Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль пастерелл в респираторной патологии овец и крупного рогатого скота

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имели Я.Р.КОВАЛЕНКО

РГ6~ППГ

На правах рукописи

ШЕГИДЕВИЧ Эдуард Алиевич

РОЛЬ ПАСТЕРЕЛЛ В РЕСПИРАТОРНОЙ ПАТОЛОГИИ ОВЕЦ И КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук » виде научного доклада

Москва -1993

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследоватальскоы ' институте экспериментальной ветеринарии лиени Я.Р.Коваленко.

Официальные оппоненты:

академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор И.А.Бакулов доктор ветеринарных наук, профессор A.B.Голиков доктор ветеринарных* наук, профессор А.Г.Шахов."

Ведущая организация: Московская ветеринарная академия ин. К.И.Скрябина.

Защита состоится " ' о " 1993 г. в часов

на заседании специализированного Совета Д 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательской мнсяиуте експериыентальной

ветеринар-и имени Я.Р.Коваленяо (109472* Москва, ¡кузьминки, ВИ8В).

i ■ 4 ...... -

С диссертацией в виде научного доклада п опубликованными раоотаы можно ознакомиться в библиотеке ШЭВ..

. ^.Длесвртапия в виде научного доклада разослана ■■ " <УмАл//& 1993 г.

. Ученый секретарь специализированного Совета кандидат ветеринпрншс наук

Э.Г.ТервИЕов

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1,1. Актуальность проблемы. Болезга органов дыхания сельскохозяйственных животных на протяжении десятилетий остается одной из основных проблем ветеринарной науки и практики. В общем балансе убытков животноводства на долю этих болезней приходится от 25 до 50%.

Ранее у исследователей не было единого мнения о природе массовых заболеваний органов дыхания, известных в специальной литературе под собирательным названием энзоотические пневмонии. В двадцатых-сорокоячх годах F'.Tonsa (IS2I), w.iът, Y.HJbsboa .<1930), х.Налаоа, 5?.Cross (1532), В.П.Миловзоров (1932), R. Montgoneri (1938), А.А.Волкова (1938), H.Marsh (1940), A.K. Отрогов (1947), Г.А.Кудрявцев (1948), D.Canpbell et al. (1949) я другие авторы указывали, что эти болезни по своей природе являются ив^енщонными- и вызываются у мелкого и крупного рогатого скота пастереллами и пастереллоподобными бактериями. Однако это мнение не получило общего признания. Многие исследователи считали*, что первопричиной энзоотических ппсбмоеий являются неблагоприятные факторы. внешня среды, а выделяемая из пораженных легких микрофлора, в том числе и паетереллы, только осложняет патологический процесс. В связи с изложенным, профилактические к лечебные -мероприятия строились с учетом указанной концепции, однако желаемого эффекта они не приносили, экономические убытки не уменьшались.

Перевод животноводства'на промышленную технологию обострил проблему респираторной патологии и обуслошл проведение комплексных исследований по изучению этиологической структуры этих болезней.

Руководство исследованиями по данной проблема в ВИЗЕ на протягемш ряда лет осуществлялось академиком ВАСХНИЛ Я.Р.Ковале!® о.

Цель работы - изучить этиологическую структуру энзо-этяч'ссзшх пневмоний у овец и молодняка крупного рогатого скота, разработать методы диагностики, научно обосновать методы- лече-ая и специфической профилактики при этих болезнях.

. 1.3. Основные задачи исследований: - изучить особенности эпизоотического процесса при знзоо-кческой пневмонии у овец, определить характер влияния климати-

ческих факторов на его динамику и интенсивность проявлений;

- изучить динамику болезни, определить частоту вьдаеления

и этиологическую роль различных микроорганизмов с учетом стадийности развития патологического процесса;

- разработать методы серологической типизации и изучи~ь се-ровариантный состав Pasteurella haenolytica и Pasteurella aul-tocida , участвующих в развитии пневмоний у овец и молодняка крупного рогатого скота;

- выяснить способност: культур p.muitocida , вьщеленных при патологии респираторных органов ягнят и телят, продуцировать дермонекро^ический экзотоксин, изучить биологические, физико-химические и иммуногенные свойства токсина;

- изучить характер взаимодействия макрофагов различной локализации с культурами p.haeaolytica, разработать методы выявления токсичности бактерий этого вида;

- изучить иммуногенность культур P'.haeaolytica, определить возможность использования ряда показателей клеточного и гуморального и^чунитета для оценки иммунологической эффективности препаратов, приготовленных из бактерий этого вида;

- изучить чувствительность культур основных воз'будителей болезни к ряду лекарственных веществ и испытать лечебную и профилактическую эффективность этих препаратов;

- селекционировать наиболее иммуногенные штаммы p.multo-

' cida и P.haemolytica различных серологических вариантов и разработать средства специфической профилактики болезней сельскохозяйственных животных, вызываемых бактериями указанных видов.

1.4. Научная новизна. Расшифрована этиологическая с тр; тс тура энзоотическо'" пневмонии у овец. Показано, что эта болезнь является полиэтиологичной и развивается стадийно. Впервые в стра-

• л

не от овец вцпелен вирус парагриппа-3 и ЫуоорХаата oTipneunoni&e. Установлено, что эти микроорганизмы вызывают начальную стадию болезни, а основным этиологическим фактором развития пневмонии является P.haeaolytica.

Впервые в стране доказана ведущая этиологическая роль р. haemolytica в возникновении пневмоний у молодняка крупного рогатого скота, развивающихся на фоне ряда вирусных инфекций (па-рагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и др.).

Впервые в стране диагностирована и описана септицемия новорожденных ягнят, вызываемая P;haeaolytica биотипа А.

Разработаны ».-етоды типпровашя и поучен серовариантниА сослав E.haeaolytiea и P.sultocta.-; , учасгвупфю а развитии тидоо-tmfl у овец к иологляка крупного рогпт.мч> скота.

Изучен характер взаимодействия культур j.iuu/Bolyfcica с ялотшд) системы коночукяеарнух фагоцитов. Разработаны методы ы.швлошя циготокспшюстп бактерий этого вида, Покаямга принципиальная воэмогзюс-.'ь разработка средств стяпЛпюской профилактика болезней> вызываемых ?.iinc-jsolyticft . Определен ряд тестов, позволяющих io vitro оценивать иммуногенность :iz

бактерий этого

Бпйоныо у p.rultaoida серологического варианта Д обнаружен и выделен дермонекротический экзотоксин, изучены его физико-химические, антигенные и иммуногенные свойства.

Дано научное обоснование и показана необходимость разработки биологических препаратов против различных форм пастереллезов животных с учетом видового и серовариантного состава пастерелл.

Научная новизна работы подтверждена авторским! свидетельствами и положительными регеття'а ЕКЯтПОО на заявки: 9313574 "Способ получения микоплаокенного антигена"; !' II00303 "Питательная средг, для выращивания S.aultocida "; 1413903 "Способ огред слегая токсичности бактерий вида P.hasaolytica ";

-1866683/13 "Способ получения сыворотки для лечения к профилактики пастереллеза сельскохозяйственных ;кивотньх"; # 4867033/13 'Способ получения гипериммунной сыворотки против респираторах >аболевашй крупного рогатого скота".

Практическая значимость. Разработаны методы лабораторий диагностики-болезней, вызываемых у животгагс P.haeaoiytic« i.aultoeida различных серологических вариантов.

Научно обоснован и испытан комплекс организационных, тех-злогкческих и лечебных мероприятий при пневмонийных формах пас-зреллезов овец и молодняка крупного рогатого скота.

Селекционированы и депонированы для производственных целей ягболее иммуногенные штаммы F.haonolytica и P.multocida разимых серологических вариантов.

Разработано новое поколение биологических препаратов пров различных форм пастереллезов животных с учетом серологичес-й и шлмунологической гетерогенности пастерелл.

Материалы проведенных исследований включены в II норматив-технических документов.

1.6. Апробация и публикация результатов. Основные резуль- * таты работы доложены на заседаниях Ученого Совета ШЭВ (19701992), Всесоюзном семинаре по микоплазмам (Москва, 1976), XXI Всемирном ветеринарном конгрессе (Москва, 1979), Секции инфекционных болезней Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (1980, 1986) Всесоюзной конференции, посвященной памяти Я.Р.Коваленко (1980), второй Всесоюзной конференции по болезням овец (Чита, 1980), | научно-производственной конференции и координационном совете по ; овцеводству и козоводству (Саврополь, 1j8I), Всесоюзной конференции по вопросам паразитологии и смешанных (ассоциированных) болезней (Москва, 1981), Всесоюзной научно-технической конферен- : ции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных" (Воронеж, 1991), семинарах и совещаниях ветеринарных специалистов (I98I-I992).

По материалам диссертации опубликовано 35 научных работ, в том числе две монограАта.

. 1.7. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на зящиту. Экспериментальное обоснование новой концепции этиологии энзоотической пневмонии овец, в соответствии с которой болезнь представляет собой многофакторный патологический процесс, а P.haemolytica является определякщей причиной развития пневмоний.

Доказательства ведущей этиологической роли P.haemolytica в развитии пневмоний у молодняка крупного рогатого скота. ^

Выявление новой для страны болезни - септицемии новорожденных ягнят, вызываемой P.haemolytica биотипа А.

Характеристика серовариантного состава P.haemolytica г P.multocida , уче-твующих в развитии пневмоний у овец и молодняка крупного рогатого скота.

Разработка и внедрение лабораторных методов диагностики различных форм пастереллезов сельскохозяйственных животных.

Научное обоснование и разработка лечебных мероприятий при пневмонийных формах пастереллезов овец и молодняка крупного рогатого скота.

Характеристика культуральных, токсигенных, иммуногенных свойств культур P.haemolytica и физико-химических, биологических и иммуногенных свойств экзотоксина P.multocida серологического варианта Д.

Научное обоснование и разработка нового поколения биологи- >-ческих препаратов для профилактики и лечения различных Форм пас-тереллсзов сельскохозяйственных животных.

1.8. Объем и структура научного доклада. Научный доклад изложен на 50 страницах, содержит 8 таблиц и включает следуйте 'разделы: общая характеристика работы, материалы и методы исследований, результаты исследований, выводы, практические предложения, список работ, опубликованных по теме диссертации.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринария км.Я.Р.Коваленко в 19551992 гг. Отдельные этапы исследований проводили совместно с И.А.Яблонской, М.Н.Соколовым, В.Б.Федотовым, В.Н.Афанасьевым, А.И.Юдиным, Н.И.Писаренко, В.И.Кадошниковым, С.Г.Дорофеевой, Н.Ю.Басовой, Л.И.Колмыковой. Ряд комплексных исследований выполняли в творческом содружестве с отделом вирусологии, лабораториями патологической анатомии, микологии и антибиотиков, токсикологии и фармакологии, протозоологии, биофизики ВИЭВ, сотрудниками ВГНКИ (Р.В,Душук, Ю.А.Малахов) и ВНИиТМБП (М.Л.Ярцез). В процессе работы методическую помощь оказывал! М.А.Сидоров (Московский институт прикладной биотехнологии), Ю,Н.Федоров (ШЗЗ), О.В.Еззпчук (ШКЗМ им.Н.Ф.Гамалеи).

Зпизоотологнческие исследования проведены в 85 овцеводческих хозяйствах Краснодарского и Ставропольского крзоь, Дагестана, Ростовской, Волгоградской,'Крымской, Белгородской и Тверской областей. Всего обследовано более 550 отар. Креме того, обследованы 23 специализированных скотоводческих хозяйства Московской, Пензенской, Белгородской. Смоленской, Владимире ко!?. Сяь'дР— ской областей. Краснодарского и Ставропольского краев.

За ряд лет проанализированы материалы ветеринарной отчетности ГУВ МСХ РСФСР, Ставропольского края, 23 районов ряда краев, областей и всех обследовашгых хозяйств, метеорологические данные 10 метеостанций Ставропольского края за период с 1973 по 1930 гг.

Изучение закономерностей проявления эпизоотического процесса проводили в соответствии с Методическими указаниям! по эпизо-отологическоцу исследованию (Еакулов И.А. с соавт., 1982).

Стадийность патологического процесса,- динамику титров антител к вирусу парагриппа-3 и микоплазмам изучали на специально сформированных группах животных (1200 ягнят и овцематок и 150

телят), которые находились под наблюдением до 5-8-месячного воз-" раста. При этом выполнено более 1500 гематологических исследований.

Бактериологическому исследованию подвергнут патологический материал от 1218 павших и вынужденно убитых ягнят, 180 теля"", 355 проб носовой слизи от больных и клинически здоровых животных. Вцпеленные культуры бактерий изучали по общепринятым методикам. Видовую принадлежность устанавливали по определителю Bergey (1974, 1984)-. Идентифицировано более 2800 культур.

Параллельно патологический материал от 420 павших и вынужденно убитых ягнят, 120 телят и 510 проб носовой слизи от больных и клинически здоровых животных подвергали микоплазмологичес-ким исследованиям в соответствии с "Методическими указаниями по ■ выделению, поддержанию и идентификации микоплазм" (1971), "Методическими рекомендациями по выделению, культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплаэм и уреаплазм" (1982), разработанными с нашим участием. Изучение свойств 415.выделенных культур прслодили в сравнении с референтными штаммами соответствующих видов.

. Вирусологические исследования проводили по общепринятым методам. Для выделения вируса парагрипп'а-З от ягнят использовали первично трипсинизированные культуры клеток почки эмбриона овцы, перевиваемую линию клеток почки овцы, диплоидные штаммы клеток легкого эмбриона овцы. Вирусологическим исследованиям был подвергнут патологический материал от 73 ягнят.

■ Уровень специфических антител определяли в серологических реакциях: связывания комплемента (РСК), диффузионной преципитации (РД1), непрямой гемагглютинации (РНГА), торможения гемагглю-тинации (РТГА), непрямом твердофазном иммуноферментном методе ■ (ИФА). Всего проведено более 11000 серологических исследований.

Для серологической типизации пастерелл готовили гипериммунные антисыворотки к референтным штаммам p.jauitocida серологических вариантов А, В, Д, Ей P.haemolytica серологических вариантов I-I2. Серотипизацию выделенных культур P.multocida проводили в РДП, РНГА и методом встречного иммуноэлектрофореза. Предварительно культуры подвергали типизации с помощью гиалуро-нидаэной и акрифлавиновой проб, рекомендованных G.Carter, Р. Subronto (1973), G.Carter, S.Rundell (1975). Серотипизацию культур P.haemolytica проводили в РНГА и в реакции агрегатгем-агглютинации (Оловников А.М., 1966).

Концентрирование токсина p.muitocida серологического варианта Д проводили методом улырацильтрации на мембрана* And cor. PV-IO'îi XíJ-50 и методом высашяштя суя^аток аммогак пси 702 насыщения в щелочной среде. Очистку гси&ша выполняли в два этапа, последовательно испольэу>! хроматогрй<',>ип на учы-рагеле /сА 44 к геяь-фшьтрацию на оефакриле 3 -200. Степень поэтапной очцег-ки контролировали методом электрофор??0. пялк^к^алатдиом голо. 'Голо кул яр пуп t'accy очищенного тмссйна оироделллтл ксзгодек эликтри-Форлла с помощью белкои-каркероа.

Альвеолярные и перитонеальные мякппЛпги иолу^мл*

n¿ «охиликн И>, У'тттоль С1073). Конц»ч»«чг7гг5 г'^гсро^аюь ииреде-но методике X.ÏÏeiler, E.V/eiXer (1965). Содержание красных цитоплазматических гранул (КЦГ) в макрофагах определяли методом люминесцентной микроскопии. В качестве флуорохрома использовали акридиновый оранжевый в конечной концентрации 1:150000. Результаты оценивали по среднему цитохимическому показателю (СЦЦ).

Хемилюминэсцентный анализ проводили на л^-шомд^ре - 125 Т

JCíH TU._n«£» fe"™,":) " соотл-лготлг:: ,;• jvoy:! чОг чи: л: pr:,;.yf.,-¡1Ди-:;п ■,, Kinry .'!' iK;.-J:JÍÍ"

О'уллл: b.c. г ПС,';®'., T?B'), Г е-.у.гл-л v -, v

. налоге 'i-'ti:cci;c;r. лц С'Хл' :: лг,,-,,-и" „лл

f'of'V.'r.'.r«; (ПХп), гсоторпо -лосллть л;„лл лл .у-'рлу.лл:;

Циюгоксичность P.haecoXytica определяли в макрофагалъной тест-системе с помощью Хл анализа по ПХл и по содержанию КЦГ.

Для оценки кгауногенеза и состоят« w».rvjn:T£î(. у пршштчх ■Kwrjrr- легюльломли pofcKiyî'o готмохотш »-л.лрапнн (мкрофагоп (FTi:>í) « pe«mwD блпстт?атеJop.««^ лицроцй*ов ÍPBTJO, PTÍÍM cra-шли в соответствия с "Ке«одическимк peitoitenpaijími во постановке реазещн торможения мигршдак макрофагов под о прозой" (B.C.

Гуткин с соавт., 1986). Результаты РШ оценивали по индексу миграции (ИМ). .

гог/йн.'-тгаеть cncsreai-чоП Хл л кллаьм/.т-лг« U/.t>); ■ ; лкси»'а.чыия интенсивность индуцированной Хл в мВ; п - число просчетов Хл;

Î - П?п"Л î:i'?' 'уПЛ'ЛТНЯ ГТ!!:;Л Хл О'ПЗСТЛ л или.

РБТЛ проводили в соответствии с "Методическими рекомендациями по постановке реакции бласттрансформации лимфоцитов крови и селезенки с использованием жидкостной сцинтилляционной радиометрии" (В.А.Горбатов с соавт., 1986). Результаты РБТЛ учитывали на счетчике радиоактивности Марк П Нуклеар, Чикаго (ИЛА) и выражали в виде индекса стимуляции (ИС).

В опытах использовано более 650 ягнят различного возраста , и овец, 45 телят, 150 кроликов, 190 морских свинок и более 12001 белых мышей.

Полученный цифровой материал обрабатывали, используя общепринятые методы математической статистики (А.М.Мерков, Л.Е.По-лякоё, 1974).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Влияние'климатических условий на проявление эпизоотического процесса при энзоотической пневмонии овец

В.А.Аликаев с соавт. (1952), М.Т.Терехина (1955), В.К.Па-ракин (1J56), А.И.Изатуллаев (1956), Н.М.Комаров, В.И.Шильников (1958), В.И.Леганцева (1958) и другие исследователи, отмечая, что в различных зонах стрлы энзоотические пневмонии овец отличаются сезонностью проявления, условно разделили эти болезни на "южные" и "северные". По их мнению причиной "южных" пневмоний является жаркая погода в летние месяцы, а причиной "северных" • пневмоний - различные нарушения ветеринарно-санитарных норм стационарного содержания животных.

В связи с изложенным, исследования по выяснению влияния климатических условий на возникновение и течение энзоотической пневмонии овец на юге страны проведены нами в Ставропольском крае, территория которого является уникальной по разнообразию климатических характеристик. Она условно разделена на 7 агроклиматических зон, отличающихся рельефом, температурными, влажност-Ными, растительными и другими показателями.

Северо-восточная часть края (I и 2 зоны) характеризуется засушливым, жарким климатом и представляет собой полупустынную полынно-злаковую степь. Сумма температур за период вегетации в этих зонах превышает 3600°, нередко достигая 4000° и более, а сумма осадков колеблется в пределах 150-250 мм, увлажненность территории (гидротермический коэффициент Г.Т.Селянинова - ГТК)

составляет 0,4 - 0,7. В летний период регистрируется до 90 жарких дней с максимальной температурой воздуха более. 30°С и минимальное количество дней с осадками более 5 мм в сутки.

По мере продвижения с северо-востока на юго-запад (3-6 золы) климатические характеристики меняются. Уменьшается сумма температур и количество жарких дней, увеличиваются сумма осадков и ГТК, изменяются почвашо-растительные показатели.

Седьмая зона, включающая предгорные районы Карачаево-Черкессии, монет быть определена как умеренно теплая, избыточно влажная. По метеостанции "Зеленчукская" среднегодовые показатели имелт* вледуюсзю значения: сумма температур за период вегетации составила всего лишь 2474°, сумма осадков за этот же период -527 мм, ГТК был равен 2,13. Среднегодовое количество жарких дней незначительно превышало 3, а количество дней с осадками более .5 мм - 30,5. Зона представляет собой предгорно-луговые степи, переходящие в субальпийские и альпийские луга, с богатой злако-во-разнотравной растительностью.

Эпизоотологический анализ свидетельствует о том, что в зоне Северного Кавказа, в том числе и п Ставропольском крае энзоотическая пневмония овец распространена повсеместно среди животных всех возрастных групп и пород.

В Ставропольском крае болезни органов дыхания ежегодно диагностируют у 5,62 - 8,97$ взрослых овец. Наивысшая заболеваемость (более 565 годового показателя) наблюдается р I полугодии, т.е. до наступления жаркой погоды.

Ежегодно от болезней органов дькшил погибает 1,46 - 2,32,7! взрослых овец-и подвергается вынужденному убога 1,47 - 2,07$. Суммарные потери колеблются в пределах 3,12 - 4,39*, что составляет 33-57^ заболевших и 29-377- всех певших я убитых взрослых животных. Наибольшее количество взрослых овец выбывает по этим причинам в I полугодии (53,78^), а максимум выбытия (31,45*) приходится на П квартал.

Еще

шире рас про е т ранрнн боттезтн^ оргпноп .ньг^н^л у ягнят. Ежегодно их диагностируют у 18,91 - 25,98^ молодняка. Сезонность заболеваемости ягнят резке отличается от сезонности заболеваемости взрослых овец. В I квартале заболеваемость ягнят бывает минимальной, затем постепенно возрастая, достигает максимального уровня в Ш квартале.

Ежегодно по крага от болезней органов дыхания погибает от

4,14 до 6,76% молодняка и подвергается вынужденному убою 1,61 -2,61$.'Суммарные потери варьируют в пределах 5,94 - 9,37%, что составляет 24-57% заболевших и 35,54 - 48,51% всей павших и убитых ягнят.

Наибольшее количество ягнят выбывает по причине пнезмо: лй в наиболее жарком Ш квартале года. При этом в наиболее жарких зонах края удельный вес падежа и убоя ягнят достигает 50-70%, в то время как в наименее жарких зонах этот показатель в Ш квартале не превышает 35-37%.

В то же время сопоставление показателей отхода ягнят по обследованным районам края в разрезе каждой агроклиматической зоны свидетельствует, что по мере уменьшения суммы температур и количества жарких дней и увеличения суммы осадков и ГТК суммарные потери ягнят от пневмонии постепенно увеличиваются и достигают в наименее жаркой зоне максимальных значений, превышающих минимальный уровень более чем на 40%.

С целью дальнейшего выяснения вопроса о влиянии климатических факторов на уровень потерь ягнят от болезней органов дыхания, метеорологические показатели 10 метеостанций Ставропольского края и данные о суммарных потерях ягнят от болезней органов дыхания в соответствующих районах были подвергнуты математико-статистическому анализу.

Исследовали влияние пяти погодных факторов: - сумма температур за период вегетации; Х^ - сумма осадков за период вегетации; Хд - гидротермический коэффициент - ГТК; Х^ - количество жарких дней - максимальная температура воздуха +30°С; - количество дней с осадками более 5 мм.

В качестве V следуемого показателя были взяты суммарные потери ягнят (пало и вынужденно убито) от болезней органов дыхания (У).

Для проведения анализа собранные статистические данные были усреднены в пределах каждого района. Усредненные данные использовали для оценки степени связи между каждым погодным фактором и исследуемым показателем. В качестве числовой характеристики степени связи между случайными величинами использовали выборочный коэффициент корреляции. Расчет проводили по стандартной программе (Г.Крамер, 1975) на ЭВМ ЕС-1022. Полученные значения выборочных коэффициентов корреляции проверяли на значимость по методике В.Е.Гмурман (1975)..Результаты расчетов'представлены в таблице I.

Таблица 1

Значение коээфициентов корреляции между погодными факторами и суммарными потерями ягнягг от болезней органов дыхания

Исслепуемый! _ "^^^кторы ......................

показатель Г ^ "! Xg —j j ^ j ^

У -0,641 0,556 0,614 -0,757 0,557

Как видно из таблицы, исследуе?*«!? показатель '•> (суммарное пг>т°ртт ягнят сг болезней оргянпп дыхания) коррелирум со всеми погодными факторами. При этом с факторами Xj и Х^ исследуемый показатель У коррелирует отрицательно, т..е. с уменьшением суммы температур и количества жарких дней потери ягнят от болезней органов дыхания увеличиваются, а с факторами Xg, Х3, Xg исследуемый показатель коррелирует положительно, т.е. с увеличением значений Xg, Хд'и показатель У тоже увеличивается.

Изложенное позволяет сделать вывод о том, что жаркая погода ке является причиной болезней органов дыхания у овец :з южной зоне страта. Более того, .?.аркую погоду не следует рассматривать даже как фактор, способстауятий гх ъози::ш;оаьн«ю. Каркая погода, по всей видимости, ускоряет гибель уь:е з«болезаих »инотшлс, что подтверждается увеличением удельного весе отхода лгнлт от пневмоний в И квартиле года в более жарких зонах (до 70% годовых потерь) по сравнению с менее ларкики пона'п:. Это положите согласуется с эксперименталыаш работами K.Ii .Плотникова (1965), показавшего,'что перегревшие больных пневмонией животных вызывает резкое нарушение гвзообисиа и их гибель.

При акали л с- докумеш.'чв учега екекескч«оРа отхода молсднака обслепо! ojüüzx хозяйсто по причине болезней органов дыхания установлено, что сезонность заболеваемости и отхода ягнят прямо коррелирует со срокам проведения окотной кампании. В отарах, где п^ктекузтся ; твя'л скос (декабрь-февраль), г.»н переболевя-гня и отхода изжита от пневмоний приходится на I полугодие. Пра O'i-OH увеличение кояи'??с?г-а ягнят зимнего срока рождения коррелирует с увеличением уровня потерь ягнят от пневмоний в I полугодии, В то г,<? врс;.!я в o'iapax, где проводится весенний окот (март-май) наибольшая заболеваемость и отход регистрируются в саше жаркие месяцы года.

Поскольку в хозяйствах Северного Кавказа до 85% ягнят полу' чают в марте-мае, максимум заболеваемости, и гибели ягнят от пне! моний в этом регионе приходится на Ш квартал года.

Аналогичные результаты установлены нами при обследовании отдельных хозяйств средней полосы России, где окот обычно проводится в октябре-декабре, а пик переболевания и отхода ягнят от пневмоний приходится на январь-март месяцы.

2.2.2. Этиологическая структура энзоотической пневмонии вец

В процессе изучения динамики энзоотической пневмонии было установлено,'что болезнь у ягнят развивается в три стадии, различающиеся клиническим проявлением, патологоанатомическими изменениями, составом выделяемой бактериальной микрофлоры.

Начальная стадия болезни характеризуется появлением кашля, серозно-слизистых истечений из ноздрей. У отдельных ягнят на-блцпали слезотечение и незначительное повышение температуры тела (40,1 - 40,3°С). Гематологические показатели в этой стадии болезни стаются в пределах нормы. При убое ягнят основные па-тологоанатомические изменения локализуются в верхних дыхательных путях (гиперемия слиз"стых оболочек носовых раковин, трахей и бронхов). В большинстве случаев макроскопических изменений в легких не наблюдали. У отдельных ягнят в верхушечных долях обнаруживали мелкие ателектазы, расположенные по ходу бронхов. При бактериологическом исследовании легких, средостенных лимфатических узлов бактерий не выделяли.

Вторая стадия болезни характеризуется резко выраженными признаками пневмонии: температура тела повышается до 41,0 -41,8°С, приступы ,*ашля усиливаются, наблюдается одышка, обильные серозно-слизистые истечения из ноздрей, увеличение общего количества лейкоцитов до 10-12 тыс/мм3, резкое угнетение. При вскрытии у ягнят обнаруживали катаральное воспаление верхушечных и краниальных участков диафрагмальных долей легких. При бактериологическом исследовании из пораженных легких постоянно выделяли культуры пастерелл.

В третьей стадии болезнь протекает хронически и проявляется резким истощением животных, выраженной одышкой, перемежающейся лихорадкой, лейкоцитозом (20-25 тыс/мм3). При патологоанато-мическом вскрытии диагностировали катарально-гнойную пневмонию и плевриты, а при бактериологическом исследовании, наряду с пас-тереллами, из пораженных легких вселяли до 10 различных видов бактерий.

Изложенное позволяло полагать, что в развитии каждой стадии болезни могут участвовать различные микроорганизмы: вирусы,, ыикоплазмн, бактерии.

2.2.2.1. Роль вируса парагриппа-3 з развитии энзоотической пневмонии овец

На первом этапе при исследовании сывороток крови овец из 29 хозяйств Ставропольского крал и Ростовской области с пара-гриппооиам антигеном в РТГА на? л совместно с К.Н.Соколовым было установлено широкое распространение вируса парагриппа-3 среди животных всех возрастных групп.

ЗйГСЫ в сеоии опытов нг еггецхпл^по сформированных группах овцематок и ягнят весеннего и зимнего окотов изучили динамику титров парагриппозных антител и проследили ее связь с развитием болезни. Установлено, что в отарах взрослых овец максимальный прирост парагриппозных антител наблюдается спустя 1,5 - 2 месяца после формирования отар и проведения случнсй кампании. У новорожденных ягнят до приема молозива антитела отсутствовал!. Через 3-5 дней в сыворотке крови 95Й ягнят п$р«пркяв«:чч?г а.ч?в?э-лл к.чтиля'ли в титрп" 1:8 - 1:255. 3 пеедедус^с:.: п:г; и ;:араграа-гояицу ?.»'тител постепенно стирали е.) а достигали {¡н!в:'.ш;лног* -на и гида а к 75-Р5 пос™? ро^ага:. С ¡¡г/а...;:, а ;.но .>;<■>.

а плттч, у ягнят пояплял-ксь керша:; нравна:::' ас-аалания органов дигания, поало "его уроггаь парг.гр:шпссг.:< аа-а-аол р^Зло (1:32 и п-.ие).

Из патологического нетеркплч, с.зл'.-г г,, оч- ¡и »ш ь начально!; <"Гп,т:и газг'ТЦ" '.'олазил, а;долены иаол;;."!^ ^иглфодивш-

цис как вирус парагриппа-3. Электронная микроскопий при идентификации вирусе яреттпт.чдеь Г,А.Налгюч^н.

З'л-с^'-пн:.:-! .-игу-ог. параар'а;аа--а п:'аьа ор^лиИ" Сиь^л-

цдокщП титр 10 + 0,22 Щ%о/мл' генаггл»™мруюций титр 1:32) провели экспериментальное заражение ягнят 2-месячного возраста. Вируесодержащий материал вводили ягнятам внутривенно (5 мл) и

о тсст.уя ¡млег.ь и трахею (2 п 3 ил соотнетс*вен~ ноК На ?-4 лень после аар-т-пкая у л'лшг 'стачали повышенную чувствительность трахеи, ее-роэио-слипистые истечения из ноздрей, у отдельных животных - слабо выраженный кааель и неэпа'шелыю«» повышение температуры тела. В сыворотке крови ягнят на 8 день после заражения выявлены специфические антитела в титре 1:64 и выше.

При убое ягнят на 8-10 сутки после заражения обнаружили гиперемию слизистых оболочек носовой полости, трахеи и бронхов, незначительное увеличение средостенных и бронхиальных лимфатических узлов. При гистологическом исследовании, проведенном проф. A.B. Акуловым, установлено набухание эпителия слизисть1". оболочек верхних дыхательных путей с признаками гиперсекреции, отек и инфильтрацию лимфоидными клетками собственной пластинки слизистой оболочки. У отдельных ягнят в легких были обнаружены мелкие очаги (в пределах од эго или нескольких ацинусов), в которых группы альвеол содержали в небольшом количестве серозный выпот, лейкоциты и клетки альвеолярного эпителия. В лимфатических узлах отмечали гиперплазию лимфофолликулов, активизацию эндотелия и ретикулярных клеток в синусах. Аналогичные по характеру, но слабее выраженные клинические признаки и гистологические изменения наблюдали у ягнят после аэрозольного заражения.

2.2.2.2. Роль микоплазм в развитии энзоотической пневмонии овец

Пр1. изучении роли микроорганизмов класса Mollicutea в респираторной патологии овец установлено, что частота вьщеления микоплазм и ахолеплазм от сольных животных в различных хозяйствах была неодинаковой. В хозяйствах, где пневмонии распространялись быстро, с широким, одновременным охватом поголовья, частота выделения микоплазм и ахолеплазм составляла 10-15%. И наоборот, в хозяйствах, где болезнь распространялась медленно, в течение 45 месяцев, процент выделения микоплазм увеличивался и нередко достигал 50. При этом частота выделения микоплазм и ахолеплазм из носовой слизи больных животных постоянно была более высокой, чем из пораженных легких. Преобладающими видами, выделенными из носовой слизи, были M.arginini, M.putrefaciena, M.capricolua, A.laidlawii , тогда как из пораженных легких до 60% изолятов составляли культуры вида М.ovipnsumoniae.

Анализ литературных данных свидетельствует о том, что выяснение этиологического значения многих видов микоплазм при ряде малоизученных болезней животных в значительной степени затрудняется недостаточной чувствительностью и специфичностью ис- ' пользуемых для этих целей иммунодиагностических тестов.

Исследования, проведенные нами совместно с И.А.Яблонской, показали, что в РСК, РИГА многие виды микоплазм реагировали по-

локитеяьно с гетерологичннми пторятлушгими сывороткаш всего лк£2» ни одно-два разведения-шге; '*тсч с. гсиахогичшгм . Ушит ял,

ЧТО оДИОЙ ИЗ ПрИЧИ» И О^О 07'.¿'ТОЧНОЙ еГИЛИфг.ЧНООТЙ .УК.-.ЗВН»1ИУ сорг>~ йг.гпч.^ских тйстоз лзляс;сл котчшинадая повег>чност1тт,г' структур

ёлками питательных сг.сд и ?рудиостнгм их полного уда--ешы, наш совместно с С.1:, Л^аьасье^игл « Г.л.1«м»точей был ря.я-рао'отан метоп оздин ттгспла^'оышх ак:;;г -¡ыи с п/л;;.--

'Дггг,-1|''С;1Г I о :] срЧ'Ягг.ч ¡.^^л'.н'л, о• ;01 о о11л-1::аг<. ¡шрсда;'; . : :/;сч (.' Сииоиак субстратов и не оказывающего влияния на структурные элементы митпл«™

п<> рл^^ .ииивих культур микоплазм прове-

ли исследования по выяснению локализации видоспецифических антигенных комплексов в различных структурах клеток и отработали непрямой твердофазный иммунопероксидазный метод (№8А), который испытали с гипериммунными сыворотками, полученными к четырем видам микоплазм, наиболее часто выделяемым при респираторных заболеваниях овец.

При сравнительной оценка "ЗА.

:1

')(' Г. П _ I.*; . ; îl4i!U "'-'

••»«гич.

•лл

При выборочном исследовании в Ш?А сыворотки «по* овцематок о ewrr.r~r.zi~i »¡к; ■ ч :„:аиь - к,".

•"■' ' ' ■ " ' ' — Ч< У .1!'' ,10,1 '.., J'J ¿р^чЛпЫх 1'рупп бЫ-

:_.„.«w<ini антитела только к îi.ovipneuœanian . С антигена»,я M.arginini, M.oapricolua и M.putreiaci«»ns по всех случаях получены отрицательные результаты.

.К, .lO.ÎOntït ÁLi . ЛнЯЛОГТТ*ПГ\~( i

»*• «>г.К:И*- , ;.у.г,ы Cv'f.r-

ч^'.гпружщих а m> а с яотиг<п!Г.» п.,-,* i-

,.ynuy r^opfüooba.;:;; б грип.сп хоэлйм-

ВР> г.пе рй^ее антител г; кикоптаэмчи ги-дзяепп не было. Сыворотки т;Г0Г1"- ^зят^с ы овцематок сразу после окота, а у ягнят до приема молозива, через 3-7 дней после рождения, а затем с интервалом 10-30 дней до 5-месячного возраста, исследовали в ИФА с ан-

тигенами четырех видов микоплазм. Установлено, что в опытных группах в течение всего срока наблюдения специфические антитела выявляли только с антигеном М.о71рпеитоп1ае . В контрольной группе во все сроки исследования антител к микоплазмам всех четырех видов не обнаружили.

До приема молозива в сыворотке крови ягнят опытных групп антитела к м.оу1рпеишоп1ае отсутствовали, через 3-7 дней после рождения они были выявлены у 91$ животных. Колостральные антитела сохранялись максимально до 35-дневного возраста. Активно приобретенные антитела к м.оу1рпеишоп1ае впервые были выявлены у ягнят в 65-дневном возрасте. В этот период клинические признаки болезни у ягнят отсутствовали. В последующем титры антител постепенно нарастали и достигали максимального значения (1:800 -1:1600) через 2-3 недели. У 10-20% положительно реагирующих животных в этот период появлялись первые признаки болезни: повышенная чувствительность трахеи, кашель. Остальные ягнята оставались клинически здоровыми. Однако у них при убое и гистологическом исследовании, проведенном проф. В.А.Шубиным, как и у ягнят с начальными признаками болезни, обнаруживали изменения, характеризовавшиеся, 5 основном, поражением бронхов. Просветы бронхов и бронхиол были заполнены серозным экссудатом, десква-мированными клетками эпителия, распавшимися нейтрофилами и лимфоцитами. Стенки бронхов утолщены, бронхиальный эпителий набухший. Отмечали также инфильтрацию слизистой оболочки бронхов по-лиморфноядерными лейкоцитами, десквамацию и дистрофию покровного эпителия. Пери бронхи аль но обнаруживали крупноклеточную пролиферацию и скопление клеток лимфоидного ряда. Кроме того у че-' которых ягнят с к 1ническими признаками болезни в отдельных аци-нусах или группе ацинусов альвеолы были заполнены серозным выпотом с лейкоцитами и слущивающимися эпителиальными клетками. ■ Альвеолярный эпителий находился в состоянии десквамации, межальвеолярные перегородки были утолщены на счет пролиферации клеток лимфоидного ряда. В бронхиальных и средостенных лимфатических узлах наблюдали изменения, характерные для серозного лимфаденита.

В последующем титры антител у ягнят постепенно снижались, однако у части животных болезнь прогрессировала и достигала максимального клинического проявления через 1,5-2 месяца после первичного выявления антител к М.оу1рпешаоп1ае.

При экспериментальном заражении безмолозивных ягнят 1,5-месячного возраста изолированными культурами U.ovipneunoniy.e наблюдали только кратковременное повышение-температуря тела до 40,1-'10,4°С. Однако при убое эивотшос на 8 сутки после заражешя гистологически диагностировали рашше стадии катарального бронхио-лита и ацинозной катаральной пневмонии.

При зкеперимеитальном заражении культурой ц.oiripaauAoniae ягнят 2-месячного возраста, отрицательно реагировавши •< в с я.гг.игепем этого вида ¡¿пкоала*!.:, также- наблюдали повышение температура тела и кашель у отдельных-животных. На 7-е сутки после инфицирования в сыворотке нр^и .тгппт с£п^ру*ааи ariï-иткля ч ».*. с^Г-З'-а^ав , о'итр котергг' :~р~стйл и достигал максимального уровня к 17 суткам. При убое ягнят на 20 сутки после заражения, гистологически диагностировали катаральный бронхит, характеризующийся скоплением в бронхах экссудата, содержащего большое количество клеток лимфоидного ряда, дистрофией и слуциванием бронхиального эпителия. Перибронхиалыю наблюдали пролиферацию клеток лимфоидного ряда, по ходу бронхов обнаруживали участки ателектазов. Из патологического материала реизолкровгли иохопгую .-.ульту-

Нри пзуч^чии гидегого г.'"с.-:'а.и;л ба::тсг,н", у'.-асгзул.^/.х Т-иЛ-

сд-'здни болезни из го; то г;', их и тра-м; в i 0',"'

клеляят^я P.h?.---:. u.î,y licrt . Р.да негд-лопггЗ'И W.-W.HCH-

чы: огягоя ки«чмонпи (1x3 - с;.:), расположенных по ходу бронхов, в 60-70$ случаев бактерии этого вила изолировали г "•сто"! Kvr.ïypo, в огтахь!":^ слузях и-; зцесяяли з асеоцхаш; с ьу.кс-япя-;т."Ч'Л!, ^.nuLtorruVi и lîranhvwliU . При более

обширных поражениях легких процент вьщеления чистых культур р. h.aeaolytica сокращается и увеличивается частота выделения культур этого вида в ассоциации с культур-ли r.Eultojio» (ЗС-Vû"). Слоду-т:- отмстить, ито чен острее протекает болезнь, тем л 'ожн: гнгок^м проценте кг- порагеизшх легких выделяются куль™;-рп p.Bul-tcitda . Чистые культуры итого вида пастерелл изолировал; из пораженных легких редко. При остром течет;;; болезни, кроме локального поражения легких, у 5-7% трупов обнаруживали изменения, характерные для септического процесса и выделяли культуры P.suL-toolda из крови сердца, селезенки, других паренхиматозных органов.-

При хроническом течении болезни из пораженных леших культуры пастерелл обоих видов вцпеляли преимущественно в ассоциации с разнообразной кокковой микрофлорой, коринебактериями и др

В ряде обследованных хозяйств во время окота наблюдали гибель ягнят в первые дни жизни. Агалактия у овцематок, воспа; з-ние пупочного канатика.и диареи являлись основными причинами отхода ягнят в этом возрасте. Однако в единичных случаях (1-35?) у 3-5-дневных ягнят при вскрытии обнаруживали пневмонии и из пораженных легких выделяли чис.ые культуры Р.Ьаеао1у1;1са.

Анализируя причины агалактии у овцематок, нередко диагностировали маститы. При исследовании секретов пораженных долей в острой стадии болезни вцпеляли чистые культуры р.1шето1у1;1са.

Следует особо отметить, что в нескольких хозяйствах Красно дарского и Ставропольского краев при высоком отходе новорожденных ягнят (20-25$) диагностировал!! остро протекающее заболевание, которое сопровождалось резким угнетением, одышкой, диареей и повышением температуры тела до 41 - 41,8°С. Заболевшие ягнята погг'бали на 3-10 сутки. При вскрытии трупов в грудной полости обнаруживали скопление серозно-фибринозного экссудата. Легкие были отечны и кровенаполнены, в отдельных случаях на поверхности легких и сердечной мышце выявляли кровоизлияния. У 50-70% павших ягнят отмечали катаральное воспаление тонкого отдела кишечника. При бактериологическом исследовании из крови сердца, селезенки и других органов были выделены чистые культуры Р.Ьаето1у1;1са . Эту болезнь, описанную в специальной литературе-под названием "септицемия новорожденных ягнят", в нашей стране ранее не диагностировали.

При изучении микробного пейзажа верхних дыхательных путей у здоровых ягнят в динамике было установлено, что до 50-60-дневного возраста бактериальный состав носовой полости был представлен грамположительной микрофлорой, в основном, сапрофитирукщими видами стафилококков, стрептококков, сарцин и др. Грамотрицатель-ные микроорганизмы, в том числе микоплазмы, в этот период обнаруживали редко. В дальнейшем состав микрофлоры верхних дыхательных путей изменялся в сторону преобладания грамотрицательных бактерий. Из носовой слизи клинически здоровых ягнят в 3-месячном возрасте наиболее часто изолировали культуры Р.Ьаешо1уг±са (до 80%), Вг.с^аггЬаНз (до 30/0, Вас1его1(1ез рпеитоаЗ-п^ев (25%), Ы1огососоиэ тис13^:1поаи.з (25%), Р.ти11;ос1с1а (10-15$)

ii ткоплазш (25-50$). ----

■ У imt?r? с клиническими признаками поражения органов .пихания частота выделения P.baeaolyfcica и P.isultocidu на носовой с лиан увеличивалась соответственно до 90-100 и 40-60'».

Изучение свойств культур P.haeaolyfcica , выделенных нами при пневмониях овец, септицемии новорожпенннх ягня™, мяститах у овцематок, а сравнении о рефороптлыш штаммами биотипов А и Т покапало, что л соответствии с определителем Ввг^ву все изолированные культуры обладай свойства!®, характерными п™ 4 С:_: рсллгимлй rpc;Wü<iv, «'iwfwpo n^rrifar::' пр.;

"¡л-л рилимах хранения, обладали высокой чувствительностью .к пенициллину.

Характеризуя некоторые свойства вцпеленных культур p.haeno-lytica , следует отметить, что па МПБ и МПА бактерии этого ви-.да растут скудно и погибают через 2-3 пассажа, хорошо развиваются на сывороточных питательных средах Хоттингера, обладают гемолитической активностью, не образуют индол, продотируют сероводород, сбтэакил»«* »о ККСл rtf Г, у, >,-'Л-ЛЛО"

оллл. ,.-.ллл :: ЛЛЛ; !ЛЛ;,-Л-Л Р '. 1 л , ¡. . л;"Л л Л ,11» <-,10-

. •! Ьгяд. лблгма'--.' Н(лл 'Лс1; 'лгллпнллльг' к плсллллилл!; л от.чг :: •>

КОЛ^Л'Лр хлраклч-гллумтся Л^лл-,,л V: и", ЛОЛОр-хш&ви.т кршза « хрупкой консистенцией. Радужность у НИХ отсутствует. й-форш хорошо окр0™!"—"тгя ..ЛЛ Н I •. Г..;!' ; лл- • ■ -¡н л'>' "■ Ь'рлм лоллиаилнолстг ЬЙ'ч'л), г; то <<рлмл :.лг л.ф-глп

; .лл..л пл, л ' ..лл . лл ; :,л л л^л ¡¿»лпсииг •

Свэ;ховыделенные культуры Р.1таеао1у1;1са не обладают пато-генностью для голубей, кроликов п морских свинок при подкожном, внутримышечном и внутри0??:::-?: ивтодеос ллрлх лл:г> п лоне ш:";;

'лкллриелхлгил клеток. Ноллч; ;л&и лгилсИ млселЛ сшлло 1С г то.ла ао нлллгЧнт при по^сяьом заражении в дозе ТО тллрД ршюбкьг клеток*

глр-лллнии кьшьП интраперитонеально в дозе 2,6 - 3 иярл микробы к клеток все ош пог-яба-зт в течение 2-3 -суток.

Культуры р.ши1Лое1йй , выделенные из пораженных легких ягнят, вызывали гибель всех перечисленных видов лабораторных животных при .подкожном, внутримышечном и других методах инфицирования. Однако их вирулентность варьировала. Большинство вцпелен-

пых культур характеризовалось умеренной или слабой вирулентностью При подкожном заражении в дозе 0,4 млрд бактериальных клеток культуры вызывали гибель белых мышей на 5, 7 сутки.

Культуры Вг.саШитаНз , выделенные из пораженных легких ягнят, не обладали патогенностью для лабораторных животных.

Результаты исследований по изучению патогенности культур Р.Ьае»о1у1;}.са для ягнят и овец показали, что подкожное, внутримышечное и внутривенное заражение ягнят до 15-дневного возраста в дозе 1,0 - 3,0 млрд микроб нх клеток вызывает септический процесс и гибель животных в течение 2-3 суток.

Экспериментальное заражение ягнят старше 2-месячного возраста аналогичными методами в более высоких дозах вызывает у животных только температурную реакцию в течение 2-3 суток. При убое животных через 8-10 дней после заражения патологоанатомических изменении не обнаруживали, исходных культур не выделяли.

Интратрахеальное заражение ягнят и взрослых овец культурами Р.Ьаетсйуиса в дозе 2-6 млрд бактериальных клеток вызывает, как правило, развитие пневмонии. Клинически у животных отмечали угнетение, температурную реакцию (40,8 - 41,5°С), одышку и кашель. При убое и патологоанатомическом вскрытий животных макроскопически обнаруживали поражение верхушечных, сердечных и отдельных участков диафрагмальных долей легких. В зависимости от сроков убоя гистологически диагностировали катаральную или ката-рально-гнойную пневмонию. При аэрозольном заражении гистологически в легких также отмечали изменения, характерные для катарального или катарально-гнойного вослаления.

Тяжелое течение болезни отмечали у ягнят всех возрастных групп при экспериментальном заражении культурами Р.Ьаедо1уиса в плевральную полость. Через 5-8 часов после инфицирования наблюдали резкое угнетение животных, одышку, повышение температуры тела до 42°С. Ягнята до 1,5-месячного возраста при минимальных заражающих дозах (2-3 млрд микробных клеток) погибали на 2-5 сутки. Увеличение дозы до 6-10 млрд бактерий вызывало гибель животных 5-6-месячного возраста. При вскрытии трупов наблюдали 'пневмонию и скопление в плевральной полости фибринозного экссудата. Гистологически обнаруживали изменения, характерные для катаральной пневмонии и фибринозного плеврита. Заражение ягнят аналогичного возраста культурами Р.Ьаево1уиса в'перитонеальную полость, даже в более высоких дозах, не вызывало у животных никаких клинических признаков болезни.

Экспериментальное заражение культурами P.haenolytieii лак-тируюцкх овцематок в молочную цистерну в дозе 1,5 млрд микробных, клеток сопровождалось угнетением гквоткттг, повшвиием температуры тела до 41,7°С, одшкой в первые дни после инфицирования, воспалением молочной-железы. При убое животных на 8-10 сутки во всех случаях в молочной железе обнаруживал'.! изменения, характерные для катарально-гнойного мастита. Кроме того, в легких гистологически вштзяяля аспноэные очаги острой катаральной пнез-мотпш з начальной стадии развития.

Изучение вирулентности P.cultocida для ягнят показало, что культуры, выявлении« из легтег бо.тып^: живо-гни*, при

iuViùcnHim ц рнутрк'ятгечпе» с ^.оае 3-3 млрд микроо-

ных клеток вызывают у ягнят 4-5-месячного возраста остропротека-кций патологический процесс, который завершался гибелью животных на 2-3 сутки. При вскрытии наблюдали гиперемию и отек легких и лимфатических узлов. Гистологически отмечали набухание и десква-мацию эпителия трахеи, начальные стадии катарального бронхита, серозный лимфаденит и серозный отек легких. В то же время заражение ягнят аналогичными «стодаыи в плав 1,5 млрд батгтерпй шш-

-члч чотчч" :..;.r.i,k0ipl't,;c:nio4 у; чтеченчч ;л:естчгчс v! г:члн,. р^чурнуч р-"ччччч ; ччччнче 3~ч îih>4î. У ?. ягнят чз ¿j инфицированных чрч v'oe ч чч^чч^чч пч о-в су.ни п:сле з;"-рлжчннй ч-лччн: эС.чачууч-::.: .-,гр,!!!йч<-чгг-!« счигл: катаральном о военалзш.; .¡о чоду бруихсс, , ч вилпили иг)г.'.енс-ния, тарактс^чьч; д¡лначхралчпечо -ьч.-

..чтч, У остолышх ягнят накроскопичбсиих из«оне»лй s льгки>. и органах не наблюдал1.!, л. при гпстологичгчкч'! исследоваши >' ч-.нч -л! только серозный отек ннтерстихщальной ткаш к ялоары, выраженные в различной степени.

Пит 1яггр.17рь'<вй;-оноп яараг.енш янда культураи* f .aultoci-в доа? 1,5 млрд бактерий тоже иаблгдюлк только кратковременное угнетение животных и температурную реакцию в течение 2-3 суток. У ягнят, убитых на 6-8 сутки после заражения, макроскопических изменений не обнаруживали, а гистологически отмечали отьк кьтеретициалыюй ткани и плевры. Увеличение дезы до Ь млрд бак. терий при ннтратрахеальнзм методе инфицироаагая сопровождалось развитием серозного стека'легких и гибелью ягнят.

Культуры Br.oatarrhalis не обладают патогенностью для ягнят при различных методах введения.

С целью окончательного выяснения этиологической структуры энзоотической пневмонии овец было проведено экспериментальное заражение ягнят (аэрозольно и интратрахеально) сочетаниями возбудителей, наиболее часто выделяемых на различных стадиях развития болезни: вирусом парагриппа-3 и пастереллами, Ы.ovipneu^o-niao и пастереллами, вирусом парагриппа-3, M.ovipneuraoniao и пастереллами.

Установлено, что вирус парагриппа-3, M.ovipneumoniae и их сочетание вызывают у животнг : только начальные клинические признаки болезш и воспалительные изменения слизистой оболочки верхних дыхательных путей и бронхов. Только у отдельных животных гистологически выявляли признаки воспаления в отдельных ацину-сах. В то же время заражение животных культурами P.huemolytica после предварительного инфицирования вирусом парагриппа-3, M.ovi-pneumoniae и их сочетанием постоянно сопровождалось резким обострением болезни и развитием катаральной и катарально-гнойной пневмонии. Аналогичные изменения развивались у животных, предварительно инфицированных вирусом, микоплазмате и их сочетанием, при заражении смесью культур P.haenolytica и P.aultoeida , тогда как при заражении ягнят только культурами P.aultoeida слабо выраженные изменения серозного и серозно-катарального характера в легких выявлши лишь у отдельных животных. -

Таким образом, проведенные исследования показали, что энзоотическая пневмония овец является сложным патологическим процессом, в котором на разных этапах развития участвуют вирус парагриппа-3, M.ovipneumoniae, P.baesi'ilytica и P.multocida . При этом ведущим этиологическим фактором непосредственного развития пневмонии являетп P.haemolytica.

2.2.3. Роль пастерелл в развитии респираторной патологии крупного рогатого скота

При изучении этиологической структуры массовых респираторных заболеваний у телят в крупных специализированных хозяйствах установлено, что эти болезни не имеют выраженной сезонности, распространены повсеместно, регистрируются чаще всего у молодняка I-6-месячного возраста и характеризуются одинаковым симптомоком-плексом. Суммарные потери от болезней органов'дыхания обычно составляют от 10 до 20-25%.

Заболевание начинается на 7-12 сутки после поступления телят в хозяйство и развивается в три стадии, которые различаются

особенностями клинического проявления, патологоанатомическими изменениями :г составом"выделяемых микроорганизмов.

Первая стадия характеризуется быстрым распространением, высокой заболеваемостью (до ?0~90?4), клинически и патоморфолопт-чески проявляется поражением верхшх дыхательных путей. При бактериологическом исследовании.материала от животных, убитых в етсй стадии болезни, из легких в единичных случаях выделяли только культуры миксплазм. Вирусологические исследования, проводившиеся параллельно H.H.Крюковым, З.Ф.Зудилиной, К.П.Юровым, A.C. S;~cpia:i2is и др., шжаныда, что н дтот период еслезп; "золпруш-ся преимущественно вирусы парагриппа-З, инфекционного ринотрахеита и др.

У 50-80% животных первая стадия болезни через 5-7 дней завершается клиническим выздоровлением. У остальных телят нарастают признаки поражения легких, развивается лейкоцитоз. При убое в этой стадии у животных диагностировали катаральную пневмонию, а из пораженных легких практически постоянно выделяли культуры r.haaKüiwtiп» биотипа A. s 30-50$ случаев и досоциптщи с кудь-тураг-щ p.mttcclia , рад,г с кикои&азкгод.

Тре.аа: стадия болезни протекает. хронически. При зскритки е;.':.а;>у*ив«та катаралъио-гкойнаа пленшчо а пдеакгш. Ира бо1*лераологачсскои исследовании, кроме гЛ:--.«/..о1у tiса, tocída п ^неоплазм, идотировали Stir. .ivogv-aja яц! alu , 3 tr. 1л о-Ua, Str.aitia, Str.íaecalia, S tüpli.&ureus , S.coli И др.

Из носспоЯ СЛ1И1 клинически адорошгс талят ^улыуры пает*--рол« и мякоплазмы изолировали в едашчшве случаях (8-10%). В процессе развития болезни частота выделения P.haemniy+.t<>>» ■■ cuitaeidi рсоко уес-лн'-З:наласа п нередко У соланых телнт составляла r.or-TucTCTBumo 80 и 50-60$.

Культуры шко плазм, выделенные из легких больных пневмонией телят и носовой слизи клинически здоровых животных, были представлены двумя вилами; M.avginini и x.tovirMniu . При заражении телят культурами этих вадоп инг/страхедлько, азрезольпо и интраплеарчльно заболовшже не воспроизводилось.

При экспериментальном заражении толят 2-3-месячпого возраста культурой P.cultooida интратрахечльно в дозе 5 млрд бактерий наблвдали одышку и температурную реакцию в течение 2-3 суток. При убое на 6 сутки после инфицирования у одного теленка из 4 в верхушечной доле легкого обнаружили ограниченный очаг пневмонии, •

из которого выделили исходную культуру. Однако у остальных.телят макроскопических изменений не наблюдали, а гистологически отмечали слабо выраженный отек интерстициальной ткани. В то же время двукратное увеличение дозы при интратрахеальном заражении вызывало гибель телят от острого серозного отека легких.

Интратрахеальное заражение телят 3-месячного возраста вьще-ленными культурами Р.Ьаето1у1;1.са в дозе 10 млрд бактериальных клеток уже через 7-10 часов вызывало температурную реакцию и рез' ко выраженную одышку. Клинич.гкие признаки прогрессировали, температура тела достигала 41 - 41,5°С, появлялся кашель, развивался лейкоцитоз. При убое телят на 7-9 сутки после заражения, на фоне максимального клинического проявления болезни, обнаруживал^ гиперемию слизистых оболочек носовой полости и трахеи, увеличение и отечность бронхиальных и средостенных лимфатических узлов, воспаление верхушечных, сердечных и краниальных участков диаф-рагмальных долей легких. Гистологически в легких отмечали изменения, характерные для катарально-фибринозного воспаления и компрессионного ателектаза. На фоне воспаления находили очаговые некрозы различных размеров.

Проведенные исследования позволяют сделать заключение о том, что у молодняка крупного рогатого скота в развитии пневмоний, протекающих на фоне ряда вирусных инфекций, участвуют г.Ьаеоо1у--Ыса и Р.вт11;ос1аа . При этом ведущим этиологическим фактором Является Р.1шето1уЪ1са.

2.2.4. Серовариантный состав и токсигенные свойства пастерелл, вьцхеленных при респираторной патологии овец и крупного рогатого скота

С целью выяснения возможности профилактировать участие Р. шиХ-Ьосхаа в развитии пневмоний у ягнят, в трех хозяйствах Ставропольского края иммунизировали коммерческими вакцинами против пастереллеза сельскохозяйственных животных более 100 тыс. ягнят 2 - 2,5-месячного возраста. Установлено, что использование производственных вакцин не исключало участия Р.ши3^ос1<1а в развитии пневмоний и не оказывало существенного влияния на течение болезни. При бактериологическом исследовании пораженных легких вакцинированных ягнят, кроме Р.Ьаето1у1;1са , в 35-50$ случаев были вьщелены культуры Р.шииос1<1а.

Поскольку в состав производственных вакцин включены только ытаммы P.Eultocida серологического.варианта_В, результаты про-ведеУшого эксперимента позволяй! полагать, что культуру p.œul-tocida , выделенные при пневмониях ягнят, относятся к другим серологическим вариантам. Это подтверждалось отсутствием протек-тивного эффекта производственной гипериммунной сыворотки против настередлеза при заражении мылей культурами этого вида, выделенными от ягнят и телят, больных янеклиш.

С целью выяснения серовариантной принадлежности, 200 кульТур P.nultoaida , вьщеленных из пораженных легких ягнят и те-»1», омяи поднвргнзти таткрсгетя;. При oí;:.-: "Olí исследо-

ванных культур отнесены к серологическим вариантам А и Д и только 10% - к варианту В.

Параллельно при серологическом типировании 140 культур р. baeaolytioa , вцпеленных от больных пневмонией ягнят и телят, установили, что из пораженных легких телят постоянно выделяются культуры, принадлежащие к I серологическому варианту биотипа А (A-I), а из легких ягнят - культуры 5 серологических вариантов г;тсгз бт:от;:", "анбодее чгпго ¡топи-рогали кулгтуун ;;ертлогкчес-

A-I (40^), А~\) \.'<i),:) и А -7 (I.-Ví). В с;„у-

•W.-. шиеляли куль-, урн А-2 и A-Í2.

Учпизгя сосбяенкя R.""r>h«s о г ¿1. '19У2>, A. 5»MôrIaad 'Л л1.(19ЯЗ) о токсичсскся псг.дейс.эи,. P.tïciû.-ciytici на мпкоэ-<п слеиуюп«' пткпр рз^оти 6v>y г -;,.чг-:,г ,.:n'iii,'5:;f,.c»'j>.íe бак- • геггич этого вида и их коппоьоьтов с *тъз<>ояг.1Кпг*а и ифигогеал:." нк-и мг^рофзгамп дпооратсрштх ;л1гх.7п:гс г, h-i:«»i . Т.:-'.-еич'.«к>:с с«?;-<*тва оцешвадй «стодсм цитологического анализа по кинетике красных цитоплазматических гванул, лвяу^тя^^ч

".hvhp».. макрофагов после очецн'Ь'чг.'Скси н;:.чук!!рг. к ь-OL-yirv ruf. . ли шкрофягов.

Установлено,, что клетки ï.haetaolytioa , их капсульная субстанция и фильтрат бульонной культура обладают выраженной ток-аддалстьч в «чкягггяп к~"707с оисгемк млюиукледрикч Фагоцитоз, проявляст;оЙся рнамительн». 4 скияепис»: цнтохпп-.чсгиого г.имттела, индекса хемилюминисценцип и гибелью макрофагов ч процессе контакта. Наибольшей токсичностью характеризовались фильтраты бульонных культур, а наименьшей - капсульная субстанция бактерий. Перитонеальные макрофаги лабораторных животных и ягнят обладали

в 1,5-2 раза большей фагоцитарной активностью в отношении клеток i.baemolytica по сравнению с альвеолярными макрофагами, но были более устойчивы к токсическому воздействию этого вида бактерий. Контакт бактерий с макрофагами в течение 3 часов сопровождался гибелью и разрушением 10% перитонеальных и более ЗС5 альвеолярных макрофагов, причем степень разрушения альвеолярных макрофагов была более выраженной.

Учитывая сообщения R.Rimler, X.Brogden (1986), P.Kielate-in (1986), H.Foged et al. ("988) и других исследователей о том, что серологические варианты А и Д P.multocida , вкдаеляемые при пневмониях у разных видов животных, продуцируют экзотоксин, 32 культуры этого вида, изолированные из пораженных легких ягнят и телят, исследовали на способность токсинообразования. Для этого бульонные культуры подвергали центрифугированию, супернатант фильтровали через миллипоровые фильтры типа us - 0,22 мкм. Токсические свойства фильтратов тестировали на морских свинках и белых мышах при внутрикожном и интраперитонеальном введении.

Установлено, что все 15 исследованных культур P.multoeida Серологического варианта А не продуцировали токсин, тогда как из 17 культур серологического варианта Д три культуры, выведенные от теленка и ягнят, обладали токсинообразующей способностью.

В дальнейшем было показано, что большая часть токсического материала в процессе культивирования секретируется в окружающую среду, а меньшая (I0-I5/O остается связанной с бактериальной клеткой. Концентрация исходного токсического материала и последующая очистка уменьшают его объем более чем в 300 раз и повыша--гот активность в 150 раз. Очищенный токсин p.multoeida серологического варианта " представляет собой термолабильный белок с молекулярной массой 120000 Д, чувствительный к действию трипсина, формальдегида и глутарового альдегида.

Гипериммунные сыворотки, полученные на кроликах к инактиви-рованному формальдегидом, концентрированному токсину, обладают нейтрализующими и превентивными свойствами. Антитоксическая сыворотка в разведениях до 1:16 полностью инактивирует летальную и дермонекротическую активность токсина при 2-часовом контакте.

Одновременно в опытах на белых мышах изучили превентивные свойства антитоксических сывороток. Контрольной группе мышей вводили нормальную сыворотку кролика. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Превентивные свойства антисыворотки к концентрированном}' токсину P.uultooida серологического варианта Д

Заражающая

дозр токсина

Разведения антитоксической сыворотки

i ¡ати вная

1:2

1:4

1:8

1:16

Контроль

5 Л%0 0/10 0/10 2/10 5/10 9/10 10/10

10 д%0 0/10 Х/Ю 4/10 9/10 10/10 10/10

количество пагЕЛ!:-: ицасЯ/количество ».таяеЯ в группе

Как видно из таблицы, нативная сыворотка защищала всех мышей от введения 5 ЛД50 и 10 ЛД^р токсина. При использовании последующих разведений сыворотки процент- защиты мышей постепенно снижался. Сыворотка в разведении 1:16 практически не защищала мышей от токсина.

В дальнейшем в серии опытов на мышах были изучены в сравнительном аспекте иммуногенные свойства концентрированного анатоксина, инлктивировангагс бактериальных клеток и смеси этих антигенов. Результаты опытов представлены в таблице 3.

Таблица 3

Иммуногенность концентрированного анатоксина, инактивированных .клеток и смеси этих антигенов Р.гаи11;ос1йа серологического варианта Д

Антигены

j Заражающая доза i токсина

Заражающая' доза культуры

[ 5 %0 i 10 Д%0 I 5 | 10 %0

Анатоксин Ö/20 0/20 3/20 9/20

Инактивированные бак- 0/20 9/20 0/20 5/20

териальные клетки

Смесь анатоксина и 0/20 0/20 0/20 2/20

бактериальных клеток

Контроль 20/20 20/20 20/20 20/20

количество павших мышей/количество мьшей в группе

Как показывает таблица, концентрированный анатоксин обеспечивает развитие у мышей выраженного антитоксического иммунитета. Однако иммунологическая эффективность анатоксина была значительно ниже при заражении мышей культурой p.multooida серологического варианта Д. Наоборот, препарат, приготовленный из инактиви-

рованных бактерий, обеспечивал более высокий процент защиты мышей при заражении культурой и менее высокий - при введении токсина. По сравнению-с первыми двумя препаратами смесь анатоксина и инактивированных клеток обеспечивала напряженный антибактериальный и в"титоксический иммунитет.

2.2.5. Характеристика эпизоотического процесса

Болезни органов дыхания у овец и молодняка крупного рогатого скота, представляющие собой сложные инфекционные процессы, развиваются в строгом соответствии с общими законами эпизоотологии. Источником возбудителей вирусных инфекций для молодняка мелкого и крупного рогатого скота являются инфицированные и больные .взрослые животные, а источником M.ovipneuaoniae для ягнят -инфицированные, больные и переболевшие овцы. Заражение обычно происходит воздушно-капельным путем при непосредственном контакте инфицированных, больных и переболевших животных со здоровыми. Распространение i.haeaolytica и P.r.ultocidu среди молодняка связано с широкий носительством бактерий этих видов у клинически здоровых и переболевших животных.

Подчеркивая особенности эпизоотического процесса, следует отметить, что вирусные инфекции характеризуются быстрым распространением, в то время как микоплазменная инфекция распространяется медленно.

Все возрастные группы мелкого к 1срупного рогатого .скота восприимчивы к перечисленным возбудителям. Однако наиболее чувствителен молодняк в возрасте до I года. Следует отметить, что возрастная чувствительность коррелирует с уровнем колостракьно-го иммунитета и в то же время часто определяется общей резистентностью животных. Неполноценное кормление, различные нарушения норм стационарного и пастбищного содержания, отрицательно влияющие на развитие и резистентность животные:, во многих случаях определяют интенсивность эпизоотического процесса.

Важным предрасполагающим фактором развития пневмоний у ягнят является отъемная кампания. Как правило, после отъема ягнят болезнь протекает более остро, с более широким охватом поголовья разного уровня развития и упитанности незначительно большим процентом отхода.

Длительные транспортировки, перегоны, особенно при неустойчивой, дождлибой погоде, новые условия кормления и содержания

животнчх при комплектовании откормочных хозяйств, импорте живот-" ных, некоторое хронические болезни тоже являются предрасполагающими факторами развития пневмоний.

В ряда хозяйств с высоким уровнем отхода ягнят от пневмоний у овец диагностировали анаплазмоз. При изучении динамики болезни у молодняка установили, что инфицир: ;ание ягнят проис-гедкт пссло ввгсна на пастбище, а тяжесть течения болезни зависит от возраста «ододияка, в котором происходит заражение ана-плазмами. Ягнята, родившиеся в осенне-зимний период, в течение 5-6 мАппиеп гтойта^ого ссдсргшш хороа» развивал»*»* и в посля-.нуугоем у типе протопал, как у взрослых овец, в виде

анаплазмоноснтельства. Парязитемия была слабо выражена, гематологические показатели, за редким исключением, оставались в пределах нормы, переболевание не отражалось на развитии и упитанности ягнят. В то же время у молодняка, роившегося весной, сразу после выхода на пастбище, отмечали высокую степень поражен-ности эритроцитов анаплазмами, анемию и резкое снижение привесов. Ягнята отставали в росте и развитии, нмевд низкую упитан-', ность. Особс.шо тяжело протекал анаплазмоз у ягнят мясо-гаерст-ьи пород весеннего окота, среди которых на фоне анаплазмоза к 7-месячному возрасту нер<уга° погибало от нневмошш до 50% молодняка.

Многие исследователи, отмечая разнообразие форм болезней, вызываемых у животных пастереллами, подразделяют пастереллезы на перви'пше и вторичные и с читак \ что при пневмонии у крупного и мелкого рогатого скота пастереллы играют роль вторичных, секундарных инфекций. Основными же или "нарушающими" возбудителями, по их мнения, является у крупного рогатого скота - вирусы, у овец - микоплазмы к вирусы. Б то же время, подчеркивая ведущее зшхчеше пастерелл в непосредственном развитии пневмоний, эти же исследователи называют болез-ъ "пневмонийнкм пасте-реллезсм". С нашей точки зрения, в изложенном имеется ряд противоречий. Если рассматривать заболевание в целом, то можно согласиться с утверждения?.™ о том, что в большинстве случаев начало патологического процесса обуславливает вирусы и мяхоплазмн, и они первичны в развитии всего процесса, но не пневмоний. Эти инфекты, вызывая поражения верхних дыхательных г/утей и бронхов, позволяют р.ЬаетоХугхоа - первичному возбудителю пневмонии у крупного и мелкого рогатого скота - проникнуть в легкие и выз-

вать пневмонию. Это подтверждается работами G.Carter (1974), E.Oibbs at ftl. (1984), других исследователей, результатами наших экспериментов, в соответствии с которыми культурами P.hae-eolytioa при моноинфицировании у телят и ягнят воспроизводятся первичные пневмонии. В то же время проведенные исследования позволяют согласиться с мнением'многих авторов о вторичной роли Р. uultocida в развитии пневмонии у овец и молодняка крупного рогатого скота. Однако отождествлять роль пастерелл этого вида, через понятие секундарные инфекции, с ролью других видов бактерий, часто вцпеляемых на последней стадии болезни, вряд ли возможно, так как этот вид бактерий, по нашему мнению, является определяющим в тяжести течения и исходе болезни."

Наше понимание механизма развития пневмонии согласуется с сообщениями G.Hepry (1984), который считает, что шгфекщш, предшествующие разштию пневмоний, совместно со стрессовым:! факторами, усиливая друг друга, угнетаю? защитные механизмы дыхательного тракта и обеспечивают проникновение P.haeiaolytica в легкие, где бактерии этого вида цитотоксическии действием повреждают альвеолярные макрофаги,-колонизируются и вызывают развитие пневмоний. Наши наблюдения свидетельствуют о том, что различные стрессовые факторы, нередко самостоятельно, обуславливают проникновение в легкие P.haeHolytica и последующее развитие пневмоний без участия вирусов и микоплазм.

В связи с изложенным считаем, что широко используемое в зарубежной литературе название "пневмонийниз пастереллезы" или "пневмонийная форма пастереллезов" наиболее полно отражает сущность патологического процесса, подчеркивает• ведущее этиологическое значение пастерелл, позволяет четко дифференцировать бо- -лезнь от геморрагической септицемии, конкретизирует направленность лечебных и профилактических мероприятий.

2.2.6. Лечение телят и ярн/гг при пневмониШис формах • пастереллезов

С' целью подбора наиболее эффективных лекарственных средств при пневмонийных формах пастереллезов телят и ягнят была опреде- 1 лена чувствительность культур p.haeeolytioa и p.nultooid& к различным антибиотикам. Установлено, что оба вида бактерий обладают наибольшей чувствительностью к пенициллином (0,05 + 0,02- ' 0,1 + 0,09 ед/мл), тетрациклина!.» (0,3 + 0,02 - 1,5 + 0,28 ед/ыл), 1

яевомицетину (0,5 + 0,02 - 0,7 + 0,03 ед/мл), несколько меньшей-к макролндам и амидоглюкозидЕЛ! (3,5 + 0,33 - 4,5 + 0,27 ед/мл).

_•. 3 дальнейшем в хозяйствах на группах"телят, сформированных по стадиям болезни, испытали с лечебной це ъю антибиотики тетра-циклакозого ряда. Лечение проводили в соответствии с наставлениями по применению этих препаратов. Установл'-'о, что применение тетрацикдинов в первых двух стадиях болезни позволяет сохранить Е?ех подвергавшихся лечению телят. При атом отмечено, что применение антибиотиков в первой сго,:мп болезни не даст быстрого лечебного аффекта, но профилактирует развитие второй стадии патологического процесс», ч та арсмя ::ак приаеаенив гпиу прчпчретоя ю второй стадии оопезни рсс:;о улучшает ейцее состояние животных уже после 1-2 инъекций. Лечение телят антибиотиками тетрацикли-кового ряда в третьей стадии болезни является малоэффективным.

При испытании пенициллинов и антибиот..ков тетрациклиновога' ряда в овцеводческих хозяйствах установлено, что в силу несвоевременной диагностики болезни и некоторых'организационных трудностей лечебная эффективность этих препаратов при пневмониях у ягнят обычно не превышает 70-75%. Однако систематическая изоляция заболевшего молодняка на лечебно-кормовые пункты резко сокращает заболеваемость в отарах и в сочетании с лечебными мероприятиями уменьшает потери ягнят от пневмоний более чем в 2 раза.

Учитывая большую трудоемкость и продолжительность лечебных мероприятий с использоваш?ем обычных форм антибиотиков, в дальнейшем была изучена чувстЕИтелы-гзть Р.Ьаешо1у-иса, Р.тиХгоеАйа и м.от1рпеиаоп1ае к комплексным лекарственным формам пролонгированного действия, разработанным под руководством академика Л.Х.Саркисова. Установлено, что левоэритроциклин, левотетрасуль-фин и дибиомицин. ПЭГ ингибирую? развитие пастерелл и микоплазм в концентрации 0,07 -2,5 ел/мл. При этом отмечено, что культуры р.1шето1уг1оа обладают большей резистентностью к указанным лекарственным формам. Левотетрасульфин ингибирует развитие культур Р.ииЗЛоеМа в концентрации 0,064 + 0,12 ед/мл, а кинималь-ная ингибируюцая концентрация этого препарата для культур р.ьае-ию1уг±оа составляет 0,505 + 0,132 ед/мл.

Испытание пролонгированных лекарственных форм' иа телятах в хозяйствах Московской, Тульской областей и Ставропольского края показало их высокую лечебную эффективность. Двукратное введение препаратов с интервалом 5 дней обеспечивает сохранность 97-98%

заболевших телят. Необходимо отметить, что лечебное применение этих препаратов даже при хроническом течении болезни было эффективным. В колхозе им. Балахонова Ставропольского края при лечении левотетрасульфином 130 больных пневмонией телят, в том числе 40 - с хроническим течением болезни, было сохранено 126 телят (97$).

В дальнейшем, совместно с И.С.Парфеновым, отработали лечебные дозы левоэритроциклина, левотетрасульфина и дибиомицина ПЭГ при пневмонийных формах пастереллезов у ягнят и испытали их эффективность в шести хозяйствах Ставропольского и Краснодарского краев на 10 тыс. молодняка.

При двукратной лечебной обработке с интервалом 5 дней указанные препараты обеспечивали сохранность 95-97$ больных ягнят. В колхозе им. Балахонова обработали левотетрасульфином 1592 больных пневмонией ягненка. Из этого количества всего пало и было убито 67 ягнят (4,2$), в то время как в контрольной группе из 1472 ягнят погибло 268 (18,2$).

С целью испытания профилактической эффективности указанных препаратов, в период появления в отарах первых случаев болезни органов дыхания, проводили обработку всех ягнят двагкды с интервалом в 5 дней, что позволило резко сократить заболеваемость и отход животных в последующее время. В ОПХ "Отрадненское" с профилактической целью было обработано 2870 ягнят, в т.ч. 1320 -левотетрасульфином, 1270 - левоэритроциклином и 280 - дибиомици-ном ПЭГ. Контролем служили 2597 ягнят, не подвергавшихся обработке. Из 2870 обработанных ягнят в течение 6 мес. заболело'пневмониями 95 (3,3$), в то время как из 2597 контрольных заболело 439 (16,9$). '

• Одновременно испытали влияние раннего отъема ягнят от овцематок на уровень заболеваемости и отхода молодняка от пневмоний. Отбивку ягнят провели в 2-месячном возрасте, до выхода животных на пастбище. В последующем в течение летнего периода содержали молодняк стационарно, в строгой изоляции от взрослых овец. Сочетание этих технологических мероприятий с профилактическим использованием левотетрасульфина позволило предохранить ягнят от анаплазмоза и парагриппозной инфекции и сократило потери молодняка от пневмоний в 2,5 раза.

Учитывая, что индивидуальное лечение в условиях крупных хозяйств является трудоемким, совместно с Д.Д.Полозом и И.В.Сидо-

ровым провелены исследования по разработке новых лекарственных препаратов для аэрозольного применения с цель» лечения телят и ягнят пои респираторных болезнях,

В работе использовал!?: тшатизон - 2?- чН раствор метисазо-ка, гтоний, додецогай, флурениэид. Установлено, что изатизон обладает противовирусной активностью, которая -начительно попылает ся прл ого сочетании о порер*ностно-активннми веществами: это-г.си и лодецениям. 3 с во г» очередь, атоний обладает выраженным бактериостатическим и бактерицидным действием в отношении пястр-рел.т п рдда других вииов часто выделлсмых при пневмо-

Аналогичными свойствами обладает флуоренизид. Минимальная бактериостатическая доза флуренизида для пастерелл составляла 8-12 мкг/мл, а бактерицидная - 20-30 мкг/мл. Аэрозольное применение изатизона в сочетании с этонием при респираторных болезнях телят в откормочных хозяйствах обеспечивает терапевтическую эффективность в пределах 87%. При ежедневном аэрозольном применении флуоренизида в сочетании с этонием в течение 5-7 дней терапевтическая эффективность составила Сочстенное аэрозольное применение изотвзона с ".тошном и флуренкгкда о зтониек повиляет терапевтическую эффективность этих прспя.ротор по 95"-'.

2,2,7. Иммуногоннооть культур биотипа А

Учитывая, что работа с культурами Р.йаало1у-Ыса ранее в стране не проводилась, следующий отап был посвящен изучению им-муногенности бактерий этого вила.

Установлено, что методика исследования колоний Р.ЬаеаоХу-Ъ1са в косоггроходящеч опете го Н.С.Акатовой (1565) позволяет быстро характер!зовать состояние выделенной популяции, ориентировочно судить о во Бирулешности и иммуногенности. По характеру свечения выявлено 4 типа колоний. Колонии I типа представляют собой переходные БЕ-формы, а остальные типы характеризуются признаками 8-форм. По нультуральнш, морфологическим и биохимическим свойствам культура из колоний всех типов р.ьаеяо1уисз не имеют существенных различий', однако по вирулентности лля белки мышей и иммуногешюсти отличаются друг от друга. Культуры из колоний 3 и 4 типов вызывают гибель шшей в дозе 1-1,5 млрд бактерий, а культуры из колоний I и 2 типов - 4-5 млрд. Наибольшей иммуногенностью характеризуются культуры из колоний 4 типа.

Их иммуногенность превышала иммуногенноеть культур из колоний первых двух типов более чем в 2 раза и на 10$ была выше, чем у культур из колоний 3 типа.

На питательных средах культуры P.haeaolytica . сохраняют исходные свойства Яе более 10 пассажей. Пассажи культур на белых 'мышах не обеспечивают повышения их вирулентности, тогда как последовательные пассажи культур на ягнятах до 15-дневного возраста повышают их вирулентность. Ягнята, зараженные культурами 34 пассажей, погибают в 2 раза быстрее животных, зараженных культурами I пассажа.

В дальнейшем были отработаны методы и режимы инактивации культур P.haeaolytica . В опытах на белых мышах испытана иммуногенность бактеринов, приготовленных из инактивированных бактерий с различными адьювантами. Установлено, что эмульгированные образцы бактеринов при двукратном введении обладают наивысшей иммуногенностью и обеспечивают защиту 60-65$ привитых мышей при 100$-ной гибели контрольных животных.

Параллельно была испытана иммуногенность клеточных компонентов P.haomolytica . В опытах на белых мышах установлено, что клепочные оболочки, цитоплазма обладают высокой токсичностью и низкой иммуногенностью. По сравнению с ними капсульная субстанция была более нммуногенной. Следует отметить, что иммуногенность и токсичность капсульной субстанции зависят от метода ее получения. Образцы капсульной субстанции, полученные по методу Е.С.Сташславского (1971), были нетоксичными и обладали низкой иммуногенностью. Капсульная субстанция, полученная с использованием I М раствора радоната калия, обладая выраженной иммуногенностью, имела высокую токсичность. Капсульная субстанция, полученная по методике с.Carter (1953), не обладала токсичностью и была наиболее иммуногенной, обеспечивая защиту 45-50$ при витых мышей при экспериментальном заражении.

С целью повышения «(.мутагенности бактерина из инактивированных клеток P.haenolytica , в последующем, изготовили и испытали в опыте на 330 белых мышах 6 вариантов бактеринов различной композиции, с использованием добавок, функционально относящихся к факторам патогенности бактерий. Для оценки ишуногеннос-ти бактеринов на 7 сутки после прививки, 7 и 14 сутки после ре-иммунизации по 5 мышей из кадпой группы убивали и исследовали с использованием ряда тестов, характеризующих состояние клеточно-

го иммунитета. Результаты оценивали на основании хемилюминес-центного анализа перитсиеадъных макрофагов и лимфоцитов с.-еле-згт'т.-и, роакЦии торможения тграцкл макрофагов и рпакгии бласт-трпнг.ук'рющи лимфоцитов селезенки. Результаты иссл^оезшй на 14 сутки после реиммунизагин представлены в таблице 4.

Таблица 4

Оценка «шулогзнности бактеринов из культуры

я опчгпч in vitro на 14 день поело рмг/'лугмзэпии

№ !- Индекс хемилюминесненгтии n0p::70J;siUi»iiae ' лимфоцит?? макрофаги ! селезенки г ! РТММ 1 W ! ! ГГТЛ , инднкг j стимуляции

J Ь I 0,98 1,15 49 1,22

J? 2 1,29 .3,38 53 1,50

3 1,16 2,76 43 1,47-

№ 4 0,92 . 0,91 . 34 . 1,07

№ 5 1,19 5,53 ' 86 1,65

№ б ' 0,98 3,25 ■50 ' 1.32

Ксг.трол:» 0,77 0.. 55 5 0,<Л

Дашь-'1 таблицм 4 евнлотс. льстнуют 0 том, что наиболее высо-

кие показатели по всем •» использованным тостам получены з группах .чьизей, привитых бпктеркагмк 2 и 5. Эти данные подтверждены опытами прямого заражения иммунизированных мкяей культурой

. Установлено, что "ммунологическая эффективность базового бактерина I, приготовленного из мнактивированных клеток Р.11аето1уЫса , составляла 66% и на 12 и 9% соответственно была ниже иммунологической эффективности препаратов № 2 и 5, которые в качестве дополнительных добавок содержали капсульную субстанцию бактерий. 3 дальнейших исследованиях использовали препарат, приготовленный по прописи бактерина № 2.

С целью определения оптимальной иммунизирующей дозы на следующем этапе тремя различными дозами эмульгированного бактерина ил культуры Р.Ьзепо1у(.1са прививали внутримышечно ягнят 3-месячного возраста. Препарат вводили дважды с интервалом в 2 недели. Ка каддую-дозу использовали по 10 ягнят. Через 3 недели после реиммушзации всех опытных и 10 контрольных ягнят разделили на 2 группы и заразили интраплегрально суолетальной и летальной дозами культуры Р.ЬаетоЗ-уЫса.

Установлено, что оптимальная иммунизирующая доза бактерина -предохраняла ягнят от заболевания при заражении сублетальной дозой возбудителя и от гибели - при заражении летальной дозой. У животных контрольных групп через 3-4 часа после заражения отмечали угнетение, повышение температуры тела, одышку. Состояние контрольных ягнят, зараженных сублетальной дозой, начало улучшаться на 5-6 сутки после заражения. Все контрольные ягнята, зараженные летальной дозой, пали в течение 4-6 суток.

В дальнейшем на ягнятах провели исследования по оценке им-муногенности бактеринов, приготовленных из культуры P.haemoly-tiea , в зависимости от метода аппликации антигена. Для внутримышечной прививки использовали эмульгированный бактерии, а для аэрозольной - бактерии,, приготовленный по аналогичной прописи без адьюванта, с добавлением 10% глицерина.

В опыте использовали 28 ягнят, разделенных на 4 группы: I группу ягнят иммунизировали-внутримышечно, дважды с интервалом в 2 недели, П группу ягнят прививали внутримышечно, а реим-мунизировали аэрозольно, Ш группу ягнят иммунизировали двукратно аэрозольно, 1У группу использовали в качестве контроля.

Иммунное состояние привитых животных предварительно оценивали в опытах in vitro на основании хемилюминесцентного анализа альвеолярных, перитонеальных макрофагов и лимфоцитов селезенки, реакции торможения миграции макрофагов и реакции бласттранс-формапци лимфоцитов крови. На 20 день после реиммунизации по 3 ягненка из каждой группы убили и исследовали указанными тестами.

Функциональную активность альвеолярных и перитонеальньгг макрофагов оценивали по максимальной интенсивности спонтанного доминолзависймого хемилюминесцентного ответа макрофагов. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5

Хемилюминесцентный анализ .макрофагов иммунизированных ягнят на 20 день после реиммунизации

Исследованные группы

Хемилюминесцентный ответ (мВ; X + sx, п = 3)

Альвеолярные макрофаги¡Перитонеальные макрофага

I группа П группа Ш группа Контроль

78,6 + 11,5 178,3 + 21,2 183,5 + 27,0 2,93+ 1,6

10,27 + 1,5 20,63 + 2,71 3,89 + 0,5 1,21 + 0,19

Как гид!.о из таблицы, функциональная активность макрофагов " тпт^ярпрсзаиних ягнят была -тачительно выше, чем у контрольных животных» Метаболическая активность альвеолярных макрофагов п I группе была в 26 раз, а во П и Ш группах - более чем в 60 раз пиле, чем в контроле. Соответственно функциональная активность п^рктон^алькых макрофагов была в 10, 20 и 3 аза.вше, чем в контрольной группе. Няипнсгаеб метаболической активностью харак-

си-одались альвеолярные макрофаги нанят паи двукратной аэрозольной и комбинированной иммунизации, тогда как у перитонеаль-п«!.< !.;а.1'ро.Т/агов наивысшую актинноетт- при •"""лнгхрзза.и-

кей, а наименьшую - при двукратной аэрозольной аппликации.

При исследовании методом хемилюминесцентного анализа с использованием специфических индукторов наивысшую Функциональную активность лимфоцитов селезенки (ИХД - 1,41) наблюдали в группе ягнят, иммунизированных комбинированно, а низкий показа-

тель (ИХД - 1,04) - у иммунизированных аэрозольно.

Одновременно альвеолярные и перитонеальные макроФаги опытных и контроль них ягнят исследовали в реакция тормст.ния миграции макроФ>лгов (табл.о).

Таблица 5

Р'П.'М нммугшзнропашш/ ягнят на 20 сутки посяч ренмчунизации

Вид макрофагов 1 Пс°Це>!? »«»южения шгрищи (X +-х,-

____________! I группа 1 П группа ! В группа ! контроль

Альвеолярные 20,4^ 1,1 44,0+1,5 41,7+1,9 11,2+0,9 Иеритонеальные 26,3+0,6 24,5+1,8 20,5+1,3 9,0+1,5

следует из таблицы, а присутстгаи специфического антигена во всех группах и»/"ущ?!фОванннх ягнят процент торможения миграции макроФагов превышал 20, что свидетельствует о выраженности клеточного иммунитета у животных п^и каждом из использованных методов иммунизации. Наиболее высокий процент торможения миграции альвеолярных макрофагов (44,0 + 1,5 и 41,7 + 1,9) наб-лпяали у -"ивотных П и Ш групп, иммунизированных комбинированно и аэрозольно. В то же время, наиболее высокий процент торможения миграции периоснеальньрс макрофагов (26,3 + 0,6 и 24,5 + 1,8) отмечали в группах ягнят, иммунизированных внутримышечно и комбинированно, а наименьший (20,5 + 1,3) - у животных, иммунизированных аэрозольно.

Параллельно оценивали функциональную активность лимфоцитов ягнят опытных групп в реакции бласттрансформации, для чего ис- -пользовали специфический индуктор - капсульную субстанцию p.hae-molytica . Установлено, что наиболее высокий индекс стимуляции бласттрансформации лимфоцитов (5,4) наблюдали у ягнят, привитых -комбинированно, а наиболее низкую способность лимфоцитов образовывать бластные формы (1,7) отмечали у ягнят, иммунизированных аэрозольно.

Комплексная оценка результатов тестирования факторов клеточного иммунитета позволяет считать, что наиболее выраженную иммунобиологическую перестройку вызывал комбинированный метод иммунизации ягнят. Данные, полученные в опытах in vitro , были подтверждены контрольным заражением ягнят в плевральную полость летальной дозой культуры i.haenolytica . Все 4 ягненка контрольной группы пали в течение 3-5 суток. В Ш группе ягнят, иммунизированных аэрозольно, заражение сопровождалось тяжелым пе-реболеванием и гибелью 2 животных (50$). В I и П опытных группах все ягнята остались живы. У ягнят, привитых дважды внутримышечно, признаки поражения органов дыхания начали развиваться на 3 сутки, в то время как ягнята, иммунизированные комбинированно, в течение 10 суток наблкдешя оставались клинически здоровыми. Только у отдельных животных отмечали кратковременное повышение температуры тела до 40,2°С.

В дальнейшем под нашим руководством аспирантом Г.А.Фоменко была изучена динамика формирования системного и местного Ьасреторного) иммунитета у ягнят, иммунизированных как и'в предыдущем опыте, бактеринаш из культуры P.haeaolytica . Всего использовали'24 ягненка, которых разделили на 4 группы. Ягнят I г-руппы иммунизировали двукратно внутримышечно, ягнят. П группы - комбинированно, а ягнят Ш группы - двукратно аэрозольно. До иммушзации и в различные .сроки после иммунизации в носовых секретах и сыворотке крови 'опытных и контрольных животных исследовали уровень общего белка, количественное содержание иммуноглобулинов различных классов, уровень специфических антител, фагоцитарную активность лейкоцитов и превентивную активность сывороток крови.

Установлено, что у животных, иммунизированных комбинированно, на 15 сутки после реиммунизации уровень sigA в носовой слизи увеличился с 0,75 + 0,12 до 0,92 + 0,09 мг/мл (Р< 0,05),

титры специфических антител в носовых секретах и з сыворотках крови соответственно возросли с 0,50 + 0,10 4,67 + 0,35

1й2 (Р < 0,05) и с 3,67 + 0,20 1&2 До 8,50 + 0,25 1§2 (Р<0,05). В эти же сроют повысились уровни х^о а 1(,. в сыворотке крови, увеличилась фагоцитарная активность лейкоцитов крови. Сыворотка крови ягнят этой группы обладала выраленнкм' превентивными свойствами и обеспечивала защиту всех зараженных мышей.

У ягнят, иммунизированных внутримышечно, уровень 31еА. и титры антител в носовых секретах, по сравнению с исходными данными и показателями контрольной группы, практачлетят не изменялись, В то ле Бремя показатели системного иммунитета изменялись идентично предыдущей группе.

Наоборот, в группе ягнят, иммунизированных дважды аэрозоль-по, отмечали достоверное увеличение уровня Э^А с 0,72.+ 0,0В до 0,90 + 0,10 мг/мл и титров специфических антител в носовых секретах с 0,50 + 0,26 1^ до 3,67 + 0,66 1ё2 (Р~< 0,05). Уровень сывороточных антител, превентивная активность сыворотки крови и фагоцитарная активность лейкоцитов .в этой группе были ^значительно ниже, чем п первых двух группах.

Материалы проведенные исследований свидетельствуют о том, что иммунизация ягнят бактеринами из культур р.Ьаепо1у1;3.ов обеспечивает иммунологическую перестройку, характер и интенсивность которой зависят от метода аппликации антигена. Комбинированная иммунизация (внутримышечно и аэрозольно) является наиболее эффективной, так как обеспечгзает формирование и системного, и местного (секреторного) иммунитета у привитых животных.

2.2.8. Специфическая профилактика различных форм пастереллезов сельскохозяйственных животных

Анализ зарубежной и отечественной литературы, материалы исследований, проведенных наш, В.Б.Федотовым и другими сотрудниками лаборатории бактериологии ШЭВ в течение последних 10-12 лет, свидетельствуют о том, что по сравнению с серологическим

вариантом В Р.пч11;ос1йа , серологические варианты А и Д этого вида бактерий значительно шире распространены в природе и могут вызывать первичные и вторичные пастереллезы у широкого круга различных видов животных (езинъи, крупный рогатый скот, овцы, пантовые олени, кролики, норки, кошки, морские свинки и т.д.).

Учитывая, что гипериммунные сыворотки и вакцины против пас-

тереллеза животных разрабатывались в прошлом только на основе серологического варианта В p.multocida , без учета иммунологической гетерогенности бактерий этого вида, становится очевидным несовершенство биологических препаратов, изготавливаемых в нашей стране в настоящее время. Это положение подтверждается анализом эпизоотической ситуации по пастереллезу животных в стране, проведенным за ряд лет лабораторией общей эпизоотологии Е1ЭВ, в соответствии с которым несмотря на постоянное увеличение количества прививаемых животных, число неблагополучных пунктов и заболевших животных имеет тенденщю к нарастанию.

Учитывая широкое распространение и большую экономическую значимость болезней, вызываемых у животных p.multocida , следующий этап наших исследований был посвящен разработке нового поколения биологических препаратов против различных-форм пастерел-леза животных с использованием всех серологических вариантов бактерий этого вида.

С целью селекции наиболее иммуногенных штаммов было изучено более 250 выделенных культур P.mltooida различных серологических вариантов. При этом оценивали характер роста и морфологию колоний на питательных средах, тип свечения в косопроходящем свете, морфологию и жизнеспособность бактер1Й на разных этапах и npi различных режимах культивирования, биохимические свойства, вирулентность и иммуногенность.

Учитывая высокую степень изменчивости культур P.uultocida, сопровождающуюся снижением их вирулентности и иммуногенности, ■ была разработана питательная среда, которая обеспечивала деблокирование ферментных систем, ответственных за синтез полисаха-ридной цепи капсульного антигена, и способствовала повышению вирулентности и иммуногенности бактерий этого вида.

Проведенные исследования позволили селекционировать"наиболее иммуногенные культуры P.uultooida серологических вариантов А, В, Д, часть которых депонирована в качестве^ производственных штаммов.

Используя селекционированные штаммы P.sniltocida серологических вариантов А, В и Д, согласно технологии, применяемой в настоящее время в. биофабричном производстве, были получены-на волах гипериммунные сыворотки к каждому серологическому варианту отдельно и к смеси трех вариантов. Изготовленные сыворотки контролировали в РИГА и на лабораторных животных. Установлено,

что сыворотка, полученная к смеси трех вариантов пастерелл, по ' споцяфп'шости и превентивной активности не уступала сывороткам, полученным к ка^пому серологическому варианту п отдельности, и по активности соответствовала требоватлям ь..струкции.

Исходя из того, что использованная технология изготовления гипериммунной сыворотки имеет ряд существен!" : недостатков, в последующем, оптимизировали ре:.тамн культипировашя и инактивации п,..:т<?уелл, испытали ряде схем гипериммушзации хивотшк, которые отличались дозой и составом вводимых антигенов, способом ввеле-к::л, наличием различных ял-т-г^отгстз.

По разработанной оптимальной технологической схеме в дальнейшем, в условиях опытной базы на волах была получена гипериммунная сыворотка к культурам р.ти11;ос1аа серологических вариантов А, В и Д, которая после соответствующих контролей, комиссионно была испытана в эксперименте на поросятах, ягнятах и телятах.

Поскольку пневмонийные формы пастереллезов у телят чаще всего наблюдаются в 1,5 - 2-месячном возрасте и в их развитии участвует большое количество сЬактсров, активная слеттифическая профилактика этих болезней является сложной проблемой, В связи с из-локеникм была разработана технология изготопло™* комплексной гипериммунной сыворотки против основ1гах игейекционнчх агентов, участвующих в развитии болезни, и сальмонелл, поскольку пневмонийные формы пастереллчяов у телят указанного возраста нередко протекают одновременно с сальмонеллезами. Для гипериммунизации волов использовали ассоциированную вирусвакцлну против парагрип-па-3 и инфекционного ринотрахэита крупного рогатого скота, инак-тивированные антигены из культур Р.аа1гос1йа серологических вариантов А, В и Д, культуры р.Ьае.ио1уНса серологического варианта А-1, культуры з.йиЬИп и з. ЪурЫ^игЗ-ип . При этом была изучена совместимость перечисленных антигенов, отработана оптимальная схема иммунизации, контроли.

На "Способ получения сыворотки для лечения и профилактики ластереллеза сельскохозяйственных .тавотных" и "Способ получения гипериммунной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скота" получены положительные решения ЗНИИГПЭ.

По материалам проведенной работы подготовлена и утверждена юрмативно-техничеекая документация на опытно-промышленное про-:зводство указанных гипериммунных сывороток. На Орской биофабри-е изготовлено 4 серии этих препаратов общим объемом более 1300 л.(

В настоящее время гипериммунные сыворотки испытываются в широком производственном опыте в хозяйствах Московской, Ульяновской, Тульской, Липецкой, Мурманской, Смоленской, Самарской областей, Кабардино-Балкарии.

Резулг таты испытания профилактической эффективности гипериммунной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скота в ряде хозяйств Московской и Самарской областей представлены в таблице 7.

Таблица 7

Результаты испытания гипериммуной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скота с профилактической целью

Пало, убито ¡Дополнительные

-1—-—| среднесуточные

голов| % ¡привесы (г)

Группа

Количество! животных !

Заболело

—г

¡ГОЛОВ)

Опытная Контроль

Опытная Контроль

Опытная ■Контроль

92

68

471

687

920 670

1,08 2,94

4,67 11,93

1,95 11,19

36

56

114

Совхоз "Доры"

6 6,52 I II 16,17 2

Совхоз "Гжельский"-

64 13,58 22 229 33,33 82

Совхоз "Трудовой"

98 10,65 18 183 28,21 75

Как видно из таблицы, двукратное введение гипериммунной сыворотки в профилактических дозах на 3-4 и 10-12 дни после пос- ' тупЛения телят из хозяйств—поставщиков в откормочное хозяйство обеспечивает, по сравнению с контролем, сокращение заболеваемости в 2 - 2,5 раза, снижение .гибели, вынужденного убоя и сдачи санитарным браком в 2,5 - 5 раз, а также увеличение среднесуточных привесов в течение первого периода откорма.

. .Лечебная эффективность гипериммунной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скот коррелирует со стадийностью развития патологического процесса. Применение'сыворотки в первой и второй стодиях болезни обеспечивает сохранность 93-96% заболевших телят. При использовании сыворотки в третьей стадии болезни лечебная эффективность препарата снижается.

Сравнительное испытание лечебной эффективности гиперигслун-ной сыворотки против, респираторных.заболеваний крупного рогатого

a.'iO'iа и гипериммуной онпоротки против пара.гриппа-3, вирусной ди---«■or.it. шЛекппонного зинетраагита и адокок.^./спой «¡йекции крупного рогатого слота, прочеденное з совхозе "Лечонга" на телятах 2 -Л-мonsT'iHor'o возраста, заказало более внес 'а лечебную а ^активность первого препарата (табл.8).

ïa алкал t:

Результатi: игеиггшка лечебной зф&ективности сыворотки против респираторных заболеваний телят п рптзулю "Г"аттангам оС аол^

....... ■•■ :-1-

i j Результаты лечения

Препараты, использованные ¡Количество; Выздоровело ' Убито

для лечения j телят j -Д^уШ"^».---

j ' ¡голор.' % j голов j %

Сыворотка против респира- 36 34 94,5 2 5,5

торных заболевании крупного рогатого скота

Сыворотка против ПГ-3, 34. .28 '82.4 6 17,6

МРТ, вирусной диареи а аденовирусной инфекции

Aïîthбиотики, сульфанил- 22 15 68,2 7 31,8

амиды, витамины и т.л.

Разработана схема со^етанного применения изатизона с этони-ем в аэрозольной Форма, гиперкммунной сыворотки против респира--горных заболеваний крупного рогатого скота и флуренизида с отопи ем в аэрозольной Форме гтри пневмонийных Формах пастереллезов телят в специализированных откормочных хозяйствах. Испытание этой схемы в совхозе "Гжельский" на телятах 1,5-месячного возраста позволило сохранить всех животных в течение первого периода откорма.

Параллельно с гипериммунными сыворотками разработана инакопированная вакцина против пастереллеза животных, вызываемого серологическими вариантами Л, В и Д P.muitocida . Отработаны

технологии изготовления и контроля вакцины, подготовлена и утверждена нормативно-техническая документация на опытно-промъглленное производство. На Сумской биофабрике изготовлены опытно-промьп-ленные серии препарата, которые в настоящее время испытываются в экспериментальных и проиэводс-венных условиях на крупном и мелком рогатом скоте, свиньях, пушных зверях.

з. вывода

1. Каркая погода в летний период времени в южной зоне страны не является непосредственной причиной возникновения энзиити-ческой пнев-онии у овец. Сезонный подъем заболеваемости ягнят определяется сроками проведения окотной кампании и возрастом животных. Наркую погоду следует рассматривать как фактор, способствующий более быстрой гибели заболевших пневмонией животных.

2. Респираторные болезни у ягнят и телят развиваются стадий- ! но. Выделены 3 стадии болезни, которые отличаются особенностями клинического проявления, локализацией и характером патологического процесса, частотой изоляции различных микроорганизмов.

3. Энзоотическая пневмония у овец является многофакторным инфекционным процессом, в развитии которого принимают участие вирус парагриппа-3, Ыусор1аапа оу1рпеииоп1ае, Р.ЬаешоХуИса И Р.юиЛЛос^аа . Вирус парагриппа-3 и ii.oylpneuaonJ.ae вызывают начальные стадии болезни, которые характеризуются поражением ели- . эистых оболочек верхних дыхательных путей и бронхов. Ведущее этиологическое значение в развитии пневмоний принадлежит Р.Ьааяо1у-■Ыса биотипа А.

4. У молодняка крупного рогатого скота основным этиологическим фактором пневмоний, развивающихся на фоне ряда вирусных инфекций (парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота и др.), является Р.11аеио1у1;1са биотипа А.

5. В развитии пневмоний у овец участвуют серологические варианты А-1, А-2, А-?, А-9, А-12 Р.1шешо1уиоа и серологические варианты А и Д Р.ти11;оо1<1а , а у крупного рогатого скота - серологический-вариант А-1 Р.11аето1уЫса и серологические варианты А.и Д ■ Р.ти11;оо1<1а.

6. Впервые в стране диагностирована, описана и экспериментально воспроизведена септицемия новорожденных ягнят, вызываемая Р.Ьаето1уЫса, биотипа А.

7. Разработаны методы лабораторной диагностики различных форм пастереллезов животных, включающие вцпеление культур р.оиХ-гьс!<1а и Р.Ьаепо1уиса, их идентификацию и при необходимости -постановку биопробы.

8. Впервые в стране у культур Р.аи11;оо1<1а серологического варианта Д вцделен и изучен токсин белковой природы. Установлено, что до 90$ токсического субстрата секретируется в культуральную жидкость, остальная часть остается связанной с бактериальной

клеткой. Выделенный токсин представляет собой термолабильный бе- ~ лок"с молекулярной массой I2U00U Д, чувствительный к действию трипсина, формальдегида и глутарового альдегида.

9. Анатоксин P.multocida серологичес.. ,го варианта Д стимулирует у белых мышей выраженный антитоксический иммунитет. Ги-перимму«ные сыворотки, полученные к анатокси у, обладают нейтрализующими свойства!® и превентивной активность».

10. Альвеолярные макрофаги лабораторных животных и ягнят, по сравнению с перитонеальными макрофагами, обладают меньшей сбаго-цятярнсЯ актишюстья в отношении P.hsonolytlca и менее устойчива it токсическому воздействию бактерий этого вида. Хемилюминес-центный анализ и реакция лизосом альвеолярных и перитонеальных макрофагов могут быть использованы в качестве экспресс-методов, оценки цитотоксичности культур P.haemolytica.

11. Определен комплекс клеточных и серологических тестов (реакция торможения миграции макрофагов, реакция бласттрансфор-мации лимфоцитов, хемилюминесцентный анализ иммунокомпетентных клеток, реакция непрямой гемагглятинации), позволяющий in vitro контролировать динамику иммунного ответа и иммунологическую эффективность бактеринов, приготовленных из культур P.haenoiytica.

12. У животных, иммунизированных бактеринами из культур P.haenolytica , иммунное состояние обеспечивается взаимодействием клеточного, гуморального и секреторного факторов. Наиболее выраженную иммунобиологическую перестройку обеспечивает комбинированный метод иммунизации животк х (внутримышечно и азрозольно).

13. Комплексные лекарственные формы на полимерной основе (левоэритроциклин, левотетрасульфин и дибиомицин ПЭГ) обладают высокой лечебной и профилактической эффективностью при пневмо-нийных формах пастереллезов у свец и молодняка крупного рогатого скота. Применение этих препаратов с лечебной целью обеспечивает сохранность 94-975Í заболевших живот"ых. Профилактическая обработка животных в начальный период развития болезни сокращает общие потери от пневмоний в 2-3 раза.

14. Селекционированы производственные штаммы P.multocida серологических вариантов А, В, Д и P.liaeaolytica биотипа А, серологического варианта A-I, которые были использованы при разра-Зотке нового поколения биологических препаратов против различных ! гарм пастереллезов животных.

15. Разработана лечебно-профилактическая гипериммунная сыворотка против различных форм пастереллеза сельскохозяйственных животных, вызываемых Р.тШ;ос1|1а серологических вариантов А, В и Д.

16. Разработана многокомпонентная лечебно-профилактическая гипериммунная сыворотка против вирусно-бактериальных респираторных болезней крупного рогатого скота. Ее применение с профилактической и лечебной целью в специализированных откормочных хозяйствах лозволяет сократить заболеваемость телят в 2 - 2,5 раза, снижает потери животных в 2,5 - 3 раза и обеспечивает увеличение привесов в течение первого периода откорма.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДИОКЕНИЯ

Разработаны и утверждены ГУВ МСХ РФ "Методические указания по лабораторной диагностике пастереллезов животных и птиц" (№ 22-7/82 от 20.08.92).

Научно обоснованы мероприятия по лечению и специфической профилактике при пневмонийных формах пастереллезов овец и молодняка крупного рогатого скота.

Разработана технология производства и контроля гкпериммун-ной сыворотки для лечения и профилактики респираторных заболеваний крупного рогатого скота. Утверждена нормативно-техническая документация на опытно-промышленное производство препарата (Временное наставление по применению сыворотки и 1У 10-09-116-91 от 31.05.91 г.). ' „

Разработана технология производства и контроля гиперикмун-ной сыворотки для лечения и профилактики пастереллеза животных, вызываемого Р.ди11;ос1аа серологических вариантов А, В, Д. Ут-' вержпена нормативно-техническая документация на опытно-промышленное производство препарата (Временное наставление по применению сыворотки и ТУ 10-19-73-30 от 20.10.90 г.).

Разработана технология производства и контроля инактивиро-ванной эмульгированной вакцины против пастереллеза животных, вызываемого Р.юи1-боо1<1а серологических вариантов А, В, Д.. Утверждена нормативно-техническая документация на опытно-промышленное производство препарата (Временное наставление по применению вакцины и ТУ 10-09-80-90 от 21.06.90 г.).

Материалы проведенных исследований включены в следующие нормативно-технические документы: "Методические указания по выделе-

низ, культивированию, поддержанию и идентификации микоплазм" (!"., 1971), "Методические рекомендации по выделению, культивированной идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреаплазм" (М., 1932), "Методические рекомендации по изгот -влению специфических, сьшороток и их применению для серологической типизации р.тиЛдо-оЫз." ('.!., 198*1), "Методические рекомендацк по серотипиэации Р.таНосШа и р.ьаатоХуЬХоа ", рассмотрены и одобрены кет«ксси-О СШЬ? "Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней ,*»вотшх" (1069), "Временное наставление по применению левотет-расульфина при бронхопневмонии телят, поросят и ягнят", утвете*-почо руо Госагрспро^а СиР "йрсмзшоо пас далекие по при-

менецкг) лсвооратроцимлина при бронхопневмонии телят, поросят и ягнят", утверждено ГУВ Госагропрома СССР (1986), "Временное наставление по применению изатизона и этония в аэрозольной форме при вирусных респираторных заболеваниях мс..одняка крупного рогатого скота и лошадей", утверждено ГУВ Госагропрома СССР (1989), "Наставление по применению левотетрасульфина в ветеринарии", утверждено ГУВ при Госкомиссии по продовольствию и закупкам Совми- ■ на СССР (1991).

5. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАСОТ, ОПУБЛИКОР.АНШЛ ПО МЛ1Ш1АЛЙ1 ДИССЕРТАЦИИ

1. Коваленко Я.Р., Сидоров М.А., Шегидагич З.А., Яблонская И.А. Методические указания по выделению, культивирования, поддержанию и идентификации микоплазм. - М., 1971.

2. Коваленко Я.Р., Сидоров 1л.А., Шзгадевич 3, А. Выделение микоплазм от телят, больных пневмошя.ти//Б»лл.В513В, 1971, вып.П,

. с.35-37.

3. Шегидевич Э.А., Сидоров М.А., Яблонская И, А. О метода:; выделения и культивирования мпкоплазм//Бюлл.ЕИЭВ, 1972, вып. 13, с.64-68.

4. Сидоров М.А., Коваленко Я.Р., Шегидевич Э.А., Яблонская И. А. Методы идентификации и серологической типизации микоплазм, вьшеленшх от жкеотных//Еюлл'.ВИЭЗ, 1972, вып. 13, с.68-73.

5. Сидоров М.А., Коваленко Я.Р., Шегидевич Э.А. Изучение рота микоплазм в этиологии бронхопневмоний телят откормочных хо-зяйств/ТБшл.ВИЭВ, 1972, вып.13, с.21-26.

6. Коваленко Я.Р., Шегидев"ч Э.А., Яблонская И.А. Использование тилана и антибиотиков тетрациклинового ряда при лечении

массовых пневмоний телят в крупных откормочных хозяйствах//Бюлл, ВИЭВ, 1973, вып.16, с.33-37.

7. Коваленко Я.Р., Сидоров М.А., Шегидевич Э.А., Яблонская И.А. Изучение этиологии массовых пневмоний телят//Ветеринария, 1974, № 5, с.56-58.

8. Ya.Kowalenko, U.Sidorov, I.Yablonskaja, E.Shegid6vich. Vergleichendes Studium einiger biologischer eigens chaften verschiedener Mykoplasmaarten. Archiv für Experimentelle Veterinärmedizin. 1974. 28. 1. 135-141.

9. Коваленко Я.Р., Сидоров М.А., Шегидевич Э.А., Яблонская И.А. Микоплазмозы животных. - М., 1976. 303 с. (монография).

10. Шегидевич Э.А. Методы вцпеления и идентификации мико-плазм и Ь-форм бактерий//1 Тр.ВИЭВ, 1977, т.46, с.8-12.

11. Шегидевич Э.А., Соколов М.Н. Респираторные заболевания ягнят//0вцеводство, 1978, № 6, с.35-37.

12. Соколов М.Н., Надточей Г.А., Шегидзвич Э.А. Выделение вируса парагриппа-3 от ягнят//Ветеринария, 1978, й 3, с.49-51.

13. Соколов М.Н., Шегидевич Э.А., Акулов A.B. Экспериментальный парагрипп у ягнят//Ветеринария, 1978, К' 10, с.46-49.

14. Коваленко Я.Р., Шегидевич Э.А., Яблонская И.А., Соколов М.Н., Писаренко Н.И. Микоплазмы и их роль в патологии сельскохозяйственных животных//21 Всемирный ветеринарный конгресс. М., 1979, № 3, с.73.

15. Шегидевич Э.А., Писаренко Н.И., Соколов М.Н., Яблонская И.А. К вопросу об этиологии энзоотической пневмонии ягнят в южной зоне страны// В сб. "Болезни овец и меры борьбы с ними". Чита, 1980, с.124-125.

16. Писаренко Н.И., Шегидевич Э.А., Тухватшина A.C.,Септицемия новорожденных ягнят, вызываемая P.haemolytica //В сб. "Болезни овец и меры борьбы с ними". Чита, 1980, с.80-81.

17. Шегидевич Э.А., Семина Л.Ю., Ряснова A.B. Влияние анаплазмоза на развитие и течение энзоотической пневмонии ягнят//

' Тр.ВИЭВ, 1982, т.56, с.93-105.

J.8. Афанасьев В.Н., Надточей Г.А., Шегидевич Э.А. Способ получения микоплазменного антигена. - Авторское свидетельство-№ 955574, 1982.

19. Коваленко Я,Р., Шегидевич Э.А., Яблонская И.А., Гроше-ва Г.А. и др. Методические рекомендации по выделению,.культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреаплазм. - М., 1982.

20. Сидоров М.А., Шегидевич Э.А., Федотов В.Б., Рустамов Ю.М. Питательная среда для вырахцивания P.nuitocida , - Авторское свидетельство № И00303, 1984.

21. Сидоров H.A., Федотов В.Б., Иегид-иич Э.А., Агаева Э.М., Руствиов Ю.М. Методические рекомецшщии по изготовлению типоспе-цк£ичес«их сывороток и их применение для ее -логической типизации P.multocida . - М., 1984.

22. Шегидевич Э.А., Зелотов В.Б., Крючков В.Я. СеротиповоЛ состав P.multocida при пневмониях ягнят/УТр.ВКЭЗ, 1983, т.58, с .15-19.

23. Шегидевич 3.А.,'Федотов З.Б., Чернушкина И.В. Идентификация P.taultocida сероварианта Д//Ветеринария, 1985, !' б, с.63.

24. Шегидевич Э.А. Состояние и перспективы изучения пасте-реллезов сельскохозяйственных животных//Тр.ВИЭВ, 1984, т.60,

с.58-63.

25. Крюков H.H., Семенюта А.Т., Шегидевич Э.А. Микробный' пейзаж и иммунологическая реактивность у телят, выращиваемых в условиях промышленной т ехн о л о гии //Тр. ВИ ЭВ, 1984, т.60, с.15-23.

26. Писаренко Н.И., 'Шегидевич Э.А. Респираторные заболевания ягнят//Ветеринарные проблемы животноводства Ставрополья (рекомендации). Ставрополь, 1982, с.59 - 61.

27. Писаренко Н.И., Шегидевич Э.А. Роль пастерелл при респираторной патологии ягнят в хозяйствах Ставропольского края// В сб. "Диагностика, профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных в зоне Севе; 'ого Кавказа". Новочеркасск, 1984, с.68-73.

28. Шегидевич Э.А., Афанасьев В.Н., Калмыкова Л.И. Некоторые биологические свойства P.haeaolytica в зависимости от типа свечения колоний//Тр.ВИЭВ, 1985, т.63, с.80-83.

29. Кадошников В.И., Горбатов В.А., Шегидевич Э.А., Афанасьев В.Н. Интенсивность индуцированной биегемилгаминесценции крови ягнят при экспериментальном пастереллезе//Биохемилюминесценция

в сельском хозяйстве. М., 1986, с.46-48,

30. Коромыслов Г.Ф., Месараш Я., Штипкович Л., Трошева Г.А., Дьяконов Л.П., Надь Г., Шегидевич Э.А., Яблонская И.А. Микоплаз-ми в патологии животных. - М., 1987. 255 с. (монография).

31. Шегидевич Э.А., Кадопников В.И., Горбатов В.А., Востря-ков А.П., Гуткин B.C. Способ определения токсичности бактерий вида P.haeaolytica . - Авторское свидетельство № I4I3963, 1988.

32. Шегидевич Э.А.Щубин В.Л., Федотов В.Б., Афанасьев В.Н.т-ДороФеева С.Г., Сальникова И.А. Экспериментальное заражение телят полевой культурой Р.Ьаеио1уиса //Бюлл.БИЭВ, 1988, вып.66,

с.39-40.

33. Кс-мыкова Л.И., Езепчук Ю.В., Шегидевич Э.А., Навасар-дянц Д.Г. Выделение и некоторые свойства дермонекротического токсина Р.пи1-(;ос1<1а /Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1991, № 8, с.29-32.

34. Шегидевич Э.А., Юдин А.И., Федотов В.В., Фоменко Г.А., Коломнина Г.Ф. и др. Способ получения гипериммунной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скота//Положи-тельное решение ВНИЙГПЭ по заявке I? 4867033/13(080263) от 20.05.91.

35. Шегидевич Э.А., Юдин А.И., Федотов В.Б., Фоменко Г.А., | Коломнина Г.Ф. и др. Способ получения сыворотки для лечения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных. - Положительное решение ВНИИГПЭ по заявке № 4866683/13(080285) от 20.05.91.