Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Реакции иммунологической памяти и толерантности у животных при бруцеллезе и туберкулезе

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ """■" и СИБИРИ И ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА

На правах рукописи

УДК 619:612,017 + 616.981.42-:--618.982.2

БАЖИН Михаил Аристоклевич

РЕАКЦИИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАЛ^ЯТМ

И ТОЛЕРАНТНОСТИ У ЖИВОТНЫХ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ И ТУБЕРКУЛЕЗЕ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология,

ЭПИЗООТОЛОГИЯ, микология И ИММунОЛО!ИП

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

НОВОСИБИРСК 1995

Работа выполнила ю Всер-лснИс-ам научямкследоватьльском i.ucnnyre бру.цдлеза и тубськулгэа животных Госийской академии сельскохо^яйствганьас наук

IlayHuie консультанты:

До1юр ветеринарных наук, профессор Р.Я. Хайкнл Доктор вепрпкарных наук A.A. Повыцснй

Официальные опповен-ты:

. Доктор медицинских наук, член-корреспондент, ГАМН, профессор JI.A. Трунова

Доктор ветеринарных наук C.K. Дииов

Доктор вегеринарных наук В.Г. Луницин

Ведущее учреждение - Иншпуг ветеринарной медчцкны О.лс.сого гооударствелнсго аграрного университета

Защита состой гса 25 октябри_1995 г,

'О часов на за-сранн.1 диссертационного совета Д. 020.23.01 при Институте экопериметальной вьгфиларии Сибири и Дальнего Еолока (633128, Новосибирская область, п. Краснообгк, СО РАСХН, ИЭЗСиДВ)

С лнгсертац.«:! моугно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН

Автореферат разослан "____1У96 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор ье-тср.тарных наук А. А Самоловов

1. общая Характеристика работы

1.1. Актуальность Проблемы. Бруцеллез и ry6q)Kyire3 до настоящего времени остаются самыми ра "Прострэнгннымг зооантролоноз-ными боле-.мми, передающимися отбельных животных человеку, ив •зонах раепростоаненид причиняют огромный социальный н экономический ущерб. По данным Объединенного комитета экспертов ФАО/ПОЗ (198*), бруцеллез среди крупного рогтгого скота, овец, коз, свиней регистрируется в 155 странах, ff о итогам XXXIX Генеральной сессии Международного эпизоотического бюро ехало известно, что только за период с J95S по 1967 годы зарегнстриров?но 9S334 очага и 17250 отдельных спудев туберкулеза крупного рогатого скота (А.Д. Третьяков, П И. Притулит, 1971). В странах мира ежегодно туберкулезом заболевает свыше б млн. голов крупного рогатого скота. Туберкулез никогда не регистрировался только на Фолклендских островах, где содержится 8 тысяч голов скота (Н.П. Овдиенко, 1989).

Ь системе мер борьбы с этими болезнями особое место отводится иммунодиагностике и иммунопрофилактике. Ii совершенствовании методов н средств диагностики и специфической профилактики го.~ьи(ой вклад внесли отечественные уч.ные: при бруцеллезе ГГ.Ф. Здродовский, П.А. Вершил jHa. ЕлХ Орлов. К.П. Студенцоь, Ф.Н. Локтсвг. П.С. Улгк:е-1-.11Ч. П.А. Трнлепко, A.Ii. Касьянов, H.A. Ко.чшов. K.M. Салмяков, К.В. Шумилов, Г.А. Объедков, В.В. Сочнев. П.А. Забродин, A.A. Ночнцкий, В.Г'. Ощепков, П.П. Иванов, В.А. Ромихов. С К. Димов и чругие: ери туберкулезе А.П. Али:>-асва. Г1.11. Вишневский, H А. Александров, В.П. Vp баи, В.Е. Щуреьскнй, Д.Д. Повак, А.И. Кузни, A.Ii. Шаров, Н.М. Колычев, X.K. r-uuiyjiHii, М.А. Сафин, БЛ. ХаГпсип, A.C. Данченко, 1 ».1 ». Оа-днешю, Ю.А. Макаров, A.B. ÎЧркин, А.Х. Нлйманов ЮМ. Смолянинов и друт не.

Дальнейшее совершенствование .методов и средств иммунодиагностики и иммунопрофилактики возможно на основе новейших достижении иммунологии, нммуио^петикн и биотехнологии (В.Г1. Урбан, 19КЗ; Г.Ф. Коромыслов, 1983; В.П. Шишков, 1986;). Открытие ьедунгй роли Т ■ и В-лимфоннтов в иммунитете, их клеточной кооперации с макрофагами, разработка методов идентификации иммунокомпетентных клето :< создают возможность более объективной оценки реакции антителообразоил'шя, гипер 1_увствительностн замедленного типа. реакций иммунологической памяти и толерантности. Механизмы формирования иммунологической намяги и толерантносш и условия проявления их реакцьй в проблеме хронических инфекций имеют первостепенное значение, и l часжоси, успешном совершенствовании методов и средств диагностики и специфической профилактики.

Разработка принципов диагностики иммунодефицитов в системе иммунитета может основыватья на знаниях иммунологического с^а'.уса

л

< рганиэма животных. Р^зультигы исследований называют на то, что для оценки функционирования иммунной системы организма огрангчнвал-_я познанием каждого ее элемента в отдельности недостаточно. Bet элементы функцион'туют не индивидуально, а в совокупности (Р.В. Негров : гз1вт.. 1983.1934: К.А. Лебедев, ИД. Понякина, 1986). Поэтому ро-ннк вопрос с необх адкмооти изучения иммунной системы во взаимосвязи <*е составляющих.

Сведенчя об иммунной системе не разных этапах нммуно! енеза у телят и ягнят при бруцеллезе и туберкулезе, о форгаировании реакций иммучотъгической памяти и толерантности к бруцеллам и микс Зектери-ям весьма актуальны. До сето времени не отработан способ этепоримен-тс.тьного индуциролания у новорожденных теляг и ягнят реакций иммунологической памлти и голерантности. В связи с этим назрела необхо-ди^остч анализа имеющихся и обобщения новых данчых функцнончро-аания иммунной системы у интактных, иммунизированрмх и зараженных бруцеллезом и туберкулезом животных с тем, чтобы научно обосновать разработку новых методов и средств иммунологической диагностики и специфической профилактики.

Важной предлосылкой к оценке иммунологическою статуса организма животных в норме и при различных им.лупопатолегпях является усс зсршенлвова;.не методов Вь.делення и иден.ификацин иммунокомпе-гентных к.:ет;>к, антител, относящихся к различным классам иммуногло-булинсв, полу.гния иммунодиагноггнче-ких препаратов в воде моно-слецифическнх air лсьшороток к иммуноглобулинам животных и соответствующих стандартов для их количественного определения, а также автоматизации исследований.

12, Цель и чадячи исследовании. Целью нсследовчннй яви-.¿atb разрабс пса новых методов и средств иммунодиагностики и иммуно-профила.гтикп бруцеллеза и туберкулеза животных на основе реакций иммунологической памяти и толерантности, испогьзуя в этих целях современные достижения иммунологии, биотехнологии, а также собственные данные по »иучешго механизмов функционирования иммунной системы. Для достнжешл поставленной цели решались следующие задачи:

-изучит» 1уморальные w клеточные реакции иммунологической Памяти у телят и ягнят, привитых протнвобруцеллезнычи вакцинами;

-разработать в эксперименте способ индуцчроваьия имм/чологиче-скоЙ тог-раитнооти у телят и ягнят к бруцеллам. Оценить иммунологический статус организма и на эый основе предложить гпособ диагностик.« бруцетеза у телок, привитых вакциной из штамма 19 li.abortiis-

-разработать -.¡с год опенки иммунологического статуса у телок, привитых протцвобруцеллезными вакцинами, позволяющий кочтроли-ро.<ать их состояние устойчивости к бруцеллезу;

-разработать технологию изготогдення бесклеточной химической вакцины против бруцеллеза, изуч:пъ ее реакгогенные и "ммуиогенные

свойства;

-разработать способ индуцирования реакций иммунологической памяти и толерантности у телят при туберкулезе, оценить нммунолошче 1.кий статус у больных туберкулезом телят и на этой основе предложит» способ диагностики туберкулеза у телят, привитых вакциной БЦЖ.

1.3. Научная пошила. В представленной работе получек^! новые данные при изучении реакций иммунологической памяти и толерантности у телят и ягнят на ьведение бруиелл вакцинного к вирулентного штаммов. На основе разртботанного способа индукции толерантност¡1 дана опенка состоянию иммунной системы у животных при толерантности н предложен новый способ диагностики бруцеллеза у телок, прибитых вакциной из штамма 19.

Впервые с использованием современных иммунологических, а также корреляционного и регрессионного методов исследований проведена оценка иммунологического станса организма, определено состояние балаиса-дчсбаланса в системе иммунитета. Ни основе вгьшвления сочетаний параметров, присущих только т&гкам с протективным иммунитетом или его отсутствием, составлена дифференциально-прогностическая таблица, позволяющая контролировать ]/ровень устойчивости к сруцеллезной инфекции.

На уровне изобретения предложен способ конструирования иескле-точных химических вакцин, где в качестве носителя использована целлю-яэза хлопковой етты, депонирующая имм/ноген, выделенный ич в^г-цннного штамма 19 В.аЬогШх. Получены новые данные о состоянии системы иммунитета, формировании реакций нммунологч"еской тмя^и и толгрантности мслодчяка крупного рогатого скот, на скове которых разработан иммунологический способ диагностики туберкулеза у телят, привитых вакциной БЦЖ, прошедший патентную экспертизу. В результате появилась реальнат возможность усовершенствования иммунодиагностики и иммунопрофилактики оруце;и.гза и туберкулеза животных.

1.4. Практическая злачимость. Принят г аслышзустса в ве.-е-ринарной практике иммунологический спосс 5 диагностики бруцеллеза у телок, привитых г акциной из штамма 19, с ислользованием феномена толерантности.

Принят и используется в ветеринарной практике иммунологический способ диагностики туберку леза у телят, привитых вакциной ЕЦЖ, с использованием реакций иммунологической Памяти й толерантности.

Разработаны и внедрены в ряде научно-исследовательских учреждений и ВУЗов методические рекомендации по оценке Т- и В- систем иммунитета у животных при бруцеллезе и туберкулезе. Методы позволяют более объектгвно оценить иммунологический статус организма в норме

г при патологиях. С использованием методов оценки Т- и В- систем иммунитета, корреляционного и м«пода группировки иммунологических параметров (дискретно-динамический анализ), рагррботан способ оценки иммунологического статуса у телок, позволяющий контролировать их состояние устойчивости к бруцеллезной инфекции.

tvf ттериалы по теоретическим и ¿фактическим аспектам иммуноло-П'чгскоЙ тамятг и тс терантносги у животных при бруцеллезе и туберкуле jp, оценка на новой основе имчугологнческого статуса организма животных в норме и пра патологии найдут применение в исследовательской деятельности в области иммунологии и инфекционной патологии, а также в г:кц':онном и практическом курсах иммунслогпн в ветеринарных и сетьскохозяйсттенных институтах, учитывал что преподана и. по иммунологи!" уделяется болылое значение в тоязи с важной ролью в решении ряда пробгем, свягаьных с иредупргждениек: и искоренением бруцеллеза и туберкулеза сельскохозяйственных животных. Материалы работы использованы И А Коснло^ым в монографин "Бруцеллез сельскохозяйственных животных", Новосибирск, '992.

1.5. АкроСампя работы. Материалы диссертации доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ВНРИБТЖ ч 19/6-19SM гг; Всесоюзной гсонференции "Сссюяни^ и перспективы научных исследований по диагностике и профилактике туберкулеза и бруцеллеза и меры борьбы с этими болииями сельскохозяйственных животных". Омск. 1980; Всесоюзной конференции "Проблемы ветеринарной иммунологии", Москва, 1982; научных конференциях преподгзагелеГ. Ок.ско/е ветесиндрного института, Омск, 1987, 1985, 1990,1992; координационных совещаниях ВАСХНИЛ по проблемам бруцеллеза и туберкулеза с.-х. животных (Омск, 1987;Кусганай, 1Г88; Новочеркасск, 1989; Омск, 1991,1994,1995).

ОсноЕкые положения, выводы и практические предложения, изложенные з диссертации, обсуждены и одобрены координационным совещанием "О состоянии и направлениях научных исследований по проблеме бруцеллеза и туберкулеза животных" (Омск, 1995) и ученым советом ВИИИБТ):;, 1995.

1.6. Публикация результатов исследований. lío геме диссертации опубликовано 33 работы в сборниках научны» трупов СибНИ-ВИ, ЬНИИБТЖ, ИЭВСнДВ СО РАСХН, в журналах "Ветеринария", "Сельскохозяйственная биология", материалах Всесоюзной кои оеренииг, описаниях к патентам.

1.7. Объем и структура диссертации. Днгсергацня изложена на 40! странице, иллюстрирована 63 таблицами, 33 ргсунками. Она включает 5 глав, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы, содержащий 578 источников, з том числе 252 иностранных учечьи, приложение. Текстовая часть диссертации составлтет 292 страницы.

1.8. Основные положения, выносммь'е на защиту.

1.8.1. Методы оценки реакций иммунологической памяти и толерантности у молодняка крупного и мелкого рогатого скота при бруиел лезе.

1.8.2. Способ индукции и диагностики иммунологический толерантности у телок, привитых вакцииэй из штамма 19.

1.8.3. Метод оценки иммунологического статуса телок, привитых вакипной из итаммл 19, позволяющий копгролнрсвать их состож.де устойчивости к бруцеллезу.

1.8.4. Разработка технологии изготовлении и испьгг.ние бесклеточ-иой ^емпегкоп вагцинм против бруцеллеза.

! .8.3. Роль иммунологической памяти и тонерантности в диагжнли-ке туберкулеза у тельг, прибитых вакциной БЦЖ.

2. МЕСТО РАБОТЫ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории мммунологиг, при участич сотрудников лаборатории по изучению бруцеллеза (рук. лаб. АА.Новицкий) и туберкулеза (рук. лаб. БЛ.Ханкьн) ВНИИБТЖ, на экспериментальной базе института и в хозяйствах Опекой об.;ати. В ней нашли воплощение ч получигп дальнейшее развитие направления исследований, заложенные профессором Б .И .Коидауровым и заслуженным деятелем пауки РФ, профессором И.А.Коснловым.

Материалом для исследования служила кровь, сывг ротка /рови, лнмфондпые органы телят и ягнят раннего лочраега, .;олодиш'л ¡.рунного v мелкого рогатого скота, коров и овец, лабораторных животных, Д;;я иммунизации жкзлпых использо."алн вакцины из лггаммов )04-.*Л. 19, 32 В.аЬонт, ¡\ei-l В.теГиелйу. вакцину БЦЖ. Для .жечеримеыальчого заражения молодняка I рунного рогатого скота и лабор .торных жии л-ных использовали бруцеллы вирулентною ццамм'л 5ч В.аЬогс.л, мико-бактерии вирулентного штамма 14 М.Ьори" молодняка овец бруцеллы вирулентного штамма 3776, !6М и Н-102 В.теШепха.

Для решения постгвлесмых задач использован комплекс иммунологических, биохимических, физико-химических, бактериологических и биометрических методов исследования.

I. Иммумиогические метооы: а) определение титра специфических антител в РА. РСК по общепринятой методике; 6) определение титра антител, относящихся к /§Д/ и /(;(/-классам по и.Ваикг ее А.л1аумку (1961) и Е.В.Чернохвостовой (1^65), а также I; РА " хроматографиче-скими фракциями (РЛУПктзоп, 1966); в) определение количеств? неспе-цифическич иммуноглобулинов провели с помошью простои радиальной иммунодиффузие«'|.Ю.Мапсци а а1., 1964); г) определение коли чества лейкоцитов, Т и В-лимфоцитов, лимфоцитов-киллеров и гнгипенреак-

лтнь.х лимфоцитов методами описанными в наших рекомендациях (МА.оажчн с ссад!., 1%9).

2. Биохим\1Ч1ские методы: а) епрсцслемс; количества РНК и ДИК в кло.'К и ткьня; проводили по Р.Г.Цгневу и Г.Г.Маркову (1950) после разделения их по 1 иК.чдту и Тангаузеру в редакции Г.П.Георгиева (1968), количество и\ зач-ряль на спектрофотометре СФ-4А.; б) определение ак-тивноош РНК-аз и ДНК-аз проводили по Л.ФАдигамову (1969) с уче-то..1 иропион, принятой в лаборатории биохимии ВИЭВ: активности фос-фатаз по Балансному в редакции А Л.Покровского (1969).

3. Физико-химические методы: а) ионообменная хроматография на ДЭлЭ-ц^ллхолоз; (Н.Ооойпап, 19о2\ ионообмекник подготавливали по методу Л.М.Гинодман (1964); б) нммуноэлектрофорез в агаровом геле 'Р.ОшЬаг, СЛ^'.Натз 1953) в модификации Р.Виме (Я\Vieme, ¡959); в) црегипитация 1 геле агара пэ Оуперлони (О.ОчсМеНолк195^).

А. Сактериотгические методы исследовании с целью определения иммунитета проводили с уча тгнем сотрудников лабораторий по изучению 5руцчлл»зя и туберкулеза по общепринятым мегодниам.

5. Бис метрическая, обработка цифрового материала, полученного в экспериментальных исслсдован.юх, проводилась с помощью программы одно-и многофакторного корреляционного и регрессиончого аншдазов, составленной на основе данных В.Ю.Урбаха (1964), А.Т.Усовича, П.ТЛебедева (1970). Значение критерия досхэверностл результатов оценивали, мспсльзуя таблиц/ вероятностей по распреде^енчю Стьюдента. Титры антител перевели В числовое выражение яог. рифмов с основанием Ю Ш).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3,1. Реакции.иммунологической нфмти у телок к бруцйллам.

Предачрлгельньп испытания метопов для изучения лосяедова-1ел(»ности синтеза ;>нлггеп. относяпихся к 1%М и /¿»З-кпассам показали, ч.-х) чучше попользовать тля э-.ш целеГ. в "ривненчи РА в обычной полыновке и РА с сыгоротсамн крозн, обртботагиой 0,1 М 2-черкапоэ!глIолом \нтит«ли 1&М клг.сса разрушаются 2-

мсрк.птсэтаиолом с утрадой их антительгоц «истивлост, в то время как антитела /¿(Т-класга >гтоьчнви к этим воздействиям. Использовали для этих целей та ."же Р\ с хроматмрифи^ескчми фракциями. Исследуемую сььорог.су раздгчиал на ДЭАЭ-целлюлозе.

Дтя и?учеьня реакций иммунологической памяти у телок на вьеде-иие нротипобр^црялезных вг.кцин бьшс проведено 3 опыта. Из 30 телок сформировали м групп. 5 телкам в возрасте до 10 дней ввели вакцину из еггэмча Ю4-М В.аЬоПиз в дозе 5 млрд. м. к. (1-я группа), 5 телкам в -том ж<~ возрасте пчела вякичну в дозе 50 млрд. м. к. (2-я группа). Аниюгнчнь.ч образом поступили с другими теикаыи, но в возрасте 1.5

мес (3 ■!> и 4-л группы). Животных всех груг.п релмктуннзнроиали в возрасте 8 .лес в дозе 20 млрд. м. к. 5 тежам в возрасте 7-8 плели в осипну впеовые в дозе 20 млрд. и. к. (5-я группа) и 5 интпктных служили в качестве контролч.

Установлено, что у телок, нммуннзнрованных в возрасте 10 дней, с:штезпр>ютсч антитела /¿'Л/-класса, уровень которых зависит от дозы вакцины. Вакцина в дозе 5 млрд. м. к. стимулирует кратко?,ременный гннтез антптпл и в низких татрах (25 МБ), тотпз гдге в дс-с 50 млрд. м. стимулирует более активный синтез макроптоб}личоры.ч антител и ь более высоких титрах. Уровень сывороточных антител у телеке, пммушин-рованных в 1,5-месячНом ворррсте, бьш выше, чем у илшотнух, мммуни-31»;;сваилых з п-ргыс дни хапш?. У всех жнтотпых на И-!! дгч' яуявпенм ¿нVIпела, средне» эчачечне кэтерых соспв.шо 2,361 Антгт«'& /^О-класса выявлены у всех телок на 60-й дрш», урорень их составив 2,180 !£-У тдаок, прежних вакциной в дозе 50 млрд. м. к.., ак аггел л /¿»С-юи'с са обнаружены шлько у трех, животных и в разные периоды исследования.

Реакции иммунологической памяти после пооторнщо введения вакцины в доте 20 млрд. м. к таккз определялись первоначальной ее дозой, при этом установлен высокий уровень сывороточных антител класса. Доля их V животных не еле двукратно!". вакцинации, по сравнении с контрольнь'ми (5-1! грунпл), значительно больше и они зарегистрировала на 7-й день, тогда «¿ж у контрольных нз 14-й (табл. I). Осо-Сеыю'гьч) вторичного иммунного ответа у тгпои, привитых и возрасте ¡,5 в дозе 5 млрд. м. к. (3-и группа), явилось то. по показатели РА-МЗ, з: одкнм 'геюточешрм (42-й д~Но), превышали покпзата.л Б А. У тело::, привитых пераоначчльно Р дозе 50 Млрд. м. к. (2-я л *.-г группы), также антитела класса вмяга егЬ. ча 7-Г; день в высок ий концстра-ц;ы. резница в показаниях РА и РА-МЭ незначительная. "На 28-в. 42-н и 56-н дни уровень антител класса превыше,/« их уровень В РА Повышение титра анп.гсл в РА-1ИЭ, по сравшашо с РА, саазано, как предположил Б.Й.Кондауров (19Щ и др., с разр>шенисм сывороточных ингибиторов /«локирующие факторы), препятствующих формированию кол:плгкег шга¡гш-лугл¡тело.

Результаты РА с хроматографнческими фракцией сывороток хро-хи нодгв-'рдили результаты предыдущих исследований. У тело к, привитых первоначально ь возрасте до 10 дне л уже ча 7-П день после ревзкцИ-чацнн зарехцстрнрооа^ы антитела в первой и второй фракциях (1/г(7-антитела), концентрация которых была значительно больше, чем в третьей фракции (/кМ-анпггела). У животных, иммунизированных в возрасте ),5 мес после реиммунизацчн тнтр /¿;С?-айтнтел также значительно превышал тигр /¡»л]~антнтел, особенно эта разнила проявилась у телок, привитых в дозе 50 млрд. м. к..

Дипамгха синтеза антител у телят после повторною вводенгя гомологичных бруцелл вакцинного штамма, (сртдчие показатели, ig)

Дейч поспэ ро-РЯЮ|ИН ции ( 3 4 5

Ду. ревакцинации ' 14" Тзб~ 2,18 Р^гМЭ РА ТвтГ 2,7Е2 РА-МЭ РА 0,45 РАгМЭ РА РА-МЭ РА РА-МЭ

0,4 4 57Е 0,46 0.46 ОДР - -

Л .4 " 1,001 " 0^ 1,54 2,376 2 075 2.24 -

2,301 2 2,24 2,677 2 2,783 1,759

:е 2.06 1,«01 2,075 0,86 1.о6 2,602 2,526 2,12 "2,1* 2 12 __

56 1,44 1,876 2,225 1,94 1,72 2,225 2,376

1.7Г 0,98 2 225 1/М1 0,6 1,66 2.225 2,30, 1.48~1 1,419

Иммунизация и особенно реиммунизацня вызывали нарастание уровня в сыворотке крови телок не специфических иммуноглобулинов 2 и Изменение их количества зависит от возраста животных

при ММ! ¡уннтнши.

Гсакмии иммунологической памяти проявились у телок не только в туморалыюй систем: нммунн.ета. но и в клеточной, что убедительно доказано результатами бактериологического исследования. Всс гелкн, привитые ишшнон из шгамма 104-М л возрасте до 10 щ.ей в дозе 5 игра. м. к., после рснммуннзации противостояли эксперчментальному заражению. Ог телок последующих фупп выделены культуры бруцелл вирулентного штамма 54. У четырех из пяти коггрмьнмх телок установлена генерализация инфекции, индекс инфицированности 53,о. У гелок, прнвн.ых в аозрасте 1.5 мес в дозе 5 млрд. м. к., после ревакцинации иммунитет был более напряженным, чей у телок посте огиократной. После иммунизации дозой вакцины 50 млрд. м. к. реиммунизацня оказалась малоэффективной. специфическая ре.!нстсн»Н.)сть у телок иыта ниже, чем после однократной иммунизации.

V телок, прибитых вакциной из шгамма 19 в возрасте до одного месяца в дозе 3 млрд. м. к... агглютининов до момента ревакцинации т выявлено. Уровень ангчтел у животных терез 7 дней после реиммуниза-цни и иммунизации в дозе 80 млод. м. к. был одинаковым и составил 2.г76 Па 14-н д'-нь показатели РА повысились у теыж. иммунизированных однократно (2.426 и снизились у ренммунизированпых (2.275 По th.iv вторичного иммунного ответа (высокий уровень ¡¿О-антнгея) реагировал!, только 4 из 12 телок, интенсивность же срологнче-екгх реакций других 8 телок существенно не отличалась от реакций животных. иммунизировании.'. однократно. В последующем уровень агглютининов снижался и к 64-му дню исследования антител в диагностическом паре с помощью РА н РА-МЭ не установлено.

Пели интенсивность гуморальных реакций у телок опытных групп различалась незначительно, тэ различия в клеточных реакциях были су-

шеешепными. Повторная иммунизация полной лозоГ. вакцины йшв..лл ускоренные н усиленные клеточные реакции, способствовавшие с высокой степенью достоверности изменению i кропи жшюшых коли1'-ста шиуиокомпагшнш клетк Боже высока:! снсш фч"ескаи резне шп-иое'п. у телок, привитых двукратно (НИ-О."), по сравнению с привитыми ошткрашо illll 7.2 ). ¡акже обусловлена ьлеючнымн реакциями.

У телок, иммунизироиинных вакциной из штамма ,Н2 в возрасте до 10 дней, i- дни 25 кшрд. м. к., апг.кпннинои выявлено. При отом ус-т-шоидшо суим-Ш'-ьисе изменение количеств неспеиифич« ких иммуноглобулинов. На 7-й д jмij после иммуннзацли значительно унед! í !п шось гсяп'кязю IgM (Р ~ 0,0.4), которое сохрчннпось до J'-ro пня, а на 64-ii "?;:!> "пктрнронано достоверное его снижение tP - й.йУ). СидсЫиШне /gG п сыворотке кроки телок увеличилось (Р = 0,01) на 14-ii день, еохрл-ннлосо на чтим уровне до 64-го дш,. У телок, вакцинированных и ре-иакциннрованных и дозе 100 млрд. м. к. в 8-месячном не зр чете. агглютининов мкже не выявлено и только на ¿8-ii и 90-й /ши у дпух обнаружена сомнительная РСК. Количество же неспеццфичеекого Ii'i\t у вакцинированных увелг.чшккь к 132-му дню (Р = 0,02), у ревакцшшрованнмх телок уменьшилось (Р = 0.03) на 58-й и (Р = 0.02) к 90 дню. Количество JgUy вл.еншшронаишлх уменьшилось (Р - 0.008) uv 90-й день, у резакниннро-и.шных на i 5-i'r 2H-i¡ шш iP ••• 0.05) н повыси-юсь (Р = 0.0."-) на vO-й день.

1,шепк>г }"i, jiii4L*iiiie количеенш РНК усыновлено н 1 роии гелох. npiüuüi íx i! раннем ни ipucit:. на 14-й и 28 й дни, а на i>ií у.ено резкое снижение tp = 'i'1!). Количество ДНК ь ;.рони ракииипрованшлх i; ре-вакиииировлнных телок снизилось на .SfcMí день |Р < 0.05',. (..'ледените чь-ио. v телок, иммунизированных и репммуннзиронашилх вакциной из шламма Н2. нг'-п'иолошческие реакции сопровождались изменением ко-личесша неспецифичсских ш муноглоСушншв и нуклеиновых кислот. Иммунизация стимулировала синтез IgM и Ig</, тогда как реиммуиизацня утнетча синтез IgG. Результаты бактериологического носке (овання показали. что i<uii6oj.cf у< юй»ш.ш телки, привитые 'щукрашо: культура заражающею штамма иьшелена ог одций из пят телик, индекс ннфнцн-рованноегги 2.1: у всех контрольных была установлена генерализация инфекции. индекс пнфицировашюстн 44.2 (пбл 2).

Установленные различия в синтезе uhtuí' л ¿о вюри-шом иммунном oineie у i елок, привитых шглютиногеннымн вакцинами, позволяли' предложить Mei' i определения реакции иммунолопс/ееко.'! намнгн М.-тод основан h;i чыявиешш антител. отноенцьАся к IgM н /#;7-клаеоам. в сыьорснке кропи телок в возрасте i 6 мес через I 1-20 дней после иммунизации. Повышение, сохранение или незиачигаг ное снижение т.ггра РА-МЭ на одно разведение, по сравнению с РА в обычной посглнокке.

Результаты бактериологического исследования телок пу.ушитых вакциной из штамма 82

№ Клшчесгв" ?1Р13ИЛ0СЬ Зыдстап к/пыур Икгекс инфи-

ГР)ППЫ жтгаопшх ггего в той чисз.с; ца ошю животное пированноаи

лперялтов РСПЮНГ'РЧЧ

1 5 4 2 2 1.6 3.4

2 5 1 . 1 0.1 2.1

3 5 3 5 - 8.4 44.2

указывает ча высокое содер?<сание в сьшсротке кроьи жиротьых антител /^С-кльсса, что соответствуй- "осгоянию иммучочотчегоей памяти. Реакции иммунологической памяти проявляются не только з синтезе специфических аншгел, ло и неспоцнфических иммуноглобулинов, нуклеиновых кислот, а таюк; изменением в криви ччела иммунокомпетет--иых клеток и иммунитетом повышенной напряженности.

3.2. Ггакции мшупа/нк ической паншги у ягшип к бруцелшч.

Из 13 ш ня^ 1 ?. в возрг.сте от 2 до 20 дней г-вгли подкожно вг*<ципу и- штамма 19 В.иЬ&"Си5 в дезе 30 млрд. м. к По достижении 3-меегчного возрастг яп1ят разделили на 2 группы по 9 в каждой. В пергой группе 6 :тп'т"ам ввели вакцину повторно чер:з 8 че: в первоначальной дозе и для контроля 3 ягчя/ам впервые. Через \2 ь;ег после первичного антигенного воздействия с живутными второй группы нпступили аналогичным образом.

Вакцина из игычга 19 р доз? 30 к.прд. м. к. у ягнят з возрасте до 20 дней гчььиает иммунный спиет л спссооствус-" образованию клеток ш-мунологической нчмяти, которые прк полторком готагге с гомологичным антигеном сбуслов. шв~юг ыорп«нын иммунчый ответ с высоты уровнем антитеи клагх. Особенно это проявилась у животных, привиты.; черег 12 мес. Уровень ак ■тгтел ^С-кпасса в большинстве случаев превышал ууовень ".нтител, выявляемой в РА, у животных после двукратной иммунизации по сгиошенто к однократной. Сьижснне же титра РА в первые сроки нсспедогания после реиммунизации объясняется более ранним перек-почением в системе иммунитета синтеза а;ггител глааа на ¡¿П (табл. 3).

В другом опь.ге пзяли 5 яшят кз 18 в возрасте 10-20 дней иммунизировали вакциной из штамма Ка>-1 В.теШепж в до-'е 0,5 мл. Друшс 9 ягнят не были иммунизированы. Через 2. 3 и 4 месяца после иммунизации каждое С ягнят 3 вакцинированных и 3 невакцинированчых были заражены подкожно вирулентным штаммом 3776 В.теШепж в дозе 200 тыс. м. к.

Через 2 1н.д.ли после вакцинации у 4 из 9 ягнят выявлены агглютинины в ттпре 50-200 МБ, относящихся е основном к Т^-кяассу. На 30-й и 45-й г чи в сьторотке крови ягнят антитела не регистрировали. Введение

вирулентного штаими Зруиелл вызвало у нпивишх ягнят незначительный синтез агглютининов. Повышение титра в основном /^С-класса установлено на 28-й день. После зара.кення /{,Л/-антитела обнаружено у двух недакцпшросанных ягнят на 14-й день, а /•-¡С-ан.итела из. 28-и дено у все;» ягнят. У ;п нят, зарчженкых через 3 к.ее после вакцинации, сн!1-т-.з антител б: ш актиг кее Титр /§¿7-антител был вьцче у привитых животных. У ящчт, зараженных чер<:з 4 мес., у;юв?нь лнт.тгел /¿/г-класса цре-в„ш!ал .14 урорень, выявляемых РА, на 2'-'" » 2й-1 дни.

Таблица 3

Динамика синтеза антнгзг у ягнят после о.цлократиой ч /рукритноЛ ичмушпяда«. 'п '

День 1 Черес 6 месяцев Через 12 месяцев

Двукратно Одьотсратпо Двукратно Однокр-чпс

[•А РА-МЭ РА РА-МЭ РА РА-МЭ РА РА-Ш

7 2,451 3.204 а,401 2 2,1 2,301 0,668

К 2.J51 • 2.55 ( Т. 103 3.001 2~351 ¿662 0,455 I

30 2,618 ,2.451 2,802 2,501 2,369 Г2.088 2,903 '2708:, -

45 67 2,2 2, Id 2,451 I 2.40Т 2 501 1.8ЭЭ г.Э52 2Л 2903

1,517 2.301 1,799 1,799 1 739 | 1,899 о 1 „ , кл,

Яри относительно слабом си:ггезе антител на 30-й .new а сыгоротке крови ягнят сущепагннс снизилось количество 1!есг.г1о(фнч..скоз о I;;G (24 03 + IР5 r/л, Р = 0,09) и ¡¿М (1,20 ± 0,36 т/л. Р ~ 0,001 >. Баедение ви-руленшего штамма Ьруцелп через 2 .v. с с nocj^e ваклннйцш. ре^кс умень-1чило количество IgM (Р 3,001) m 14-й ди'ь. У ятлат, зар'-ксин иг чер-а 3 ме.' изменения а количестве 1>ил:употобулнноь было несущественным, хотя с штез антлтгл Ьын бо.'те активным. С урепнчечнем чл.ер,;ала между инъекциями |4 мес1 л возраста •кивг.ткых upon гопчк- су.Л'- 'ыенн ч' уве-лмченне количества IgM (Р 0,004) и /gf7(P - 0,009) на 7-й дет •>.

Содержание луюгенновых кислот в крови иитакхныч чгнят после заражения бьло 1.и;.;е, toi дп а органах выше, чем у эакпинирован-hi ix. Достоверное различие ДНК д РНК в косан установлено га 7-й i 14-й дни, В количестве ДНК в селезенке, РНК во всех ис'лел,оваННы:; ори-im (табл. 4). С увеличением штервела между вакцинацией и заражением (4 мес; содерзгянне нуклеиновые кислот нивелируется. Достоверные различия в активности нукиеаз уст&игвдньали чаще в псени, селезенке. тимусе и реже в лимфатических узлпх. Аналогичная закономерность, .имя н менее выражена, установлена у ятнят, зараженных через 3 н А мес. Результаты ба.пгерконагнчетского исследопаьия покязали, что псе иммунизированные ягнята противостояли чк-сп ¡рименталыюму заражению через 2, 3 и 4 mjc носе введения викцинм.

Содержание ну^леиновы.» кислот ь органах ягнят. _мраже1г1ь1.к^1срез 2 мес после вакиинанни. mi/100 мл

7ÜÍK_ ______ Г " ~ Т'НК

Органы

Помэнь r.n¡ иснка Т' ','ус

Вакцинированные

Гл í. m

13,42*0, 3 ,7 i Í0 ,38

P

"0,18

0"29

Невакнини-роТШШЫе

M ± m _b,gói3j66~ 8,93 vi ,10

10,42+5,32

Вагцииировли-

(ib. e____

P

_M ± m_ 3~61±Ó,40

Лимфптичетмв

о.ро!

I;,4? ±2,1)0 ( 0,001

2L?tíi¿±i ÍLÍL

Нсвакцини-

M im " "i2,32±0,53

30 2til1,fl0 " " fi9,95±15,5

Пре."попеточ|!ыо 3,71x0.6-* 0,33

Загп- точные 4,18±0,64 0

Паховые 2,51±0.?1 0,1

Тазовые 3,54±0,84 0,26

6^7«.±2,09

12.29±3,10

7.48±2,27

10,64±5,25

11 27±2,40

12,92±1,t)9

13,90.4:2.1«

17,72±2,40

0,001 o.ooi

0,05 0,02"

3?.40±4,40_ "42,73±4"95

54,18± 10,2

.1.3. Рсащии плпунологиуеской толерантности у телок к брущеляяли С целью разработки способа индукнин толерантности 5 телкам в возрасте 15-20 днем ввели подкожно вирулентный штамм 54 fi ahmtus в дозе 50 млрл. м. к. Другие 4 животные аналогичного всзраста заражению не подвергались. Через 4 мес телок обеих групп иммунизировали Вакциной hj штамма (9 в дозе 50 млрл. м. к.

Отсутствие в сыворотке кропи антител /¿»G-класса и сниженный уровень антител /#Л/-класса у телят t й группы (табл. 5), указал на то, что у них индуцирована частичная иммунологическая толерантность.

Таблица 5

Динамика cnintia антител у трлок после введения

Груп- Символы День вакцинации, мегоды исследования

па статистики 7 14 30 60

РА РА-.МЭ 1'А гл-мэ РА 1'Л-МЭ РА РА-Ш

Ья М= 1.00 - ' ■ 2,101 - 0,845 • - 0,425 -

ni f Í.I5 - 0,245 0,93 Г - 0,849 -

2-я м= 2,22« - . 2,451 1,925 1,425 1,575 2,075 -

m i 0,29 - OJO! 0,(50 0,960 1,087 0,¡ 50 -

Целью последующих исследовании явилась диагностика толерантного состояния у .тлят неблагополучных но бруцеллезу стад и изучения у них иммуноло! нчг ского статуса. Дня этого взяин 43 телки из неблагополучного по бруцеллезу стада н 8 из благополучного. Из 43 животных 13 заражали пробно с первого ян<? жизни в течение М дней: ежедневно через конмонкпшу ттодмлн но 120 млн. м. к., с молозшюм и молоком но 20С млн. м. к., общая лпза составила 3,2 млрд. м. к. I [ .: оставшихся 14 телок заразили •.»днг.момчшно чсрс :кот.юнкгиву 2о0 млн. м. к. и 16 челок не

заражали. По достижении 4-5-месячного возраста телок разбили на группы. Первая - 7 телок, зараженных дробно; вторая - 7 \елок, зараженных однократн а; третья - 7 незараженных телок; четвертая - 4 иеэа-раженных телок из благополучного по бруцеллезу-озклг^ва. Жиь-лч.ьи всех групп т> возрасте 4-5 мес иммунизировали вакциной из штамма 19 в дозе 60 млрд. м. к. Жпвотчых 5, 6, 7, 8-й групп (22 телки), составленных rio аналогичной схеме, иммунизировали вакциной из штамма 104-М в дозе 80 млрд. м. к. Девятая группа нез раженные .елки из неблагополучного по бруцеллезу пункту не были вакци"нрованы.

Из 40 коров матерей, исследованных на бруцеллез, реагировало в РА 15 (37,5%), в том числе положительно 4 коровы, в РСХ реагировали 24 (60%), из них положительно 18 коров. Уровень антител 7-класса существенно превышал показания РА. Всего реагировало в РА-МЭ 23 коровы (57,5%). Эти данные подтверждают, что оольшинство телок, взятых в опыт, родилось от коров, зараженных бруцеллезом. У телок, зараженньи как дробно, тпк и одномоментно, существенных различий в иммунном отеете после иммунизации не установлено. У 14 телок, привитых вакциной чз штамма 19 и у 11 телок, привитых вакциной из атамма 104-М, антител /¿¿/-класса не обнаружено. Все животные контрольных трупп синтезировали антшеяа этого класса. Отсутствие антител IgG-класса госпе иммунизации установлено также у нпараж'-нных телок, но родившихся от больных бруцеллезом коров. Часть телок этих групп ог-ветила на вакцин;' по типу первичного или вторичного иммунных ответов (наличие в сыворотке коови IgG-кшюса^. Следовательно, аномалии в иммунном ответе, вызванные толепантностыо, определяются главным образом происхождением новорожденных телял У толерантных телок после введения агппотиногенных вакцин синтезируются ант. .тела в основном IgM-i'ласса в тигре до 100 > ÍE.

G целью изучения бруцеш;эносительстьа за животными наблюдала в течение 2,5 лет. ttodne убоя животных бактериологическое исследование материал!, позволило выделит) бруцеллы i.сходного вирулентного штамма у 22 % толок. Культуры вгрулентных бруцелл был» выделены от 6 из 21 телм* (28%) и от одной Из 11 телок (9,9%) Из групп п дробным и однократным заражением соответственно, а также от 7 из 3 тело:, не подвергавшихся ни иммунизации, Ни заражению, но полученных от болчных бруцеллезом коров. Йз 9 телок - бруцелзточоеителей у б животных при 6-кратном серологическом исследовании до убо- н^ было выявлено антител в РА и РСК. Следовлтел- но, отсутствие или резкое подавление гуморального ствЬса в первые недели после введен; ¡ агмютнйо-генных вакЦЦн телкам 4 5-месячного возраста свидетельствует о заражении животных внутриутробно или в рвннем возрасте.

Параллельно Продукции антитгл изменялось количество неспецифических иммуноглобулинов! У тчлок, заражении.; ^роб ю, после нммуни-

зации вакциной из штамма 19 на 42-й и 60-й дни оезко уменьшилось количество 4»<7(Р < 0,05), тогда как у: гзараженных животных (3-я группа) повысилось (Р = 0,Э2). У телок, привитых вакциной из штамма 104-М (5-я группа), установлено поьышенноГсодержание /¿'С на 7-й и 28-й дни (Р < 0,05). У теток, заражекл.лх однократно (6-я группа), количество 1§С сни-жг.-:о на 42-й день (22,27 ± 0,47 г/л, Р = 0,03). Измененга:- также было подвергнут .) количество у телок, привиты: вакциной 104-М. У живот-5-й группы, количество /|»Л/увели ¿илось на 7-й день (2,27 ±0,17 г/к), и ла 42-й снизило-ь (1,74 ± 0,22 г/л). У толерантных телок количество кеспеци^ических иммуноглобулинов после вакцинации оставалось на уровне контрольных животных или уменьшалось, тоща как у незара-женных телок повышалось.

В крови толерантных телок после вакцинации уменьшается количество ДНК при повышенном содержании Рх 1К. Не установлено существенной разницы в когнчестие нуклеиновых кислот после иммунизации у теток, зараунных разными методами и незараженных, однако наблю-дагч болсс выраженное изменение их уровня у телок, привитых вакциной из штамма 19.

Материалы проведанных исследований дали основание к дальнейшему изучению иммунологических реакций на введение вакцины из штамма 19 у телок неблагополучных по бруцеллезу стад. На ферме, где регистрировались аборты Груцеллезной этиологии, имчуизировали 72 телки в Еозрасте 3-6 мес вакциьой из штамма 19. Через 14 дней с помощью РА и РА-МЭ провали исследования, которые показали, что у 15 телок (20,8"')) отсутствовали антитела 1%М и /#(7-классог, у 45 не обнаружено антител З-класса (62,5%), однако титр в РА превышал 100 МЕ. Высокий уровень Г§С-клгсса зарегистрирован у 7 телок (9,7%). С низким уровнем 1§М'Г~хасса (100 МЕ и менее) при отсутствии антител /§&-класса выявлено 5 телок (С,9%). 12 толерантных т-лок повторно вакцинировали этой же вакциной г через 17 дней провели аналогичные исследования. У 4 телок • ситела ^gM и /§(7-класса обнаружены в высоких титрах (100 МЕ ч выше), у 6 не обнаружено I?(7-антител и уровень /^Л/-антител не Превышал 100МЕ. Следовательно повтор чое введение вакцины из штамма 19 толерантным животным снимает у некоторых состояние толерантности, другие же остаются аргактивными.

Нами сделана также попытка снятия иммунологической толерантности путем воздействия на систему иммунитета животных тимариНом. С этой целью в другом хозяйстве (фе~ма по передержке Сольного бруцеллезом скота) Исц! 'таИо действие тимарина отдельно и в сочетании с вакциной из Щтамма 19. Установлено, что тимарин индуцирует синтез антител у ареактивных текх: и угнетает его при сочеТанном введении с вакциной. однако иммунитет бы.; влше <66,1% иммунных) у телок, привитых вакциной И та йрином, И ниже после Викцинацкл (55,6% иммунных).

Проведены исследования с целью сравнительного изучения иммунитета у телок, ответивших на введение вакмииы из штамма 19 но т;.;|у первичного, вторичного иммуннмх ответов и толерантных. В пункте по передержке больного бруцеллезом стада исследовано в РА и РСК 138 телок в возрасте 4-5 мес. Из них 1*4 животное, отрицательно реагирующих, иммунизировали вакциной .¡з штамма 19 и через 18 дней исследовали с помощью РА и РА-МЭ. Выявлено ареактионых 54 телки (41,2%), 10 телок (7,6%) ответили по типу вторичного иммунного лвета и 67 животных (51,2%) ответили по типу первичного. Из указанного количества отобрали ! О телок, реагирующих по тиг.у первичного ответа, 10 вторичного и 10 телок толерантных. Через 4 мес по:ле иммунизации тетки были заражены конъкнктивально вирулентной культурой Сруцелл из штг мма 54 в дозе 25 млн. м, к. и через 40 дней убиты для изучения напряженности иммунитета. Наиболее устойчивыми к экспериментальному заражению оказались животные, реггирующие ни вакцину по типу вторичногг ответа. Из 10 телок у 4 выделена культура заражающего штамма и только у одного установлена генерализация инфекц,.и. Наименее устойчивыми были толерантные телки. Из 10 животных у 8 выделена культура вирулентного штамма, причем у 6 установлена генерализованная инфекция. У ..«.вотных, реап'ру.ащих по типу пер ..итого ответа, также у 8 телок нэ 10 выделена культура, но генерализация инфекции установлена у 3 животных.

3.4. Реакции иммунологический толерт^пноапиу пгият к бруцелъ-и.

С целью индукции толерантности о яыятам я возрасте до 10 дней вв°ли вакнину из штамма 19 в дозе 30 млрд. и. к. Затем в писледующие 2 мес вакцину вводили еще 6 раз. Общая доза составила 550 млрд, м. к. Ч(,рез 3 мес после последнего антигенного воздействия ягнятам вновь была введена вакцина из штамма 19 в ьээе 30 млрд. м. к. Другим б ягнята в том же возрасте (5-6 мео) ввел:! вакцину впервые в дозе 30 млрд. м. х. У ягнят после многократного введения вакцины агглютинины синтезируются г б->лее низки* ти рах, чем после однократного. Б течение первых двух недель у большинства ягнят этой группы выявлялись антитела в основном /£(?-о<ггэсса. У животных после однократного вв.деьия вакцины первоначально обнаруживаются антитела ' и затем ¿^(/-класса, топи как начиная с 2с дня тояьги антитела /¿»О-класса. Следовательно, с помощью многократного вг чтения вакцины из штамк!а 19 удается снизить продукцию антител на последующее введение иммуногенной дозы гомологичной* антигена, однако животные продолжали синтезировать антитела обоих классов.

Также отмечено, что иммунизацп аакгиной из штамма 19 вызывает измене, ше количества Т и В-лимфоцитов в крови ягнят 3-б-месячного возрасте, характер котор01 з существенно не зависел ог кратности введены вакцины и со дозы. Как после иммунизации, так и гипернммуннза-

цик количество Т-л1.мфоцитов ^челичивается, тс-да как количество В-лимфоцктов в отдельные сроки исследования уменьшается.

С этой же целью был проведен другой опыт на 17 овцематках во второй половине беременности, из них 9 овцематок заразили подкожно вирулентной культурой 16М В.те1кепшь дозе 200 тыс. м. к., остальных иммунизировали вакциной из штамма В.еу-1 В.пгеШсмк в дозе 2 млрд. м. к. Полученным от зараженных овцематок 10 ягьятам в возрасте до 10 дней ввели вирулентный штамм 16М в дозе 200 тыо .г.и 5 ягнятам, родившимся от иммунгзированных маток, вакцину из штамма Яег%1 в дозе 500 млн. м. к. В возрасте 6-7 мес ягнятам обеих групп ввели вакцину в дозе 2 млрд. м. к.., аналогичным образом иммунизировали 10 интакт-ных ягнят .43 благополучного по бруце^е-»у хозяйства.

У ягнят, зараженных и вакцинированных в раннем возрасте, антител не обнаружено. Ягнята, зараженные в раннем возрасте и иммунизированные в возрасте 6-7 мес, синтезируют в основном /#М-антитела. У трех ягнят титр РА не превышал 50 МЕ, и только у 5 на 7-й день антитела зарегистрированы в титре 200 МЕ. Антитела /¿»(Т-класса выявлены у 2 ягнят на 28-й день в ппре 25 МБ. У ягнят, привитых вакциной в раннем возраеге. после ревакцинации выявлены в основном анлггела 1gM-класса. Антитела /§С?-класса обнаружены только у 2 животных на 28-й день. У ягнят, иммунизированных однократно в возрасте 6-7 мес, агглютинины обоих классов выяпены у большинства: у 6 на 14-й день и у 4 на 28-й.

Что касается коли"ества неспе"ифк кских /#/»/ и то с высокой степенью достоверности установлено уменьшение его после иммунизации у зараженных ягнят и увеличение у незараженных после вакцинации. У двукратно вакцинированных ягнят повышение уровня 1%М установлено на 14-:1 д^нь (Р = 0,004) и сохранилось до 84-го дня. У однократно вак-цинир. - днных ягнят увеличение количества ^О установлено на 4-й день (Р = 0,01) и на 7-й день (Р = 0,05).

Материалы двух опытов показывают, что индуцировать иммунологическую толерантность к бруцеллач у ягн :т раннего возраста достаточно трудно и определяющим явл-ются время контакта жиьотных с антигеном, его свойства и доза. Вакцина из штамма 19 явилась для ягнят имму-¡югенной и, несмотря на многократное ее введение, индуцировать толе-р нтность в В-системе иммунитета не удалось. Вакцина способствует образованию клеток Памяти, которые после повторного взаимодействия с гомологичным антигеном обуславливают втори"чый ответ с образованием в основном /&£7 антител. Наиболее убедительные данные об клдукции толертитростч 5 ягнят к бруцеллам подучены во 2 опыте. Вирулентный штамм бруцелл и вакц.|; ИьШ штамм кер-1 обладают наиболее выраженными .олерогеннымн свойства,.,и. I лшукции толерантности способствовал и тот факт, что ягнята, £од»вшиеЫ И сояерж щиеся с зараженными и

вакцинированными матками, получали длительное время бруцеллезный антиген. Наши данные согласуются с данными, полученными В.К. Гринько с соагт. ^1983), которым также удалось индуцировать толерантность у ягнят лишь тогда, когда имел место контакт бр;'целд вирулентных штаммов с развивающимся эмбрионом.

3.5. Взаимосвязи в системе иммунитета у телок щи бруцеллезе.

Исследовали материал от 30 телок (10 - реагирующие ьо первичному ответу, 10 по вторичному и 10 толерантных телок.) до экспериментального заражения и через 7. 14 и 30 дней после него (раздел 3.3").

Установленные изменения числа иммунокомпетентьых клеток (табл. 6) после введения бруцелл вирулентного штамма указывают на степень иммунологической перестройки. В основном увеличивается количество лимфоцитов, за исключением ЕАС-РОК. Однако по установленному иммунологическому статусу не удается определить у животных исхода инфекции.

Таблица 6

Динамика значения иммунологических параметров

_у телок после заражения, тыс/мкл___

Сроки исследования, дни Сьмволы статистики Лимфоциты,

Т-(Т) ' В-(В) г^куе) ЕА-РО(А) ЕАС-Ю(С) ВАГ-Ю(Г)

До эара..са- ния Мх= 4,Г; 1,57 1,45 П,о4 1,04 0,78

т,\± 0,26 0,12 0,09 0,08 . 1 0,06

7-й _ Му_= <\26 2,1 0.44 1,11 0,79 1,12

п.у± 0,35 0,15 0,03 0,13 0,07 п,11

р = 0,002 0,01 0,0001 0,1 0,05 0,01

14-й МУ= Ь,51 2,05 1,75 0 ,Г 5 0,69 г_ 1,56

ту± 0,34 Го, п 0,09 0,07 0,0о 0,08

Р = и 0,00о 0,02 0,31 0,002 0,0001

30-й Му= 5,97 1,83 1,76 0,9" 1,33 1.28

ту± 0,36 0.-.5 0,12 0,07 0,08 0,11 0,0002

Р= 0,007 0,13 0,04 0,54 0,32

В последующем пропели анализ взаимосвязей иммунологичеекгч параметра с помощью меюда лпск'регно-динпмн'дескоп" анализа, сущность которого состоит в том, что исследуемую хрупну живошых делят по значению одного Из параметров. Принятого в качестве базисного, на три приблизительно равные по величине подгруппы. В 1-ю входят животные с минимальными значениями базисного параметра. Во 2-ю с максимальными и в 3-ю со средними значениями. 13 каждой по; ируппс расчшьшягот срсдние значения остальных (;,арнабс;;ч1ых.) парамсгроп. 3 тех случаях, когда средние значения гарпабедыюго йарамс/ра в Подгруппах с минимальными и максимальными значениями базисного параметра достоверно различаются, констатируют ннлм те взаимосвязей между данными базисного И вариабельного папаметров. Взаимосвязь положите" уа, если при увеличении базисного параметра уровень вариабельного также уве-

лнчнвается; отрицательна, если при увеличении базисного уровень вариабельного снижается. В работе использованы две подгруппы с минимальными и. максимальными значениями, так как подгруппа со средними существенно не отражает взаимосвязь исследуемых параметров. Для оценки существенности различий между двумя средними величине ми Мх и Му использовали Ькр'черий по Стьк.денту.

Для стандартизации измерений ' взяли минимальное значение варьируемого параметра за 100 % и лросчитали максимальное значение варьируемого параметра в процентах к минимальному значению. Если определить разность между значениями варьируемого параметра в подгруппах (2-1) базисного (Т-лимфоцнты), то иммунологический профиль при пчтологии после заражения в сравнении с нормой для такого сочетания варьируемых и базисного параметров можно предстагить, как показано на рисунке 1. Обозначения на рисунке расшифрованы в таблице 1. В соответствии с величиной и направлением взаимосвязи, сочетания параметров у животных до заражения расположили в ранжированный ряд (рис. 1 а). В другие сроки в той же последовательности, До введения вирулентного штамма бруцелл представленные вариабельные параметры имели с базисным положительную связь (Р < 0,05), за исключением Б РОК, у которых с Т-лимфоцитами связь была слабой. На 7-й день (рис. 16) взаимосвязи усиливаются по величине, оставаясь положительными (Р < 0,05). Показатель реакции торможения миграции лейкоцитов (ПТМ) на 7-й деш после заражения принимает отрицательную связь с базисным параметром (Р < 0,05), На 14-й день в иммунной системе животных достаточно, «етко проявляется дисбаланс по отношению к дпупш срокам исследования, особенно при базисных параметрах: ЕА-, НАС- и ЕАГ-РО лимфоцитах. Изучение отдельных взаимосвязей между параметрами определило состояние бадакоа в норме (до заражения) к дисбаланса в системе иммунитета При патологии (14-й день). Однако это не даегг нам представления о состоянии иммунной системы, определяющим протективность иммунитета у отдельных животных. • ■ Далее изучали взаимосвязь иммунологических Параметров у телок ; с отрицательной бактериологией до и через 14 дней после заражения и таким ке образом у телок о положительной бактериологией. Было отобрано 50 телок, из них 20 с отрицательной и 30 с положительной бакте-. ркологией.

У телок с отрицательной бактериологией до ьведепия бруцелл вирулентного штамма установлены силъш ге положительные связи (Р < 0,05) между содержанием В-лимфоцитов (базио) и Е-, БА-РО лимфоцитами (вариабельные), тогда Как у телок с положительной бактериологией сильные положительные связи при этом же базисе В- и БАС-РОК. Такие же взаимосвязи установлены между БА-РОК (базис) и В-лимфоцитами, ЕАС и ЕАГ-РОК (вариабельные) у телок с отрицательной и только с

ЮТ 120

0 п п

0 !П

Т а В С Г Е

0 —5 __

п £ 1 1 г* * I.......

I п

Т А В С Г Е

■72".

1СО в Г ..... г1

120 — — [_

80

40 Пг-, ~1п П Г!

0 т А В с г Е и т А а с г ЕЕ П

Рис. 1. Иммунологи пский профиль у телом, зараженных бруцеллезом, предсташки-нме в виде взаимосвязей параметре;', выявленных днсгпетно-динамическим апалшом (баше - Т-лнмфпаиты): а - до заражения; б - через 7 дней; я - через 14 даг^- г - через 30 дней после 1аряж«1ят; по оси ордщгят - рязпость мекаду значениями варьируемого параметра в подгруппах (% к минимальному значегопо).

1 оО 1 21! ею

40

а

-40 1ВО 120 во

до

Пп

п

о ■до

5 Л У. -105%

С^3 С=»

п

п

.'{5

П

В

иг

Й1

О п

в

Рис. 2. Иммунологический профиль у телок сотрии-■. .тыгой I I и положительной ^ бактериологией через Й дней после зщыжегата, описанной с помощью взаимосвязей параметров: а - базис - ЕД-рок; б - ЕАГ-рок.

а

ЕАГ-РОК у телок с положительной бактериологией. БАС-РОК (базис) положительно взаимосвязаны у телок с отрицательной бактериологией с ЕА и ЕАГ-РОК (Р < 0,01), тогда как у телок с положительной ЕАС-РОК с В-лимфоцитами и Е-РОК (Р < 0,01). При базисном параметре ЕАГ-ЮК взаимосвязи также отличались у телок с отрицательной и положительной бактериологией. Эти данные показали, что еще до введения бруцелл вирулентного штамма у телок, которые в последующем противостояли экспериментальному заражению и заразились, существенно различается состояние иммунной системы.

Аналогичные исследования провели у тедок через 14 дней после заражения. Анализ взаимосвязей мея'ду БА-РОК (базис) и вариабельными показал, что у телок с отрицательной бактериологией находятся в сильной прямой -'вязи с В-лимфоцигами, Е-, ЕАГ-РОК и отрицательной с ПТМ (Р < 0,05), тогда как у телок с положительной бактериологией такого рода связи отсутствуют (рис. 2а). Различий во взаимосвязях вариабельных парцмстров с базисным ЕАГ-РОК у телок 1 и 2 групп не установлено (рис. 26).

Проводя исследования таким же образом., в^яв каждый из параметров в качестве базиснсх-о, были выделены сочетания парамехров, имеющие высокую степень достоверности, и присущие только каяадоЙ из 1рупп животных. Сведения по сочетанию гтараыетров позволили приступить к реализации следующего этапа исследований составление дифференциально прогностической таблицы, пользуясь которой можно определить у животных через 14 дней после экспериментального заражения наличие протективного иммунитета или его отсутствие. С целью автоматизации дискретно динамического анализа, а также исключения суб' ек тивизма в нем, был разработан пакет программ для ЭВМ, включающий разделение исследуемых жизотныг на подгрупгы с минимальным и максимальным значением параметров о установкой стабильности гранин базиса. После этого с помощью про!раммЫ проводился статистическая оНработка цифрового материала в Подгруппах с минимальным и максимальным значениями базисного и вариабельных параметров по критерию 1-Стьюдента п построении*: дифференциально про1 ностт-еской таблицы. Интервалы различия по сочетанию параметров у телок с отрицательной и положительной бактериологией показаны в таблице 7.

Следовательно, Используя все 15 сочетаний параметров, указанных в таблице 7, V нас появляется во^ожность на основе определении иммунологических параметров прогнозировать у каждого животного без Проведения бактериотогчческого исследования развитие протективного иммунитета или ьнф-кционного процесса. Помимо этого, пользуясь таблицей, можно оценить участие отдельных иммунокомпетентных клеток в противобруцеллезном иммунитете, на что указывает критерий I по Стпо-денту.

Тяолипа 7

Дифференциально - прогностическая таблица

Сочекишс. Критерии t П реле л л ишерплла для со чет лнмн

№ рмрмао'-.чытыи ПО ____________________

ЧЛ! парам; гр С'1'.Т<1Д.Л!Ту ripoieKiMiüH.iii онук липе оа .не

(базис 1. '.MMV-IIIIC'' ta

1 ПГМ (Г-АС-) 5 01 ->= lf) 59 7 43 < 0,77

2 1 ИМ 'L'V ) 1.S2 :>- 22,6t"! <f ,;0 <= 0V5

3 ПТМ (П ГМ ) 3,73 >= 27,13 <= 22.10 >- 22,00

- щ ч - Е- ( с- } ' _ ,3.61. 0,75 Li- j:'L, ■<•= 1.27

5 3 С"1 • -- 0,/B >- 1-03 егг

6 ПТМ ( Е-) 3,26 >= 24,23 <= 15,30 <= 1,21

7 Е- (ЕА- ) 3,21 <= 0,98 >= 1,62 <= 0,75

8 ПТМ (ЕАГ-) 3,11 >= 23, .8 <= 12,84 <= 0,93

9 ЕАГ ( Е-) 3,01 <= 0.63 >=.1,12 <= 1,21

10 ЕАС(ПГМ) 2,71 <= 0,56 >= 1,40 >- 22,00

11 В-л(Е-) 2,55 • 2,07 >= 2,90 >- -1,91

12 ЕАГ-(ЕА-) - 2,51 <=0,83 >= 1,41 '<= 0,75

13 В-п (CA-) :;з2 ' 1,34 ' >- 1,93 <= 0,75

14 ЕАС-(ЕА1 ) 2.29 <= 0.60 0.80 , <= 0,98

(5 ЕАГ(ЕАГ-) 2,2(5 L <= 0,58 074 <= 0,98

3.6. Mamqmav,t по разработке fiejvoeo цслльпотой eriKUtuu.i против finyn '.тки'..

В лаборатории иммунологии ВНПИБТЖ (Нажин М.Л.. Переходом (".К.) и лаборатории медиаторов и эффекторов иммунитета ШШ-ЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (Суслон Л.П., Элы-opi Д.Л.. Фельдшером Л.АЛ разработан простой способ, в основе которого использована конъюгация антигенов, выделснны:: из вакцинного штамма 19, с; целлюлозной матрицей. позволяющий получить бесклеточную белкопо-нснлюлозную вакиину (БЦВ). создающую проилспцгньт иммунпиг у животных против бруцеллеза. Растворим) ut бруцеллезный антиген га штамма 19 В. tibor tus получали с учетом метода Канете с' al. (1978). Трехсуточную культуру штамма '9 смывали стерильным фи чюлошчеекпм раствором. Суспензии бруиели пстрчлнадлм 2 часа, затем авгокланироналн 20 мин при 121 С. Носче охлатсгения пригарзт центрифугировали при 15000 g и течение 20 мин. В надосздочнон жидкости определяли количество белка по Лоури и н<люл1. JOB.4.4K п качестве зной <л !.з Пенлш-к^нгто мафппу гозочилн из хлопковой раты по ммоду I;,.K.'Ie.v'пизз и Л .M.I уршна Для "ною лотк овую пату растворили п чсдни аммиачном комплексе (релкпш Швейцара) и переосажлалн. лоианлгя а рную кислоту.

в 1^-|_ул'лше '-¿го цещьолоза выпада ?г в виде мелко дисперсной ьзвесн. Был:1 мрилловж-ны разила тнпы целлюлозных матриц: I) целлюлоза, а'Г'И'и роганпая путем окисления иернодатем натрии диальдегндцеллю-лоза; .1) акпаированлая ами:юбе;0шще;шюлоза: 3) неактнвировакнал пере^саждекная ньотолэда с высокой сорбционной емкостью. Помимо создания хим.нпокцх сьязей при реакции бе^жа бруцолл с активированной це.ииоло-.ой (либо за счет взаимодействия свободных аминогрупп белка с альц'ч идкыми группами окисленной целлюлозы, либо д.1азсреаКмИИ о ам.шиСензилцелшолозоп) был применён другой принцип присоединения белка к целлюлозной м .трице, а именно через координационную связь, образуемую с помощ01э трех оюристого хрома. 3 результате этой работы б'.лг получены препараты, содержащие достаточ-но^ колгчеетво бетка на единицу сухого веса ц<^л. полозы. Для получения конъюгатоъ нсг.ользовали два метода присоединение антигенов бруцелд к п^лг^сдозной мафице: !1 когалентноо присоединение к целлюлозе, окнсл'-ннсл перкодаюм натрия, за счет реакции ме^ду Е-иынногрупгами оелка и пл^де; целыми1руппаыи окисленной целлюлозы, 2) присоединение к неактиьнрованиой целлюлозе зг. счет образование координационных связей с помоиыо трех хлористого хрома. Этот спо:оЬ более преимущественен, так кэк благодаря треххлористому хрому удается присоединил Зстьшее к отчество иммунизирующего Сешса ня 1 г целлюлозы (табл.

Спсгсб гдределедня количества иммобилизованного белка основан на иик-тьзонэнин красителя броыфенолпвого сгонегс (Б.З. Ле^тцинд, Д./-Эльгорт, 19«"/). Доза вводимых препаратоз опр^дгч&изь количеством белка, приооединепногок целлюлозе.

Таблица 8

Характеристика белков» - ц^цьолоз.чых комплексов _

Способ ПрЬСС?- шшения — 'Метрика Присоединенный антиген

Хара-те- 1 ¡Сопи-рмстика | чесшп. 1 «Р {Гадание Количество, мг

Езяго Присоединилось

ЬССГО аа 1 »р целлюлозы

тесной цеплншм;.' 6 АГ19В -М 177.5 ¿0

1 СуИСИЗ ИД ИЧ4УТЧ-ВЬРЛЛЦЬЙЦЛ!. тк,л- *. л 1.7 АГ19В 170 «1 ; , „ 4 а

Исходя из данных, ррььеденнмх и таблице 8, дальнейшие исследования провоп.ши о коныогитом, полученным вторым способом.

На беспородных белых мь.шал исследовали протекшвные свойства БПВ, исходного растворимого антигенг, а также сгнмулнрующзго действия ц^.иис тоэной матрицы. При бактериологическом исследсвамии оп-

ределяли инщ.кс ш1ф'11л'];ова»:нт)П1 (НИ) и кечнчштю марочных ¡.леток заража^г-шеп- шт&мма на ослззгнку 1,;'\1'е'_-по':;.ое числе. '.¡¡1.

Хак (¡оказали исслеяован.ш. !>'1Г, пьимвн"' '.'ньлсе'ит 11И г с и.:ех счучаях, по ергшченпю о соитвегслгукмчеЛ дож и гс><,дп01О аысега и контролем заражечня. Дез-1 антигена ч 25 и 50 чкг Счмпсп (Р- 0,05) снижают накопление сруцелл в селезенках мышеи. Кочъм,чаг"я нз иеллюлоз-ной матрице усиливает пгот эффект антигена. достоверность раз. игчш показателя селезеночного числа между групгимн мышей. чолучигмп." 2Г и 50 мкг белка в кокъюгзге. возрастает (Р- Од)1). Целлюлозная матрица несколько усиливагт неопсиифичежую защиту мышей «1-111 66,3), то где ког у нитактных после % зраж?ння 84 3.

Результаты исследовании по изученик» плн.елм.осп« ».мм 'ншета у мышеч линии ВАЬВ/с показали, что ЕЦВ выртба.ывает ныму-ште-. напряженность которого во все сро;сн не уцупг'ч иммунитету у кьгвей после введения вакцины из штамма 19. при этом через 3 и 5 же результаты гонорят о преимуществе протек" ивных свойств БЦЬ (ттЗл,

Таблица 9

Реэультать1 бактериологических исследований мышей лгнпи ВАЬВ/с в опыте по изучению длительности прстехтнвного действия вакциш.ых

препаратов

Ср<^кзира жени я после □педен: я пре-пярагоо (мес)

1

5

БЦВ

10

| сслезшоччое ИИ% |_ЧЧ1ЯП, 1й _

45 3,4+ Т,б

35,4

18,7

52,4 61,7

2,3-»: 0,6

2,1±Р,9

4.91-1,4 6,4± 0,9

Вакцина из лх. >9

10 9

10

10

ии %

62У

36,9

4е,з

СОТОС

чисчо, 1_

3,2±0,Н5

2,7± 0,9

Контроль зграженяя

11

45^8 71,7

5,6:11,2 4,0х 0,9" 7,1 ± 0,9

4

32,6

74,1

7С,в

У5,? 83,3

ссягаеночте ч-по, и

7,7 -С,36

7,6 ±0,33

8 1 ± 0,5 2

&,5 ± 0,0

В опыте на морских свинка:: серологическими реакциями установлено, что БЦВ. по сравнению с вакциной из штамма 19. вызвала более низкий уровень анткгелообразования. Гыры антител у отдельных животных не превышали в РА 25 МБ и РСК 1:10. Перзд гдрзжением (че^ез 3 мес после вакцинации) у морских свинок, привитых Б11В, максимальные титры достигали в РА 20 МЕ и РСК (п0. У животнм", привитых вакциной из штамма 19. максимальный упоьечь антнгсл был отмечен в РА >'ерез 1 мес в титре 200 МЕ и в РСК через 2 мес в титре 1:40. Пплот„ ¿о заражения титры антител практически не снижались.

У морских свинок, защишенны;; БЦВ в дозе 125 мкг. после за; а-^е-ния выделена культура вирулентного штамма 54 из одного лимфоузла (ИИ КП и у защищенной вакциной из штамма 19 в дозе 1 млрд. м к. 5 культуп (ИИ 5.2). у контрольных животных 58 культур (ЧИ -7£.3>.

п

п

9

2

8

е

7

В eu ire на овцах но изучению агглютши,генных и иммуногенных свойств БЦВ использовали 21 овцу. Опец 1-й группы иммунизировали БЦВ в дозе 2 мг, 2-й группы в дозе 0,5 мг и овец 3-й группы иммунизировали вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м. к.., :!сш'ошые 4-й группы Сыш контрольными. Через \ .лес после иммунизации овец заразили вкрулечтной культурой H 102 В.теЛшии в дозе 2 млн. м. к. и через 35 дней у oui: и ддя изучения иммунитета.

Серологическими реакциями установлено, что на введение БЦВ у овец синтезируются агглютинины и комплементсвязыватошие антитела, уровень которых на 14 день сушетгоенно не отличается от уровня у овец, пригшых вакциной из штамма 19. Через 3 мес агглютинины не выявлены у овец, привитых БЦВ, и зарегистрированы у овец, привитых вакциной из штамма '9. РСК бьша положительной у всех овец, привитой живой вакциной, до конца исследования и была отрицательной на 64-и день у овец, привитых БЦВ.

Результаты пз изучению иммунитета показали, что протективные свойства сравниваем! ix препаратов существенно не различались, однако ПН у овец, привитых БЦВ в дозе 2 мг. несколько выше, чем у овец, привитых вакцнпой из штамма 19 (табл. 10). БЦВ в дозе 0,5 мг слабо защитило животных отэкскериментального заражения.

Следовательно, белкоъо-цеяшолозная вакцина, приготовленная простым способом соединения белковой части водорастворимою антигена бруцелч вакшишого штамма 19 с целлюлозной матрицей, индуцирует чыражеиные реакции клеточного иммунитета, но с более слабой серопо-'зил.лнретыо. Анализ исследований и наблюдения за животными показали, что БЦВ безвредна в использованных дозах. Во всех случаях не обнаружено отрицательных реакции. Под кожей частицы целлюлозной матрицы и погибшие лейкоциты илкаисулирукяся и у овец достигают в диаметре до 1,5 см.

Таблица ю

Результаты биг териологического исследования овец, _привитых противобруцеллезньши препаратами___

Препарат, Количество % Индекс ин-

доза на животных Заразилось иммун- фицирован

животное ных - ностн, %

BLCrû генерашшоааино

БЦД 2 иг 5 2 I 60 8.0

ЩЬ, 0,5 мг 6 4 1 33 9,5

Вакцина ш- :аш.1 19, 40 Miipn м. к j 2 2 60 5,0

Koutjioia 5 5 5 0 23,5

3./. Реакции шпупелогическсй г&гчи'а << та-рмирчаалг у молодняка крупного рогатого ско.ггл при туберкулезе.

С целью изучения состояния иммунной системы и разработки нового способа диагностики туберкулез у телят, трив'тых вакциной БЦЖ, бмла проведена серия опытов 10 телят г возрасте до олчого ,леся-га заразили культурой ьчрулентного штамма К М.Ьогй' ПЬПИБТЖ путем трехкратного скармливания с л.первалом л один день по 0,05 мг на ! кг массы животного, затем через 2 недепч им ввели вакцину ЗЦЖ внутрнкожно в до-^е 1 М1; другим 13 телятам уИгтактныО ввели вакнигу БЦЖ'аналогичным способом. Через 30 дней лос^ иммунизации животных исследовали ППД туберкулином дпя млекопитатоши ', Чер^з 6 мес после вакцинацни "животных убили дав. изучения туберкулезного процесса.

У некоторых телят, зараженных туберкулезом, через ? недели выявлены реакции на ППД туберкулин однако утолщение кожной склад :» не достчгало 3 мм. Чергз 30 дней по"ле им.чунипцип алгер) ичес/сая реакция у телят зтой 1руппы составила 23,6 ± <!,• мм, у отдельных животных она превысила 30 мм и не б» ша ниже 15 мм. У и чта.ггмых телят через 30 дней послр гакнипации кожная оеакция составила 8,1+2,1 мм и не достигали 15 мм. У 5 ю 1 телят, зараженных туберкулезом, после убоя установлен туберкуы >.

Из неблагополучного по туЬс) кулезу крупного рогатого '-коп хо зяйсгва I > результатам кожной реакции на ту >еркугчн »срез 30 дней после вакцинации БЦЖ быт отобраны 2!» т^ляг в возрасте до <1 мес. Из них 10 с низкой туберкулиновой "еакчиси, утолщение кожной складки в среднем составило 1.6 мм ' 1-я групп«), 10 с хорошо выпаженной реакни-ег, утолщение составило в среднем 10,7 (2-я группа), 5 не иммунизированных ~елят, но реагирующие на туберкулин. \ толщение кожнег складки составило 12.2 мм (3-я группа). Дополнительно взяты в интктных Телят в Возрасте до 2 месяцев из благо, кмд-чного по туберкулезу хозяйства, которых иммунизировали рчкцинр''! БЦЖ т? дозе 1 мг (4-1 группа*

Результаты исследований, предегавленные в таблице 11, показывают, что интенсивность тубергуличовых реа:сичй у телят 1-й группы увети-•чшась через 58 дней, тогда как у телгт последующих групп, особенго у 2-й, снизилась. Туберкулез установлен у одною ареактивного животного (отсутствие реакций как через 30, так и 5Й дней), у 8 телят с гилерэргмче-скон реакцией, а также у 4 не привитых, но реагирующих животных.

Аналогичные исследования ,юд нашим руководством Ытли проведе-нь! сотрудниками лаборатории иммунологии ВНИИБТЖ (В Л С эподе в-ннков, В.А. Мироненко, Ю.И. Пацула) ь совхозе "Малиновский" на ие-благополуч.юй по туберкулезу ферме, где из 10 телят, не реагирующих я? туберкулин через 45 дней после иммунизации БЦЖ, у 7 установлен туберкулез. ,

Таблица 11

Ггзулчгаты г.слсдьвангй га туберсткз титят, привигых вакцичсй БЦЖ

РрУ1-" гСо1.иче- Ксж.ши 1'ЗТ, чи в Диагноз нг. туберкулез Ьсего

пч сио слешей, через Сольных

№ 1 » аво»- .10 лип. 58днеЛ 1.Л ■шГ'Гоана • Ба>—ермол^- Гьотологи- живот-

1 "ЫХ гоьп*ческ11Й ГИЧМкЧЙ -¡есл.и ных

10 12 5:03 3,6 ± 0.8 1 - 1

2 10 30,71: 1,» 7 э± 1,0 й 5 7 О и

* 5 12,2 ±1,31 4,3 ±0,9 Д 4 4

6 6,8 ± :,г • 1 '

Оьсгоъртильно. туберкулин;>рыс реакции у инфицированных ми»о-сакт.с гччи тел г- после шл.^уни^ацги БЬЖ развиваются по двуу типам: "срвыГ. нмьуночи/нчс ;кая память, которая сопровождается усиленной кожнзй 1у6глсухпшовси реакцией; второй импунологическтг толерантность. которая отсуип.'чем этом реакции.

'^чмуи.гщия '¡акн.шой БЦЖ увеличив?ет ь крови тел»»1 количестве 7-лимфоцитов, тг.дт ках у заражении:: животных число их остартсч на "рыкнем уровне или умегьи'ается. Сниженное содержание Ти В-лимфгц.1Тов в ку о-ш телят отраж?ет } них длительную першстенцгпо возбудителя в организме. Вакцинация также узеяичисает количество и '\'М, ьзл.еьлет содержание нуклеиновых кислот и активиосл ферментов.

Результата мсследовэння позволили предложить способ диапюстн-ги ту б.ркул'-оа у '.ел.гг, привил >х вакциной БЦЖ, сущность которого за-кл очается в том, «то черес 30-4л дней пост/'; гакцинацил ЗЦЖ телят дополнительно чеследу.от на туберкулез о помощью однократной внутри-ксл;он туоеркулчновс й пробой и считтют больных по утолщеннк склгчгч чо-ги на 15 мм и выц-е, а также телят, у которых рдакция на ту-б^жугик сгсутствует. Способ позволяет ъ более раньис сроки выяа:1ят1 тегят, больпь'х туберкулезом с минимальной активностью. Для определения эф^'пиннс.сти метода диагностики было исл0л130ва«0 в ряде хо-"ячетв Омской ц Челябинской областей более 50 тыс. голов крупного рогатого скота, чакцн.шривачнг« БЦЖ в возрг сте до одного месяца в со-огв.т|.гвии с Нг г гвпением по прш.ененмю вакцинм БЦЖ. Перчэе иссде-доваж.е провод!1Ли через 30-45 дк-гГ] после иммуь:иации, затем через 11 м^с. Т'.ллт кода:ой реакцией, дооттиющей 15 .«м и более после первого псследсза.ц.л и арегчечшных выюдит в огкормечные группы живот-мых или vб,^вaлн на мясокомбинате. Для подтверждения эпизоотической эф^екг.гагэсти претлагагмогз мсгоди ксьолкювали клинический, ал-герП1'!.еск'Ц', патологзаит.омитеекп!' и лабораторные методы и.тдедова-ния. Анализ результатов по олюровти.ю ферм от туберкулеза с и с-пользование..) вакцины Б1'.Ж и предлагаемого способ? диагности ки в совокупно« .и с дрлтчми мерами показал, что на фермах ежегодно улучша-рте. г>пнзоо_п.ческ4.я силиция по туберкулезу скоти. Исследования, кача-

тые в 19У0 гиду под контролем автора, ¿/I "лайкина. докн.. профес-ори и В.Л.Зубак.ша к.в.н. в ряде ф»рм Омс:я П и Чслдоиискин пласты по-казагы в таблице 12.

Таблица 12

Результаты испытания гредлтга^мого лт^слба д/'агностики не неблагополучных ф:рм;.х за 1999 гол

Не'элагопсиг/Ч' Речгире- Р-и-ш"- Иссис со- Реякпии >сЛч1:овльн

лис пункты вало до нирог.п- выю че^-з тубс^ку^ез

вакцина но .е- 30-42 аре актиьло >=15 им ГСП V«

Соя.'созы: аии ляг дней гол ъ>9 Ю.1 %

КсСыр,тт,я':скт!Й (Ф. Кабырдак) 131 Я00 7Ь0 11 1,4 •л 1.6 6 46,1

Краскоусовсклн (ф. Красиоугоьо) 235 760 710 10 1,3 ¿2 ¿.9 8 36 А

Октябрьский (•Ь. Бердзчково) 78 1250 :?.оо 13 1 1 1И 2,Л 3 9.6

Коммунист (ф. Соляное) 118 97С т и М •8 1 5.5

Сугояксклй 'ф.С\го!Г.<) (16 1100 ;о8э 18 1,7 31 г,9 4

Тсстллымсюж

(Л. Тс.лалым > 95 Г50 1320 22 1,6 23 2,1 3 ■ 0,7

Дииные таблниы. суммированные за 1990 ^д, подтвепущагот неблагополучие ферм пс туберкулезу. Послелуклчзя работа (1991,1993) суце ственчо улучшила эпизоотическую ситуацию. что 1.од\вердглн аллергиче-с::не исследования животных через 14 мес после нммуниз<ш"н. К ''^4 ~т>-ду все фермы были озцооовлены. Результаты прои^лидственио/о иегь.тч ния иммунологического метода диагностики тубер-сул=за у телят, привитых вакциной ЬаЖ. подтвердил!' Э7'спрримент4льные исследования м свидетельствуют о том, что у заболевших в раннем возрасте телчт со скрытым течением туберкулез.', черта 30- 45 дней после вакичнацчи БЦЖ отмечается стабильное краткозремечное появление усиленных ложных туберкулиновых реакций с утолщением кожнон скл-чокн на 15 мм и выше или их отсутствие.

4. ВЫВОДЫ

1. Внедрение в обший комплекс сгециалъных мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллеза и туберкулеза животных выявленных закономерностей по проявлению реакций иммунитета лычч-теггт.нс повышает их эффективность а именно:

- реакции иммунологической памяти поэволлют выявить лгтетлые форель; инфекции;

- с иок.омью Феномена холеу антностн диагностировать бактерионосительство у жизотных при отрицательных серологических и аллергических показателях.

2. Иммунологическая компетентность новорожденных телят и ягнят, пр'шитых противобруцсллезнымн вакцинами, определяется иммунным ответам, уровень которого в значительной степени зависит от дозы антигена, его свонсп. и образованием клонов клеток иммунологической памяти. Новорожденные животные на введение вакцин продуцируют рнгитела

класса в низких титрах. С /•озрасгтом способность их синтезировать антитела различных кдассоь {1&М и /§£/) усшшыется.

3. Реакции иммунологической памяти определяются высоким уровнем сьшороточн' IX антител /^С-класса повышенным содержанием в крови жигэтных нммунокомпетентных клеток нуклеиновых кислот, активностью феоментов и иммунчтетом повышенной напряженности. По-вышекне, сохранение или снижение титра антител на одно развецени» в РЛ с сыворотками, обработанными 0,1 М раствором 2-меркагпоэтанога, по сравнению с РА в обычно.-! постановке, указывает на высокое содержание антител /¿С-клаеса.

4. Реакции иммунологической памяти в гуморальной системе иммунитета можно определил г.осупиым способом, используя в сравнении результаты РА и РА-МЭ, у гелок в возрасте 3-6 мес через 14-20 дней после иммунизации агппотлногенньши вакцинами. У телок неблагополучных по бруцеллезу хозл'тств (до 10%) формируются реакции иммунологической памяти. Наличие на фермах телок, реагирующих го типу вторичного иммунного ответа, указывает на их контактирование с полевым штаммом бруце.ш.

5. Частичная иммунологическая толерантность у телят и ягнят * бруцеллам может быть индуцирована инфицированием в раннем возрасте высокой дозой вирулентных бруцелл, которая проявляется на повторное введение антиг.на синтезом антител только /§Л/-класса. В несла-гог.олучньл пунктах выявляется до 40% толерантных телок в возраст! 3-6 м^с при проверке их через 14-20 дней после иммунизации их ва«сциноГ из штамма 19.

6. У толерантные телок развивается иммунитет низкой напряжен ноли н они .тлеются бруцеллоносителямн. Повторное введение вакци ны из штамма 19, а также тнмарин кммуноцодулятор Т-системы иммуни тета снимают состояние толерантности у часты телок, стимулируя у нш синтез антител.

7. Иммунный статус толерантных телок после введения вакцины и' штамма 19 в иммуногенной дозе характеризуется уменьшенным колнче ством нммунокомпетентных клеток, неспецифич-с^нх чммуногг.обулино! и нуклеиновых кнслэт. Бруцеллы вирулентного штаммт у толерантные

телок после ьа::цинацин чызыьают пролиферацию Т н В-лнм{ эщиов, •по сопровождается увеличением в крови их количестве.

8. Методом дискретно-динамиче-жого лналчза ..южно определить иммунопатологию принципиально ногого , ,нн иммунологический дисбаланс, который характеризуется отоицательнммч ьсгиносвязямн и.игу-гологических параметров у телок, приви,ых вгкцинои из штамма 19. Особенно четко проявляется сост.ч ше дисбаланса при базисных параметрах: Т-киллеры п Т-лимфошьы. реагирующие с антигеном бруцетл.

9. Метод дискрегно-дннамичежего анализа может быть использован в практических целях для определения нмгунн л о статуса животных, что подтверждено эксперимент) тьными чанными после заражения телок вирулентной культурой бруцелл. Оценка у ровня специфического иммунитета у телог мо/сет ьыть болеь ускоренной и объективной при помощи разработанной на основе ЭВМ диффер;нцнально-ирогностигеской таблицы.

10. Разработанная по новой технологии белково-щллтълозная вагсцина (ВЬЦ) индуцирует у животны." в: .раженную реакцию клеточного иммунитета, которая не иммуногенности не уступает вакцине из штамма ! 9, но имеет преимущество за счет нижой серопозиуивностч и •жологн"еской безопасности.

11. Иммунный '»'тз.т у ..члодняка крупнего рогатого скота на введение вакцдчы БЦЖ сопровождается накоплением эффекторных клеток ГЗТ, синтезом неспсцнфических иммуноглобулинов, изменением п крови количества нуклеине вых кислот и активности фq'»мeнтoв. Увеличенное число Т-лчмфоцнтов в крови телят отрд-кает повышенную их устойчивость к туберкулезу. У больных туберкулезом телят количество нммуно-компетентных клеток уменьшается.

12. Телята с латентным течением туберкулеза отвечают на введение вакцины БЦЖ: в о;:,ном случае гнперэргическнми колшь'ми реакциями на ППД-туберкулин (15 мм и более); в другом отсутствием таких реакций. В неблагополучных по туберкулезу крупного рогттого скота хозяйствах тткие реакции у телят ртистрируктся соответственно: до 13 2% и до 2.2%. Инфицированных до вакцинации телят можно выявить дополнительным исследованием на туберкулез внутрикожиой туберкулиновой пробой через 30-45 дней после введени- вакцины БЦЖ.

1

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Способ диагностики брудезшегт у телок, привит- п. вакциной из штамма 19. с использованием феномена толерантности (Наставление го применению вакцины живой сухой из штамма 19 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота, утв. ГУ В МСХ СССР с Госге-тинспекцчей, 27.04.83 и ГУВ Госагропрома СССР, 10.11.88 г).

2. Методика применения пропшобруцелп^ньк вакцин из штаммов 19 и 82 (Сказани* о порядке применения прстивобруцеллезных вакцин из штаммов 19 и 82, утв. Г/В гостгропроМа СССР, 19.03.87 г).

3. Способ диагностики туберкулеза у теляг, привитых вакцилой БЦЖ, с использованием феномена толерантности (Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота, утв. ГУВ с Госветиспекцисй МСХ СССГ, 22.02.85 г).

4. Способ диагностики туб ер-гул еза у телят, привитых вакциной БЦК, с использованием реакций иммунологической памяти (Временное наставленн« по применению способа для производственного испытания, угв. ГУВ Госагропрома СССР, 23.02.89 г). Способ защищен патентом № 1829929.

5. Методы оценки Т и Е-систем иммунитета у крупного рогатого скота при бруцеллезе и туберкулезе (Методика использования критерий оценки Т и B-систем иммунитета у крупного рогатого скота при бруцеллезе н туберкулезе, угв.ОНКвет ВАСХНИЛ,26.09.88 г).

6. Методы оценки реакций иммунологической памяти и толераттю-стч у телок при бруцеллезе. Реакции определяют через 14-20 дней после иммунизации вакциной из штамма 19, сравнивая показания РА в обычной постановке и РА с сыворотками, обработанными 0,1 М 2-Меркаптоэтанолом. Повышение, сохранение или незначительное снижение титра антител на одно разведение в РА-МЭ, по сравнению с РА, соответствует иммунологической памяти, тогда как отсутствие агглютининов 1ши в РА уровень антител не превышает 100 МЕ-нммунологическая толерантность (Методические рекомендации, утв. ОНКвет ВАСХНИЛ, 26.09.88 г\

7. Способ получения вакцины против брушмшеза (Решение ВПИ-ИГПЭ о выдаче патента на т.зобретенне, 27.04.94 г).

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бажин М.А., Коидауров Б.И. Биосинтез специфических и «специфических имыуноглобушшов в зависимости от зраста телят в дозы бруц«ш//Сб.иауч.рабох СибНИВИ.-01-сзс,1975.ВыпЛХУ.-С21-27.

2. Бляаш Нобшьлш A.A., Кондауроа Б.И., Kochjiob H.A. Иимунологичс-ская холсраптность у телтт к бруцыпнш//Сб.науч.работ СибНИВИ.-Омск, 1976.-Вып.ХХУН.-С.7-12.

3. Конлауроз Б.Н., Камаш МЛ., Миканлоыа W.T. Вторичный иммунный отпет у ягнят, тнгшииюваииых в первые дай жнзни//11роф1.дактика заболеваний сельскохозяйственных л промысловых животкых / Сб.науч.работ СибНИВИ.-Омск, 1977,-ЗыпХХУ1П.-С.96-Ю1.

4. Б.шш МА, Коццауров Б.И. Содержание иммуноглобулинов у хеши после перв-'шого н вхе ричного введения вакцины вз штамма В г. abortus 104-М // Профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных/Сб.иа/ч.работ СнбНЧВИ,-Онсзс. 1977,-Вы..ЛХ1Х.-Г.З-Ь. .

5 Бгжнн М.А., Копдауров Б.И. Метод повышения г тпряжечности нммуинтета против бруцеллеза у мозодняха vpy- ного рогатого скота//Там же.-С.9-13.

6. 1чоидяз|1о„ Б.П., Бяиг-м М.А., МихаР теня И.1 . А .тивпх.^ дею.сснриб нук-леяз в организме ягнят после введения вакцинных бр^нелл шт.)9 и Меры борьбы с табояевннгчии .ельск-охозяйстяенных жи огных и пр шнпрек.ых кочп.гетесях / Сб.науч.работ СибНЛВИ.-Смск. ¡977.-1 ип.ХХХ.-ГЛ 1-15.

• 7 Ба::пщ М.А., Ко.вдаур«.:: Б.И., Кузо.-шн 1..П, Иммунный .•тчет н;. введение и;,кщшы из шт. Бр.абортус 82 у овгл, пр. витых р-чгс ; впкшпюЧ "7 шт. 19 // Тим : С.(„-21.

8 Батат М.А., Конд: урке Г>.Н., 'Ь: щгаз. А.Д. Особенности "носинтеза иммуноглобулинов после вакцинации у телок, чярчжепгых ьрук.'лезом в ие~ия .гщ ный псриод/.Инфекционнис болезни животных/ 76.на^ I работ СнбНПВИ.-Омск. 1978.-ВыпХ50а1.-С.11-16.

9. Бягят МЛ., Коачяуров Б.М., Ноттикгт А.;». Содержание гукпе"Нолых кк-счот после иммуинзаичн в крог ч тГ) ок, зара-^нннх бруцеллезом 1 раннем возрае-хе/Лл1фсишонныс болезнн жииотных/Сб.1 чу ч. работ СибНШ!И.-Омсгс. 1979,-Вып.34.-С.1'7-21.

10, Кенздуроп Б.1 ¡., (.аж-ш М.А. Бносннгез пчтчтел. согержанне нуклеиновых , мияот и активность нуклег > у эксчериментал'.нз зарагхнныхбруцеллыом ягнят/Л'ач же.-Л2-29.

П.Багъл! М.А., Кчгхяурон Б.И. "Зиоснлтгэ спсцпфпчесю.х и неспецнфнче-емх иммуногж булини, у ягнят, зяражеингх ~руцегла-.1'//Гамже.-С.35-39.

12. Неустросп ГИ.П., Ры®к01.я Л.П., Кондяуров Б.II., Бааги М.А. Иммунное состояние и морфологически изш ..испил " ягниг. ваггчнчровапчых Вг.теЧиийч Нег-1, до и после снижения бруиетеами//Д-гагностика ч профилактике ннфекцисынчх болезней животных: Сб. пауч .тбот СиРНИВИ.-Омек ¡980.-Вып.37.-С.21-Зб.

13. Кондяурап Б.«-,., М.Л. Метод ..огмшепия тпр'гкепности и: »мунщетя против бруцеллеза V молодых животны //Материгчы Всесогоз.науч.коиф., Омск, 2П-23 мая 19Р0 -М..1980. С.2? 1 -224.

14. мкиан! МЛ., Чпмдаурин Б.11., ('¡.иккс.на ПЛ. Иммунное состояние и морфолог нн"«™^ пзменеиил у телят привитых вакциной но штамма 82//Хропические инфекции животных/Сиб.отд-нце ВАСХН ИЛ.-Новое.,бкрек, 1981.-С.10-!6.

15. Баиаш М.Л., Конляуров Б.Ч. Биосинтез специфических и яеепепифиче-ет-нх и ■!»,;)'» о г л о 6у л ни о в у овец и г-пяг, вакцинированных и зараженных бруцеллезом //Таи ,;<е.-С.28-35.

16. Бпздт М.Л. Состояние иммунной системы у ягнлт, прнвн~ых вакццнон из штамма Вг.аЬоПи« 19/лХрсническне инфекции жьвотних; Н^ч.-тедн.бюл./ВАСХНИЛ, Сиб.отд-чие, 1983.-Вып.31 -С.28 34.

17. Бя!яш МА Содер канн'; иммуноглобулинов, !гт-лстг-)вых кислот к активность ферментов у теля-, привитых вакциной БЦЖ//С6. науч. трУАСХШШ, Снб.отд-ние -Новосибирск, 1983.-С.23-28.

18. Новпцкпй А.А., Бя-пш М.А-, Кондаурон Б.И., Косил чя И А., Мнрсненко А.Т. Иммунологическая толерантность крупного рогетого скота при заражении бруцеллезом // Сельскохозяйственная биология,-1483.-Кч.-С. 100-[04.

19. ХяПкш! С.Я., Бяжт'> М.Л., Кр«вм» Д.Т., Рыжклия Л.П., 3}Пякин В.А. Инну-почогнческая и морфопогнчсскяя рпкция } телят, н-1м>низированных вакцннсЗ 1)ЦЖ//ВетерИ|1ат1ИЯ.-|983.-Ь 12.-С.25-27.

20. Бя тт! \1.Л. Хантш Б.Я., Зубак'п В.Л. Проявление иммунологической памяти у телят пр», туберкулезе // ССтму.тр./ВЛСХПИЛ, Снб.стд-ние.-Н^посибирск, 1983.-С.29-33.

21. Бямоп! М.А. Иммунологическая памят'. и юлсрашность у телят прг туое^-кудгае и Оруцслляе//Ветеринария,-19841.-С^9-30.

22. Uüii. ni VI.«., Iviid-uiOB Г.С. Проявлен! e иммунологической памяти у телят, ч»шунизироазн.;ь;у вакциной из штамма 19 Br.abortus // Сб.науч.тр. / ВАСХНИЛ. Си? отд-иие.-Ньвосибирск. 19У6.-С.48-52.

23. Баааш М.Л., Ф:шы-о lt.П., Об<ншш Р.Б. Взаимосвязь иммунологических параметров у .¡олодпяка крупного рогатого скота при Ьруц.тлезс ¡1 Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. Сиб.отд-н;.?. -Новосибирск 1987. С. 4>-51.

14. Бшкш> М.А., Миронеико Ü.A. взаимосвязь иммунитета и содержания имму-кокомпитеатиых 1С етоку телят при бру:;еьлезе//Методы днягпс^тн' н п профилактики бр^цеш.еха и туберкулеза животных: СС. науч.тр./ВАСХНИЛ. В НИИ ЗТЖ.-Омск, 1988.-0.31-41).

25. Мнронсши В.А., Ka um IVt-A. Состояние системы иммунитета у молодняка ^рунного рогатог.- скота после многократной иммунизации вакциной из штамма )9 FrvceBa abortm II Профилактика инфекционных болезней сеяьск хозяйственных животных: С5. науч. тр ./ВАСХНИЛ. ГШНИЕ'Ш.-Оик, 1988 .-.3-9.

26. Бг-кии М.А., Миронсш:^ P.A. Иммукологичеста.г реакции у телят из неблагополучного по бруцеллезу стада после иммунизации и экспериментального заражения II Бруцельгэ сельскохозяйственных ж.1вотных:Сб.иауч.тр./ВАСХНИЛ. ВШШЕТЖ.-Оиск, I989..-C.56-02.

27. Важ>..1 М.А., Мнромсш.-о В.А., Переходов« С.К., Солпд-вшпсов ПЛ., Пацу-ла IO.il. Катоды оценки Т и В-систем иммунитета у крупного рогатого скота при бруцеллезе и туберкулеза (методические рекомендации) // ВАСХНИЛ. В1НШБТЖ.-Омск, 1989.-36 с.

28. Вами. i М.А. Индуцирование иммунологической толерантности у ягнят к бруцешъш//Пути совершенствования профилактики ч диагностики бруцеллеза сель тсохозяйственаых жнвотктлт.: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. - Омск, 199Ü.-C.94-104.

29. ГЬр^ходзва С.К., Ба йт М.А.. Мироне, .к а В.А. Влияние пшаршш на пока-;ателч иммунитет;: прн экспериментальном бруцеллезе //Там же.-С.110-118.

30. Зубакии O.A., Хшцл.л М.А., Ба<.лн МЛ., Богаиец Н.С. Разработка оптимальной схемы иммунизации против туберкулеза вакциной БЦЖ ремонтного поголовья крупного рогатого скоп // Разработка средеiв и методов борьбы с туберкулезом животных: Сб.науч.тр. /ВАСХНИЛ. ВШ'ИБТЖ.-Омск, I990.-C.49-54.

31. Мирсшшсо A.A.. ¿"Win IV1.A., Переходоса С.К., Нагобии В.В. Динамика пещугищы лимфоцитов у животвчх при введении хнмарина а вакцины из штамма 19 н взаимосвязь с иммунитетом // Сб.науч.тр./ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ.-Новосибиоск, I99I.-C.54-64.

, 32. Башы Л I.A., Coj.j^oiüniKoa BJ1. Способ диагностик"! туберкулеза у телят, привитых ватинов БП,Ж II Описание изобретения к патенту II 1829929.-1993.-Бюл. N 27. ;

33. лашгна Б.Я., Башш М.А., ''yöwta H.A., Кище«и H.H., Ждгшиз П.И. Иммунологический метод диагностики туберкулеза у телят, привитых вакциной БЦЖ // Гез.док.н.-па<олф.-Ковос11бнрск,!2-13 июля 1995 г. /РАСХ11. Сиб.отд-иие. ИЭВ-СиДВ.-Новосибирск, 1995. С.55-56.