Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Реактогенные и антигенные свойства вакцины против кампилобактериоза крупного рогатого скота, приготовленной с различными адъювантами

О ^ 9 2

ВСЕИШшСКИП НАГ-ШО-ИСЛЛЩОйАТЗШГыЙ ИНСТИТУТ ЭКС.ШВСДШТАДЬНШ ВЗТЖПКШ имеип_ Я.Р.КОН/ШйСО- (ШЭВ) ----•""

рсшйаал АШЗ.:Я сйг^кохозяГсташх НАУК

11а правах рукописи . ........

опк ораз^КША __________________

'УЖ 012:GIG.SU:579.843.1-085.371

рзактсглпые ;; англглшз свойства злкзга против ХА:.гп1лаЕ,истЕГ?:ооА кр/.исго рогатого скот, нриго-

С РАЗ.ЛШШ! АаЫЖПАМЛ.

15,00.03 ветеринарная-ютробиолс:-"" ;"вирусология, эпизоотология, миологи.-. и типология.

* чтореферат ¿ри^ -па сопскайзе учелоП степени

кадииата встеглнарянх каук

'_______________гХлисж*»* Х'Л,^

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностика и профилактики патологии воспроизводства животных (ШЗВ)

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профеооор М.А.Лучко. .

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор В.А.Бурлаков (ША)

2. Кандидат ветеринарных наук В.З.Еондаре-тсо (НГНКИ вет-преларатов)

Ж

Ведущая организация - Московский институт прикладной биотехнологии.

дата диссертации состоится 1992 г.

чаоов на заседании Специализированного Совета

.К 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко (ВИЭВ)

N '

по адресу: 109472, 1.1осква, Кузьминки, ШЭБ.

С диосертацией можно ознакомиться % библиотеке ШЗВ. Автореферат- равослан " у " г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, кандидат ветаранарншс наук -

Ф.Г.Терешов.

. 'I ОБЦМ XAPAKTJHiCM'iA РАБОШ -

таций I,

——-Ч Актуальность, лри приготовлении вакцины против кампилобак-териоза .тавотных как за рубежом так и в нашей стране широко используется адъювант на основе минеральных масел. Оддако, эмульгированные препараты обладают значительной вязкостью и реак-тогенностью, что затрудняет их применение при массовых обработках ( Ho«rleln A.B., Кгатг Т.Т.,1964t ПгсЬатмг B.D., Berg R.L., 1966» Clari B.L. et el,1974t Schurig (1.0. et al,1975t Лучко :.:.А.,Грубицки.'! A.H.,1979; UaitapoB B.A.,IS83 и др.). Использование указанных вакцин, особенно в зимнее время, сойряжено о определенными трудностями.

Учитывая вышеизложенное и тот факт, что с 1987 г. в нашей стране прекращен выпуск минерального масла для эмульгированных вакцин и антигенов Ярославским нефтехимзаводом, изыскание адъю-ванта для приготовления вакцин против кампилобактериоза крупного рогатого скота и др. препаратов является актуальной задачей ветеринарной науки.

3 связи с этим, целью нашей работы являлось изыскание адъю-ванта, позволяющего изготавливать легко вводимый, умеренно реак-тогенны? препарат, при сохранении йысокой иммуногенности.

Задачи исследования:

1. 3 сравнительном аспекте изучить фиэлко-хлмнчоские свойства различных углеводородных касол.

2. Лзучить реактогенность сада углеводородных масел на лабораторных животных и крупном рогатом скоте.

3. Изучить свойства некоторых эмульгаторов для создания водно-v,- л'шых вакцин покг.хегшой влзкостя.

4. Определить реактогенность масляных адъйвантов для лабораторных животные а крупного рогатого скота.

5. Изучить антигеннутз активность кампилобактеряозной вак-гпяы, приготовленной с различны?-® адъювантамн, на лабораторных

животных и крупном рогатом скоте.

6. Провести патоморфологическое исследование тканей на мео-те введения вакцины.

Научная новизна. В опытах по сравштельноцу изучении вязкости, реактогенности и антигенности различных углеводородных масел и эмульсий на их основб, показана целесообразность использования, в качестве универсального адъмванта - минерального масла разработанного Куйбышевским филиалом В1Ш нефтяной промышленности. В результате изучения реактогенности и антигенной активности опытных серий кампилобактериозиоЙ вакцины на лабораторных животных и . крупном рогатом скоте рекомендован дня ее приготовления уыеренно-реактогешшй и высоко 5ш>дуногенный адювант.

Практическая значимость работы. На основании результатов исследования предложен адаовант для изготовления камиилобактериозной вакцины, который включен в нормативно-техническую документацию по " Изготовлению и контролю промышленной серии инактивлрованяой эмульсин-вакцины ЗПЭВ против кампилобактериоза крупного рогатого скота* утвервденный 02.УПД9В9 года ГУБ Госагронрома СССР.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку на конференциях молодых ученых и специалистов 15133 " 'Проблемы ветеринарной биотехнология и инфекционной патологии животных" (1990,1931); " Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов ВНШяТЖГ (1991); Ученом Совете К!ЭВ (1991); на 1-ой' Научно-практической и учебно-методаческой конг«зр'.м:^1! молодых ученых Казахстана в -,'оскве (1992); меяиабосаторнон совездшш сотрудников ШЭВ (1992). '

Публикация работ. Но материалам диссертации опубликовано 5 статей.

Объем и структура диссертация. Работа изложена на 120 стра-яйцах ?.:аллнописного текста г. состоят из введения, обзора литературы, собственных исследовал;;:':, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предло-хении, списка литературы п приложения. ;1нссертацля иллюстрирована II таб-ии^аш и 12 рисунками. Список литературы включает 165 источников, из них G9 иностранных.

"ССБСТЗЖ-Ш iICC.t 1иОЗА!Е1Л

''атернал: ^_::стод; асследоваш1.?.. Работа выполнялась в течение 138Э-1991 гг. в лаборатории эпазоотоло^пи, диагностики и профилактики патология воспроизводства животных BÍÍ33, Вывне-Золоц-ком отделе К133, а также в неблагополучных по кампилобактериозу хозяйствах Оренбургской и Акгобинской областей.

3 опыте использовано 80 белых шией, 120 кроликов а 403 го-лс'вя крупного рогатого скота.

1ля приготовления вакгатш использовали следушие образцы отечественных, импортных генеральных г.асел и адъ'пзантов: медицинское вазелиновое масло (Г00? JIG4-78); парфшерное гасло (ГОСТ ■1225-75); гакеряльпоэ масло для эг.ульгированикх вакцин и антигенов - ярославского не'техкмзавода ТУ oGI0Ioü7-'72; шнеральное гасло ТУ ЗЕ-1ЛЗ(:4-54 (ангарское); синтетическое - поляэтилксилокса-новая жидкость (.1ЭС-3); гарно л-52 (Эра ним); масло для универсального адъ ванта луГбыдевского "л.тгала i'ÜS: нефтяной прошатешюстп ТУ oíICI1224-3?; вгкдглзюе и:,дл".ское г.асло (из^ iisaTimrapa); мас-дкнке гдъ-ва.тгы ЗГС:Т' a 3HC2Í; гель пирата окясаалятанкя (ГСА); аэросал, а также е-з.7пссте:.7ЛЯТор гл: о заке:шл-мурашлдиг:е птия

3 каюстзе эг.у.тьгаторов использовали: ланолин, твип-ВО я мод-

Основные фнзано-хишческие свойства иасел (вязкость, температура замерзания, кипения, вспышки, степень очистки, зольность, кислотное число и др.) были представлены в технических паспортах. Наш изучалась вязкость шсел и эмульсий на их основе при помочи лабораторного вискозиметра типа 1ШСТ-2 (ГОСТ 33-82) при температуре 20°С.

В лабораторных условиях готовили и испытывали водно-масляные и множественные эмульсии типа "вода в масле" и "вода-масло-вода". Водно-масляные эмульсии готовили путем диспергирования 50 мл физиологического раствора в равном объеме масляного адъзванта (масло и эмульгатор), ¡божественные эмульсии готовила реэмульгированием водно-масляной эмульсии с равным объемом 1-2% раствора твин-80.

Стабильность эмульсии определили двумя методами: путем центрифугирования при 15000 об/мин в течении 2- минут и после двухнедельной выдержки в термостате при 37°С. Эмульсии признавали отабилышшз, если не происходило расслоение водной и масляной фаз. Тип эмульсии определяли нанесением эмульсш: на повер;сность холодной воды ("водная проба").

Эмульгированные препараты готовили о помощью гомогенизатора ¡Л1* -302 (производства Польши).

Реактогенность масел,, адъювантов и приготовленных на их основе вакцин изучали на белых мышах, кроликах и крупном рогатом окоте.

IIa белых шшах реактогенность маоел оценивали но степени отечности лапок, которую выражали в процентах по методике Гарцета В модификации £.В,Гусевой (1981).

Изучение реактогеннооти шсел, адъювгштов и вакцин на кроликах и крупном рогатом скоте проводили путем подкожного и внутри-

мниечного введения. Сыворотки крови тавотных на наличие антител исследовали до я??.7Ш!за;1пи и через 10.Х' дней после нее в РА и ;:гл, и в дадьнеГаем ежемесячно (до сникпшя титров), З'оствакци-иальну:-1 ),;ест:-:уо реакни:о определяли по величине развивающегося уплотнения ткани а времени его рассясивэния, а также путей гистологического ясс.тедеванля. ,,ля удобства оценки реактогегшооти ма-с ;л з адъхвантов применили 6 балъпур шкалу по методике А.А.Сидор-чукв (ТГ'?1): 0 - отсутствие местной реакции; I - реакция в виде кебодьаоЗ олеомы (гогоднка) размером 1x1 см; 2 - умерегшая олеот, размером 2x2 см (фасоль); 3 - значительная олеома, размерил от 3x3 до 4::4 (голубиное лГщо); 4 - крупная олеома, размером с куриное яйцо; 5 - вскрытие олеош с образованием язвы илп абсцесса.

¿ля изучения реакгогегиости л антягенноЯ активности била изготовлена вакцина содерглщая:

1. Ад-ьпвант на основе Ярославского минерального масла - 50^ 4 антиген - £0^.

2. Адь:-:вант на основе Ангарского минерального масла - 50^ + антиген - ЗОъ.

о. Адъизант на оонс-ве гуЗбыпевского минерального масла - 50,1 антиген - 5С'.

4. .ГолЕэтялксилсксансвуг) едкость (..ЭО-З) - 5иЙ + антиген-оСЙ

5. Адьпвант Б1П1Л;: - 5+ антиген - 502.

2. Лдь-л*аа? 31" 131 - 33-! * антиген - 50£.

?. Антиген, сорбировгинк" на гидроокиси алшпняя (ГОА).

£. Адъаван? 3313 - 50.' + антиген - 53^.

V. Актзгез - а^госил - I"'.

. ..:т;:геч - ЗЙ'" * а.тос::л - 2'.

II. Антиген - 53' ♦ "";з: - 1"?.

с:-; служила -3*. Зсзмалпнизирозаяная суспензия

культуры Саару1оЬаог«г виЬвр«о1«а т«п*г«аХ1а 1123

первого серовара. В целях накопления бактериальной пассы кшяшло-бактерий использовали две основные среди: полужидкий агар с добавлением 10% ферментативного гидролизина (.Х^А) и плотный шсо-пе-ченечно-пептошшй агар с добавлением ашнопеатида-2 или 11$ ферментативного гидролизина (1ША). разлитый по 250 ш в колбы-матрацы.

Для проверки на стерильность полученную бактериальную суспензию высевали на И'А,' ¡.¡ЛБ, косой агар и среди Сабуро, Китт-Та-роцци под вазелиновым маслом. Инактивированну» бактериальную массу разводили до ну;кной концентрации 0,5^' с те рилы ши формалшшзи-рованным физиологическим раствором. Все серии вак.даы готовили из расчета содержания в I мл препарата 75 млрд. микробных.клеток.

Эмульгированную вакцину в лабораторных условиях готовили в гомогенизаторе МР*-302 по следующей методике, Масляную смесь, простерилизованную в автоклаве в течение одного часа.при 1,5 атм., двукратно с интервалом в 24 часа совмещали с бактериальной суспензией в соотношении 50:50 и, с соблюдением правил стерильности, помещали з стакан гомогенизатора. Затем включали его и устанавливала скорость вращения ротора 15 тыс. об/мин, эмульгировали в течении 2 минут. В процессе всего периода эмульгирования поддерживали температуру стакана гомогенизатора в пределах 18-20°С с использованием куоочков льда. ' 1

Образование эмульсии типа "вода в теле" характеризовалось появлением белого цвета смешиваемых фракции сливкообразной консистенции, без запаха. Приготовление и-контроль эмульгированной вакцины проведет! с участием в.н.с. А.И.Трубимого.

Вакцииу содержа-дую ГОА и аэросил, готовили путем добавления к антигену 30$ (3;'>-ного раствора гидроокиси ал.мнил), 1% [им

раствора аэросила марки Л-^00. .¡олученнуи взвесь тщательно переменна ли.

Контроль вакцины на стедальность, безвредность и активность проводили согласно " "/.нструкщш по изготовлении и контролв эмульгированной вакцины против кампплобактериоза крупного рогатого скота", утворддегшой Г/3 Госагропромом СССР 02.Л1.12Ю г.

Изучение реактогенности лабораторных серий вашзнш проводили па нго.т:ках и круписм рогатом скоте в сравнении с адульгированной вакциной, содергллэй ярославское пасло. 13акщшу вводили подкожно и внутримышечно: кроликам в дозе I мл, врупиоцу рогатому скоту -2,5 мл. щ

При проведении гематологических исследований у животных определяли общее количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарный профиль по общепринято", методике.

Кроликов убивали через 10, >0 и 360 дней, крупный рогаты!! скот - через .50 и 120 суток после введения вакцшш. Для гистологического исследования отйиралн пробу из ?,;еста введения вякцшш, регионарных я периферических лл^атпческлх узлов, сердца, печени, легких, селезеггкл. ..'рсЗы 'Тлнслроватл ЮГг-гшм растворо/л формалина. Гпстосрезн оксаплвали гемогоксплпн-эгзпноп по Зэн-Гизону и Ерапо. Гистологическое исследование проведено на ка;«дре латанатомли Саратовского зооветянстлтута с участием доцента З.А.;!акарова.

Кгзе'.втггчоская вязкость генеральных с синтетического масел, В псс.тедоваотл кжеглтгческоГ: вязкости установлено,

что у г'псел она била ";од:!::акозой при 2и°С.

.¡с данногу' лсказа?еллз все гасла разделили на четыре грузны, лсгвсГ- гру.-: :е отнесли масла с еысскжл показателе!.: вязкости:ме-

- 8 - -

дацкнское и парфшериое (124,8 и 87,0 сСТ); ко второй - ярослав- . ское и индийское вакцинное (23,6 и 22,3 сСТ); к третье;: - пасло • КФ ВНШ1 Ш, ИЭС-3, иаркол-52 соответственно (16,1, 14,0, 14,0 сСТ) и к четвертой группе - ангарское (7,8 сСТ). Вязкость пасла суцест-венно влияет на вязкость водно-масляной эцу.тьсии. Так, ыасла с большой вязкостью (медицинское и парфюмерное) не пригодны для приготовления водно-масляных вакцин, поскольку на их основе образуются очень густые креыообразше эмульсии. Наименее вязкое шсло (ангарское) позволяет создавать жидкие, легко вводите водно-масляные эмульсии. Масла со средней вязкостью занншзт промежуточное положение . Таким образом, вязкость наела необходимо учитывать при создании легко вводимых эг.ульгаровангшх вакцин.

Реактогеннооть углеводородных :ласел для белых шией

и кроликов. •

Результаты изучения углеводородных масел на белых мызах показали, что индекс их реактогенности в 4-27 раз выше, чей в контроле при введении физраствора (Р-^-0,001), Разница мезду суммарными дан-ннш отделышх масел была неодинаковой. Так, индекс реактогенности ярославского масла был равен 65,7+ 6,1. У. ангарского гасла, по срах-нешш с ярославским, он был выше на 69,ii/5 (P<0,U0I). Оно вызывало также в месте введения более выраяешшй воспалительный отек. Реактогеннооть ЛЭС-З, КЗ В1СЯ Ш, парфшерного, медицинского вазелинового и индийского вакцинного масел был шке, чем у ярославского, соответственно 38,3+ 2,3; 34,7+ 1,8; 33,7+ 2,4; 29,7+ 1,4; 22,4+2,£. Индекс реактогенности этих ыаоел был примерно на одном уровне.

;1ри сравнительном изучении реелтогенности углеводородных касео. • на кроликах (таблица I), путем подкожного и внутриплатного введения попользовали синтетическое (.1ЭС-3) и 7 г.шнаралыгкх масел, при-' чем на каждый образец брали по 3 кролика. U:era;y роактегенности определили по 6 бальной шкале.

Таблица I.

Реактогенность углеводородных масел для кроликов.

И!Наименование масла! .¡овыпение!Снижение!Оценка реактогенности

пп!

I I

¡темпера- ! массы !туры тела! тела !в сред.по! (%)

I

группе

I

в баллах.

лодко.тлое! внутримышечное введение ! введешь

I

1. Медицинское вазелиновое

2.■<шр<*юкерное

3. Ярославское

4. Индийское вакцинное

5. ЛЭС-3

6. Марнол-52

7. КФ ВНИИ. Ш '

8. Ангарское

0,3° I 2 I

0,3° I 2 I

0,5° I 3 2

- - I 0

0,3° I 2 I

- - I 0

0,3° I 2 I

0,5° 2 4 ' 4

Из приведенных данных видно, что при подкожном я внутримышечном введении масел наименьиую реакцин у кроликов вызывали медицинское вазелиновое, парфюмерное, индийское вакцинное, масло КФ В1С1Я III, жидкость цЭС-З и маркол-52. Изменения характеризовались ограниченны?.; разростом межишечной соединительной ткани величиной с фасоль. На разрезе ткань была сочной, однородной. Йэя-более сильной изменение тканей вызывало ангарское масло. Изменения тканей характеризовались образованием толстостенных стерильных абсцессов диаметром 6x9 см.

Способ введен.ш масел существенно не влиял на степень ответной реакции тканей. Однако, более выраженной била реакция тканей на подке.^юе введете. Результаты изучения реактогенности углеводородных :.-асел на кроликах подтвердили полученные ранее данные па белых шиах о высокой реактогенности наименее вязкого ангар-

оного масла. Реактогенность ярославского, индийского вакцинного, маркола-52, куйбышевского масел и жидкости АЭС-3 была умеренной. Из этих масел наибольший практический интерес представляет выпус- . каемое отечественной промышленностью масло КФ ВНШ1 1И и жидкость 11ЭС-3.

При изучении водно-маоляных змульсий установлено, что их вязкость зависит от использованного масла, типа и концентрации эмульгатора. Эмульсии на оонове тела КФ ВНИИ Ш, жидкости ПЭС-З не расслаивались при хранении в течение 2-х лет.

Реактогенность масляных адъювантов для кроликов.

В итоге сравнительного изучения реактогеннооти масляных адъювантов для кроликов, при убое их на 30 день, изменения обнаружили только в местах введения препаратов.

Реактогенность при .подножном введении адъювантов на основе куйбышевского, индийского вакцинного масел и жидкости ПЭС-З составила - I балл; ярославского, маркола-52 - 2 балла;' ангарского масла, адъювантов ВШЯй, ВШИ и 3310 (ВШШИ) -.5 баллов.

■ Внутримышечная инъекция адаюванта на основе ярославского масла с ланолином вязывала образование в толще мышц заднебедрен-ной группы, диффузную тестоватув припухлость. В межмышечной рыхлой соединительной ткани обнаруживали бледно-желтую ткань, объемом с фасоль.

Введение адъюваига на основе ангарокого масла, адъювантов ВННЯИ, ВГНКИ привело к нарушению функции конечности. Ыыыци в месте ' введения были увеличены в объеме, твердой консистенции, на разрезе отмечали наличие абсцессов. •

Данные полученные наш на кролика* 'совпали с результатами проверки реактогеннооти адъювантов на белых мышах. Адызванты на оонове куйбышевского масла, индийского вагонного и зюадкости НЭС-З

»

- II - - ■ •

обладали умеренной реактоге'нностыэ.

Реактогеиноеть масляных адъзвангов для крупного рогатого скота.

:1ри изучении масляных адь: шантов :га крупном рогаток скоте установили, что при использовании куйбыаевского масла, жидкости ПЭС-З и кампилобактериозного антигена реактогенностт, составила -I балл; ярославского масла, ланолина - 2 балла; ангарского масла - 3 балла.

Подкожное введете, в среднюю часть шеи, адьювантов на основе масла КФ В1Ш Ш, жидкости ЛЭС-3, вызывало у коров умеренную воспалительную реакцию. Низкой реактогенностью обладал и кампилобак-териозный антиген. В месте введения этих препаратов отмечали об--разйвание небольшой олеош (горошины). ГГаибольпей реактогенностью обладал адъювакт с ангарским минеральным телок, который вызывал образование значительной олеош, размером 3x5 см (голубиное я''цо).

Реактогсшгость и антигенная активность камнмобактериозиой вакцины для кроликов, приготовленной о различим адъювантами.

В результате проведенных опытов по пзучек'.я рсактогеннооти и антигенной активности кашилобактериозной вакцины с различил.® адъювантами (на основе масел - ярославского, ангарского, куйбышевского; адъювантов В1Е1ЯИ, ВПЖП; явдкостн ЛЭС-3; ГОА, аэросила; иммуностимулятора МШ; антигена без адъюзанта), установлено, что кролики весьма чувствительны к введении масляных препаратов. На месте введения вакцины наблюдала образование плотш;х, ограпичен-¡шх, безболезненных гранулем. Умереннуи воспалительную реакции с полным рассасыванием на 00 день вызывала вакцина на основе масла Х5 'ЛЕК ¡1! и жидкости ЛЭС-3. Тогда как вакцина на основе ангарского гасла, а такае адъювантов 1ЧП1ЯИ а ВГНКН обладала повышенно!! -

реактогенностью. Воспалительная реакция в месте введения этих препаратов сохранялась у кроликов до 148-190 дней.

При серологическом исследовании антитела к кампилобактериоз ному антигену в сыворотке крови иммунизированных кроликов выявля ли на 10 сутки после прививки в титре 1:50...1:100 в РА и 1:400. 1:800 в ИФА (рис. 1,2).

Рис.1.

Уровень агглютининов в сыворотке крови кроликов иммунизированных кампилобактериозной вакциной о различными адъювантам

ШЮ

1:/600

д.

Ш

т

ш

ш ш

30 60 ■ SO 120 150 IGO 210 240 270 300

Дни после иммунизации

Ярославское тело

Ангарское масло

Масло Кф ВНИИ Ш1 ■ '. '

Жидкость ЯЭС-3

Адъювант В1Ш1 *

Адъювант ВГНКИ

Кампилобактериозный антиген

- 13 -

- * " Рис. 2

Титры антител в ИЗА у кроликов тиунизированных кашило-бактериозной вакциной с ,,азлич.шш адънванташ.

Наиболее вноокий уровень антител и длительное их оохраненне наблюдали у кроликов, привитых вакциной на основе адъюванта содержащего масло' КФ ВНИИ Ш. ¡.1аксимальные титры антител регистрировала в РА на 30 день после вакцинации - 1:1600.. .1:3200 и в -1:25600...1:51200, которые удерживались в течение 3 месяцев л зь-тем постепенно снижались. На 280 день посла прививка уровень антител составил 1:50 в РА, 1:000 в КФА. Аналогичные результаты были получены у животных привитых вакциной на основе жидкости ЛЭС-З. Титры антител у кроликов привитых указанной вакцино.1 на 16 сутки в РА были 1:3200 и в И5А - 1:25600...Г:512о0. ¡¡ачниая о 60 дня уровень антител постепенно снижался и к 227 суткам составил 1:100 в.РА а 1:800...1:1600 в ИФА.

У животных привитых вакциной на основе ГОА, аэросила, ГВДП I! кампилобактериозного антигена титры антител были значительно ниже: на 30-й день 1:200...1:400 в РА и 1:800...1:1600 в ИФА, на 70-й день титры антител снизились до показателей контрольной группы.

При вскрытии яивотгах, убитых на 30 сутки, наиболее выраженные изменения тканей установлены у кроликов, привитых вакциной содержащей ангарское минеральное масло и адъюванты ВННШ и ВГНКИ. Изменения, вызванные этими вакцинами, характеризовались образованием в мышцах одного-двух стерильных абсцессов, размером от горо-Е1лнн до крупного куриного яГгца, с толстыми губчатыми стенками розового цвета, заполнешшми светло-желтой мадущейся массой. ¿1ри гистологическом исследовании участков измененной ткани обнаружены очаги некробиоза, некрозов, атрофия мышечных волокон за счет обширного разростания соединительной ткани. Отмечены такяе различные по величине масляные вакуоли, окруженные лимфоцитами, макро- ■ фагами и нейтрояшлами.

Умеренные изменения тканей вызывала вакшша приготовленная с адъювантом на основе масла КФ В1Ш Ш1 и жидкости ПЭС-З. Ыакро— скопическяе изменения характеризовались образованием в месте введения небольших, размером с фасоль, саловидннх уплотнений бледно-розового цвета. При гистологическом исследовании тканей в местах введения препаратов отмечали выраженную пролиферацию лимфоцитов, плазматических клеток, йнброблэстов. Введение вакцины с добавлением ГОЛ, аэросила, ПДДЛ вызывало в мышцах небольших, размером с горолнну, бугристых абсцессов бледно-розового цвета.

.¡ри еск;;пти'л кроликов, убитых через 360 дней посла введения .аратов, содср/адох различные гиь^нты, на месте инъекции об-нору^вали уплотнение подколкой клетчатки, размеры которого были

различными и достигали у некоторых кпвотних 2*:3 с;;., а у от.дель-1шх вообще отсутствовали. У кроликов, которым ввод/лл антиген без адъюванта каких-либо изменений на гесте введения не наблюдалось.

При гематологическом исследовании установлено некоторое увеличение содержания эезинофилов, нейтроТндов, базо'плсз л моноцптоп в периферической крови кроликов, незначительное кга?коврвыашюе снижение лимфоцитов.

Таким образом, эмульгированная вакцрна типа "вода в ¡.иоле" превосходила по антигенной активности препараты на основе ГОЛ, аэросила, ИЩИ и кампилобактерлозного антигена. Эмульгированная вакцина, приготовленная с адъвваитом на основе ¡.-дела КЗ йШШ Ш1

I

и жидкости КЭС-3, обладала умеренной реактогенностьа, высокой ан-тигенностью,

Реактогенность и антигенная активность вакцшш для

крупного рогатого скота, приготовленной с различными адъювантгил!.

При изучении в препаратов на крупном рогатом скоте (рисунок наибольшую реактогенность проявила вакцина с адъювантом ЗНГЯП. Развитие воспалительной реакции на месте инъекции указанного препарата происходило в. течение 130 суток, а затем отмечали се уменьшение. • Размер гранулемы на 330 день после введения ракцинн был равен 18 см2. У.двух янвотных из 10 наблюдали вскрытие гранулемы.

Умеренное развитие лоствакцинальной реакции отмечено у живот-1шх, привитых вакциной приготовленной о адъювантом на основе масла КФ ЕКИИ НИ. При этом полное рассасывание грануле; и происходило на 250 день. У яивотных контрольной группы, которым вводили анти-• ген без адъюванта, каких-либо изменений на месте "введения не отмечали .

Рис. 3

Реактогенность кашилобактериозной вакцины у крупного рогатого скота, приготовленной с различными адъывантами.

^ Яроолавсков

масло -+- Ангарское масло Иасло КФ acal 1Ш --Едкость ЯЭС-З ■*■ Адъювант ВЫ НИ

' 120 150 ' 180 21о' ' 240* ' 270 ' З'СЙ 'зЗО-• дни после иммунизации Лрп серологическом исследовании наибольшее накопление и длительное сохранение антлтел регистрировали у нивотных, привитых аакцяноЗ, я;;:.го .-озленной с адьизантои на основе масла KS ШИШ ILI жидкости ОЗЗ'-З (рис. -1,5). ..¡аксималыше титры антител в РА и регистрировал:: через .3-3 месяца после вакцинации .соответственно 1:1000...1:3230 - 1:05000...1:51300, затем уровень антител пос-

тепенно снизился и на 220 день составил а ¿'А - 1: .. 1: -ш, и в 155А - 1:3200... 1:0*00. В контрольной гругаи ;.;::1о:;ил VII:р антител на 60 день составил 1:50 ь ГА и 1:800 в .^А.

Рло. -1

Уровень агглютининов в сыворотке крови коров л'.л.ушоаииьиа-

30 60 00 120 160. 1и0 210

¿да после нгимунизацпи

-I- ..асдо КЬ ШЫИ Ш -- Едкость ПЭС-3 Ярославское шоло

-*- Ангарское масло -3- Адъювант ВЬСТЯТТ — К&'.шугасЗактерлозниЙ антиген

Рас. 5

Гитрц пититсл в ¡ÎJA у крупного рогатого скота иммунизированного G.i.e.Tenereai.c различными адъюванташ.

1С зо оо та со но 130 iso itc i.o его

iûm после юл.уназации

Рсакгля на введение вакцин:;, содер.'^ие" масло J.Z'Ù' -П.' -j:;3-:ccTt, .'iC-З, при г;:столог;;ческог' ;;ссле;;ст;:;г.: на 30 день однотипно": и солрг,£о-дал"СЬ ; езроеташ:е:.: .¡::5рсз::с.". л:а::п, лхт^о"дно!. на месте кньякцкв препаратов. Б

тйческ:-:: уз."!:; отглче;:-; гплйрпласгг.чзские процессы, в дх кер-тсхальдох >: лага;:орт;:;:а.1ьн:;х зо::ах наблюдала больше количестве {оллпкулои со свет.хпг.: цсктра:.л, зеаслне.-шгаа блпегаглг.. лрасвие

и центральные синусы заполнены лл^оццуии!, Л соЛиЗиило обнаружена гаперллазая: видны лимфатические ¿олынул. со ев-лш.ш цин-траш, вокруг которых имеется широкий ободок из лимфоцитов.

Лри цитологическом исследовании в казках-о'ги«чаи;нх из надлопаточных лимфатических узлов, регионарных к месту введения вакцины обнаружены бласты, иакоо'.аги, лял^оццчи, что укапывает ira развитие иммунного ответа.

Лри гистологическом исследовании тканей гранулем взяты:: на 120 день после инъекции вакцины установили сходные ви^ооьпсашше изменения, различавшиеся лишь по отепени проявления патологического процесса. У, всех коров на месте введения препарата развивался фиброз ткани, более вцраденный чем на 30-й день. U лимфатическом узле, регионарном к месту введения вакцшш а селезенке отмечали ослабление гиперпластических процессов по сравнена,, с нре^ду-аим исследованием (30 день), что указывает на снижение и: илунпого ответа.

г, , ,. о

ii производственном опыте, вакциной приготовленной с адъ»шаа i U1 на основе масла КФ ШШ 11Л, привяли в неблагополучной ао камлило-бактериозу хозяйстве "Белогорка" Актюбинском области ¿uù голов крупного рогатого скота. Препарат вводили однократно, ь области подгрудка в дозе 2,5 мл. :1ооле иммунизации у 10-20;', ¿квотных наблюдала на месте инъекции вакцины ограниченные, безболезненные, плотные гранулемы, размером 2x2, 3x4 см"*, которые рассасывались через 6 и более ыеояцев,

В сыворотке крови вакцинированных коров выявляли спецн !-лч«»о— кие антитела по РА и ИФА. Максимальный подъем титров антител зарегистрирован на 90 день после вакцинации. / дальнсЖдоы наблида-лось постепенное снижение уров!Ш антител, в течение 7-13 месяцев. У вакцинированных животных абортов в бесплодия кампилобактериоэ-

- 20 -

ной этиологии не зарегистрировали.

Таким образом, при производственном испытании вакцины наиболее высокие титр» антител, длительные сроки их сохранения в крови привитых животных, а такяе умеренную местную рэакдаг.1 наб-л-палл при использовании препарата, приготовленного с адъизактсм на основе гасла КФ игпЗТ Н.1. Наиболее приемлемое место инъекции кашплобакториознс!: эчульсин-вакшшы крупно^ рогатому скоту -область подгрудка, применение ваккшш способствовало более быстрому оздоровлении хозяйства от кампплсбактериоза.

1. Ангарское минеральное масло, при мишитлъной вязкости,, имеет повышенную рЕактогенность для крупного рогатого скота, медицинское вазелиновое и парфюмерное шола,имелаае ьысоку... влакосгь, мало пригодны для приготовления Э1лу.;ьсин-вы;цпны.

2. :.!анералыше масла шещве средним вязкость (сгаоси-лдьиу«• • обладает умеренной реактогенностью и могут бить использованы лчя приготовления эмульсин-вакцины против кашилобантериоза крупного рогатого скота.

3. Адъювант на основе минерального масла Куйбшлевского филиала БШШ нефтяной' промышленности и ланолина позволяет изготавливать стабильные эмульсии пониженной вязкости и умеренной рсактогенностп для крупного рогатого скота.

4. Эмульсинвакцина 0^.в.у«пвгва11всгг.::..ул;:иует исиас ьысоку. антаг иную активность, чем препарата араготовлешше с .. .1, ао[>о-силсм и ищуностацуляторои Г.'^л, при равлом кодйп-с-лк, антигена .<•

5. Вакцина С.*.г»»11впригиговленпая с адь. иамто:.; ¡:а основе масла Куйбышевского филиала неТ.т. .нол и„о..и.»теилосл1

о ланолином, введенная подкошю в области подгрудка, в дело цл, активно стимулирует гумморалышй иммунитет. В качестве затаглтс'л,. минерального шола Куйбышевского ф&жюди .СЬЛ ири.д,.л£ н»

кести пригодно синтетическое масло - Л'оО-з.

6. При иммунизации крупного рогатого скота эмульсии-вакцинсК-против кашилобантериоза, в подкожной клетчатке, на . сете аве.^ии.... препарата образуются олеогранулеш, с аоследуыюи ^.т-тиш.. розной ткани.

7. У вакцинированных с/«"«"»«»г«»11ч.ц1вошых р&звиьае?сл иммунная клеточная реакция характеризующаяся прожф.ра^ей лиь^оци-тов в тимусзависишх зонах периферических лимфоидццх органов, бл¿cv■

- 22 -

тронсТюп-япяе:*, а танпе интенсивно!1 г.икро^егальной реакцией.

О. Если с шли я кролики пригодны для оценки реактогенносги я «штигешгсй активности инактквированной эцульсин-вакцикн против кампилойактерчоза крупного рогатого скота.

- 23 -

¡¡ГАкдаишк .шц;у;о:ззш

В итоге выполненных исследований предложен ¡шсляинл идылик! для камлилобактеряозной вакцины крупного рогатого с1.ота, состонц-..:. из масла ВШИ 1П и безводного ланолина, который включен ь нормативно-техническую документацию по " Изготовления I! контролю прсмиаленной сорил нньктивированной эмульсин-вакцины Г^ЗВ против кампилсбактериоза крупного рогатого скота ".утверздешшй 2.6?Л0ьЗг. ГУВ Госагропромом ОССР. Указанный адъюЕант попользуется при изготовлении вакцины иротав кампилобаятериоза ооглаоно дополнения и изменения НЭД от. 23 сентября 1091 г.

СЖОХ 0.;УБЛНКОВА11Шл РАБОТ.

1. Г^ансеркенова О.О..Трубицкий А.Н.,Нренков И.П.,Макаров В.А. ¡оствакциналыше реакции у кроликов иммунизированных вакциной о различными адънвантами // Бгал.ВШПШ. 1991. Выл.77.с. 22-25.

2. Гансе ркенова 0.0.,Дучко М.А. Специфическая профилактика кашилобактериоза крупного рогатого скота // Бюл.ВПНПЭВ. 1891. Вып.78.с. 19-22.

3. ¡¿шсеркенова 0.0. Антигенные я реактогешше свойства противокампилобактериозной вакцины, изготовленной с различными адъивантака // Тез.докл. I/ Всесоюзной конференции " Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных бпологи-ческих препаратов ".- ;.'.-19Э1.

4. лансерненова 0.0. .Трубицкий А.Н. .Лренков It.il. Влияние различных адъ; вантов на антигенную активность и реактогешше свойства противокашилобактешозной вакцины // Бгал.ВШПШ. 1914. 13ЫП.78.С. 17-18.

5. ^йшсеркенова 0.0. Антигенная активность д реактогенность противокампилобактериозной вакцины приготовленной о различными адыгвантами // Тез. докл. I Научно-практической и учебно-методической конТеренцки молодых ученых ¡Казахстана в Москве. 19.-2.

Подписало в печать 2.04.92. ЗакАз 560

■ропачг 00x90/16 Типах ПО_

Москва» Типография РАСХН