Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого окота

Министерство сельского хозяйства Российской (йедерают Главное управление вчспих-учебных заведечиЯ Воронежский государственный аграрный университет

1 •

. На правах рукописи

Евглевский Алексей Алексеевич

УДК 619:616-002.5-084 :633.2

Совершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота

16.00.03 -ветеринарная микробиология, .вирусология, эпизоотология, микология и иммунологкя

. АВТОРЕФЕРАТ дисоерташш на соискание ученой стчпеггй кандидата ветеринарных наук

Вороне* - 1992

Райе гг. выпе лнею в лаборатории пс изучении туберкулез: курского ааучно-иссшдоватвльского института игропро'лшшшшго прои: датва.

Научный руководитель - кандидат ветеринарных наук, Д01 ;т

К.гптилый а. П. ' ■

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Шахов А.Г., доктор ветеринарах наук, профессор Субботина 2.Г.

«идущее учраздан'ла - ¿Зсессюний институт экспериментальной вотеринарил.

I

Защита диссертации состоится "" /с/ " (У'/лХ^РХ 1992 в IV часов на заседании специализированного совета

К. 120.54-03

иоронежгкого государственного аграрного университета / 394087 г. Ьорсиеж, ул. Ломоносова, 114/.

•дг.еоертацльв мокно ознакомиться в библиотеке БГАУ.

(Юри.

разослан "_ ¿0." аШЛ^ 1992 г.

ЛшиЙ СиКрКТйр*. ОПи!йЗ?.;1ШфОЬа!ШОГО СОВ<!11,

кандидат ¿отерянздш/ лаук

Н.А.Чапдигина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Туберкулез относится к заболевания!.:, при которых аллергия участвует как обязательный компонент основного патологического процесса /А.Е.Коляков,1986; Д.Т.Леви и др.,196а; ' В.И.Литвинов и др. ,1976/. По своей природе это высокосиоц-.гглческая реакция итжунокомпетеитшх клеток с аллергеном, вызвавшим эту сенсибилизации /8.Г.Галакт:юг;ов,1988; П.Б.;.1едун-щин,1983; В.П.Иыцкий, 1984; §о1>Ье\1т с. 1983; /,. <".АД983/. Наряду с амерги-

чоск;г:,"1 реакциями на специфический аллерген встречаются случал, когда сенсибилизированный организм отвечает на аллерген, изготовленный из родственных в антигенном отношении микроорганизмов /Ю.К.Зейсфейлер,1985; А.Н.Шаров,1981/.

Наличие у яшотных сенсибилизации, обусловленной' атипичными микобактернямп, существенно ослокняет аллергическую диагностику туберкулеза /А.С.Дончонко и др., 1987; А.В.Ткачев-Кузьки,1981;

A.Н.Ткаченко,1985; Б.П.Урбан о соавт. ,1938/. 13 сатан с чем, основываясь на показаниях реакции на туберкулин, не.всегда представляете/ возмотгным точно поставить диагноз на туберкулез /¿.и.Авилов,

B. О.Пылинин, 1992;' 0.3.;1схаков,1937;.Ю.А.Кассич о соавт.,1990;

¡1.П.Никифоров о соавт. ,1985; Н.П.Овдиечко,1987; В.И.Пионтковсклй, 1984; ;.;.А.Сафин,1987; В.П.Урбан с соавт.,1985; В.Е.Щуревокий,1932/, Отсутствие достаточно надежных мйтодов прижизненной диМззрэн-цлапги неслецяфических реакций на туберкулин обусловливает'необходимость совершенствования имевшихся и изнсканяо новых рациональных средств и методов диагноотики туб-зркулеза крупного рогатого скота-/А.О.Донченко,1987; -Ю.А.Кассич с ооавт.ДЭЭО; А.'.I.Козин, Р.А.Пура-ттюв,1987; В.Кульбипкас, К.Мартянкайт1тс,1936; А.Х.Найканов,-1980; Г.А.Юдин,1990Д '

Зчгларичяоотв и точность, показания аллергической диагностик* туберкулеза зависит от целого ряда сопряженных Факторов. И':грогое

'применение в ветеринарии вакцин, лекарственных препаратов, загрязнение oncG.tupu химичеок'чли веществами прио^дат к изменению реактивности* организма, которая проявляется или сни^чием/анергия/, или наоборот повиашнием /сенсибилизация/ реакций оргаш.-'ма на введение алльргонсв. Ьопрое о ьиаишюм гдиянии вшоуказанных вцеегч и средств их роль и появлении аллергизирувдогс перекреста с аллергией при туберкулезе недостаточно изучен /Т.С.БрусевичДЭь^; В.П.Урбан,1988; Ь.П.Шииков, 1985; Г.А.Юдин, 1987 ; 6. Q/ck Д^Э; £. iju ,1973/.

Особую значимость и актуальность сегодня приобретает разработка средств специфической профилактики туберкулеза. Недостатком применения вакшпш ШЖ является правду всего образование аллергии у • привитих организмов, кроме того защлтннй г4фзкт ЩЖ не является Абсо.иотнам. Вакцинации предупреждает появление значительных поражений, но ке про;!.алактируот развитие туберкулезного процесса и не «¡гл'штзтву(Л распространению возбудителя, что недопустимо в ветери-■ парной фтизиатрии /Й.ЛДшков, В.П./рбан.1991/. С этой точки зрения ьпопю понятно, что необходима работа по изысканию новой противотуберкулезной вакцлни или антигенного комплекса микобактерий, кото' [iiid икали бы преимущество пород Б1К в отноиен/и ишуногенностй и аллорги'сяруадого действия / M.W.Авербах, 1976; М.А.Бьтян ДУВ4; U.о'.Гупшн н др.,1987; А.Н.Кульберг,19&Ь; Н.Ч.Оьднннкс; с coaBT.,19t34;

т.£.Яй»::}коьа,1&?С{ Х^И'Л'/ДУ»«; С Smnie Д98HxW.HoeUeyer е.з,. д&М; f>\ A/a$do ел,i9S5/.

il --:еяаа с аишеаа'юздшиш. цолма настоящей работы являлось ■разработки и апробация ношх средств аллергической диагностики л оцецифичеокоИ профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота. И ооотвутотнли о ыим необходимо било решись следуюшин задачи:

-разработать бэлео рациональные способы получения нативноп (Jeb^ibdiiioshovo туберкулина и штоди его применения;

-иаучлп, влияние разных фак'гороь и средств на чувствительность

животных к туберкулину о целью регламентации сроков показаний и противопоказаний к аллергической диагностике туберкулеза;

-изучить возможность получения и применения для спешфгеескоЯ профилактики туберкулеза у животных инактивлропанных формалинjm туберкулезных аллергенов.

Алтюбапля работы. Основные материалы доло.тонн и обоугдзпч не научных конференциях профеосороко-преподавательского состава ¿утзкогг сельскохозяйственного института в 1987,1988,1989,1990,1991г.г.,на Ученом совете Курской IlilßO в 1988,1989,1990г.г., на Ученом оозоте Курского IШ АПН в 1991г.

ГГуб.такаттпк.До результатам диссертационной работа опубликовано 9 печатных работ, кздано 2 »летодическио рекомендации.

Структура л объем лиедстггаттки. Диссертационная работа вюппаег ■ в себя следующие' раздели} общая характеристика работы, обзор литературы, катершпы и катода исследований, результаты собственных исследований, анализ а сбсуздеяио полученных результатов, вывода, практические предложе.шг, описок использованной литературы и приложения., Диссертация наложена ча 116 отранипах машинописного текста, содержит 15 таблиц, 2 охаиг. Список литературы включает 262 источника, лэ них 80, иностранных.

• Ооиовиыэ положения диссертационной работывынооише на заппту:

1. Материалы по получении и испытания безальбумозного тубйрку-'лина. " •

2. Соверяевотвованио оушеотвуодих методов диагностики опешЛл-чеоких и неопацпфическях реакций на туберкулин у крупного рогатого окота. '

3. Натбриали во изучении инактиваций Формалином токз;шо-_ аллергенных- свойотв туберкулезных аллергенов о целью получения туберкулезного анатоксина для. опецифячеокой профилактики туберкулеза животных.

- 'ЦаУчная новизна. ■ Выявлена; деоенсибилизируотдя ролг> на чувств::-

ггьнооть коти к туберкулину у крупною рогатого окота йюрмолвакшш, .птибиотиков, антягельмиьтних препаратов.

¿оказана- эЛпактивность применения безальбум^гчого туберкулина для ьиекоп"гтагацнх при внутрнвелчом способе введения дты дифференциации спзци'Уичбских т1 неспеци-рячесггдх когчих реакций на туо?ркул:и у крупного рогатого скота.

Изучена шактивнрумзал роль формалина на токсичные и аллергенные свойства туберкунезлых аллергенов. Получены полонитетьниа результаты по изучению протектпвиых свойств туберкулезного анатокояна о целью спет: р'.'.ческой профилактики туберкулеза животных,

практическая ттентооть работы. Определена регламентированные -сроки показаний и противопоказаний к проведению туберкулшшзашя крушого рогатого скота б зависимости от обработки лечебно-профи-чсскими средства:/»!.

Разработан гетод элективной диагностики специфических л неспе-•цифлческих реакций на туберкулин у 1фуп.шго рогатого окота о применением внутривенной тубаркулигшзаи.ш о помощью безальбумозного туберкулина.

Лолучопи поло-гаге ¡гьние результаты экспериментального л производственного испытания туберкулезного анатоксина для активной профилактики .туберкулеза »нвотных.

2. ¡.атериалц и метода исследований

Работа ышолаена в 198Б-1992гг. ¡.лтериаяом исследований олужили

• 4479 голов_крупного рогатого ск^та, принадлежащего колхозам а совхозам Курской области, 217 морских свинок, 95 ..роликов. Наследования проводились в Бетэринариих лабораториях л хозяйствах Курской области.

3 полги диМарешиапин неспецифнческих реакций на туберкулин у

• кр^шэго рогатого скота использовали сп зоб предложенный' «алька и Кпттол /190С/, загбнтааадйся во вяутривошом введении туберкулина

для провоцирования температурной реакции у болышх тлвотных,

В наших иоояедованиях ш изучали диагностические свойства двух туберкулкнов:' серийного-ШЩ для млекопитающих и опытного образна безальбумозного /напгвного/ туберкулина. .

Безальбумозный -туберкулин получали из культуральной .жидкости после двухмесячного выращивания микобактерий туберкулеза штамп« О на синтетической среде Курской биофабрики. Выращенную туберкулезной культуру автоялавировали при 1 атм. 30 минут о предварительным 30 минутным прогревом. Для увелячания содержания аллергеноактивных веиеотв в культуральной жидкости, продолтгительнооть автоклавкрованил увеличили до 1,5- 2 часов. Культуральнуз жидкость отделяли от бак-масса через марлевый фильтр и "СФ" пластины,'

Контроль культуральной отдяооти проводила согласно требования;,! • предъявляемым к испытанию тубаркулинов на стерильность, безвредность, активность и специфичность.

. Производственное испытание безальбумозного'туберкулина проводили в благополучных и. неблагополучных по туберкулезу хозяйствах на крупном рогатом окоте разного возраота. Помяло внутрикотной пробы, активнооть безальбумозного туберкулина изучалась во внутривенной и глазной тубернулинизации. Результаты исследований оканчивались о патологоанатомлческой картиной убитых животных.

В случаях, вызывающих сомнение.в ¿ринадлежности обнаруживаемых патологоанатомичеоких изменений в органах туберкуле зным изменениям пли их отсутствия, а также для выделения чтготых культур микобактерий проводили лабораторное исследование материала от убойных ответных, э лооледуиЕпм анализом результатов исследований.

1,'лтарислоа для изучения аллергии при туберкулезе и влияние на ее проявлоние различных факторов а; оредств служил крупный рогатый окот, аллергязирОванннЙ оуопензией из автоклавировапннх мнкобакте- . , рий ?уб6ркулэза. '■■■'...

Туберкулезный анатокоин приготавливает -из равной -сместт тубе^:;,7-

лэзных аллергенов, содержащих сухой очишенкый туберкулин и безальбу-' ыозний туберкулин о агтивностыо 50000 Т.Г. в 1 мл каждый. Обработку аллергенов проводили 0,2е! концентрацией формалина на каждые 50000 Т.Ь при температура 45°0 в течение 7- 10 дней. Сорбцию и'атоксина проводили на гидроокиси алюминия из раочета 2- 3 мг окиси алюшгчия на 1 мл анатокс:гпа.

Контроль туберкулезного анатоксина проводили ооглаоно требованиям предъявляемым к испытанию всох биопрепаратов на стерильность, безвредность, токсичность, остаточную аллергенную активность. Иро-тективане свойства туберкулезного анатоксина изучали на мороких свинках, кроликах и крупном рогатом окоте после Двукратного подкожного введения препарата морским свинкам и кроликам по 1 мл, крупному рогатому скоту Ь мл с интервалом 14 дней. Для инфицирования иммуни-ггцрозанких кльотных использовали микобактерни туберкулеза бычьего и,ч,а штамм !i 8 в дозе 500- 800 млн. млкробных тел на морскую свинку ■ а кролика и 14 мг на крупный рогатый окот. Морских свинок заражали лощ-да-но, кроликов внутривенно. Заражение крупного рогатого окота проводили путем подкожной инъекции взвеси микобактерий туберкулеза и о] алию. В про л з в одо те з ш ш х условиях неблагополучных по туберкулезу хозяйств ип.-.униаировашшх животных подвергали контактному инф>.-нирэсаапю ирл сот.:.:ьот;юм содержании их о больными туберкулезом

/кывотлш.ш.

Динамику иммунологических изменений в организма привитых кивот-ных изучали определением числа и соотношения различных категорий лльь 'фоцлтоь,. ивракшх ведущую роль в противотуберкулезном иммунитете.

Ь оиоих исследованиях но .ольаовали схему определения иммуно-( компетентное*.; и функциональной акт1Шности лимфоцитов предложенную Г.^.Корс;дд)ловим и В.Л.Солодовниковым /1982/.

' ¿татизтичаоную обработку полученных данных проводили ооглаоно методических yitasaxiiiii Ю.К.Баш /1988/ j использованием эвы-электро-

ник^ lawic, > • »

• _ 9 -

3. Результаты исследований 3.1. Получение л применение безальбуморного туберкулина д.;гл

диагностики туберкулеза Достозерность аллергической диагностики туберкулеза гитютИх . зависит не только от Люрш течения инфекттии, но п от опоча"гтзс:п:: свойств и активности -аллергена.

й основе получения туберку.яинов положено двухмесячное вчря;;рт-в&чие на жидкой ореде микобактернй и стерилизация бактериапЬчоЙ массы. ■ .

Upz изучении истинного пропесса образования туборкулпчоаптйгннх веществ установлено, что культуральная жидкость, после дзухяесяччогг выращивания-микобактернй туберкулеза на жидкой синтетической ерэде, представляет собой продукт .расшепления микроорганизмов^ а пропреет/ аутолиза а биосинтеза не шечт значения. Данные по бчохгатчестому

составу культуральной кпдкости предотавлепи в таблице 1,

■

Таблчпа 1

Бтюхимический состав культуральной тпдкостн после двухмесячного выращивания шкобактор:* туберкулеза на жидкой стптетической среде

: Показатели 1.л: 'в мг/мл Автоклавпрсьачио: Автоклавирование} После после отделения ¡ i бакмассой при : осаждения багалассы :■ 1 атМ.. ЗО .шотут : ТХУ ■ .

1.: Белок.. 0,15-0,20,/ г 0,7.0- 0,74 0,8100+ 0/030

2,: Полисаха- • „

: риди - ; 0,06- 0,01 0,07+ 0,01

3,: Ляпнда - : 0,05- 0,01 . о,оа± O,ÜI

4.': РНК _ : 0,005-4 0,007 0,006+ 0,001

5.: ДК - . : ф25£ 0,001 0,02Ь+ 0,ШЗ :

6.: Аллергенная ■ • i

:активность 2500-'3000 ' í 50000± 3000- 50000+ ООО

. :в Т.Е. :

7.: Потеря : • дет • ш

В настоящее' врет/л в налей стране изготовляется только очкшбчкч!'. тубэркулнн для ткекопитаягсх /ШЩ/. •

Сухой очищенный туберкулин используется преимущественно дгся внутрлкожкой диагностики. Попытки использовать его при подкожной туберАулинизации не имели практического успеха /М.К.Юсковец,1963/. Лмевтся противоречивое мнен'/л о ого активности, и во внутривенной пробе, используемой для дифференциации специфических и неспецифи-ческлх кожных реакций на туберкулин.

Технология получения сухого очищенного туберкулина предусматривает ряд сложных химикотерыических обработок в результате которых снижается на 20- 30% активность, потери исходного начала препарата, после осаждгкия трихлоруксусной кислотой составляют 47% /таблица 1/, а после переосажаения сернокислом аммонием до 78- Ь0%, в пересчете •на содержаний тубаркулопротеина. ' и наших иссчздов-лыях безальбумозний тубаркулин получали из культуральиой жидкости после 30 минутного автокчавирчаания мико-

":арий туберкулеза при 1 атм. Этот резким обеспечивал выделение в •культура'иную яидкость Ь00СЮ+ 3000 туберкулиновых единиц /Т.Е./. Однако недостатком указанного способа получения Сезальбумозкого туберкулина яви ¡¡ось повышенное на 0,25- 0,30 кг/ил, по сравнению с 'физраствору;.!, наличие солевих озтчтков синтетической среды. Поэтому, с учетом образования аялерганоактпышх веществ в культу ральной жидкости.за счет водю'-.ермичэского гидролиза микобактерлй, предприняли поцшку увеличить выход туберкулопротеина при одновременном уиеньаенки с оленых остатков синтетической среди и сохранении натнв-ных свойств принарша. Серия опытов показала, что увеличение времени Стерилизации до 3- 4 часов, или усиление режима автоклавпргчания до 1,5 ¡л;.: ънзниам частичнуи денатурацию белков, которые выпадают в осадок .1 требуют удаления, а культуральная жидкость приобретает темнокбричне&ый цвет, коатому и наших•исследованиях использовали безальбуисаниЯ туберкулин полученный при белое "щадящем" режиме автоклавароьчнил,. яри 1 атм в точешш 1,Ь- 2 часов. Яри атом в наибольшей С1 онежисохрмязюи а натизном состсинии порьоначалыше

фзэико-хишческие и аллергенные овойства препарата, рчход т'убпрку--лопроте'ина увеличивается до 0,92- 0,94 г/г, а биологическая активнобт; составляет 7БСЮ0 Т.Е. в 1 пл. Последуюпим добавлением деминерализованной вода устанавливается требуемая активность 50000 Т.Е. р.Ч мл., а содержание солевых остатков синтетической сродн находится на уровне хлористого натрия, в физрастворе. Таким образом, в результате поисков разработан еше более экономически выгодный способ получения бозаль-бумозного туберкулина. При этом .биологическая активность безальбу-мозного туберкулина, при содержании 0,70- 0,74 мг/мл алтергено-активннх веществ, составляет 5р- 53 тысячи Т.Е. в 1 мгг,! а очищенный туберкулин'имеет аналогичную активность при содержании'не менее 1 мг. препарата..

Производственные испытания безальбумозного .туберкулина на крупном рогатом скоте показали, что он обладает равной с туберкулином ПЦЦ специфической и биологической активностью во внутршеожно* к глазной пробах. Результаты испытания приведены в таблице 2.

'.-..•' • 'Таблица 2'

Результаты'испытания биологической активности безальбумозного туберкулина и туберкулина ПЦЦ млекопитающих на больном туберкулезом •крупном рогатом скоте. • ■ '

* п.п Наименование- тубер-: кулгаа .'! • Кол-во исследуемых, кив-х . Кол-во реагирующих . ЖЛВ-Х' Интенсивность: . кожной : реакции в мм : Различия

1. Безальбумозный : 1000 97 10,8+ 1,9 :

2. туберкулин,, серия 1: ПЦЦ млекопитающих, | 1000 ' 97. ♦ » .11,1+ 1,3 Достовяр них

3. Безальбумозный.. ■ : туберкулин, серия 2: 1862 . 207 \ 9,8+1.4 • : разлив:: нет

4. ПЦД млекопитающих,. : сешя 41 : - 1862 • 207 10,2+ 2,1 :

Из вапеизлокенного следует, что- в основе .изготовления безаньб?-

мозного туберкулина положена экономически выгодная и безвредная технология, позволяющая устранить использование до 20 тонн трихлор-укзусной кислоты, обеспечить получение с 1 л. синтетической среды до Ь- Ю тысяч дои ъм&зто 500-600 доз очищенного туберкулина.

• J.ii. ^оверщвнзтпоьание методов первичной диагностики туберкулеза и д,;1ч';.:ф(лщлации неопоцифичеоких реакций на туберкулин у крупного рогатого скота с помощью безальбумозного туберкулина

U шда/. исследованиях ьа прототип такой дифференциации взят гиззоб './дилйчню-уимя во внутривенном введении туберкулезных аллергенов. Завистно, что при внутривенном -введении туберкулшщ у больных туберкулезом квотных возникает общая реакция повышенной чувствительности згрздлйнцего типа /¡М5Т/ -туберкулляовый шок. Причем изменение •г&к'^ртгурч те-tt зависит от тяжести шока /Н.В.Д1едунйадн,1983/.

Одашо Необходимо учитывать, что не все виды туберкулезных .i,.4£)preii-jB ебчек'дмт равной способностью вызывать температурнуя реакции.

' Ср:ш:пт!ш!00 ¡юпытанне, на болтом туберкулезом крупном рога-тси cîîovcj, i.nyrp.ibiiiiuoii туберку-вшязаиии туберкулином Ш1Д млекопл-•r«»«wx. л с-сиибумоаини, ьливлло преимущество последнего в точиосм iKKa:::.i:.iii гимл.арлтурнбИ реакции с патологоанатомаческой картиной yci.ii.ix Lsnoïiiux. Результаты этих исследований представлены в таблице X

, Ну данных, представленных в таблице 3 следует, что наиболее 14--KTuacii ао внутривенной туберкулинизации безальбумозный туберкулин в концентрации ¡¿00000 Т.Е. Причем в практически в 1L0JIÈ случаев полож/дчшпно показания внутривенной туберкулинизации безальбумозным туберкулином соответствовала специфическим поражениям туберкулезного хирл-л'ср! у убитых мБотти. ii то время туберкулин ГШД млекопитающих в аналогичной коЛпищщшш или я л.и знач лилию меньшее, количество

< ' 4

животных с положительной температурной реакцией. Причем ичтеаснв-ность температурной реакции ни в одном случае не превчсита 4г/\:.

Таблица 3

Показатели температурной реакции на бозальбумолннй туберкулин и, Ш1Д млекопитающих у больного туберкулезом крупного рогатого скота при внутривенной туберкулшшзации.

Вид туберкулина и доза Кол-во: Кожная „ : реакция И1В-Х : на тубор : КУ.Л7Н N74 Знявлено жизотчыл с темпегч-турной роактгие;|

37,5-39,5: >39,58.1: > 40°0: >41°:

Безальбумозный туберкулин 200000 Т.Е. . Обнаружены туб. поражения. ■ 53 » 10,8+*1,9 12 : 9 ! 2Ь • 7 • \ . - ' :• 9 ' : 25 ; 7'

ПДЦ млекопитающих 200000 Т.Е. Обнаружены туб. поражения 44 10,8+ 1,9 36 : .8 ' : - : 12 : 8 1 - : -*. • « •

Полученные результаты позволили шире использовать внутривенную ту:'ор-кулинизацию безальбумозным туберкулином в хозяйствах, продетая пл-гг; ■: определенные трудности -в правильной постановке диагноза и-? туберг;:-лез и для дифферонциагаи неспецифических косных реакций на тубер::\--лин у крупного рогатого скота. Применение внутривенной туберку.тонизации в 26 хозяйствах Курской'области; при первичной постановке диагноза на туберкулез, позволило установить причину аллергических реакций на туберкулин в 11 хозяйствах. Следует отметить, что неоднократно проводимые 'попытки получить какие-либо опре.-.оленные 'результаты с применением внутривенной туберкулинизации туберкулином ШЩ, не имели практического успеха, так как ее. показания во всех случаях были отрицательными. .

3.3. Оценка специфичности аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота экспериментально сенсибилиэиро-

* ' ванного разнима видами 'микобактерий

В настоящее' время аллергическая диагностика туберкулеза значите пьно затруднена из-за сенсибиллзацш животных атипичными микобак-тариями. ,'Ьш изучения специфичности аллергических реакций на туберкулин и совуриеяствсвания аллергической диагностики положительное значение имеет создание у восприимчивых животных аллергического • состояния, вигл:вл5:.;зго различными видами микобактерий.

В идеях езечедиваняях использовали искусственно созданные, ойзонаенне /.одел,: гыл^ргла путем сенсибилизации крупного рогатого скота аы^миаваро^штыма .культурами 55. ; 'Л.&'шт-, И.^ЛоИ/ИцеОЛ ; '..'..пьлсЬгоподмсиМ, д.я изучения проявления ответных реакций на аллер-г^ши при спмучьтшшой туоеркуланизаши, применяя рази7ы их концеитра-

ч проведанных нами исследованиях установлено /таблица 4/, что у апыпьых, сенслеллнзлраааннах М. . наблюдаются более досто-. верно »к,.*.»*- шше а..и.ергич*ск:ш ^еанипн на оооть«тотную.ияй тубе.рку-лл. д:я ц'^г.еилгакиих но сравнению с аналогичной концентрацией туберкулина ;илц. иу.1 зтом интенсивность реакций на туберкулин до» шшксиитиыйХ.ооотшшш 9,1+. 0,4 мм, а на птичий 4,4+ 0,4 ш. Различие'достоверно Р<0,0Ь. Ь процентном отношении число рзаги-руадах не туберкулин дня птиц составило 3556 от числа рчакцл.4 чь туберкулин для млбкопитаюшлх,

У жлв.>£»ых, сеаслоллиалрован.мх возбудят, лом туберкуле. ; птичьего вида и цтлпичнами какобиктерияш, преимущественно нао.-лол.-.еись реакция на туберкулин для дтиц и в знача!огню кеньыой стзпена ■'а т^беру/.лк и;.л .•диксимыи^*, Однако по интенсивности реакции на оба туб :и;> 1 „ьк: п.. ыльи^но 1' >*0,0а.

Кик .к,к.1 ... ■,. „м .1.,1^:1,1к ум.п:1 а;; м..е ш^гностическо;; дозы '|у0е|'|;ул.ч!:1 ь, ч е рЦист .:н ¡и.;т;: келной Пробы, при ето>.1

Таблица 4

Результаты аллергических реакций на туберкулезные аллергены у 'животные экспериментально сонсииилизиро^анных автоклавированными мйкрбактерияки разных вкдсь.

.:гЬлцчестго:£ид сеиск-:__гзагиооь.гяо ¡кицотных с интенсивность;) реакций ■

. :иилкзаии;; : ^ СО дней : 50 ¿НОЙ

• ; шок ; :ШОО Т. и '.Ши вткц : ЮООО Т.Ь. илэк цткц ¿0000 Т.Ь.' : 10000 Т.Е. : ПОД, кдек : 10000 Т.Е. :ГШд птиц :Ш1Д млек : 10000 Т. 5: ¿000 1.Е. •ЛЩД.атщ :5000- Т.£*

л . гь : М. ЬоуЦ : ?е : 5 25 : 7 : 25. : 9 : 24 2 ..

: ; :9,О+О.5 : 3,8+0,0 5,3+0,5 : 4,0+0,4 ; 5,1+0,4 : 4,4+0,4 : 4,5+0,4 : 3.0

Гс : 25 : М.аШГП : 5 14 : е : 23 : 11 24 : • 5 * : 14

• :4,6+о,е : 7.5+0.6 : 5,1+0,5 : о. 9+0.5 : 4,4+0,4 ; 5,25+0.4 : М : 3,5+0,2

° ' 25 '• 1зееит '• : - : 7 3,8+0.3 : 5 : 4,6+0,4 : 12 : 4,5+0,3 : 21 : 4,7+0,3 : 3 : 3,0 : 10 : 3,3+0,2

попскго-тс у?пс сит : - : 6 ч.э+0,7 : 9 : э.1+0,5 : 15 : 4,2+0,3 : 22 : 4,2+0,3 5 : 3,4+0,2 : 9 : 3.3+0,2

опепноГкчнооть ее практически не повышается, В связи о этим сомнительным является направление на повышение эффективности дифференциации неспецифических реакций путем снижения концентрации туберкулой.

Проведенные исследования свидетельствуют о возможности искусственно!: , целечаправтенной и безопасной сенсибилизации гавотних рлп'шми видами шкобактеркй с целью совершенствования аллергической диагностик;! при разработке оптимальных концентраций туберкулина, в т.ч. испытании сенситинов из местных штаммов атипичных макобактерий.

3.4. Регламентация показаний и противопоказаний аллергической диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота

На резистентность п аллергическую реактивность организма разностороннее влияние оказывают факторы внешней среды. Как следствие в медицине и ветеринарии Имеется рост аллергических болезней и н.мунодепрэоан'гчых состояний.

Изучение влияния на кожную чувствительность разнообразных ■ • факторов, й частности.-.применяемых в ветеринарии лекарственных и • профилактических препаратов, а такте при заболеваниях инфекционного и инвазионного характера представляет определенный интерес как с практической, так и о теоретической точек зрения. - 1

■ Для выяснения влияния йасштолозной инвазии на проявление когкных рпакинК на туберкулин провели исследования в колхозе "Красное Знамя" на 47 к в колхозе "Путь к коммунизму" на 53 реагирующих на туборку-.•114 Колрологическпм исследованием в первом хозяйстве рч.чви-.

ли 19, а ко втором 25 штвазирозанных фаецполезом коров. Находящихся в -мг;те коров наслодорапи учащенной туберкушшпзацией через качдав днчй в точение месяца. ¿} группе кнвазггровашшх коров, учащенная I у'ерхуллнязацяя, в том числе симультанная с туберкулином для

' п* '

:1Т:!Ц и КЛ*.!, не отразилась на уровне аллергических раакш.*'. ливот-¡г;ч постоянно р-аггровалп кз туберкулин. Однако после деголь- .

:-.ТОВ.'2Н:!НХ КорСВ ПрэПЗГЧТиЛ'К ^аСКОВврМ, КИЛ."«»

дертил "Б" наблюдалось состояние десенсибилизации, которое сохраня-' лось в точение 20- 30 дней. Параллельноо учащенное введение аллергенов 79 коровам, инвазированным фасциолезом и нереагирующим на первое введение туберкулина, не вызвало в течение месяца проявление повышенной чувствительности кожи при туберкулинизации.

Арреактивность на учащенное введение туберкулина и КАМ установлена у 35 коров больных некробактериозом, 32 больных маститом и 19 эндометритом.

С у .етом проведенных исследований, выявивших состояние десенсибилизации у животных после.обработки антагелшннтными препаратами, провели.исследования по изучению влияния на аллергическую реактивность организма разных групп биопрепаратов широкопримонявмых в ветеринарной практике. Для решения поставленной задачи предварительно провели аллерглзацио убитой туберкулезной культурой молодняка крупного рогатого скота. После появления у животных хорошо выраженных реакций на туберкулин они были разделены на группы по 5 голов в ка»до:1, на-которых в отдельности пржончяи а рекомендуемых доьах формолвакцилы против ящура и паратифа, антитоксическую сыворотку против пс.ратп^а, антибиотики пенициллин, стрептомицин, бициллин, "тетрациклин. Животные в последующем исследовались учащенной туберку-линизацней чераз какдыо 7 дней в течение месяца. При .»том было выяснено, что наибольшее по продолжительности деионсибЛлиаирумдее действие оказывает парентерапг-нсе введения 'формолвакцин. Состоянии десенсибилизации поел« их применения сохранялезь зпчвы £0 дней. Одна: ) введение антибиотиков также вызвало практически полное выпадона;) аллергических реакций на тубыркулан в точвя~о 15- 20 дней.

1Чзи!.:ируя следует отметить, что заболевание животных фасцлсле-зом, н:,крэбактс.риооом» кастетом, эндог/атритоы нэ является причиной появления повышенной чувствительности к туберкулину. Таким образом, неубедительной является ссылка на воакоч-чосп. появлении неспопири-чеаких реакций на туберкулин при данных г^оол^вания». у животных. Подобного рода суждения в определенно.! ^т-.пшпл могут только

маскировать туберкулез.

При плакировании аллергических исследований на туберкулоз необходимо учитывать, что применение форкол- и фонолеодержаших биопрепаратов, ряда антигельминтных препаратов и антибиотиков подавляет чувствительность кожи к туберкулину в течение 20- 30 дней

3,5. Материалы по получению и применению инактивированных

формалином туберкулезных аллергенов

Используемый дм диагностики и специфической терапии туберкул)

представляет собой экзо- и эндотоксин микобак'терий туберкулеза,

способный вызывать у алпергизированных животных аллергические

реакции и анафилаксическик шок /М.М.Авербах, В.И.Литвинов,1976/.

% Возможность инактивации форматном аллергенных и токсичных

опойстй туберкулина с целью получения туберкулезного аллергоида

или анатоксина для профилактики туберкулеза не изучалась из-за

классического представления о нестерильном иммунитете при туберкул*

Сухой очищенны?' туберкулин и безальбумозный туборкулин по двор: -t *

галс обработке формалйком начиная с концентрации 0,1%. Обработку

туберкулинов формалином Изводили при- повыш енной температуре 4,5ч

55°С, с учетом того, что туберкулин как продукт воднотермического гидролиза микобактерий туберкулеза обладает свойствами тормостаби^ :юго аллергена, а реакция между формалином и бактерийными иротеина-ми ускоряется и стабг-газируется при повышенной температуре/ Д.М, ГогФункпль-Кошкина, Н.Д.Воробьева,1979/.

Пзу. ;ние процесса снижения и установления степени инактигтдии .".хлергонних и токсичных свойств туберкулина, после- обработки фомали-нсм, проводили на сенсибилизированных вакциной ЁШЕ морских свинках и больном Туберкулезом крупном рога:ом скоте. Для контроля использо-калп диалогичную серию аллергена не подвергнутого обработке формалином. Лги этом установили, что обработка туберкулина формглином уже нг>. перзые сутки приводит к заметному снижению 'аллергенных свойств..

- 19 - .

Однако было выяснено, что 0,1$ концентрация формалина недостаточна для их полной инактивации. 'Максимальное снижение аллергенной активности в формолтуборкулине, при титрацни на сенсибилизированных морских свинках, достигало 70$. Полная инактивация аллергенных свойств в туберкулине достигалась 0,2$ концетрацией формалина из расчета на каждые 50000 Т.Е. в 1 мл. Начиная с 7- 8 дня,- после обработки туберкулина указанной концетрацией формалина, у сенсибилизированных морских свинок ответные реакции на внутрикожное введение фопкилтуберкулина на проявлялись, при наличии на параллельное введение туберкулин-. Аналогичные результаты были получены и на больном туберкулезом крупном'рогатом скоте. Подкожное однократное введение формолтуберкулина в дозе 0,5- 1,0 мл сенсибилизированным вакциной БЦК морским свинкам и в дозе 5 мл больному туберкулезом крупному рогатому скоту, подавляло у них чувствительность к туберкулину. При этом выяснилось, что сенсибилизированные вакциной БЦ2 морские свинки без видимых признаков беспокойства переносили указанную дозу туберкулезного аллергенда. й то же время введение неинактивироваы-ного формалином туберкулина вызывало склькое беспокойство у сенсибилизированных вакциной ЕЦ2 морских свинок.

При этом в туберкулезном аллергоиде белок не опредз.чялся, что указывало на высокое и прочное связывание туберкулопротеина с форг.-'а лином.

Таким образом, разучьтаты проведенных наследований свидетельствуют о тем, что'туберкулин после обработки 0,2$ коаиетраци«й формалина утрачивает свои аллергенные и токсичные свойства к подобно формоляакцинам приобретает способность подавлять аллергически:! реакции у сенсибилизированных морских свинок и у больного туберкулезом крупного рогатого скота.

3.6. Изготовление' ¡1 применение гуооркужэлгам анатоксина

С уадгом установленной способности фор лупила шектпалродцть токсичные и аллергенные лпойатва туе-¡Букина -;р -.л. ли изыскан;;.!

- 20 -

возможности получения туберкулезного анатоксина.

Туберкулезный анатоксин вначале изгбтоаляли отдельно из сухого очишснного и безальбумозного туберкулина с активностью 50000 Т.Е. в 1 мл катдкй. Инактивацию аллергенных и токсичных свойств провели ' Г),концентрацией формалина в течение 10 дней при температуре 4Ь°С. Сорбцию анатоксина провели на гидроокиси алюминия из расчета 1 мг окиси алкминия на 3 мл препарата. Однако защитный эффект, при испытании на лабораторных животных, был незначительный. Кролики и морские свинки имели явные тубаркулезныз поражения, но гибели их в течение трех месяцев после заражения не наблюдалось.

Следующая серия анатоксина была приготовлена из смеси сухого очищенного и безальбумозного туберкулпнов с.общей аллергенной активностью 100000 Т.Е. в 1 мл.

Заражение кроликов и морских свинок, подвергнутых двукратной иммунизации туберкулезным анатоксином, вызвало единичные туберкул., з-кые поражения в печени и легких. Контрольные, неиммунизированные анатоксином, кролики и морские свинки в течение'2- 2,5 месяцев" гогиб.ти от генерализованного туберкулеза.

Для повылекия протективкой активности туберкулезный анатоксин

бчл изготовлен кз удвоенной концентрации сухого очищенного и безаль-• • ! бумозного туберкулпноз о обшей аллергенной активностью 200000 Т.Е.|

в 1 мл. Дта инактивации аллергенных свойств использовали 0,8% ксниетрацию формалина, а сорбцию анатоксина провели на гидроокиси алтаиния кз расчета 2- 3 мг окиси алюминия на 1 мл препарата.. Полученный по последней схймэ туберкулезный анатоксин обеспечил защиту, от ?арт»ения ?уйэркуле;ч-м 43 карских свинок и 28 кроликов в трех и четверга:.: опыте 9 морских свинок и 6 кроликов переьзели • иукра\.юе, с интервале»: э три месяца, заражение взвесью миксбакте- ■ у:-« тубегкулерз в срегнек 500- 80? ют. ютсробннх тел каждоку «ивот-•;;/-.'.7. г.е-кло подтверждено, ~го ту5е?кулчзикй анатоксин

оС' :ле -.••.■■г»:1"- иту .•.■»¡Гсгат^рнчх ''изогнцк ст 32рсс«нля мкясбакте-•:"■-.•.•.•; '. • : \ - ^ :ч . а ::гс •З'-'рчо. 2гг. ;• ■::■.> ссчи^нп';

- 21 - '

иоштать данный препарат для активной профилактики туберкулеза у крупного рогатого окота.

При испытании туберкулезного анатоксина на крупном рогатой скоте установлено, что двух- и трехкратное подложное введение препарата в дозе 5 мл не вызывает сенсибилизации организма животных к туберкул.гау. Иммунологическая перестройка в организме сопровождалась накоплением лейкоцитов с 6,40+ 0,42'109/1л до 8,25+0,25*Ю^л и лимфоцитов с 4,72+ 0,34 до 5,98+ 0,70. Изменения достовер'ш. Существенно стимулировалась выработка В-клеток. Содержание ¿-лимфоцитов доходило до 37,2+ 0,54, против фоновых показателей 13,88+ 0,12. Изменения в количественном соотношении Т-клеток на действие туберкулезного анатоксина не ;а:ело достоверного различия с предопытныш ' данными. .

Для изучения протектлвного действия туберкулезного анатоксина было поставлено несколько опытов.

В первом опыте провели двукратную иммунизацию туберкулезным анатоко-шом 8 телят шестимесячного возраста. Через месяц после иммунизацли животных заразили млкэбактернямн туберкулеза птш.а~ 8 . в дозе 10 мг на од.ю животное. 1!абл:одение за зарат-е.пшми животншлл осуществлялось в течение трех месяцев. При исследовании на туберкулез, спустя 1,5 месяца пооле заражения, установлена повышенная чувствительность к туберкулину в пределах 7,3+ 2,1 юл утолщения кожной складки. Туберкулшг/зацией, проведенной спустя три месяца, у 5 из 8 иммунизированных оычков кожные реакции на туберку1:;'1 не проявились, а у остальных трех существенно снизились и составили в среднем 2- 3 мм. Лрп диагностическом убое характерных для туберкулеза патологоонатомлческих изменений выявлено не было. Лабораторными исследованиями ¡лнкобактер.л туберкулеза не выделены.

Аналогичные результаты нами были полтонн при не пытал ли туберкулезного анатоксина в длительно неблагополучном по туберпул°яу стаде на 525 коровах. Следует отметить, что в период проведения

иммуниэатш животных било выявлено три реагирующие на туберкулин коровы, причем у одной из них была обнаружена генерализованная Форма туберкулеза, а у двух других туберкулезные поражения в лимфатических узлах, что подтверждало паличпи' распространенного туберкулеза в данном стаде. Контроль за иммунобиологическим состоянием гивотных осуществлялся проведением туберкулднизации через каидые три месяца.

В результате инфицирования у части юшотных наблвдалась пова-гаенная чувотвите.льность к туберкулину, особенно в зимне-стойловый " | период, когда тавотные находились в необеззар'акенком помещении. Однако состояние повышенной чувствительности к туберкулину было

непостоя;шшл. Копше рёакции на туберкулин через 2- 3 месяца пол- ;

}

ностк-о выпадали у ранее реагировавших животных, однако проявлялись у других. Выборочно убитые животные но млели туберкулезных поражений. При лабораторном исследованил материала от убитых коров, продай;,!!! параллельно двумя лабораториями в течение 2,5 лат, ааболе-вание туберкулезом не подтверждалось.

Для1 более объективного сувдения о защитном действии туберку-,. . лезного анатокоина был поставлен опыт в ^жестких" условиях туберкулезного изолятора. С этой целью, провели иммунизация туберкулезным анатоколном 33' телят в благополучном по тубвркрюзу хозяйство.'. Для контактного инфицирования опытные телята в течение года содзр« жались вместе о болыппги туберкулезом быками. Лля контрольного . наблюдения использовали 69 неимыунизировшпшх бычков.

Конт-оль за иммунобиологическим состоянием животных ооуип.,*твлй^ ли периодическим -исследованием на туберкулез. В результате наблюдения установлено, что Е течение первых 4- месяцев содержания 'тнвотных в условиях туберкулезного изолятора у опытных бычков, иммунизированных туберкулезным анатолоиксм, повышенная чувотвлтель^ нооть к туберкулину не проявилась, что свидетельствовало о_защитном деВотвни данного препарата для организма животных. В контрольной

группо, из 65 исследованных бычков, у 28 выявлены кожные реакции на туберкулин.

Следующее исследование на туберкулез, проведенное спустя 8,5 месяцев, выявило состояние повышенной чувствительности к туберкулину у 9 опытных телят, в то время как в контрольной группе реагировало на туберкулин 58 быков. Результаты последующих наблюдений представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты испытания защитных свойств туберкулезного анатоксина на молодняке крупного рогатого окота в уоловаях длительного контакта о больными туберкулезом быками.

№

а п.

Наименование группы я количество

животных

Количество реагирующих на туберкулш животных о интенсивностью косной реакции в мм_

через 4,5 ыео.

через 8,5 мес.

через 10 мес.

через 12 мес.

1.

Опытная группа, Зо бычка

Контрольная группа, 69 бычков

28

11,50± 2,44

9,80± 1,92 58

11,50+ 1.94

8,0± 0,85 59

10,70± 1,24

4,20+ 1,64

не

исследовались

При убое 7 реагирующих на туберкулин бычков из опытной группы, у одного из них обнаружен первичный туберкулезный процеоо в заглоточном лимфатическом узле.

При убоэ 30 бычков из контрольной группы, у 24 из них обнаружены туберкулезные поражения.

Таким образом, иа основании проведанных исследований следует, что туберкулезный анатоксин не вызывает сенсибилизацию крупного рогатого окота к туберкулину. При инфицировании алго^ных млкобакте-рияки туберкулеза возникает временная повышенная чувствительность на внутрнкожнов введение туберкулина без прогреознровання туберкулезного процесса.

4.0. ВЫВОДЫ'

1. Образование а ллергеноактивных веществ в кулг.туральной жидкости происходит при воднотермичпском гидролизе•микобакторий туберкулеза, а процессы аутолиза и биосинтеза не имеют практического значения.

2. Концентрация и очистка аллергеноактивных веществ туберкулина о помощью трихлоруксуоной и уксусной кислот, аммиака, спирта, ап?тона и диализа приводит к потере исходного препарата до 78- 80$ при снижен-,!" его активности на 20- 30^.

3. Гоэальбумоэчнй туберкулин, приготовленный без химического ^сг.дрй^твия на аллоргнноактивные вещества препарата по биологической активности, видовой специфичности равноценен производственным сорита туберкулина ЛПЯ для млекопитающих. • '

4. Внутривенное введение крупному рогатому скоту безальбукоз-нсго туберкулина в.объеме 4 мл /200000 Т.Е./ обеспечивает выявление ' э SO- '1005 случаев больных туберкулэзом животных, но вызывает * , длсенсибшшзапиа чувствительности кожи.

Б. Антибиотики, формол-и фенолсодержащие препарата проявляют 1 дснроссарутааее действие на чувствительность кожи к туберкулину у : .згнокбилизлрованного ¿oW^ крупного рогатого скота.

6. Обработка туборкуллна, содержащего в 1 мл 50000 Т.Е., 0,2| формальдегидом приводит к полной инактивации аллергенных к токсичт■, ных свойств, обеспечивает-получение препаратов, обладающих-десонси-биллзйрувЕИмв и протйкгивники свойствами. . •

7. Туберкулезный.анатоксин не вызывает сенсибилизацию к туберкулину у здорового крупного рогатого скота, обеспечивает устойчиво-;.?; морских сванок и кроликов при заражении их кякобактериями Тулпркулеза.бычьего.впда в дозе 0,5- 0,8 млн микробных тел.

Заражение крупного ро?атлтэ скота, иммунизированного туберку-.«•«ныи привод:? к образованию кратковременной повышан-

"-.V гуузт?ит-:.тън к т уборку г? ну сез перехода' в «заболевание.

-25 -

5.0. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• 1. Для дифференциации специфических и неспецифическнх кожных реакций на туберкулин предлагается способ внутривенной туберкутнни-зации безальбумозным туберкулином в концентрации 200000 Т.Е., позволяющий в 90--100$ случаев надеяио выявлять животных тлеющих туберкулезные поражения'при абсолютном исключении неспецифических реакций.

2. Необходимо учитывать в противопоказаниях к проведению тубер-кулинизации способность формолвакцин, антибиотиков, антигельминтных препаратов индуцировать десенсибилизацию чувствительности кожи к туберкулину в течение 30 дней.

3; С целью предохранения животных от туберкулеза целесообразно проводить иммунизацию туберкулезным анатоксином здоровых животных при постановке их в ранее неблагополучные по туберкулезу фермы.

Ochobi je работы, опубликованный по теме диссертации

.1. Евглевский Ан.А., Евглевский Ал.А. Дозенсибилизирукж.не свойства'к туберкулину биопрепаратов, содержащих формалин и фонол// Курокий ЦНТИ, Ч 220- 86.

2. Буткин Е.И., Евглевский Ан.А,, Евглевский Ал.А. Имлгуноалл-! -гические модели при туберкулезе а учебном процессе и эксперименте// Курский ЦНТИ, № 225- 86.

3. Евглевский A.A. Регламентация аллергической диаг-юстики туберкулеза у сельскохозяйственных животных/'/ Курский ЦНТИ, ;i355- 87.

4. Вианяков J.И., Евглвг/^кий Ан.А., Левантовскпй С.А., Евглиьск»:

A.A. Аллергическая арреактивнооть к туберкулину при скармливании белково-минеральных добавок// Курский 1ШТИ, № 260- 8?.

5. Евглевский Ан.А., Евглевский Ал.А., Киптилый Ю.П., ¿ыдрик

B.Н., Дубинин А.Н., Лебедев а.5. Противотуберкулезный анатоксин л его защитные свойства для' животных// Курски;; ЩГ.'Л. № 80- 89.

6. Евглевский A.A. Диагностика специфических и неспещ^ы-теских реакций на туберкулин у крупного рогатого скота// Курский ЦНТИ,

. » 152- 90.

7. Евглсез клй Ал.Л., Еиглевскпй Ан. А., Дубинин А.Н. Изготовление я иопитанио безальбумозного туберкулина для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота// Курский ЦНТИ, № 216- 90.

0. Евглевский A.A., Дубинин А.Н. Результаты испытания противотуберкулезного анатоксина на крутаом рогаток скоте// Курский ЦНТИ, Я 1-91.

У. Урбан В.П., Евглепский Ан.А., Евглезский Ал.А. Изготовление и испытание туберкулезного анатоксина// Курский ЦНТИ, X 21- 31.

Методические рекомендации

1С. Евгловский Ан.А., Буткин Е.К., Евглевский Агс.А. Методические рекомендации по диагностике туберкулеза животных// Курск- 1938.

LI. Евгловский A.A., Дубинин А.Н. Практические аспекты первичной диагностики туберкулеза к дифференциации неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота// Курск- 1991.