Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Разработка средств специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней

ь

На правах рукописи

КУКУШКИН Сергей Анатольевич

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва-2009

003462755

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»),

г. Владимир

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук,

старший научный сотрудник КОЛОМЫЦЕВ Алексей Александрович

Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (ГНУ ВНИИВВиМ), г. Покров Владимирской обл.

доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РСФСР УЗЮМОВ Василий Лаврентьевич

ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир

доктор биологических наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ ЕРЕМЕЦ Владимир Иванович

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ГНУ «ВНИТИБП»), г. Щелково Московской обл.

Ведущая организация:

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии (ГНУ ВНИВИПФиТ), г. Воронеж

Защита диссертации состоится /¿/марта 2009г. в 12-00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.32 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8, корп. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в Учебно-научном информационно-библиотечном центре (Научной библиотеке) РУДН.

Автореферат диссертации размещен на сайте РУДН - www.rudn.ru. Автореферат разослан « 9у> 2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных наук,

профессор

С.Б. Селезнев

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Успешному развитию свиноводства во мнош.м препятствуют различные инфекционные болезни, которые наносят большой экономический ущерб, обуславливая снижение продуктивности животных и шикую рентабельность отрасли. В начале 90-х годов прошлого столетия к их числу добавилось новое заболевание - репро-дуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС), которое в последние годы наносит значительный ущерб индустриальному свиноводству во всем мире.

Впервые это заболевание было зарегистрировано в свиноводческих хозяйствах США и Канады в 1986-1987 гг. и быстро распространилось по всему миру (Keffaber, К.К.,1989; Bilodeau R.,1991; Mardassi H.,1994). В 1990 году РРСС установлен в Германии, а к середине 90-х годов им была охвачена почти вся Европа (Christianson W.T., Joo H.S.,1994; Albina E.,1998). С 1993 года он регистрируется в России и в других странах СНГ (АЛ. Семенихин и др.,1992; В.А. Мищенко и др.,1994; В.О. Бусол и др.,1994 и др.).

Заболевание характеризуется поздними абортами (90-109 дней супоросности), преждевременными родами (110-112 дней), прохолостами свиноматок, рождением мертвых, мумифицированных, нежизнеспособных поросят, гибелью новорожденных поросят и поражением органов дыхания у поросят-отьемышей, групп доращивания и откорма (В.А. Мищенко и др.,1994; Т.З. Байбиков и др.,1998; Albina Е.,1997).

Возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Arte-rivirus, семейство Arteriviridae, порядок NidoviraJes. В мире существует два генотипа вируса РРСС: американский и европейский (Murphy F.A.,1995; Dea S. et al.,1999). Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей российских изолятов вируса РРСС показал, что все они относятся к европейской геногруппе (A.B. Щербаков и др.,2003; Andreyev V.G. et al., 1999). Однако в последние годы в некоторых отечественных хозяйствах был выделен вирус РРСС американской геногруппы (К.Н. Груздев и др.,2006; Т.З. Байбиков,2008).

РРСС наносит ощутимый экономический ущерб свиноводству многих стран мира, который только в США ежегодно составляет 560 миллионов долларов. Убытки при РРСС исчисляются в 100-236 долларов США на свиноматку при острой вспышке болезни и до 502 долларов при хроническом течении.

Основным методом профилактики, контроля и борьбы с РРСС в странах с промышленным свиноводством остается специфическая профилактика с использованием живых и инактивированных вакцин (Т.З. Байбиков и др.,1998,2000; Б.Г. Ордяшсип и др.,2000; Kang Y.B. et al.,1996; Mengeling W.L. et al.,2003; Gambade P. et al.,2007).

В связи с этим разработка, усовершенствование и оценка эффективности применяемых средств специфической профилактики РРСС является актуальной задачей для развития отечественного свиноводства.

Цель и задачи научных исследований. Главной целью исследований являлась разработка и внедрение в ветеринарную практику эффективных средств специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- оценить эпизоотическую ситуацию по РРСС в Российской Федерации в 19972007гг. и изучить клинико-эпизоотологическое проявление репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления;

- изучить иммунобиологические свойства отечественных изолятов вируса РРСС, отобрать штаммы, обладающие стабильными антигенными свойствами, для использования их в качестве производственных;

- разработать технологию крупномасштабного культивирования производственных штаммов вируса РРСС;

- разработать режимы инактивации вируса РРСС;

- подобрать адъюванты для изготовления инактивированных вакцин против РРСС;

- разработать технологию приготовления вакцинных препаратов против РРСС и методы их контроля;

- провести испытания и дать оценку эффективности разработанных препаратов в экспериментальных и производственных условиях;

- разработать инструкции по применению вакцин против РРСС;

- освоить промышленное производство живой и инактивированных вакцин против РРСС и внедрить их в ветеринарную практику;

- разработать и проверить в производственных условиях схему вакцинопрофилак-тикиРРСС;

- оценить эффективность средств и методов борьбы с РРСС в свиноводческих хозяйствах России;

- подготовить и утвердить нормативно-техническую документацию на разработанные биопрепараты.

Научная новизна исследований. Дана оценка эпизоотической ситуации по РРСС в Российской Федерации в 1997-2007гг. Изучены особенности клиннко-эпйзоотологического проявления репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления. Впервые в результате клинико-эпизоотологического мониторинга РРСС показана степень его распространения на территории Российской Федерации.

Изучены иммунобиологические свойства полевых изолятов вируса РРСС, отобраны штаммы, обладающие стабильными антигенными свойствами, для использования их в качестве производственных.

Отобраны в качестве вакцинных и депонированы в коллекции микроорганизмов ФГУ «ВГНКИ» производственные штаммы «БД-ДЕП» и «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС, отработана технология их крупномасштабного культивирования в перевиваемой культуре клеток Marc-145.

Разработаны технологии изготовления и наставления по применению вирусвакци-ны против РРСС, эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и эмульсионной инакгивированной ассоциированной вакцины против РРСС и парвовирусной инфекции свиней на основе отобранных штаммов.

Освоено промышленное производство живой и инактивированных вакцин против РРСС, которые успешно внедрены в ветеринарную практику.

Научная новизна исследований подтверждена 7 патентами Российской Федерации:

- Патент на изобретение №2220202 «Штамм «БД» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов» (2003г.);

- Патент на изобретение №2232596 «Способ изготовления вирус-вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.);

- Патент на изобретение №2236253 «Вакцина эмульсионная инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.);

- Патент на изобретение №2236254 «Способ изготовления вакцины эмульсионной инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.)

- Патент на изобретение №2269361 «Вакцина ассоциированная эмульсионная инак-тивированная против ренродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней» (2006г.).

- Патент на изобретение №2295567 «Штамм «КПР-96» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов» (2007г.);

- Патент на изобретение №2316346 «Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней эмульсионная инактивированная» (2008г.).

Практическая значимость исследований. Установлена степень распространения РРСС на территории Российской Федерации и Республики Беларусь, определены особенности клинического проявления репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления.

Разработаны технологии изготовления и инструкции по применению вирусвакцины против РРСС, эмульсионных инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против РРСС и обоснована их эффективность. Внедрена в ветеринарную практику и широко используется для борьбы и профилактики РРСС комплексная схема вакцинопрофилактики РРСС, применение которой в свиноводческих хозяйствах Российской Федерации и Республики Беларусь показало ее высокую профилактическую эффективность.

Результаты научных исследований вошли в нормативную документацию (НД), утвержденную Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Россельхознадзо-ром МСХ РФ:

1. НД на «Вирусвакцину сухую культуральную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-027-00008064-99 и «Наставление по применению вирусвакцины ...»), 10.06.1999г.;

2. Изменения в ТУ 9384-027-00008064-99 «Вирусвакцина сухая культуральная против РРСС» (изменение методов контроля антигенной активности и определение биологической активности вирусвакцины), извещение №1 от 01.04.2005г.;

3. «Инструкция по применению вирусвакцины сухой культуральной против РРСС» (вместо «Наставления по применению ...» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вирусвакцины), 15.02.2006г.

4. НД на «Вакцину эмульсионную инакгивированную против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней» (ТУ 9384-026-00008064-99 и «Наставление по применению вакцины ...»), 30.06.1999г.;

5. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактивированная против РРСС и 11ВИС» (изменение методов контроля вакцины), извещение №1 от 04.04.2005г.;

6. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактивированная против РРСС и ПВИС» (замена штамма «БД-ДЕП» на штамм «КПР-96»-ДЕП), извещение №2 от 04.04.2005г.;

7. «Инструкция по применению вакцины эмульсионной инактивированной против РРСС и ПВИС» (вместо «Наставления по применению ...» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вакцины), 15.02.2006г.;

8. НД на «Вакцину эмульсионную инакгивированную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-153-00495527-2005 и «Инструкция по применению вакцины ...»), 30.06.2006г.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 78 научных работ, в том числе 12 работ в изданиях по перечню ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международных и всероссийских научных, научно-практических конференциях (Владимир, 1998;2000;2004;2005; Щелково,2000;2002;2005; Омск,2000; Витебск, 2001; Иваново, 2005; Казань, 2005; Воронеж, 2005; Харьков, 2003;2005; Минск, 2005; Киев, 2006; Киров,2007), на 6-м и 7-м Международных симпозиумах по кабанам (Киккос, Кипр, 2006; Шопрон, Венгрия, 2008), XIV и XV Московских международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2006;2007), 5-ом Международном симпозиуме по эмерджентным и ре-эмерджентным болезням свиней (Краков, Полына,2007), Международных симпозиумах по РРСС (Чикаго, США, 2007;2008), 4-ом Международном симпозиуме Россия-Евросоюз (Суздаль, 2007), 20-ом Международном ветеринарном конгрессе по свиноводству (Дурбан, ЮАР, 2008), зональных и межрегиональных научно-практических семинарах ветеринарных специалистов (Ярославль, Белгород, Казань, Киров, Иркутск, Краснодар, Новосибирск, Саранск, Москва, Кустанай, Минск, 2002-2008), заседании секции «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Москва, 2008), а также на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 1998-2008гг.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 370 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 475 источников, в том числе 99 работ на русском языке. Работа иллюстрирована 28 рисунками и 93 таблицами.

Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно. В выполнении отдельных этапов работы принимали участие д.в.н., профессор Т.З. Байбиков, к.в.н. Е.К. Долганова, к.б.н. Е.П. Баборенко, к.в.н. И.А. Пронин, к.в.н. И.А. Тетерин, к.в.н. И.Я. Курман, K.B.H. Н.С. Дудникова, к.в.н. A.M. Тимина, к.в.н. A.B. Каныпина, к.б.н. A.B. Щербаков, за что автор приносит им сердечную благодарность.

Основные положения, выносимые на защиту:

- степень распространения РРСС на территории РФ;

- особенности течения и клинического проявления болезни;

- характеристика иммунобиологических свойств ряда изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории РФ;

- подбор и характеристика вакцинных штаммов вируса РРСС;

- разработка средств специфической профилактики РРСС;

- схемы применения живых и инактивированных вакцин против РРСС;

- оценка результатов производственного применения специфических средств профилактики РРСС в хозяйствах РФ и Республики Беларусь.

Исследования по диссертационной работе являются частью комплексных тем НИР «Проведение исследований по разработке и освоению в условиях производства средств и методов борьбы с особо опасными и карантинными болезнями и инфекциями сельскохозяйственных животных» (государственный контракт №808/26) и «Совершенствование методов диагностики и профилактики инфекционных заболеваний свиней» (шифр «Ветеринарное благополучие» 3-02), которые выполнялись в 1997-2008гг. в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир).

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Оценка эпизоотической ситуации по РРСС. При анализе эпизоотической ситуации по РРСС в странах мира, России, а также в отдельных регионах и хозяйствах использовали статистические данные Всемирной организации здравоохранения животных (МЭБ), отчеты ветеринарных служб разных уровней и сотрудников ФГУ «ВНИИЗЖ»,

принимавших участие в обследовании свиноводческих хозяйств в различных регионах страны, а также собственные материалы, собранные в течение 1997-2008гг., в том числе в результате командировок, во время которых осуществлялось непосредственное участие в обследовании хозяйств и оказании консультативной помощи в планировании, организации и проведении противоэпизоотических мероприятий. Такие командировки состоялись в свиноводческие хозяйства Архангельской, Белгородской, Владимирской, Вологодской, Воронежской, Ивановской, Иркутской, Костромской, Ленинградской, Московской, Нижегородской, Новгородской, Новосибирской, Омской, Оренбургской, Пермской, Псковской, Ростовской, Тверской, Тульской, Ульяновской, Ярославской областей, Краснодарского, Красноярского, Хабаровского краев России, а также Республики Беларусь. Эиизоотолога-ческое обследование свиноводческих хозяйств проводили по рекомендациям, описанным в работах И.А. Бакулова и др. (1975) и С.И. Джупины (1991).

Вирусы. В работе использованы следующие штаммы вируса РРСС: прототипный штамм Lelyslad (Нидерланды) европейского генотипа; NVSL (США) американского генотипа; № 2156 (Италия) европейского генотипа; BIS-046 (Испания) европейского генотипа; вакцинные штаммы «БД» и «КПР-96» (ФГУ «ВНИИЗЖ»). В экспериментах также были использованы российские изоляты вируса РРСС, выделенные и идентифицированные в ФГУ «ВНИИЗЖ» в 1996-2007ГГ.

Животные и культуры клеток. В опытах использовали свиней разных возрастных групп из благополучных но РРСС и другим инфекционным заболеваниям хозяйств. Для выделения и культивирования вируса РРСС использовали перевиваемую культуру клеток Магс-145 и альвеолярные макрофаги свиньи (AMC).

Материалом для выделения вируса РРСС являлись кровь и 20%-ные суспензии из легких, подчелюсных, бронхиальных, средостенных лимфатических узлов, селезенки, почки от нежизнеспособных, больных или павших поросят-сосунов и подсвинков группы доращивания. Кровь и полученную суспензию использовали для заражения культур клеток и свиней.

Серологические исследования. Наличие специфических антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней определяли в реакциях ИФА, РНГА, НРИФ по методикам, утвержденным директором ФГУ «ВНИИЗЖ», а также с использованием коммерческих наборов ИФА: HerdChek PRRS ELISA, HerdChck PRRS 2XR Antibody Test Kit (IDEXX, Westbrook, ME, США), CIVTEST PRRS (HIPRA, Испания), INGEZIM PRRS Europa, 1NGEZIM PRRS America (Ingenasa, Испания).

Заражение животных. В экспериментальных исследованиях о наличии вируса РРСС в исследуемых пробах (суспензия патматериала, вируссодержащая культуральная жидкость и др.) судили по появлению характерных клинических признаков у зараженных животных, цитопатических изменений в культурах клеток и подтверждению обнаружения вируса РРСС в НРИФ, генома вируса с помощью ПЦР или выявлению специфических антител в серологических реакциях.

Инактивация вируса. Для инактивации вируса РРСС использовали формальдегид (Россия), аминоэтилэтиленимин (Россия) и ß-пропиолактон (Natalex S.A., Польша).

Изготовление вакцин. Для изготовления экспериментальных образцов вакцин использовали различные масляные адъюванты: комплексный адъювант ФГУ «ВНИИЗЖ», состоящий из минерального масла MARCOL-52 (ESSO, Франция), эмульгатора №139 и ланолина, тип эмульсии «вода в масле»; ряд традиционных и новых коммерческих адъю-вантов компании SEPPIC (Франция): Montanide ISA 70, Montanide ISA 206, Montanide IMS 1313 N PR VG, Montanide ESSAI PS 60638, Montanide ESSAI IMS 25lc. Экспериментальные серии инактивированных эмульсионных вакцин готовили на коллоидной мельнице типа К100/0 с зазором ножей 0,1-0,2. Безвредность экспериментальных вакцин про-

веряли на белых мышах и подсвинках, которым подкожно и внутримышечно вводили по 0,5 см3 и 5,0 см3 вакцины, соответственно. За животными вели наблюдение в течение 10 и 15 суток, соответственно, после чего их умерщвляли и проводили патологоанатомическое вскрытие.

Эффективность разработанных препаратов изучали в экспериментальных и производственных условиях путем сравнения основных эпизоотологических показателей (заболеваемость, смертность, сохранность, выход поросят на свиноматку и др.) в опытных и контрольных группах. Напряженность иммунитета оценивали по уровню специфических антител в сыворотках крови привитых животных.

Статистическая обработка результатов. При статистической обработке результатов исследований были использованы общепринятые методы, рекомендованные Гланцем С. (1999) и другими авторами, а также компьютерные программы Microcal™ Origin™ Version 5,0,1991-1997 Microcal Software, Inc и Microsoft Office Excel 2003.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Анализ эпизоотической ситуации по РРСС в мире и Российской Федерации

По официальным данным МЭБ, в 1992-2007 гг. РРСС ежегодно регистрировали в 8-38 странах. Максимальное количество неблагополучных стран - 38, зарегистрировано в 2001 году. Всего за период с 1992 по 2007 год 57 стран мира сообщили о своем неблагополучии в отношении РРСС. Анализ полученных результатов показывает, что особенно сложная эпизоотическая ситуация по РРСС сложилась в Европе, где из 46 стран заболевание было зарегистрировано в 31 государстве. В Юго-Восточной Азии ежегодно регистрировали 5-8 неблагополучных по РРСС стран из 37 имеющихся. В Северной и Южной Америке из 43 стран 5-11 ежегодно сообщают о своем неблагополучии. За последние 3 года количество неблагополучных стран в Европе, Северной, Южной Америках и Азии остается на относительно постоянном уровне. Африка долгое время была благополучной в отношении РРСС, однако в июне 2004 года появились сообщения о вспышках острой формы РРСС на фермах в Южно-Африканской Республике.

Среди десяти государств-ведущих производителей свинины в мире, на которые приходится 76,7% общемирового объема производства, девять стран являются неблагополучными по РРСС.

За период с 1997 по 2007 гг. в ФГУ «ВНИИЗЖ» были исследованы на РРСС сыворотки крови и патматериал из 513 хозяйств 54 регионов РФ. Неблагополучными по РРСС оказалось 355 (69,2%) хозяйств, расположенных в 51 (94,4%) регионе РФ (табл. 1).

В результате проведенного анализа установлено, что распределение серопозитив-ных по РРСС хозяйств в различных регионах страны неравномерное и находилось в пределах от 37,5% до 100%, среднее значение неблагополучных хозяйств составило 69,4±17,8% и за последние годы этот показатель меняется незначительно.

Учитывая широкое распространение вируса РРСС среди домашних свиней в России, нами был проведен мониторинг РРСС среди диких кабанов. При исследовании 107 проб сывороток крови диких кабанов, отстрелянных в 6 неблагополучных по РРСС субъектах страны, а также в Харьковской области Украины, антитела к вирусу РРСС обнаружить не удалось, в пробах патматериала от кабанов геном вируса РРСС также не выявляли.

Анализ проводимых в отношении РРСС мероприятий в мире показывает, что они сводятся в основном к профилактической вакцинации животных, контролю за передвижением животных как внутри страны, так и за ее пределами, а также постоянному проведению диагностических исследований популяции свиней.

Таблица 1

Данные о распространении РРСС на территории России и 1997-2007гг.

(по данным лабораторных исследований ФГУ «ВШИ13Ж»)_

Годы Обследовано Положительные результаты на РРСС

регионы хозяйства

регионов хозяйств число % число %

1997 24 128 23 95,8 104 81,3

1998 30 130 27 90,0 75 65,4

1999 35 ИЗ 34 97,1 82 72,6

2000 27 60 23 85Д 50 83,3

2001 24 48 24 100 35 72,9

2002 30 61 25 83,3 39 63,9

2003 30 74 27 90,0 50 67,6

2004 20 44 19 95,0 35 79,6

2005 28 54 25 89,3 38 70,4

2006 35 85 33 94,3 63 74,1

2007 36 86 29 80,6 47 54,7

Итого: 54 513 51 94,4 355 69,2

Таким образом, РРСС имеет глобальное распространение и большинство стран, где свиноводство хорошо развито, неблагополучны по этому заболеванию. Несмотря на широкое осуществление специфической профилактики и жестких санитарных мер, РРСС остается серьезной проблемой для современного промышленного свиноводства.

2.2.2. Изучение путей распространенна и особенностей течения РРСС в свиноводческих хозяйствах различного типа

Проведенные нами эпизоотологичсские наблюдения показывают, что острые вспышки РРСС в ряде хозяйств, особенно в репродуктивной форме, часто возникали после завоза в них племенных свиней или спермы хряков из инфицированных хозяйств. В некоторых хозяйствах после ввоза инфицированных свиней острые вспышки РРСС не регистрировали, т.к. эти хозяйства до ввоза животных были уже серопозитивными и проводили специфическую профилактику РРСС среди собственного поголовья.

Таким образом, на примере нескольких хозяйств была установлена взаимосвязь между завозом племенных животных, спермы хряков и последующим возникновением острых вспышек репродуктивной формы РРСС, что свидетельствует о значительной роли племенных свиней и спермы хряков в распространении РРСС.

В ФГУ «ВНИИЗЖ» постоянно проводятся исследования сывороток крови, полученных от импортируемых в Россию племенных свиней. Всего за 1998-2007гг. было исследовано более 5 тыс. проб сывороток крови племенных свиней, импортированных из 11 государств. За весь период исследований антитела к вирусу РРСС у импортных свиней были обнаружены трижды (из Великобритании, Дании и Литвы). У свиней, завезенных в ООО «КампоФерма» Московской обл. из Даши, заболевание проявилось в яркой клинической форме еще в карантине. Этот случай массового заболевания в карантине свидетельствует о возможности заноса вируса РРСС с импортируемыми животными и о необходимости строгого контроля за серологическим статусом ввозимых на территорию РФ свиней.

Наши наблюдения за течением РРСС на протяжении нескольких лет свидетельствуют, что основным отличием течения РРСС на небольших фермах является его «манифестное» проявление, т.е. внезапное возникновение с охватом практически всего поголовья. Это обусловлено тесным контактом между животными и быстрым перезаражением всего поголовья, что ведет в дальнейшем к его переболеванию и формированию продол-

9

жителыюго постинфекционного иммунитета, однако полное освобождение от инфекции не наступает, так как возбудитель долгое время может циркулировать в стаде. В большинстве случаев на небольших фермах впервые возникшее заболевание проявляется в виде массовых репродуктивных нарушений.

В процессе наблюдений нами установлено, что в отличие от репродуктивной формы, респираторный синдром в неблагополучном по РРСС хозяйстве у поросят на дора-щивании и откорме без осуществления профилактических мер может регистрироваться весьма продолжительное время (месяцами и даже годами). Это связано с инфицированием поросят после окончания или снижения уровня колострального иммунитета, совпадающего по времени с периодом отъема их от свиноматок (30-35 дней жизни).

Эпизоотологические наблюдения за течением РРСС в крупных свинокомплексах свидетельствуют, что заболевание проявляется сначала в репродуктивной форме. Однако массовые нарушения репродукции могут регистрироваться в отдельных цехах или секторах, а общее количество свиноматок с данной патологией по отношению к их общему поголовью обычно невелико, но превышает технологические нормы (табл. 2).

Таблица 2

Сведения о репродуктивных нарушениях во время острых вспышек РРСС

в обследованных свиноводческих комплексах России

Свинокомплекс Поголовье, тыс. гол. Уровень репродуктивных нарушений

«Надеево» 43,5 аборты, мертворождение, рождение слабых поросят-70%

«Пермский» 68,4 аборты - 8,4%, прохолосга - 16-19%

«Ботово» 45 отсутствовали

«Кузнецовский» 42,0 аборты, мертворождение - 2%

«Шувалово» 22Д аборты - 4%

«Новгородский Бекон» 30,8 единичные аборты

«Вишневское» 15,0 аборты-0,8-5,7%

«Индустриальный» 64Д аборты -5,5%, прохолосггы -17%

56,9 аборты -1,3-3%

«Кудряшовское» 60,0 мертворождение -70%

Как видно из табл. 2, во всех хозяйствах, за исключением СХПК АПК «Надеево» Вологодской обл. и ОАО «Кудряшовское» Новосибирской обл., уровень абортов и мер-творождений не превышал 9%. Высокий уровень прохолостов в ряде хозяйств был обусловлен другими возбудителями, а также грубыми нарушениями технологии содержания животных.

Наши наблюдения также показали, что без принятия надлежащих мер борьбы и профилактики РРСС во время острой вспышки болезни или при их неправильном выполнении, заболевание, как правило, переходит в хроническую форму. Особенно это заметно в крупных свинокомплексах, где хроническая форма РРСС с периодическими обострениями может наблюдаться годами.

В результате обследования хозяйств установлено, что РРСС наиболее часто протекает в ассоциации с другими инфекционными заболеваниями. Наиболее часто ассоциированные формы РРСС встречаются у поросят во время доращивания и откорма при респираторной форме, обуславливая развитие так называемого комплекса респираторных болезней свиней (PRDC). От поросят с PRDC, кроме вируса РРСС, также наиболее часто выделяли цирковирус свиней типа 2 (ЦВС-2), Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma hyorhinis, стрептококков. Массовое заболевание поросят в большинстве хозяйств начиналось в возрасте 50-70 дней.

В конце августа 2007г. в Иркутской области была зарегистрирована первая на территории России вспышка атипичного РРСС, вызванная высоковирулентным изолятом вируса РРСС американского генотипа. У больных свиней, включая откормочных свиней, свиноматок и хряков, наблюдали угнетение, анорекешо, цианоз кожи ушей, конечностей, живота, мошонки, гипертермию до 41,2°С, кашель, диарею, отек и паралич задних конечностей. У свиноматок отмечали массовые аборты и рождение мертвых поросят. Наибольший уровень гибели регистрировали среди поросят до 4-месячного возраста - до 69,7%, наименьший среди взрослых животных - до 3,3%.

Изучение иммунобиологических свойств изолята «Иркутский 2007» вируса РРСС, проведенное совместно с сотрудниками лаборатории диагностики особо опасных болезней животных ФГУ «ВНИИЗЖ» (к.б.н. A.B. Щербаков, к.в.н. A.M. Тимина), показало, что он по ОРС 7 имеет 100% гомологию с изолятом JXA1, выделенным в Китае в 2006г во время эпизоотии атипичного РРСС, и маркерный признак - делецию 90 нуклеотидных оснований (30 аминокислот) в гене Nsp 2, характерную для всех высоковирулснтных китайских изолятов вируса РРСС.

Таким образом, РРСС широко распространен на территории России, при этом регистрировали как репродуктивную, так и респираторную формы болезни, а также атипичный РРСС. В связи с этим вакщшопрофилактика предусматривается как основное звено при борьбе и профилактике РРСС и в нашей стране.

2.2.3. Выделение н изучение иммунобиологических свойств изолятов вируса РРСС с целью отбора их для изготовления и контроля вакцинных и диагностических препаратов

В результате первоначально проведенных исследований было установлено, что для выделения вируса РРСС предпочтительным является использование культуры AMC, полученных от зараженных поросят, с последующим заражением ими нормальной культуры макрофагов (AMC) для дальнейшего культивирования вируса в них.

Для выделения и изучения иммунобиологических свойств изолятов вируса РРСС были отобраны пробы сывороток крови и патматериала из 18 хозяйств различных регионов России и одного из Республики Беларусь, где имело место клиническое проявление РРСС. При этом в 13 хозяйствах регистрировали репродуктивную и во всех респираторную форму болезни.

С использованием ранее разработашюй нами методики отобранные пробы первоначально культивировали в AMC путем проведения последовательных пассажей. Четкое ЦПД вызывали 5 из 16 отобранных изолятов. При этом исследование зараженных AMC с проявлением ЦПД на уровне 3-13 пассажа подтвердило наличие генома вируса РРСС в 5 пробах.

На втором этапе исследования были предприняты попытки по адаптации выделенных на AMC изолятов к перевиваемым культурам клеток Marc-145 и МА-104, а также к смешанным культурам клеток АМС+Магс-145 и АМС+МА-104.

В результате проведенной работы из 22 образцов патматериала нам удалось выделить 5 изолятов на культуре клеток AMC и два изолята - «Кемеровский-96» европейского генотипа и «Иркутский-2007» американского генотипа были успешно адаптированы к перевиваемой культуре клеток Магс-145. При этом изолят «Кемеровский-96» на протяжении 10 пассажей вызывал четко выраженное ЦПД с последующим разрушением монослоя и накапливался в титре 4,5 lg ТЦЛ^см3. Высоковирулентпый изолят «Иркутский-2007» американского генотипа вызывал разрушение 60-70% клеточного монослоя через 48-72 часа, титр вируса в 4-9 пассажах составлял 3,25-4,5 lg ТЦДо/см3.

После анализа течения РРСС в хозяйствах нами были поставлены опыты на свиньях по изучению иммунобиологических свойств полевых изолятов вируса РРСС в лабораторных условиях (табл. 3).

Таблица 3

Особенности клинического проявления РРСС

Изолят вируса РРСС Клиническая картина заболевания

в условиях хозяйства в эксперименте (на поросятах)

Кемеровский-96 свиноматки:аборты незначительная гипертермия -2-4 сутки

Вологодский-98 свиноматки: аборты, мертворождение -70%; поросята-отьемыши: гипертермия, ухудш. аппетита, кашель, цианоз кожи ушей, гибель - 9% гипертермия - 2-16 сут., угнетение, слабость, ухудш. аппетита, конъюнктивит, кашель-9-21 сут.

Пермский-99 свиноматки: аборты -6%; поросята-отьемыши: гипертермия, ухудш. аппетита, кашель, гибель - 5% гипертермия - 2-7 сут., угнетение, снижение аппетита, конъюнктивит -2-8 сут.

Белорусский-01 (БР-01) свиноматки: отсутствовала; поросята-отьемыши: гипертермия, ухудш. аппетита, кашель, цианоз кожи ушей, гибель - 30% гипертермия - 2-13 сут., угнетение, снижение аппетита, конъюнктивит -4-14 сут.

Вологодский-02 отсутствовала отсутствовала

Юбилейный-03 свиноматки: мертворождение, появление нежизнеспособных поросят; поросята-отьемыши: гипертермия, ухудш. аппетита, кашель, цианоз кожи ушей, гибель-20% конъюнктивит

Иркутский-2007 свиноматки: мертворождение, рождение слабых поросят - 70%; поросята-отьемыши: гипертермия, ухудш. аппетита, кашель, цианоз кожи ушей, гибель - > 30% гибель большинства поросят 1-1,5-мес. возраста на 7-14 сутки после заражения, тяжелое переболевание без гибели 3,5-б-мес. подсвинков

Таким образом, проведенные исследования показали, что на территории России и Белоруссии циркулируют изоляты вируса РРСС с различными иммунобиологическими свойствами. Из изученных изолятов вируса РРСС изоляты «Белорусский-01» и «Иркутский 2007» оказались наиболее патогенным для поросят-отьемышей.

В результате проведенных исследований в качестве вакцинных были отобраны ранее выделенные штаммы «БД» и «КПР-96», а в качестве контрольных - штамм Lelystad и изоляты «БР-01» и «Иркутский-2007».

2.2.4. Оценка иммунобиологических свойств штаммов «БД» и «КПР-96» вируса РРСС, отобранных в качестве вакцинных

С целью изучения антигенных свойств штамма «БД» вируса РРСС были проведены опыты на трех группах подсвинков, которые были внутримышечно иммунизированы штаммом «БД» в дозе 2><104'0, 2><1030, 2*102,0 ТЦД50/СМ3, соответственно. Через 30 дней после иммунизации подопытных и контрольных подсвинков заражали вирулентным штаммом Lelystad вируса РРСС внутрипульмонально в дозе 10х 10 ,0 ТЦД50/СМ . У поросят, иммунизированных штаммом «БД» в различных дозах, в сыворотках крови выявлен высокий уровень специфических к вирусу РРСС антител, начиная с 14-ти дней после иммунизации. Максимальный уровень антител установлен к 28 суткам после иммунизации. На контрольное заражение вирулентным вирусом Lelystad они не реагировали. В то же время два контрольных подсвинка заболели с типичной клинической картиной РРСС.

Изучение культуральных свойств изолята «Кемеровский-96» показало, что он хорошо размножается, вызывает четко выраженное ЦПД и накапливается до 5,0 lg ТЦЦ50/СМ3 в перевиваемой культуре клеток Marc-145. Далее нами было проведено подробное изучение его иммунобиологических свойств.

Специфичность и генетическую принадлежность изолята «Кемеровский-96» к европейской геногруппе подтвердили с помощью ПЦР, а также исследованием сывороток крови после иммунизации поросят этим изолятом, с помощью дифференцирующих наборов ИФА INGEZJM PRRS фирмы fngenasa (Испания), позволяющим различать антитела к европейскому и американскому генотипам вируса РРСС. Для этого 5 серонегативных поросят иммунизировали внутримышечно ииактивированным аминоэтилэтиленимином вирусом. К 21 дню после иммунизации в сыворотках крови всех животных выявлены антитела только к вирусу РРСС европейского генотипа и не обнаружено антител к американскому генотипу. Спустя 28 дней после иммунизации к американскому генотипу положительной была только 1 проба, а при исследовании сывороток крови в более отдаленные сроки положительными были 4 пробы из 5 (рис. 1).

2,5 2,25 2

21 28 35

дни после иммунизации

П уровень антител к вирусу РРСС американского генотипа Ш уровень антител к вирусу РРСС европейского генотипа

Рис. 1. Динамика накопления антител к разным генотипам вируса РРСС после иммунизации поросят изолятом «Кемеровский-96»

Как видно из рис. 1, значительное повышение среднего уровня антител к европейскому генотипу вируса у поросят после их иммунизации подтверждает принадлежность изолята «Кемеровский-96» к европейской геногруппе вируса РРСС. Иммунизированные поросята оставались серонегативными по отношению к вирусам ПВИС, болезни Ауески, КЧС, ТГЭС, гриппа и Mycoplasma hyopneumoniae, что подтверждает отсутствие контаминации изолята «Кемеровский-96» этими возбудителями.

Степень вирулентности изолята «Кемеровский-96» для свиней изучали на серонегативных в отношении РРСС подсвинках 2-4-месячного возраста и супоросных свиноматках.

У трех из шести зараженных поросят регистрировали лишь кратковременное повышение температуры тела до 40,7°С, однако после инфицирования все животные стали серопозитивными к вирусу РРСС. Степень вирулентности изолята «Кемеровский-96» была также испытана на двух супоросных свиноматках, которые на 85-88 день супоросности были интраназально заражены в дозе 10' 105'" ТЦД50/см1 Обе свиноматки опоросились на

114 день после осеменения и от них получено 23 поросенка, из них 18 живых здоровых поросят (78,3%). У одной из них родилось 2 нежизнеспособных поросенка (8,7%) и 3 с патологией глаз (13%). Следовательно, изолят «Кемеровский-96» вируса РРСС является слабовирулентным для свиней.

После всестороннего изучения иммунобиологических свойств изолята «Кемеров-ский-96» вируса РРСС он был комиссионно испытан и депонирован в коллекции штаммов и микроорганизмов ФГУ «ВГНКИ» под наименованием «КПР-96»-ДЕП. В результате комиссионных испытаний по депонированию вакцинного штамма «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС было установлено, что вакцинный штамм «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС не конта-минирован вирусной, бактериальной и грибковой микрофлорой, специфичен, обладает выраженной антигенной активностью на подсвинках, слабовирулентный.

Полученные результаты исследований по изучению иммунобиологических свойств штамма «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС были подтверждены выдачей патента РФ на изобретение №2295567 «Штамм «КПР-96» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и/шш вакцинных препаратов» (2007г.).

2.2.5. Разработка сухой культуральной вирусвакцины против РРСС из штамма «БД»

В результате проведенных исследований был отработан режим крупномасштабного культивирования штамма «БД-ДЕП» вируса РРСС, включающий получение антигена в клинских матрасах или роллерах с использованием 3-суточной перевиваемой культуры клеток Магс-145, питательной среды Игла с добавлением 2,5-5,0% фетальной сыворотки КРС, 50 мкг/см1 гентамицина, 0,3 мг/см3 глутамина и временем культивирования до 48 часов при температуре 37°С. С использованием указанного режима накопление вируса достигало титра до 7,5 lg ТЦД50/СМ3 при стационарном культивировании и до 8,3 lg ТЦДзо/см3 при использовании роллеров.

После наработки вирусного сырья его использовали для составления вирусвакцины. В качестве защитной среды при изготовлении сухой культуральной вирусвакцины против РРСС была использована известная среда ФГУ «ВНИИЗЖ», состоящая из сахарозы, гидролизата лактоальбумина и желатозы. Количество защитной среды для лиофили-зации составляло 400 см3 на 1000 см3 вирусного сырья.

Дм контроля вирусвакцины сухой культуральной против РРСС из штамма «БД-ДЕП» были отобраны традиционные параметры, использующиеся при контроле живых вирусвакцин: внешний вид; отсутствие контаминации бактериальной и грибковой микрофлорой; массовая доля влаги (остаточная влажность); растворимость; безвредность; антигенная активность; биологическая активность.

Результаты контроля безвредности вирусвакцины из штамма «БД-ДЕП» показали, что введение препарата лабораторным животным (кролики, морские свинки, белые мыши) и подсвинкам 2-4-месячного возраста в дозе Ю4,0 ТЦДзо/см3 не вызывает каких-либо клинических изменений в их состоянии. В лабораторных условиях антигенная активность вакцины была изучена на 10 поросятах 2-3-месячного возраста. В сыворотках крови поросят специфические антитела в ИФА IDEXX обнаруживались в достаточно высоком уровне к 14 дню, среднее значение s/p по группе составляло 0,69±0,10 и к 33 дню достигло 1,22+0,10. Через 33 дня после иммунизации поросят интраназально заразили вирусом РРСС штамм Lelystad в дозе 10х104,5 ТЦЦ50/СМ3. Поросята, иммунизированные сухой ви-русвакциной, в большинстве на контрольное заражение не реагировали, только у отдельных животных отмечали незначительное повышение температуры тела. Все три контрольных животных заболели с типичной клинической картиной РРСС.

Кроме того, две свиноматки на 28 и 30 дни супоросности были привиты сухой ви-русвакциной. Перед опоросом в сыворотках крови свиноматок были выявлены высокие

титры антител. Эти свиноматки принесли 24 поросенка, из них 20 здоровых (83,3%), 2 слаборожденных (8,3%), 1 мертворожденного (4,2%) и 1 мумифицированного (4,2%). Сохранность среди живых здоровых поросят за время подсосного периода составила 100%.

Эффективность сухой культуральной вирусвакцины против РРСС из штамма «БД» была изучена в 4 крупных свинокомплексах («Кузнецовский» Московской области, «На-деево» Вологодской области, «Ильиногорскос» Нижегородской области и «Лазаревское» Тульской области), которые были неблагополучными по РРСС (табл. 4).

Таблица 4

Уровень снижения смертности поросит-отъемышей после применения сухой куль-

туралыюй вирусвакцниы против РРСС

Сви нокомплексы Смертность до Смертность Анализируемая Снижение смертно-

вакцинации, после вакци- продолжитель- сти в результате

% нации, % ность вакцинации, мес. вакцинации, %

«Надеево» 6,8 4,9 1 27,9

«Лазаревское» 6,0 5,8 4 3,3

«Кузнецовский» 33,2 17,2 5 48,2

«Ильиного рское» 40,7 20,2 7 50,4

Как видно из табл. 4, через месяц после вакцинации в ЗАО «Надеево» смертность поросят сократилась на 27,9%, а в течение 5 месяцев применения вакцины в свинокомплексе «Кузпецовский» смертность уменьшилась на 48,2%. В свинокомплексе «Ильино-горское» через 7 месяцев вакцинации показатель смертности снизился на 50,4%. Только в одном хозяйстве - АО «Лазаревское» вакцина не оказала ожидаемого результата и за 4 месяца ее применения смертность поросят-отьемышей снизилась всего на 3,3%. Это можно объяснить тем, что в этом свинокомплексе имело место ассоциативное течение РРСС с энзоотической пневмонией (микоплазмозом), а также с рядом бактериальных заболеваний, против которых не проводилось эффективного лечения.

Таким образом, сухая культуральная вирусвакцина против РРСС из штамма «БД-ДЕП» обладает высокой иммуногснностью, позволяет увеличить сохранность молодняка и стабилизировать эпизоотическую ситуацию по РРСС. Однако на фоне ассоциативного течения РРСС с другими инфекционными заболеваниями и при отсутствии мер борьбы с ними эффективность сухой культуральной вирусвакцины против РРСС значительно снижается.

Результаты этих исследований были использованы при составлении НТД на «Ви-русвакцину сухую культуральную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» н наставления по ее применению.

Кроме того, в результате проведенных исследований и по рекомендации ФГУ «ВГНКИ» в 2005 году в действующих ТУ 9384-027-00008064-99 на «Вирусвакщшу сухую культуральную против РРСС» были изменены параметры метода контроля антигенной активности вируса РРСС и четко определены показатели биологической активности антигена в вирусвакцине. Изменения, внесенные в действующие ТУ, были согласованы с ФГУ «ВГНКИ» и утверждены Россельхознадзором в установленном порядке.

2.2.6. Разработка эмульсионной инактивированиой вакцины против РРСС

После всестороннего изучения иммунобиологических свойств вируса РРСС, отбора вакцинных штаммов и отработки оптимальных условий их культивирования нами были проведены работы по разработке эмульсионной инактивированиой вакцины против РРСС, необходимость создания которой была обусловлена недостаточной безопасностью живых препаратов для репродуктивного поголовья.

Данная работа включала разработку технологии получения вирусного сырья, режимов инактивации вируса РРСС, испытание изготовленных образцов вакцины в экспериментальных и производственных условиях, разработку методов контроля препарата и нормативной документации.

Процесс изготовления эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС состоял из нескольких основных этапов: получение, поддержание и контроль матриксной серии вируса РРСС; получение производственной серии вируса РРСС; получение вирусного сырья и его инактивация; эмульгирование инактивированного антигена и адъюванта; контроль производственных серий вакцины.

Для отработки режимов инактивации вируса РРСС нами были испытаны традиционные инактиванты, использующиеся в ветеринарной биотехнологии: формальдегид, аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ) и [3-пропиолактон. Для проведения экспериментальных исследований был использован штамм «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток Магс-145 с титром вируса 6,0±0,25 lg ТЦД50/СМ3. В результате проведенных экспериментов было установлено, что для полной инактивации штамма «КПР-96» вируса РРСС необходима концентрация формальдегида 0,05% при 37°С в течение 12 часов, для Д-пропиолактона- 0,025-0,1% при 4°С в течение 6 часов, для АЭЭИ - 0,05% при 37°С и времени экспозиции 12 часов.

Опыты, проведенные на 20 взрослых кроликах и 17 поросятах 2-месячного возраста, показали, что наиболее высокой антигенной активностью обладали образцы вакцины, содержащие антиген инактивированный р-пропиолактоном и АЭЭИ. Учитывая полученные результаты, а также согласно экономическим расчетам себестоимости получаемого антигена и рекомендациям МЭБ, дальнейшую работу по разработке инактивированных вакцин проводили с использованием АЭЭИ.

Поиск наиболее оптимальных адъювантов для инактивированных вакцин против РРСС проводили путем конструирования опытных образцов моно- и ассоциированных вакцин против РРСС и ПВИС.

Для изготовления экспериментальных образцов вакцин использовали ГОЛ, а также различные масляные адъюванта: комплексный адъювант ФГУ «ВНИИЗЖ», состоящий из минерального масла MARCOL-52 (ESSO, Франция), эмульгатора №139 и ланолина, тип эмульсии «вода в масле»; ряд традиционных и новых коммерческих адъювантов компании SEPPIC (Франция): Montanide ISA 70, Montanide ISA 206, Montanide IMS 1313 N PR VG, Montanide ESSAI PS 60638, Montanide ESSAI IMS 251c.

В результате всестороннего изучения различных адъювантов в качестве основного (базового) для изготовления инактивированшлх вакцин против РРСС был выбран адъювант Montanide ISA 70, обеспечивающий наиболее высокую антигенную активность и умеренную реактогенность препаратов на его основе.

В качестве альтернативных адъювантов, обеспечивающих умеренную антигенную активность и не обладающих реактогенностью, для иммунизации поросят откормочных групп в неблагополучных хозяйствах без проявления острой респираторной формы РРСС возможно использование адъювантов Montanide IMS 1313 N PR VG и Montanide ESSAI IMS 251c.

Для контроля эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС были отобраны традиционные параметры, использующиеся при контроле инактивированных вакцин: внешний вид, отсутствие посторонней примеси, плесени, хлопьев (не разбившегося осадка), трещин флаконов, стерильность (отсутствие контаминации бактериальной и грибковой микрофлорой), стабильность, вязкость, полнота инактивации вируса, безвредность, антигенная активность.

Образцы инактивированных эмульсионных ващин против РРСС с прививной дозой 2,0 см3 для оценки безвредное™ вводили белым мышам в объеме 0,5 см3, кроликам и морским свинкам - 1,0 см3, подсвинкам 2-3-месячного возраста - 5,0 см3. Белым мышам, кроликам и морским свинкам вакцины вводили внутримышечно и подкожно, подсвинкам - только внутримышечно. Результаты многократных наблюдений за привитыми животными в течение 2 недель показали, что все лабораторные животные и подсвинки оставались живы. Измерение ректальной температуры тела у кроликов и подсвинков свидетельствовало, что в первые 1-5 суток возможно повышение температуры тела на 1,0-1,5°С. При пальпации места введения вакцины прощупывалась припухлость, размеры которой зависели от объема введенного препарата. В результате осмотра на месте введения препарата у лабораторных животных и подсвинков после их умерщвления выявляли разросг соединительной ткани и наличие асептических инкапсулированных очажков, при разрезе которых вытекало вакцинное содержимое. Патологических изменений (очагов некроза, гнойного воспаления) в месте введения препаратов не обнаруживали.

Образцы эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС, изготовленные из штамма «БД-ДЕП» и масляного адъюванта Montanide ISA 70, были комиссионно испытаны на безвредность, антигенную активность и иммуногенность.

Для оценки антигенной активности вакцины 5 серонегативных поросят 2,5-3-месячного возраста однократно иммунизировали в дозе 2,0 см3 внутримышечно. Специфические антитела к вирусу РРСС в сыворотках крови выявлялись в ИФА ВПИИЗЖ к 21 дню после вакцинации, и в среднем показатели их по группе составили 1:200±122. В последующие сроки отбора (30, 45 дней) уровень специфических антител возрастал и составил 1:280±109 и 1:440±219, соответствешю. Наличие высокого уровня антител в сыворотках крови поросят после вакцинации было также подтверждено с помощью коммерческого ИФА набора фирмы IDEXX (США).

Определение безвредности и иммуногенности инактивировашюй вакцины из штамма «БД-ДЕП» проводили на двух супоросных свиноматках (47-50 дней супоросно-сти). Вакцину вводили однократно в дозе 2,0 см3 внутримышечно. Через 42 дня после введения вакцины (на 90-93 день супоросности) свиноматки были интраназально заражены вирулентным европейским вирусом РРСС штамм Lelystad в дозе 10*Ю4'0 lg ТЦД50/см3. Результаты исследований иммуногенности инактивированной вакцины го штамма «БД-ДЕП» на двух супоросных свиноматках представлены в табл. 5.

Таблица 5

Показатели иммуногенной активности инактнвироваиной вакцины против РРСС из штамма «БД-ДЕП» на супоросных свиноматках_

JVaJVs свиноматок Использованная реакция Уровень антител в ИФА Результат заражения

до вакцинации после вакцинации (до заражения) после заражения наличие клинической реакции родилось поросят

3 ИФАВНПИЗЖ 1:50 1:400 н.и. отсутствовала 8 живых здоровых

ИФА HIPRA 4 48 89,7

ИФА IDEXX 0,01 1,02 2,23

4 ИФА ВНИПЗЖ 1:50 1:200 н.и. отсутствовала 6 живых здоровых, 2 мертвых

ИФА HIPRA 5 19,7 69,5

ИФА ШЕХХ 0,05 0,3 2,1

Примечание: значение ИФА «ВНИИЗЖ» > 1:100 - результат положительный; значение ИФА HIPRA > 20 - результат положительный;

значение ИФА ГОЕХХ s/p > 0,4 - результат положительный; н.и. - не исследовали.

Как видно из табл. 5, после вакцинации в сыворотке крови животных с помощью ИФА выявляли специфические антитела к вирусу РРСС. После контрольного заражения вакцинированных свиноматок вирулентным штаммом Lelystad наличие каких-либо клинических признаков заболевания у них не отмечали. Свиноматка №3, имевшая перед заражением высокий уровень антител к вирусу РРСС, родила 8 живых здоровых поросят. Свиноматка №4, имевшая перед заражением слабоположительный (сомнительный) уровень антител к вирусу РРСС, принесла 6 здоровых поросят, 1 мертворожденного и 1 ма-церированный плод. Сохранность среди живых здоровых поросят за время подсосного периода у обеих свиноматок составила 100%.

Проведенные исследования показали, что эмульсионная инактивированная вакцина против РРСС из штамма «БД-ДЕП» является безвредным иммуногенным препаратом и защищает свиноматок от контрольного заражения вирулентным вирусом РРСС штамм Lelystad. Поросята, полученные от вакцинированных свиноматок, имели высокие титры колостральных антител до 36-дневного возраста.

Учитывая более высокую гомологию штамма «КПР-96»-ДЕП с отечественными эпизоотическими изолятами вируса РРСС (т.е. их принадлежность к европейской генетической группе вируса), чем у штамма «БД-ДЕП» (американская геногруппа), дальнейшая разработка эмульсионной инактивированной моновакцины против РРСС была продолжена с использованием штамма «КПР-96»-ДЕП.

С этой целью нами были изготовлены экспериментальные образцы моновалентной эмульсионной инактивированной вакцины из штамма «КПР-96» на основе адъюванта Montanide ISA 70, антигенная активность и эффективность которых была изучена в лабораторных и производственных условиях. Результаты исследования антигенной активности трех образцов инактивированной вакцины против РРСС из штамма «КПР-96» при двукратном ее введении представлены в табл. 6.

Таблица 6

Антигенная активность эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС из

штамма «КПР-96» на подсвинках после двукратного введения

Образец вакцины № животного Уровень антител к вирус; f РРСС в ИФА (IDEXX), s/p

до иммунизации перед ревакцинацией после ревакцинации, сут

7 14

№1 1 0,01 0,8 2,02 2,85

2 0,04 0,2 1,13 н.и.

№2 3 0,01 1,55 2,40 3,35

4 0,01 1,93 1,94 3,30

5 0,09 0,75 2,30 2,40

№3 6 0,01 0,20 0,34 0,57

7 0,09 1,33 1,90 1,84

8 0,05 0,52 1,40 1,40

9 0,05 0,30 1,10 1,31

10 0,02 0,40 1,30 1,10

Среднее значение, M±S 0,04±0,03 0,80±0,61 1,58±0.64 2,00±1,02

Примечание: ревакцинация: серии №№1 и 2 - 28 сутки; серия №3 - 21 сутки;

значение ИФА ШЕХХ s/p ¿0,4 - результат положительный; н.и. - не исследовали.

Данные табл. 6 показывают, что перед ревакцинацией 7 животных из 10 первично иммунизированных были сероположительными, а средний уровень антител по группе составил 0,8±0,61. Через 7 дней после ревакцинации сероположительными стали 9 животных, среднее значение s/p по группе равнялось 1,58±0,64. Спустя 14 дней после ревакци-

нации все подсвинки имели достаточно высокий уровень антител к вирусу РРСС, и среднее значение s/p по группе составило 2,00±1,02.

В ЗАО «Кудряшовское» Новосибирской области (общее среднегодовое поголовье 60 тыс. свиней, из них 6 тыс. свиноматок) была изучена эффективность эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС.

Первая вспышка РРСС в этом свинокомплексе после полной смены поголовья была зарегистрирована в декабре 2005 года. Заболевание проявлялось уменьшением количества поросят в помете, увеличением рождения мертвых и мумифицированных поросят. Традиционная схема иммунизации репродуктивного поголовья до и после вспышки РРСС включала иммунизации против ПВИС, болезни Ауески, рожи и классической чумы свиней. С конца января 2006 года в хозяйстве стали применять программу вакцинации против РРСС с бустер-иммунизацией в 60 дней супоросности. Результаты исследований представлены в табл. 7.

Таблица 7

Данные об опоросах в свинокомплексе ОАО «Кудряшовское» (комбинат №1) до и после программы вакцинации против РРСС_

Период Опоросилась свинок и св/м всего, гол. Родилось поросят всего, гол. Получено поросят на 1 опорос, гол.

всего деловых слабых мертвых мумифиц.

опоросы у не привитых против РРСС свинок и свиноматок (вспышка РРСС)

Февраль-апрель 2006 2051 20841 9,80±0,80 (100%) 6,28±0,88 (64,2%) 1,03±0,21 (10,5%) 1,06±0Д5 (10,8%) 1,42±0,17 (14,5%)

опоросы вакцинированных против РРСС свинок и свиноматок

Май-июль 2006 2613 27696 10,62±0Д1 (100%) 8,60±0,27 (81,0%) 0,81±0,09 (7,6%) 0,86±0,09 (8,1%) 0,35±0,14 (3,3%)

Как видно из табл. 7, после применения программы вакцинации увеличилось среднее общее количество поросят на опорос и выход деловых поросят, значительно уменьшилось количество слабых, мертвых и мумифицированных поросят. Статистический анализ полученных данных подтвердил, что вакцинация свинок и свиноматок против РРСС в ЗАО «Кудряшовское» достоверно влияла (х2 > 3,84) на увеличение выхода живых и деловых поросят, а также уменьшение появления слабых, мертворожденных поросят и мумифицированных плодов у привитых животных по сравнению с невакцинированными.

Сыворотки крови поросят, полученных от привитых против РРСС свиноматок, были исследованы в ИФА ФГУ «ВНИИЗЖ» для оценки колострального иммунитета. Антитела к вирусу РРСС у домолозивных поросят не выявляли, в 5-10-дневном возрасте позитивными были 88,9-90% поросят-сосунов, к 25-30-дневному возрасту их количество уменьшилось до 80%, к 45-дневному — до 47,4%, к 65 дням жизни - до 45%. С увеличением возраста животных средний уровень антител в сыворотках крови также снижался - с 60,9±20,2 - 65,1±18,8 у 5-10-дневных до 29,5±18,1 у 65-дневных. В 90 дней жизни количество серопозитивных поросят возросло до 52,4%, а средний уровень антител в сыворотках крови увеличился до 36,5±20,1, что свидетельствует об инфицировании части животных после снижения или окончания колострального иммунитета.

Таким образом, опыт применения в крупном свинокомплексе ЗАО «Кудряшовское» эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС показал ее высокую эффективность для профилактики репродуктивной формы заболевания.

Высокая антигенная активность препарата была также подтверждена его применением на свинках и свиноматках в другом крупном свинокомплексе - ЗАО «Ботово» Вологодской области (табл. 8).

Таблица 8

Результаты исследования сывороток крови ремонтных свинок и свиноматок, иммунизированных эмульсионной инактивированной вакциной против РРСС _ (ЗАО «Ботово» Вологодской обл., 2005-2006гг.)_

Возрастная группа Сроки отбора проб сывороток крови Общее количество проб Результаты исследования сывороток крови в ИФА «ВПИИЗЖ»

положительных отрицательных уровень антител

Ремонтные свинки перед вакцинацией 188 0 (0%) 188(100%) 8,3±3,7

после трехкратной иммунизации ПО 110(100%) 0(0%) 62,2±21,5

Основные свиноматки после двукратной иммунизации 43 41 (95,3%) 2 (4,7%) 68,9±30,8

Примечание: значение ИФА «ВНИИЗЖ» > 30 - результат положительный.

Как видно из табл. 8, в сыворотках крови ремонтных свинок и основных свиноматок после иммунизации выявляли антитела к вирусу РРСС в ИФА ФГУ «ВНИИЗЖ» в достаточно высоких титрах - 62,2±21,5 и 68,9±30,8, соответственно.

Позитивный эффект от применения эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС из штамма «КПР-96» европейского генотипа был также получен при ее испытании для профилактики респираторной формы заболевания в свинокомплексах РСУП совхоз-комбинат «Белая Русь» Минской области Республики Беларусь и ООО «Белгран-корм» Белгородской обл. (табл. 9).

Таблица 9

Результаты испытания эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС на

пороеятах-отьемышах в ООО «Белграпкорм» Белгородской обл.

№ п/п Показатели Опытные группы (вакцинированные ) Контрольные группы (не вакц.) Разница между группами, %

1 Количество животных, гол. 1003 962

2 Возраст, дней 24-28 24-28

3 Передано на доращивание, гол. 1003 962

4 Средний вес 1 головы, кг 7,3±0,1 7,3±0,1

5 Валовый привес группы, кг 7326 7024

6 Среднесуточный привес, г 216,6±8,4 209,3+10,4 + 3,5%

7 Заболело, гол. (%) 250 (24,9%) 261 (27,1%) -8,1%

8 Вынужденно убито, гол. (%) 43 (4,3%) 53 (5,5%) -21,8%

9 Санитарный брак, гол. (%) 103 (10,3%) 110(11,4%) -9,6%

10 Пало, гол. (%) 104 (10,3%) 98 (10,2%) +1,0%

И Передано на откорм, гол. 753 701

12 Сохранность за период доращивания,% 75,1 72,9 + 3,0%

Из данных табл. 9 наглядно видно, что в вакцинированных секторах за период до-ращивания было меньше заболевших животных на 8,1% и вынужденно убитых на 21,8%, сдано на санитарный брак на 9,6% меньше по сравнению с контрольной группой. При этом среднесуточные привесы были выше в среднем на 3,5%. Гибель в обеих группах была практически одинаковой, однако общая сохранность за период доращивания в опытной

группе была выше па 3,0%. Анализ заболеваемости показал, что в опытной группе большую часть заболевших составляли животные с нарушениями функций желудочно-кишечного тракта и травмами, а в контрольной группе - с респираторными нарушениями.

Таким образом, результаты применения эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС показали ее высокую эффективность для профилактики репродуктивной формы РРСС и умеренную для профилактики респираторной формы заболевания.

На основании проведенных с положительным эффектом лабораторных и производственных испытаний и применения вакцины в условиях хозяйств была разработана нормативно-техническая документация на вакцину эмульсионную инактивированную против РРСС из штамма «КПР-96». В НТД вошли технические условия на вакцину, инструкция по применению и регламент по изготовлению и контролю препарата.

2.2.7. Разработка эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС

Результаты мониторинга инфекционных болезней свиней, проводимого ежегодно в ФГУ «ВНИИЗЖ», свидетельствуют, что в большинстве свиноводческих хозяйств, неблагополучных по РРСС, одновременно циркулирует парвовирус свиней. Данная ситуация свидетельствовала о необходимости разработки и изготовления ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против РРСС и ПВИС.

Такую вакцину разрабатывали с учетом ранее проведенных исследований в области РРСС и имеющегося опыта производства эмульсионной инактивированной вакцины против ПВИС, выпускаемой в ФГУ «ВНИИЗЖ» с 1996 года. В качестве парвовирусного антигена использовали производственный штамм «Вл-94», с инфекционным титром в перевиваемой культуре клеток почки поросенка (ППК) не ниже 6,5 ^ ТЦЦ50/СМ3.

Первоначально для изготовления вакцины использовали штамм «БД» вируса РРСС. Экспериментальные серии вакцины были комиссионно проверены на иммуногенность путем контрольного заражения иммунизированных животных вирулентным вирусом РРСС штамм Ье1у51ас1 (табл. 10).

Таблица 10

Показатели иммуногеннон активности эмульсионной кнактивироааннон

вакцины против РРСС и ПВИС на подсвинках

Группа, показатели Уровень антител в сыворотках крови Результаты контрольного заражения шт. Lelystad через 35 дней после вакцинацни*

до вакцинации на 35 день после вакцинации

против РРСС в ИФА, s/p против ПВНС в РТГА, log2 против РРСС в ИФА, s/p против ПВИС в РТГА, log2

Опытная (9 гол.) Исслед./положит. 9/0 9/0 9/6 9/9 9/0

Среднее, М±Б 0,04±0,02 6,55±0,53 0,50±0,19 10,22±0,67

Контроль (3 гол.) Исслед./положит. 3/0 3/0 3/0 3/0 3/3

Среднее, М±Б 0,04±0,03 6,33±0,58 0,05±0,03 6,33±0,58

Примечание: значение ИФАIDEXX s/p 2 0,4 - результат положительный;

значение РТГА (ПВИС) >8,0 Iog2 - результат положительный; * в числителе общее количество животных, в знаменателе - количество заболевших.

Как видно из табл. 10, шесть из девяти вакцинированных подсвинков через 35 суток имели высокий уровень антител в крови к вирусу РРСС. Так, в ИФА ГОЕХХ средний уровень антител у них составлял от 0,51 до 0,9 и лишь у трех подсвинков результат был сомнительный. Титры антител против вируса ПВИС в РТГА были высокими и колебались в пределах от 1:512 до 1:2048. Не вакцинированные животные остались серонегативными.

21

Результаты контрольного заражения показали, что все вакцинированные подсвинки, в том числе и с показателями s/p 0,28, 0,34, 0,35, не заболели.

В 2005 году после всестороннего изучения иммунобиологических свойств вируса РРСС и по рекомендации ФГУ «ВГНКИ» нами была произведена замена производственного штамма «БД-ДЕП» на «КПР-96»-ДЕП в составе ассоциированной вакцины против РРССиПВИС.

Результаты изучения антигенной активности ассоциировашюй вакцины против РРСС и ПВИС из штамма «КПР-96»-ДЕП на 7 поросятах 3-месячного возраста по отношению к американскому и европейскому генотипам вируса представлены в табл. II.

Таблица 11

Показатели антигенной активности эмульсионной ипактивированной вакцины про-

тив РРСС и ПВИС на основе штамма «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС

Сроки отбора проб сывороток крови Показатели Результаты исследования сывороток крови в ИФА

IDEXX INGEZIM PRRS

America Europa

До иммунизации исслед./полож. среднее, M±S 7/0 0,0±0,0 7/0 0,0±0,0 7/0 0,0±0,0

Через 21 сутки после иммунизации (перед ревакцинацией) исслед./полож. среднее, M±S 6/5 0,93±0,38 6/1 0,41±0,21 6/5 1,35±0,82

Через 15 суток после ревакцинации исслед./полож. среднее, M±S 7/6 1,34±0,40 7/6 0,70±0,37 7/7 1,74±0,74

Примечание: значение ИФА ГОЕХХ s/p > 0,4 - результат положительный;

значение ИФА INGEZIM PRRS America > 0,436 - результат положительный; значение ИФА INGEZIM PRRS Europa > 0,430 - результат положительный;

Как наглядно видно из табл. 11, через 21 сутки после иммунизации в сыворотках крови большинства привитых поросят выявляли антитела к вирусу РРСС европейского генотипа, и одна проба имела серологический перекрест с американским генотипом вируса. Спустя 15 суток после ревакцинации все поросята были сероположительными при исследовании в ИФА Ingenasa и 6 из 7 животных в ИФА ГОЕХХ. Кроме того, большинство животных стали серопозитивными к обоим генотипам вируса. После ревакцинации средний уровень антител увеличился в ИФА IDEXX с s/p 0,93±0,38 до 1,34±0,40 и в ИФА Ingenasa Europa с 1,35±0,82 до 1,74±0,74.

После успешного испытания образцов вакцины в лабораторных условиях дальнейшее изучение эффективности препарата проводили в условиях неблагополучных по РРСС свиноводческих хозяйств. Животных иммунизировали по схеме, аналогичной инактиви-рованной моновакципе против РРСС. Применение эмульсионной ипактивированной вакциной против РРСС и ПВИС в условиях хозяйств показало ее высокую антигенную активность (табл. 12).

Как видно из табл. 12, после применения эмульсионной инакгивировашюй вакцины против РРСС и ПВИС в ЗАО «Ботово» Вологодской области в сыворотках крови привитых свинок, свиноматок и хряков выявляли высокий уровень антител к вирусу РРСС в ИФА ФГУ «ВНИИЗЖ»: 98,8±29,1,88,6±36,5 й 77,2±65,0, соответственно. У всех животных после вакцинации также повысился уровень антител к вирусу ПВИС на 2-3 log2.

Как показал опыт многолетнего применения эмульсионной инактивировагаюй вакцины против РРСС и ПВИС производства ФГУ «ВНИИЗЖ» в свинохозяйствах России, а также некоторых стран СНГ, иммунизация позволяет значительно стабилизировать эпизоотическую ситуацию по этому заболеванию (табл. 13).

Таблица 12

Результаты исследования сывороток крови свиней, иммунизированных

эмульсионной инактивированной вакциной против РРСС и ПВИС __(ЗАО «Ботово» Вологодской обл., 2004-2005гг.)_

Возрастная группа Сроки отбора проб сывороток крови Общее количество проб Результаты исследования сывороток на наличие антител к вирусу РРСС

положительных отрицательных уровень антител в ИФА

Ремонтные свинки перед вакцинацией 95 0 (0%) 95 (100%) 12,5±3,7

после двукратной иммунизации 22 15 (68,2%) 7 (31,8%) 98,8±29,1

Основные свиноматки перед вакцинацией 5 3 (80%) 2 (20%) 39,4±22,3

после однократной иммунизации 57 54 (94,7%) 3 (5,3%) 88,6±36,5

Хряки после двукратной иммунизации 73 58 (79,4%) 15 (20,6%) 77,2±65,0

Примечание: значение ИФА ФГУ «ВНИИЗЖ» > 30 - результат положительный.

Таблица 13

Показатели эффективности применения эмульсионной инактивированной _вакцины против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах_

Хозяйства, область Анализируемая продолжительность применения вакцины (мес.) Уровень репродуктивной патологии, %

до применения вакцины после применения вакцины

ЗАО «Вишневское», Воронежская обл. 24 78,8 3,0

ЗАО «Тихий Дон», Воронежская обл. 24 74,0 11,8

ЗАО «Кузнецовский», Московская обл. 5 2,0 *

ЗАО «Надеево», Вологодская обл. 6 70,0 2,0

ЗАО «Лазаревское», Тульская обл. 24 14,1 *

АПП им. Кирова, Нижегородская обл. 12 79,3 *

АОЗТ «Коммунар», Тульская обл. 6 66,6 *

Примечание: * - единичные случаи. При дальнейшем наблюдении за вышеуказанными хозяйствами в течение 3-5 лет репродуктивных нарушений, вызванных РРСС и ПВИС, не регистрировали.

Из табл. 13 видно, что после применения эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах уровень репродуктивной патологии снижался в среднем с 55% до 5,6%, то есть в 9,8 раз. Кроме того, в этих хозяйствах резко уменьшался массовый отход поросят-сосунов.

Полученные данные свидетельствуют, что применение эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах различных регионов РФ показало ее высокую эффективность. В неблагополучных хозяйствах существенно снижался уровень репродуктивной патологии и резко уменьшался массовый отход поросят-сосунов.

Таким образом, на основании проведенных исследований была разработана эмульсионная инактивированная ассоциированная вакцина против РРСС и ПВИС, обладающая высокой антигенной и иммуногенной активностью.

Кроме того, в результате проведенных исследований и по рекомендации ФГУ «ВГНКИ» в 2005 году в ТУ 9384-026-00008064-99 на «Вакцину против РРСС и ПВИС эмульсионную инактивированную» были внесены дополнительные методы контроля на вязкость и полноту инактивации антигена. Были даны также более полные характеристики внешнего вида и безвредности вакцины, изменены параметры гемагппотинирующей активности парвовирусного антигена и методики контроля антигенной активности вируса РРСС, изменен метод контроля антигенной активности вакцины. Изменения, внесенные в действующие ТУ, были согласованы с ФГУ «ВГНКИ» и утверждены Россельхознадзором в установленном порядке.

2.2.8. Разработка и усовершенствование схем иммунизации против РРСС

Результаты наблюдений показали, что после применения эмульсионной инактиви-рованной вакцины против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах резко уменьшался уровень репродуктивной патологии и массовый отход поросят-сосунов. После применения сухой культуральной вирусвакцины против РРСС значительно снижался уровень заболеваемости поросят-отъемышей с респираторным синдромом.

Однако в некоторых хозяйствах, где наблюдали массовое проявление репродуктивного синдрома, после применения традиционных схем иммунизации эффект оказывался не достаточно высоким. В связи с этим нами были проведены опыты по разработке новой усовершенствованной схемы вакцинации репродуктивного поголовья против РРСС.

Испытания были проведены в двух крупных свинокомплексах: «Белгранкорм» Белгородской и «Надеево» Вологодской областей. Новая схема иммунизации свинок и свиноматок против РРСС включала двукратную иммунизацию перед осеменением согласно «Наставлению по применению вакцины ...» и дополнительную бустер-вакцинацию между 60 и 70 днями супоросности. В последующем ранее иммунизированных свиноматок прививали первый раз однократно за три недели до случки (осеменения), второй раз - на 60-70 день супоросности. Для этих опытов использовали эмульсионную инактивированную вакцину против РРСС и ПВИС производства ФГУ «ВНИИЗЖ». Результаты сравнительного применения эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС в разной кратности в ООО «Белгранкорм» представлены в табл. 14.

Таблица 14

Показатели эффективности вакцинации против РРСС в свинокомплексе

«Белгранкорм» Белгородской обл.

Показатели До вакцинации После двукратной вакцинации После трехкратной вакцинации

Опоросилось свиноматок (гол./мес.) 223 345 482

Абортировало свиноматок, % 5,4 2,0 0,5

Свиноматок с мертворождением, % 15,7 8,8 1,9

Прохолостов у свиноматок, % 23 16,6 11,2

Получено приплода в среднем (гол./мес.) 1774 2918 4392

Выход поросят на 1 свиноматку, гол. 8,0 8,5 9,1

Отход поросят-сосунов, % 9,7 5,5 3,7

Как видно из табл. 14, до проведения вакцинации в хозяйстве наблюдали серьезные нарушения репродукции у свиноматок, обусловленные циркуляцией вируса РРСС. При

этом процент абортировавших свиноматок составлял 5,4%, мертворождение наблюдалось у 15,7%, а прохолосты у 23% свиноматок, выход поросят на одну свиноматку составлял 8 голов и отход поросят в течение подсосного периода - 9,7%.

Через два года, в течение которых в хозяйстве проводили плановую двукратную вакцинацию свиноматок, эпизоотическая ситуация по РРСС в племенном стаде значительно улучшилась, а после введения дополнительной бустер-вакцинации свинок и свиноматок против РРСС в период 60-70-дневной супоросности показатели приблизились по значению к показателям благополучного стада.

Положительные результаты применения трехкратной иммунизации среди ремонтных свинок были также получены в свинокомплексе «Надеево» Вологодской области. В этом хозяйстве первая вспышка РРСС была диагностирована в 1999 году. Тогда заболевание проявлялось абортами на поздних сроках супоросности, мертворождением, появлением нежизнеспособных поросят и их гибелью в первые дни жизни. Применение эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС позволило сократить патологию репродукции с 70% до 2% (табл. 13). Однако, у некоторых свинок первого опороса периодически продолжали наблюдать клиническое проявление болезни. После применения усовершенствованной (трехкратной) схемы вакцинации в хозяйстве перестали регистрироваться единичные аборты и рождение мумифицированных плодов у ремонтных свиноматок.

Таким образом, результаты проведенных испытаний усовершенствованной схемы иммунизации репродуктивного поголовья против РРСС показали ее высокую эффективность и преимущества перед традиционной схемой.

Полученные результаты были использованы при составлении и внесении соответствующих изменений в инструкции по применению эмульсионных инактивированных вакцин против РРСС, выпускаемых ФГУ «ВНИИЗЖ», и были утверждены Россельхоз-надзором в установленном порядке.

Всего за период с 1997 и по настоящее время (на 12.2008г.) было изготовлено: 30 серий вирусвакцины сухой культуральной против РРСС общим объемом более 4,5 млн. доз, 88 серий эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС общим объемом более 13,6 млн. доз, 14 серий эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС общим объемом 620 тыс. доз. Все серии успешно прошли внутренний лабораторный контроль, проверку показателей ТУ в отделе биологического и технологического контроля ФГУ «ВНИИЗЖ» и ежегодные инспекционные контроли ФГУ «ВГНКИ». Изготовленные препараты были реализованы и с положительным профилактическим эффектом применены более чем в 50 регионах РФ, а также в Республиках Беларусь и Молдова.

3. ВЫВОДЫ

1. РРСС имеет глобальное распространение. В период с 1992 по 2007гг. неблагополучными в отношении РРСС являлись 57 государств, из них 31 в Европе, Ив Юго-Восточной Азии, 8 в Северной и Центральной Америке, 5 в Южной Америке, одна страна в Африке и одна - в Океании. Основными мероприятиями в борьбе и профилактике РРСС в мире являются профилактическая вакцинация животных, контроль за передвижением животных и мониторинг заболевания в популяции домашних свиней.

2. РРСС имеет широкое распространение на территории России. Положительными в отношении РРСС в разные годы являлись от 80,6% до 100% обследованных регионов и от 54,7% до 83,3% исследованных свиноводческих хозяйств. Уровень серопозитивных по РРСС хозяйств в обследованных регионах России был в пределах от 37,5% до 100%. Результаты исследований проб сывороток крови и внутренних органов, отобранных от ди-

ких кабанов в 6 регионах России и Харьковской области Украины, свидетельствуют об отсутствии циркуляции вируса РРСС в дикой природе.

3. Вирус РРСС, впервые попадая в серонегативное хозяйство, как правило, вызывает острую форму болезни, сопровождающуюся массовым поражением животных с характерными клиническими признаками болезни. В крупных свинокомплексах хроническая форма РРСС с обострением в виде спорадических вспышек может наблюдаться в течение многих лет.

4. Ведущими этиологическими агентами в развитии «комплекса респираторных болезней свиней», являются вирус РРСС совместно с цирковирусом свиней типа 2 (ЦВС-2), сочетание которых широко распространено в свиноводческих хозяйствах России.

5. Выделены и изучены иммунобиологические свойства ряда изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории России и Республики Беларусь. Изоляты «Воло-годский-98» и «Пермский-99» являются патогенными как для поросят, так и для свиноматок. Изолят «Вологодский-02» оказался авирулентным и не вызывал каких-либо клинических проявлений как в хозяйстве, так и при заражении поросят в лабораторных условиях. Изоляты «Белорусский-01» европейского генотипа и «Иркутский-2007» американского генотипа вируса РРСС оказались наиболее патогенным для поросят-отъемышей. В условиях хозяйства изолят «Белорусский-01» не вызывал репродуктивных нарушений у свиноматок, а «Иркутский-2007» являлся высоковирулентным для супоросных свиноматок.

6. Штамм «КПР-96» вируса РРСС не контаминирован вирусной, бактериальной и грибковой микрофлорой, специфичен, способен накапливаться в культуре клеток Магс-145 в титрах до 5,25-5,5 lg ТЦЦзо/см3, обладает выраженной антигенной активностью на подсвинках, слабовирулентный, в связи с чем он предложен в качестве производственного штамма для изготовления инактивированных вакцин против РРСС, а также в диагностических целях.

7. В результате сравнительного детального изучения иммунобиологических характеристик отобраны для изготовления и контроля вакцинных и диагностических препаратов штаммы вируса РРСС «КПР-96»-ДЕП, «БД-ДЕП», изоляты «БР-01» и «Иркутский-2007».

8. Разработана технология получения высокоактивного вирусного сырья с использованием штамма «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС на перевиваемой культуре клеток Магс-145. В роллерных установках накопление вируса РРСС на 1,0-1,5 lg выше, по сравнению с системой культивирования на матрасах, и их использование позволяет сократить сроки культивирования до 1,5 суток.

9. Отработаны режимы инактивации вируса РРСС с использованием формальдегида, аминоэтилэтиленимина и p-пропиолактона. В результате проведенных экспериментов было установлено, что для полной инактивации вируса РРСС необходима концентрация формальдегида 0,05% при 37°С в течение 12 часов, для Р-пропиолактона - 0,025-0,1% при 4°С в течение 6 часов, для аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) - 0,05% при 37°С и времени экспозиции 12 часов.

10. Дана оценка некоторым традиционным и новым коммерческим адыовантам компании SEPPIC (Франция) в составе инактивированных вакцин против РРСС и ПВИС. Установлено, что наибольшей антигенной активностью обладали образцы на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70.

11. Разработана технология изготовления и контроля моно- и ассоциированных инактивированных вакцин против РРСС:

- эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС;

- эмульсионной инактивированной ассоциированной вакцины против РРСС и пар-вовирусной инфекции свиней (ПВИС).

12. В неблагополучных по РРСС хозяйствах дополнительная вакцинация свинок и свиноматок на 60-70 день супоросности позволяет существенно повысить эффективность вакцинопрофилактики.

13. Результаты применения эмульсионных инактивированных вакцин против РРСС в условиях хозяйств показали их высокую эффективность для профилактики репродуктивной формы РРСС и умеришую для профилактики респираторной формы заболевания. После применения эмульсионных инактивированных вакцин против РРСС, против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах уровень репродуктивной патологии снижался в среднем с 55% до 5,6% и резко уменьшался массовый отход поросят-сосунов.

14. Сухая культуральная вирусвакцина против РРСС является безвредным, стерильным, слабореактогенным препаратом, обладает высокой иммуногенностью и эффективностью. Ее применение в неблагополучных по РРСС хозяйствах позволяет увеличить сохранность поросят в период доращивания на 30-50%, по сравнению с непривитыми, а также среднесуточные привесы.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований вошли в нормативные документы, которые были одобрены ученым советом ФГУ «ВНИИЗЖ», утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Россельхознадзором МСХ РФ:

1. НД на «Вирусвакцину сухую культуральную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-027-00008064-99 и «Наставление по применению вирусвакцины ...»), 10.06.1999г.;

2. Изменения в ТУ 9384-027-00008064-99 «Вирусвакцина сухая культуральная против РРСС» (изменение методов контроля антигенной активности и определение биологической активности вирусвакцины), извещение №1 от 01.04.2005г.;

3. «Инструкция по применению вирусвакцины сухой культуральной против РРСС» (вместо «Наставления по применению ...» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вирусвакцины), 15.02.2006г.

4. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней» (ТУ 9384-026-00008064-99 и «Наставление по применению вакцины ...»), 30.06.1999г.;

5. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактивирован-ная против РРСС и ПВИС» (изменение методов контроля вакцины), извещение №1 от 04.04.2005г.;

6. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактивирован-ная против РРСС и ПВИС» (замена штамма «БД-ДЕП» на штамм «КПР-96»-ДЕП), извещение №2 от 04.04.2005г.;

7. «Инструкция по применению вакцины эмульсионной инактивированной против РРСС и ПВИС» (вместо «Наставления по применению ...» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вакцины), 15.02.2006г.;

8. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-153-00495527-2005 и «Инструкция по применению вакцины ...»), 30.06.2006г.

Научная новизна исследований подтверждена 7 патентами на изобретение Российской Федерации (№№ 2220202; 2232596; 2236253; 2236254; 2269361; 2295567; 2316346).

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Смешанное течение классической чумы свиней (КЧС) и репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) / Т.З. Байбиков, A.A. Шевцов, С.А. Кукушкин, B.JI. Гаврилова,

A.И. Егорова, А.Ю. Филина// Матер, науч.-произв. конф., посвящен. 190-летию высшего вет. образования в России и 100-летию вет. науки (Вет. лаборатории в Петербурге). - СПб,1998. -Ч.1.-С.26-27.

2. Эпизоотология, диагностика и специфическая профилактика репродуктивно - респираторного синдрома свиней / Т.З. Байбиков, Н.С. Дудникова, И.Я. Курман, С.А. Кукушкин,

B.Л. Гаврилова, Е.К. Долганова// Соврем, аспекты вет. патол. жив-х: матер, конф., посвящен. 40-летию ВНИИЗЖ. - Владимир, 1998. - С.85-92.

3. Преимущества культивирования вируса репродуктивно - респираторного синдрома свиней (РРСС) на культуре MARC-145 в роллерных установках / Т.З. Байбиков, Н.С. Дудникова, И.Я. Курман, Ш.К. Куляшбекова, С.А. Кукушкин // Актуал. пробл. с.-х. биотехнол.: матер, конф. - пгт.Гвардейский, 1998.- С.Ill.

4. Смешанное течение репродуктивно - респираторного синдрома евшей (РРСС) в ассоциации с вирусными и бактериальными инфекциями / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, A.M. Рахманов, B.C. Русалеев // Матер, учредит, конф. Междунар. ассоциации паразитоцеиологов. - Витебск,1999. - С.40-41.

5. Поствакцинальный иммунитет у свиней против репродуктивно - респираторного синдрома и парвовирусной инфекции / И.Я. Курман, Т.З. Байбиков, С.А. Кукушкин, А.И. Егорова, Н.С. Дудникова, Е.К. Долганова, А.И. Ануфриев // Экол. аспекты эпизоотол. и патол. жив-х: Междунар. науч.-произв. конф.-Воронеж,1999.-С.112-114.

6. Курман, И.Я. Колостральный иммунитет у поросят от свиноматок, вакцинированных против репродуктивно - респираторного синдрома свиней (РРСС) и парвовирусной инфекции (ПВИС) / И.Я. Курман, С.А. Кукушкин, Е.К. Долганова // Матер, учредит, конф. Междунар. ассоциации паразитоценологов. - Витебск,1999. - С.95-96.

7. Comparative study of immunobiological properties of different strains of PRRS virus / T.Z. Bai-bikov, S.A. Kukushkin, N.S. Dudnikova, E.K. Dolganova // 3rd Int. Symp. on PRRS and Au-jeszky's Dis. -Ploufragan, France, 1999. - P. 125.

8. Peculiarities of PRRS in pig farms of Russian Federation / T.Z. Baibikov, S.A. Kukushkin, N.S. Dudnikova, E.K. Dolganova // 3rd Int. Symp. on PRRS and Aujeszky's Dis. - Ploufragan, France, 1999.-P.211.

9. Кукушкин, C.A. Репродуктивно - респираторный синдром свиней и его профилактика /

C.А. Кукушкин // Свиноводство. - 2000. - №5. - С.31-32.

10. Кукушкин, С.А. Особенности течения и вакцинопрофилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней в Российской Федерации: автореф. дис....канд. вет. наук / Кукушкин Сергей Анатольевич. - Владимир, 2000. - 26с.

11. Кукушкин, СЛ. Особенности течения репродуктивно - респираторного синдрома свиней в хозяйствах разного типа / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, И.Я. Курман // Достижения молодых ученых-в вет. практику: матер, конф. молодых ученых. - Владимир, 2000. — С.51-57.

12.Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС): клшшко-эпизоотологический мониторинг и профилактика болезни / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, A.M. Рахманов, H.A. Яременко // Актуал. пробл. патологии с.-х. жив-х: матер. Междунар. науч.-практ. конф. Минск,2ШУ -С.126-129.

13. Изучение чувствительности первичных, перевиваемых культур клеток и куриных эмбрионов к вирусу РРСС / В.Л. Гаврилова, С.А. Кукушкин, И.Я. Курман, Т.З. Байбиков //

Достижения молодых ученых - в вет. практику: матер, конф. молодых ученых. - Владимир,

2000. - С.23-25.

14. Иммунобиологические свойства эмульсионной инактивированной ассоциированной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней / И.Я. Курман, Т.З. Байбиков, Н.С. Дудникова, Е.К. Долганова, С.А. Кукушкин, С.Г. Ерофеев // Роль вет. науки в развитии жив-ва: матер, междунар. науч.-произв. конф., посвящен. 75-летию КазахНИВИ.-Алматы,2000. -С.126-128.

15. Клинико-анатомическое проявление репродуктивно-респираторного синдрома свиней / A.M. Рахманов, Т.З. Байбиков, B.JI. Гаврилова, НС. Дудникова, СЛ. Кукушкин // Матер. Всерос. науч.-метод. конф. патологоанатомов вет. медицины: сб. науч. тр. - Омск, 2000. — С.127-128.

16. Разработка и применение отечественных вакцин для специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней / Т.З. Байбиков, Н.С. Дудникова, Е.К. Долга-нова, Н.А. Яременко, И.Я. Курман, С.А. Кукушкин, A.M. Рахманов // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф., посвящен. 30-летию ВНИиТИБП. - Щелково, 2000. - С.87-89.

17. Эффективность применения сухой культуральной вирусвакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней / Т.З. Байбиков, СЛ. Кукушкин, Н.С. Дудникова, ИЛ. Курман, 11I.K. Куляшбекова, A.M. Рахманов // Роль вет. науки в развитии жив-ва: матер. Междунар. науч.-произв. конф., посвящен. 75-летию КазахНИВИ. - Алматы, 2000. - С.62-65.

18. Оценка экономического ущерба и эффективности проведения противоэпизоотических мероприятий при репродуктивно-респираторном синдроме свиней / С.А. Кукушкин, В.М. Гуленкин, Т.З. Байбиков, Н.А. Яременко, НА. Ануфриев // Учен. зап. Витебской гос. акад. вет. медицины.-Витебск, 2001.-Т.37, ч.2. - С.92-94.

19. Репродуктивно-респираторный синдром свиней / Т.З. Байбиков, А.А. Гусев, Н.А. Яременко, Н.С. Дудникова, В.Л. Гаврилова, С.А. Кукушкин, И.Я. Курман, В.Ф. Ковалишин, А.М. Рахманов // Ветеринария. - 2001. -№3 - С.18-24.

20. Разработка и применение вакцин производства ВНИИЗЖ против РРСС и ПВИС / Т.З. Байбиков, Е.К. Долганова, Н.С. Дудникова, Н.А. Яременко, В.М. Гуленкин, С.А. Кукушкин, И.Я. Курман, Ш.К. Куляшбекова, A.M. Рахманов // Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации вет. препаратов: тез. докл. Всерос. науч. конф. - М., 2001. С. 116-118.

21. Разработка и применение эмульсионной ассоциированной инактивированной вакцины против РРСС и ПВИС / Т.З. Байбиков, Е.К. Долганова, НС. Дудникова, НА. Яременко, В.М. Гуленкин, СЛ. Кукушкин, И.Я. Курман, A.M. Рахманов // Пробл. зооинжен. вет. мед.: зб. наук, праць «Вет. науки».-Вип. 7(31). Матер. 5-го зЧзду паразитоценологов Украши. -Харюв,

2001.-С.291-293.

22. Смешанное течение РРСС и пастереллеза в экспериментальных условиях / СЛ. Кукушкин, И.Я. Курман, Т.З. Байбиков, Е.П. Баборенко, В.Ф. Ковалишин, Н.Б. Шадрова // Акгуал. пробл. болезней молодняка в современных условиях: матер. Междунар. науч.-практ. конф. — Воронеж, 2002. - С.362-364.

23. Клиническое проявление РРСС в зависимости от метода заражения поросят / СЛ. Кукушкин, ИЛ. Тетерин, И.Я. Курман, Е.П. Баборенко, О.Г. Андреева // Науч. основы технологии производства вет. биопрепаратов: сб. докл. мевд. конф. молодых ученых. - Щелково,

2002. - С.56-58.

24. Испытания различных масляных адъювантов для производства эмульсионной инактивированной вакцины против РРС и ПВИС / И.Я. Курман, Т.З. Байбиков, Е.К. Долганова, Н.С. Дудникова, СЛ. Кукушкин, Е.П. Баборенко, С.Г. Ерофеев // Научные основы технологии

производства вет. биопрепаратов: сб. докл. Междунар. конф. молодых ученых. - Щелково, 2002. - С.59-62.

25. Эпизоотология и стратегия борьбы с репродуктивно-респираторным синдромом свиней / О.Г. Новиков, В.М. Мосин, С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, В.Л. Гаврилова // Сучасш ветеринарш та технолопчш аспекти свйнарства: матер, научно-практической конф. — Киев, 2002.-С.13-15.

26. Выделение полевых изолятов вируса РРСС с использованием альвеолярных макрофагов / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, И.А. Тетерин, В.А. Пыльнов // Актуал. пробл. инфекционной патологии жив-х: матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвящен. 45-леппо ФГУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2003. - С.459-465.

27. Кукушкин, СЛ. Болезни репродуктивной сферы свиней / С.А. Кукушкин, В.Ф. Ковали-шин // Животновод. - 2003. - №3. - С.22-23.

28. Кукушкин, С.А. Нарушение функций воспроизводства у свиней / С.А. Кукушкин, А.М. Рахманов // Вет. консультант. - 2003. - №3(51). - С.3-4.

29. Пат. 2220202 Российская Федерация, МПК7 12И 7/00. Штамм «БД» вируса репродуктив-но-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов / Байбиков Т.З., Гусев А.А., Дудникова Н.С., Дудников С.А., Гаврилова В.Л., Курман И.Я., Кукушкин С.А., Долганова Е.К.; ФГУ «ВНИИЗЖ». -Заявл. 25.04.02; опубл. 27.12.03.

30. Кукушкин, С.А. Эпизоотология и специфическая профилактика РРСС / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, НА. Яременко // Ветеринария. - 2004. -№2. - С.19-22.

31. Иммунобиологические свойства изолятов вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, И.Я. Курман, Е.П. Баборенко, В.А. Пыль-нов, А.В. Канынина, И.А. Тетерин // Вопросы вирусологии. - 2004. -№2. - С.42-46.

32. Иммунобиологические свойства высоковирулентного вируса репродуктивно-респираторного сицдрома свиней / И.А. Тетерин, С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, Е.П. Баборенко, В.Ф. Ковалишин, А.В. Канышша //Проблемы мониторинга и генодиагностики болезней жив-х: матер. Междунар. конф. молодых ученых. - Владимир, 2004. - С.34-38.

33. Кукушкин, С.А. Профилактика и меры борьбы с репродуктивно-респираторным синдромом свиней / С.А. Кукушкин // РацВетИнформ. - 2004. - №5. - С. 12-14.

34. Кукушкин, С.А. Методы диагностики ре продуктивно-респираторного синдрома свиней / С.А. Кукушкин // Вет. медицина: межвед. тематич. науч. сб. / ИЭКВМ. - Харьков, 2004. -Вып.83.-С.133-137.

35. Кукушкин, С.А. Вирусные болезни свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков // Животновод для всех. - 2004. - №7-8. - С.8-9.

36. Кукушкин, С.А. Специфическая профилактика основных инфекционных болезней свиней / С. А. Кукушкин, Т.З. Байбиков // РацВетИнформ. - 2004. - №8. - С. 17-18.

37. Серологический профиль стада в отношении репродуктивио-респираторного синдрома свиней в неблагополучных хозяйствах / С.А. Кукушкин, И.А. Тетерин, Т.З. Байбиков, Е.П. Баборенко, А.В. Канынина, В.Ф. Ковалишин // Проблемы мониторинга и генодиагностики болезней жив-х: матер. Междунар. конф. молодых ученых. — Владимир, 2004. - С.31-34.

38. Пат. 2232596 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/12. Способ изготовления вирус-вакцины против репродуктивио-респираторного синдрома свиней / Байбиков Т.З., Гусев А.А., Дудникова Н.С., Дудников С.А., Гаврилова В.Л., Курман И.Я., Кукушкин С.А., Долганова Е.К.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Заявл. 16.10.02; опубл. 20.09.04.

39. Пат. 2236253 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/12. Вакцина эмульсионная инакти-вировшшая против репродуктивио-респираторного синдрома свиней / Байбиков Т.З., Долга-нова Е.К., Груздев КН., Дудникова Н.С., Курман ИЛ, Баборенко Е.П., Кукушкин С.А., Гаврилова В.Л.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Заявл. 16.10.02; опубл. 20.09.04.

40. Пат. 2236254 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/12. Способ изготовления вакцины эмульсионной инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней / Байбиков Т.З., Долганова Е.К., Михалиншн В.В., Дудникова Н.С., Курман И.Я., Баборенко Е.П., Кукушкин СЛ.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Заявл. 17.10.02.; опубл. 20.09.04.

41. Течение репродуктивно-респираторного синдрома у свиноматок / СЛ. Кукушкин, Т.З. Байбиков, В.Ф. Ковалишин, И.А. Тетерин // Актуал. пробл. и перспективы развития агропромышленного комплекса; матер. Международной науч.-метод. конф. - Иваново, 2005. -Т.2. — С.41-43.

42. Усовершенствование схемы вакцинации свиней против репродуктивно-респираторного синдрома / СЛ. Кукушкин, Т.З. Байбиков, И.А. Тетерин, В.И. Чермашенцев // Сб. науч. тр. / ВГНКИ. - М., 2005. - Т.66. - С. 107-112.

43. Кукушкин, СЛ. Болезни свиней, протекающие с нарушением воспроизводства, и их профилактика / С.А. Кукушкин, A.M. Рахманов // Актуал. пробл. болезней органов размножения и молочной железы у жив-х: матер. Междунар. науч.-пракг. конф., посвящен. 35-летию Всерос. НИВИ патологии, фармакологии и терапии. - Воронеж, 2005. - С.259-264.

44. Кукушкин, С.А. Испытание новой схемы вакцинации свиней против репродуктивно-респираторного синдрома / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, ИА. Тетерин // Тез. докл. Всерос. конф. / ВГНКИ. Лекарственные средства для жив-х и корма. Современ. состояние и перспек-тивы.-М., 2005.-С.10-11.

45. Кукушкин, СЛ. Особенности специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков // Ветеринария и кормление. - 2005. - №.4. - С. 16-17.

46. Пролиферативно-некротизирующая пневмония свиней / СЛ. Кукушкин, Т.З. Байбиков, В.Ф. Ковалишин, AM. Тимина, А.С. Яковлева // Ветеринария. - 2005. - №.9 - С.17-20.

47. Антигенная активность эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС из штамма «КПР-96» / И.А. Тетерин, СЛ. Кукушкин, Т.З. Байбиков, Е.П. Баборенко // Актуал. пробл. болезней органов размножения и молочной железы у жив-х: матер. Междунар. науч.-пракг. конф., посвящен. 35-летию Всерос. НИВИ патологии, фармакологии и терапии. - Воронеж, 2005. - С.254-259.

48. Байбиков, Т.З. Эпизоотологический и серологический мониторинг некоторых вирусных болезней свиней в России / Т.З. Байбиков, СЛ. Кукушкин // Пробл. экотоксиколог., радиационного и эпизоотолог. мониторинга: матер. Всерос. науч.-пракг. конф., посвящен. 45-летию ФГНУ ВНИВИ. - Казань, 2005. - С.245-252.

49. Иммунобиологические свойства штамма «КПР-96» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней / Т.З. Байбиков, И.А. Тетерин, С.А Кукушкин, Е.П. Баборенко, B.JI. Гаврилова // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: матер. Междунар. науч.-пракг. конф., посвящен. 35-летию ВНИТИБП.—Щелково, 2005. - С.179-183.

50. Разработка и испытание эмульсионной инактивированной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней из штамма «Кемеровский» / И.А. Тетерин, С.А. Кукушкин, Е.П. Баборенко, Т.З, Байбиков, B.JL Гаврилова, А.В. Каньшина// Тр. Федерального центра охраны здоровья жив-х. - Владимир, 2005. - Т.З. - С.241-254.

51. Monitoring of porcine circovirus type 2 on pig farms of the Russian Federation / A.M. Timina, S.A. Kukushkin, T.Zh. Baibikov, A.V. Scherbakov, V.F. Kovalishin // Proc. of the Int. Conf. on Animal Circoviruses and Associated Dis.-Queen's University, Belfast, Northern Ireland,UK, 2005. -P.79.

52. Кукушкин, СЛ. Репродуктивно-респираторный синдром свиней (эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика) / С.А. Кукушкин // Промышленное и племенное свиноводство. - 2006. - №3. - С.60-61.

53. Гаврилова, B.JI. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств штаммов вируса РРСС / B.JI. Гаврилова, И.А. Гетерии, С.А. Кукушкин // Вет. патология. - 2006. - №4. -С.86-90.

54. Груздев, К.Н. Мониторинг экономически значимых инфекционных болезней свиней в России / К.Н. Груздев, Т.З. Байбиков, СА. Кукушкин // Пробл. инфекционной патологии свиней: матер. XIV Моск. Междунар. вет. конгр. - М., 2006. - С.29-34.

55. Значение мониторинга инфекционных болезней в промышленном свиноводстве / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, О.С. Пузанкова, А.В. Кацынина, О.П. Бьядовская // Ветеринарна бютехнолопя. Бюл. №9. Матер. М^жнар. наук.-практ. конф. «Современные проблемы ветеринарной медицины в свиноводстве». - Киев, 2006. - С.161-169.

56. Кукушкин, С.А. Эпизоотология и меры борьбы с репродукгивно-респираторным синдромом свиней в мире и Российской Федерации / С.А. Кукушкин // Ветеринарная патология. - 2006. - №4. - С.80-85.

57. Кукушкин, С.А. Серомониторинг инфекционных болезней среди диких кабанов в центральном федеральном округе России / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, A.M. Тимина, А.В. Канышша, О.П. Бьядовская, Е.К Долгадава, О.И. Ручнова, И.Н. Бакунов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2006. - Т.4. - С.233-240.

58. Новая инфекционная патология - пролиферативно-некротизирующая пневмония свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, A.M. Тимина, В.Ф. Ковалишин, И.А. Тетерин // Вет. медицина 86: м1жвщ. зб. - Харьков, 2006. - С.214-218.

59.Пат.2269361 Российская Федерация, МПК А 61 К 39/29. Вакцина ассоциированная эмульсионная инактивированная против РРСС и ПВИС / Байбиков Т.З., Долганова Е.К., Дудникова НС., Груздев К.Н., Кукушкин С.А., Баборенко Е.П., Гаврилова В.Л.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Заявл. 25.03.04; опубл. 10.02.06.

60. Репродуктивно-респираторный сивдром свиней / Т.З. Байбиков, А.А. Гусев, НА. Яременко, Н.С. Дудникова, B.JI. Гаврилова, С А. Кукушкин // Ветеринария с.-х. жив-х. -2006. -№12.-С.9-13.

61. Kukushkin, S.A. Monitoring of porcine reproductive and respiratory syndrome in wild boar in Russia / S.A. Kukushkin, T.Z. Baibikov, V.V. Mikhalishin // 6th Int. Symp. on Wild Boar (Sus scro-fa) and on Sub-order Suiformes. - Kykkos, Cyprus, 2006. - P.30.

62. Кукушкин, CA. Новая схема вакцинации против репродуктивно-респираторнош синдрома свиней / С.А. Кукушкин // РацВетИнформ. - 2007. - № 1. - С. 18-19.

63. Исследование сывороток крови кабанов (Sus scrofa) на наличие антител к некоторым ин-фекциошшм болезням свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, О.П. Бьядовская, Е.К. Долганова, О.С. Пузанкова, И.Н. Бакунов, В.В. Михалишин // Современные пробл. природопользования, охотоведения и звероводства: матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Киров, 2007. -С.243.

64. Комплекс респираторных болезней свиней в свиноводческих хозяйствах России / С.А Кукушкин, Т.З. Байбиков, М.В. Челышева, В.Ф. Ковалишин // Пробл. инфекционной патологии свиней: матер. XV Моск. Междунар. вет. конгр. - Москва, 2007. - С.24-27.

65. Kukushkin, S. Clinical manifestations of PRRS and PCV-2 associated disease on pig farms / S. Kukushkin, T. Baibikov // 5th Int. Symp. On Emerging and Re-emerging Pig Diseases. - Krakow, Poland, 2007. -P.187.

66. Kukushkin, SA. Effectiveness study of PRRS booster vaccination in sows / S.A. Kukushkin, T.Z. Baybiioov, E.P. Baborenko, E.K. Dolganova // Proc. 2007 Int PRRS Symp. - Chicago, Illinois, USA, 2007.-P.45.

67. Байбиков, Т.З. Профилактика основных вирусных болезней свиней в промышленном свиноводстве / Т.З. Байбиков, С.А. Кукушкин // Пробл. инфекционной патологии свиней: матер. XV Моск. Междунар. вет. конгр. - М., 2007. - С.32-38.

68. Baibikov, Т. Evaluation of pathogenicity of some isolates of PRRS virus in the field and laboratory conditions / T. Baibikov, S. Kukushkin, V. Chermashentsev // 5th Int. Symp. On Emerging and Re-emerging Pig Dis. - Krakow, Poland, 2007. - P. 188.

69. Мониторинг инфекционных болезней среди диких кабанов / А.В. Щербаков, С.А. Кукушкин, А.М. Тимина, Т.З. Байбиков, В.Ф. Ковалишин, А.В. Каньшина, ОЛ. Бьядовская, Л.Б. Прохватилова, О.И. Ручнова, И.Н. Бакунов, М.В. Бабкин // Вопросы вирусологии. -

2007. - №3. - С.29-33.

70. Пат.2295567 Российская Федерация, МПК8 C12N7/00. Штамм «КПР-96» вируса РРСС для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов / Байбиков Т.З., Кукушкин С.А., Баборепко Е.П., Долганова Е.К., Гаврилова B.JI, Тетерин И.А.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - За-явл. 20.06.05; опубл. 20.03.07.

71.Чермашенцев, В.И. Профилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней / В.И. Чермашенцев, С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков // Промышленное и племенное свиноводство. - 2007. -№5. - С.67-69.

72. Investigation of wild boar (Sus scrofa) for porcine reproductive and respiratory syndrome in some territories of Russia / SA. Kukushkin, A.V. Kanshina, A.M. Timina, T.Z. Baybikov, V.V. Mikhalishin// Europ. J. Wildlife Research. - 2008. - Vol.54, №3. - P.515-518.

73. Level of pathogenicity for pigs of highly virulent PRRS virus of European genotype depending on an inoculation dose / S.A. Kukushkin, T.Z. Baybikov, E.P. Baborenko, I.A. Pronin // Proc. 20th Int. Pig Vet Soc. Congr. - Durban, South Africa, 2008. - Vol.2. - P.121.

74. Seroprevalence of antibodies to main porcine infectious pathogens in wild boars in some regions of Russia / S.A. Kukushkin, E.P. Baborenko, T.Z. Baybikov, V.V. Mikhalishin, F.A. Domskiy // Proc. of 7th Int. Symp. on Wild Boar (Sus scrofa) and on Sub-order Suiformes. - Sopron, Hungary,

2008.-P.36.

75. Изучение комплекса респираторных болезней свиней в свиноводческих хозяйствах России / GA. Кукушкин, Т.З. Байбиков, А.М. Тимина, М.В. Челышева, В.Ф. Ковалишин // Рос. вет. журн. с.-х. животные. Спец. вып., посвящен. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». - 2008. — Септ. - С.55-57.

76. Пат.2316346 Российская Федерация, МПК8 А61К39/12. Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней эмульсионная инактивированная / Байбиков Т.З., Кукушкин СА., Баборенко Е.П., Долганова Е.К., Гаврилова B.JL, Тетерин И.А.; ФГУ «ВНИИЗЖ». -Заявл. 20.02.06; опубл. 10.02.08.

77. Кукушкин С.А. Атипичный (высокопатогенный) репродуктивно-респираторный синдром свиней / С.А. Кукушкин, Т.З. Байбиков, А.Е. Фомин // Ветеринарная патология. -2008. — №4. - С.37-42.

78. First outbreak of atypical porcine reproductive and respiratory syndrome in Russia caused by highly pathogenic chinese-like PRRS virus / SA. Kukushkin, T.Z. Baybikov, A.V. Scherbakov, A.M. Timina, E.P. Baborenko, O.S. Puzankova, I.A. Pronin, A.E. Fomin // Proc. 2008 Int. PRRS Symp. - Chicago, Dlinois, USA, 2008. - P.23.

Кукушкин Сергей Анатольевич (Россия) РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ

РРСС. в настоящее время является одним из наиболее значимых заболеваний в индустриальном свиноводстве во всем мире.

В работе дана оценка эпизоотической ситуации по РРСС в Российской Федерации в 1997-2007гг. Изучены особенности клинико-эпизоотическош проявления репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления. Показана степень его широкого распространения на территории Российской Федерации.

Изучены иммунобиологические свойства полевых изолятов вируса РРСС. Огобра-ны в качестве вакцинных и депонированы в коллекции микроорганизмов ФГУ «ВГНКИ» производствешше штаммы «БД-ДЕП» и «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС, отработана технология их крупномасштабного культивирования в перевиваемой культуре клеток Магс-145.

Разработаны технологии изготовления и наставления по применению вирусвакци-ны против РРСС, эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и эмульсионной инактивированной ассоциированной вакцины против РРСС и парвовирусной инфекции свиней на основе отобранных штаммов. Освоено промышленное производство живой и инактивированных вакцин против РРСС, которые успешно внедрены в ветеринарную практику.

Sergey A. Kukushkin (Russia)

DEVELOPMENT OF PREPARATIONS FOR SPECIFIC PREVENTION OF PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME

PRRS is at present one of most significant worldwide-spread diseases in the field of industrial pig farming.

The given paper gives an evaluation of the PRRS epidemic situation in the Russian Federation in 1997-2007. Peculiarities of clinical and epidemic manifestation of PRRS reproductive, respiratory and abnormal forms during acute, chronic and associated course of the disease on farms of different types were studied. The level of its wide-scale spread on the territory of the Russian Federation was shown.

Immunobiological properties of PRRS virus isolates were studied. PRRSV production strains "BD-DEP" and "KPR-96"-DEP were selected as vaccine strains and were deposited in the FGI "VGNKI" collection of microorganisms and the technology of their large-scale cultivation in continuous Marc-145 cell culture was optimized.

Technologies for production of live vaccine against PRRS, emulsion inactivated vaccine against PRRS and emulsion inactivated associated vaccine against PRRS and porcine parvovirus infection were developed on the basis of selected strains and instructions for their use were worked out. The industrial production of PRRS live and inactivated vaccines was mastered and they were successfully introduced into veterinary practice.

Подписано в печать:

28.01.2009

Заказ № 1507 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Актуальность темы. Развитие свиноводства является естественным, объективно обусловленным, экономически выгодным и наиболее перспективным направлением возрождения мясного комплекса России.

Согласно проекту ведомственной целевой программы «Развитие свиноводства Российской Федерации на период 2006 - 2010 годов и до 2015 года» поголовье свиней в России должно удвоиться, а число постоянных рабочих мест в свиноводстве к 2015 году достигнуть до 100 тыс. [89,90,91].

Однако успешному развитию свиноводства во многом прешпствуют различные инфекционные болезни, которые наносят большой экономический ущерб, обуславливая снижение продуктивности и низкую рентабельность отрасли. В начале 90-х годов прошлого столетия к их числу добавилось еще одно заболевание - ре-продуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС), которое в настоящее время является одним из наиболее значимых заболеваний в индустриальном свиноводстве во всем мире.

Впервые это заболевание было зарегистрировано в свиноводческих хозяйствах США и Канады в 1986-1987 гг. и быстро распространилось по всему миру [287,367,378]. В 1990 году РРСС зарегистрирован в Германии, а к середине 90-х годов им была охвачена почти вся Европа [73,128-132,336-343,442,443,468]. С 1993 года оно регистрируется в России и в других странах СНГ [1,2,7,13,13,14,18,31,38.47,53,66,67,73]. Эти факты говорят о высокой контагиозно-сти заболевания и необходимости борьбы с ним.

Заболевание характеризуется поздними абортами (90-109 дней супоросности), преждевременными родами (110-112 дней), прохолостамн свиноматок, рождением мертвых, мумифицированных, нежизнеспособных поросят, гибелью новорожденных поросят и поражением органов дыхания у поросят-отьемышей, групп доращивания и откорма [50,55,59,68,73,107,162,371,408].

Возбудителем заболевания является РНК-содержащий вирус, относящийся к роду АМегшгш, семейство Аг1ег1\>1г id.de ь порядок Nidovirales. В мире сущесхвует два генотипа вируса РРСС: американский и европейский [41,43,145,329,467]. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей различных изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории РФ, показал, что все они относятся к европейской геногруппе, и уровень различий между ними достигает 17% [18,234,409]. Однако в последние годы, в отдельных отечественных хозяйствах был выделен вирус РРСС американской геногруппы, а осенью 2007 года в Иркутской области была зарегистрирована первая на территории России вспышка атипичного РРСС, вызванная высоковирулентным изолятом вируса РРСС американского генотипа.

РРСС наносит ощутимый экономический ущерб свиноводству многих стран и особенно при интенсивном ведении этой отрасли. Экономический ущерб от РРСС ежегодно в США составляет 560 миллионов долларов. Для сравнения ущерб от классической чумы свиней и болезни Ауески в США составляли 364 миллиона (Wise, 1981) и 36 миллионов (Hallam et al., 1987), соответственно до их искоренения. Наибольшие экономические потери приносят острые массовые вспышки болезни [263,264]. По сообщениям различных авторов [106.194,363], убытки при РРСС составляют 100-236 долларов США на свиноматку при острой вспышке болезни и до 502 долларов на свиноматку при хроническом течении болезни.

В связи с этим в последние годы РРСС для многих стран остается основным инфекционным заболеванием свиней.

О высокой актуальности изучения РРСС также свидетельствует следующее:

• по проблемам РРСС проводятся ежегодно международные конференции;

• разрабатываются и реализуются национальные программы по искоренению

РРСС (США, Канада, Чили и др.);

• существует сайт в сети Интернет, посвященный РРСС: http://wwvv.prrs.org.

Основным методом профилактики, контроля и борьбы с РРСС в странах с промышленным свиноводством остается специфическая профилактика с использованием живых и инактивированных вакцин [5,47,68,69,70,83,96,144,168,201, 231,415].

К настоящему времени РРСС довольно широко распространен на территории России и других стран СНГ, однако, еще не достаточно изучены вопросы эпизоотологии, меры борьбы и профилактики этого заболевания, иммунобиологические свойства изолятов, циркулирующих на территории нашей страны и особенности течения РРСС в свиноводческих хозяйствах различного типа. В связи с этим изучение особенностей течения РРСС в свинохозяйствах нашей страны, иммунобиологических свойств изолятов, циркулирующих на территории РФ, разработка. усовершенствование и оценка эффективности применяемых средств специфической профилактики РРСС являются актуальной задачей для развития отечественного свиноводства.

Цель и задачи научных исследований. Главной целью исследований являлась разработка и внедрение в ветеринарную практику эффективных средств специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- оценить эпизоотическую ситуацию по РРСС в Российской Федерации в1997-2007гг. и изучить клинико-эпизоотологическое проявление репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления;

- изучить иммунобиологические свойства отечественных нзолятов вируса РРСС, отобрать штаммы, обладающие стабильными антигенными свойствами, для использования их в качестве производственных;

- разработать технологию крупномасштабного культивирования производственных штаммов вируса РРСС;

- разработать режимы инактивации вируса РРСС;

- подобрать адъюванты для изготовления инактивированных вакцин против

РРСС;

- разработать технологию приготовления вакцинных препаратов против РРСС и методы их контроля;

- провести испытания и дать оценку эффективности разработанных препаратов в экспериментальных и производственных условиях;

- разработать инструкции по применению вакцин против РРСС;

- освоить промышленное производство живой и инактивированных вакцин против РРСС и внедрить их в ветеринарную практику;

- разработать и проверить в производственных условиях схему вакцинопро-филактики РРСС;

- оценить эффективность средств и методов борьбы с РРСС в свиноводческих хозяйствах России;

- подготовить и утвердить нормативно-техническую документацию на разработанные биопрепараты.

Научная новизна исследований. Дана оценка эпизоотической ситуации по РРСС в Российской Федерации в 1997-2007гг. Изучены особенности клинико-эпизоотологического проявления репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления. Впервые в результате клинико-эпизоотологического мониторинга РРСС показана степень его распространения на территории Российской Федерации.

Изучены иммунобиологические свойства полевых изолятов вируса РРСС, отобраны штаммы, обладающие стабильными антигенными свойствами, для использования их в качестве производственных.

Отобраны в качестве вакцинных и депонированы в коллекции микроорганизмов ФГУ «ВГНКИ» производственные штаммы «БД-ДЕП» и «КГ1Р-96»-ДЕГ1 вируса РРСС, отработана технология их крупномасштабного культивирования в перевиваемой культуре клеток Marc-145.

Разработаны технологии изготовления и наставления по применению вирус-вакцины против РРСС, эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС и эмульсионной инактивированной ассоциированной вакцины против РРСС и парво-вирусной инфекции свиней на основе отобранных штаммов.

Освоено промышленное производство живой и инактивпрованных вакцин против РРСС, которые успешно внедрены в ветеринарную практику.

Научная новизна исследований подтверждена 7 патентами Российской Федерации:

- Патент на изобретение №2220202 «Штамм «БД» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов» (2003г.);

- Патент на изобретение №2232596 «Способ изготовления вирус-вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.):

- Патент на изобретение №2236253 «Вакцина эмульсионная инактивирован-ная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.);

- Патент на изобретение №2236254 «Способ изготовления вакцины эмульсионной инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (2004г.)

- Патент на изобретение №2269361 «Вакцина ассоциированная эмульсионная инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома и парвови-русной инфекции свиней» (2006г.).

- Патент на изобретение №2295567 «Штамм «КПР-96» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов» (2007г.);

- Патент на изобретение №2316346 «Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней эмульсионная инактивированная» (2008г.).

Практическая значимость исследований. Установлена степень распространения РРСС на территории Российской Федерации и Республики Беларусь, определены особенности клинического проявления репродуктивной, респираторной и атипичной форм РРСС при остром, хроническом и ассоциированном течении заболевания в хозяйствах различного типа и направления.

Разработаны технологии изготовления и инструкции по применению вирус-вакцины против РРСС, эмульсионных инактивированпых моно- и ассоциированных вакцин против РРСС и обоснована их эффективность. Внедрена в ветеринарную практику и широко используется для борьбы и профилактики РРСС комплексная схема вакцинопрофилактики РРСС, применение которой в свиноводческих хозяйствах Российской Федерации и Республики Беларусь показало ее высокую профилактическую эффективность.

Результаты научных исследований вошли в нормативную документацию (НД), утвержденную Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Рос-сельхознадзором МСХ РФ:

1. НД на «Вирусвакцину сухую культуральную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-027-00008064-99 и «Наставление по применению вирусвакцины .»), 10.06.1999г.;

2. Изменения в ТУ 9384-027-00008064-99 «Вирусвакцина сухая культураль-ная против РРСС» (изменение методов контроля антигенной активности и определение биологической активности вирусвакцины), извещение №1 от 01.04.2005г.;

3. «Инструкция по применению вирусвакцины сухой культуральной против РРСС» (вместо «Наставления по применению .» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вирусвакцины), 15.02.2006г.

4. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктив-но-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней» (ТУ 9384-02600008064-99 и «Наставление по применению вакцины .»), 30.06.1999г.;

5. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактиви-рованная против РРСС и ПВИС» (изменение методов контроля вакцины), извещение №1 от 04.04.2005г.;

6. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактиви-рованная против РРСС и ПВИС» (замена штамма «БД-ДЕП» на штамм «КПР-96»-ДЕП), извещение №2 от 04.04.2005г.;

7. «Инструкция по применению вакцины эмульсионной инактивированной против РРСС и ПВИС» (вместо «Наставления по применению .» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вакцины). 15.02.2006г.;

8. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктив-но-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-153-00495527-2005 и «Инструкция по применению вакцины .»), 30.06.2006г.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 78 научных работ, в том числе 12 работ в изданиях по перечню ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международных и всероссийских научных, научно-практических конференциях (Владимир. 1998;2000;2004;2005; Щелково,2000;2002;2005; Омск,2000; Витебск, 2001; Иваново, 2005; Казань, 2005; Воронеж, 2005; Харьков, 2003;2005; Минск, 2005; Киев, 2006; Киров,2007), на 6-м и 7-м Международных симпозиумах по кабанам (Киккос, Кипр, 2006; Шопрон, Венгрия, 2008), XIV и XV Московских международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2006;2007), 5-ом Международном симпозиуме по эмерджентным и ре-эмерджентным болезням свиней (Краков, Польша,2007), Международных симпозиумах по РРСС (Чикаго, США, 2007;2008). 4-ом Международном симпозиуме Россия-Евросоюз (Суздаль. 2007). 20-ом Международном ветеринарном конгрессе по свиноводству (Дурбан, ЮАР, 2008). зональных и межрегиональных научно-практических семинарах ветеринарных спсциалистов (Ярославль, Белгород, Казань, Киров, Иркутск. Краснодар, Новосибирск, Саранск, Москва, Кустанай, Минск, 2002-2008), заседании секции «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Москва, 2008), а также на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 1998-2008гг.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 370 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 475 источников, в том числе 99 работ на русском языке. Работа иллюстрирована 28 рисунками и 93 таблицами.

5. ВЫВОДЫ

1. РРСС имеет глобальное распространение. В период с 1992 по 2007гг. неблагополучными в отношении РРСС являлись 57 государств, из них 31 в Европе, 11 в Юго-Восточной Азии. 8 в Северной и Центральной Америке, 5 в Южной Америке, одна страна в Африке и одна - в Океании. Основными мероприятиями в борьбе и профилактике РРСС в мире являются профилактическая вакцинация животных, контроль за передвижением животных и мониторинг заболевания в популяции домашних свиней.

2. РРСС имеет широкое распространение на территории России. Положительными в отношении РРСС в разные годы являлись от 80,6% до 100% обследованных регионов и от 54,7% до 83,3% исследованных свиноводческих хозяйств. Уровень серопозитивных по РРСС хозяйств в обследованных регионах России был в пределах от 37,5% до 100%. Результаты исследований проб сывороток крови и внутренних органов, отобранных от диких кабанов в 6 регионах России и Харьковской области Украины, свидетельствуют об отсутствии циркуляции вируса РРСС в дикой природе.

3. Вирус РРСС, впервые попадая в серопегативное хозяйство, как правило, вызывает острую форму болезни, сопровождающуюся массовым поражением животных с характерными клиническими признаками болезни. В крупных свинокомплексах хроническая форма РРСС с обострением в виде спорадических вспышек может наблюдаться в течение многих лет.

4. Ведущими этиологическими агентами в развитии «комплекса респираторных болезней свиней», являются вирус РРСС совместно с цирковирусом свиней типа 2 (ЦВС-2), сочетание которых широко распространено в свиноводческих хозяйствах России.

5. Выделены и изучены иммунобиологические свойства ряда изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории России и Республики Беларусь. Изоляты «Вологодский-98» и «Псрмский-99» являются патогенными как для поросят, так и для свиноматок. Изолят «Вологодский-02» оказался авирулентиым и не вызывал каких-либо клинических проявлений как в хозяйстве, так и при заражении поросят в лабораторных условиях. Изоляты «Белорусский-01» европейского генотипа и «Иркутский-2007» американского генотипа вируса РРСС оказались наиболее патогенным для поросят-отъемышей. В условиях хозяйства изолят «Белорусский-01» не вызывал репродуктивных нарушений у свиноматок, а «Иркутский-2007» являлся высоковирулентным для супоросных свиноматок.

6. Штамм «КПР-96» вируса РРСС не контаминпрован вирусной, бактериальной и грибковой микрофлорой, специфичен, способен накапливаться в культуре клеток Marc-145 в титрах до 5,25-5,5 lg ТЩ^о/см"5, обладает выраженной антигенной активностью на подсвинках, слабовирулентный, в связи с чехм он предложен в качестве производственного штамма для изготовления инактивированных вакцин против РРСС, а также в диагностических целях.

7. В результате сравнительного детального изучения иммунобиологических характеристик отобраны для изготовления и контроля вакцинных и диагностических препаратов штаммы вируса РРСС «КПР-96»-ДЕП, «БД-ДЕП», изоляты «БР-01» и «Иркутский-2007».

8. Разработана технология получения высокоактивного вирусного сырья с использованием штамма «КПР-96»-ДЕП вируса РРСС на перевиваемой культуре клеток Marc-145. В роллерных установках накопление вируса РРСС на 1,0-1,5 lg выше, по сравнению с системой культивирования на матрасах, и их использовани-ие позволяет сократить сроки культивирования до 1,5 суток.

9. Отработаны режимы инактивации вируса РРСС с использованием формальдегида. аминоэтилэтиленимина и ß-пропиолактона. В результате проведенных экспериментов было установлено, что для полной инактивации вируса РРСС необходима концентрация формальдегида 0,05% при 37°С в течение 12 часов, для ß-пропиолактона - 0,025-0,1% при 4°С в течение 6 часов, для аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) - 0,05% при 37°С и времени экспозиции 12 часов.

10. Дана оценка некоторым традиционным и новым коммерческим адъюван-гам компании SEPPIC (Франция) в составе инактивированных вакцин против РРСС и ПВИС. Установлено, что наибольшей антигенной активностью обладали образцы на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70.

11. Разработана технология изготовления и контроля моно- и ассоциированных инактивированных вакцин против РРСС:

- эмульсионной инактивированной вакцины против РРСС;

- эмульсионной инактивированной ассоциированной вакцины против РРСС и парвовирусной инфекции свиней (ПВИС).

12. В неблагополучных по РРСС хозяйствах дополнительная вакцинация свинок и свиноматок на 60-70 день супоросности позволяет существенно повысить эффективность вакцинопрофилактики.

13. Результаты применения эмульсионных инактивированных вакцин против РРСС в условиях хозяйств показали их высокую эффективность для профилактики репродуктивной формы РРСС и умеренную для профилактики респираторной формы заболевания. После применения эмульсионных инактивированных вакцин против РРСС, против РРСС и ПВИС в неблагополучных хозяйствах уровень репродуктивной патологии снижался в среднем с 55% до 5,6% и резко уменьшался массовый отход поросят-сосунов.

14. Сухая культуральная вирусвакцина против РРСС является безвредным, стерильным, слабореактогенным препаратом, обладает высокой иммуногенностыо и эффективностью. Ее применение в неблагополучных по РРСС хозяйствах позволяет увеличить сохранность поросят в период доращивания на 30-50%, по сравнению с непривитыми, а также среднесуточные привесы.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований вошли в нормативные документы, которые были одобрены ученым советом ФГУ «ВНИИЗЖ», утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Россельхознадзором МСХ РФ:

1. НД на «Вирусвакцину сухую культуральную против репродуктивно-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-027-00008064-99 и «Наставление по применению вирусвакцины .»), 10.06.1999г.;

2. Изменения в ТУ 9384-027-00008064-99 «Вирусвакцина сухая культураль-ная против РРСС» (изменение методов контроля антигенной активности и определение биологической активности вирусвакцины), извещение №1 от 01.04.2005г.;

3. «Инструкция по применению вирусвакцины сухой культуральной против РРСС» (вместо «Наставления по применению .» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вирусвакцины), 15.02.2006г.

4. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктив-но-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней» (ТУ 9384-02600008064-99 и «Наставление по применению вакцины .»), 30.06.1999г.;

5. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактиви-рованная против РРСС и ПВИС» (изменение методов контроля вакцины), извещение №1 от 04.04.2005г.;

6. Изменения в ТУ 9384-026-00008064-99 «Вакцина эмульсионная инактиви-рованная против РРСС и ПВИС» (замена штамма «БД-ДЕП» на штамм «КПР-96»-ДЕП), извещение №2 от 04.04.2005г.;

7. «Инструкция по применению вакцины эмульсионной инактивированной против РРСС и ПВИС» (вместо «Наставления по применению .» с изменением схемы иммунизации и биологических свойств вакцины), 15.02.2006г.;

8. НД на «Вакцину эмульсионную инактивированную против репродуктив-но-респираторного синдрома свиней» (ТУ 9384-153-00495527-2005 и «Инструкция по применению вакцины .»), 30.06.2006г.

Научная новизна исследований подтверждена 7 патентами на изобретение Российской Федерации (№№ 2220202; 2232596; 2236253; 2236254; 2269361; 2295567; 2316346).

294