Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Состояние неспецифической резистентности при комбинированной химиотерапии дизентерии свиней

На правах рукописи

ПАХМУТОВ МИХАИЛ ИГОРЕВИЧ

I 003472140

СОСТОЯНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ КОМБИНИРОВАННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ДИЗЕНТЕРИИ СВИНЕЙ

(КЛИНИКО-ЭКСПЕРМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Саранск-2009

003472140

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Столяров Владимир Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Здоровинин Владимир Александрович

(Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева г. Саранск)

кандидат ветеринарных наук, заслуженный ветеринарный врач РФ, президент Ассоциации ветеринарных врачей Республики Мордовия Денисов Василий Георгиевич (Мордовская республиканская станция по борьбе с болезнями животных, г, Саранск)

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», г. Казань

Защита диссертации состоится в6. 2009 г. в «¿2.» часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 212.117.15 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева

Автореферат опубликован на сайте Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева www.mrsu.ru E-mail: dsovet@mrsu.ru

Автореферат разослан » «иОлА_2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета . ^ Т. А. Романова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В большинстве регионов России, как и вне её пределов, свиноводство остается одной из основных отраслей животноводства. При этом в условиях различных форм собственности и создавшейся экономической ситуации возникла острая необходимость срочного возрождения и наращивания темпов производства свинины, предусмотренных «Программой развития АПК на 2008 - 2012 гг.» (А.Т. Мысик, 2006; Г.А.Шичкин, 2008; В .И, Фисинин и др., 2008; В. Шарнин, Н. Михайлов, 2009).

Одним из важных факторов, отрицательно влияющих на этот процесс, являются заболевания свиней различной этиологии. Среди них основное место занимают болезни органов пищеварения, в частности инфекционные гастроэнтероколиты, в т.ч. и дизентерия свиней (ДС), наносящая весьма существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам (A.B. Голиков и др., 1978 - 1991; В.Н.Скворцов, 2002, 2006; Х.З.Гаффаров, Е.А.Романов, 2004; А.И.Иванов, 1994, 2004, 2005; А.В.Иванов, Р.Х.Юсупов, 2006; А.Г. Шахов и др., 2007; H.A. Солдатенко, 1994, 1997, 2007; A.A. Швецов, 2007, 2008; E.N. Wood, R.J. Lysons, 1988 и др.).

Основным возбудителем ДС считается анаэробная храмотрицательная спирохета Brachyspira (Treponema, Seipulina) hyodysenteriae, синергично взаимодействующая с условно-патогенной микрофлорой кишечника на фоне расстройств его микроэкологического равновесия, обусловленного активизацией анаэробов при снижении численности бифидо- и лактобактерий (A.B. Голиков, В.В. Бондик, 1980; А.И. Завирюха, 1983; М.Д. Дриаева, 1994; А.И. Иванов, 1997; T.J.Terpestra, I.Äkkermans, 1968; D.Y.Taylor, 1970, 1997; D.L. Harnes e.a., 1972, 1974; I.Äkkermans, W. Pomper, 1973; T.Alexander e.a., 1976; J.M. Kinyon e.a., 1976, 1977; R.J. Lysons, 1979,1991; M. Karlsson e.a., 1999, 2000).

Однако до настоящего времени отсутствуют специфические средства борьбы с ДС (вакцины, сыворотки), а нередко продолжительное, порой

бессистемное применение многочисленных лекарственных средств обуславливает ослабление их лечебно-профилактической эффективности, т.к. у патогенных бактерий, судя по последним данным, сравнительно быстро вырабатываются механизмы повышения резистентности в составе биопленок к химиотерапевтическим препаратам и факторам иммунной защиты (Т.С. Ильина и др., 2006; A.C. Велик и др., 2008). Эти и другие обстоятельства (A.B. Голиков и др., 1991; В.Н. Скворцов, 2002; H.A. Лагуткин, 2006; А.Н. Гречихин, A.B. Семенихин, 2006; А.Г. Шахов и др., 2007; П.С. Лобова, В.Н. Скворцов, 2008) обусловливают при лечении i. профилактике ДС не только изыскание новых химиотерапевтических средств, но и использование относительно «старых» лекарственных веществ в комплексе с различными препаратами, активизирующими (модулирующими) функции нервной, эндокринной, иммунной и других систем организма животных, обеспечивающих, в конечном итоге, нормализацию их метаболизма и оптимальный уровень продуктивности (В.Т. Самохин, 2003; Ю.Н. Федоров, 2005; О.Т. Муллакаев и др., 2006; Б.Д. Кальницкий, 2008).

Перечисленное выше предопределило цель наших исследований: изучить изменения клеточных и гуморальных показателей неспецифической резистентности в норме и при комплексной химиотерапии ДС у поросят послеотьемного периода.

Для ее достижения решались следующие задачи экспериментально-клинического характера:

- определить в динамике (0, 7, 15 суток) нормативные клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у клинически здоровых поросят (группа доращивания, возраст 65 - 70 дней);

- изучить в эти же сроки исследований аналогичные показатели неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов на фоне монотерапии препаратом Метронид-50 (ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов);

- установить динамику (0, 7, 15 суток) изменения тех же показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов при

комплексной химиотерапии; - дать сравнительную оценку лечебной и экономической эффективности моно-и комплексной химиотерапии ДС у подопытных животных.

Научная новизна. Подтверждены и научно обоснованы ведущая роль и значение нарушений механизмов неспецифической резистентности в патогенезе ДС на фоне расстройств микроэкологического равновесия в толстом отделе кишечника свиней, обусловленного активизацией анаэробных микроорганизмов при снижении численности лакто- и бифидобактерий.

Установлено, что комплексная химиотерапия ДС поросят послеотъёмного периода оказалось эффективней по сравнению с монотерапией, т.к. в большей степени повышала уровень клеточных и гуморальных факторов неспецифической резистентности (врожденного иммунитета), обеспечивая тем самым более раннее восстановление и нормализацию так называемой «оральной толерантности» у больных ДС поросят (К.А. Лебедев, И. Д. Понякина, 2008).

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные экспериментально-клинические данные убедительно продемонстрировали необходимость комплексной химиотерапии ДС, способствующей более раннему клиническому выздоровлению больных животных по сравнению с использованием только одних средств так называемой «специфической монотерапии». Расширение и углубление наших знаний о состоянии механизмов неспецифической резистентности у поросят отъемного и послеотьемного периодов в норме и при ДС позволяет разрабатывать новые, научно-обоснованные и эффективные схемы-модели профилактики и лечения этой инфекции в свиноводческих хозяйствах различных форм собственности в условиях современной России.

Материалы собственных исследований не только вносят определенный вклад в изучение патогенеза ДС, ко используется в учебном процессе, в работе научно-исследовательских учреждений ветеринарного профиля, при написании и составлении учебников, учебных пособий и руководств по инфекционной

патологии свиней.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены: на Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (г. Санкт-Петербург, 2006); на XV Международном ветеринарном конгрессе (г. Москва, 2007); на Международной конференции «Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках нацпроекта «Развитие агропромышленного комплекса» (г. Казань, 2007); на Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВ и М (13 - 14 ноября 2008 г. Покров, Владимирская обл'.); на расширенном заседании кафедры анатомии и физиологии животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (г. Саранск, 2009).

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на профильных кафедрах Санкт-Петербургской и Казанской ГАВМ, Нижегородской, Ивановской, Костромской, Кировской и Брянской ГСХА, Оренбургского ГАУ, Мордовского и Хакасского госуниверситетов.

Публикация результатов исследований. Основные материалы по диссертации опубликованы в 5 научных трудах, в т.ч. одна из них - в рецензируемых изданиях списка ВАК Минобрнауки РФ. Положения, выносимые на защиту;

- клеточные гуморальные факторы неспецифической резистентности у клинически здоровых и больных ДС поросят-аналогов послеотьемного периода;

- изменения показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят через 7 и 15 суток после начала моно- и комплексной химиотерапии;

- лечебная и экономическая эффективность испытанных схем лечения ДС подопытных поросят-аналогов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста и традиционно состоит из введения, обзора

литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и практических предложений. Список цитируемой литературы содержит 222 источника, в т.ч. 97 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами и 10 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и метода исследований.

Работа выполнялась в 2004 - 2008 гг. на кафедре анатомии и физиологии животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева(№ госрегистрации 01200704777.).

В экспериментально-клинических исследованиях использовано 69 поросят послеотъёмного периода в возрасте 65 - 70 дней: из них больных острой (подострой) формой ДС - 59, клинически здоровых - 10 голов, подобранных по принципу парных аналогов по возрасту, массе тела, интенсивности роста.

Диагноз на ДС ставился комплексно с учетом клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений, лабораторного анализа проб фекалий, взятых из прямой кишки больных поросят, соскобов со слизистой оболочки толстого отдела кишечника (слепая и ободочная кишка) павших и вынужденно убитых поросят. При микроскопии (х450) мазков из проб фекалий, больных ДС поросят, соскобов слизистой оболочки ободочной кишки вынужденно убитых животных обнаруживалось большое количество (20 - 50 экз.) грамотрицательных спирохет, похожих на извивающихся аскарид с заострёнными концами. В конце срока наблюдений (30 суток) в мазках из проб каловых масс в опытной и контрольной группах, взятых из прямой кишки отсутствовали или обнаруживались лишь единичные экземпляры спирохет (2 -3) соответственно у 4 и 7 животных. В этих же специментах определялся их микробный пейзаж с помощью общепринятых микробиологических методов исследования (В.В. Меньшиков (ред.), 1987; А.И. Карпищенко (ред.), 1999).

Из предназначенных для выполнения экспериментов животных были сформированы опытная (п=31) и контрольная (п=28) группы поросят, больных ДС, а также - клинически здоровых животных (п=10).

Подопытные поросята размещались по 9 - 10 голов в станках после их тщательной механической очистки, мойки горячей водой и двукратной дезинфекции 2%-ным раствором едкого натрия с последующим периодом «отдыха» в 7 - 8 дней и дополнительной дератизацией в помещении свинарника.

В схему лечения опытной группы включались: Метронид-50 (ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов), микрогранулят тилозина («Балканфарма», НРБ), 3%-ный масляный раствор селенопирана, витаминный водорастворимый комплекс «Аквитин» (ЗАО «Мосагроген», г. Москва) в дозах и повторностях, рекомендованных производителями этих препаратов. Кормление подопытных поросят осуществлялось согласно норм РАСХН (А.П. Калашников и др., 2003).

Пробы венозной крови брались в утренние часы до кормления в начале, середине и в конце лечения (0, 1, 15 суток). В них определялся ряд морфологических, иммунологических, цито- и биохимических тестов по общепринятым методам исследований согласно цели и задач настоящей диссертационной работы (С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, 1979; И.П. Кондрахин и др., 1985; И.А. Пахмутов, 1988; А.И. Карпищенко и др., 1999). В частности, подсчитывалось количество эритроцитов, лейкоцитов, выводилась лейкограмма, определялось содержание гемоглобина, гематокрит с последующим расчетом величины среднего эритроцитарного объема (СЭО), среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в клетке (ССГК и СКГК), лейкоцитарного индекса интоксикации Каль-Калифа (1941) в сочетании с определением наличия эндогенной интоксикации по содержанию молекул средней массы (МСМ) на фоне содержания продуктов ПОЛ (перекисного окисления липидов) по уровню МДА (малонового диальдегида) в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой.

В образцах цельной крови изучались показатели фагоцитоза

полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН), НСТ-теста, активности ферментов миелопероксидазы и щелочной фосфатазы (МПО, ЩФ), содержание гликогена (Гл) и липидов (Лп) в этих клетках крови. В пробах сыворотки крови - степень бактерицидной (БАСК), лизоцимной (ЛАСК), комплементарной (КА) и бета-лизинной (БЛА) активности в отношении тест-объектов (О.В. Бухарин и др., 1974, 1977; С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, 1979).

Экономическая эффективность комплексной схемы-модели лечения поросят, больных ДС, по сравнению с монотерапией Метронидом-50 рассчитывалась по И.Н.Никитину и В.Ф. Воскобойнику (1999). Цифровой материал подвергалася статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента на IBM PC/AT с помощью лицензионной программы Microsoft Excel 2003 (С. Гланц, 1999).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Клиника-гематологические показатели у подопытных поросят в норме, до и после лечения ДС.

Клиническая картина ДС у естественно спонтанно заболевших поросят послеотъемного периода (65 - 70 дн.) при её остром (подостром) течении практически соответствовала дизентерийному симптомокомплексу, описанному во многих литературных источниках (В.П.Урбан, В.И. Шнур, 1974; П.И. Притулин и др., 1975, 1977; В.Л. Крупальник и др., 1980, 2006; A.A. Конопаткин, 1982, 1993; В.Н. Ласкавый, 1983; В.И. Шнур, 1983; H.A. Солдатенко, 1984, 2007; А.И.Иванов, 1995, 2005; А.В.Иванов, Р.Х. Юсупов, 2006; A.A.Швецов, 2007; T.J.L. Alexander, D.Y.Taylor, 1969; D.L. Harris e.a., 1972, 1992). В частности, у них отмечалось ухудшение общего состояния, вялость, субфебрилитет в первые дни болезни, ослабленный аппетит или почти полный отказ от корма, несформированные или жидкие каловые массы с примесью серо-зелёной слизи, приобретавшие впоследствии грязноватый или коричневый оттенок, а с появлением в испражнениях свежей крови - темно-бурый, кофейный цвет со зловонным запахом. Исхудание, жажда,

запавшие глаза, тусклая щетина, в некоторых случаях рвота, бледно-синюшный оттенок кожи и видимых слизистых оболочек, сгорбленность, грязный опущенный хвост и задняя часть бедер, шаткая походка. У некоторых больных ДС поросят наблюдалось извращение аппетита (питьё навозной жижи). В отдельных случаях отмечалось стертое, атипичное и даже безсимптомное течение инфекции при наличии выраженных патологоанатомических изменений в толстом отделе кишечника (ободочная кишка) в форме дифтеретически-геморрагического воспаления с наличием в его жидком содержимом буроватого цвета слизи, пленок фибрина и примеси крови. В картине красной крови у больных ДС животных обнаруживался относительный эритроцитоз, повышение уровня гемоглобина, гематокрита вследствие выраженной гипогидратации (табл. 1).

Таблица 1

Картина красной крови у подопытных поросят до и после лечения ДС (М±т, п=7)

После лечения, сут.

Показатели, ^лин- ! До лечения ; 7 1 15

здоровые : .......

О К O K

Эр., Т/л 6,2±0,24 |7,7±0,2*а ;5,8±0,41 |5,7±0,36 Д9±0,53 5,7±0,32

Hb,г/л 1121±3,3 |104,б±2,б** ! 108,8±2,5**6 ¡96,2±1,8 jll2±2,5 107,8±3,6 Ht, л/л СЭО, фл СКГК, г/л ; ССГК, пг

0,38±0,02 ;0,40±0,01 0,37±0,04 ;0,36±0,03 ¡0,37±0,02 0,36±0,03

61,3±1,2 52,0±1.0*** 63,8=1,3 |бЗ,2±1,2 |б2,7±1,5 63,2±1,3

312±П,3 !2бЗ±10,4**а ;294±7,6*6 ¡267±6,9*а ;303±6,5 298±7,2

19,6±0,65 :13,6±0,43**'; 18,8±0,72*6 16,9±0,51*' ;9,0±0,74 18,9±0,69

Примечание: Эр., Т/л - количество эритроцитов, Терра/л; НЬ, г/л - количество гемоглобина; Нг, л/л : гематокрит; СЭО, фл - средний эритроцитарный объем; СКГК, г/л - средняя концентрация гемоглобина в, : клетке; ССГК, пг - среднее содержание гемоглобина в клетке; *' - р<0,05, **' - р<0,01 - уровень достоверности: , различий по сравнению с клинически здоровыми поросятами-аналогами; *6 - р<0,05, '",6 - р<0,01 - уровень; достоверности различий по сравнению с данными контрольной и опытных групп.

Однако, как показали расчёты СЭО, СКГК и ССГК, у больных ДС поросят они оказались в пределах нижней границы стандартного интервала, снижаясь соответственно на 15,2 - 15,7 и 30,7 % по сравнению с таковыми у клинически здоровых поросят (р<0,05 - 0,01). Иными словами, у больных животных по изменениям показателей красной крови обнаруживались признаки

микроцитарной гипохромной анемии на почве расстройства пищеварения вследствие катарально-геморрагического воспаления в толстом отделе кишечника. Как нам представляется, это сопровождалось достаточно глубокими нарушениями в обмене железа, меди, витаминов В6 и В!2, играющих важнейшую роль в синтезе гема как основного компонента в молекуле гемоглобина (H.W. Tredten, 1999; М.Е. Conrad, J.N. Umbreit, 2000; J.M. Ristic, M.F. Stidworthy, 2002; J.L. Spirak, 2002; T. Ganz, 2003). Через 7 суток в опытной группе на фоне комплексной химиотерапии, а также и в контроле (монотерапии) количество эритроцитов и гематокрит у подопытных животных фактически нормализовались, но уровень гемоглобина в опыте оказался выше, чем в контроле на 11,8 % (р<0,01). Тем не менее, по сравнению с клинически здоровыми поросятами он не достигал нормативных значений (р<0,05).

При этом, как видно из данных табл. 1, в опытной группе СКГК и ССГК оказались существенно выше, чем в контроле (р<0,05). Через 15 суток все изучаемые показатели красной крови в обеих группах нивелировались и фактически достигли возрастных нормативных значений для этого вида животных. Судя по материалам табл. 1, включение в комплексную схему лечения витаминов A, D, Е и С (препарат «Аквитин») и селенопирана способствовало более быстрому (через 7 дней) возрастанию количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита и других показателей красной крови, и, следовательно, более раннему восстановлению анти- и прооксидантного баланса, ослабления эндогенной интоксикации в опытной группе по сравнению с контролем. Последний факт нашёл своё подтверждение про анализе лейкограммы у подопытных поросят. Так, в картине белой крови у больных ДС поросят наблюдалось закономерное возрастание количества лейкоцитов в 1,5 -2 раза выше относительной нормы, довольно выраженный нейтрофилёз с регенераторным сдвигом ядра влево, а процент моноцитов оказался в пределах верхней границы стандартного интервала (4,9±0,1 против 3,2±0,5 % в норме, р<0,05), согласуясь с литературными данными (R. Jonasson, 2004, 2007). В то же время наблюдалась достоверно выраженная эозино- и лимфоцитопения

(р<0,01), а лейкоцитарный индекс интоксикации Каль-Калифа составил 0,94±0,02 против 0,14±0,02 у клинически здоровых поросят (р<0,001). Убедительным подтверждением этому факту послужило определение МСМ -молекул средней массы, до лечения их уровень составлял 0.31 - 0,36 у.е. против 0,25 - 0,28 у здоровых (р<0,05), указывая тем самым на наличие эндогенной интоксикации. Через 7 суток только в контрольной группе содержание МСМ оказалось повышенным, как и уровень МДА - малонового диальдегида: 2,14±0,09 против 1,74±0,02 ммоль/л у здоровых поросят (р<0,05). При этом количество циркулирующих иммунных комплексов через 7 суток было выше нормы в обеих группах, а через 15 суток - лишь в контрольной (30,5±2,7 у.е.), превышая таковой у здоровых животных на 30,3 % (р<0,01).

Таким образом, судя по представленным выше данным, у больных ДС поросят на почве геморрагического или дифтеретически-некротического воспаления толстого отдела кишечника развивается эндогенная интоксикация, вызванная как ЛПС - липополисахаридом, являющегося облигатным компонентом клеточной стенки грамотрицательных энтеробактерий, включая Вг. ЬуоёуБепгепае, а также повышенным количеством токсических продуктов пероксидной денатурации липидов и частичного протеолиза белковых молекул (М.Ю.Яковлев, 1993; Н.В.Чижиков и др., 2001; А.И.Иванов, 2005). Комплексная химиотерапия поросят, больных ДС, позволила гораздо раньше (через 7 суток) восстановить антиоксидантно-прооксидантное равновесие и устранить негативное влияние эндогенной интоксикации на организм подопытных животных.

3.2. Изменения фагоцитарной реакции ПЯН при комплексной химиотерапии ДС.

Многочисленными работами отечественных и зарубежных исследователей показано, что макрофаги, полиморфноядерные нейтрофилы и дендритные клетки являются своеобразными «профессиональными» фагоцитами, обеспечивающими один из основных эффекторных механизмов

неспецифической резистентности (А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин, 1984; И.С. Фрейдлин, 1984,2001; Р.М. Хаитов, 2006).

В конце прошлого столетия их рецепторный арсенал пополнился рядом новых гуморальных, мембранных и внутриклеточных рецепторов, способных распознавать структурные микробные компоненты (паттерны) и их химические соединения - паттерн-распознающие рецепторы (РШ1). Структурно-функциональные нарушения в этих «образраспознагащих» рецепторах клеток врождённого иммунитета (доиммунных механизмов резистентности к патогенам) чреваты такими опасными последствиями как возникновение и развитие инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний (Г.А. Игнатьева, 2003; А.К. Лебедев, И.Д. Понякина, 2008; И-МесШЮу е.а., 2000, 2001). Принимая во внимание вышеизложенное относительно роли и значения фагоцитирующих клеток в механизмах неспецифической резистентности (врожденного иммунитета), нами проведено изучение показателей фагоцитоза ПЯН у подопытных поросят (табл. 2).

Таблица 2

Динамика изменений показателей фагоцитоза ПЯН до и после комплексной химиотерапии поросят, больных ДС (М±т, п=7)

После лечения, сут.

Показатели

Клин.

; здоровые

Лейкоциты, ; 1 /л

До лечения; 7 ¡15

j О КОК

!17,б±1,5 ;i3,5±l,2 jl4,8±l,6 jll,9±l,l*a 12,2±1,4

ФАН, % 64,б±3,5

ФИ ! 7,1 ±0,5

ФЧ .5,3=0,2 ФЕКхЮ'/л i 62,5±2,8

|36,4±1,8 |52,7±2,1 |48,б±1,7

¡5,7±0,5 " 6,0=0,6 ¡6,2±0,3

!2,1±0,4 3,1±0,3 |3,0±0,6

:36,6±1,3* ;41,8±2,1 ;44,4±1,8*

Примечание: ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов; ФИ и ФЧ - фагоцитарный индекс и число; ФЕК' - фагоцитарная «мкость крови; * - р<0,05, ** - р<0,01 - уровень достоверности различий по сравнению е| ■ клинически здоровыми животными; - р<0,05 - уровень достоверности различий между контрольной и: опытной группами.

> 57,8±1,4 :51,5±1,б

! 6,8±0,4*а 5,б±0,3

:3,9±0,4 ;3,2±0,1

;46,4±2,5* 39,0±4,б**

Из материалов табл. 2 видно, что у больных ДС поросят почти в 1,5 раза

выросло количество лейкоцитов. Однако их функциональная способность, судя по уменьшению фагоцитарной активности нейтрофилов на 28,2 %, ФИ и ФЧ соответственно на 19,7% и в 2,5 раза, существенно ослабевала. Подтверждением этому служило и снижение фагоцитарной ёмкости крови на 41 % (р<0,01) по сравнению со здоровыми животными. Через 7 суток после начала лечения в опытной и контрольной группах изучаемые показатели почти достигли нормативных величин за исключением ФЕК, которая даже через 15 суток оставалась пониженной. В тоже время, как видно из табличных данных, в опытной группе комплексная химиотерапия способствовала заметному возрастанию ФАН, ФИ по сравнению с контролем, указывая тем самым на более высокую интенсивность фагоцитоза ПЯН (р<0,05).

Ещё более ярким и убедительным подтверждением материалам табл. 2 послужили результаты параллельных исследований НСТ-теста у подопытных поросят (табл. 3). Так, изучение проявления кислородзависимой бактерицидности нейтрофилов у больных ДС поросят показало, что все показатели этой цитохимической реакции, за исключением СВ НСТ-теста, обнаружили тенденцию к достоверному снижению (табл. 3).

С одной стороны это явилось указанием на функциональное раздражение нейтрофилов за счёт двукратного возрастания процента позитивно реагирующих ПЯН в СВ НСТ-теста, а с другой - уменьшения такового а АВ НСТ-теста, указывающего, наоборот, на снижение потенциальных возможностей этих клеток к фагоцитозу, т.к. в ранее выполненных исследованиях (Ч.Д. Асадов и др., 1983) показана прямая коррелятивная зависимость между поглотительной и переваривающей способностью нейтрофилов в реакциях фагоцитоза и их активностью в АВ НСТ-теста. Через 7 суток функционально-метаболическая активность ПЯН в НСТ-тесте, как и в фагоцитарных процессах, существенно возрастала по сравнению с началом лечения, но межгрупповые различия оказались статистически недостоверными. Лишь через 15 суток, как видно из материалов табл. 3, проявился более выраженный стимулирующий эффект комплексной химиотерапии больных ДС

поросят в опытной группе, что особенно отразилось на показателях AB НСТ-теста (р<0,05).

Таблица 3

Динамика показателей НСТ-теста до и после лечения поросят, больных ДС (Mim, п=7)

' ! После лечения, сут.

Показатели j д0 лечения I 7 I 15

: здоровые ; ................

О

■ 7,9±0,4 ;16,7±0,8** : 12,4±0,5* il3,l±0,9* 9,8±0,5* ; 10,2±0,6*

66,8±2,3 ;51,2±1,4* 57,5±2,0 ;54,9±1,8 ¡68,7±1,5*а 62,1±1,3

8,5±0,3 ;ЗД±0Д** 4,6+0,2 4,2=0,2 7,1±0,3*а 5,9±0,2

0,88±0,02 0,67±0,03** 0,78±0,02 , 0,76±0,02 :0,8б±0,01 0,83±0,02

;0,27±0,02 0,42±0,03** 0,36±0,02 ;0,40±0,01 Д23±0,04**° 0,35±0,01

КОК

НСТ-тест СВ,%

НСТ-тест АВ, %

ПРН

КМАН

сцпсв

НСТ-теста

: 1,92±0,05 ;1,38±0,07** ¡1,5б±0,03* : 1,53±0,04* ' 1,79*0,05*" 1,65±0,03 ; НСТ-теста ; : ; :

Примечаиие: СВ и АВ - спонтанный и активированный варианты НСТ-теста; СЦП СВ и СЦП АВ средний цитохимический показатель ПЯН в СВ и АВ НСТ-теста; ПРН - показатель резерва кейтрофклов; КМАН -коэффициент метаболической активности нейтрофилов; * - р<0,05, ** - р<0,01 - уровень достоверности. ] различий по сравнению с клинически здоровыми животными; ** - р<0,05 - уровень достоверности различий между контрольной и опытной группами.

Подобная тенденция обнаружилась в других цитохимических реакциях, отражающих функционально-метаболические процессы в ПЯН у подопытных поросят (табл. 4). Из материалов этой таблицы видно, что ферментативная активность миелопероксидазы (МПО) у больных ДС поросят достоверно снижалась по отношению к таковой у клинически здоровых животных на 14,5 %, а щелочной фосфатазы (ЩФ), наоборот, повышалась на 19,9 %.

Содержание гликогена и липидов в ПЯН у больных ДС поросят характеризовалось достоверным снижением первого и, напротив, возрастанием второго, как важного компонента внутриклеточных мембран, синтез которых возрастает во время фагоцитоза (Е.М. Крепе, 1981). С другой стороны, как указывает И.М. Раскин (1977), н-' исключалось накопление липидного материала в ПЯН на фоне низкого уровня оксигемоглобина при тканевой

гипоксии у больных ДС поросят. Запасы гликогена в ПЯН (4,23 мкг на 106 клеток) необходимы им для выполнения фагоцитарных функций при максимуме расхода полисахарида во время «респираторного взрыва» (С.М. Гордиенко, 1983; В.М. Земсков, 1984; А.Н. Маянский, 1989; S.J. Klebanoff, 1980).

Таблица 4

Цитохимический статус нейтрофилов у подопытных поросят (М±т, п=7)

, ! После лечения, сут.

Показатели'____ ' „ ; До лечения ! 7 15

здоровые i ...........................

I ОКО к

МПО.СЦП ;2,63±0,05 :2,25±0,05** ;2,39±0,03** ;2,33±0,03** 2,52±0,04 ;2,47±0,06

ЩФ.СЦП : 1,57±0,03 1,96±0,02* |1,72±0,05

1,83±0,04 \ 1,68±0,06** 1,74±0,05 1,79±0,04 ! 1,95±0,05* 1,92±0,03

Гл., СЦП \2,06±0,07 ; 1,73±0,04* ;1,88±0,02**

Лп.,СЦП ;1,48±0,06 ! 1,66±0,05* 1,52±0,03** ;1,б1±0,04 ¡1,39±0,05* 1,53±0,04

Примечание: МПО - миелопероксидаза; ЩФ - щелочная фосфатаза; Гл. - гликоген; Лп. - лигшды; МПО: СЦП, СЦП ЩФ, СЦП Гл., Лп., СЦП - средний цитохимический показатель миелопероксидазы, щелочной: фосфатазы, гликогена и липидов в ПЯН; * • р<0,05, ** - р<0,01 - уровень достоверности различий по сравнению с клинически здоровыми животными.

Ослабление ферментативной активности МПО косвенно подтвердило данные по фагоцитозу и НСТ-тесту, т.к. по всей вероятности, у больных ДС поросят снижалась наработка бактерицидных компонентов в системе МПО+НгОг+галогены. Неодинаковое повышение реакции на МПО через 7 суток в опыте и контроле, значительно возрастание уровня гликогена в ПЯН поросят опытной группы также указывало на активизацию кислородзависимого метаболизма в этих клетках крови за счёт преобладания антиоксидантных эффектов комплекса витаминов А, D, Е, С и селенопирана. На этом фоне вполне закономерным оказалось снижение ферментативной активности ЩФ в ПЯН, связанное скорее всего с ослаблением стрессорной наработки АКТГ в системе гипоталамус - гипофиз - кора надпочечников, медиаторов воспаления в толстом отделе кишечника больных ДС поросят. Иными словами, подтвердились ранее полученные сведения об ингибирующем эффекте избытка АКТГ на ферментативную активность МПО (А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин, 1984; A.A. Барсуков и др., 2004). С другой стороны, избыток активных форм

16

кислорода, гидроперекисей липидов в воспалённых органах и тканях при наличии тканевой гипоксии обуславливают нарастание количества лейкоцитов в циркуляции, их праймирование и активацию (Р.В. Tremblay е.а., 2000). По мнению многих исследователей, в основе этих важнейших эффектов в функционировании ПЯН лежит накопление в цитоплазме клеток ионов Са2+, повышение активности Са2+ -зависимых фосфатаз, гидролиз фосфолипидов и образование ряда биологически активных веществ (диацилглицерола, полиненасыщенных жирных кислот с последующим образованием лейкотриенов, простагландинов, тромбоксанов и т.п.). В свою очередь, они в совокупности с ионами кальция активизируют протеинкиназу С или тирозинкиназу, которые в дальнейшем фосфорилируют цитозольные белки, транслокацию некоторых из них в цитоплазматическую мембрану для формирования активного комплекса НАДФ'Н-оксидазы. Стимуляция последнего чрезвычайно разнообразными веществами экзо- и эндогенного происхождение является одним из основных «пусковых» моментов так называемого «дыхательного» или «респираторного взрыва» в фагоцитирующих клетках (Н.И.Бахов и др., 1988; 2004; А.Н.Маянский, 1989; Г.И.Клебанов, Ю.В. Владимиров, 1999; А. А. Барсуков и др., 2004; Т.Г. Сазонтова, Ю.В. Архипенко, 2007).

Резюмируя изложенное можно заключить, что подобранная схема комплексной химиотерапии больных ДС поросят в опытной группе уже через 7 суток после начала лечения не только ускорила их клиническое выздоровление, но и оказала благотворное влияние на функционально-метаболическую активность ПЯН, играющих важную роль в механизмах врожденного иммунитета (Р.Х. Хаиточ, 2006).

3.3. Гуморальные факторы неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС.

Лизоцим, комплемент, бета-лизины, пропердин, интерферон и т.п. генетически детерминированы и передаются по наследству, Они представлены

в плазме крови и других жидкоеых тела многочисленными пептидами и белками, нередко функционирующими в виде различных систем: бактерицидной, пропердиновой, кининовой, свёртывающей и др. Обладая антимикробным потенциалом, они способны активировать друг друга, а также вовлекать в защитные реакции клетки, способные к фагоцитозу (дендритные, ПЯН, моноциты/макрофаги). В данном разделе работы освещается роль и значение БАСК - бактерицидной активности сыворотки крови, уровня лизоцима в ней, а также комплементарной и бета-лизинной активности сыворотки крови, отражающие в совокупности функциональное состояние гуморального звена неспецифической защиты (врождённого иммунитета). Ниже (табл. 5) приводятся результаты исследований указанных выше показателей у больных ДС поросят до и после комплексной химиотерапии по сравнению с монотерапией препаратом «Метронид-50».

Таблица 5

Динамика гуморальных показателей неспецифической резистентности у подопытных поросят (М±т, п=7)

1 После лечения, сут.

Показатели; ^лин' \ д0 лечении; 7 15

: здоровые ;м

О

БАСК, % 72,3±3,1 47,9±2,5** !54,5±3,;* БЛА, % 13,2±0,8 ;8,3±0,5** ¡10,2±1,0* КА,% ■ 15,4±0,7 ;9,4±0,б* ;11,5±0,3 10,6±0,4 :14,3±0,5*а 12,1±0,2

Лизоцим, ;75i05 ¡9 8±о,4* ! 6,4±0,3 16,2±0,2 6,?±0,4 5,6±0,7

МКГ/МЛ : . :

КОК

51,7±4,2** :69,8±2,5*а ;62,3±2,2 9,8±0,0* : 12,8±0,7*а • 10,4±0,5

Примечание: БАСК, ЕЛА, КА - бактерицидная, бета-лизинная, комплементарная активность сыворотки: кроаи; * - р<0,05, ** - р<0,01 - уровень достоверности различий по сравнению с клинически здоровыми животными; ** - р<0,05 - уровень достоверности различий между опытом и контролем.

Как видно из материалов табл. 5, у больных ДС поросят отмечалось повышение уровня лизоцима в начале курса лечения с 7,5±0,5 до 9,8±0,4 мкг/мл (р<0,05), что по всей вероятности, было связано с его повышенной продукцией в клетках моноцитарно-макрофагального ряда как в области толстого отдела желудочно-кишечного тракта, так и в других органах и тканях, по-видимому, поддерживая циркулирующий и достаточно высокий пул этих клеток в крови,

18

что подтверждается их достаточно высоким процентом в лейкограмме (Я. 1опаз$оп, 2004, 2007). С другой стороны, как видно из табличных данных, показатели БАСК, БЛА, КА в начале лечения свидетельствовали об ослаблении, а, скорее всего, об их повышенном расходе в процессе глубоких морфо-функциональных изменений в стенке толстого отдела кишечника на фоне негативных сдвигов в его микрозкологическом равновесии. Из данных табл. 5 вытекает, что уровень лизоцима нивелировался в опытной группе достигая через 15 суток нормативных значений у клинически здоровых поросят-аналогов по возрасту и живой массе. В контроле данные показатели оказались в это время достоверно ниже, чем в опыте (р<0,05).

3.4. Суммарный показатель неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС, её лечебная и экономическая эффективность.

Значение рассчитанного по 21 лабораторному тесту суммарного показателя неспецифической резистентности (СПНР), в опытной и контрольной группах через 7 и 15 суток после начала опытов, своеобразно отразилась на его параметрах. Так, если у спонтанно заболевших ДС поросят СПНР составил 71,0±2,б %, то через 7 суток в опыте и контроле он был равен соответственно 86,0±1,8 и 80,0±1,6% (р<0,01). Через 15 суток СПНР в опытной и контрольной группах возрос до 90,0±1,4 и 86,0±1,2% (р<0,05), указывая тем самым на позитивное влияние комплексной химиотерапии больных ДС животных. В частности, в контрольной группе клинически выздоровело в течение первой недели 25 животных из 28 (2 пало, 1 вынужденно убито), т.е. лечебная эффективность составила 89,3 %. Кроме того, на второй неделе экспериментов (И - 12 день) реинфекции в контроле подверглось 3 животных (наличие в пробах фекалий из прямой кишки до 20 - 30 спирохет Вг. ЬуоёуБетепае). После соответствующего лечения (Метронид-50, 2 мл/10 кг массы тела) через 2 дня клинические признаки ДС практически исчезли, а возбудитель ДС через 3 суток при бактериоскопии проб фекалий вплоть до окончания срока наблюдений не

выявлялся. Из 31 больного ДС животного опытной группы один поросёнок пал, второй - вынужденно убит, т.е. лечебная эффективность в данной группе составила 93,5 %. Дача с комбикормом тилозина тартрата в микрогранулированном виде в комбикорме вплоть до окончания срока наблюдений (30 дней с начала опытов) позволила не только исключить реинфекдию поросят в этот период времени за счёт существенного повышения резистентности, но и добиться более высокой продуктивности, отражающей интенсивность их роста и развития. В частности при практически одинаковой массе тела в начале экспериментов (16,2 - 16,0 - 15,8 кг) при их завершении (через 30 дней) валовой прирост живой массы в опытной группе составил 7,74±0,21, в контрольной группе 7,05±0,18, а у клинически здоровых поросят-аналогов - 12,54±0,27 кг (р<0,02 - 0,001). Расчет экономической эффективности разработанной схемы комплексной химиотерапии в опытной группе по сравнению с лечением больных ДС поросят одним Метронидом-50 (контроль) показал, что, несмотря на использование большого количества лечебных препаратов, она оказалась практически одинаковой в том и другом случае (13,6 и 13,8 рубля на 1 рубль затрат). Однако более высокая лечебная эффективность, валовой прирост живой массы, отсутствие реинфекции, падежа в опытной группе на фоне повышенного (90,0±1,4 против 86,0±1,2 %; р<0,05) СПНР -суммарного показателя неспецифической резистентности, явились объективным подтверждением преимущества комплексной химиотерапии ДС поросят в условиях выполненного клинико-экспериментального исследования.

Таким образом, как следует из представленных фактических материалов в данном разделе, разработанная и апробированная комплексная схема химиотерапии поросят, больных спонтанной ДС, оказалась более эффективной как с лечебной, так и с экономической точки зрения.

ВЫВОДЫ

1. У спонтанно заболевших ДС поросят на фоне относительного эритроцитоза снижаются средний зритроцитарный объем и концентрация

гемоглобина в клетке (СЭО, СКГК), свидетельствующие о наличии микроцитарной гипохромной железодефицитной анемии на почве катарально-геморрагическош воспаления толстого отдела кишечника и функционально-метаболических расстройств в системе органов кроветворения.

2. Повышенные лейкоцитарный индекс интоксикации Каль-Калифа, содержание молекул средней массы, малонового диальдегида и циркулирующих иммунных комплексов явились своеобразным отражением наличия эндогенной интоксикации в органах и тканях поросят, больных ДС. Комплексная химиотерапия с использованием витаминного препарата «Аквитин» и селенопирана способствовала более ранней (через 7 суток) нормализации антиоксидантно-прооксидантного равновесия и антиоксидантного потенциала у животных опытной группы.

3. Установлено ослабление фагоцитоза в полиморфноядерных нейтрофилах у больных ДС поросят: снижение ФАН и ФЕК на 27,8 и 42,9 %, соответственно ФИ и ФЧ на 19,7 и 60,4 %. В опытной и контрольной группах эти показатели достигали нормативных величин неодинаково, т.е. на 7 - 15 сутки в опыте они были достоверно выше, чем в контроле (р<0,05 -0,01).

4. Кислородзависимая цитотоксичность ПЯН у больных ДС поросят в спонтанном варианте НСТ-теста возрастала в 2,1 раза, указывая на функциональное раздражение этих клеток белой крови. В активированном варианте, наоборот, - на ослабление их бактерицидного потенциала, обусловленного достоверным снижением на 15,6 % позитивно реагирующих клеток с менее выраженной интенсивностью отложений диформазана в их цитоплазме, о чем свидетельствовали низкие показатели СЦП (соответственно 1,56±0,03 и 1,53±0,04). Комплексная химиотерапия способствовала более раннему (на 7 сутки), по сравнению с контролем, достижению нормативных значений всех изученных показателей НСТ-теста.

5. Как и показатели НСТ-теста у больных ДС поросят в опытной и контрольной группах существенным изменениям подверглись и гругие показатели цитохимического статуса ПЯН:

- снизилась активность фермента миелопероксидазы и содержание гликогена (соответственно на 15,5 и 16,1 %);

- возросли на 24,5 % ферментативная активность щелочной фосфатазы, а уровень липидов в цитоплазме ПЯН - на 12,2 %;

- в опытной группе при комплексной химиотерапии больных животных уже через 7 суток данные показатели вернулись в границы стандартного интервала, а в контроле - лишь через 15 суток.

6. Гуморальные факторы неспецифической резистентности (БАСК, БЛА, КА) у больных ДС поросят оказались ниже по сравнению с клинически здоровыми животными-аналогами (р<0,05 - 0,01). Через 7 суток в опыте и контроле существенные межгруппов_ле различия не обнаруживались (р>0,05), но через 15 суток в опытной группе они оказались достоверно выше, чем в контрольной (р<0,05 - 0,01).

7. Снижение СПНР у больных ДС поросят до 71,0±2,6% свидетельствовало о выраженном угнетении механизмов неспецифической защиты (врожденного иммунитета). Комплексное лечение способствовало возрастанию СПНР до 86,0±1,8 % против 80,0±1,6 % в контроле через 7 суток (р<0,02). Через 15 суток эта тенденция сохранилась: 90,0±1,4% и 86,0±1,2°/о (р<0,05), т.е. у поросят опытной группы неспецифический защитный потенциал оказался гораздо выше, что в свою очередь повысило лечебную эффективность (93,5 % против 89,3 %) и в последующем - продуктивность по валовому приросту живой массы при одинаковой окупаемости лечебных мероприятий на один рубль затрат.

Практические рекомендации

1. Отдельные положения диссертации рекомендуются для практической

реализации при лечении и профилактике ДС. Их можно использовать при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий патофизиологии, патоморфологии и другим клиническим дисциплинам ветеринарной медицины. Также они могут включаться в соответствующие разделы при составлении и написании монографий, учебников и учебных

пособий для студентов вузов, обучающихся по специальности 111201 «Ветеринария».

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Пахмутов М.И. Изменение иммунного статуса при комбинированной

химиотерапии дизентерии свиней. / М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Ветеринария, зоотехния, комбикорма. Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», 28 - 29 августа 2006 г. - СПб, 2006. - С. 196-198.

2. Пахмутов И.А. Показатели неспецифической резистентности при комбинированной химиотерапии дизентерии свиней. / И. А. Пахмутов, М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин // Материалы XV Московского Международного ветеринарного конгресса ^ по болезням мелких домашних животных, 28 -29 августа 2006 г. Москва, Россия. - М., 2006. - С. 164-165.

3. Скворцов В.Н. Влияние комплексной химиотерапии дизентерии свиней на показатели иммунобиологической реактивности животных. / В.Н. Скворцов, М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Материалы Международной конференции «Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках нацпроекга «Развитие агропромышленного комплекса», 28 - 30 ноября 2007 г. - Казань, 2007. - С. 200-205.

4. Пахмутов М.И. Показатели иммунобиологической реактивности свиней, больных дизентерией. / М.И. Пахмутов, С.Н. Скворцов,

B.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Ветеринария и кормление, 2008. - № 2. -

C. 14-16.

5. Пахмутов М.И. Комбинированное лечение дизентерии свиней и её влияние на иммунный статус животных. / М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов, В.Н. Скворцов // Труды Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и малоизученными инфекционными болезнями животных», 13-14 ноября 2008 г. - Покров, 2008. - Т 2, - С. 245-250.

комплементарная,

Список сокращений

АФК - Активные формы кислорода

БАСК.БЛА, КА - бактерицидная, бета-лизинная, активность сыворотки крови;

НСТ-тест - тест восстановления красителя нитросинего тетразолия;

СВ и АВ НСТ-тест - спонтанный и активированный варианты НСТ-теста;

ПРН.КМАН - показатель резерва и метаболической активации полиморфноядерных нейтрофилов (ГОШ) в НСТ-тесте;

СЦП - средний цитохимический показатель;

ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов;

ФИ, ФЧ, ФЕК - фагоцитарный индекс, число и ёмкость крови;

СПНР - суммарный показатель неспецифической

резистентности;

НЬ, № - гемоглобин, гематокрит.

Пахмутов Михаил Игоревич

СОСТОЯНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ КОМБИНИРОВАННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ДИЗЕНТЕРИИ СВИНЕЙ (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 04.05.09 г. Формат 60x90 1/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная. Объем: печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 05/0509

Отпечатано издателем Ю.А. Николаевым 603073, Нижний Новгород, Таганская, 6-29 тел.: 8 (831) 250-47-17, e-mail: nvapub@sandv.ru

В большинстве регионов России, как и вне её пределов, свиноводство остается одной из основных отраслей животноводства. При этом в условиях различных форм собственности и создавшейся экономической ситуации возникла острая необходимость срочного возрождения и наращивания темпов производства свинины, предусмотренных «Программой развития АПК на 2008 - 2012 гг.» (А.Т. Мысик, 2006; Г.А. Шичкин, 2008; В.И. Фисинин и др., 2008; В. Шарнин, Н. Михайлов, 2009).

Одним из важных факторов, отрицательно влияющих на этот процесс, являются заболевания свиней различной этиологии. Среди них основное место занимают болезни органов пищеварения, в частности инфекционные гастроэнтероколиты, в т.ч. и дизентерия свиней (ДС), наносящая весьма существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам (А.В. Голиков и др., 1978- 1991; В.Н. Скворцов, 2002, 2006; Х.З. Гаффаров, Е.А.Романов, 2004; А.И.Иванов, 1994, 2004, 2005; А.В.Иванов, Р.Х.Юсупов, 2006; А.Г.Шахов и др., 2007; Н.А. Солдатенко, 1994, 1997, 2008; А.Ф. Швецов, 2007; E.N. Wood, R.J. Lysons, 1988 и др.).

Основным возбудителем ДС считается анаэробная грамотрицательная спирохета Brachyspira (Treponema, Serpulina) hyodysenteriae, синергично взаимодействующая с условно-патогенной микрофлорой кишечника на фоне расстройств его микроэкологического равновесия, обусловленного активизацией анаэробов при снижении численности бифидо- и лактобактерий (А.В.Голиков, В.В. Бондик, 1980; А.И. Завирюха, 1983; М.Д. Дриаева, 1994; А.И.Иванов, 1997; T.J. Terpestra, I. Akkermans, 1968; D.Y. Taylor, 1970, 1997; D.L. Harries e.a., 1972, 1974; I. Akkermans, W. Pomper, 1973; T.Alexander e.a., 1976; J.M. Kinyon e.a., 1976, 1977; R J. Lysons, 1979, 1991; M. Karlsson e.a., 1999, 2000).

Однако до настоящего времени отсутствуют специфические средства борьбы с ДС (вакцины, сыворотки), а нередко продолжительное, порой бессистемное применение многочисленных лекарственных средств обуславливает ослабление их лечебно-профилактической эффективности, т.к. у патогенных бактерий, судя по последним данным, сравнительно быстро вырабатываются механизмы повышения резистентности в составе биопленок к химиотерапевтическим препаратам и факторам иммунной защиты (Т.С. Ильина и др., 2006; А.С. Велик и др., 2008). Эти и другие обстоятельства (А.В.Голиков и др., 1991; В.Н. Скворцов, 2002; Н.А. Лагуткин, 2006; А.Н. Гречихин, А.В. Семенихин, 2006; А.Г. Шахов и др., 2007; П.С. Лобова, В.Н. Скворцов, 2008) обусловливают при лечении и профилактике ДС не только изыскание новых химиотерапевтических средств, но и использование относительно «старых» лекарственных веществ в комплексе с различными препаратами, активизирующими (модулирующими) функции нервной, эндокринной, иммунной и других систем организма животных, обеспечивающих, в конечном итоге, нормализацию их метаболизма и оптимальный уровень продуктивности (В.Т. Самохин, 2003; Ю.Н. Федоров, 2005; О.Т. Муллакаев и др., 2006; Б.Д. Кальницкий, 2008).

Перечисленное выше предопределило цель наших исследований; изучить изменения клеточных и гуморальных показателей неспецифической резистентности в норме и при комплексной химиотерапии ДС у поросят послеотъемного периода.

Для ее достижения решались следующие задачи экспериментально-клинического характера:

- определить в динамике (0, 7, 15 суток) нормативные клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у клинически здоровых поросят (группа доращивания, возраст 65 — 70 дней);

- изучить ' в эти же сроки исследований аналогичные показатели неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов на фоне монотерапии препаратом Метронид-50 (ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов);

- установить динамику (0, 7, 15 суток) изменения тех же показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов при комплексной химиотерапии;

- дать сравнительную оценку лечебной и экономической эффективности моно- и комплексной химиотерапии ДС у подопытных животных.

Научная новизна. Подтверждены и научно обоснованы ведущая роль и значение нарушений механизмов неспецифической резистентности в патогенезе ДС на фоне расстройств микроэкологического равновесия в толстом отделе кишечника свиней, обусловленного активизацией анаэробных микроорганизмов при снижении численности лакто- и бифидобактерий.

Установлено, что комплексная химиотерапия ДС поросят послеотъёмного периода оказалось эффективней по сравнению с монотерапией, т.к. в большей степени повышала уровень клеточных и гуморальных факторов неспецифической резистентности (врожденного иммунитета), обеспечивая тем самым более раннее восстановление и нормализацию так называемой «оральной толерантности» у больных ДС поросят (К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, 2008).

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные экспериментально-клинические данные убедительно продемонстрировали необходимость комплексной химиотерапии ДС, способствующей более раннему клиническому выздоровлению больных животных по сравнению с использованием только одних средств так называемой «специфической монотерапии». Расширение и углубление наших знаний о состоянии механизмов неспецифической резистентности у поросят отъемного и послеотьемного периодов в норме и при ДС позволяет разрабатывать новые, научно-обоснованные и эффективные схемы-модели профилактики и лечения этой инфекции в свиноводческих хозяйствах различных форм собственности в условиях современной России.

Материалы собственных исследований не только вносят определенный вклад в изучение патогенеза ДС, но используется в учебном процессе, в работе научно-исследовательских учреждений ветеринарного профиля, при написании и составлении учебников, учебных пособий и руководств по инфекционной патологии свиней.

Положения, выносимые на защиту:

- клеточные гуморальные факторы неспецифической резистентности у клинически здоровых и больных ДС поросят-аналогов послеотъемного периода;

- изменения показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят через 7 и 15 суток после начала моно- и комплексной химиотерапии;

- лечебная и экономическая эффективность испытанных схем лечения ДС подопытных поросят-аналогов.

1. Обзор литературы

Выводы

1. У спонтанно заболевших ДС поросят на фоне относительного эритроцитоза снижаются средний эритроцитарный объем и концентрация гемоглобина в клетке (СЭО, СКГК), свидетельствующие о наличии микроцитарной гипохромной железодефицитной анемии на почве катарально-геморрагического воспаления толстого отдела кишечника и функционально-метаболических расстройств в системе органов кроветворения.

2. Повышенные лейкоцитарный индекс интоксикации Каль-Калифа, содержание молекул средней массы, малонового диальдегида и циркулирующих иммунных комплексов явились своеобразным отражением наличия эндогенной интоксикации в органах и тканях поросят, больных ДС. Комплексная химиотерапия с использованием витаминного препарата «Аквитин» и селенопирана способствовала более ранней (через 7 суток) нормализации антиоксидантно-прооксидантного равновесия и антиоксидантного потенциала у животных опытной группы.

3. Установлено ослабление фагоцитоза в полиморфноядерных нейтрофилах у больных ДС поросят: снижение ФАН и ФЕК на 27,8 и 42,9 %, соответственно ФИ и ФЧ на 19,7 и 60,4 %. В опытной и контрольной группах эти показатели достигали нормативных величин неодинаково, т.е. на 7 — 15 сутки в опыте они были достоверно выше, чем в контроле (р<0,05 — 0,01).

4. Кислородзависимая цитотоксичность ПЯН у больных ДС поросят в спонтанном варианте НСТ-теста возрастала в 2,1 раза, указывая на функциональное раздражение этих клеток белой крови. В активированном варианте, наоборот, — на ослабление их бактерицидного потенциала, обусловленного достоверным снижением на 15,6 % позитивно реагирующих клеток с менее выраженной интенсивностью отложений диформазана в их цитоплазме, о чем свидетельствовали низкие показатели СЦП (соответственно 1,56±0,03 и 1,53±0,04). Комплексная химиотерапия способствовала более раннему (на 7 сутки), по сравнению с контролем, достижению нормативных значений всех изученных показателей НСТ-теста.

5. Как и показатели НСТ-теста у больных ДС поросят в опытной и контрольной группах существенным изменениям подверглись и гругие показатели цитохимического статуса ПЯН:

- снизилась активность фермента миелопероксидазы и содержание гликогена (соответственно на 15,5 и 16,1 %);

- возросли на 24,5 % ферментативная активность щелочной фосфатазы, а уровень липидов в цитоплазме ПЯН - на 12,2 %;

- в опытной группе при комплексной химиотерапии больных животных уже через 7 суток данные показатели вернулись в границы стандартного интервала, а в контроле — лишь через 15 суток.

6. Гуморальные факторы неспецифической резистентности (БАСК, БЛА, КА) у больных ДС поросят оказались ниже по сравнению с клинически здоровыми животными-аналогами (р<0,05 - 0,01). Через 7 суток в опыте и контроле существенные межгрупповые различия не обнаруживались (р>0,05), но через 15 суток в опытной группе они оказались достоверно выше, чем в контрольной (р<0,05 - 0,01).

7. Снижение СПНР у больных ДС поросят до 71,0±2,6 % свидетельствовало о выраженном угнетении механизмов неспецифической защиты (врожденного иммунитета). Комплексное лечение способствовало возрастанию СПНР до 86,0±1,8 % против 80,0±1,6 % в контроле через 7 суток (р<0,02). Через 15 суток эта тенденция сохранилась: 90,0±1,4 % и 86,0±1,2 % (р<0,05), т.е. у поросят опытной группы неспецифический защитный потенциал оказался гораздо выше, что в свою очередь повысило лечебную эффективность (93,5 % против 89,3 %) и в последующем - продуктивность по валовому приросту живой массы при одинаковой окупаемости лечебных мероприятий на один рубль затрат.

Практические рекомендации

1. Отдельные положения диссертации рекомендуются для практической реализации при лечении и профилактике ДС. Их можно использовать при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий патофизиологии, патоморфологии и другим клиническим дисциплинам ветеринарной медицины. Также они могут включаться в соответствующие разделы при составлении и написании монографий, учебников и учебных пособий для студентов вузов, обучающихся по специальности 111201 «Ветеринария».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пахмутов М.И. Изменение иммунного статуса при комбинированной химиотерапии дизентерии свиней. / М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Ветеринария, зоотехния, комбикорма. Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», 28 — 29 августа 2006 г. — СПб, 2006.-С. 196-198.

2. Пахмутов И.А. Показатели неспецифической резистентности при комбинированной химиотерапии дизентерии свиней. / И.А. Пахмутов, М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин // Материалы XV Московского Международного ветеринарного конгресса по болезням мелких домашних животных, 28 - 29 августа 2006 г. Москва, Россия. - М., 2006. - С. 164-165.

3. Скворцов В.Н. Влияние комплексной химиотерапии дизентерии свиней на показатели иммунобиологической реактивности животных. /

B.Н. Скворцов, М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Материалы Международной конференции «Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках нацпроекта "Развитие агропромышленного комплекса"», 28 - 30 ноября 2007 г. - Казань, 2007. - С. 200-205.

4. Пахмутов М.И. Показатели иммунобиологической реактивности свиней, больных дизентерией. / М.И. Пахмутов,

C.Н. Скворцов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов // Веткорм, 2008. — № 2. -С. 14-16.

5. Пахмутов М.И. Комбинированное лечение дизентерии свиней и её влияние на иммунный статус животных. / М.И. Пахмутов, В.Б. Сорокин, И.А. Пахмутов, В.Н. Скворцов // Труды Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и малоизученными инфекционными болезнями животных», 13 - 14 ноября 2008 г. - Покров, 2008. - Т 2. - С. 245-250.