Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Разработка средств и методов экспресс-диагностики вирусных инфекций

пв од

• 7 ФЕЗ Г

УЗБЕКСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН Узбекский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт ветеринарии им. К. И. Скрябина

На правах рукописи УДК 619:616. 98:578. 835. 1Я

БАЗАРОВ Мурат Ахмаджанович

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ЭКСПРЕСС — ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Самарканд—1994 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных и Среднеазиатском ящурном институте

Научный консультант доктор ветеринарных

наук, профессор МИЩЕНКО В. А.

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор Ахтамов М. А.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Парманов М. П.

3. Доктор ветеринарных лаук Салимов X. С.

Ведущая организации: Казахский научно исследовательский ветеринарный институт

Защита состоится « ЛУ » 1995 г. в '/

час. на заседании спеаиалнзироаашюго совета Д 020.37.21 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора на-" ук при Узбекском научно-исследовательском институте ветеринарии им. академика К. И. Скрябина (704453, Самаркандская область, пос. Таилик, УэНИИВ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института

Автореферат разослан > ииё1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор ветеринарных наук^

профессор —

ПУЛАТОВ Г. С.

I. QC"in гзрзатерлстпп работы

Актуальность с~гпы пз oretorrasc факторов сохранезгл псголоаья солъсг.ехозлйстЕсптз ааготнна является своевременноо г сачсгтхшяоо прозэдеяао rosopaopaaz коропряягпа. каптпллен-сг на аредулраггспго поггсхасвонгя а борьбу с различт?" забо-г.сгаввсня птотнаа. Baiao2 проблеме.! з борьбо с гяфо бол «гага яалязтел разработка гамоаочузэтвигельшп: ;*:;с~г. тодез» дозгаляязп: а краггайааэ сроет кетагь л цг^ага^-лгрэ-глть габолэгдпая. Свосврзкеааая заетп-зз-д^гноста-

гтгг/ивпеашх болсзнеЛ гаазотааа язляотся гаг:?™-'; ; глохло^ пу-ацт-оотз з взрзз-сс« отагзе С^тзагагадоть яроззд-зая црсфсаскябЗЕз: изгеззааяй гага-trtir о? спороотз а точности <г:язгешЕ1 парусов, гэбояо-

ГЗЧГ.Э ЛЛПОТД*.:^

3 пасгод~зз для даагаостагз.рядз гз.Со-

лпаааабаптзраальзод л ЕлрусасЗ ггтлогггг асаолъоугс

рпглаззаз ирпЕта реащпа сасссзяоЗ (ТШ.),

саязазаяая хсогзлсгонга (РСК), 'ез^зо^УОг--™ изтод йтпэ-

].осанр;.гзалл алтатал (''"А) л другаз»

Иазз^лзся ссрологгосгаго гятода лог.-.:." .. т. : ;. • еггзгзат л с си трабогаадсл EorapasapasJ практика, ma гл.: -гродалаатсльны а ледостаточао чувоггагеда'.-.:.

Лраззля вадэуказанаоо зо Езггдзяо» .".'..ат-

аке о пасбаодг-гостя разработка ускорение с:-тру., л::,-;

згруссз и еггатоя к hjtj. Era мзтодз доллза отмтл:, слс-д^дли трсбогашкг; простота воотан'озкп, гызоаая чузегзаъ олыхостз» сло~ алгачнасгъ, яадзаностг. а аосдроазводлиозгъ рззульта-

тез, возгаглоегь шиучэшм окончательного результата та позапоо чем чзрзз £0-60 иазут. зосло востуадзиаа алторгала па аоеледо-Езшге,

Паяь а задачи псоледов.зкпЗ. Цолпэ ясслодоааьиЗ являлась разработка сродстгз а мэтодоз эксирйсс-даагаосглкп вирусных ш-фоадай (ящура, везакуллрноЗ бзлэзпа свиясЗ (BEJ); ввзшеуляркой экзантаиа сванеЗ (BSC); чуан крупного рогатого скота (ЧКРС); везикулярного стюагпта (ВС); болезнп Ауоски (BIA); африканской' чумы лошадей (АЧЛ); ослы озец). В связи с этим была поставлены следующие задача:

- разработать ывтода получения диагностических антпгзнов;

- разработать ьзтоды получения даагностачэсках сывороток;

- разработать катода выделения препаратов антител;

- усоБвргсясгвозагь дзя даагностака вгрусних ннфекюй аи-муцо^.ерыватшгЗ пагод (iiJA). ускоренный оауво^ерыонтныа аетод (УИ5А), ызтод эрятротглунноЗ адсорбция' Coli), ывтод флюоресцентных зондов (§3);

- кзучэтъ в сравнительном аспекте диагностическую ценность смунохашческих реакцаЗ ара выявлении вирусов а антител i;

- усовершенствовать ыатода подготовка проб Свода, зерко-продуктн} для даагност'-песвкх псследовашй.

Дагчкзя новдзна работы. Создано научное яаараяленаэ в сб-< ласти биотехнология по аолученаа п контроля даагностихумоз, пригодных дгя эгспрасо-даагностгкн п цдэаифасадии вирусов ядура, ЯЕС, ВЭЗ, £5, бохазяЕ ¿уеска, осяа озац, qyia лРС а ЛИ.

'Разработаны а уооверденотвозаны:

- цатода получения инакгивироваянтп« универсальных ангаго-нсз вирусов ядура, EEC, ВЗС, болеанл Ayeosz, А.Ч1;

- «этоды получение диагностачесгзх сывороток;

- ыетоды получения антител дза коаьагадиа as фзриантаыа, арагроцгтаыи, солишрщши сфораиа, сенсибилизации твердей фазы;

- вариант твердофазного тшуноферцадгного ыетода о коньзсгц-гсш вирусслвци$ичвскпг антител пароЕсядазоД хреш, щелочной фосфатазо2,^3-,Д-гадактозидазо2» с хршо- и флюорогешши субстратами;

- вариант ишунофериэнтного анализа, позволяэдй в полевых условиях за 30-40 щнут обнаружить вирусспвцгфпческдЗ белок;

- метод определения влрусов и антитал к ш, основанный на шюльзоьанаи фгоорэсцонтннг зондов ДЗД и ДД-б раннах этапов взааи одаЗсткая мру сов с клетками и возводящий проведать вдентЕ^агадиз возбудителя в точенкэ 35-60 иинут.

Изучена даагаостичгзвая ценность разработанных иэтодаз. Новизна подученных катердалов подтверждена авторскими свидетельствам:

- авторское свидетельство СССР Л 310588 "Способ получения гшериымунных сиворсток sa овцах; .ti

- авторское свидетельство СССР М I647S68 "Способ дрлученка гшсга-гдобуданоэ";

- авторское свидетельство СССР & 1730596 "Способ нроведа-

- 4 -

пня аыуноферызнтного анализа

- авторскоэ свидетельство СССР £ 285191 "ЭрятроищуашЗ гвалгз для олрадалешш антигенов вируса язура";

- авторское свидетельство СССР J» I6I59I7 пАдьювадтп|

- авторское свидетельство СССР & 316676 "Способ слдакацти вирусов в дискретном матер шла";

- авторекоо сввдзтельство СССР Л 2SI529 "Способ ввдзлзшш пгрусоз 3 водэ"г

- авторскоэ свидетельство СССР Л 2760S3 "Способ евдихздеп згрусоз";

- полозптэльноэ ретенкэ ЕНЙЙШЭ по заявке ß 4Б7С530 "Раствор для твердофазнкд ш£.!уно:имячесгах реавдтй"«

- тыгогсгольное роззниэ ШШШЭ по заязкэ й 50*35519-14 "Способ получения ГЕйрпьиунншс сшюротс:: крозл на кролнках к EïTjycy болазет Ауескх".

Dpa ктечз екая значилосгь. Усоворпестзоваеа гегпояогая изготовления Я КОТОДЫ контроля ДИаГНОСГЭТОЭТСК OEBOpOTOír И aНТП-гоиоа, дригодикх для вшвленпл вирусов яздра, ЕБС, ВЗС, ВС» чу-isi КРС, осш овец, боложп Ауескп. А41 в '/.П, УК>А» Э'.'А, ФЗ.

Ыода$2цлроваЕЫ lííA и 3IA, что позволило сократить врз:/л анализа проÚ до 20 ¡.ещуг.

Разработаны способы получения внсоксаетизпх: гаи/д-глобули-Еов к на пх осЕово сшйозеровзнн сцецифа-чоекгэ KCHSciaiH, oosbo-дцзкц19 псшоить ЧуВСТВЗТОЛЬПОСГЬ mcjjhoxnctsscigk ролкгщД.

Оскогнцэ подояанЕя:. дынеоониыо на sajgrg;

Технология изготовления и катоды контроля догносгетедкшс актггеиоз s снзоротса.

Долучешш ГЕперпьо^уннах спворотск крови на корсстх свенкзг» гфоликах, овцах и взделенпе гакыа-глобулЕШ, пригодного д-тя спэ-циркчоспой экспресс-диагностики.

Методы (У1йА, Sil, ¡53) ускоренной диагностики вирусных иы-фогахгл (яздра, ВБС, ЗЭС, ВС, чуш КРС, оспы овец, болезни Ауес-zz, АЧЛ).

Апробация работы. Материала диссертации доложены и обсуждены гл:

- ВсосоизноЗ. научно" ионферзпщш по ветеринарной вирусология в IS87 г. - Влздшпр;

- Всесоюзной научной конференции по вогеришрпсЗ вярусало-

Г2Н б J983 г. - Владимир;

' - Сеианарэ 4ДНХ СССР "Доотгаания шуга и практики в борьба о болвзняаз сальагогозяЯстввнных зевотных" в 1989 г. - Москва?

- Саишаре сиедаалнстсв отран члаасз СЗВ "Разработка и но-аользопанта адажантса доя биотвхнологнчэскех долей" в I9SO г; - Ваадамнр;

BcecczsHoS коЕфорэЕщш "Совреыешнэ пробдвш тиунологгз, баотехЕологш, тонной с нлетсчноЗ иттпнараи в ветеринарной ыада-цяна" г 1990 г. - ¡teffií Новгорода

- Бооооззной козферешпш "Совершэкствованжз годов Госконтроля вотаршаряш: црааарагов" в 1ЭЭ1 г. - Москва;

- Ыесдувародаой гонфвршцвг "К воааЗ страхагсн борьбы о /ззуроа в IS2I г. - Даадваад

- Уче&са Соеого ШИШ IS88-IS9I гг. ¡

- 7чш&! Совете Срвдааазиатсгого ящурного Еаотстута IS8&-IS93 гг. а

- Еаучно-гохшлесгац Совета Главного уаравгедзя вэгергшряа 2-CZ а 5? Республик: Тадшщотая э 1993 г. .- йташбе.

Публикация разудьтатсз гсслвцозакая. До шгордгалм дассер-гащпг ояуйлашваяо 37 статей, получено 8 авторе юн сэидательств в два полоапеяьннх решения, пять норштивно-технэтескюс документов бэ гзмховддшиз. контроль 2 щшызкениэ даагностзкуыов, кз нах да утвержденные Главшш управлением ветерлнариа (1УВ) Гоо-агропроса СССР z три нормативно-тахническах документа на изготовление, контроль и црдаененле дгагностшсуков, утворхданаш Ш UCX а ЗР Республика Таджикистан.

Объем е структура работы. Работа язложзда на 209 страницах каашнсашся, содержи S3 таблицы z аклвчает сдещхцио разделы: обдая харакгаргстаяа работа, обзор литературы, мат ерзали е метода га следований, результаты Еоследовашй, внвода в прикхЕчасхио продзогашз.

2. Eaeepiam и методы юз следования

Работа штоядвта во йсероссяЗскоы научно-исследовательской кнстЕтуте задаты гашотнш. в лаборатории вшдакадяи а Среднеазиатском ецуркоы Еасгатута в лабораторян даагаеояаи.

В цроведвшг экспершенжальша расе? гепользовалк:

вируок (плашн):

- о -

- одура ( Oj а 194, Oj В 1618, А^ & 550, 15, A?, Ард, Agg»

АЛ717, GJ5S4, Авия-I JS 48, Азия-I JS 938, эпизоотические шгаькн Среднеазиатского рогпoía, адаптированные в завлсиш>стя от цоля опытов к различны* систагаы культ ивир о гания:

- вззикулярноЭ болезни свиной (ВВС, 0-72, Т-75);

- везикулярной экзантоиы свиней (БЭС, Д-43, С-72);

- болезни Ауеснш - maici УЕИИЗВ -163;

' - везикулярного стшатита (Индиана и Еыьйюрсл), адаитиро-панного к кулг^раг! клетоз;

- аттенуироваиного вируса чумы крупного рогатого скота;

- аттенуированного вируса африканской чуш дошадзп;

- оспы овец.

2ивотпыз:

- крупннЗ рогатнй сетт, шссой 2)0-400 кг| ою.ц -- raccoä 35-40 кг; свиной гассоЗ 20-60 кг; лотдеЗ ьнсссЗ 350-100 кг| ослов шссой 200-250 кг; столиков шссоЗ 2-2,5 tcr; морских сви-ECi шссоЗ 400-450 г; башх 'uaccoä 18-29 г*

Культуры клеток:

- первичзо-тридспкпзирозаынуа ыоаослоЗнуэ культур/ клото» почек телят (ИГ), свиной почки (СЕ), шчки ягнят (ПЯ);

- перевиваемые линии культур клеток евино:"! дочки

почки сибирского горного козерога (ЕСГК-30), почки, зеленой'щр-тклки (Не¿а), почте: новорожденного сирийского хомячка СШК-21)г почки зкбрлош свиней (Ш23)«

Диагностические антигены вирусов, не содзр^агукз лплпда, получали по способу, цредлоиеннопу Шщзнко В.А., Ыихайлизяшл! В.З., Улуповим H.A., который заключался в очисткз полизтЕяенямиису, хдоророриш и полиакриловой кислотой. Вирус концентрировали осагданши долиэтиленгликолзм (ы.в; 6С00) и фильтровали через ткань Петрлноьа. Инактивации вируса проводили агтнэтплэтатошзях-ком. Этот способ позволял получать диагностические антигены вы- . сокой актввностн я болов бистро, чем другие извзстше мзтода.

Иымуннш сыворотки получали кшерилмуяизадиоа шроте: свинок, кроликов и овец. Иммунизации проводили по носкольким -схемой, в зависимости от вида животного и свойства вируса.: Антигеном для ишунлзации слугшш лалинизировашшо z культуральннэ вирусы, как правило, пооло очистки, концентрирования и зкактпва- . ции. 'Кроме того, испытывали адыованги отечественного! произвол-

ства на основе минеральных и синтетических шсел.

Серологические нот ода: реакцию связывания комплемента (РСК). реакции дв^узноннсй преципитации (РДД), реакции пассивной гем-агглэтинации (РИГА), метод флюоресцентных антител (LIM), реакции нейтрализации (РЕ) ставили со ойцапр&знш! ыетэдикаи.

Балов определяла в испытуемых растворах по ыетоду Лоури и соавг. ÍIS5I) ила спектрофотоыетрироваяззц. Для этого измеряли сзетопоглоиенио раствора белка при длине волны 2SO ни. Расчет концентрации белка производили со формуле:

С 2260(С)'Д где С - искомая концентрация белка в %;

Eg^di?) ^^(С) - светопсглодашэ определяемой

фракции при 280 ни;

S^Uí) - сазтсаоглоцэшга 1£-ного раствор бычьего сывороточного альбумина при д^ине водны 2£G ни; с - разЕодэЕио каторзада.

7чет результат02 метода фпюрвсцентныг зондоз прозоднпн о noKoajba фазоресцентного шкроскопа И-2 с фотоиетрзческоЗ насадхоЭ Ш321-1. Оптическую плотность растворов в лунках панелей определяли ш автоиатичесаоы адсорбциомэтре МБ - 7С0 фарыы наток" (США), флюоресценцию a лучших измеряет на ыикрофлюоритт-ра фярцн "Дайнатек" (СЩ).

Работу проводили совместно о сотрудниками ЕНИИЗХ, ВД^Уицеа-ко, АЛДудкиковки, Н.С.Майковым, Д.Б.Сиирновкы, Т.К,Конюакяно2, Е«В.Новосыово£, Э.КДтабвыа, М.Г.Костюченко. Л.Н.лорнионко, S.U. Бабаронко; Института биооргакической хасии ВД.Лзваленко; L27 А.Г.Одинец; Института бзохтошт вы. А.Н.База, АЛ.Савищиш.

. 3. Результаты иссгедованиЗ

3;Г; Рагработиа методов получения <wt гное тдчв czar антиген ob.

Дзагностичзснга езуягснн получает отастксЛ и концентрированием вирусе одер гацих суспемзиЗ из ткаяай заражаннкг хизотннх или культур meros. Очистку и ¡концентрированна вирусов, нэшскзих липидауа оболочзд BSC, BSC) проводили по ьгэтсду описанно-

му в "¿Латериалах г методиках", а вирусов с липидшй оболочкой (болезнь Ауаскг, ЧКРС, осла овец), тагам да способом, но исключали стадии очистки и концентрирования с нсаааъзовшвем ливж-дорастасрзгггзп: вецеств ímnpxiep хлороформ, метадонхяордд). В

- с -

результата цровадонноЛ рабогн батл получены Бизокоактиэныэ актл-ге'щ, дрлгодпкз для 'гсаользовандя в качество д'йглэстяЕуьтов, а тагам д/л получения глпаргаиуннис сшюроток л дат Сбясибхжй-ц;~ яалслеЛ нрл Еитг-тэ:1;:г алтлтзл в лмтунохнадчссккх: реакцллд.

Так-лл образен, б результате проведению: наследован^ усга-позлено, ~?о удалось разраззтлгь :,:зтод получения универсальны: антдгозсз, дрлголшх дтя полользованзя во шопа пи?упо.-гг.:тчзс-1ггг розщняг.. Универсальная технология изгогевтгг.лнл лозюляо? дспользогать аятпгопы для гкмушгзацдд доноров о цэл;.;: лолучо-ся сизороге::.

3.2, Разработка мотодгаз аолучонга датюс?:лс'с:"г. антптэл.

Нз чугстзлтальлоотъ сазяохздэтескзх иегодоз гкзвз? рззлот->?•■■> ¿-актора, одыы ;:з когорызс язляотся спсдг.Х1гчасосз алтлтол. Л::т:п?:гссть шрусетегБфячзсгсг: сцвороток згяззст ст с;се:а и кого-д:- :: доноров, используемого адызвакга, вдда доноров»

а-.тзотга л колдчзства вводного антягена.

3.2.1. Отработка схож получолхя вя^у сслогсг'-нчстхн огшоротйк х:я морских свинке:.

Традиционная с:со:са колучсаая сгзороток цродуалтрлвао'*' ггит.зплз аззотшх, адааэтфоватша х гппд вирусом п гк-

лерг ^¿¡дзадлоЛ з готсппэ 2-3 кесяцоз. 3 гячесхцг адоншха зоз ;:сл1;т2;::-и-10 -схема прздус^гривала кспользогшг.э содошка разах

("Дс1" -Англия, "Цзрк" - КГ, ''Спо?з'* - -ц:?;. Драпаратп отлд 'Т.прл различаются по адызвангао;'! акглвкостп, которая колаба-лась в завис ллэсти от сзрш:. Существенным недостатком саяондка ласгстся его високад реактого:.":ооть, гсиолптлчаская л токсическая активность, С целья псис::а здювантоз оточастзэшюго производства лпзеяннг недостатков, лрзсуцах сапошшу, бил ксяытан ряд кесрз.тытх и огювтачоа^: жсо.1. а таклз органические соединения растительного происхождения. •

При использовании масляных адьивантов водннЗ раствор ионогена смешгзалд с разный объексы адызванта до получения стабильно! эмульсля ткпа "вода-касло". Сапонан к его аналоги добавляли к антигену в количества О,2о-С,5>1.

Оценку к.иуност12.гулцрушра свойств адыоззантов проводили по' удельной адьюванткоЗ ает:шностл - отноаеапе числа обратного тпт-

ру полученной сыворотка к количеству ьпкрограим а.шу низ прущего антигена.

В итоге установлено, что отечественные тасляные адьвванти ка основе сиятатпчзскгх шоел с эмульгатором СПЗС-2 а ПХ-3), •мела гарок ¿ИГ и Ш, а таккэ маола ддя противояцурных биопрепаратов не уступам? тшортноыу неполю^ адьаванту Фре2нда.

Адыншет !Я основе ошззетнчэсхлх 1асел с эмульгатором П5С-2 и ПЗС-З ' полпэтглсыоксановая гладкость) оказался менее реаето-геншаг по сравяеню о другиыз адьпаантами, поэтому он бил признан изобретением (Авгорскоо свидотельство & 1615917).

я иммунизации цорехих свинок применяли препараты, созхер-аацаэ 10-20 шт/гл ант отека, эмульгированные в синтетическом глсло, Морсюп оаиякац препарат вводили внутримнзечно в задне-бедреннут» гругщ? ьыщ, второЗ раз на 21-23 день и третиЗ раз на 28-20 день поело первого. Отбор крови осуществляли на 39-40 день-после начала шщупизации.

Результата проведанных отлов езидэтатьствуиг о той, что йред.югзшш2 способ позволяет получате активна и епбоз^ичнкз гипергьшушшз сывороткг.

3.4.2. Отработка схеш получения вирусспецЕ5ичесгазх сывороток £фова ка кроликах.

Недостатки*' извоотеых методов является низкая активность, специфичность и дют&яъность сроков лолучэная сывороток крона не приходных для использования в ЖА, РИА, ЕХА.

В связи с этим ш предлояшш ддя издунизация кроликов использовать инактизпрованниз, высэкоочи^аншю, концзктрпров^шгко в 1С0-ЗС0 раз препараты вирусов, содеряагрю 2С1—50 мет вирусспс-ЦЕфичаского белка» эяульгированнна в минеральной или синтетическом теле;

Порпуп лнъокидо указанного препарата проводили в тажиальцо-вгга пространства задних коначностеЛ, гторув на 7-10 день после первой в навзай подксло-;.:к2 лиг$оузол, треть» на 19-23 дань после первой внутривенно с предзарнтатьЕса десенсибилизацией продуцентов, Отбор крови осу:'-'стбл-чле через 31-55 дней после Еачала ишуктащиг.

Предпо^онт-щ схйад позволила получать наа активные и снецг-¿ячеекге сивороткз, пригодные для ягаюльзогягаи в серологжчзо-генх реакциях СЕ2А, К1А, РазрабстангнЗ и рекоиеЕдоБашшЯ на-

га нетод признан изобретением (Автородео свидетельство по заявка Я 5035515-14).

•3.2.3. Отработка получения гпюришунта: снзоротск па ошпд

Пршптпя во Епигзшгз сооС^знпэ Рпч^аиз (1233) о тс-гл, что бзлот: Л $(. аигм наименее оф$экгизно связвваегся о и^уизгло-булнпамн овец, было репено разработать схему получение аптггзд г. всрусаы. чтобз пх в последующа!! использовать в пуупеязеггег-кгт. системах с белкоа А. Дая гшерпнаушгззцхг гетольэовелд рог:ааовской и кнргизсгой тонкорукпоЗ порода» шссс": Э—25 кг. "т-гупкйгчеэ доноров начинали чзрез. 20 днеЗ шгегэ глглгегпя гс:я-логичилг! щруаса шеокоочщэнпцкз, кощоягрлог.-лпг.гз: п пк-апэтзтрогаяжгз штягозагп. Вгоруэ и грзтьэ пд^и^егдип епоб:о лл я "раз 10-20 дноЗ пооло асршЛ актягэпс« с гачщектрзцкэЗ 33-50 г.г.гг/нт впрусспеди^'ичоокого белка.

В качзстзз адьэвапта прт ог:ц пепользо:хтг.

кглсралгшд п сиытотпчзскпэ гасяз.

Прздлотнгоп^: способ дгзпзлал полутать ггпортлгтттз тилссп:— цкО'ггчоскио сыворотки с титром в РР11Д 1:160 - 1«»Ю2-и Гздалэгикз из отлх сывороток клааглобулсш использовали:» глчэлзвзжзиз антитела для твердофазких реакций, что позволх-о г-аср-ботатл кз-тодита постановки сандвич варианта с белкои А,. мшзкфовзз-пп! о фаркситакп, а такта дач изготовления козь&гдтоэ а з-

»С1 (пороксядазсй, щолочноЗ. фо^мзоа.^-Д-таскгсгтгпзсЗ.^-лзт:-такззоЗ), ^астицаьа полннвроз, эрптрощггакз.

ПродлокашшХ мот од позволил получать более япткнка, спзцл-¡¡игческиэ сыворотки крови, позто;.?у дакгатЗ способ цризлел изобретением (Авторское свидетельство Г? 310588).

3.3. Выделение ыфусспещйическии антител, пригодны: язи экспре ос-диагностики.

При разработка реакций "третьего" поколения осповпсЯ задачей бил выбор оптимального способа получения вирусспэгдйичзсгск антитол в количествах, необходимый дал использования в этих реакциях. '".'■.

Известно иного способов ввдолошзл специфических антител. Наиболее цррстоЗ предусматривает очистку сывороток хлороформом и кетиленхлоридоы (УХ). Результаты этиг исследований"свидетель-

ствовала о тел, что этот способ позволяя? отстать сыворотку ш 53-67;.!, при эх он уд.льная серологическая активность повышалась с 0,11-0,24 до С(2£-С,73.

Одкает известно, что хлороформ является канцгрогенннм во-цэстгзои а разлагается с выдаленаеа токсаческах вецестЕ.

;-;рс:« того, препараты антител, получению с поиоуьв сернокислого аялаигя аз сывороток, очщонных хлороформом ала нетален-хлорадоы, чрезвычайно гетерег-знны по составу а содорзат большие количества балластшас белков. Это обусловлено тс-, что вылепэре-численлыо методы ко обеспечивает высокой стелена очистка енворо-тоз, а увеличение количества растворителя приводит к снимании ах взруссаеца5ачэсйс2 активности сывороток аа 20-50;».

Крсано того, хлоратору и ыетиленхлорад эф£зптиаш для очистке сывороток кразд, з то вренш гак источником антител могут быть а друуаз биологические продукты как молота, цолозиво, ^элчь, ас-цнгная гцдаость.

Учитывая слоший состав этих биологических апдг.остэД было предложено использовать црнзцип селективного выделена« гаюа-гло-булана обработкой педагагдленишноа, хлороформе« и полиакриловой кислотой. При такой кошлзкеноа способе с пс^одьи полаэталоннщ:-на (ПЗИ) аз биологических гадкостсД уделяются альбугды а основная часть па:елокулярных белков (цреальбушн, транй>зран, постальбу1Ин).'ПЭ11 флокуларует в этой случао белка с калыа су::-ыарн>£.» зарядок.

Хлорофоры денатурирует крусноиатэ^улярные структурные .•кипене ;;тц, в т.ч." лиаояротоня, глюколротеан. При обработка пэталх-раловоХ кислотой осаждаются гльфаыакроглоб^ланы а бета-глобула-еы, а такдо агрегата денатурированного белка а остатка полнота-лешоааа;

Однако, увазананЗ саисоб получения гагга-глсбулана лрэдус- . ыаг-раьает использование слюртвого патгэталснаэдза.Лозтсуу бил испытан ряд ехкл заделай л гагс.а-глобуланоз аз езгзгроток хрозд с поыочыз ползоетк52пол:т..,ДЕа (ПЕЛА), :.бталсн£ло--а£1 а аолаакра-лозой .-.аслотк,

Б процессе обработка схемы очистка варьпроьала кояцег-ттраца-з5 полтаталенлаяаглагна а содзрлапиеи Провгдегааз сгагты

показала, что с яяишьноП концентрата*" оказался 0,252 П21А. Зт^аенъ очистка 63,6,-', а удельная серслогатосхая активность возросла до 5,30. При очяагкз набдвдалась потеря £—17;" антата-,

Данккз зги опатсв сзддзтзльстЕузт об упязерсальности лсгояного памп способа очлст;:;: биологических алдаоотвЗ. Он даст возможность, з оглячяэ о? ранее асполъзсваиша, получать внсоко-козщепгрпроваший вреварзт с зздаяноЗ ■'¡ктлбносткз. Метод прост, воопроаззодал, гзхнолсгэтеп н лзгга гетолнгя. Лря обрзбоггй пт.:~ воротет по ктюэд 1»тоя? проткжодп- сгловдткоо вш»лз:гтз гаа-yn-r.-.oiy..

Способ ' получено: гаия-глобулдна, предук-йтрпгаг-гя": f.-n:'-тг..' скгороют Еояяэтетепполпаккяом, кэталгахлорадог; я ясдрйкрзло-soM гггслоттГ: лразгая'изобретением (Авторсаоо cra,""'"5".i г;г-'л У. IC479-33).

~".?рабОТ&ЧЙП2 подход ПОЗВОЛЯЯ. получать лрогяг""" гглад-гло-гп1_гсд:пг; для получекпг ао-сзгзтсз гл;г:?:ол :- Е-лсатат.'л-?cä, гтлсчнс": фссйатазоЗ. JJ-Д-гахзассзазк»то?- а "зро-.огглзс::. «рс-

ятого, ярекратя aar:.--"¡л, пзлучекказ зт:а'. сязсоСо: г лсзп.тпг-.уотся для сенсябаяазгцяа сорбентов.

Разработка »«годов эксаресс-даагаос :г.у~ варусшп иг^зкаиЛ.

4.1. И^уксфераелтгаа ааалаз ("'*!)

Для гзгадсздяЕ влруса гзурз ясслз пропз.т ;.:>/; ся;- v '•: п. : ,-льтурз глот о:: ада кгг-гат&г-с ссуда:: гспольс с М", :. Г"Л. Эгк кзтоди позволяла поело провздэна.1 бастп.'; с тс лхл-.з гя.-рус яг^рз черзз 24-144 часа. Одпатл опя оуд^алгапг достатка: .

- кязгля чузстгатзлъаость;

- .лесяецяфпчяоегь результатов;

- длительность овалазл.

Учитывая ото, ш провели выбор вг/оокочтвсггятлшЕХ а сзс-цг^ачзставс пляунохлмлческях тостов.

3 первой серии онктоз бала изучена зозмоапостъ аопользова-гитя дая виявлеапг вируса яаура твердофазная варвантез вкауяо^бр--иентного анализа.

Однга яз основных компонентов, аяродзляшдлм чувствительность и специфичность IBA являатся коякзгат фермента, со спецяфа--чоекпш антителами. ■.

С этой цель» нслаталя ферменты: дероксидазу хреяа, щелочнуп фосфатазу,^-Д-галаетозддазу, ^-лагаагазу, которые отличалась ■ друг от друга по каталитической активности, частоте,' цопо, дос-

тулностл, ояошюстз cvöcvpata» способу регистрации действия çep-конта на субстрат.

4.I-.I, Авробация способа получения коньхгата антител о пэроксидазоЗ хрена

3 порвсД с-срд: сднтсз били испытана езстъ способов иэлучо-;ея г:о2ьагагсз, з 'с:~ 'е*злз: одзо и дзустадинниЗ глвтаралъд-эгдд-екл сериодатнд? На:жнэ п Кавоя, парподатнхй в цодпЁдкацпп садг з ссгзз., г -ояоаочгаЗ s бзстпокочзт! мргакгн по

:: Га raro е

3 до» ссзкзюсл yc-sascosoEc; яздостагочдсоть арздооса кодь-обусловленная, ззроктео, раздай каяаетзи препаратов гдз-5арздг;стзгз, о&згдзгаг раегд! садграшгсу в ski подсарЕг: д олдтгзрннг. $ора шздэгэда. ПориоддкзЗ дотод, разработана^ На-гзао г, Глгол s гЕДсгаансй орз лидзз кодэ<пс.7Доа, ардгудд: гж-гараиздогадзеду, но болоо игаоиа, слагад з дсдсйждз: с прадуй-игзодьзэгандз вдзодогс-сдчного

Еолсэ гзхнйлогдчаддг обвались его дод:::;:::дц:,д:, пред-адоп-2S3 !îaïsscset3 :: соагт. ÍIS7B), о гагд» Вигзссксл д Егаааа (IS73). йихагас в техдаяогдз Езготодгеддя ддагксот^дуда» вре:-,'д

прсдосса, г ™дцдд вгиеява я Еоддчоства продукта, 7дедьнс2 а::~ тдзностг. ;:лазгста, «а стдалд предпочтение» пердодагнеду дот оду в Вильсона s Нагана.

<1.1.2. Разработка способа получения кенхдгато а:-тител с цолэчноЗ йоафатазед.

Ксагзгаздэ авгкгеих с далочзой $оо£атазо2 цроводдяз по што-дп::о дадсашюй ,7¿4'"tA" « '^'•¿etty.

В раб5?о нзЕзльзсдздп $орагнте, ностааяясддз çaci»2 сл. um Т и НПО "Еиою^'ргаетдв'5.

Лкгваооть ггздотаоЕ ocï-aia зн производства НПО "Биохг.-ргаг-Г.пз3 из гсгуппс? по азгашоссд Çapûanry $лрдд "Stf-na Поэтеау в гдльнзйзд! для мтотозл-зпиа ;х:гьагагг использовали сор-

яронаведегга НПО "Б/охицреантиз".

- 14 -

4,1.3. Разработка способа полазил ютп^зг-тсз ентдтая с js-a-ra jzl хтозлдазс.'!

Акзлез лзв-зстнкзс .\:отодд:: получсзгя 1сокызга?сз^-Д-галзкгсзг:-дазн со слащпстзск".:-! аг.тлтола.',:г локзоял, что наиболее npc-cciri :: таза-юлогчпги" лиллатся глжпральдзгддзй слссоб, прэдког%!п:.1 .•siOECiasía ЕсалодссЕтеляил ka-i о :: coas:. Погод отлагала: пзозто-гсс, ::о требовал сложного 2ро:гс?огрзф:лзс£сого оборудогягЕ... Сл пс^иог;;*: получать активно :: сасак.^тасспг'З презета-г. г:гглсс/".:гз ~лл оезтадезко: свордоуазпхз: гарлантоз НС'.«.

¿„Z»¿. qhczoúi еол7чс:п:д ккзегаггз - ;

iiJJ-oirTajnp^.

*.::з:е;пэ» с.'о з органа:: v:;'c;rvr.-"7:;.: т\.-> г."::::гч-; ^зр.'гзгг::: (лзт;о::з:г,"Зйз п цзлегагая ¿сс/л1:;"'::-^ , ;\:?ср:;г г:-г.-1." :■: гэ-^чз.-и-о ло"5с::оло:гл?гл1-::г,': poe:w:.\j.'cj,

зг.пг.т о^>~лзгта::агсД, адгзлэк::о2 пз bmiiv* из jrsaxs: г.кзлогоз в оргаклз;.:.? хпзггг:,

Ко:"::гсц:з спгдгат проводите пэ сло;:;;;:::"п.: nove,-;:

1. Метод Ягоз?:г:;:оЛ 2,Ъ. :: сояпт. (ZS-23)• :.'.о?оя л (IS&Í).* •

2. Метод j.'03-л i.;.'.;, ц ее??/:. (IÍS5).

Наг.оолсз висогдя аг^^ксотг. коньж^'? (1:сСЭ). го/уч.™ :tjo-до\: Дговииясй В.З, irp:: б 2 гт/ял

о с.:;;.

Пол^зн'.^о "оньогати проагл погггосгслпиэ а таггго

акрой^рэзанк з условная рокгожрню: ла<Зорсгор^1 :: рзкешловгли для технологе:! лзготоелспея кй&агасоз йзр:-..;онтоз со спсцгч1гчзс"'.т--;л! антителах: :: что дало гаи ссгговаягэ составит?. ЛТД. Угязтякп технологии оказались прлговпга для полутоиаг гсоякзтев ¡?ор:.:сн-тов с антптелаш: к агглуоз яздра, ВШ, ВЗС, бояз&га AyGCts, ВС, чда КРС, оспи овоц п АЧЛ.

4.Г.5. Выбор растворов дта отгядзш лунок и раззадвнк* компонентов твордоТазза: реакдаЗ.

Известно, что одним ::з вз:люГ1£ПЖ этанол всэх твордо-Тазиш: реакций являзтея отглвка носзязалпплс.! кошеленгоз, чем и достигаемся позшлзпгэ специфичности этих методов. 3 состав раствора .

для отшейся в качество поверхностно-активного вздаства (ПАВ) в основной входят тс;;-2С для тритон Х-100. Однако, в СНГ промпз-денноо проаззодствэ этех зздэстз не налалено.

Исходя из этого, нани проведен скрининг ряда ПАВ т пригодность ж использования в растворах для бтшвки и постановка твердофазных псгукохаслесгшс реакции,

Результаты кагдх пселедозакд.1 подтвердили данные Ситаевс2 А.С, (1:35) о целесообразности использования в качестве ПАЗ в состава бу$с?а СС-£0. Наряд? с зги, шиа Епзрвко показана вэз-могзюсть гсяользошипя таких ПАЗ, гак Сйеат СЗГ-4С0, проксанслов, а такиз зак ДП-40, ПГСБС и ИГО й 3 прнапади дзобрагоадаа (лоло-гвхмакао ?оаез:о ЕЗИЯШЭ но заявка £ 4870550), что позволяло за-йондтъ г;д!орт!2;о реактива, снизить стоимость анализов, сбоспо-чкть упдворсзлдсаддз, создать сухно соловиз прописи.

-¿■«1,6; Выбор сптс-ляъшл; соотамв субстратов $зр^олтоз

Посредством субстрата быяелязтся ф-эрглнтатнллоя активнее?! коикзгата, От качества субстрата хаккэ зависит чувствительность роакцил. Идеальней субстрат дэхгдк давать полностью растворп:дй продукт реакцлЗ, инегцих тксл-альннЗ коэффициент экстикцин.

Призпг.:зл 20 внпгдшлэ внзензлолшшоо, нанд проведен ряд опытов по внбсру оптлголъндх состагсз хрсш- п флзорогенных субстратов для конзагатоз щолочноЗ фосфатазы, ^¡-Д галаетозлдззн, ^Б-лак~ тапаза д пзроксэдазн, При внбора опта/дльного состава хрссло- я флворогопного субстратов бил из питан рлд прописок.

В первоЯ серил отлов изучала зависимость чувствительное?:: 1ЕИ от способа приготовления хрк,югеиного. субстрата челочкой фосфатова.

3 итого исследований оказалось, что наиболее васо;:ая активность антигенов вируса ядура проявилась лрл использовании в качоствь субстрата ЕараЕлгро^еЕЯ^ос^дта з концентрации I цг па I 10^-кого даэтанолзгллнового буфера рН 9,8.

Далее к» провода подбор оптимально!! концентрация *лвот)огсз— него субстрата 4-?.етплуы^а.плп$ергз^оофага '4-1:70) н установдлл, что наиболэо глсокоя чувствительность погода достигается прл центрлци2'0(СД1 цг &-Х7С- а I гл 10^-иого дгэтавагаыпкозого бу*о-рл рЕ 2,8.

Зо второй сорил опгхтоз изучали: аовцадаость чувстветатьдсстд

от недользуеного субстрата дад^Д-гшзктозддазн. 3 качестве

- IS -

хрс:.'.огэнзого субстрата использовали ортошггрофсшм В-Д-галакто-пнрапознд (СЮ?). 3 итога оказался GIS? в количестве ÍOO га ICO ÜT 0,01 еосйатного буфера гЯ 7,7 I^C¿'2-Í0 хй, дагготрвэгад -5 til.. Для флзорогвнного субстрата установлено, что наиб:тоо простые, доступы^ л гриепле:лым для прзкипрского использования является субстрат, яриготовлезнкЗ со следулдой грс-д::с":

4 - (4 117?) - I !ЛГ«

С,С5 '5осТсткы2. бу$ор plí -- 7,-i..- IDO гл, 3 третье.': серии отлов изучали злбпспг.'осгь чувствительности 1'1ГА от дспатъзуеиом' субстратаJ5-vranra!.asu. Kairtíaies высокая ак-тиезсзть антигеназ вируса ддура бнла получена при гспользоваязи з качестве субстрата декицкЕпиз в. концентрации G.í' :-.г/:пв Ьремя инкубации 10 низ., при 37 °С, после чего добавляли ¿одппол з рпз-вгпении 1:7 з дистиллированно;! воде.

3 четзертсЛ сорил опытов изучала злг.т::'? ;а чувствительность субстрэтоз псроксядасн. Псаольсовахпз субстрата пброхсздззы га основе очщэняоЗ 5-9^!осаллщлозса кислота еойзсмко розко оддздгл Фон реаетдг и понизить ч^сипгольягсп; "C!. Авалагзтаио розультахы подучены при дсдользоваадя субстрата т оспозе срто-Яавгяеквзисзза л 2,2 азпподз - 3' еткленбсззтдсзз.тгп! 3 суль&осса U3TC).

Такой;.: образом, вызгдрпвздошпз отггн госголсдг устанопт, что чузсетитоладосяь КЗЛ суцозтвонно зависит от згягользуе'лп: субстратов.

4.1.7,- разрабоиа биотин-строитоавидиновой сиотзиы.

Ряд исследователе;! показала, что чувствительность í'SJ 'исзю повысить за счет использования бЕотвз-стрегосаз5спдово2 с'истешг. На:ли такгэ испытана днагностичэская ценность биотин-стрептоавдди-ковой системы.

При постановка ИЯ.1 исполъзозали биотпнилпровалнке антитела получений добавлением к I .".л раствора здгуааглобулзнов (10 :.з?/:'.т в U,I Ц -;а - бикарбокатксм бу:$еро, рН 8,8) 120 лкл 0,1 II раствора 'Л - окспсугасгкаьадного э-Jnpa биотит э днметил;эорпг,\шде. После пккубадиг в течение 2 часш ври когаатнсй температуре раствор, диализовали против С,05 М фосфатно-солвзого буфера, рЯ 7,5, Постановку ИШ с биотипилированнш.'и антителага осуществляли' ио общепринятой схеме.

Опыта показали, что JBM о биотш-стредтоаввдиковэй сксяеиой

зроиогэшшч cjc'crpavc&i позволяет выявлять антигены в разведениях трехкратна превоехо~т£Г2: ашлогнчнш показатели обычней й-Ei и в 200 раз KS;, При аапмхзованш. флворогенного субстрата эти показатели црввосходт..* 1131 в 4-8 раз, a PCS 600 раз»

4.2. Разработка ускоренного ишунс^зриенткого ашлиза

СУИШ).

Е постадноа spe-is уеилня исследователей направлены на разработку з^сяросс-сзтодоэ ш&гуноаетлнва, позводящих поставить диагноз на моста отбора пробы.

'.'сходг' из этого, перед наш. была поставлен цель разработать ускорешй твордс^азей зммуко^ермвгтнза анализ (УКЫ), пэззолязо-дкй э течэкзте СЗ-40 глаут проводить анализ пробы на наличие антигенов ая: антггед к игл.' Б первоЗ серии опытов изучали возможность выбора сптиалдоЛ температуры инкубирования регкцаа.

Результата выбора оптвьнлькей теьгпэратуры Епгубирсвгнтл по-казалд, что повышение тегшоратуры при инкубировании позволяет сократить время ш проведана® реэгннн. Самая высокая активность антигена выявлонз при провадоащ реакции в условиях 53°С по 10 низу? ка ыаядси втаае.

Бо второ-1 ссрад опытов изучали выбор оптимального вреыоад инкубирования рыкцаи при 53°С. Оптимальное вреия инкубирования реагентов колеблется в пределах 5-10 ианут, При болов продолжительной инкубации происходит потеря чувствительности анализа. Использование различных {ориектов л субстратов на результаты реакции не влияет. Прод-тогокный метод ускоренного паяукоформветно-го анализа Д1я определения антигена л антител признан изобретением {Авторское свидетельство .''u I73C5S5). Этот феномен снсзалсл нра-воаорнш при определении возбудителе!! и антител к вируса« яцура, ЗВЗ, ЗЗС, БС, болезни Ауосгд, ЧКРС, АЧЛ, оспы овец, а тагса скоЛ лахоредяг и вирусного гепатита А, В и HBs антигена.

4.3. Разработка кот ода, осяованиого на использовании •

антател, ко!с>агзрова:пых сетачсска длоткыиз шргсерага.

Ргакита, осяоганякя на ясаользовадапг антител, коныдт^ован-ных оптически плзгнь&аг :.Ер:-:орпча со свое,? гтростото а скоростг значительно провосходта во? яругяа тесто, 'л внезапным способам относя? рикша пассивной ггдаггллтЕЕЕШгс СНЕГА)» латекс агглютинацию ГР1Л), голякэраггахвянадкн (Н1&> хооггл^гияации (JXcA).

Принимая во вникание этя сообаэяая, катят быт разработан тсд эрЕтроидгуяоздсеретзг , заклэчавдйся в тем, что в :фуг-яодокшв лункв, сенскбияязяроваЕнке вярусспоцпфпчеокпш! антителами вносят предварительно преипсубнровзгнуп при 3?°С в течение 45 ьлатут смесь антгтеаа я антительяого зратроаитарного даагаостааут.

После оятптлпаяаа нетодяка постановка 3ÍIA. определена со чувствительность. Результат* ояктоз свидетельствует о тса, что чувствительность ЭИА ара вкявлсзп! азгкгсзов вылэ показат&тзЗ FCC в 10-170 раз а в HITA 4-22 раса.

ЗУ. позволяет обнаруживать около 5-10 nsHorra'Ts шгруссасаа-йачэсхого белка. 3 схема постановка с'/А лродуехтраааетая гэдуно-зкстрамгл, что позволяет избегать" догнал pea гея."« -^тэ позволяло игяолъзогать SI1A ара виявлевая вару сов з патолсгачег'.г.ом 'лзтерпа-ло, аарнаироЕЗ.часЗ культура г.летск а яробаа обьоятоп гясгасЗ слоя;.:.

"'А бил усяэаао яспатья ара жсрэ» БЗЗ, ВВС, полегая Ауес-г.л, A'LT, Ч1-ТС, ВС а осле слои.

HpejKosemaSt метод Sil для спредошпгя астагляоз взруссз араз.чая аззбрэтешге.г.г {Авторское свидетельство .','2S5IÍÍ),

К недостаткам 5/1,1, :?лт: л РПГД при яцурз» слодузт отнесла необходимость палачая тгаосяеалфачоскаа зратрояатарпа: дсагаоз-такг-.оз;

С целкэ устранеядя этого згадостатка бала цреведзнз асолодо-лп'яля по разработке ундворсальяого варианта "IIA (7Э'ГЛ) па осао-i?*? балка А золотистого ст&Згзошжка слан Ковзе-I, от-загцровса-яого с эратродатага.

Установлено, что постановка 757Á возиогоа ар- га-аобялазадпа за круглодопякх лунках аанелой препаратов антител, ваделеншд аз снзоротов крова овец я асяользоЕашкэ в качество ваявдшзах аата-тел, выделенных ез снворотогс крови кроликов, морских: сванок ала сзпнеЗ. В случае гэ гмлобилизацяа на лушах панелей другая аитп-тел каблпдали лоянополоштолъные результаты. Применение (в качестве выявлявдиг) антатол, видэлзшшх аз сквороток овец, приводило к получен® лозиопологятеяьта результатов. Вероятно, зтс связано о различная средствами белка А к 3 различных видов етвотянх.

Универсальный влрпант ЗИА позволяет значительно стандартизировать метод, что дает возможность последовать патологический-материл г инфицированнув культуру клеток*

4.4. Faspadorai хотела ^таорэсцэетннх зондов ДЛЯ ЛНЯВЛ8Ш1Я вирусов

Адсорбция ьируса на клетке результат случайного столкновения б процесса сроуЕоволого движения, Характер этих процессов • таено свясал и состояло:«' алазьатячвскоЗ м&мбранн клеток, поэто-уу ее характеристика мохат слундть ранни тестон оценки функционального состоя:-ал метка.

Для кзучоддя процессов, протекающих з структура! плааматем-ии xeuöрак клетсх незло воздействия патогенных агентов использует зонда флворзецентпко, еллнолца цлл ЯЕ1-зонды. Наиболее цдро-:-:се применена нагас флвсресценгшгэ зонда.

Слооросцентша зонда (53) - соединения, хоторнз ярикрааляЕТ-'ся к ллпадноау слою исследуемой клетка Еэковалентакма связям. Поэтому, э налзх не. ат одеваниях иы использовали метод йлсоресцзнт-нкх зондов, обладакцше сдодуезее: лретулестзами: ив£ор1аткв~ ностьз, простотсЗ, дзлавззяо2, засоко2 чувствительность® и укя-ворсальностьа.

3 дан:-: су случае в качество зендоз б ели внбранн слодухзцио вецоства:

1.4. - (п-ДпметилагшностЕрлл) - I - штилииридиноЕоЗ а -толуолсульфанат (ДСЛ)';

2.4. - (и - Дшетидашностирил) - I - гохсалпаркдишй п -толуолсульфанат (ДСП-6). (líEjemco S.A., Нааозшлова 2.В., 1990).

7чэт результатов-взаимодействия вируса с клетками проводили с поиощьв ¿эмоасцеетного микроскопа с автоматическим ечнты-вазздгь.' устройством;

На основании .'Еоготаслезапаг экспериментальны^ дсследовандЗ било установлено, •seo прикрепление вируса к клеточной поверхности приводило к азмнонпи состояния ее пл^згилемш, которое заявлялось не узоличонив НЕтапсишостЕ флюоресценции зонда в 1,5-5 раз по срагаониэ с ттактшащ, а такав обработанный балластны-шг балками клетками.

G цель» обоссованшг' ¿раненного интервала инкубации спстегяг "вирус-клетка" проведает изучали© дзваж-ш сорбции вируса яцура А^ .*5 550 на коеослой культуры клеток скетой почки (СП) с аосде-дузиоЗ его рвпродупогаЗ: А - по содерзазю взр^са з надосадка (БЖ/ыт), с о птеощью флэсрэсцеЕТНОГй чаи^п {ще.). Видно,что максимум фетороацесши наблздалсЕ чэрев 15-30 шнуг экспозиции

?~с. I. Исследование динаьспш сорбции вируса ящура А^ ЗсО мояослоЗной культуре- клеток СП о иоследлздеЗ ропродурдизЗ вируса.

По оси абхшсс: время препозиции •'.теток СП а зируссодер-задей суспензий, иян.

По осям ординат: А - % рабочей дозн вируса

5 - показатель интенсивности флуореоцгзЕ-цил зонда

£ = Реп/? контр»

?ле?ок СИ с впруссодеряадай суспензией, а мштауи приходился из врэкя эксцраосЕР. вирусного гскоыа к внсвобоадэппя вграонов потомства. Прглеы-интенсификация флооресцеЕдди совпадала с ьакси-гуиоы сорбции вируса на кзотке (го есть соответствовала кини:!у-му присутствия возбудителя в супернатанте).

На основании этого били сдвлаяк следупзиэ выводи: а) изменение состояния клеточкой кеиорапк, связанное с вг-руско:" пдЪеппигй, иодет бить выявлено ызтодо:.' флаоросце:гтнкд зондов па раннгд sr:.n_x, предгбстБуаддх репродукции.

С) наиболее сотвладьван язляегся время пккубадкп систола; "вируо-клоткз" в прйдзлгд 15-30 кгяуг. Это обеспечивает спсдг1д-чесхгуэ сорбция вируса ш рсдапгоры кле^ок-игдапий и является кс-обходп«:.! и достаточна: условием два получения достозэркдх результатов.

tes равновесного распродаченая зодца в сизгэдз "срода-кягс-1я" заелозит;::» лрог> с зоедсд дрозодгзд в теченг-з 12-15 jjhejs, что было кайдззо ггалсримЕнтально. - -

С поаагьэ Зсззрзсданш^ зондов бия подтвэрадег гакге çoeo-ыаа «гораоданд." адсорбции возбудителей снгнгелака па ¡кзточноГ: кзгбранэ, о -чаи судж до одинаковой $лворасцопцид проб, содар-дата кшздэкз гилэтяд * вирус + гомологичная снворотда" о гк-тактчг-л контроле.-: ,:клс?кд + зонд". Суть его заклзчздаоь в тс-:, 420 njc образодаздз »здганого ксетлокеа "вируо-адгЕтоло" возбудитель теряет способность связшатьса со специЗачэокгли роцоято-раид скагкодедга. Е z-tou случав соотовнвэ мембраны кязток-мша-ний не изгоняется»

Бати zo нейтрализация вируса из-за отсутствия в сыворотке спегдйичеciarc антптгл к кеду на происходит, "свободный" вирус адсорбируется на шазиэлеьие клеток, что монет б^ть выявлено ¡лз-годои СЗ» как показано ранее,

• .Такид образец, инкубаци» смеси вируса с екзороткой в системе репродукция вируса ведут в течение 15-2-0 цикут при 37°С, затеи в неё добавлять флюоресцентной зонд и через 12-15 минут проводить учет результатов реакции по относеншз интенсивности флуоресценции сыеои в опыте и контроле.

При 'значении показателя К равной 1,5 и выше, определяет; наличие инфекционного агента, а при значении этого показателя менее 1,5, в случае образования спецЕфического комплекса, "вррус-EKTUTsnoV определяет наличие антител к нему.'

Результата продстазлокнке в таблица I с- дптельотзуг'т о том, что метод ¿лзоресдептинх зондов целесообразно ислользогать пни экспресс-диагностике вирусов. Разработанной >;отод позволяет проводить анализ ггребн на наличие вирусов а течение I члеа посла поступления пробн.

5. Подготовка проб для заявления вирусоь

3 нраетичвених условиях специалисту чаете встречаются со случаями, когда иевозшзю отобрать иатологичпс:и£ шт';р:лл. 3 зтих случаях постановка диагноза зоз^оета по достилТектнэкгпг! антителам зыдздяс-мо;.!у .пивотныли вирусу. Лоэтм.'у о'г.пи прове— декн исследования по подготовка проб для виру ссвкдо.-.ч:яя из пода и зернспродуктов.

Идеятп^зкацзя вдргусов с поыодък *~зсрэгцйн?ного

зопда для определения вирусов и анттгпл п ниу

Возбудитель

бзлпз!-л

показатель интенсивности ^лэоресцоп: п i:cсле Д7 -з кыг стаовот:<ах_

щу-за: А тад: 3SC

зэ:

:Ъолзз-: Cera

: овец :Чл?С

АЧЛ

* :Aye>c:a:

Ядура А тад. 1,03 I,SO I,£0 1,60 1,70 1,80 I.so 1,30

35С 1.90 I,CO I, SO I,so I, SO :,7c 1,30 l,ой

ВХ I ,SO I,so 1,10 :,so I.7C i.eo 1,70 :,7o

2G 1,70 T '"»Л I,so I,CO 1,90 1,70 I.SC :,c0

А чески :,70 :,60 1,80 : ,io J. t cC -:.£C :.2C

Т\?С I.cC 1,30 I, so 1,60 •1,70 I,so I.1J 2,CG

Оспа оаеи I.SO 2,CO I.SO I,SO i,da I.EO 1,30

А-Л 2,00 2f ОС 1,70 I,BO :,£0 1,60 :tcQ I.CO

5,1. Подготовка проб для вняатекия вирусов з годе

Ранее выделение вирусов з вода приводили согласие "Лэгсди-чосипу указаниям по пндикадпн вируса лдура з об-зеитах заселен среди" раэтэботанлаг сотрудникам SCEI■СА.Л.Грппенхо и соа?т., IS??)» Сси<'?нностьа этой ехкди является адсорбция возбудителя г2дроэ>.з»аэ гаэшнзз ¡ГСА) и яослэдсдагаЗ аясги' его с ГСА с зо-иеднэ раствора Зрлн, содсрладзго 105 яор^тьноЗ енворетт-п крези

л?С. Пробу подвергали очистке хлорсфорыса л Енокулцроьадд б культуру клеток зкд вводили кызатам-сооунац. Однако, этот способ подготовки исследуеиого ьагерззда нкеаг и суяесгвекназ недостатки;

- нЕзхуа чувствительность из-за огоакнззкдя стапсид коедсет-рцС'ОзадЕЕ адсррбдпзй-эясциа2 из-за наличия антител а акгпбаторов к вирусам в сыворотка, нспользуеиоЛ .ара алацад возбудителя с ГСП;

- длггедьЕость. аначдса, требуется 7-8 дне?:;

- отбор проб вода с доставка их в лаборатории, где далал ярозодпяьсг додготовка цробд к дсследоьашз;

Учитывая шазсглодэвгаз недостатка с дсльв иовгллэыал чувствительности д укЕьзрсзльпосгк шх: предлогзз способ подготовка дссдсдуекого гахердадд хдаючащгй отбор а аеридчпув подготовь проба и: м-зс-з, . отсылал в лаборатории только фильтра, ка которнд в результата такс.! ¡подготовка адсорбирован вдрус. Для этого ш-г,; усодерсеаствован способ писвяснед вирусов из зодн. фдльтрсдао^. Ьндд испытаны равлгчыа фдзкера, изготовленные кз разкьа: }атсраа-лсь. '

£алзс бвсд дсдЕтадд- спсо.обы концентрирования вируса с £алхтра С21-15~1,5- я ГСП. Элззцз» вируса проводили С„5;' ГЛА на Зрдэ.с 10% пор:.'альнс-а сыворотка к^ушогз рохстого скота.

Сорбция га <]д;:ьтро СШ-15-1,5 по о^кгввеооте цревосходд? додольоозап» дгг: сгсЛ долг гидроокись алБДдадя. В взлхнейсг:» била азучзпа ^-уТ'Знгн¿гость слкцна вируса с фильтра.

•7чвпшай сообщения ряда. гсадедоватодоЛ (Акдзрсеп 1979; Баа-ео Е.А. а соавг. 157&) о валюта в сыворотках крона иктскгшл: давотиьп: Енгабдтороз, додавяэдах цпгсшцтогеннеэ детства« возбудителей, кн'ЦроЕола поиск заненстоля в злпеЕте нормальней сыворотка крова. •._•..

С цэльа гсаютаяпк возьгошюго отрицательно! и влияния ингибиторов а саецафдчбсдЕХ адтетед, наш прадлозено для аозцаа вирусов использовать раствор беаглобулинового црепзрата сыворотка крова. "Технология получения такого препарата разработана ЕНйЯЛ А.С.Окавытовш! и А.А.Быковык.

ДредзогонныЗ: элвант/ в состав которого входит 1С# раствор ультрафильтрам сыворотки креви крупного рогатого скота, позволяет элгщровать вируо яэдра с фильтров марок Ш1, СНА, И-ЕА-ид в 10-100 раз больае чем другие. Таким образом, результаты исследований свидетельствувт о еоздоеносте повызеядя эффективности процесса эладка вируса'. Названный элеант яаляатса эффекзгвшы и при

зндалении зкрусоз ВЕС, БЭС, ВС, болезнз Ауес-<, ЧКРГ, ссгга овец, À4I, что позволило рекомендовать arc для боля-э :х»ро!-ого использования при внделонлл эозбудптэлеЯ ш^згапотт*. баяпзкзЯ.Работа признана новой, имезцоЗ на учи о о и црагслтог'.сч ггачпп'л 'Авторское свидетельство СССР .'5 27SC53).

3 другой сериз, ошггоз псшггаяа ..гэгодткп', поззо:.яг-г:з проводить анализ проб з ггряспособло-шнд дпагностичсостс ."асорлтсря-яг;' С этой цольэ применялась иэтодаа, продуюягразг-зк^я одно_ зга дзухэтапноэ концентрированно асслэдус:.'о5 пробы з - 10^ раз по обгеыу, Далео алтигзп о фильтра вотируется сссг.снзной, состояцоЗ из зрптрсцдгоз бзрака, сонсдбдлазвзрогязз^ здруссаоо» йгевсзстет аптитетп 0,Со *3 ЗЕ? п 0,С5:« тдип £0 дли С,С5;1 оксдз-тдлпровапяоЗ олзилсвсй кислотой. При этсу происходи? сподг?ичес-::ое связнгалио элзирзгакюго антитела с ^птдтолага, ссодгнэпзпгз о эритроцитах: барана. СбразолагзпЗея .ttr.yrnn:! логелзиз дзсс^-дг з лунки панелей сснсибилизирогангигз глтитзялгп. 3 случао полоди-тсльноЗ реакции зсрмировалсл агглптггзт.

ПредлодокпиЗ способ пссзолязт :..;.пь"гь актптенн вируса лцу-ра при концентрации ого и зодэ около 0,01-0,1 nanorpa;.:¿/¡:i:.

С яолсдлтельдп.Ег результата мзтод пошлая при вшшездз з зодэ вирусов болгзх: Ауосиз, BSC, ЗЗС, ЕС, ЛЧ~Т, 4XFC, оспа овец л яцура.

Упазакжй слсссб арззгпз изсбрстзнисл (Азторсксэ саздоталь-С730 СССР 2SI529).

'¿.и такие изучали ио::!с~:;осгь выявления вирусов я зодэ изто-дсу . Для этого з 1зсзс:пз0 твердой фази бш пегмтая ряд :з.™.Г7-поеорбоятоз при постановка 221. 3 дачзстло зосителэЛ пепьтадн полистиролоэиз граяулл (лэбэзно продеэтаалепц С.Е.Ичрцззш с института бноргаиячссхоЗ гпмпд АН РБ) и частник пзлицорез (лаб-зз-но предостазланннз 3,Л.Яесторояс2 НПО "Пластдагл.'эр'1, г.Санкт-Петербург). 7аазалтэ носители, еедеибилгзгровашап знрусспзци-фпеекпадтдтвлшгг, вносились в зируссодергадув ьоду и доела инкубирования, zlztjнссорбея? использовался ь качество твердой ?азц для постановка «St. Из •^вр.-лентоз ллл этг: цодэЗ наиболее подходила _3-ла-.сташза.

Испзльзованиа гдсздосор-бентоз на ссяовз „'адхтиролоиыг гранул и c:vm:opa ЗА-ША 50/50 позволяет обнаруггдать з зодэ моте— дси raí до 1,0 гпг/тя знрусслзцпфичеслдй белек. 221 с ясллстиро-яовыя грззулаыз был с успехом иегштад при цндслзнди вирусов

- 25 -

tícnasEE ЛуескЕ, BX, ВС, ЧКРС, осин овец, АЧИ и кздра.

5.2. Подготовка проб для выявления вирусов zz зерна с сорнопродуктоБ

Ранее вцдэлешге вирусов из ззрка г зэряопродуетов проводили согласно котодичосклп углзлнл.:, у тверже гллп ГУБ \LZ1 СССР от 0S.02.77 г. Особенности этого иотодп «^сличалась в то:;, что пробы ке ценза 203 граи.св шжедзд: в гидсосгь, осгободдалг сх грубит частиц фильтр05лп:л: черог 2-3 сдоя иарли л цсг.:-рг,яггрова-лг; ros 3320 ocazn l тс »окно 10-15 б качоепо сладруиг-

гидхости црйгсйекд раствор гидрэлпеатг. лгяггяьйзгд.-

х, ерзд:. Зргл, Хзяхсл ггл 0,С ¡I фослтнсл буал>с (рИ 7,4-7,5). Концентрирование вируса иг глахозти проводили: с ис^сцьз ПсГ (Гл сООО). ом док рлсуспогс-тгро^ллл v кзс&:сдг.к.:

0,55 ГЛ.1, очкздлк 5хоро1орлеи длп'Срсолк! 1/3 к л:-голли-розалл и чуветЕнтольцуз систе;:;.' культкигрования. Игл условгл: 1»ссг?с:л«£кг ьзгбудизелг к?. вое ото требовалось дэ 10 дне.1,

Унлгашпл спосзй ллолэлгл sjrpycos в sopuo irtccc суглслл::-ныо вздесгатта ¿легальность анализа. трудоо:л;:осгь, кизгел чух,-сгахгдеяьиздзь, что исоудпло нас попытать другие варианты зеяс.;-ЕК гируезь' ь тллл касорЕалаз:,

С »гей- целю цзд отйорэ цроб нустсхелнГ; ионусооЗразннп итп с ц:: лл отиаротплл г, буг-т зор;:а. С лолзг~лз пойуднто-

лп ьакуула восд?а i:!'t.cacтали ь толлгл 5-10 ьпкзгт чзроз усаанол-лоакий »а еуес:.". (.лй-трод'.ге.'^дтсль с йглътрел из ткани Езтряиога,

Вирус с фг^ллра дгакозре* 70 ку элюяровали Я гк о-ггзекта, состоя53го кз púbeisí чаоусг двух cksc0í. 0лг7 из кд2 готовили

слэсгхзшюи S ня отилацотата, I ыг стисс-ото спирта i: I гл тот-реглорзтЕлека. Другуз емзеь - Б-ХО^-пкн раствор уль^раЗиньтрага клзорегкх" кровп КРО па растворе Хвнкса.

Поело цевзркйтлфованЕК проба лрл ЗСС-0-4С00 об/ышг надоса-дочпуэ-жидкость использовали в качество антигена для постановка иымуккашичеекгх реакдй, а такта для проведения биоцробы. Б таблица 2 продотавлекн сравнительные результата исишания прод-логанного способа и способа, изломанного в "Методических указаниях", ,

Данные, предстатешыэ в таблице 2, свидетольствуат о про-к?.?у2;<зсгва предлокошгого способа подготовки проб пз зерна и зер-нопродустоз. Способ позволяют обнаруживать ифусы яцура, ЗБЗ,

ЗЗС. АЧЗ, ЧКРС, болезнз Ауескя, occí ояед з зерпз, гак путем гсстеновка <5ясярсбн на культуре нлзт.'я, так :г ИЗ! a ЗИА. Разработанная методааа бнлз признана ззобрэтоняси {Авторстоо святительство ССС? 316675).

Таблдда 2

Срааядтольяиз д.-лшз по яядятдяа глгр^соз л зэрпэ при использования разшх ггетолез

Зярус Методы ЛЮТЛеНЯЯ

^тз.-'ллагагтя ,. .^77 г. ,,

: йяспроба: —-Г 1 : си : бдэпробз'.

A-w f

2ГС С-72 -J- ■г -

ЬСС 1-18

— 'Ч + з/з -

^ - -г -- -

Л .-д. i- _

я/я г я/я -

Седа сд.ц я/л + я/я -

27.1 + - + > -

лзлгэ: -г- - доле нательная р;а:спя

- - отрицагольнг>л реалдяя а/а - зэ иссл<?дояддп

3 Ы 3 о д н

1. ^г-.лйзгапгг тзяяологля нэготззлояи у.и£?-зрсзл":щх -ддтяге-лоз -яруса 2IC, ЗСС, ЬС, б&лзздг Аузс а:, чуггя ¿PC, X1Z я ссдн озец. тгрдгздгпп: для использования лая я гг-улсаагягасндд

л о?, ланях, лап я для ялг;:г.:зяя:-л депзреа. л дглллз зэяучзнзл: дидг-нзатачесаах сязсрстоя.

2. Разработка сясгз аллуазл^али orea» изелачев я гхреяхк евпзгя для ззлучеядя злсоллллтигнпя, сзадагачлсязс таизртзжукнах сяточетол.

3. Разработал гпссс<5 зяделолдя дрэдарягэл лхгагел яз основе 33U (датазтгатеытолгтагапЗ для лсяьлгяага с фзрллптамез эвятреди-

л ге^сабиллглдад твзрдсЗ $азя.

. -V; л'сдя^п'дродазя усисрендяД глгуно-горг-^яткяа ашлзз я цэ-тод эржг?01дгг7паа2. ядгербааа. дозвгляддав ояредэлять зарусн я ан-

титвла'к heu в течешза 30-60 глнц?т.

5. Уссвврсенствован способ определений: вирусов и антител i: sa: осиовакшй ка изучении с исгюдьз йхоорссдектгкх зондов ДСП п ДСП-S ранниг зтадсв взаимодействия вирусов с клеткам: (адсорбции) и поаволлвдй проводить идеити^исгд.с возбудителя: в тсчси::о 35—SO ».ищут.

£, Изучена дпйгностгяоспая ценность ÏSI".'.s и 311?.. У «а задике методы позводезт обьа^кквзть около I-I0 иноцхигл вирусеао-цифичесцого белка»' "отои флаоросцвнтшк зондов позводязт обнаруживать вируси sa ^ггдп,: пргтр£илг-:ия к поверхности илеткп-цидэнд. Чуво2эьт£.диюать указанного катода не устззасс ^ествитсльксстх: бг.оиробы Е цуляур,. кзгтс;:»

7. Огрьботагд: сиоооои подготовил проб дчг: ггдапсациг вирусов г. ьэдэ Е озрногродул^д«

I". Полетай;:. результаты позволил!' рекомендовать в диатясс-Tsraeuc; цзл.с: сдедд^ичнзю, ввсоххвроизвоЕнгсдь-

zue и акаир.'ссыг .«тодд ÍIC.1, УКЛ» ЗИЛ. з: сз для енявлсние спсдд-фдчосхпх :: ú.ttí.-xü.': при сщю, BSC, БЗ, ЧКРС, ¿'Ll-

болознг Луес:-.:: и ссх: съсд.

. . r.vaветеринарии Госагродрсг: СОС? утгор::.-Д2_н кор.ц'..сио-тохкиоокиг дог^^ндн:

- Bpai;c:sL"j iTiCTpiamûi no кзготохдсякэ и контрсяз набора для нндакгддп вируса езура грстрохкцушг! адеорбдие^ и з^-лупэ-fcopuesTiaz: г.стодкл кокьагатаьз■ взфуоспвЦм5нчос5-2: амврод -J&-E-галактозцдазн?

— гехпкчоскнэ условна "Набор дал индикации вируса ядурп 8рЕтрош5Душ;о2 адсорбцией д шаунод&араэнтгя когодои с кокьзга-та^г БгруоеЕацЕ£н«:йска: антител -^В-Д-гатаетозидаси";

- '."Наставлангл по ярдаонеда» наборов дик Евдгтации вируса ядура вргтроЕддквки анализо:: и кллуЕоЬоршшпйс.: истодом".

Главны« управлением ветеринарии ÜÜX и S? Ресиублиги Таджикистан -угвэрздиш следуища иорпатквно-технкчзскио документы;

- ьрвшннш инструкции по изготовлению к контролю наборов для диагностики вируса ящура иилуноферкектншл методом ¡сопьлгата-ми вирусследЕ$кческвс антител - пероксидазы, щелочной фосфатазы,

Jü-лактшази;

- технические условия "Набор для диагностики вируса яздра

дягунсфериэктшы ыетодои о хоньвгатамд вярусспсцйдчзздих антител - пероксздазн. делочноЗ фое^атагя, _В-лант?лазн" ;

- "Маетавлетая по примоненизэ наборов для дгатностиет вируса

;-гтура яшунофериептнш методом".

Список та б от. опублдкованшх по тепе диссертации

I; З.А.Мпценко, ЕД.Сатао, M .А. Базаров и др. Сравнительная оценка катодов конъюгации антител а вирусу яцура о пепонсидзаоЗ герепп // Тэз.докл.науч.конгорепцид. Влади/др, IS87, λ 2. С. 40-50.

2. З.А^идеяко, £.А.2азко, У.А.Базаров д др. Сравнительная сдея-на разннх вариантов твердофазного п.ыувс£,эрмечгного "этода // тез.докл.науч.хонф. Злздияз», ISS7. 1. 2. С.

3. В.А^иденко, 'м.А.Еозарсэ, А.Б.Флирнов и др, Изучение диагностической ценности :г„^7ло~,<9р::о1ггногэ могодз с флзорогвшеая субстратам делочноЯ' Соефэтазн д^-Д-галантозидазн // Тез. докл. науч. зояф., посвяд. 20-легиз ВЕСКИ. Зладжир, IS68.

1. 2. С. 61.

4. И .¿.Базаров, Т.Б.Кояетхпз, Зл:з ген:..» есть показателе!! чувствительности я-иунсфертюктЕОГО анализа с^р-лактагазя-я! копьега-тсы от используемого субстрата // Тез.доги.науч. xosî. .поезяд. ЗС-лэтив ВШИ,- Владимир, IS88, Ч. 2. С. 62.

5. В.АЛ^денко, У.А.5£заров, Т.Б.Хснпхшта. ¡ЬадоофериедтпнЗ .vs-тод определения эпруса ядура с использованием коньвгата 3-ла:-:-тагдзн с вируосподд$ичес:ддс1 а;-гтитела;.я // Антдбдотдтсг и гсиудотерадия. I5S9. Т. С4? Л 10. С.. 739-741.

6. З.АЛнцснлО, З.К.Атаэз, Ы.А.Базаров и др. Реакция эрнтрогдг.гун-ноадсорбции при изучении яцура // Науч.ксордпкдц.ссвйд.стран ччопоз 33. Разработка козах i-етодоз дзагясегдгз лцура и дй1.-[врондиа.тьноЗ диагностик болезнаЗ с везикулярным с::ндро?.:с:.г. Злэдл.ир, ISôS. С, 26-31.

'7. З.А.Мпденио, .'Л.А.Базаров, A.S.Смирнов и др. дттпг.'лояция :тдг7-по^риаптного узтода с доньэтаташ элрусспецд^дчесдпх антител л т-здочкоЗ 5сс$а?азы // ЗЬ^уч. госрдпяац.созод.страд члоаов С23. ?гзроби:<а новкх детодоз днэгнсстигсг болезней о везиду-опддгоыод. Злэдхдгр, IS89. С, 32-35.

8. В.А.Ыидекко, Ц.А.Базаров, А.Б.Смцрнов я др. йшукорершнтЕк2 иетод определения вируса яцура с использование« шшзгатов JJ-лактаиазн с вируоспецг^ическш! антителами // Вауч.коордн-над.совед.сГраЕ членов СЭВ. Разработка новых методов двагноо-тлка ящура е де©еренцдально2 диагнготдкс болозкеЛ с вазпку-ляршш сшцроиоц. Владпшр, 1989, С. 37-41»

2. НДЛиденко, И.А.Базаров, Т.Б.Контпаша и др. Влияние субстрата пероксдгзззн на чувствительность шгнукоферызнтаого метода // Науч.цсзрддпап.совез.стран членов СЗЗ. Разработка hobie кзтодов диагностики болезной с вездкулярнку свндроцсц .Владимир, I9SS. С,: 42-47.

10. В,А.Мпдэнка, Э.К.Атаев, Ii Д.Базаров и яр. Реакция эритроидму-ноадсор&спз при изучении ячура.// Ветеринария. ISSO. 3, С. 27-29«

И.Б,А.:.:ицзн:;о, ы.А.Базароз, А.Б.Сиирнов 2 др. Опгждзацгя пд-К7во$а?зднг£огэ кегода с козьагатамз 'впрусспгсд§зчос:аа антител и полочно": фос&атазк // Z, 2IKU ISSO. » 6. С, 65-67. •

12. y.A,Iö3apos, Т.Б.Ксквгд&да, В.К.Потров и др. Влдяява качества глугарсдого альдзпда на активности антител ojä-лакта'д:-зой // АЕтуальл.нробд.вэг.вирусах. Взадпнцр, IS20. С. 23.

13. Базаровs Т«Б.Козвшсака, Э.К.Атаов и др. Оценка сорбидоп-но2 способное;;-; кпнрогшат, црьггасоаа: для твердофазного :z:~ цуноферкэятаого анализа // Ак5уалгп.про<йг.е0т.вЕрусол. Вдадд-ьжр, Т.SSO. С. 24;

14. Э;К,Атаев, М.А'.Базаров, Н.Е.Бадакпга и др. Оценка диагностической цанлсотЕ врЕгроагуукоадсорбдик ирп ядуро // Актуальд. яробл.зэт.вцрусоя.- Владшшр, 1990. С. 25.

15. B,A.b!i"SHKo, М.А'.Базароз, Т.Н.Коншкина с др. Им.??нохзрмонт-нкЭ метод яря вдрусшк инфекциях // Bs?, медлила: зконклт-чесйк, ооцйшню и экологпчеекно пробл.' Харьков, 1990.

С. 258.

16. В.А^Дедонко, М'^Базаров, ГЖТСоншкпна и д?; • Использований инаунсфзрдентного шгода для выявления антителоотлотавдздся тташов вируса ящура // Бэт. медицина: Экономические, социальные и экологические проблош. Харьков, 1990. С*. 259.

17. ви'Дищенко, LI .А'.Базаров, Костшенко и др'. Ускоренный вариант

твердофазного таиунофермвктного катода // Соврвмлн.яробл. ткунол. биотехнол. гекноЯ я клзгочной ипгэяергга в нет. медицине. Нигшй Новгород, I9SQ. С. 88-89.

18. ЪЛЛя&пУО, 'J .А.Базаров, Т.Б.Коштаина я др. С^ата чуг.ст-вательностя аи-гунофер^адтвого метода- ври использования различных субстратов пероксидазн // 2. С-хозбзологая. Сер. Биология животных. ISSO. К 6. С. IS0-IS2.

19. В.АЛиденко, U Д.Базаров, Т.Б.Коншгаш я ф. Оаэнкз :-ачест-га нротнвоядуршгг: антител, используемых в диагностических целях // К новой стратегия борьбы о ядуреи Таз.доал.иеаду-народа.науч.конф. Владяигр, ISSU, С.47.

20. В.АД!2денко, Л.А.Еагсроз, А.НЛудшков à др. Результаты обследования уорстах котиков на острове Еорзнга // К новой стратегиз борьбы о ядуроу. Тез.дскл.яегдунэр.яауч.конф. Владимир, ISSI. С. 155.

21. 3.AJJîS39Hko, '.'Д.Базаров, А.Б.Спирдов я др^' Емцунсфермент-ннй метод о бяотякстреятеавлдиждг зрн ягщхз // К новой стратегия борьбы о ядурсм. Тез.доги.мзддупар.туч.конф. Вдадн-игр, IS9I, С. 159."

22; З.АЛнденко, Т.З.Твргна, II.А.Базаров а др. Индакацая вируса яцура в продуктах убоя кивотштс // К новой стратегии борьбу с ядурга-. ? е з. до лл.аелдунар. науч. аовр. Владимир, IS9I. C.I6I.

23. З.А.:Ляденко, У.А.Базарш, Ц.Г.Костгченйо я др. Уокореяг-ай твердофазячЗ а:с.тукоМр«эят:ай «етод // К новоЗ стратегия борьба с ядурга. Тзз.доют.меядунар.когй. Втад:тагр,1$91. C.I64.

2-4. З.А^'.ядеако, МД.Базараз, Т.З.Хопшшша я др. Сравнительная ояеназ субстратоз делочяоЯ фосфатазы прз яостанозкз и: лгун о-■¿ерментного иотода // X новой стратегия борьба о я^урсг. Твз.докл.1Щздувародн.5ауча.?.о1^. Етаддляр, ISSt, С.157.

25. УД.Базаров, BiAJaœai®, А'.Б.Сшграов а др"; Изучаяиэ антяз-ясста анатоксяга яротяз аа^адзоаноЗ зятеротонсеаии овец яи-ауноферяентнну методом // Совера.магодсз Госконтроля вот, препаратов. Иоскза. ISSŒ. С. II0-III.

26. ЗД.Мгзчнхо, М.А.Базаров, А.Б.Смирнов я др. йдтуноЗершнтааЗ аетод rçz дягяостякз яяура //S. Вопросы вирусрл. 1991.

.1 4. Ci 341-343.

27. В.Д.Ыэдэеко, Ц.Г.Коситчвеео. ¿1 .А.Базаров и др. УсксрзЕннй твердоразшй имаднареризятый: // К новой стратегии

борьбы с шаром. Зладплгр, 1592» Ч. I. С. 110-116.

26. А.Б.Скирнов, Е.Е.Баборенко, Ц.А.Еаазров я др. Изучение

назых фильтров обеззараживаниях воздух // Экалог.пробл.вег. санитарии. 1993. Ч. I. С. £7-66.

29. К; .А.Базаров, Б.А.Мидоико, И.С.Костпчензо п др. Диагностик влруснкл иг-1зкцпг; ускоренна твердскТ&зкк: лглгунсСар'.'.еьл'К!:.' анализом // Известил. 1££3. .'3. С. 47-52.

33. il.ii.Базаров, В.А.'Лщзнко, А.П.£удшг<сов и др. использование различных адьвьантов при получении диагностический сгаэрото:: // 2. Извести», 1993. й 2. С. 52-57,

31. П.А.Базароь, Б.А.ипцэжа, А.Б.Сццриов и др. ^лгкостичоакал ценность универсального варианта эргтроюнуиоадсорйдип гра определении виоусов .//1. Известия. 1953. 4. С. 44—17.

3?. '.Л. А.Бекаров, З.Л.'Лицзнкз, '»'.Т.Коспзчвнко и др. £дггностэтес-ггхя: ценность уенорокдогэ ©аукоферузнтйого метода // востия. 1993. .'¿4. С. 47-50.

32. М.А.Базарез, Б.А.?Лпцеш», Л.Б.Смирнов н др. 1!к®но$зрайяглд2 кетод с биоггг.сгргнтоавидднон црп .езуро // Науч.-лрспзьзд. ;.,-:;,.лзсвлг1. 50-лекз Тадя. ЕЛЕЯ. 1993. С. 70-75,

34. П.А.Базаров, М.Р.Костзтчзх-псо, Б..А^г.^зипо и др. лнагносгпчоо— гля ценность зьзлуко&эризятного катода при определении антител т. вирусу сора // Науч.цроазвод.тае^.посвяз. 50-л&тиз Та™. ЕЯЫ. 1993. С. 75-79,

35. В.С.Болокснь, В.АЛЛпцзккэ, 1.!.А.Базаров и др. Технология и контроль изготовления протпволцурнын биопрепаратов с по:;о:иьв 'ускоренного КШ // Биотехнология вэтеринаршЕ препарат св. Тез. докл. иаучно-лракт.иэяй. Харьков, 1993. С. 21-23,

36. Б.Л.1Ддценко, К.Г.Коетшенко, И.А'.Еазаров к др. Ускореккн": твердофазши" ик^укофориенгий метод б диагностике вирусных киТетсцнГ: // Вопроси вгоусол. 1993. Л 6. С. 284-285.

3?. В.А.".пценко, Е.Е.Корниенко, Ы.А.Базаров и др. йллуяейерпент-кг.": ызтод при диагностике болезни Ауескд // Ветеринария. 199!. Е 3. С. 32-34.

38. A.c. 1647968 (СССР). Способ полугодия гаша-глобулина из сы-зоротозс хровз млэкопитаадих / М.А.Базаров, З.А.^пдадко, А.Б, Скарнов.

3S. A.c. 1730725 (СССР). Способ проведения твордсйазного ашуно-»араенгного ашетза / U.A.Базаров, В.А.илдал?.о, Ы.Г.Коствчен-ко я ДО*.

40; A.c. I6I59I7 (СССР). Адьэван? / М.А.Базаров, ЗДДидензо, А.КЛудяаков я др.

41. A.c. ЗГС568 (СССР). Способ получения гшгарииуннаг сывороток ха овдах / З.А.Мд5зтаи ЫД.Базаров, А,Б.Смирнов, Т.Б.Хонкз-танд.

•12. A.c. 316676 (СССР). Способ индихадпд вирунов а дгсгретнои иа~ терзало / З.А.Ипдегкэ, 'Д.А.Базаров, А.Б.Сдпрнсв, Э.К«Атаев.

43. А.о. 276С63 (СССР)- Способ индикадпз вирусов / 3 .А Ладанно, А.Б.Сипрнсв, U.A.Базаров и др.

44. A.c. 2B5IS4 (СССР). ЗрзтрогйгуяднЗ анализ для определения антигенов вируса ядура / З.АЛддзню, З.Х.Атаев, л.А.Базаров, А.З.Сднряоз.

45. A.c. 2SI529 (СССР). Способ вндэлокая ктрусоя в водв / З.А. '.Ллденко, Э.КДтааа, А.Б.Силрнов, LI.A.Базаров.

46. A.c. 4870520 (СССР). Раствор ддг твердофазных элгуяохахачес-

реахцзЗ / L!.A.Базаров, З.А^пдеядо, :i др.

47. A.c. 5C65519-14 (СССР). Способ по.хчензя гнд:ргс.гунпих сш?с-ротоя крови га кроликах вирусу батезкз Ауескд / U.A.Базаров, З.А.:!пхензо, Л.НЛлрЕмгесо и др.

КаСшШ. ШДОВД

паруодд насалшширвЕ тез (ьЕСпресо) аидцяадяинг ьосита ьа усулларшп к;идя.А члцаа"

ицсид, ч>ч1\адарнанг л-езиададр касаялцга, чучгляаршшг ьезккудяр ьгзаятемасв, крршоллирЕИдг ¡¡zar васадлдгя, луесга; насалят:, отлар-ийиг окрика улата касаддига ьа куйларнинг чечон касаллггп ьпрусда-ptHÄ тез андцдаа ва вдеяти^яяацая i-аишдда куллаз учу в диагноз тикукдар4-ни таЬёрлаа га казорат вршжшг ьоскта ва усулларннд дшдаб чнкдш буйича снотехнолог^г сохаскда яаг^ дл^дС Ёукадш яратизди.

иазкур касаллдьдэр ьируодардЕваг уааверсад адтегенларивд та£ёр-лаз технологпяой ндлаб чиг^дди»

4 аоллкгл Kj члп ыахсус гикеркАилуп г,он зардобларяни тайёрш ¿чуя . 1;уСдар, вуёнлар ва деаглз чуч^аларинм имсун^зацая rçiuun тиртиби ^¿да аодЕэгадсааолЕьшш аоосада цврюнтдар ьа эритроцптлар Сплав нонъскацвядаа ва датиц бос^ачва сеислбилдзациялад ¡.-.адсадвда ьвмлшсклар а г. евар атлар^ЕД тайэршЕ уаудк вилаб чшуищи.

Ьируолар ьа.. улирх'а царши дпсьшарнд (антитело) 30-60 (¿¿ш.даво-квда ани^иага ¿лиши Осрувчи ихаупоферцентда гездаамрялгая

имлунофермеаглд (ГйФУ), оригроимцун адоорбдая (¿»ÍA.») ва флаоросцентди зондлас (фБУ) каба яымунсБИЦёшй аш1ггчаа уоуллари яратилда ш таког.шл-далтарилдв*

Сув ва доа ¿¡ахсудогдарздан вируолараа кндлканЕядао учув яакувалар то2ёрлаа усулларк игдаб чм>шиЕ.

И©,ТИ4У ва.йЬАУ шаг диагностик ахаавдтв урганилда, Мазкур усулла, иахсуо о^салнй Î-I0 яанограьмгача г.^^дорда ваацяишха дм кол Серади. Фльорсоцентлй эовдлар уоулл ёрдашда ьирусдарпд хуаайра адасига ёшикш-боо^ичЕда ани^даш мушиш. ¿сулнинг таъсарчанлиги хуьлйралн ыухитда Oiiüüpoöi утрат усулага тенгдир.

Одянгаа натнжалар спорила аедтарллгая дасадддкдараанг махеза антиген ьа антщшсшшрааа ааш\лащда луда фаоя.гга^оуо.Ецора ашаралл ьа тэзлаитирллтад ,'oMJ ва Ш уоулдараяа здлдшеял такал

этшга аыкоа Оерада.

СССР давда? агроаааоаз Оардашааяяиаг ватерааарая Боа боиц~Р-ааоа тоисаадда гдйндага xysaasaaj заомцаангтг

- махоуо антижкамдпрндаг юаыогатдара-озадаза бадаа эритронмыуп адоорОдаа ва иммувоферментая уауддар ёрдшшды о^сад кааал-лага рлруошш аададацоялаш- учуа туддап яратнл -sa аазораз ^алия буйача ауваздат аудлааяа{

- "Jaxaya ая1адисыдарянаг зодьюгатдарл -ß - д-сздзитодвдаа балаа apatpcmjja адсоридя на ди^поферыантда зсудлар ёрдааада одоад аасалдлга варуаана аядакацшиаа з'чуп тзцдан"аяяг тахндвдшй tsaptaapa;

S «¿ратроамаун адоорбазл ва алзауаофераедздз уоуллар Зрдаадда о^сад каоадлага Езрзспаа шдадацаялал зчуа ту плата г$ддаз бзЗача таЕсаянсма".

Тоадяастоа РесауОдалаоа ^аолод хузадята вазарлагаалнг затераварая Ьсд босцармасл томояадав луйадага хуазаиар таодш^ланган:

• Махсус ааиашсылар аоиыпгатлара-йеровдндаза.шицорла фос^атаза, ß- дактаааза- бадаа аццувофврава^да усуд ёрдашвда о^сал насаддага еэдоинд ана^дая учуа ?задаа яратаа ва назорат ва rçaaas бушпа муводка? Зураиаома»

- "Ыахсуо аатнааоыла^ аоаъгатдарл-аероЕсадаза.ки^орла ^оо^атаза, J>- лак тамада- бадаа акиунофлраеатлл зсуа Зрдаклда сздад гаоадлига заруояад алдщааи у чу в ууплам"зашчвгядааЕза иаргдаря*

- "О^сад ааваллага варуозаа аы.чуао$«рмектда уезд бадаа aaajyua учуа туолакна адддая бу2ача тагаадпома

P. E 11) К E

of H.ñ. BñZñRQÜ'S disertation en these "Exploitation of rcsedies and sxprcrs-dicOTesis cstbods of virous diseases" for acadejic dspree cosa st i tier, /doctor of veterinary sciences/.

In biological field are worked cat rssedies and Eethsds cf receicticn and diagnosis centra!. wich are suitibls for exnress-diseoverin? and identification cf vireus tedcls cf FKD. visiculare exantesa of saine /SUE/, sains vesicular disaese /911'. fjueskv's disaese /£3/.bovine rindeDest /OF!/. African rindenest of horses /í!Pi!/. sheet сох /SY.

Ths techno! с™,• of Earafacturin? cf universal antipens of Fffi.F.^J.SyD.Bn. ' PIE and sheep pex is mastered.

For the purpose with the receictian cf hich-active. specific hToericsu-r.iccd seras uas ;ísvised the share cf itror.izaticn of rabbits.craírioa-sics-Tíie Ecthods of antibodies ár:srs excretion on the basis cf PEPP. conjunction u'ith ferEsr.ts. eritrocitos and sencibilizatien cf ssíid fase узя also devised.

The iírjp.cahciiaai icthnds cf virous dasaeses кеге scdified ar.d narked cut :IFK. SIFM. EFfi and FSP. vhich alley to define viruses and anti-tod Ff ulthin 30-60 cirates.

The uays of crobes preparation for viras indication fres pater and food trains v;er? ucrked cff.

The diagnostic value cf IFfi. SFP..EIA tas 'earned. These Estheds alley te found оЛ ebest MQ nanaerenas cf virusspecific aliasen,methods ef fluorescente irebas aliaos to discover virusas on fasten ire stairs Kith sell surface-tarcst.Tho sensitiveness of this cethed is sisilar to bioprahes cr.

alhie cribe obtained results allca to receoscr.d the diagnostica! purpose cf sensible. specific.hicMv Brafcctire and egress methods ef IFfi. SI*. EI/!. FP. с It hales to o^lcsurc specific ant i pens and antibodies of F>2.?J!!.UES.bovine rindcocst.íüK.shesp осу..

' The Kaín Board of üeterinary Medicine cf" £osazrc?rcs" of Tajikistan Republic confinad the полайте and teclnical dac-Eontalien:

tha provisional instruction on production snd setting control for indica -

tion of FKD virus bv EI& and HIF uith vircsspecific antibodies-peroxiaasis. alkali fosfstsres. B-D calactcsidascs. B-Iactasases.

The direction cn sets us in? for indication of FKD virus by eritroisaune analysis and lmBofcrEent netted".