в Шк от .1:3200 до Ї:І0240, в зависимости от активности гплерта-ьуной сыворотки. Однако спиртовий метод выделения гашга-глобудинс® позволяет подучать препараты с высокой степенью очистке і • -

Оценку диагностической зф$ективясстя лряготовлєянеос по раз-

15 .

работанным наш методивдм ■ ошопоток и антигенов проверяли в РДП, РСК с материалом. от больнщс, переболевших, экспериментально зараженных., вакцинированных рвец, а тагссе от здоровых и больных эк -темой животных. При этом органотканевой материал исследовали на обнаружение антител и антигена в качественном и количественном , вариантах вышеуказанных серологических реакций. Результаты, исследований представлены в табл. 3. . ' '

Данные тайл. 3 свидетельствуют о том, что положительные ре-. зультаты при оценке зф^ективности и специфичности сывороток как -в количественном, так и в качественном вариантах РСК, РДП были подучены только с пробами органов и тканей от больных оспой диво теш: при отрицательной реакции с норшльныии антигена«, пробой вирусной эктиш, суспензиям селезенки и легких больных 00-. ПОЙ овец. ' , • • ; . . -

При оценке эффективности и специфичности приготовленных серий антигенов положительные результаты как в РСК, так и в РДП полу-, чены только с ¡¿атериалоы, содержащим специфические, антитела к ' вирусу оспы овец, .кроше суспензии Е02И губ,' шшонки, корочек ' оспинок, норшльных проб органов ж тканей, а такае с сыворотками от здоровой и больной эктимой овец. . • .

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о' тон, что приготовленные диагностккуш для серологических реакций щ>и оспе овед являются специфически активными и шгут использоваться ' для постановки диагноза, путем обнаружения антигенов и антител в сыворотке крови, органах и тканях больных, переболевших и павших животных. , '

2.2.3. Отработка оптикалышх условий постановки ыакра^етодов РСК

’ Таблица 3

Оценка'эффективности и специфичности приготовленных антигенов я сывороток для диагностики ослы овец

Ш !Наименование л!Обнаружение антигена !Обнаружение антител п/п!характеристика! ТдП Т ~ТС1Г ! • РДГГ Г ТСК ¡штериада !кач.Гкол. ! кач.г кол.! кач.Гколяч.!кач.Г ко лич.

I. Суспензия К02Ш губы больного оспой ягненка + 4 + 15 -

2. Корочки оспинок + 16 + 160 - -' . _ ' -

3. Суспензия кожи , • - “ 1 ‘ ' ‘

шшонки больного оспой ягненка + &-16 + 120-320 - _ ■,. — *’ —

4. Селезенка больной оспой свцн - _ . ' — +• 8 ' ■ + .40

5. Легкие больной . оспой овцы - _ ' __ - ' + 16 о со +

6.' Предлопаточяые ляи^оузлы. боль- . ной оспой овцы + 2- + ■ 15 + . 16 ‘ + 80

7. Легкие здоровой овцы ,

3.- Суспензия КОйЗ . ■ здоровой. ОВЦН _ • ’ —'

9. Отек (место • • .1 *

ЕНъеКЦ2И)зКСИё- . ' ' * ' ‘

■ риментально •за- ' 32 320 ■ + • « , •' + 15,

раЕШяой овцн + ' + ' : 4 •

10. Корочки язз . ' • ■ ’ больного зктя-. мой ягненка - • - н/е н/п а/и ' я/а

II. Сыворотка по- '■ ' роболсвшей оспой овцы я/л н/и н/н н/и + 8 . + . 60

12. Сыворотка больной оспой овцы н/и н/и н/и н/и +• 4 > 40

13. Сыворотка зан- ' цивированюсс • ■ против оспн -■'.овец н/и н/и н/и н/и 4- 2 . + ,30

14. Сыворотка здо- розой овцы н/и з/и н/и н/и - ■ — ( ' — —

15. Сыворотка больной эктямой ' -. ■овцы н/и н/и я/е н/н - .. - ‘ - - .

Т7 . . _

Из анализа литературы известно, чао вопросу разработки экспрессных, чувствительных е специфичных реакций, позволяших в практических; условиях быстро и надежно устанавливать диагноз на инфекционные болезни животных, придается большое значение. В связи с чей целью наших исследований, была разработка шкромодификации РСК для диагностики осин овец, применимой в условиях любой ветеринарной, лаборатории и позволяющей сократить время постановки реакции и расход диагностических препаратов.

При определении оптимальных условий постановки иякро-РСК и микро-ЕДСК испытывались различные варианте теьперануряых решив с разными сроками *фа5ы связывания кошиеаента (1-4 ч при температуре 37 °С, 10-18 ч при температуре 4 °С), фазы гемолиза от 5 до 50 мин, а также объемы ингредиентов, участвующих в реакции (0,01, 0,02, 0,03). • ' ""

В процессе отработки временя выдерживания реакции при температуре 37 °С во второй фазе - фазе гешлиза огшчено, что при 5-10 ¿идугной експозиции в' тераастаге реакция не заканчивается и устанавливается высокий титр антигенов (антител) при частичной; задергае гешлиза с норьаадьнывд (контрольны!®) компонентам; р&^ анцш и в контролер физиологические раствором. . ■ -

В обоих вариантах была испытана возжжность использовада прогретых и непрогретых сывороток, йгворотки, в нрогрето^виде1:-:. дают более четную^еакщпо.^Г'^

' Так, в результате проведенных наш исследований установлено,, что наиболее оптимальныш условиями для постановки кюфометодов РСК в полистироловых плашках при объеме 0,03 см3 каждого кошо-' нента реакции дяя мюфо-РСК являются следувдие лараметры: фаза . связывания комплемента при тешературе 37 °С в течение 60 шн с

последующи выдергиванием при комнатной температуре 30-40 мен;

' фаза гешлиза после внесения гемолитической системы и встряхива-• ния в течение 15-20 мил при температуре 37 °С. Постанову микро-РДСК осуществляли также в полкстяроловых плашках с фазой связи-ваная комплемента при- температуре 4 °С в течение 14-16 час, а фаг-за гемолиза при-температуре 37 °С в термостате в течение 15 мин, с предварительным выдерживанием реакции до внесения гемолитической смеси при комнатной температуре в течение 10-15 мин.

Учет результатов микрометодов РСК вели по оседанию эритро-цйтой "положительно" . (+) и по гемолйзу .^"отрицательно* (-).

Оценку чувствительности и специфичности микро-РСК и микро-РДСХ осуществляли в даух вариантах путем постановки качественной и количественной реакций.. ПринциМальйуа' (качественную) оценку исследуемого материала проводили с ййпользованием постоянных рабочих разведений антигена или сшорШ®, гемолитической системы я различных, доз комплемента. Для Определения титра антигена или антител (количественная постановка) реакцию ставили с различными разведенияш сыворотки'йли aHtffl’efia,Ж постоянными рабочими дозачл комплемента и-гемолитической ймёсй» , ' -

• Для оценки чувствительности и специфичности макрометодов ' РСК постановку их проводили с использованием комплексны антяге- . нов и сывороток, приготовленных со разработанным нами методикам.

В качестве испытуемых антигенов служили органогканевые вирус содержала е суспензии, приготовленнне из органов и ткайей больных • оспой овец,■а также культуральнко специфические и нормальные, антигены.'-В качестве испытуемых сывороток - сыворотка .гзперям^уя-.

н^х и' переболев'хих,-сспой зевоткнх'.-'■...\' "" г'";. • •

Гетерологичными препаратами являлись 'антигены- и сшоротки . чумя мелких жвачных животных, адеяоматоз'а, катаральной-' лихорад-.

кл и контагиозной зктида овец. Для сравнения параллельно проводили поотановву пробирочной РДСК. Результаты изучения чувствительно-ста ьмхро методов РСК представлены в тебл. 4 я 5.

' Так по даяннм результатов сравнительной оценка ^гвсгаите-льности различных; иодиркацнй. РСК при исследования антигенов, тятр последних в шшро-РДСК был выше, чем в РДСК, ьикро-РСК и в среднем составил в РДСК 1:280+68; в шкро-РДСК 1:298+61,5; в ш-кро-РСК 1:187+23. При исследований сывороток с то2 ае целью активность их такає в ідскро-^РДСК превосходила таковьпо в двух других. вариантах реакции. Средня! тнтр при этом <3ыл следующим: в . РДСК 1:202+70; в ¿акро-РДСК 1:227+81; в шкро-РСК 1:150+55,5.

В дальнейшем била проведены исследования по проверке специфичности ыякроьгетодзв РСК с набором го ¡,ю логичных я гетеро логичных; препаратов, результаты которых отражены в табл. 6.

, . ■ .Таблица 4.

Результаты сравнительной оценки чувствительности различных г.йди,рккацк2 РСК при исследоз-гнхш антигенов

їі/тіІ Акткгенк

!. Результаты - исследования з • ТШЗК." 'ігаоііл-! ї-икоо^ДСЙ ! гмкро-г'СК

! тіш£__________І___■____!.

І.Ьіту.і-олп руль суральные: ■ . .

1. Нсрхг-яьный сер.3-90 -■ - - - . -

2. СнецаІ-ікоскяи оео.3-90 . 1:128 > І:Ї28 + 1:128

2. Спачг&песхпИ сер.5-91 1:128 + 1:192 + 1:128

П.Аятзгены органоїкаяевьіе:

1. Нор-гальна* суспензии коли — - - -

2. Суспензия ко:;;;' больной.

оспо£ овдк Л 4 І:40С + 1:800 + 1:300

3. Сусгії-нзйя лз места пнъ-

е:-сг.аи зкспеоя./.е;іта^ьно -

зарг-ч.сзноа сепой овц ьг -**8 1:400 + І:6С0 + 1:400

+

' Таблица 5

Результаты сравнительной оценки чувствительности различных модификаций РСК дря исследовании сывороток - .

з/и

Сыворотки

2

! Результаты исследования з ’РДСлпроЗи-Гулкро-РДСК^Тг/лкро^СК--

¡оочная _ ! _ !_________

!количТГкачТ!колячТГкачТ!колич.Гкач"

7 з ~! ГЇ ~5 ~ ! 6~! 7 ! 8

С. Сыворотка нормальная

сер. 5-91 “ -

I. Сыворотка норьгалъяач

сер. 4 . - ■

5. Сыворотка специфическая

сер. 2-89 1:240

1. Сыворотка специфическая

сео. 1-90 *■ 1:120

+ 1:480 +

+ 1:160 +

1*240 +

1:120 +

, Таблица 6 '

Результаты проверки специфичности шхро-РДСК л макро-РСК

¡.'з ! ■ ’

;/з! Характеристика испытуегяд: проб

Г7 5

__Результаты______’______

шкро-РДСК | микро-РСК

I. Антигены

Антиген специфический чуш мелких язачнкх алвотннх (ЧШЗІ)

Культуральная суспеизгя вакцинного' вируса эктикн .

Оуспелзия ксгл здоровой езцы ■ .

Суспензия оогаяоткачєвого материала -больной оспой озщ .

Антиген специфический культуральный ‘ при'оспе овец с ер Л-87 б смеси с ан-■ тпгеном специфическим катаральной ■ ■лихорадки овец (КЯО) . ■ . •

Антиген специфический; (КШ) . ■ ■

Антиген нормальный с дульгуры клеток ПО

Антиген специфический сер. 5-91'

П. Сыворотки, • ■ ■

Сыворотка.специфическая при КПО ...

I !_______________________2__________________

2. Сыворотка специфическая при оспе овец

сер. 1-90 в смеси с сывороткой специфической при КЛО - •

3. Сыворотка специфическая при ЧкЖ ■

4. Сыворотка специфическая цри оспе овец

5. Сыворотка специфическая оря аденомато-

зе овец •

6. Сыворотка нормальная сер. 5-91

Оценка- специфичности шкрометодов РСК с набором гомологичных и гетерологичных препаратов показала, что положительные результаты были получены голью с гомологичными ¡материалом осш овец и в смеси с таковыми других инфекций при отрицательной . реакции с гетеро логичными антигенами .и снвороткаш.' ’

В целом на основании проведенных 'исследований установлено, что шврошдификации РСК для диагностики оспы овец являются чувствительными, специфичными, экономичными методами и могут применяться для постановки диагноза данного заболевания- путем обнару-яения ко.мялемеятфиксдауицих; антигенов -и антител в органах и тка*-нях больных и экспериментально зарааенннх еивотнызс, а танае антител в сыворотке больных', -переболевших и гиперизиа^нных- животных. Зфоме того, шкро-РДСК чувствительнее пробирочного варианта РДСК в 1,5-2 раза, фвствителъность кикро-РСК ншге, чей РДСК, но эта реакция шжет применяться в качестве экспресс-метода для предварительной постановки диагноза;. Микрометоды РСК сокращают время на подготовь и постановку реакции,’ расход диагностических препаратов в 10 раз. *

22 . в ы в..о д її

1. Разработан способ изготовления комплексного культураль-

ного антигена длд постановки серологических реакций (РСК, ?ДП, ИФА) при оспе овец и гиперишунизадии животных. Антиген универсален, обладает высокой активностью и спедифичностью в серологических реакциях. ■

2. Оптимальними условиям получения вирусного сырья для при-

готовления ^антигена являются: І-2-х суточная іфлв’ґура клеток Ш, выращенная роллерным методом, заражазэдая доза •* 0(05=<0,1 ТВДдд на клетку, инкубация вируса в течение 72-96 часов й использованием среды ПСП, отделение клеток от стенок сосуда механически или раствором вереєна. . ,

3. Из числа испытании: методой конценїрйройаййя и очистки

антигена наиболее приемлемым оказался метод центрифугирования, позволяющий проводить осаждение клеточной, фракции, освобождение от клеточного детриїа о одновременным концентрированием антигена в ТОО'раз. Указанный способ концентрирования и .очистки позволяет подучать глтйген с активностью в РДП - 1:16-1:32, в РСК-1:120 - 1:480 и Ш - 1:Ї2С0 - 1:40960. ; • - .

. ■ 4. Разработана и предложена схема получения диагностической универсальной енворойш ка обцэх для постановки серологических реакций при оспа ойец (РСК, РДП, ЇЇФА, ®А, PH). Сыворотки спе- -цифичйые, высокоактивные с титром в РДД - 1:16 до 1:32; в РСК -1:120 до 1:480;. в гЖ.т. 1:128 до’1:256, пригодны для'Евделения имиуйоглобулинов и приготовления на их основе конъюгатов для ИФА.

ч 5. Разработаны мижромзтоды РСК на полистиролэзнх плашках с 4 » . . . ^ объемом общей реагирующей- смеси 0,05 см , для обнаружения специфических кошлемезгфинсирувциг антигенов. и антител в органотканевом матёриале бодьнщ'и павших овец,, а также антител в сы-

воротках крони больных в переболевших животных. і-акроцетод П03В0-ляет сократив расход диагностических препаратов в 10 раз я использовать его в качестве экспресс-петода дяя диагностики оспы оаец. . . ' '

6. Цраґогозленние дпаї'ЕССТвческЕО препарати (антигены в сыворотки) в £ЕОфтаЗЦрОБаНЯОИ состоянии црЕ теипературе 4°С сохраняют ЕСХбДНуЮ £ЗТИВНСС£Ь в гечегле 5 в более лет.

/7« На разработанные ДЕагЕОСггческке препараты (антиген г сыворотку) 5С'Ставдо5а е утверглвиа директоров института/норнатквно-техкичебкад до^пгенїщся со взгоговленгю, кэкгродэ в применении препаратов для дкагностЕки оспы овец (инструкции,наставления и техкичебкйе условия). ' ;

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ '

I* Предложен ыегод изготовления комплексного культурального антигена для поеїановки серологических реакций (РСК, РДП, Шк) и гиперикыунизшии газетных, на который составлена нормативно-тех-нгчоокая документация (Вреизккая инструкция по изготовлению и -конїроло, Технические условия и Наставление по применению), ут-верзденная директором. НЙСХЙ Национального центра по биотехнологии Республики Казахстан 25.04»94 г. ‘ .

2. Разработан й йреДйоаен способ получения.диагностической

сыворотки для постановки серо логически реакций (РДП, РСК, №ФА)

и выделения иицувогдобулинов, на ^которую составлена нориатввно-

техническая документация (Временная инструкции по изготовлению

в контролю, Технические условия и Наставление по применении),

- - - і . . . , утвержденная директором НИСХИ Национального центра по биотех -

нологии Республики Казахстан 25Д)4.94 г.

3. Разработаны и предложены шнроиетоды РСК для диагностики оспы овец, на которые подготовлены методические рекомендации

"Ддагностяка оспы овец шкроыатодаиз реакция связывания коьпхле-иекта (РСК) и реакция длательного связывания кошлсшнта (РДСК)", ¡ггвердденнне директором НИСХИ Национального центра по биотехнологии Ресцублнкн Казахстаа 25.04.94 зу

5. СПИСОК НАУЧНЫХ РаБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ГО '

АТЕРИА1АМ ДИССЕРТАЦИИ

[. I. Гононов Ю.М.,Пасечн2ков 1.Н., фрчеявэ Ф.И.,Алехнн'А.Ф.,

^санова А.¡^.'Литвинова В. П,, КереаЗекова 7 .Я. Лабораторная дз-

ц’костзка оспы овец. Научные основа технология лрошилезшго про-

гзводства ветеринарных бжологачеекаг препаратов. Теэгсн докладов

сетзертой Всесоюзной конференции. (НИСХИ).Москва, 1991 г.о 269-270

2. КеремЗекоза 7.Н..Гоноков Ю. М., Пасечников Л.Н.,Русанова А.М. ¡атэееза В.М. "Шлучениэ днагносзнчкяшг препаратов дня серогзгн-ескях реакций пря осп» овез. ВеетняксеяьсгохозлйстаеяноЗ нгуня азахстаяа» 1992, ЙЗУ-с Л22-123 .. .

■ 3. КеревЗеаова У.1.,Паовчнявоз 1.Н.,Никитин Е.Б.,£гсано-& А»*.:.. * Разработка мщюшдяфнкацди РСК дда диагностика оспн зец*. Вес гнев свльсвдхозяАетввшоЯ- наук® Казахстана, 1994,# 2 .45-48 . ' ' , . .

4. КеремЗекова У.2.«Гоновов Ю.л.,,Шс.в?шш«5в ЛЛ^^сзаО: -

А.И., Матвеева В.М.^Нгкитян Е.Б. Сраершештэоваяк^орешзга методов лабораторной диагноствкл оспа озяи . .■

иергалн научной конференция НЙСХЙ 18-20 ада 1994 Яч . . -

5. Пасечников Л.Н,.Гононов Ю.М..,Деи?ашю А«Г.,.^5атвесэа, В.М., Панова А.1ь.,Керем1е:»ва У .1*,Морозова Д.А*,Суарв»л Н;.А*

1учная работа * 616/0. На правах рукописи. Отчет НЙСХИ,11390,287 с

6. Паввчшдая ДЛ.,1уоев А.А.,Алехш А.Ф.,1Ънонов Ю*1Ц.

25 •

Кереыбекава У.Е. и др. Научная работа 623/о. На 'правах рукописи. Отчет НИСХИ, 1990, 134 с. ' ,

7. Пасечников Л.Н., Матвеева В.М., Русанова А.М., Керембе-кова У.І. Набор препаратов для диагностики оспы овец методом иммуноферментного анализа. Т7 10 РК 14.190-93. Утвержден научнотехническим советом ГУВ ЖЗХ РК 8 января 1993, НИСХИ, 20 с.

8. Пасечников Л.Н., Матвеева В.М., Русанова к.а1. , Кереьзбе-

кова У.Ж. Инструкция по изготовлении и контролю набора црепара-тов для диагностики оспы овец методом иьщуно,ферментного анализа. Утвержденная научно-техническим советом ГУВ АКХ РК 8 января 1993, НИСХИ, 28 с. ‘ . • • . • -

9. Оасечйяков Л.Н., ¡Матвеева В.М., Русанова А.М., Керембе^ кова У.Е. Наставление по применению набора препаратов для диагностики ослы овец методом юауноферменткого аначиза* Утзерждек-1-ное научно-технические советом ГУВ Ж ЇК 8 января 1993 г., НИСХИ; 8 с.

, КегеиЪеко'/а Ultugan Jalamanovna

THE IMEROVSMEMT OP MEAHS А1Ш METHODS FOR SIEESP I-'OZ IAEORATCRÏ DIAGNOSIS

Summary .*

The results of the development of the method of preparing sheep pox virus complex structural antigen fron vaccinal strain ITISHI for serologic tests and hyperimmunization. of animals are shown here. ,

. The developed method includes 72-96 h growing of virus in 24-48 h roller cultura..of sheep kidney cello with nutritive nedium PSP, separation of cellular fraction by centrifugation at 2000-2500 rpn for 20-30 nia, destruction of cells Ъу'thermolysis followed by high speed centrifugation and use of supernatant fluid as an antigen. The uso of this antigen allowed to develop the protocol of preparing the serum for the diagnosis of sheep pox including preliminary immunization of sheep followed in 23-30 days by twofold introduction of antigen with biostisulants« Thé obtained sera arc specific, highly active in CP, DP and FA tests, suitable for the isolation of imuno' globulins and preparation of conjugatos for СТА on their basie.

' ■ Besides, the .results of the devolopnent and usage of CB and DCP microtest3 on 56-7/ell polysterene platos with the total volume of reacting mixture 0,05 cn^ are presented here. The tests aay be used for diagnosis by detecting complement fixing antigens in organs, and tinsues of sick animals and by detecting antibodies in the gora of' sick, reconvalescent and hyperimmune sheep. .

КЕРЕМБЕКОВА УЛТУГАН ЖШМАН ДОЗЫ .

Цой шешегін балаудьщ лабораторшищ здістерін жетіздїру

. Тунырымы ' • ' : •

Бул жушста Аушшаруашыльщ гылыми- зерттеу институтннъщ цой шешегініц ващйналщ шгаммынан ^урамды вирус есіеді антигендерін дайындау адісі * оны серологиялщ реакцияларды цоюга, малдарды егуте цолданудьЩ Зерттеу натижелері келтірілген.

Бул зертїелген здісівируста к;ой буйрегініц 1-2' кундік торша есіндісінде ДСП цоректік ортаны пайдалана отырып айналмалы адіс ■пен 3-4 теулік ІШІВД8 всіруді, торша беліктерін 20-30 мин ішін-де 2,0-2,5 ывд аПналым/мин ажыратып алуды5 торлаларды к;атьіркп-ері-тунен ыдырату, соаан кейін оны жогаргы кылдамдщта айналдыру кэ-не тунба устїндєгі суйьщты антиген ретінде цолдануды усынады.

Осы антигендх цойга алдын ала хане 28-30 ктанен кейін цура-мында биоудеткіші бар антигецді цайталап егу арцылы цоЯ шешегіне балау цоюга арналган і^ан сарысуын алу адісі кавдары тадцанган.

Ж^уарлардал алынган цан сарысулары ете твндї, комплеменгті байланыстыру/КБР/, диффузиялн^ преципитация/ДПР/, жарщ шыгаратш • антиденелер' адіс і /ЕАЭ/ реакцияларында когаргы белсенділік керсе-теді, івйфчюглобулиндердх белід алуга,олардщ негхзінде ишунды ферментті анализді/ИБА/ кіоота цураыалар дайындауга жара еды. Соны-мен цатар 96 уялы полистеролды тацтапарда цосынды келеиі 0,05 см3 болатын микро - КБР жэне михро; - кТБР реакцияларын цою жолдары меі адіотері келтірілген. Реакцияларды ауру, ыалдардыц агэалары мен

ж I '

улпаларындага комплементбекіткіш антигендерді, сондай-ац ауру, аурудан саувдкан жэне егілген' к;ойлардьщ цан сарысуьшдагы антиде-нелерді аныцтауга пайдалануга болады.