Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диоксинор при респираторных болезнях поросят

На правах рукописи Никулин Алексей Иванович

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА ДИОКСИНОР ПРИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЯХ ПОРОСЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

о з апр :::з

Воронеж - 2009

003466503

Работа выполнена в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии»

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН

Шахов Алексей Гаврилович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Скворцов Владимир Николаевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Защита состоится 28 апреля 2009 года в 13 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.02 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» по адресу:

394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии».

Автореферат разослан «¿^З » (Л^^рШЛ— 2009г. Ученый секретарь

доктор ветеринарных наук Жуков Иван Васильевич

диссертационного совета

Близнецова Г.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из острых проблем крупных свиноводческих хозяйств являются респираторные болезни. Они широко распространены практически во всех странах мира с развитым свиноводством, занимают одно из ведущих мест в патологии свиней и наносят большой экономический ущерб (Р.Г. Хунн, 1970; Й.Гаммельгор, 1985; П. Щербаков, с соавт., 2002; И.В. Волков, 2004; А.Г. Шахов, 2005; Б.Г. Орлянкин, 2006; А.И. Ануфриев, с соавт., 2007; Т.С. Кузнецова, с соавт., 2008).

В последние годы наблюдается тенденция к снижению эффективности химиотерапии и химиопрофилактики при различных инфекционных болезнях животных, в том числе и при респираторных болезнях свиней. Циклические способы лечения одним и тем же препаратом ведут к возникновению затяжных форм болезни и формированию устойчивых к антимикробным средствам популяций возбудителей, которые становятся слабочувствительными вследствие адаптации к препарату, и в этиологии инфекционных процессов стали преобладать более устойчивые формы и виды патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (C.B. Шабунин, 1999; А.Г. Шахов, 2003).

Этим определяется актуальность представленной работы и ее перспективность в плане изучения эпизоотологии и этиологии респираторных болезней поросят и разработки высокоэффективных комплексных антимикробных препаратов.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение этиологии респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР и разработка комплексного антимикробного препарата для терапии больных поросят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторным болезням свиней в трех крупных специализированных хозяйствах Воронежской, Липецкой и Орловской областей.

2. Провести бактериологические, серологические и молекулярно-генетические исследования патологического материала от больных пневмонией свиней для определения этиологической структуры респираторных болезней свиней.

3. Изучить in vitro и in vivo на моделях бактериальных инфекций белых мышей антимикробные свойства комплексного препарата диокси-нор.

4. Изучить лечебную и экономическую эффективность диоксино-ра при респираторных болезнях свиней.

Научная новизна. Впервые в возрастном аспекте изучены заболеваемость поросят респираторными болезнями в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР, их этиологическая структура, антимикробные

свойства нового комплексного препарата диокеинор, его лечебная и экономическая эффективность.

Практическая значимость и внедрение. Полученные результаты свидетельствуют о сложной эпизоотической ситуации и этиологической структуре массовых респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах. Для терапии больных животных разработан новый высокоэффективный комплексный препарат диокеинор с широким спектром антимикробного действия, обладающий выраженными лечебными свойствами. Полученные результаты вошли в разработанную и утвержденную нормативно-техническую документацию на препарат диоксинор-АФ (СТО 10590965-0002-2006) и инструкцию, утвержденную заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за №ПВР-2-1.7/01921 от 18.04.2007г.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», протокол №2 от 01.02.2007 года; первом съезде ветеринарных фармакологов России, Воронеж 21-23 июня 2007 года; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» 17-19 сентября 2008 года, г, Воронеж.

Публикация материалов исследований. Основные материалы диссертации изложены в 6 статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 2 в журналах, рекомендованном ВАК. В публикациях отражено основное содержание диссертации.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эпизоотическая ситуация и этиологическая структура респираторных болезней свиней в крупных свиноводческих хозяйствах.

2. Антимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диокеинор при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 183 источника, в том числе 83 на иностранных языках. Иллюстративный материал включает 4 рисунка и 20 таблиц.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Россельхозакадемии в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии Всероссийского научно-исследовательского

ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 2005-2008 гг. и в трех крупных специализированных свиноводческих хозяйствах Воронежской (СХА МХГ1 «Николаевское»), Липецкой (ОАО «Русская АПК») и Орловской (ОАО Агрофирма «Ливенское мясо») областей, стационарно неблагополучных по респираторным болезням поросят.

Для определения эпизоотической ситуации в хозяйствах использовали данные отчетов ветеринарных служб и результатов собственных исследований.

При клиническом исследовании у животных измеряли температуру тела, определяли частоту пульса и дыхания, наличие одышки, кашля, носовых истечений в соответствии с принятыми в клинической диагностике методами.

Этиологическую структуру респираторных болезней изучали на основании эпизоотологического обследования хозяйств, результатов бактериологических, серологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала (легкие, средостенные лимфоузлы, печень, почки, селезенка, кровь из сердца) от павших и убитых с диагностической целью больных животных.

1. Бактериологические исследования проводили общепринятыми классическими методами согласно утвержденным наставлениям. При бактериологических исследованиях использовали пораженные участки легких на границе со здоровой тканью, средостенные лимфатические узлы, кровь из сердца, селезенку, почки, печень. Патологический материал исследовали не позднее 2 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), МПА с 5% крови барана, среду Эндо. Посевы инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов, после чего учитывали характер роста микроорганизмов. У выделенных чистых культур изучали тинкториальные, морфологические и культурально-биохимические свойства. Чувствительность выделенных культур к антибиотикам определяли методом индикаторных бумажных дисков. Оценку результатов проводили путем измерения величины зоны задержки роста культур. Патогенность выделенных микроорганизмов определяли с помощью постановки биопробы на белых мышах.

2. Молекулярно-генетические исследования выполняли методом ПЦР с применением соответствующих утвержденных тест-систем, амплификацию ДНК проводили в программируемом термостате «Терцик ТПЧ-ПЦР01». Для регистрации продуктов ПЦР использовали метод электрофо-ретического разделения продуктов амплификации в агарозном геле.

3. Серологические исследования проводили согласно утвержденным методикам и наставлениям к соответствующим диагностическим наборам в реакциях РТГА, РИГА и ИФА. Учет результатов иммуноферментного анализа осуществляли на спектрофотометре с вертикальным ходом луча «Униплан-ТМ».

4. Зоогигиенические и токсикологические показатели кормов, воды и воздуха оценивали согласно утвержденным методикам и ГОСТам.

5. Изучение антимикробной активности диоксинора и оптимального соотношения диоксидина и норфлоксацина в препарате проводили in vitro методом серийных разведений (Антонов Б.И. с соавт., 1986; Ковалев В.Ф. с соавт., 1988; Сидоров М.А. с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали музейные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов возбудителей респираторных и желудочно-кишечных болезней поросят, ти-пированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Оптимальное соотношение диоксидина и норфлоксацина определяли путем сравнения антимикробной активности изучаемых композиций с таковой у составляющих компонентов.

Минимальную бактериостатическую концентрацию определяли методом серийных разведений в МПБ, а минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы. В качестве контроля роста культуры использовали пробирку, не содержащую препарат. Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 500 тысяч. Посевы инкубировали при 37°С в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Антимикробную активность диоксинора (in vivo) изучали на моделях пастереллезной, сальмонеллезной и стафилококкозной инфекций белых мышей массой 18-20 г. В предварительных опытах определяли минимальную летальную дозу (DLM) суточных культур.

Определение терапевтической эффективности диоксинора проводили in vivo в модельных опытах при экспериментальном заражении белых мышей Staphylococcus aureus (2,25 млн. микробных клеток/мышь), Salmonella cholerae suis (100 тыс. микробных клеток/мышь), Pasteurella multocida (100 тыс. микробных клеток/мышь).

Заражение проводили смывом суточных агаровых культур возбудителей. Разведения культур делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности. Лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препарат вводили 1 раз в сутки внутримышечно.

Эксперименты проводили на половозрелых нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 18-20 г. Животных содержали в условиях вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии, при температуре воздуха 20-22°С и влажности 40-60%.

Группы животных формировали по принципу парных аналогов по 10-20 мышей в каждой, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Животных контрольных групп лечению не подвергали. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 10 дней,

учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом выделения исходных культур микроорганизмов из крови сердца, печени, селезенки павших мышей. Индекс защиты определяли по формуле В.Д. Белякова (1961). О терапевтической эффективности препарата судили также по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 10 дней после инфицирования.

6. Действие препарата на морфологические и иммунологические показатели крови и неспецифическую резистентность организма было изучено на больных пневмонией поросятах. Для оценки уровня неспецифической резистентности определяли гемолитическую активность комплемента у животных - по Г.Ф. Вагнеру (1963), бактерицидную активность сыворотки крови - по О.В. Смирновой и Т.А. Кузминой (1966), лизоцимную - по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс - по B.C. Гостеву (1950).

Количество иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (1965).

Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования крови - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005). Определение микроэлементов проводили на атомно-адсорбционном спекрофотометре - 6500.

Показатели, отражающие состояние системы ПОЛ-АОЗ: содержание малонового диальдегида, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы и ка-талазы оределяли по методу Бузламы B.C. с соавт. (1997), активность су-пероксидцисмутазы (Сирота Т.В., 1999) - на спекрофотометре «Specol-340».

7. Опыты по изучению лечебной эффективности диоксинора проведены на поросятах 2,5-3 месячного возраста в условиях двух хозяйств, стационарно неблагополучных по респираторной патологии: СХА МХП «Николаевское» Аннинского района Воронежской области и ОАО Агрофирма "Ливенское мясо" Ливенского района Орловской области. Опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т. Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий содержания и кормления животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты проведены в нескольких повторностях.

Экономическую эффективность применения препарата определяли согласно методическим рекомендациям Б.Т. Артемова с соавт. (1991).

Статистическая обработка полученных данных проведена с помощью программы «ExStat».

За помощь при проведении исследований выражаем искреннюю признательность сотрудникам отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии; физико-химических методов исследования; клинической биохимии; лаборатории экспериментальной фармакологии ГНУ ВНИВИПФиТ и специалистам свиноводческих хозяйств.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.Эпизоотическая ситуация и этиология респираторных болезней поросят

Изучение эпизоотической ситуации в крупных свиноводческих хозяйствах показало, что респираторные болезни регистрируются на протяжении всего технологического цикла. У поросят-сосунов в общей заболеваемости респираторная патология не превышала 0,5% - в 2004 и в 2005 году, 0,4% - в 2006 году. В период доращивания она резко возрастала и составила по годам соответственно 39,6 - 65,8%, 34,5 - 74,6% и 66,9 - 76,5%. У откормочного поголовья заболеваемость по годам несколько снижалась, но оставалась высокой: 44,5 - 65,0%, 43,6 - 71,1% и 39,7 - 59,5%.

На доращивании количество павших поросят от респираторных болезней, из общего числа падежа, составило соответственно 43,7-73,8%, 28,9-71,0% и 61,5-89,0%, на откорме - 36,1-54,0%, 12,0 - 31,3% и 32,242,0%.

При бактериологических и молекулярно-генетических исследованиях спектр возбудителей был представлен микоплазмами — в 37,8-64,5%, цирковирусом II типа - 44,0-63,6%, вирусом РРСС - 12,0-18,9%, хлами-диями - 5,4-12,0%, Pasteurella multocida - 46,1-86,7%, Salmonella cholerae suis - 19,2-60,0%, Salmonella thyphimurium - 6,7-33,3%, Streptococcus pneumoniae - 3,3-20,0%, Actinobacillus pieuropneumoniae - 16,7%.

В значительной степени респираторные болезни были обусловлены ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей в различных сочетаниях: вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма - 37,1%, цирковирус II типа + микоплазма - 41,2%, вирус РРСС + микоплазмы - 28,5%, вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма + хламидии - 8,7%. Во всех случаях вирусные инфекции осложнялись бактериальной микрофлорой. В 28,9% случаев патология была обусловлена ассоциацией бактерий, из них: Pasteurella multocida + Salmonella cholerae suis - 10,0-26,7%, Pasteurella multocida + Streptococcus - 13,3-23,1%, Salmonella cholerae suis + Salmonella thyphimurium - 6,7-26,7%.

При исследовании сыворотки крови поросят с респираторным синдромом выявлены антитела к вирусу РРСС в 31,3-52,2% (41,7%) случаев, цирковирусу II типа - 47,4-64,3% (53,9%), микоплазмам - в 26,1-53,3% (36,0%) и пастереллам - 57,1-100,0% (74,1%). У клинически здоровых животных сероконверсия к вирусу РРСС составила 25,0-42,9% (34,0%), цир-

ковирусу II типа - 25,0-35,7% (30,4%), микоплазмам - 20,0-25,0% (22,5%) и пастереллам - 60,0-100,0% (80,0%).

При изучении чувствительности выделенных бактерий к антибактериальным препаратам установлено, что в свиноводческих хозяйствах циркулируют антибиотикоустойчивые штаммы микроорганизмов.

Таким образом, во всех изучаемых хозяйствах в возникновении и развитии респираторной патологии поросят принимают участие различные ассоциации возбудителей. Ассоциированные инфекции, вызванные вирусом РРСС, цирков ирусом II типа, микоплазмами, протекают более тяжело, чем моноинфекции, вызываемые этими возбудителями. Это свидетельствует о синергизме между вирусом РРСС, цирковирусом II типа и другими возбудителями, которые принимают участие в респираторной патологии.

Широкая циркуляция среди свиней указанных вирусов и микоплазм свидетельствует об их активном участии в возникновении и развитии инфекционного процесса, при котором создаются условия для активации потенциально-патогенной бактериальной микрофлоры.

Установленная сероконверсия к указанным возбудителям у клинически здоровых животных свидетельствует об их инфицированности и, возможно, скрытом переболевании, что создает условия для стационарного неблагополучия хозяйств по инфекционным заболеваниям.

3.2. Факторы, предрасполагающие возникновению и распространению респираторных болезней поросят

При изучении микроклимата в свиноводческих помещениях ОАО «Русская АПК» и ОАО Агрофирмы «Ливенское мясо» было установлено, что температура воздуха была ниже нормы на 24,0 и 16,7%, а влажность воздуха выше нормы на 5,0- 15,8% соответственно, общая бактериальная обсеменённость помещений составила 54 - 90 тыс. м.к. в 1м3 (допустимая микробная обсеменённость не должна превышать 50 - 60 тыс. м.к. в 1м3); были выделены культуры Escherichia coli (серотипы 0111, 02, 026, 041, 033), Salmonella cholerae suis и Salmonella typhimurium.

В помещении для откорма животных жидкими кормами общая бактериальная обсеменённость составила 70 - 80 тыс. м.к. в 1м3; выделены культуры Escherichia coli (серотипы 02, 01, 0111, 041, 033), в помещении для откорма животных сухими кормами общая бактериальная обсеменённость составила 80 - 90 тыс. м.к. в 1м3, выделена культура Proteus vulgaris.

При бактериологическом исследовании воды (4 пробы), - титр воды составил 333, при норме не менее 100, а коли-индеке - 3.

Таким образом, респираторные болезни являются типичными факторно—инфекционными заболеваниями, возникающими вследствие воздействия на животных присутствующих в среде обитания неблагоприятных факторов и носительства у них потенциально-патогенных микроорганизмов.

3.3. Разработка комплексного антимикробного препарата диоксинор

Проведенные исследования по изучению этиологии массовых респираторных болезней поросят показали, что они представляют сложные инфекционные процессы, в которых на разных стадиях их развития принимают участие бактерии, вирусы, микоплазмы в различных сочетаниях. Поэтому для лечения животных при болезнях, вызванных ассоциациями микроорганизмов, необходимы комплексные антимикробные средства с широким спектром и разным механизмом действия. В связи с этим совместно с сотрудниками отдела экспериментальной фармакологии и НПО «Агро-фарм» разработан комплексный антимикробный препарат диоксинор на основе норфлоксацина и диоксидина.

3.3.1. Изучение оптимального соотношения компонентов в диоксиноре

Изучение оптимального соотношения норфлоксацина и диоксидина в диоксиноре проводили in vitro методом серийных разведений в МПБ с определением минимальной бактериостатической концентрации (МБсК) и сравнением антимикробной активности норфлоксацина и диоксидина и комбинаций норфлоксацина и диоксидина в соотношениях 5:0,5; 5:1; 4:1 (табл.1 и 2).

Таблица 1

Антимикробная активность диоксинора, норфлоксацина и диоксидина __(мкг/мл)__

Вид микроорганизмов Норфлоксацин Диоксидин Диоксинор

МБсК МБцК МБсК МБцК МБсК МБцК

Staphylococcus aureus 209Р 3,12 6,25 50,0 100,0 0,96 1,92

Staphylococcus aureus (п) 6,25 12,5 50,0 100,0 0,96 1,92

Streptococcus pneumoniae 3,12 6,25 50,0 100,0 0,96 1,92

Bordetella bronchiseptiea 8346 6,25 12,5 25,0 50,0 0,24 0,48

Pasteurella multocida B651 6,25 12,5 25,0 50,0 0,48 0,96

Pasteurella multocida (n) 6,25 12,5 25,0 50,0 0,48 0,96

Escherichia coli 57358 0,19 0,39 25,0 50,0 0,24 0,48

Escherichia coli 08 (n) 0,19 0,39 12,5 50,0 0,12 0,24

Escherichia coli 0142 (n) 0,39 1,56 25,0 50,0 0,24 0,48

Escherichia coli A20 (n) 1,56 3,12 50,0 100,0 0,48 0,96

Salmonella cholerae suis 0,39 1,56 25,0 50,0 0,24 0,48

Salmonella cholerae suis (n) 1,56 3,12 50,0 100,0 0,96 1,92

Salmonella dublin 0,39 1,56 25,0 50,0 0,48 0,96

Salmonella typhimurium 0,19 0,39 12,5 25,0 0,48 0,96

Pseudomonas aeruginosa 25,0 50,0 50,0 200,0 15,6 62,5

Примечание: (п) - полевые культуры

По данным таблицы 1, наибольшей антимикробной активностью обладал норфлоксацин. Минимальная бактериостатическая концентрация в отношении эшерихий и сальмонелл составила 0,19-1,56 мкг/мл. Чувствительность пастерелл к препарату проявлялась в концентрации 6,25 мкг/мл. В отношении стафилококков и стрептококков МБсК составила 3,12-6,25 мкг/мл.

МБсК диоксидина в отношении всех изученных микроорганизмов составила 12,5-50,0 мкг/мл.

Минимальное бактерицидное действие (МБцК) у обоих препаратов превышало бактериостатическое в 2 раза.

Антимикробную активность различных комбинаций состава препарата изучали в отношении пастерелл, бордетелл, сальмонелл, стафилококков и стрептококков (табл. 2).

Наиболее выраженным антимикробным действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов обладает комбинация норфлоксацина и диоксидина в соотношении 5:1. МБсК данной комбинации в отношении Salmonella cholerae suis и Bordetella bronchiseptica 8346 составила 0,24 мкг/мл, Pasteurella multocida B651- 0,48 мкг/мл, а в отношении Staphylococcus aureus 209Р и Streptococcus pneumoniae (п) - 0,96 мкг/мл и превосходила МБсК как составных частей комбинации - норфлоксацина и диоксидина, так и комбинаций норфлоксацина и диоксидина в соотношении 5:0,5 и 4:1.

Таблица 2

Антимикробная активность комбинаций норфлоксацина и диоксидина

Вид микроорганизмов Минимальная бактериостатическая концентрация (мкг/мл) комбинаций норфлоксацина и диоксидина в соот-

ношении:

5:0,5 5:1 4:1

Staphylococcus aureus 209Р 1,92 0,96 1,92

Streptococcus pneumoniae (п) 0,96 0,96 1,92

Bordetella bronchiseptica 8346 0,48 0,24 . 0,48

Pasteurella multocida B651 0,96 0,48 1,92

Salmonella cholerae suis 0,96 0,24 0,48

Примечание: (п) — полевые культуры

Таким образом, совместное применение норфлоксацина и диоксидина в соотношении 5:1 позволило снизить минимальную бактериостати-ческую концентрацию в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергическом действии составляющих компонентов.

3.3.2. Антимикробная активность диоксинора

Активность препарата диоксинор (табл. 1) в отношении грамотрица-тельных бактерий в зависимости от видовой принадлежности микроорганизмов находилась в пределах 0,12 - 0,96 мкг/мл, а именно: для Escherichia coli 08 (п) она составила 0,12мкг/мл, Escherichia coli 57358, Escherichia coli K88 (n), Escherichia coli 0142 (n), Escherichia coli 04, Escherichia coli 866 -0,24мкг/мл, Escherichia coli A20 (n) - 0,48 мкг/мл препарата.

В отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл минимальная бактериостатическая концентрация диоксинора составила для Salmonella cholerae suis - 0,48 мкг/мл, Salmonella typhimurium и Salmonella dublin, Salmonella cholerae suis (n) - 0,96 мкг/мл.

Концентрация 0,48 мкг/мл вызывала задержку роста культур Pasteurella multocida. Диоксинор в концентрации 0,24 мкг/мл задерживает рост Bordetella bronchiseptica 8346.

Минимальная бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры (Staphylococcus aureus 209Р, Staphylococcus aureus (п), Streptococcus pneumoniae (п)) составила 0,96 мкг/мл. Наиболее устойчивой к диоксинору оказалась культура синегнойиой палочки - 15,6 мкг/мл.

Бактерицидное действие диоксинора проявилось в концентрациях, в 2 раза превышающих бактериостатические. МБцК препарата в отношении культур эшерихий составила 0,24 - 0,96 мкг/мл, сальмонелл - 0,48 - 1,92 мкг/мл, пастерелл - 0,96 мкг/мл, бордетелл - 0,48 мкг/мл. Минимальная бактерицидная концентрация диоксинора в отношении стафилококков и стрептококков составила 1,92 мкг/мл, а культуры Pseudomonas aeruginosa 62,5 мкг/мл препарата.

3.3.3. Специфическая акггивность диоксинора при экспериментальных инфекциях белых мышей

Специфическая активность препарата in vivo была изучена на моделях пастереллезной, стафилококкозной и сальмонеллезной инфекций белых мышей. В опыт было взято 90 мышей, разделенных на 6 групп.

В предварительных опытах определяли минимальную летальную дозу (DLM) культур суточных культур, которая составила 500 млн. микробных клеток для Staphylococcus aureus, 2,25 млн. микробных клеток для Salmonella cholerae suis и 100 тыс. микробных клеток - Pasteurella multocida.

Staphylococcus aureus

Salmonella cholerae suis

Pasteurellamultocida

Si

Рис. 1. Индекс защиты (%)

При проведении экспериментальных исследований было установлено (рис. 1), что наиболее выраженным терапевтическим эффектом препарат обладал при пастереллезной и сальмонеллезной инфекции (95%), при стафилококковой инфекции лечебная эффективность составила 85 % при 100% гибели животных в контрольных группах. Также отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни белых мышей в зависимости от микроорганизма-возбудителя. При инфекциях, вызванных пастереллами и сальмонеллами, суммарная продолжительность жизни белых мышей составила 194-195 дней, при стафилококковой инфекции - 189 дней.

Улучшение общего состояния животных опытных групп в процессе лечения наблюдалось на 3-5 день, а полное клиническое выздоровление наступало на 7-8 сутки.

Полученные результаты характеризуют диоксинор как эффективное химиотерапевтическое средство для лечения респираторных инфекций, вызываемых потенциальными бактериальными возбудителями.

3.3.4. Фармако-токснкологическая характеристика диоксинора

Исследования проведены совместно с сотрудниками отдела экспериментальной фармакологии ГНУ ВНИВИПФиТ (заведующий доктор биологических наук Г.А. Востроилова).

7307528

Изучение параметров токсичности диоксинора показало, что препарат относится к малотоксичным веществам (IV класс токсичности). ЬП50 диоксинора при внутрижелудочном введении для белых мышей и крыс составляет более 30000,0 мг/кг. При пероральном введении ЬЭ5о диоксинора определить не удалось, так как при введении препарата в максимально возможных объемах (0,6 мл - белым мышам и 6,0 мл - белым крысам) не отмечалось гибели животных. При внутрибрюшинном введении ЬО}о диоксинора для белых мышей составила 8900,0 мг/кг, для белых крыс -13100,0 мг/кг, Диоксинор обладает слабовырзженным кожно-раздражающим действием. У препарата не выявлено кожно-резорбтивного действия, у него отсутствуют кумулятивные и аллергенные свойства. При изучении влияния диоксинора на организм клинически здоровых животных не установлено его отрицательного влияния на морфологический состав крови и основные виды обмена веществ.

Диоксинор при длительном применении не оказывает отрицательного влияния на качество мяса и мясопродуктов.

Изучение фармакокинетики активнодействующих веществ диоксинора в крови поросят и телят показало, что максимальное содержание ди-оксидина и норфлоксацина наблюдается через 1-3 часа после введения препарата. Терапевтическая концентрация диоксинора в крови сохраняется до 24 часов. Результаты определения остаточных количеств диоксидина и норфлоксацина свидетельствуют о том, что оба компонента хорошо проникают в различные органы и ткани (концентрации в ткани почек и печени превышают сывороточные). Элиминация компонентов препарата идет преимущественна с мочой. Через 7 суток после внутримышечного введения диоксинора в исследуемых биологических жидкостях, органах и тканях активнодействующие вещества не обнаруживаются.

Таким образом, препарат диоксинор является малотоксичным средством (4 класс токсичности), обладает выраженным антимикробным действием в отношении бактериальных возбудителей респираторных болезней свиней.

3.3.5. Лечебная эффективность диоксинора при пневмониях поросят

Изучение лечебной эффективности препарата проводили в двух стационарно неблагополучных по респираторной патологии свиноводческих хозяйствах: СХА МХП «Николаевское» и ОАО Агрофирма "Ливенское мясо", рассчитанных на получение и выращивание 54 и 24 тысяч поросят в год соответственно.

При клиническом исследовании животных с острой и подострой формой бронхопневмонии были отмечены следующие признаки: слабость, потеря аппетита, отставание в росте и развитии, повышение температуры

тела на 0,5 - 1,5°С, сухой кашель, серозное и серозно-слизистое истечение из носовых отверстий, одышка.

При патологоанатомическом вскрытии павших и вынужденно-убитых с диагностической целью с респираторной патологией поросят обнаруживали катаральное воспаление слизистой оболочки трахеи и бронхов, отечность и гиперемию паренхимы легких, лобулярное катаральное и катарально-гнойное воспаление легочной ткани. Средостенные и бронхиальные лимфатические узлы увеличены в объеме, серо-белого цвета, упругой консистенции. В отдельных случаях наблюдали очаги некроза в легких, фибринозное воспаление плевры.

В СХА МХП «Николаевское» при бактериологическом исследовании патологического материала от убитых с диагностической целью больных пневмонией поросят выделены Streptococcus pneumoniae, Pasteurella multocida, Salmonella cholerae suis. Кроме того, методом ПЦР из пораженных легких поросят обнаружен геном микоплазм (родовой).

В опыте по принципу аналогов было сформировано две группы больных поросят в возрасте 90 дней. Животным опытной группы (п = 31) применяли диоксинор в дозе 1 мл/10кг массы тела, контрольной (п =23) - эн-рофлон 5% в дозе 1мл/10кг массы тела один раз в сутки в течение 7-10 дней. Выбор базового препарата основывался на результатах определения чувствительности выделенных возбудителей к антибактериальным препаратам.

За подопытными животными вели клинические наблюдения в течение 14 дней, учитывали сроки выздоровления, определяли массу тела, терапевтическую эффективность (табл.3).

Таблица 3

Сравнительная терапевтическая эффективность диоксинора при респира-

торной патологии поросят СХА МХП «Николаевское»

Показатели Группа животных

Контрольная Опытная

Количество животных, голов 23 31

Выздоровело, голов % 18 78,3 27 87,1

Пало, голов 0 0

Осталось больными, голов 5 4

% 21,7 12,9

Сроки выздоровления, дней 9,2±0,4 8,1 ±0,5

Терапевтическая эффективность, % 78,3 87,1

Масса тела одного животного:

в начале опыта, кг 19,4 21,2

в конце опыта, кг 22,5 24,9

Среднесуточный прирост массы тела, г 310 370

Установлено (табл. 3), что применение диоксинора способствовало улучшению общего состояния животных, нормализации температуры тела, выздоровление животных при этом наступало на 8,1±0,5, а при назначении энрофлона 5% - на 9,2±0,4 сутки. Падежа поросят как в опытной группе, так и в базовом варианте не регистрировали. Лечебная эффективность препаратов составила соответственно 87,1 и 78,3%. О более высокой терапевтической эффективности диоксинора свидетельствует и среднесуточный прирост массы тела поросят, который превосходил показатель группы сравнения ца 60,0 г.

В ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» от павших и вынужденно убитых с диагностической целью больных поросят были выделены Pasteurella multocida, Streptococcus pneumoniae, Salmonella typhimurium, Salmonella cholerae suis, которые были чувствительны к энрофлоксу 5%. Молекуляр-но-генетическим методом выявлен геном микоплазм (родовой).

Для проведения эксперимента по принципу аналогов было сформировано две группы больных поросят в возрасте 85 дней. Животным опытной группы (п = 98) применяли диоксинор в дозе 1мл/10кг массы тела, группы сравнения (п =96) - энрофлокс 5% в дозе 0,5мл/10кг массы тела один раз в сутки в течение 7-10 дней (табл. 4).

Таблица 4

Сравнительная терапевтическая эффективность диоксинора при респира-

торной патологии поросят ОАО Агрофирма «Ливенское мясо»

Показатели Группа животных

Контрольная Опытная

Количество животных, голов 96 98

Выздоровело, голов % 73 76,0 82 83,7

Пало, голов 0 0

Осталось больными, голов 23 16

% 24,0 16,3

Сроки выздоровления, дней 9,0±0,3 7,8±0,4

Терапевтическая эффективность, % 76,0 83,7

Проведенными исследованиями установлено, что животные при применении диоксинора выздоравливали на 7,8±0,4, а при назначении энроф-локса 5% - на 8,9±0,3 сутки. Лечебная эффективность препаратов составила соответственно 83,7 и 76,0%.

Таким образом, комплексный антимикробный препарат диоксинор обладает выраженным терапевтическим эффектом (83,7-87,1%) при респираторных болезнях поросят.

3.3.5.1. Иммунный статус поросят с респираторной патологией н после лечения их диоксинором

Исследования проведены на двух группах больных животных, принадлежавших ОАО Агрофирма "Ливенское мясо" в возрасте 85-100 дней. Животным опытной группы (п = 33) применяли диоксинор в дозе 1мл/10кг массы тела, контрольной (п = 31) - энрофлон 5% в дозе 1мл/10кг массы тела один раз в сутки. Лечение проводили в течение 7 дней. Исследования крови проводили до лечения и на 7 сутки после проведения терапевтических обработок. Определяли бактерицидную, лизоцимную и комплементарную активность сыворотки крови, фагоцитарную активность лейкоцитов, содержание классов иммуноглобулинов А, М и б. Одновременно аналогичные исследования крови проводили у интактных клинически здоровых поросят такого же возраста (п = 28).

При исследовании крови больных поросят до лечения, по сравнению со здоровыми животными, отмечен более низкий уровень большинства показателей неспецифической резистентности. Так, бактерицидная активность сыворотки крови у поросят опытной и контрольной групп была ниже по сравнению с таковой у клинически здоровых соответственно на 9,1 и 8,4%, фагоцитарная активность лейкоцитов на 2,3 и 0,9%, фагоцитарное число на 28,8 и 1,4%, фагоцитарный индекс на 28,6 и 3,7%. Кроме того, у поросят контрольной группы была существенно снижена лизоцимная активность сыворотки крови по сравнению со здоровыми (на 42,2%) и животными опытной группы (на 38,2%), а у последних отмечалось повышение общей гемолитической активности комплемента по сравнению с таковой у клинически здоровых и поросят контрольной группы, соответственно - на 18,4 и 22,8%, что, вероятно, обусловлено повышенной антигенной нагрузкой.

У больных пневмонией поросят отмечен выраженный дефицит гуморального звена иммунитета (рис.2). Об этом свидетельствует наличие у них, по сравнению с клинически здоровыми поросятами, существенно более низких концентраций ^ в в крови на 18,5% (первая группа) и 41,4% (вторая группа) (Р<0,01), что обусловлено низкой интенсивностью вторичного иммунного ответа.

Однако в обоих случаях у больных поросят были выше уровни ^ М в крови соответственно на 59,0 и 31,4%, что отражает повышенную активность первичного гуморального ответа

Наличие у больных поросят более высоких уровней ^Ми низких ^ в является косвенным свидетельством нарушения регуляторной функции Т-клеток, влияющих на антигензависимое переключение В-лимфоцитов при дифференцировке в плазмоциты и на выработку более аффинных антител О-класса.

П Клинически здоровые животные (начало опыта) I Клинически здоровые (конец опыта) И Животные контрольной группы (начало опыта) ЕЗ Животные контрольной группы (после лечения энрофлоком 5%) I Животные опытной группы (начало опыта) □ Животные опытной группы (после лечения диоксинором)

Рис. 2. Содержание классов иммуноглобулинов в сыворотке крови у поросят с респираторной патологией и после лечения их диоксинаром

После проведения курса терапии у животных обеих групп отмечали повышение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови до уровня здоровых животных, что свидетельствовало о выздоровлении.

У поросят после лечения диоксинором отмечено снижение комплементарной активности сыворотки крови, повышение фагоцитарной активности лейкоцитов, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса до уровня значений клинически здоровых животных, что обусловлено компенсаторной реакцией организма.

У животных второй группы уровень комплементарной активности сыворотки крови, показателей фагоцитарной активности лейкоцитов, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса по сравнению с клинически здоровыми поросятами и животными первой группы был выше соответственно на 32,9 и 44,6%, ФАЛ - на 4,5 и 5,0%, ФЧ - на 14,2 и 17,9%, ФИ - на 8,7 и 11,6%, что свидетельствовало о напряженности этой системы неспецифической защиты.

О более выраженной терапевтической эффективности диоксинора свидетельствовали и показатели гуморального иммунитета. У животных после лечения уровень ^ в не изменялся, так же как и у здоровых животных, что обусловлено уменьшением антигенной нагрузки за счет антимикробного действия диоксинора. Напротив, у поросят группы сравнения от-

мечали повышение содержания О в крови на 40,4 % (Р<0,05), что свидетельствует об интенсивном переключении В-клеток при дифференцировке в антителопродуценты, на синтез ^ в (рис 2.).

При общей тенденции снижения уровня ^ А в крови подопытных поросят, в меньшей степени оно наблюдалось у переболевших животных, чем у клинически здорового молодняка, что свидетельствует о повышенной напряженности у них локального иммунитета.

Таким образом, у больных пневмонией поросят иммунный статус характеризуется снижением большинства показателей общей резистентности и гуморального звена иммунитета. Применение комплексного препарата диоксинор сопровождается нормализацией у животных комплементарной, лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, снижением антигенного воздействия на иммунную систему и, соответственно, индукции вторичного (системного) гуморального иммунного ответа.

3.3.5.2. Гематологический и биохимический статус поросят с респираторной патологией и после лечения их диоксинором

Гематологический и биохимический статус изучен на клинически здоровых поросятах и с респираторной патологией 85-100-дневного возраста, принадлежавших ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» до и после применения антибактериальных препаратов диоксинор и энррфлокс 5%.

Общее количество лейкоцитов в крови клинически здоровых поросят 85-дневного возраста находилось на верхнем уровне физиологических параметров (16,28±1,27 109/л), однако в лейкограмме отмечали лимфоцитоз (66,0±2,83) за счет уменьшения количества сегментоядерных нейтрофилов. Отмеченная закономерность прослеживалась и в крови поросят с респираторной патологией на фоне лейкоцитоза (17,96±1,19 109/л).

В крови клинически здоровых поросят количество эритроцитов находилось на нижнем уровне физиологических нормативов (5,54±0,08 1012/л против 5,5-6,5 1012/л - в норме), при этом гемоглобина было ниже на 14,86% и железа в 1,69 раза, что указывало на развитие железодефицитной анемии.

Железодефицитная анемия наблюдалась и у животных с респираторной патологией, однако изменения показателей крови у них были более выражены.

В сыворотке крови как у клинически здоровых, так и у поросят с респираторной патологией отмечали низкий уровень общих липидов (2,48±0,14 и 2,23±0,09 г/л соответственно при норме 3,0-4,0 г/л), что указывает на нарушение липидного обмена.

О нарушении минерального обмена в форме субклинического рахита у поросят обеих групп свидетельствует низкое содержание общего кальция

(2,23±0,02 мМ/л) и повышенный уровень неорганического фосфора (3,12±0,09 мМ/л при норме 1,9-2,4 мМ/л) на фоне высокой активности щелочной фосфатазы (1,8б±0,21 мМ/лхч), причем у поросят с респираторной патологией указанные изменения были более выражены, чем у клинически здоровых.

Активность ферментов трансаминирования у животных обеих групп низкая, при этом высокий уровень в сыворотке крови мочевины (6,25±0,40 и 7,02±0,44 мМ/л при норме 3,0-5,0 мМ/л ) и креатинина, с одной стороны, указывает на повышенную функциональную напряженность печени, с другой стороны, на нарушение функции почек, через которые выводятся продукты азотистого обмена.

Респираторная патология у поросят сопровождалась также интенсификацией процессов пероксидного окисления липидов, о чем свидетельствовал в крови более высокий уровень МДА в 1,25 раза. Повышенное образование активных форм кислорода приводило к явлению субстратной индукции и повышению активности каталазы на 22,3%, глутатионпероксида-зы на 31,3%. Эти изменения можно объяснить развитием воспалительного процесса, сопровождающегося повышенной активностью нейтрофилов и макрофагов, продуцирующих активные формы кислорода, в обезвреживании которых каталаза и пероксидаза играют основную роль. При этом у больных животных возрастал уровень молекул средней массы на 30%, свидетельствующий об эндогенной интоксикации, обусловленной окислительной модификацией белков под действием повышенного образования активных форм кислорода.

Таким образом, выявленные изменения показателей крови и сыворотки крови у поросят в возрасте 85 дней указывают на наличие субклинических признаков рахита, железодефицитной анемии, нарушение углеводного, липидного обмена, нарушение деятельности печени и почек, а также снижение резистентности их организма, причем эти изменения были более выражены у поросят с респираторной патологией.

Применение антимикробных препаратов диоксинор и энрофлон в дозе 1 мл/10 кг благоприятно отразилось на гематологическом и биохимическом статусе больных поросят.

Более выраженные изменения наблюдались в организме поросят, получавших в течение 8 дней диоксинор. На 14 день опыта в их крови увеличился уровень гемоглобина на 12,10 % и железа на 5,49 %, общего белка на 7,75 % (Р<0,001), у-глобулинов на 11,93 % (Р<0,05), общих липидов на 10,38 %, холестерина на 11,57 %, общего кальция на 10,89 % (Р<0,05) и микроэлементов: меди, цинка, марганца на 19,56 %, 28,08 % (Р<0,05) и 12,94 % соответственно. Также снизился уровень креатинина на 19,83 %.

3.3.5.3. Производственное испытание диоксинора при лечении больных пневмонией поросят

Производственные испытания комплексного антибактериального препарата диоксинор проводили в свиноводческом хозяйстве СХА МХП «Николаевское», на 115 больных животных 92-дневного возраста. Препарат назначали в дозе 1 мл на 10 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 7-10 дней до клинического выздоровления. В период проведения опыта за животными вели клиническое наблюдение, учитывали сроки выздоровления, падеж. В начале опыта и после лечения проводили взвешивание поросят.

Выздоровление 100 поросят при назначении диоксинора наступило через 8,1 ± 0,5 дня. Терапевтическая эффективность составила 87,1%. Среднесуточный прирост массы тела клинически здоровых поросят составил 390 г, животных опытной группы - 370 г, поросят, которым препарат не назначался, - 210 г. Фактический ущерб, нанесенный заболеванием, составил 12420 руб.; затраты на проведение ветеринарных мероприятий — 3695,5 руб. Предотвращенный ущерб, исходя из общего поголовья восприимчивых животных, составил 35208 руб.

Экономический эффект и эффективность ветеринарных мероприятий на рубль затрат составили 31512,5 и 8,5 руб. соответственно.

4. ВЫВОДЫ

1. В обследованных крупных специализированных свиноводческих хозяйствах респираторные болезни регистрируются на протяжении всего технологического цикла получения и выращивания животных. У поросят-сосунов в общей заболеваемости респираторная патология составляет 0,40,5%, в период доращивания - 34,5-76,5%, у откормочного поголовья -39,7-71,1%. Из общего количества павших поросят падеж от респираторных болезней на доращивании составил 28,9-89,0%, на откорме - 12,0 -54,0%.

2. Спектр возбудителей респираторных болезней поросят представлен микоплазмами - в 37,8-64,5%, цирковирусом II типа - 44,0-63,6%, вирусом РРСС - 12,0-18,9%, хламидиями - 5,4-12,0%, Pasteurella multocida -46,1-86,7%, Salmonella cholerae suis - 19,2-60,0%, Salmonella thyphimurium - 6,7-33,3%, Streptococcus pneumoniae - 3,3-20,0%, Actinobaciflus pieu-ropneumoniae - 16,7% случаев. В большинстве случаев респираторные болезни обусловлены ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей в различных сочетаниях: вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма -37,1%, цирковирус II типа + микоплазма - 41,2%, вирус РРСС + микоплаз-мы - 28,5%, вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма + хламидии -8,7%. Во всех случаях вирусные инфекции осложняются бактериальной микрофлорой.

Респираторная патология (28,9%) обусловлена ассоциацией бактерий: Pasteurella multocida + Salmonella cholerae suis - 10,0-26,7%, Pasteurella multocida + Streptococcus - 13,3-23,1%, Salmonella cholerae suis + Salmonella thyphimurium - 6,7-26,7%.

3. При серологическом обследовании у больных поросят с респираторным синдромом выявлены антитела к вирусу РРСС в 31,3-52,2% (41,7%) случаев, цирковирусу II типа - 47,4-64,3% (53,9%), микоплазмам -в 26,1-53,3% (36,0%) и пастереллам - 57,1-100,0% (74,1%). У клинически здоровых животных сероконверсия к вирусу РРСС составила 25,0-42,9% (34,0%), цирковирусу II типа - 25,0-35,7% (30,4%), микоплазмам - 20,025,0% (22,5%) и пастереллам - 60,0-100,0% (80,0%), что свидетельствует об их инфицированное™ и/или скрытом переболевании.

4. Острая и подострая бронхопневмонии поросят, обусловленные Streptococcus pneumoniae, Pasteurella multocida, Salmonella cholerae suis, микоплазмами, проявляются общей слабостью, повышением температуры тела на 0,5 - 1,5°С, наличием сухого кашля, серозными и серозно-слизистыми истечениями из носовых отверстий, одышкой, потерей аппетита, отставанием в росте и развитии; снижением показателей неспецифической резистентности организма (бактерицидной на 9,1% и лизоцимНой активности сыворотки крови на 42,2%, фагоцитарной активности лейкоцитов на 2,3 %), концентрации Ig G в крови на 18,5% и увеличением уровня Ig М на 59,0%.

5. При вскрытии павших и вынужденно-убитых поросят респираторная патология в большинстве случаев характеризуется катаральным воспалением слизистой оболочки трахеи и бронхов, отечностью и гиперемией паренхимы легких, лобулярным катаральным и катарально-гнойным воспалением легочной ткани, увеличением средостенных и бронхиальных лимфатических узлов и в отдельных случаях наличием очагов некроза в легких, фибринозным воспалением плевры.

6. Новый комплексный препарат диоксинор, состоящий из норфлок-сацина и диоксидина в соотношении 5:1, является малотоксичным средством (4 класс токсичности), обладает выраженным антимикробным действием в отношении бактериальных возбудителей респираторных болезней свиней.

7. Бактериостатическая концентрация препарата для культур эшери-хий составляет 0,24 - 0,96 мкг/мл, сальмонелл - 0,48 - 1,92 мкг/мл, пасте-релл - 0,96 мкг/мл, бордетелл - 0,48 мкг/мл, стафилококков и стрептококков 1,92 мкг/мл и для псевдомонад 62,5 мкг/мл.

Бактерицидное действие диоксинора в отношении указанных культур микроорганизмов проявляется в концентрациях, в 2 раза превышающих бактериостатические.

8. Диоксинор обладает выраженным терапевтическим эффектом при экспериментальных пастереллезной и сальмонеллезной инфекциях белых

мышей в 95%, стафилококковой инфекции - 85 % случаев при 100% гибели животных в контроле. Улучшение общего состояния белых мышей в процессе лечения наблюдается на 3-5 день, а полное клиническое выздоровление наступает на 7-8 сутки.

9. Диоксинор является эффективным химиотерапсвтическим средством при респираторных болезнях свиней, вызываемых потенциальными бактериальными возбудителями. Применение его при бронхопневмониях поросят обеспечивает выздоровление животных в 83,7-87,1% случаев на 78 сутки лечения, сопровождающееся улучшением общего состояния животных, нормализацией температуры тела, увеличением содержания в крови гемоглобина на 12,1%, железа на 5,5%, общего белка на 7,8%, гамма-глобулинов на 11,9%, общих липидов на 10,4%, холестерина на 11,6%, общего кальция на 10,9%, меди на 19,6%, цинка на 28,1%, марганца на 12,9%; снижением комплементарной активности сыворотки крови на 13,3%, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов на 7,9%; концентрации й в крови на 40,5% и снижением уровня ^ А на 13,8%.

10. Экономическая эффективность при применении диоксинора с лечебной целью при респираторных болезнях поросят составляет 8,5 рубля на 1 рубль затрат.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Препарат диоксинор применять в соответствии с инструкцией по его применению: при респираторных болезнях поросят внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг массы тела один раз в сутки в течение 7-10 дней.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шахов А.Г Антимикробная активность диоксинора / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин, P.A. Востроилова, М.Г. Петрова // Первый съезд ветеринарных фармакологов России: Материалы съезда (Воронеж 21-23июля 2007 г.). - Воронеж, 2007. - С. 661-663.

2. Шахов А.Г. Лечебная эффективность диоксинора при респираторной патологии поросят / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин, Г.А. Востроилова, М.И. Лебедев, М.Г. Петрова // Первый съезд ветеринарных фармакологов России: Материалы съезда (Воронеж 21-23иголя 2007 г.). -Воронеж, 2007. - С. 663-667.

3. Никулин А.И. Экономическая эффективность применения антибактериального препарата диоксинор для лечения респираторной патологии свиней / А.И. Никулин // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Международная научно-практическая конференция: Материалы конференции (Воронеж 17-19 сентября 2008 г.). - Воронеж, 2008.-С.194-197.

*4. Шахов А.Г. Этиология респираторных болезней поросят в промышленных свиноводческих хозяйствах и меры их профилактики / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, С.И. Першина, Ю.Н. Бригадиров, В.И. Шушлебин, А.И. Никулин, C.B. Сычев, A.C. Стребков // Свиноводство. - 2008.-№5. - С. 26-28.

*5. Шахов А.Г. Специфическая профилактика респираторных болезней свиней бактериальной этиологии / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, А.И. Никулин // Ветеринарная практика. - 2008.-№3 (42). - С. 5255.

6. Сашнина Л.Ю. Иммунный статус поросят при респираторной патологии и после лечения их диоксинором / Л.Ю. Сашнина, Ю.Н. Масьянов, А.И. Никулин, М.И. Лебедев // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Международная научно-практическая конференция: Материалы конференции (Воронеж 17-19 сентября 2008 г.). - Воронеж, 2008. - С. 233-236.

*- издания из Перечня ведущих рецензируемых научных журналов и изданий ВАК РФ

Подписано в печать 23.02.2009 г. Формат бОхБО'/^ Бумага ки.-журн.

П.л. 1,0. Гарнитура Тайме. Тираж 100 экз. Заказ № 387 Типография ФГОУ ВПО ВГАУ 394087, Воронеж, уя. Мичурина, 1

Актуальность. Одной из острых проблем крупных свиноводческих хозяйств являются респираторные болезни. Они широко распространены практически во всех странах мира с развитым свиноводстом, занимают одно из ведущих мест в патологии свиней и наносят большой экономический ущерб (Р.Г. Хунн, 1970; Й.Гаммельгор, 1985; П. Щербаков, с соавт., 2002; И.В. Волков, 2004; А.Г. Шахов, 2005; Б.Г. Орлянкин, 2006; А.И. Ануфриев, с соавт., 2007; Т.С. Кузнецова, с соавт., 2008).

Анализ структуры заболеваемости свиней за последние несколько лет показал, что основной ущерб свиноводству наносят так называемые факторные инфекции, поражающие преимущественно молодняк и проявляющиеся клинически желудочно-кишечным и респираторным синдромом, характеризующимся кашлем, одышкой, лихорадкой, потерей аппетита, снижением усвояемости кормов и, как следствие, замедлением роста массы тела и высокой летальностью (Х.З. Гаффаров, с соавт., 2003; И.В. Волков, 2004; B.C. Русале-ев, с соавт., 2006; С. А. Кукушкин, с соавт., 2007).

Респираторные заболевания у свиней проявляются на стадиях доращи-вания и откорма, однако возраст животных, у которых они возникают, сильно варьирует. Специалисты США считают, что этому заболеванию свиньи подвергаются в возрасте от 14 до 20 недель жизни, а в странах Европы - на этапе их доращивания (8-10 недель) или на раннем этапе откорма (10-15 недель). В России заболевания поросят с респираторным симптомокомплексом проявляются с 35-дневного возраста (И.В. Волков, 2004).

На инфекционные болезни поросят приходится 72,5% неблагополучных пунктов, 88,7% заболевших и 85,1% павших животных (A.M. Рахманов, с соавт., 2002).

Удельный вес бронхопневмоний занимает 35-40% от общей заболеваемости поросят (Б.Г. Талер, с соавт., 2001). А на долю факторноинфекционных болезней приходится 74,1% от числа всех заболевших животных (Л.Я. Романова, с соавт., 2005).

За последние 5-6 лет респираторная патология свиней заняла одно из первых мест среди болезней, наносящих значительный материальный ущерб. Потери от них обусловливаются высокой заболеваемостью поросят (от 30 до 90%), гибелью заболевших (до 60% и выше), вынужденным убоем (от 10 до 90%), отставанием в росте, значительным увеличением кормодней, применением различных профилактических и лечебных препаратов (Т.С.Кузнецова, с соавт., 2008).

По данным Б. Г. Орлянкина, с соавт. (2005) в различных хозяйствах заболеваемость респираторными болезнями составляет 30-70 %, а летальность может достигать 40 %. Наибольший отход регистрируют у поросят 60-90-дневного возраста.

Степень распространения респираторных болезней и тяжесть течения инфекционного процесса зависят от численности свиней в хозяйстве, скученности их в помещениях, качества кормления и состояния микроклимата. Возбудителями инфекционных респираторных болезней свиней являются вирусы, микоплазмы и бактерии.

Широкое распространение инфекции получили при переводе свиноводства на промышленную основу. Это связано, прежде всего, с интенсификацией животноводства, при которой резко возросло содержание на ограниченных площадях животных разновозрастных групп, их постоянное перемещение из одной технологической группы в другую и неизбежное при этом формирование новых групп, неоднородных как по возрасту, так и по микробному пейзажу и иммунному статусу; ранний отъем поросят, безвыгульное их содержание, отсутствие естественного и искусственного ультрафиолетового облучения, однообразный концентратный тип кормления, несбалансированный по питательным биологически активным веществам; короткие санитарные разрывы в эксплуатации помещений; нарушение правил карантинирования при ввозе племенных свиней; невыполнение планов профилактических обработок и других противоэпизоотических мероприятий (Й.Гаммельгор, 1985; В. Lawhorn, 1998; Б.Г. Орлянкин, 2006; B.C. Русалеев, с соавт., 2006; А.Н.Гречухин, 2006; А.И. Ануфриев, с соавт., 2007). По мнению П.Н. Корикова (1974), в возникновении пневмонии участвуют два фактора: снижение резистентности организма под действием неблагоприятных факторов внутренней среды и внедрение сим-бионтной микрофлоры в паренхиму легких восприимчивого животного, и уже эта микрофлора непосредственно участвует в развитии пневмонии.

Предрасполагающими факторами снижения резистентности организма к заболеванию являются: алиментарные нарушения, применение больших доз антибиотиков, кортикостероидов и других иммунодепрессантов (О.В. Бароян, с соавт., 1980; Б.Ф. Новиков, 1980), нарушение параметров микроклимата в помещениях (резкие колебания температуры, повышенная влажность, сквозняки) (A.M. Семениченко, с соавт., 1997).

Появлению и распространению респираторных заболеваний свиней по данным Т.С. Кузнецовой с соавт. (2007), способствовали: интенсивный импорт племенных животных, являющихся носителями циркорвируса свиней тип-2 и вируса репродуктивно-респираторного синдрома; использование гибридов с высокой интенсивностью роста, в результате чего происходит отставание развития органов и систем, обеспечивающих жизнеспособность животных; применение для кормления различных биологически активных добавок, которые способствуют усилению роста массы тела свиней, но и воздействуют на печень и почки; нарушение ветеринарно-технологических норм и параметров; использование кормов, содержащих микотоксины, которые поражают внутренние органы и различные системы организма.

Все выше перечисленное следует рассматривать как стресс-факторы, присущие в разной степени всем свиноводческим хозяйствам, которые приводят к снижению уровня естественной резистентности организма и высокой их восприимчивости к патогенной и потенциально патогенной микрофлоре, постоянно персистирующей в организме животных и окружающей среде (В.В. Палунина, 2004; А.И. Ануфриев, с соавт., 2007; В.В. Палунина, с со-авт., 2007).

В связи с широким распространением респираторных болезней свиней учеными НИУ и ВУЗов разработаны средства профилактики (вакцины, сыворотки, иммуноглобулины и др.) и терапии (антибиотики, сульфаниламиды и другие антимикробные препараты, патогенетические и симптоматические средства).

Однако, несмотря на большое количество проведенных исследований, вопросы дальнейшего изучения этиологии респираторных болезней свиней в крупных промышленных хозяйствах и разработки эффективных средств и методов их профилактики и терапии остаются весьма актуальными.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение этиологии респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР и разработка комплексного антимикробного препарата для терапии больных поросят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторным болезням свиней в трех крупных специализированных хозяйствах Воронежской, Липецкой и Орловской областей.

2. Провести бактериологические, серологические и молекулярно-генетические исследования патологического материала от больных пневмонией свиней для определения этиологической структуры респираторных болезней свиней.

3. Изучить in vitro и in vivo на моделях бактериальных инфекций белых мышей антимикробные свойства комплексного препарата диоксинор.

4. Изучить лечебную и экономическую эффективность диоксинора при респираторных болезнях свиней.

Исследования проведены в 2005 - 2008 годы в соответствии с государственными темами ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии 08.04.01.02. «Изучить этиологическую структуру желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят в крупных животноводческих хозяйствах с применением современных методов исследований» и 08.04.01.05 «Разработать новый эффективный препарат диоксинор для лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных».

Научная новизна. Впервые в возрастном аспекте изучены заболеваемость поросят респираторными болезнями в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР, их этиологическая структура, антимикробные свойства нового комплексного препарата диоксинор, его лечебная и экономическая эффективность.

Практическая значимость и внедрение. Полученные результаты свидетельствуют о сложной эпизоотической ситуации и этиологической структуре массовых респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах. Для терапии больных животных разработан новый высокоэффективный комплексный препарат диоксинор с широким спектром антимикробного действия, обладающий выраженными лечебными свойствами. Полученные результаты вошли в разработанную и утвержденную нормативно-техническую документацию на препарат диоксинор-АФ (СТО 10590965-0002-2006) и инструкцию, утвержденную заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за Ж1ВР-2-1.7/01921 от 18.04.2007г.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», протокол №2 от 01.02.2007 года; первом съезде ветеринарных фармакологов России, Воронеж 21-23 июня 2007 года; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» 17-19 сентября 2008 года, г. Воронеж.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Эпизоотическая ситуация и этиологическая структура респираторных болезней свиней в крупных свиноводческих хозяйствах.

2. Антимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диоксинор при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

5. ВЫВОДЫ

1. В обследованных крупных специализированных свиноводческих хозяйствах респираторные болезни регистрируются на протяжении всего технологического цикла получения и выращивания животных. У поросят-сосунов в общей заболеваемости респираторная патология составляет 0,4-0,5%, в период доращивания - 34,5-76,5%, у откормочного поголовья - 39,7-71,1%. Из общего количества павших поросят падеж от респираторных болезней на дора-щивании составил 28,9-89,0%, на откорме —12,0 — 54,0%.

2. Спектр возбудителей респираторных болезней поросят представлен микоплазмами - в 37,8-64,5%, цирковирусом II типа - 44,0-63,6%, вирусом РРСС - 12,0-18,9%, хламидиями - 5,4-12,0%, Pasteurella multocida - 46,186,7%, Salmonella cholerae suis - 19,2-60,0%, Salmonella thyphimurium - 6,733,3%, Streptococcus pneumoniae — 3,3-20,0%, Actinobacillus pleuropneumoniae — 16,7% случаев. В большинстве случаев респираторные болезни обусловлены ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей в различных сочетаниях: вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма - 37,1%, цирковирус II типа + микоплазма - 41,2%, вирус РРСС + микоплазмы - 28,5%, вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма + хламидии - 8,7%. Во всех случаях вирусные инфекции осложняются бактериальной микрофлорой.

Респираторная патология в 28,9% случаев обусловлена ассоциацией бактерий: Pasteurella multocida + Salmonella cholerae suis - 10,0-26,7%, Pasteurella multocida + Streptococcus - 13,3-23,1%, Salmonella cholerae suis + Salmonella thyphimurium - 6,7-26,7% .

3. При серологическом обследовании у больных поросят с респираторным синдромом выявлены антитела к вирусу РРСС в 31,3-52,2% (41,7%) случаев, цирковирусу II типа - 47,4-64,3% (53,9%), микоплазмам - в 26,1-53,3% (36,0%) и пастереллам - 57,1-100,0% (74,1%). У клинически здоровых животных сероконверсия к вирусу РРСС составила 25,0-42,9% (34,0%), цирковирусу

II типа - 25,0-35,7% (30,4%), микоплазмам - 20,0-25,0% (22,5%) и пастереллам - 60,0-100,0% (80,0%), что свидетельствует об их инфицированности и/или скрытом переболевании.

4. Острая и подострая бронхопневмонии поросят, обусловленные Streptococcus pneumoniae, Pasteurella multocida, Salmonella cholerae suis, микоплазмами, проявляются общей слабостью, повышением температуры тела на 0,5 — 1,5°С, наличием сухого кашля, серозными и серозно-слизистыми истечениями из носовых отверстий, одышкой, потерей аппетита, отставанием в росте и развитии; снижением показателей неспецифической резистентности организма (бактерицидной на 9,1% и лизоцимной активности сыворотки крови на 42,2%, фагоцитарной активности лейкоцитов на 2,3 %), концентрации Ig G в крови на 18,5% и увеличением уровня Ig М на 59,0%.

5. При вскрытии павших и вынужденно-убитых поросят респираторная патология в большинстве случаев характеризуется катаральным воспалением слизистой оболочки трахеи и бронхов, отечностью и гиперемией паренхимы легких, лобулярным катаральным и катарально-гнойным воспалением легочной ткани, увеличением средостенных и бронхиальных лимфатических узлов и в отдельных случаях наличием очагов некроза в легких, фибринозным воспалением плевры.

6. Новый комплексный препарат диоксинор, состоящий из норфлоксацина и диоксидина в соотношении 5:1, является малотоксичным средством (4 класс токсичности), обладает выраженным антимикробным действием в отношении бактериальных возбудителей респираторных болезней свиней.

7. Бактериостатическая концентрация препарата для культур эшерихий составляет 0,24 - 0,96 мкг/мл, сальмонелл - 0,48 - 1,92 мкг/мл, пастерелл -0,96 мкг/мл, бордетелл - 0,48 мкг/мл, стафилококков и стрептококков 1,92 мкг/мл и для псевдомонад 62,5 мкг/мл.

Бактерицидное действие диоксинора в отношении указанных культур микроорганизмов проявляется в концентрациях, в 2 раза превышающих бакте-риостатические.

8. Диоксинор обладает выраженным терапевтическим эффектом при экспериментальных пастереллезной и сальмонеллезной инфекциях белых мышей в 95%, стафилококковой инфекции - 85 % случаев при 100% гибели животных в контроле. Улучшение общего состояния белых мышей в процессе лечения наблюдается на 3-5 день, а полное клиническое выздоровление наступает на 7-8 сутки.

9. Диоксинор является эффективным химиотерапевтическим средством при респираторных болезнях свиней, вызываемых потенциальными бактериальными возбудителями. Применение его при бронхопневмониях поросят обеспечивает выздоровление животных в 83,7-87,1% случаев на 7-8 сутки лечения, сопровождающееся улучшением общего состояния животных, нормализацией температуры тела, увеличением содержания в крови гемоглобина на 12,1%, железа на 5,5%, общего белка на 7,8%, гамма-глобулинов на 11,9%, общих липидов на 10,4%, холестерина на 11,6%, общего кальция на 10,9%, меди на 19,6%, цинка на 28,1%, марганца на 12,9%; снижением комплементарной активности сыворотки крови на 13,3%, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов на 7,9%; концентрации Ig G в крови на 40,5% и снижением уровня Ig А на 13,8%.

10. Экономическая эффективность при применении диоксинора с лечебной целью при респираторных болезнях поросят составляет 8,5 рубля на 1 рубль затрат.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Препарат диоксинор применять в соответствии с инструкцией по его применению: при респираторных болезнях поросят внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг массы тела один раз в сутки в течение 7-10 дней.