Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль рациональных схем специфической профилактики и поствакциональной диагностики в системе противобруцеллезных мероприятий крупного рогатого скота



\ На правах рукописи

КУРЕНСКАЯ НАТАЛЬЯ ИВАНОВНА

РОЛЬ РАЦИОНАЛЬНЫХ СХЕМ СПКЩЙВИЕСКОЙ ПРОЙШКТИКИ И ПОСТВАКЦИНАЛЫЮЙ ДИАГНОСТИКИ В СИСТЕМЕ ПРОТИВОБРУЦКЛЛКЗНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул, 1993

Работа выполнена в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

Хлыстунов Анатолий Георгиевич

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ) г. Омск

Защита диссертации состоится 19 ноября 1998г. в 10 часов на заседании диссертационного совета К 120.01.03 в Алтайском государственном аграрном университете по адресу: 656022, г. Барнаул, ул. Новосибирская, 34 "А".

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВЫ АГАУ.

Димов Сергей Константинович

Официальные оппоненты: -доктор ветеринарных наук

Никифоров Иван Порфирьевич

-кандидат ветеринарных наук Сысоев Виктор Алексеевич

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

С. И. СНИГИРЕВ

- 3 -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1. Актуальность проблемы.

Бруцеллез сельскохозяйственных животных все еще имеет распространение в. нашей стране. По-прежнему сохраняется опасность заражения людей. Поэтому проблема полного искоренения этой инфекции является актуальной.

В комплексе мер по ликвидации бруцеллеза важное место отводится специфической профилактике. В решение этой проблемы внесли вклад многие отечественные исследователи (IL Ф. Здродовский, 1948; Е.С.Орлов, 1950, 1967; П. А. Триленко, 1967, 1976; К. М. Салмаков, 1974, 1975, 1977; И. А.. Косюгов, 1975, 1980, 1985, 1992; К. В. Шумилов, 1984, 1988; А. А. Новицкий, 1989; В. Г. Ощепков, 1990 И др.).

Наиболее иммуногенными и эффективными в протиЕОэпизоотическом отношении оказались живые вакцины из агглкпиногенных штаммов В. abortus 19, 104М, В. melitensis Рев-1 и др. (Ф. П. Локтева, 1967; КВ. Шумилов, 1977, 1984; В. А. Ромахов, 1989; А. А. Лим, 1989 и др.).

В течение длительного времени в нашей стране использовали вакцину из агглютиногенного штамма В. abortus 19, с помощью которой за счет многократного ее использования удалось оздоровить многие неблагополучные пункты (Е. С. Орлов, А. а Касьянов, 1972) даже в регионах с тяжелой эпизоотической обстановкой. Однако ее применение на взрослом поголовье по причине поствакцинальных реакций, препятствующих диагностике и соответственно удалению боль-нач животных из оздоравливаемых стад, с 1970 года было прекращено, что отрицательно отравилось на эпивоотической ситуации в целом по стране, в том числе и в регионе Сибири.

С 1974 года в нашей стране стала использоваться вакцина из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82. С ее помощью были достигнуты определенные успехи в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота {К. М. Салмаков и др. , 1980; И. П. Никифоров и др. , 1981; И. А. Косилов и др., 1986).

Но, как оказалось, важно не только создать, но и поддерживать в течение длительного срока иммунное состояние в стаде с помощью конкретного препарата при определенных условиях его применения (кратность, метод, доза), не осложняющего проведение поствакцинальной диагностики. Такое комплексное сеойстео вакцин и (или) схем их применения И. А. Косилов (1985) назвал технологичностью.

Иными словами, в специфической профилактике важна не только (а то и не столько) вакцина, но и схема ее применения.

Особое значение должно придаваться и поствакцинальной диагностике. Прежде' Есего Еажно, чтобы она была своевременной (обеспечивающей максимальное использование провоцирующих сеойств вакцин) и достаточно простой.

Рядом исследователей (П.А.Триленко 1951, 1956; Е.С.Орлов, 0. И. Морякова 1955; Л. В. Дегтяренко, 1989; Т.Г.Попова, 1990; 1?. Уог-Шп^оп, 1969 и др.) в целях контроля благополучия ферм по бруцеллезу был с положительным результатом применен тест с молоком -КР (кольцевая реакция).

Заслуживает внимания реакция непрямой гемагглютинации (РИГА) с эритроцитарным диагностикумом. Установлены высокая чувствительность и специфичность этой реакции по сравнению с другими серологическими методами ( П. К. Араке лян, С. К-Димов, 1985; А. П. Красиков, 1987; Л. Е Дегтяренко, Г. Е Разницына, 1990, 1991).

Таким образом, на основании вышеизложенного, очевидна необходимость рациональных схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики в целях повышения эффективности системы про-тивобруцеллезных мероприятий у крупного рогатого скота. Однако к началу наших исследований их не было, что и определило цель и задачи исследований.

1.2. Цель и задачи исследований.

Цель исследований - Экспериментально и практически обосновать рациональные схемы специфической профилактики и поствакцинальной диагностики в целях повышения эффективности системы противобру-целлезных мероприятий у крупного рогатого скота.

Задачи исследований:

- Изучить в экспериментах и производственных опытах эффективность различных схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и на основе полученных результатов предложить наиболее рациональные из них для дальнейшей апробации.

- Апробировать рациональные схемы специфической профилактики и поствакцинальной диагностики в производственных условиях.

- 5 -

1.3. Научная новизна

Экспериментально и практически обоснованы рациональные схемы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, обладающие наряду с технологичностью высокой иммуногенностыо и противоэпизоотической эффективностью. При этом подтверждена ведущая роль в ник грундиммунитета, оказавшегося наиболее полноценным при использовании агглютиногенных вакцин, а также перманентного иммунитета, достигаемого реиммуниаациями слабоагглютиногенными вакцинами с оптимальным интервалом один год.

В экспериментах по изучению иммуногенностй различных проти-вобруцеллезных вакцин получены результаты, свидетельствующие о роли типа вакцины, дозы, количества прививок и интервала между ниш.

Установлено, что уровень противоэпизоотической эффективности различных схем применения противобруцеллезных вакцин зависит не только от их иммуногенности, но и в значительной степени от максимального использования провоцирующих сеойств вакцин в схемах поствакцинальной диагностики.

В экспериментах и контролируемых производственных опытах на крупном рогатом скоте установлена возможность использования в ранние сроки после прививок (начиная с 15 дней) КР и РИГА с молоком в целях достижения максимального провоцирующего эффекта вакцины из штамма 82.

На большом фактическом материале доказана роль КР с молоком в повышении противоэпизоотической эффективности поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота при оздоровлении неблагополучных стад.

В экспериментальных и производственных условиях получены результаты, доказывающие возможность использования РНГА с сыворотками крови, как высокочувствительной, специфичной и простой в постановке реакции, для массовой поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота взамен комплекса РА+РСК.

1. 4. Практическая значимость

Внедрение разработанных рациональных схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики в значительной степени повышает лротивозпизоотическую, противоэпидемическую и экономи-

ческую эффективность системы мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота.

1.5. Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены и ■ обсуждены на: Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным" (Новосибирск, 1989); всесоюзных и всероссийских координационных совещаниях по проблеме бруцеллеза и туберкулеза с.-х. животных (Омск, 1987; Кустанай, 1988; Новочеркасск, 1989; Махачкала, 1990; Омск, 1995, 1996); региональных конференциях молодых ученых (Новосибирск, 1986, 1987); региональных научных конференциях ИЭВСиДВ (Новосибирск, 1988, 1990); международной научно-практической конференции "Зооантропо-нозные болезни, меры профилактики и борьбы" (Гродно, 1997) и ученых советах ИЭВСиДВ (1985-1998гг. ).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные е диссертации, обсуждены и одобрены на мелиабораторном заседании научных сотрудников ИЭВСиДВ (1998).

1.6. Публикация результатов исследований.

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

1.7. Объем и структура диссертации

Диссертации изложена на 139 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами. Она состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, выводов, практических предложений и приложения. Список литературы включает 218 источников.

1. 8. Внедрение результатов исследований

Разработаны и широко внедрены в Новосибирской области и других регионах страны рациональные схемы специфической профилактики и поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, регламентированные 5 нормативно-техническими документами, утвержденными на российском .и областном уровне.

1. 9. Основные положения, выносили на заииту

Рациональные схемы специфической профилактики и поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и их роль в повышении эффективности противоэпизоотических мероприятий.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы к методы исследований

Работа выполнялась с 1985 по 1998 год в Институте .экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока и хозяйствах Новосибирской и Кемеровской областей.

Эксперименты по изучению напряженности иммунитета были поставлены на 108 морских свинках и на 91 гол. крупного рогатого скота. Производственные контролируемые опыты и зпизоотологические наблюдения проводили на поголовье более чем 30 тыс. голов крупного рогатого скота в хозяйствах с разнообразной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу.

Иммунизацию, заражение животных в целях проверки иммунитета, отбор материала для бактериологических исследований, посевы на питательные среды, типизацию выделенных культур проводили по общепринятым методикам. Для заражения применяли двухсуточную культуру вирулентного штамма В. abortus 54 в дозе 200 млн. м. к. подкожно. Для иммунизации и ревакцинации использовали живые вакцины из штаммов В. abortus 19, 104М , 82 , 16 /4, убитую из штамма В. abortus 45/20 в различных дозах и с разными интервалами.

В экспериментах и производственных опытах при исследовании сывороток крови в качестве диагностических тестов применяли РБП, РА и РСК с S-антигеном, РИГА, РИД с О-ПС антигеном; при исследовании молока - КР и РИГА до предельных титров по общепринятым методикам.

При постановке серологических реакций использовали цветной антиген для РБП, единый бруцеллезный S-антиген для РА и. РСК, О-ПС антиген для РИД (профессор Чекишев В. М. с соавт.), медицинский эритроцитарный диагностикум для постановки РИГА и цветной антиген для КР.

Методики отдельных экспериментов, научно-производственных опытов и наблюдений изложены в соответствующих разделах диссертации.

При изучении- противоэпизоотической эффективности схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики использовали материалы учета и отчетности областных и районных ветеринарных учреждений, а также материалы собственных эпизоотологических исследований.

Исследования по изучению эффективности КР и РИГА с молоком, а также РИГА с сывороткой крови у крупного рогатого скота были начаты в 1985-1986 гг. совместно с Л. В. Дегтяренко, Г. К Разницыной, а далее наш продолжены.

Некоторые другие исследования были проведены совместно с И. А. Косиловым, С. К Димовым, А. Г. Хлыстуновым , П. К. Аракеляном, ¡0. В. Русаковым, В. В. Русаковым, К И. Сайченко, Г. М. Стеблевой.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Результаты разработки и внедрения рациональных схем спецнфичесгдзй щхфшактиси бруцеллеза крупного рогатого скота

В процессе разработки рациональных схем специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота был проведен ряд экспериментов.

В опыте на 108 морских свинках изучали иммуногенность вакцин из штаммов бруцелл с различной антигенной структурой (табл. 1).

Морских свинок иммунизировали вакцинами из штаммов В. abortus 19, 82, 104М, 16/4, 45/20.

Через 30 дней после иммунизации проЕели заражение морских свинок вирулентным штаммом В. abortus 54 в дозе 100 м. к. Кроме опытных групп заразили еще 12 интактных морских свинок (контроль).

Из приведенной таблицы 1 очевидна наибольшая иммуногенность агглютиногенных вакцин, причем наиболее иммуногенным (100%) оказался штамм 104М.

Таблица 1

Результаты изучения иммуногенности вакцин из различных штаммов В. abortus в опыте на морских свинках

Количество свинок X Индекс

Н ШТАНЫ -иммунных инфициро-

группы В. abortus в зара- иммун- ванности

опыте зилось ных (И. И.)

1. 19 - Франция 9 3 6 67 2,25

2. 19 - серия 34 10 2 8 80 0,96

3. 19 - Гамалея 4 1 3 75 0,6

4. 19 - серия 244 10 3 7 70 1,04

5. 104М- серия 6 4 0 4 100 0

6. 82 - серия 0915 11 6 5 45,4 2,0

7. 16/4 - музейный 10 10 0 0 5,65

8. 45/20 - Франция б 5 1 20 11,8

9. контроль 12 12 - - 5,26

В дальнейшем для изучения иммунитета провели несколько экспериментов на 91 гол. крупного рогатого скота.

В первом опыте на животных, первично привитых в 2-6-месячном возрасте вакциной из штамма В. abortus 19 и реиммунизированных перед случкой вакциной из штамма В. abortus 82, а затем реЕакциниро-ванных или неревакцинированных этой же вакциной с интервалами 1 или 2 года, установили, что среди животных, ревакцинированных вакциной из штамма 82 с интервалом 1 год, 62,5% противостояли заражению, а среди коров, ревакцинированных с интервалом 2 года, заражению противостояли 87,5%. В это время у неревакцинированных животных через 1 год иммунитет был 75%, а через 2 года - 62,5% при 100% заражении животных в группе контроля.

Во втором опыте на животных, привитых б 2-6-месячном возрасте вакциной из штамма В. abortus 82, а далее реиммунизированных и не-реиммунизированных вакцинами из штаммов В. abortus 82 и 16/4-0 интервалом 1 год, был установлен различный иммунитет:

1 группа (82+82+82+82мал. доза) - 40%

2 группа (82+82+82+82) - 75%

3 группа (82+82+82) - 100%

- 10 -

4 группа (82+82+82+без ревакц.) - 100%

5 группа С 82+82+без ревакц.) - 100%

6 группа (82+82+82+16/4.) - 50%

7 группа (82+82+16/4.) - 80%

8 группа (контроль) - 0%

Полученные данные позволяют полагать, что интервал мезду ре-иммунизациями в 1 год является целесообразным при определенных условиях: во-первых, первые реиммунизации с интервалом 1 год не приводят к снижению уровня иммунитета, а наоборот, обеспечивают его повышение; во-вторых,, видимо, имеют иммунологическое значение количество проводимых реиммуниааций, а также тип вакцины, используемой для реиммунизации.

В большинстве случаев имеет смысл использовать для реиммунизации слабоагглютиногенные вакцины, как наиболее технологичные, в частности, из штамма 82.

Об этом свидетельствуют результаты третьего эксперимента по проверке иммунитета.

В проведенном опыте у первотелок, ревакцинированных вакциной из штамма 19 в малой дозе(1 группа) и у первотелок, ревакцинированных вакциной из штамма 82 в полной дозе (2 группа), количество иммунных животных было одинаково - по 38,6%, т.е. установлен иммунитет одинаковой напряженности в обеих группах.

Изучение свойств вакцины из штамма В. abortus 104М в сравнении с вакциной из штамма В. abortus 19 проводили в экспериментах и производственных опытах совместно с Русаковым Ю. R в хозяйствах Убинского района Новосибирской области, фи этом установили более выраженную агглютиногенность у данной вакцины по сравнению с вакциной из штамма 19 (соответственно 96,9% и 89,3%). Серологические реакции (РА, РОК, РБП) у животных, первично привитых вакциной иа штамма 104М, угасали к 9 месяцам, тогда как у привитых вакциной из штамма 19 к указанному сроку до 10% животных ешэ реагировали.

После реиммунизации за два месяца до осеменения этих ж животных малыми дозами (3 млрд. м. к.) этих же вакцин вторичный иммунный ответ был выражен на 15 день у всех животных в обеих группах. У животных, ревакцинированных штаммом 104М, иммунологические реакции угасли к 180-му дню, а у ревакцинированных штаммом 19 сохранялись у единичных животных до 270-го дня.

При экспериментальной проверке иммунитета в группах животных, привитых по схемам "urr. 104М + шт. 104М малая доза" и "шт. 19 +

шт. 19 малая доза", его напряженность была одинаковой (66,6%) при 100%-ном заражении интактных животных.

Противоэпизоотическая эффективность схемы иммунизации животных против бруцеллеза, предусматривающей прививку вакциной из штамма 104-М в полной дозе телочек в 2-4-месячном возрасте и ре-иммуиизацию в дозе 3 млрд м. к. за 1-1,5 месяца до осеменения, в контролируемых производственных опытах оказалась выше в два раза по сравнению с применением вакцины из штамма 19 по аналогичной схеме.

В контролируемых производственных опытах, проведенных совместно с С. К. Димовым, была доказана эффективность реиммушзаций коров вакциной из штамма 82 по фону первичной приеивки вакциной из штамма 19, превышавшая в 2 раза таковые, проводимые по "гомологичному" фону. Практическая безвредность таких схем реиммуниза-ций была подтверждена на большом поголовье благополучных по бруцеллезу ферм.

При изучении целесообразности использования схемы реиммуниза-ции коров вакциной из штамма В. abortus 82 с интервалом 1 год в контролируемых производственных опытах в хозяйствах Краснозерско-го района Новосибирской области было установлено, что если после реиммунизации, проведенной со средним интервалом 2,5 года от предыдущей, было выявлено 1241 гол. положительно реагирующих на бруцеллез (РА и РОК) животных (32,5 % от имеющихся), то после первой реиммунизации с интервалом 1 год выявлено 201 гол. (5,2%).

После двух реиммунизаций с интервалом 1 год были практически оздоровлены восемь из десяти ферм.

По материалам Убинского, Здвинского и других районов Новосибирской области проанализирована и доказана противоэпизоотическая эффективность схемы реиммунизации коров вакциной из штамма 82 с интервалом 1 год.

Из приведенной таблицы 2 видно, что при применении вакцины из штамма В. abortus 82 по фону первичной приеивки вакциной из штамма В. abortus 19 с интервалом 1 год наблюдается снижение процента реагирующих . Так, в Здвинском районе с 1993 по 1996гг. процент реагирующих снизился с 0,68 до 0,22, т.е. в 3 раза; в Убинском районе - с 2,5? до 0,3?, т.е. примерно в 7 раз.

Таблица 2

ПротиЕоэпизоотическая эффективность схемы иммунизации с интервалом 1 год в разрезе некоторых районов Новосибирской области

| Район я схема иммунизации

ГОДЫ | Здеинский Убинский

| шт. 19 + шт. 82 шт. 19 + шт. 82

±

1993

исследовано всего 65,4 33,9

реагировало полож. 446 872

% 0,68 2,57

1994

исследовано всего 65,1 27,1

реагировало полок. 239 619 '

% 0,37 2,2

1995

исследовано всего 4?, 7 37,4

реагировало полож. 130 590

% 0,27 1,58

1996

исследовано всего 43,5 25,3

реагировало полож. 99 93

% 0,22 0,37

2.2.2. Результаты разработки и внедрения рациональных схем поствакцинальдай диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота

При разработке рациональных схем поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в условиях широкого применения вакцин ориентировались прежде всего на необходимость использования наиболее информативных и эффективных диагностических реакций в ранние сроки после вакцинации и реиммунизации. При этом постановка их должна быть максимально простой и быстрой и они должны обладать дифференцирующими возможностями.

Поэтому нами для дальнейшего изучения в сравнении с традиционными и официально утвержденными РБП, РА, РСК. и РИД с О-ПС анти-

геном были взяты КР и РИГА с молоком, РИГА с сывороткой крови.

2.2.2.1. Изучение эффективности ЕР и РИГА с молоком в эксперименте х производственных опытах

Специфичность, диагностическую и противоэпизоотическую эффективность КР с молоком в стадах коров, привитых вакциной из штамма 82, изучали в экспериментальных и производственных условиях.

Специфичность КР с молоком вначале была подтверждена на здоровом, непривитом против бруцеллеза поголовье коров (500 проб), а затем и на реиммунизированном против бруцеллеза вакциной из штамма 82 поголовье коров благополучных ферм.

При исследовании молока от 9147 коров начиная с 15 -го дня и далее кольцевая реакция была в основном отрицательной. Только в единичных случаях (до 2%) регистрировалась КР с цельным молоком или в разведении 1:2 при оценке в два креста.

Диагностическая эффективность КР вначале была доказана нами в экспериментах.

Так, интересные данные получены при ежедневном исследовании в КР молока от интактных и вакцинированных коров в течение 30 дней после искусственного заражения вирулентным штаммом В. abortus 54 в дозе 200 млн. м. к..

В группе интактных животных реагирующие в КР появились на 8-ой день после заражения (у одного животного). На 11-ый день реагировали все, при этом далее титры у них нарастали и сохранялись до конца опыта.

Среди вакцинированных коров в КР реагировали с максимальными титрами на 11 - 13 дни после заражения, а с 17 - го дня реакции начинали угасать и концу опыта сохранялись у единичных животных в разведении от 1: 2 с оценкой ++, +++.

В дальнейшем диагностическую эффективность КР с молоком изучали в производственных условиях.

В ряде неблагополучных хозяйств изучали КР с молоком в сравнении с официально утвержденными сывороточными тестами - PA, PCR и РИД с О-ПС антигеном.

Из таблицы 3 видно, что из 35 животных, КР с молоком у которых была положительной во всех случаях (1:2 - 1:64), РА (100 ME и Еыше) зарегистрирована у 20 (57,1%), РСК (1:5 и выше) - у 32 (91,4%), РМД - у 24 (68,5%).

Таблица 3

Показания КР с молоком в сравнении с характером других серологических тестов у крупного рогатого скота из неблагополучнах по бруцеллезу хозяйств

КНВ. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

N НОМЕР -

п/п ЖИВОТНОГО КР РА РСК РИД

(разве д.) (оценка в МЕ) (развед.) (+ или -)

1. 6558 1 2 50 1:20 -

2. 7654 1 4 отр. отр. -

3. 4903 1 4 отр. отр. -

4. 7201 1 4 отр. отр. -

5, 6520 1 8 отр. 1:10 -

6. 6536 1 8 отр. 1:10 -

7. 87 7 1 8 отр. 1:40 , +

8. 7244 1 8 50 1:5 -

9. 605 •1 8 100 1:10 +

10. 343 1 8 100 1:20 +

11. 9542 1 8 200 1:80 -

-12. 7166 1 8 200 1:80 +

13. 6725 1 8 400 1: 40 +

14. 9907 1 8 400 1:40 +

"15. Астра 1 8 400 1:40 +

16. 9342 1 16 отр. отр. -

17. 7259 1 16 отр. отр. -

18. 0271 1 16 отр. 1:40 +

19. 7140 1 16 отр. 1:80 +

20. 7080 1 16 отр. 1: 80 +

21. 7860 1 16 50 1:10 +

6554 1 16 100 1:20 +

23. 340 1 16 100 •1:80 -

24. 6569 1 16 200 1:40 +

25. 7855 1 16 200 1:80 +

26. 6504 1 16 400 1: 40 +

о»-, . 6527 1 16 400 1: 40 +

28. 7959 1 16 800 1:80 +

29. 9990 1 32 50 1: 20 +

30. 6685 1 32 200 1: 40 +

31. 6600 1 32 400 1: 40 +

32. 6292 1 3? 800 1:80 +

оо о о. 5292 1 32 800 1:80 л.

34. 6790 1 64 400 1:80 +

35. 6790 1 64 400 1:80 +

При этом только с положительной КР зарегистрировано 5 животных (14,3%), в остальных 30 случаях КР совпала: только с РА и (или) РСК - в 6 (17,1%), только в РИД - ни в одном (0%), в РА и (или) РСК + РИД - в 24 (68,6%).

Если оценивать совпадения показаний РИД с другими тестами, то они совпали с КР в 100% случаев (в титре 1:8 в 7, 1:16 - в 10, 1:32 - в 5, 1:64 - в 2).

Из 240 первотелок неблагополучных стадч19 (7,9%) реагировали положительно по РА и РСК, причем 16 из них реагировали в КР с молоком (84,2%). КР с молоком в 7 пробах была в разведении 1:32, в 3-1:16, в 6 - 1: 8 и в 3 - 1:4. При этом необходимо отметить, что все первотелки с КР в разведении 1:8 и выше реагировали в РА в титре 200 МЕ и выше.

В совхозах "Арлюкский" и "Заозерный" Кемеровской области в 1989-1990гг. при комплексных диагностических исследованиях 3361 пробы сывороток крови и 3846 проб молока выявлено 128 животных с сомнительными и положительными показаниями КР с молоком (с цельным - 73, 1:2 - 30, 1:4 - 6, 1:8 - 14 и 1:16 - 5).

Часть проб молока, положительно и сомнительно реагирующих по КР, исследовали бактериологически.

Параллельно такую же работу проводили и в ряде хозяйств Новосибирской области.

Результаты этой работы свидетельствуют о высокой диагностической ценности КР с молоком. Эпизоотический штамм бруцелл был выделен не только от животных, реагирующих в КР в высоких разведениях (1:8, 1:16), но даже от животных , которые реагировали в КР с цельным молоком и в разведении 1:2, 1:4.

Противоэпизоотическуто эффективность КР с молоком в ранние сроки после реиммунизации коров изучали в неблагополучных стадах, когда применение других тестов (РА, РСК и др.) невозможно из-за сохраняющейся поствакцинальной серопозитивности.

Так, при 6-кратных серологических исследованиях сыворотки крови 760 коров меаду первой и второй ревакцинацией (интервал 13 месяцев) было выделено 19,5% реагирующих, причем при последнем исследовании перед ревакцинацией в РА и РСК реагировало положительно 9,7% животных (в том числе в РА в титре 200МЕ и выше 2,5%). Дополнительно кольцевой реакцией с молоком выявлено еще 3,8%. Всех реагирующих своевременно удалили из стада.

За 1,5 месяца после реиммунизации проЕели 5 исследований мо-

лока, выявили 3,2% реагирующих, которых также удалили иа стада.

Через 6 месяцев после ревакцинации приступили к исследованиям сывороток крови в РА и РСК - положительно реагирующих было 5,4% (в том числе в РА в титре 200 МЕ и выше 0,8%).

Таким образом, за счет оперативного удаления из стад активных источников инфекции с помощью RP удалось получить четкую тенденцию к снижению заболеваемости уже при первом исследовании в РА и РСК после ревакцинации.

В случаях, когда КР не применяли, количество реагирующих в РА и РСК при первых исследованиях после ревакцинации превышало таковое при последних исследованиях до него в 1,5-2 раза и более. Иными словами, провоцирующее свойства вакцины из штамма 82 в целях оздоровления с помощью КР можно использовать значительно раньше, чем с помощью РА и РСК, уже начиная с 15 дня после ревакцинации.

Аналогичные результаты получены во многих других хозяйствах.

Из таблицы 4 видно, что, применяя КР с молоком для ранней поствакцинальной диагностики, в ряде районов добились положительных результатов в оздоровлении стад, что указывает на ее противо-эпизоотическую эффективность. Так, если в Кочковском районе в 1990 году выделяли 1,13% положительно реагирующих по КР, то в 1994 году этот процент снизился до 0,15, а в 1995-1996гг. положительно реагирующих не было. В Чановском, Здвинском и Купинском районах также наблюдалось постепенное снижение процента выделенных положительно реагирующих по КР с молоком животных, а к 19951996гг. положительно реагирующих уже не было. В настоящее время неблагополучных пунктов в указанных районах нет.

Наряду с КР изучали и возможность использования РНГА с молоком в ранние сроки после реиммунизации коров для диагностики бруцеллеза.

Специфичность РНГА с молоком была вначале подтверждена на 300 здоровых, непривитых против бруцеллеза коровах.

Затем специфичность РНГА изучали на 1685 ревакцикированных против бруцеллеза вакциной из штамма 82 коровах из благополучных хозяйств. Выло установлено, что РНГА с молоком была отрицательна у абсолютного большинства животных даже в первые 15-30 дней после прививки, тогда как РА, РСК и РНГА с сыворотками крови были положительными более чем у 40% животных.

Таблица 4

Противоэпизоотическая эффективность КР с молоком на примере некоторых районов Новосибирской области

I .

Исследовано | РАЙОН

по КР | Кочновский Чановский Здвинский Купинский

1990

исследовано всего 7000 6600

реагировало полож. 79 74

% 1,13 1,12

1991

исследовано всего 12700 10200

реагировало полож. 78 104

н. д.

6400 99

6500 27 " 0,41

27800 49

% 0,61 1,01 1,55 0,18

1992

исследовано всего 13200 9300 17100 3810

реагировало полож. 12 81 72 1

% 0,09 0,87 0,42 0,02

1993

исследовано всего 10000 6100 14500 12500

реагировало полож. 6 43 116 2

X 0,06 0,7 0,8 0,016

1994

исследовано всего 11400 4900 14300 4900

реагировало полож. 18 3 44 10

% 0,15 0,06 0,31 0,2

1995

исследовано Есего 3000 4600 13500 9900 реагировало полож. - 2 5% 0 0,04 0,03 -0

1996

исследовано всего 2800 3200 12600

реагировало полож. - -

% 0 0 0 -

Примечание: н. д. - нет данных.

В отдельных случаях регистрировали единичные случаи реагирующих в РИГА с молоком, но титры не превышали 50 или 100 МЕ.

Диагностическую эффективность РИГА с молоком изучали вначале е экспериментах.

При сравнении РИГА с молоком с РА и РСК оказалось, что показания РИГА как среди интактных, так и среди вакцинированных животных полностью совпадают с показаниями РА и (или) РСК, особенно на 14-ый день после заражения. В другие сроки РИГА с молоком может выявлять реагирующих животных дополнительно.

При сравнении РИГА с молоком с КР оказалось, что в группе интактных животных на 7-ой день после заражения все реагировали только в РНГА. В другие сроки (14 и 28 дни) КР полностью совпадала с РНГА.

Среди вакцинированных животных на 7-ой день после заражения больше реагирующих было в РНГА, в другие же сроки (14 и 28 дни) в двух группах было совпадение реагирующих в КР и РНГА, а в двух группах с помощью КР было выявлено реагирующих животных больше.

Диагностическую эффективность РНГА с молоком в производственных условиях изучали в неблагополучных хозяйствах.

Данные таблицы 5 показывают, что при исследований молока и сывороток крови от восьми животных из неблагополучного хозяйства 100% реагировали в. КР с молоком, 7 из них положительно реагировали е РНГА с молоком в титре 200-400МЕ, т. е. прямым образом коррелировали с КР (87,5%). При сравнении с результатами исследований сывороток крови этих же животных оказалось, что положительная РНГА с молоком совпадает с положительными РА и (или) РСК, РНГА с сывороткой крови, а одно животное (12,5%) выявлено дополнительно по тестам с молоком (КР и РНГА с молоком).

При исследовании молока от 1445 коров 5 неблагополучных ферм в различные сроки после реиммунигации (15, 30, 45, 60 дней) установили, что РНГА с молоком чаще всего (86-90% случаев) совпадала с КР в стадах с острым течением бруцеллезной инфекции.

Так, при исследовании 195 первотелок, Еыращенных на неблагополучной ферме, 20 (10,2%) реагировало только по КР с молоком, 22 (11,3%)- по РНГА с молоком и 38 (19,5%) реагировало положительно по РА и РСК, причем у 19 животных КР с молоком совпала с РНГА с молоком (89/1%). Титры РНГА с молоком были от 100 до 1600 МЕ. Важно, что из 22 реагирующих по РНГА с молоком 18 (81,8%) из них реагировали по РА и РСК.

Таблица 5

Диагностическая эффективность РИГА с молоком в сравнении с КР, РА, РСК и РИГА с сывороткой крови

1 N 1 1 Инвентарный | ТИТ Р Ы РЕАКЦИЙ

п/п | номер | с молоком с сыеороткой крови РНГА КР РА РСК РНГА (МЕ) (разв.) (МЕ) (разв.) (МЕ)

1. 997 отр. 1 2 200 1 80 3200

2. 3967 200 1 8 800 1 40 200

3. 8023 200 1 2 50 1 40 800

4. 170 200 1 16 100 1 80 3200

5. 1669 400 1 16 100 1 40 200

6. 44 400 1 2 отр. 1 80 1600

7. 370 400 1 8 100 1 80 1600

8. 666 400 1 8 отр. отр. 50

Сопоставляя результаты исследования сывороток крови по РА и РСК и молока в КР и РИГА по двум хозяйствам, следует отметить, что в совхозе "Заозерный" при исследовании сывороток крови через 6 месяцев после ревакцинации реагирующих в РА в титрах более 100 МЕ не было. После ревакцинации с помощью КР с молоком при 3-х кратном исследовании (15, 30, 45 день) выделено 7 положительно реагирующих коров, а РИГА - 11, совпадение у 4 (36,3%). В совхозе "Арлюкский" за год было выделено более 90 положительно реагирующих животных, в том числе перед ревакцинацией 4 головы, из них 2 в РА в титре 200 и 400 МЕ, а по КР дважды был получен отрицательный результат. На 15, 30 и 45 дни после реиммунизации по КР положительно реагировало 14 животных, по РНГА - 18, совпадение было у 10 (45,5%).

Учитывая результаты изучения КР и РНГА с молоком в экспериментальных и производственных условиях, можно сделать вывод, что и КР, и РНГА специфичны и чувствительны и в большем проценте случаев совпадают с РА и РСК, однако могут и дополнительно выявлять значительное количество реагирующих животных (10-15%).

Итак, РНГА с молоком наряду с КР также оказалась эффективной в диагностическом отношении.

Однако в практических условиях наиболее приемлемой при массо-

вых исследованиях оказалась КР, как наиболее простая, позволяющая в течение 2-3-х часов получить результат.

2.2.2.2. Изучение эффективности РИГА с сывороткой крови

Специфичность РИГА с сывороткой крови изучали на здоровом ре-вакцинированном поголовье коров благополучных ферм через 6-7 месяцев и более после ревакцинации (более 4 тыс. гол. на 16 фермах). Положительной РИГА не зарегистрировано.

Диагностическую эффективность РИГА с сьшороткой крови изучали вначале в экспериментах.

При сравнении РИГА с сывороткой крови с РА и РСК по результатам трех экспериментов на крупном рогатом скоте оказалось, что РНГА чувствительна , поглотает все показания РА и (или) РСК, может заменить их.

Далее диагностическую эффективность РНГА с сьшороткой крови изучали в производственных условиях.

Оказалось, что РНГА с сьшороткой крови коррелирует с показаниями РА и (или) РСК в 89,5% случаев.

В ряде неблагополучных хозяйств изучали РНГА с сьшороткой крови в сравнении с официально утвержденными, серологическими реакциями (РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном).

Из 61 жиеотного, РНГА с сывороткой крови у которых была положительной во всех случаях (200 - 1600 МЕ), РА (100 МЕ и выше) - в 47 (77,0%), РСК (1:5 и выше) - в 57 (93,4%), положительная РИД -в 43 (70,5%).

При этом РНГА совпала только с РА и (или) РСК в 18 случаях (29,5%), только с РИД - в 1 (1,6%), с РА И (или) РСК + РИД - в 41 (67,2%).

Если оценивать совпадения показаний РИД с другими тестами, то они совпали с РНГА в 100% случаев (в титре 200 МЕ в 20, 400 МЕ -в 10, 800 МЕ - в 12, 1600 МЕ - в 1).

При исследовании сывороток крови от. 670 коров неблагополучного стада в РНГА через 7 месяцев после ревакцинации реагировало 96 голов (14,3%), при втором исследовании - 25 (3,7%), при третьем -14 (2,0%). Таким образом, при 3-х кратном исследовании сывороток крови от ревакцкнированных штаммом 82 животных в РНГА выделено реагирующих 135 голов (16,9%), из которых 45 (33,3%) одновременно реагировали в РА и РОК. 90 животных (66,6%) реагировали только в

РИГА. Однако РИГА при последующих исследованиях угасали, да и сами реакции были в низких титрах.

При исследовании в РНГА сывороток крови от 43 коров, многократно привитых вакциной из штамма 82, из бруцеллезного изолятора у 2? коров РНГА была положительной (из них положительные РА у 11, РБП у 22 и РСК у 20 животных), у 11 - сомнительной (из них положительные РА у 2, РБП у 7 и РСК у 7 животных), у 5 - отрицательной (из них положительные РА у 1, РБП и РСК у всех 5 животных).

Нами неоднократно отмечено, что высокие титры РНГА коррелируют с высокими титрами РА и РСК. При исследовании 37 коров, привитых вакциной из штамма 82, из неблагополучного по бруцеллезу хозяйства при титрах РНГА выше, чем 1:400, РСК была в титре Еыше 20 МЕ (кроме одного случая из 37), а титры РА выше 200 МЕ были только у тех животных, у которых РНГА регистрировалась в титре 1:1600 и Еыше (кроме 5 случаев из 37).

Из 185 животных колхоза им. Ленина Колыванского района выделено реагирующих по РА и РСК - 17 голов, а по РНГА - 23, из них 16 голов совпали с РА и РСК, в основном те, которые реагировали в РА 1:200 и выше , а также в РСК 1:20 и выше.

Учитывая простоту постановки РНГА, можно на основании полученного нами большого фактического материала как в экспериментах, так и в производственных условиях предлагать ее взамен РА и РСК для массовой поствакцинальной диагностики.

2.2. 3. Противозпизоотическая эффективность рациональных схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики при оздоровлении хозяйств Новосибирской области

Мы проанализировали эффективность оздоровления неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота ферм области после начала применения вакцины из штамма 82, то есть с 1975 года до 1998 года.

Установлено, что уровень заболеваемости с 1975 по 1997 год снизился примерно в 20 раз (с 42,7 до 2,3 тыс. гол. ), с 1985 по 1997 год - в 9 раз, а количество неблагополучных пунктов с 1975 по 1997 год снизилось почти в 44 раза (с 482 до 11), с 1985 по 1997 год - в 12 раз (со 133 до 11).

Уровень эффективности противоэпизоотических и профилакти-

ческих мероприятий в масштабах области в девяностые годы удалось повысить ва счет широкого внедрения в неблагополучных и угрожаемых районах реиммунизации коров вакциной из штамма 82 с интервалом 1 год. В большинстве районов это произошло на фоне первичной прививки молодняка вакциной из штамма 19, ранней поствакцинальной диагностики в целях максимального использования провоцирующих свойств вакцин с помощью кольцевой реакции с молоком и других специальных мероприятий в сочетании с общими ветеринарно-санитар-ными и организационно-хозяйственными мерами.

3. ВЫВОДЫ

1. Экспериментально установлено, что из числа живых противоб-руцеллезных вакцин из агглютиногенных штаммов наибольшей иммуно-генностью (100%) обладала вакцина из штамма В. abortus 104М, что на 20-33% выше по сравнению с различными сериями вакцинного штамма В. abortus 19, на 54,6 % - слабоагглютиногенного В. abortus 82 и на 100 % - инагглютиногенного В. abortus 16/4.

2. Живые агглютиногенные вакцины при использовании для первичной иммунизации оказались в два раза эффективнее в противоэпи-зоотическом отношении по сравнению с живой слабоагглютиногенной вакциной из штамма В. abortus 82.

При этом в противозпизоотическом отношении вакцина из штамма 104М была эффективнее вакцины из штамма 19 в два раза, что является основанием рекомендовать ее для широкого практического использования.

3. Реиммунизации крупного рогатого скота слабоагглютиногенной вакциной из штамма В. abortus 82 в полной дозе (100 млрд. м. к.) или агглютиногенной вакциной из штамма В. abortus 19 в уменьшенной дозе (3 млрд. м. к.) без ущерба для напряженности иммунитета позволяют беспрепятственно осуществлять поствакцинальную диагностику в целях своевременного выявления бруцеллоносителей.

4. В экспериментах и производственных условиях установлено, что должного противоэпизоотического эффекта можно достичь при проведении реиммунизаций животных с интервалом не более чем два года. В производственных условиях реиммунизации с интервалом один год обладали эффективностью в два раза выше, чем реиммунизации с интервалом два года.

5. Подтверждена значительная роль рациональной диагностики в повышении протиЕозпигоотической эффективности специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота за счет возможности максимального использования провоцирующих свойств вакцин. Так, в качестве специфичных и чувствительных реакций зарекомендовали себя КР и РНГА с молоком: в экспериментах после искусственного заражения вирулентными бруцеллами 100 % реагирующих в группах ин-тактных животных выявлялось до 28 дня, а в группах вакцинированных - практически до 15 дня.

6. При массовых исследованиях после ревакцинации коров наиболее приемлемой оказалась КР, обеспечивающая возможность исследовать молоко уже через 15 дней и далее в любые сроки после ревакцинации Еакциной из штамма В. abortus 82. Это позволяет ускорить оздоровление неблагополучных стад в два раза за счет выявления инфицированных коров в сроки, когда другие методы диагностики не приемлемы.

7. Положительная КР совпадает в 57,1% случаев с РА (100 ME и Еыше), в 91,4% - с РСК (разведение 1: 5 и выше), в 68,6% - с положительной РИД, но можвт и дополнительно выявлять реагирующих животных (в отдельных случаях при отрицательных РА, РСК, а также РИД КР была в разведениях от 1:4 до 1:16).

Животные, реагирующие в КР даже в разведении 1:1, 1:2 и 1:4, представляют эпизоотическую и эпидемическую опасность, так как от-них выделяли культуры бруцелл полейых штаммов.

8. РНГА с сывороткой крови специфична - на привитом поголовье реакции сохраняются не более 6 месяцев; чувствительна- в эксперименте на 14 и 28 дни после заражения у крупного рогатого скота она полностью совпадает с показаниями РА и (или) РСК, а также выявляет реагирующих жиеотных дополнительно .

В производственных условиях также отмечена ее корреляция с РА и (или) РСК, причем высокие титры РНГА (200МЕ и выше) совпадают в 77,0% случаев с РА (100 ME и выше), в 93,4% - с РСК (разЕедение 1:5 и выше), в 70,5% - с положительной РИД. С учетом изложенного, а также простоты постановки РНГА, очевидна возможность использования ее взамен комплекса РА+РСК для массовой поствакцинальной диагностики.

9. Внедрение разработанных на основе полученных результатов рациональных схем специфической профилактики и поствакшш&яьной диагностики позволило сократить число неблагополучных по бруцел-

- 24 -

лезу крупного рогатого скота пунктов в Новосибирской 1975 года по 1997 год почти в 44 pasa, а с 1985 года -

области с в 12 раз.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований нашли отражение в следующих нормативно-технических документах, утвержденных на областном и российском уровнях:

- "Наставление по применению вакцины сухой живой из штамма 82 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота" (утверди. 26.02.96г. , N 13-3-2/539);

- "Наставление по применению вакцины живой сухой из штамма 19 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота" (ут-вержд. 26.02.96г., N 13-7-2/271);

- Ветеринарные правила ВП 13.3.1302-96, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 18 июня 1996 года.

- План протиЕобруцеллезных мероприятий по Новосибирской области на 1985-1990, 1995-1997 гг.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Характеристика штаммов бруцелл, выделенных от кошки/ Л. Е Репина, И. А. Косилов, Е И. Черкасская, Г. В. Разницына, В. Е Шаталов /Профилактика и оздоровление животных от туберкулеза и бруцеллеза: Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, Новосибирск, 1988.

- С. 58-61.

2. Иммунитет к бруцеллезу у крупного рогатого скота, реимму-низированного малыми дозами агглютиногенных вакцин /Ю. В. Русаков, А. Г. Хлыстунов С. К. Димов, И. А. Косилов, а И. Черкасская /Актуальные проблемы туберкулеза и бруцеллеза с. -х. животных: Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, Новосибирск, 1989. - С. 77-79.

3. Димов С. К., Черкасская Н. И. , Русаков В. В. Дифференциальная поствакцинальная диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота и ее противозпизоотическая и экономическая эффективность //Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза" и организации медицинской помощи больным: Тезисы докл. Всесоюзной конференции, Москва, 1989.

- С. 125-126.

4. Реакция непрямой гемагглютинация в дифференциальной пост-вакцинальнсй диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота

/А. Г. Хлыстунов, Е И. Черкасская, С. КДимов, В. В. Русаков /Научное обеспечение мероприятий по профилактике и ликвидации туберкулеза

Новосибирск, 1991. - С. 124-127.

5. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе крупного рогатого скота /А. Г. Падалица, Е И. Сайченко, С. К. Ди-мов, А. Г. Хлыстунов, Г. М. Стеблева, Н. И. Куренская, С. А. Кузлякин, И. А. Косилов, А. А. Ноеицкий /Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы: Материалы международной научно-практической конференции, г. Гродно. 23-24 октября 1997 г. - Минск, 1997.

С. 92-94.

6. Проблема специфичности показаний РИД с О-ПС антигеном у животных, привитых противобруцеллезными вакцинами различных типов /С. К. Димов, Г. М. Стеблева, А. Г. Падалица, В. И. Сайченко, А. Г. Хлыстунов, К Я. Куренская, ПК. Аракелян, И. А. Косилов / Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы: Материалы международной научно-практической конференции, г. Гродно. 23-24 октября 1997 г. -Минск, 1997. - С. 92-94.

и бруцеллеза с.-х. животных: Сб. науч. тр. РАСХН, Сиб. отд-ние,

Подписано к печати 12.10.98 г. Формат 60x84 1/16. Объем 1,0 печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 988.

Отпечатано в типографии ГРПО СО РАСХН. 633128, Новосибирская область, п. Краснообск