Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Разработка средств для обеззараживания кишечного сырья при изготовлении кетгута

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ им. Н.Э.БАУМАНА

На правах рукописи . Дня служебного 'пользования Экз. &0. о и 4 я

САША ЧУЛПАН МАРАТОВНА

разработка средств дня обеззараживания

кишшого сурья при изгогошенш кегпутл

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

03.00.07 - микробиология *

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 1993

Работа выполнена в лаборатории вирусологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института.

Научные руководители; заслуженный деятель науки республики Татарстан и РСФСР, доктор ветеринарных наук, член-корреспондент АНТ, профессор Равилов А.З.; доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Угрюмова B.C.

Официальные оппоненты:

1. Папуниди К.Х. - доктор ветеринарных наук, профессор.

2. Куприянова-Аиина Ф.Г. - доктор биологических наук,

ведущий научный сотрудник.

Ведущая организация - Казанский медицинский институт им. С.В.Курашева

Защита состоится апреля 1993 г. в' 13 ч на заседании

специализированного совета К - 120.22.02 в Казанском ордена Ленина ветеринарном институте им. Н.Э.Баумана (420074, Казань-74, ветеринарный институт).

Автореферат разослан "/¿V марта 19ЭЗ г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ордена Ленина ветеринарного института им. Н.Э.Баумана.

Ученый секретарь

специализированного совета, доцент

Корнишин А.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность теш. Усовершенствование технологических процессов на основе научно-технического прогресса при производстве материальных ценностей, позволяющее повышение качества производимых продуктов и снижение их себестоимости, является одним из основных направлений по развитию прикладных научных исследований. Важное место занимают в этом плане исследования, направленные ка совершенствование дезинфекционных и стерилизационных мер при производ- ' стве шовных материалов, особенно кетгута. Учитывая своеобразие и специфику производства кетгута, вопросы обеззараживания сырья являются актуальными и находятся под пристальным вн;«а1'научных исследований.

Кетгут - иовшй материал, употребляемой для хирургических швов и лигирования сосудов. Преимущество кетгута перед всеми шовными 'материалами состоит в его эластичности, пластичности и легкой рассасываемости в организме. В нашей стране кетгут изготовляют из тонких кишок мелкого рогатого скота (в основном, баранов). Фабричное изготовление кетгута производится при строгом санитарном надзоре. Трудность стерилизации кетгута обусловлена, в первую очередь, качеством материала, идущего на изготовление кетгута, и сложным технологическим процессом обработки кипечных полос, которые являются благоприятной средой для развития микроорганизмов. Поэтому при разработке того или иного способа стерилизации необходимо иметь в виду получение .кетгута не только стерильного, но и сохранившего ценные свойства коллагена.

За последние годы значительно совершенствуется и укрепляется дезинфекционное дело. Од'-эврэменно с этим расширяются научно-исследовательские работы по разработке способов дезинфекции сырья, используемого для получения повньгх материалов, а такта по проведению всесторонней оценки активности, токсичности и изучению механизма действия ряда новых дезинфицирующих средств из различных групп химических соединений и созданных на их основе препаратов, обладающих дезинфицирующим действие!,!.

Однако, несмотря на некоторый прогресс, достигнутый з этой области, проблему обеззараживания' кишечного сырья и стерилизации кетгута (Дшкант И.Л., Шевелева В.И., 1968; Ксендовский II. И.,

1970; Саноцкий И.В., 1970, 1975, 1979; Байбеков Э.Б., Вафина Р.Г., Чернышева Л.З., В&яковинская Л.П., 1976; Заева Г.Н., 1985) считают окончательно не решенной, поэтому требуется более глубокое изучение и микрофлоры кишечного сырья, и совершенствование методов ее обеззараживания. К дезинфицирующим средствам предъявляются требования, вытекающие из необходимости: надежного обеззараживания кишечного сырья, их малой токсичности, отрицательного влияния на качество кетгута и экономичности. Однако применяемая до настоящего времени засолка кишок не уничтожает микроорганизмы, а лишь задерживает их развитие. В связи с этим технология производства кетгута не исключает размножения микрофлоры, имеющейся в сырье, и не гарантирует ее уничтожения.

Исходя из вышеизложенного, возникла необходимость изыскания дезинфицирующих препаратов, пригодных для обеззараживания кишечного сырья при изготовлении кетгута.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изыскание новых дезинфектантов для обработки кишечного сырья при изготовлении кетгута. Основными задачами исследований являлись:

1) Изучить микрофлору кииечкого сырья, используемого для изготовления кетгута;

2) Изучить бактерицидные свойства препаратов ДП-2 и $-761 в зависимости от температуры окружающей среда и концентрации рабочего раствора;

3) Изучить токсикологические свойства препаратов ДП-2 и 5-761;

4) Изучить обеззараживающие, свойства препаратов ДП-2 и 2-761 на микрофлоре кишечного сырья в условиях производства;

5) Провести производственные комиссионные испытания отобранных препаратов применительно к технологии изготовления кетгута.

Научная новизна работы. Изучена микрофлора кишечного сырья, поступающего из 15 мясокомбинатов различных регионов на Казанский кетгутный завод. Изучены её количественные и качественные изменения в процессе изготовления кетгута.

Установлено, что при обеззараживании кишеичого сырья, используемого для изготовления кетгута, препарат ДП-2 в 0,05^-ной концентрации позволяет ингибироаать рост микроорганизмов на 96 часов. Препарат (5-761 в концентрации 0,2% обеспечивает бактери-цидность технологического раствора и кишечного сырья и течение • 12 суток.

Впервые получены новые данные о возможности использования новых дезинфектантов (ДП-2 и Ф-761) для обеззаратазаиия кишечного сырья в процессе изготовления кетгута (положительное решение ВНИИГПЭ на выдачу патента ,\'= 5006229/Г2/057120 от 1.07.91).

Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований предложены новые высоко эффективные дезинфектанты, обеспечивающие надежное обеззараживание кишечного сырья при изготовлении шовного материала - кетгута. Дезинфектанты ДП-2 и $-761 обладают высокой бактерицидностью, не влияит на качество кишечного сырья, хорошо растворяются в воде, не обладают токсичностью и аллергизируквдтаи свойства:.:;!. Внедрение рззработанних рекомендаций по применению дезинфектантов ДП-2 и 0-761 производство позволило повысить качество выпускаемой лрод„ ::цки - кетгута и снизить затраты на его производство.

Основные полокения диссертации, выдвигаемые на садиту:

- результаты изучения бактерицидных, дезинфицирующих и токсикологических свойств препаратов Д.7-2 и $-761;

- данные о возможности использования новых дезинфектантов ДП-2 и 3-761 для обеззараживания килечного сырья в процессе изготовления кетгута.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

1) научной конференции "Экологические проблем фармакологии и токсикологии". Казань, 1990;

2) республиканских научно-производственных конференциях, Казань, 1990; 1991 г.

3) научной конференции "Актуальные проблемы дезинфекции, стерилизации, дезинсекции и дератизации". Москва, 1992.

Публикация. По теме диссертации опубликовано 5 работ; получен (в соавторстве) патент на изобретение "Средство для обеззараживания коллагенсодержацего сырья" (заявка 5006229/12/057120 от 1.07.1991 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа содержит 13 таблиц, 13 рисунков. Список литературы включает 216 источников, из них 84 иностранных.

- б -

СОЕСТВЕНШЕ ИССЩОЗАШЯ

Материал и методы исследования. Работа выполнена в лаборатории вирусологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института в 1983-1032 гг. 'Отдельные этапы исследований по изучению бактериальной обсемененности кишечного сырья на технологических этапах изготовления кетгута проведены в производственной лаборатории КШЙО "Татхимфармпрелараты", патоморфологичео-кие исследования - на кафедре гистологии Казанского ветеринарного института км. Н.Э.Баумана.

В процессе выполнения работы били использованы: стам.\;ы кишечной палочки (0126), золотистого стафилококка (Р-209),

(К—016), обладавшие характерными морфологическими и биохимическим свойствами. Культивирование микроорганизмов проводила на твердых питательных срсдах в условиях термостата при температуре 37°С. Лдекифшяцию выросших колоний вели визуально, используя стереоскопический микроскоп ыБС-9, руководствуясь при этом дифференциальными признака:.;:!. Кроме того, для идентификации микроорганизмов из выросших колоний готовили мазки, которые окрашивали общепринятыми методами Грама, Пешкова и Козловского. Готовке мазки просматривали под иммерсионной системой светового микроскопа. Подопытные кивотные: взрослые белые крысы (массой 200250 г) - 60; морские свинки (массой 350-400 г) - 36; взрослые кролики (,;ассой 2,5-3 кг) - 76. Питательные среды: мясопептонный агар (МПА) и мясопептонный бульон (МПБ) - 350 пробирок; солевой агар - 300 пробирок; среда Зндо - 250 чашок; среда Вильсон-Блере - 52 пробирки.

Изучение Сактерпостатического действия препаратов и определение их бактерицидности проводили по общепринятым в бактериологии метода;.;, описанным Еершиным Г.Н. (1971), Вашковым В.А. (1977); при ото:.! использовали различные концентрации (0,1 - 3%) испытуе-(л,;х препаратов. Учиглвая технологический процесс обеззараживания китазчного сырья, опыты проводили при различных темепратурах внесшей среды (+4°;,+18-22°; +37°С) и при температуре +37°С рабочего раствора. Результаты опатов учитывали через 24 часа; при этом отмечал;! наличие роста или оадершеу роста культур в среде.

Степень усиления бактериостатической активности подсчитали с

помощью метода Финнея (1952 г.).

Исследования по изучения микрофлоры кишечного сырья, используемого для изготовления кетгута, проводили в производственной лаборатории завода иовио-хирургических материалов и в лаборатории вирусологии ВНИЗИ г.Казани. При этом использовали общепринятые в бактериологии метода, а также руководствовались "Мотодикой количественного определения обсемененности кишечного сырья на различных этапах технологического цикла", утвержденной Генеральным директором КПХФО "Татхимфармпрелараты" 4 февраля 1985 г.

Изучение токсикологических свойств препаратов ДП-2 и Ф-761 проводили по общепринятой методике (Саноцяий И.Б., 1970; Третьяков А. Д., 1983).

Острую оральную токсичность изучали на белых лгаа; (массой 20-25 г) и белых крысах (массой 200-250 г). Препараты вводили непосредственно в желудок из такого расчета, чтобы объем его не превышал 0,5 мл и 4,0 - 4,5 мл соответственно. Дозы исчисляли в мг действующего вещества на кг массы. Величину ЛД^д вычисляли по методу Карбера (1931), Полученные величины ЯД^д при введении в яелуцок классифицировали по 4 классам токсичности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

'Изучение кумулятивных свойств препаратоз проводили по методу "Субхронической токсичности", предложенному

Ьыраженность кумулятивных свойств препаоата оценивали по величине коэффициента кумуляции по формуле, предложенной Наган Ю. С., Станкевич В.В. (1954).

Оценку местно-раздражающего действия проводили согласно методическим указаниям "Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покров': и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи" (1980). В однократных и повторных опытах использовали кролихов и белых крыс.

Определение кожной резорбции проводили в подостром эксперименте (Ю - 20 аппликаций) с ежедневной экспозицией 4 часа для крыс и 2 часа для мышей. Нанесение препарата осуществлялось "пробирочным методом" на 2/3 хвоста животных, что составляло % поверхности тела. Обследование подопытных животных проводили через 5-10-20 аппликаций. Эффект кожной резорбции оценивали по возможной клинической картине отравления или смертельному исходу.

Исследование сенсибилизирующих свойств препаратов проводили

методом Алексеевой-Петкевич (1980) на морских свинках.

Хроническую токсичность препаратов изучали на кроликах и белых крысах. Животный наносили средство в 4^-нах концентрации ях ежедневно в течение 12 месяцев,, При этом вели клиническое наблюдение, изучали гематологические (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкофорнулу) и биохимические (содержание общего белка, активность щелочной фосфотазы, содержание сиаловых кислот) показатели.

Гематологические исследования проводили общепринятыми методами. Подсчет форменных элементов крови (лейкоцитов, эритроцитов) - автоматически на счетчике микрочастиц "^¿со

Содержание гемоглобина определяли по Сали. Исследование лейкоцитарной формулы крови проводили в окрасенных по Романовскому-Гпмза мазках периферической крови.

Количество обцего белка определяли рефрактометрическим истодом (на рефрактометре Ш5-201). фракции белка сыворотки крови -методе:.: электрофореза г, ПМГе по И.К. (1931).

Уровень сиаловнх кислот и активность щелочной фосфотазы -общеприняты?:« методами (Какдрахкн И.П., 1985).

Изучение пгтоморфологлческой характеристики органов животных, обработанных препаратом Д1-2 и 5-7&1, проводили на крысах и кроликах. Длл этого из внутренних органов подопытных кквотних готовили гистосрезы с целлоидином и окраклвали их гематоксилин-эозином. Гистосрезы внутренних органов '(печень, почки, селезенка, легкие, сердце) и коаи с места аппликаций готовили по Меркулову Г. А. (1969).

Производственною испытания препаратов Д1-2 и <¡>-761 проводили на заводе ЬКМ 1ШХ50 "Татхямфармпрепараты" совместно с сотрудника:.;:: произгодетвенноГ! лаборатории в условиях технологии, принятой на завода. В технологическом процесса на первоначальной стадии обработки кишечного сырья - "замочка" - в качестве антисептиков применяли препараты ДП-2 I! Ф-761. Концентрация препарата Л1-2 в замачивающем. растворе С^ - 0,05$. Технологический раствор С> содержит 0,5$ кальцинированной сода и 0,23 ПАВ Скнтаф-794 с умягченной воде^ Во втором случае в 1;ачсстве поверхностпо-ак-тнвього геа;ества взамен Синтсф-794 в новом замачивающем средстве использовали препарат 2-761, обладавшего также и антисептически;.; свойством. Замачивакудий раствор содержал 0,5% кальцинированной

сода и 0,25? препарата $-761 в умягченной воде. Контролем служило кишечное сырье, замоченное в растворе ^ без антисептиков. Экспозиция замочки - 78 часов. После замочки кишечное сырье обрабатывалось последовательно по общепринятой-технологии. Била наработана опытная партия нитей кетгута различного калибра (Р 0-1-2-3-4-5-6) с применением в качестве антисептиков 0,05%-ноЙ концентрации препарата ДП-2 и 0,2%-ного $-761. Б дальнейшем изучали физико-химические показатели готового кетгута общепринятыми методами.

Необходимый цифровой материал обработан статистически по методу вариационной статистики с учетом достоверности по формулам с применением показателя достоверности Р, устанавливаемого по таблице Студента.

РЕЗУЛЬТАТА ИССЛЕДОВАНИЯ

Микробная обсемененность кишечного сырья, используемого для изготовления кетгута

Анализ количества микрофлора кишечного сырья, поступившего из 15 мясокомбинатов, показал, что общее микробное число в сырье из 'различных мясокомбинатов различно и значительно колеблется от 6020 до 116 клеток на I см кишечной трубк: . Результаты данных исследования представлены в таблице I.

Повторный анализ материала из одного и того же мясокомбината, взятогс(в различное время года, также значительно отличается. Так, например, микробное число для сырья Актюбинского мясокомбината в одной партии поступившего сырья - 850,0; в другой - 330,0; для сырья Иркутского мясокомбината, соответственно, - 2800,0 -240,0; Ташкумырского - 214,0 - 670,0. Значительные колебания количества микробного числа, вероятно, зависят от времени года, качества консервирования кииок, а также от продолжительности транспортировки сырья, так как засолка кишок не уничтожает микроорганизмы, а лииь задерживает их развитие на определенное время, поэтому при хранении, киаечного сырья возможно втс$чкое загрязнение его микрофлорой.

Качественный состав микрофлоры кишечного сырья с различных

Таблица I

Показав;ди микробного числа для кишечного . сырья с различных мясокомбинатов до начала опыта

n?ni Наименование мясокомбинатов' ¡Микробное число в I см ;кишечной трубки

I Алма-Атинский 1000,0

2 Актюбинский 850,0-330,0

3 Бакинский 485,0

4 Ивановский 630,0

5 Краснодарский 1180,0

б Иркутский 2800,0-240,0

7 Карагандинский 6020,0

8 Каменский 230,0

9 Минеральных вод 171,0

10 Нальчикский 1200,0

И ГУбачинский (Киргизия) 1800,0

12 Серноводский 116,0

13 Семипалатинский 4560,0

14 Ташкентский 2486,0

15 Ташгсушрский 214,0-670,0

мясокомбинатов изучали в течение двух лет (1989 и 1990 года) в летние и оиыляе гприода. Результат исследований представлены в-таблице 2.

Га таблица 2 видно, что кишечное сырье различных мясокомбинатов обсеменено разнообразной микрофлорой. Постоянно встречаш?-.ся такие бактерии, как стафилококки, пасечная палочка; часто выделится аороб(ше спорьаз форлн бап'ер.Ш С&е.епЫьое^^хич ) Зч&ч'Шь, и др.), ре;ке - схрспхокгкки Ъе>£Са2 ,

CAif.Ci.tS , Еаз. Р'-ео^оти», , ей /iiij.ro С^'сли^

5, др. Так, напри :ср, споуовие апазроба ¿х^-с/чищ обнаружены в сырье, постушшсел из Ивановского и Тшкентского кясокох-бянатоо, - нз ¿щоокомбпната минеральных вод

. Следует отметить, чго в посева;: иногда паяю обнаружить рост Еирулснгш;: и езирулентшгх Етакгов • . Из сырья,

Таблица 2

Качественный состав микрофлоры кишечного сырья, полученного с отдельных мясокомбинатов

Выделена микрофлора

Ж151ТЩЖ

^.«11111

1 Алма-Атинский

2 Актюбинский

3 Ивановский

4 Краснодарский

5 Иркутский

6 Карагандинский

7 Казанский + + +

8 йабачинский * + + (Киргизия)

9 Семипалатинский +

10 Ташкушрский +

11 Ташкентский

12 Читинский +•

+

+ + +

+ +

+ * + + +

+ + + + +

1990 год

1 Алма-Атинский +

2 Актюбинский 43 Бугульминский +

4 Волгоградский

5 Минеральных +• + вод

6 Нальчикский +

7 йыбачинский + (Киргизия)

8 Семипалатинский +

9 Краснодарский +

10 Ташкумырский +

11 Ташкентский +

12 Читинский

+ +

+ + + + •+■ + + + + + +

+

+ +

+ т

+

+

+

Примечание: В таблицах отмечены знаком "+" виды бактерий,

которые обнаружены при высевах из кишечного сырья.

поступившего в 1989-1990 г.г. из мясокомбинатов Актюбинский, Алма-Атинский, Иркутский, Семипалатинский, Шбачинский (Киргизия), а также Читински!:, Краснодарский и Еугульминский, на питательных средах были обнаружены дромки; из сырья мясокомбинатов Карагандинский, Ташкентский - Еас. О ¡рСи^££ий и в двух случаях из сырья, поступившего из Ивановского и Семипалатинского мясокомбинатов, нами были выделены микроскопические грибы из рода тче.

Анализ сырья, поступившего из одного и того же мясокомбината в различные года, свидетельствует о значительном колебании в качественном составе микрофлоры. Так, например, в сырье мясокомбинатов, исследованного нами в 1989 и 1990 годах, в основном, совпадало выделение таких бактерий, как стафилококки и кишечная палочка (Е. соД' ), остальная микрофлора имела значительные колебания б качественном составе. Так, при исследовании сырья, поступившего в 1989 г. из Изановского, Семипалатинского, Читинского мясокомбинатов, в 3-х случаях были выделены микроскопические грибы из рода и в 2-х случаях из сырья мясокомбинатов Карагандинский и Ташкентский - 4-р с(мХ , тогда как при исследованиях сырья из этих же мясокомбинатов в 1990 г. ни в одном случае рост грибов не был обнаружен.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о высокой обсеыененности кишечного сырья, используемого для изготовления кетгута, микроорганизмами, относящимися к различным группам. При этом необходимо отметить, что при задержке обработки кишечного сырья и несоблюдении санитарного режика происходит интенсивное размножение микроорганизмов, что приво'дит к снижению качества кетгута за счет ферментного расцепления сырья микроорганизмами.

Бактериостатические и бактерицидные свойства препаратов

Первичному испытанию на бактериостатическую и бактерицида .л активность было подвергнуто десять препаратов, относящихся к различным группам соединений. Из числа исследованных препаратов наиболее приемлемы для дезинфекции кишечного сырья оказались -натриевая соль трихлоркзоциануровой кислоты (ДП-2) и препарат Ф-761 - -дкметил- Г/ алкил- ///изононилфеноксидекрСэтилекок-си)карбонил/а.\щоний хлорид фракции С^д-С^, общей формулы:

- СЩ>- о ел*.0),0—с.- ¡г^дчеГ

° Ь,<5

По физико-химическим свойствам препарат Ф-761 представляет собой жидкость светло-коричневого цвета, со средней молекулярной массой 1000. Массовая доля основного вещества согласно ТУ - не менее 90$; примеси: толуол, свободные амины фракции CjQ-Cjg не более 1,0%; температура воспламенения - 227°С. Препарат практически нелетуч; давление насвденних паров препарата при 20°С -0,0034 мм рт.ст. Растворимость в воде при 23°С составляет 17,5 г на ТОО мл воды. На воздухе не окисляется, не полимериэуется, но холоде могут образоваться кристаллы.

Препарат ДП-2 - хлорсодеркащ&я композиция на основе трихлор-изоциануривой кислоты к ашоннйшк солей, содержащая не менее 40$ активного хлора, при растворении п воде образуется натриевая соль трихлоризоциануровой кислоты. Композиция представляет собой мелкодисперсный порошок белого цвета, хорошо растзоримый в воде. При правильном хранении композиция стабильна в течение 3 лет (срок наблюдения). Композиция сохраняет свою активность в кислой, нейтральной и щелочной среде и только при рН, равном 12, ее активность резко снижается. Это свойство позволит применять ее при различной щелочности природной воды.

В результате проведенных исследований установлено, что препарат ДП-2 обладает бактерицидным действием в отношении Е.соб! в 0,05%-ной концентрации, в отношении cíw"<i£.t{¡? в концентрации 0,1% при экспозиции 30 минут. В отношении спорообразу-щнх бактерий ( CÍ, ) необходима 0,5%-ная концен-

трация препарата при экспозиции 120 минут. Индекс избирательности бактериостатического действия ДП-2 составляет для Е.со- e¿ 1080000, cUfte.43 540000, &£. рсъЛьлпуспА 27000. Индекс избирательности бактерицидного действия составляет соответственно 27000, 13500, 2700.

Прзпарат 3-761 бактериостатическим действием обладает з концентрации 0,00125;?; бактерицидпость его проявляется в 0,1$-иоП концентрации при экспозиции 30 минут. Еактрицидностьа препарат обладает в 1%-ной концентрации при экспозиции 60 минут. И>декс избирательности бактериостатического действия <3-761 для Е.со ц Sí. dxftcu^, ' составляет 2 млн, для Cf. _ -

100000. Индекс избирательности бактерицидного действия составляет соответственно 25000, 25000, 2500.

Повышение температуры до 18-22°С не оказывает существенного влияния на бактерицидную активность; при температуре внешней среды 4-37°С бактерицидный эффект достигается при экспозиции 20 минут. Исследования по сравнительному изучении бактерицидных и бак-териостатических свойств композиции препарата Ф-761 и карбоната натрия (кальцинированной сода) показало, что карбонат натрия является сильным активатором препарата Ф-761. Коэффщиент синергизма при этом равен 8,01.

Следовательно, использование предлагаемой композиции позволит в несколько раз снизить расход препарата Ф-761.

Изучение токсикологических свойств препаратов ДП-2 и Ф-761

Одним из требований, предъявляемых к дезинфицирующим средствам, наряду с высокой биологической активностью является отсутствие вредного воздействия на организм как в процессе их применения, так и в отдаленные сроки,

В настоящее время принято судить о токсичности веществ по величине их смертельной дозы Ш^о^ определяемой экспериментальным введением испытуемого вещества внутрь лабораторным животным (Паршин Г.И., 1971).

Исходя из вышеизложенного, нами проведено изучение токсикологических свойств препаратов ДП-2 и Ф-761.в объеме токсикологического паспорта, а такие хроническая токсичность их в длительном эксперименте.

B-результате было установлено, что предложенные препараты относятся к III классу опасности по ГОЗДУ 12Л.007-76.

Среднесмертельная доза препарата Ф-761 для белых мышей составляет 2500 мг/кг, ДП-2 - 1350 ыг/кг.

Изучение раздражающего действия отобранных препаратов показало, что при введении препаратов ДП-2 и S-76I в кокызнктиваль-ный мешок в концентрациях, превышающих в 3-4 раза предлагаемые в производстве (ДП-2 - 0,05; 0,2 и 0,6£-ной; $-761 - 0,2; 0,6 и 2&-ной), при наблюдении в течение 5 дней каких-либо изменений

конъюнктивы глаза, за исключением легкого покраснения и гиперемии век, не выявлено. При оддократном нанесении на конъюнктиву глаза 2СЙ-ного раствора $-761 наблюдали отек слизистой и окружающей ткани, слезотечение. Однако через 3 дня наступало полное выздоровление.

Изучение местно-раздражавцего действия препаратов ДП-2 и 3-761 показало, что многократное нанесение препарата $-761 в 0,2; 0,6 и 2/6-ной концентрации не вызывает признаков дерматита. Наблюдались лишь легкая гиперемия и шелушение козси, которые исчезали к 3 дню наблюдения. Однократное нанесение препарата на чистую коау в 20^-ной концентрации не вызывает каких-либо видимых изменений.

При нанесении препарата ДП-2 в концентрациях 0,2 и 0,6% были установлены признаки поверхностного дерматита, но без образования корки и трещин, что свидетельствует о слабом местном действии. Концентрация препарата 0,05? не вызывала видимых изменений на месте аппликации. Таким образом, установлено, что указанные препараты в рабочих концентрациях и в 3-10 раз превышающие их, не вызывают каких-либо значительных изменений. При закапывании соответствующих растворов в ко1л>юнктивальный мешок установлено, что препараты вызывают гиперемии, раздражение мокет сохраняться в течение 2 дней, после чего полностью исчезает.

Исследованием по определению иодной резорбции установлено, что аппликация препаратов ДП-2 и Ф-761 в дозах, рекомендованных для производства и в 10 раз превышающих их концентрациях ни в о,дно?.! случае отравления и смертельных неходов не вызывает, что свидетельствует об отсутствии келно-резорбтивкого действия указанных препаратов.

Определение сениснбилнзирутл'их свойств HcüLiTyr.vjx препаратов показало, что при наиэсепп ксс-сдуеияс яр^ларзгоз на псъ.у морских свинок и кроликов, а тлглэ прл знутрллоднс! гг.едо:-/: пх этпп епдгм газоткк происходл? дегкзл сс:-:с::б::.'::па::::л '.а. Реак-

ция проявляется с лллз кз:-грас::с:"1д ;:с.и, с>:-'ос:.'. зллд^рллсл л па-лп'П'я орлте'л;. При 14-гл крзтлол аппликации пррпзра?а нг. ::с:.ту п " 10/5-най кслцеитрекли у 'С>, а прл пнутрллолне:! ззэденг.л - в дозэ 200 нкг у 70^ итоттлл.с ст'чллна сглбол !*зсшзя реаэт^я на ксг.е. Тат:гм образом, устснзз.'.снз, т.—а согласно "^зтог^гсеским указаниям по определил7} токси'плтт с-.сЛсгэ пр'пг^тог' (1?С8), препарат

ДП-2 относится к средним, а препарат Ф-761 к слабым аллергенам, что удовлетворяет требования по использованию указанных препаратов в производстве.

Изучением хронической токсичности препаратов ДП-2 и Ф-761 на кроликах (срок наблюдения 12 месяцев) в 1/20 ЛДвд статистически достоверно установлено снижение количества эритроцитов и гемоглобина, начиная с 4 месяца после начала опыта. В лейкоформуле подопытных животных отмечали статистически достоверное увеличение процента эозинофи31?Реэ 2 и 5 месяцев после начала опыта, снижение процента сегмйтоядерных нейтрофилов, начиная с 4 месяцев и увеличение процента лимфоцитов на 3 месяце наблюдения. Следует отметить, что на 7-8 месяце наблюдений соответствующие показатели имеют тенденцию к нормализации. Статистически достоверных изменений в биохимических показателях сыворотки крови подопытных животных (активности щелочной и кислой фосфотаз, уровню сиаловых кислот), за исключением увеличения уровня сиаловых кислот на 10-ый день наблюдения, на протяжении всего срока наблюдения не установлено.

Характер изменений в гематологических и биохимических показателях подопытных кроликов при изучении хронической токсичности препаратов <5-761 и ДП-2 в 1/50 ЛД^ был менее выражен, чем у этих препаратов в дозе 1/20 ЛД^. Так, статистически достоверно установлено уменьшение количества лейкоцитов на 5 месяце наблюдения. Статистически достоверные изменения в лейкоцитарной формуле подопытных кроликов заключались в увеличении процента сег-ыентоядерных нейтрофилов на 3 и 5 месяце наблюдения. Однако к концу опыта эти показатели были близки к соответствующим показателям животных контрольной группы. Статистически достоверных изменений в активности кислой и щелочной фосфотаз, уровне сиаловых кислот в сыворотке крови подопытных животных в течение всего срока наблюдения не установлено.

При изучении хронической токсичности препарата Ф-761 на белых крысах в дозах 1/20, Т/50 статистически достоверные изменения были отмечены лишь в лейкоцитарной формуле и выражались в уменьшении процента сегментоядерных нейтрофилов и увеличении процента лимфоцитов, начиная с пятого месяца наблюдения. При этом статистически достоверных изменений в количестве лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, активности фосфотазьг и уровне сиаловых

кислот в течение 12 месяцев (срок наблюдения) не отмечали.

Препарат ДП-2 в дозах 1/20 и 1/50 JlJ^g в течение всего срока наблюдения не вызывал статистически достоверных изменений в гематологических (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина в лейкоцитарной формуле) и биохимических (активность щелочной и кислой фосфотазы, уровень сиаловых кислот в сыворотке крови) показателях подопытных крыс. Следует подчеркнуть, что установленные при изучении хронической токсичности ДП-2 и 5-761 изменения в гематологических и биохимических показателях подогатых кроликов и белых крыс имеют незначительный характер.

Заключительным этапом изучения токсикологических свойств, в частности, хронической токсичности явились патсморфологические исследования материалов (кола с места.аппликации, внутренние органы). При этом макроскопически ридимых патоморфологических изменений во внутренних органах опытшх и контрольных .tkdoiüíix не обнаружено. На коже п области нанесения препгратов отмечали попиленное шелушение эпидермиса, подобное таковому у интактннх кроликов и крыс, на кояу которых п эти же сроки ияносилн дистиллированную поду.

При гистоииследовании органов и тианеЯ зиготных, находящихся п длительном эксперименте (360 дней), во всех четырех опытных группах кроликов существенных различий сикроструктуры не выявляли. У крыс вы: 'лены гистологические изменения иммунологического характера в виде перквоскулярных лиу^оиднух инфильтратов и избыточного содержания тучных клеток в легких, разрешение лимфоидной ткани и дезорганизация трабекуд в селезенке. Установлена тшехе зернистая дистрофия паренхиматозна:: элементов пен;;;,;, почек и миокарда.

Анализируя реоультаты мскроснспнчусксгэ и гистологического исследования органов и ткенгй ошгтге и ког.'ролымх лпволгл::, нлхо-диеиихся в детальней 0ЕСпер;г«е;:тз, по изучен:'.» воздействия покойной аппликрп;;п преларлтез ДП-2 :: o-TóI з различной »снаеигрзшга, установлена однотипности стру::'."ур1 ::сс;:одуь:..:j;c o¿b2icros з j'tc::o-р::::ен7альпы:г и контроль:»« группа;:. У сг:;;:-;::,::: ::л;зог::ых (.;рол::::п а irpicu) в морфологии огилопгг::": ;:з нгбл:зделось. Сз-здует что у крыс о"г;"ет]с!::.! г.:::.:, r::cj?'cr:r:•■гнеыэпия ;п.:мупо..апологического ::эра::тера :s п::тэ пср::::ос:уляр;их лг-'фоиднцх инфильтратов и избыточного содег-агня ту--:п7.:с клеток и легких, раз penetran

лимфоидной ткани и дезорганизации трабекул в селезенке, зернистой дистрофии паренхиматозных элементов печени, почек и миокарда. Однако эти изменения были обнаружены и у крыс контрольной группы, поэтому не могут быть отнесены за счет воздействия испытуемых де-зинфектантов.

Принимая во внимание физико-химические свойства препарата 5761, исследование биологической активности его в эксперименте при ингаляционном пути поступления в организм не проводилось. Однако в условиях синтеза препаратов в ГПУ "Татнефтепромхим" проведено определенП^возможного их содержания в воздухе рабочей зоны спект-рофотометрическим методом, разработанным в ИО*>Х им. А.Е.Арбузова Казанского НЦ РАН. Отбор проб воздуха (130-320 л) проведен в наиболее опасных местах (в рабочей зоне у реактора и на расстоянии 3 м от реактора). Результаты не выявили ни в одном случае в воздухе наличие даже следов препарата, что позволило сделать заключение об отсутствии необходимости по физико-химическим свойствам нормирования в воздухе рабочей зоны препарата $-761.

Таким образом, проведенными исследованиями установлено, что по параметрам изученной токсичности препараты ДП-2 и Ф-761 удовлетворяют требования, предъявляемые к дезинфицирующим средствам. Согласно методическим указаниям "Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи", М., 1980 г., препараты ДП-2 и Ф-761 вполне могут быть предложены в качестве дезинфицирующих средств для обеззараживания кишечного сырья при изготовлении кетгута.

Обсеменнность кишечного сырья в процессе изготовления опытных серий кетгута и производственные испытания его

Исследования кишечного сырья, обработанного препаратами ДП-2 и Ф-761 в процессе изготовления кетгута,изучали на этапах "замочки" и "вязки" кишечного сырья. При этом установлено, что обсеме-ненность кишечного сырья после замочки с антисептиком ДП-2 в течение 78 часов резко снижается по сравнению с контролем. Так, при разведении микробной вытяжки 1:100000 после замочки кишечного сырья е 0,05^-ном растворе ДП-2 общее микробное число на I см кишечной трубки составило менее 30, после операции вязки - менее

100 микробных тел, тогда как в контроле был сплошной рост. При разведении микробной вытяжки 1:10000 после замочки через 78 часов общее число микробных тел в кишечном сырье составило не менее 300, после операции вязки - более 300 микробных тел, а в контроле - сплошной рост бактерий. И, наконец, при разведении микробной вытяжки 1:1000 через 78 часов после замочки получили сплошной рост, после операции вязки - более 300 микробных тел, а в контроле - сплошной рост, после операции вязки - более 300 микробных тел, а в контроле - сплошной рост.

Общее микробное число кишечного сырья после замочки в 0,2£-ном растворе препарата Ф-761 в течение 7В часов также резко снижается по сравнению с контролем. Так, после замочки в растворе Ф-761 при разведении микробной рытэтки Т:ГОСООО общее микробное число на I см кишечной трубки составило менее 30, после операции вязки - более 30, а в контроле - более 300 микробных тел, то есть в 10 раз выше. При разведении микробной гмтяпи'и 1:10000 после замочки обсемененность составила 20, после операции вязки - более 300 микробных тел, тогда как в контроле наблюдался сплошной рост микробов. При разведении микробной вытяжки 1:1000 обкее число микробных тел составило после замочки более 100, после вязки -300, а в контроле - сплошной рост.

Таким образом, препараты ДП-2 и Ф-761 на этапах замочки и вяз-кп'резко снижали общее микробное число по сравнении с контролем.

В дальнейшем, при сравнительном изучении сбсемененности кишечного сырья (0МЧ) микрофлорой на первых четырех этапах изготовления кетгута до и после обработки их разлнчгамн антисептиками установлено, что 0,05^-ный растЕор ДП-2 и 0,23~шй раствор препа-та i-761 действуй! на кишечную микрофлору значительно (вЗ,5 раза) гют, чем используегай до сих пор в технологическом процессе изготовления кетгута состав антисептиков.

Изучением влияния предложешщх дезннфектантоз (ГЛ-2 — 1-761} и технологического дезкнфектента (П'З "Снкт.-у-Т?*4 =- сульфохлерзя-тин) на фчзпко-хигип-есг'че покезатели кетгута установлено, что яти показатели кетгута, изготовленного из к;:зеч:-:зго с-:рья, обработанного общепринята?!;! на производстве антисептиками. Так, содержание влаги в готовом кетгута допускается в нориз белее 20^, а в кетгуте, изготовление?) с применение?! препарата ДП-2, содер-шше влаги колебалось от 8,5 до 9,63. Содержание Кировых веществ допуска-

ется в норме не более 2,555, а в кетгуте, обработанном испытуемым антисептиком - 0,21 - 0,33$ и т.д. Показатели прочности кетгута также оказались выше после обработки кишечного сырья препаратом ДЛ-2. Так, у нулевого калибра нитей разрывная нагрузка в простом узле до и после стерилизации составила 2,1 - 1,5 кГ/с, а в норме -1,2 - 1,1 кГ/с. У всех калибров нитей (от 0 до 6) разрывная нагрузка в простом узле (кГ/с) у наработанного нами кетгута была выше нормы.

Физико-химические показатели кетгута, изготовленного из кишечного снрья, обработанного антисептиком Ф-761, также соответствует нормативным требованиям ГОСТа, предъявляемым к готовому кетгуту, а показатели прочности выше, чем в требованиях ГОСТа.

Так, разрывная нагрузка в простом узле (кГ/с) в зависимости от калибра нитей до стерилизации колебалась от 3,0 до 6,Е$, после стерилизации от 2,9 до 6,%*, тогда как в норме эти показатели составляют соответственно от. 2,5 до 6,3% и от 2,25 до б,?®.

Следовательно, у наработанного в технологическом цикле с использованием препарата Ф-761 кетгута все калибры нитей (от 2 до б) имели больше прочности, чем это предусмотрено в норме. В результате проведенных комиссионных испытаний установлено, что сырье, замоченное в испытуемых составах с применением в качестве антисептиков как препарата ДП-2 , так и препарата 5-761 соответствует технологическим требованиям. Готовый кетгут соответствует требованиям технологических условий.

Таким образом, в результате проведенных исследований предложены препараты ДП-2 и Ф-761 в качестве средств для обеззараживания и обезжиривания кишечного сырья при изготовлении кетгута. Препараты малотоксичны, не обладают кумулятивными, аллергизирув-щими свойствами. Новизна данной работы подтверждена положительным решением ВНМГГО на выдачу патента; внедрение указанных препаратов при производстве кетгута подтверждены соответствующими актами ко-миссонных и производственных испытаний; в 1991-1992 годах производство кетгута различных калибров с использованием препаратов ДП-2 и Ф-761 составило около 8 млн погонных метров.

ШВ0Д1

X. Видовой состав микрофлоры кишечного сырья, поступающего на Казанский завод ШХМ с различных мясокомбинатов для изготовления кетгута,отличается как по качественному,так и количественному составу микроорганизмов,среди которых встречаются и патогенные вида бактерий.

2. При задержке обработки ккпечнсго сырья и несоблюдении санитарного режима на первых этапах изготовления кетгута происходит интенсивное размножение микроорганизмов в кишечных полосах, что приводит к снижению качества кетгута за счет ферментативного расщепления сырья микроорганизмами (кишечная палочка, протеи, стафилококки, стрептококки, энтерококки, различные споровые бактерии и микроскопические грибы).

3. Применяемый по регламенту для обеззараживания микрофлоры кишечного сырья при изготовлении кетгута 1^-ный раствор импортного препарата - сульфохлорантина - значительно снижает инициальную контаминацию кишечных полос, однако высокая стоимость и дефицитность его создают определенные сложности в работе, свидетельствуют о необходимости изыскания доступных и эффективных антисептиков для обработки кишечного сырья при изготовлении кетгута.

4. В результате изучения антимикробных свойств десяти химических соединений были отобраны дезинфицирующие средства ДП-2 и Ф-761, обладающие высокой бактерицидной активностью и пригодные для обеззараживания кишечного сырья в производстве кетгута.

5. Натриевая соль трихлоризоциануровой кислоты (ДП-2) обладает бактерицидным действием в отношении Е.со&, и ОмЫм*, в 0,005^-ной концентрации при экспозиции 30 минут, в отношении спо-рообразующих бактерий ( &• р) . в 0,5^-ноЙ концентрации при экспозиции 60 минут.

6. Препарат 5-761 из группы соединений изононилфеноккпгали (этиленокси)карбонилыетил аммоний хлоридов бактериостатическим свойством обладает в концентрации 0,00155, бактерицидность его проявляется в 0,155-ной концентрации при экспозиции 30 минут, а в отношении спорообразушдах бактерий - в 1Й-ной концентрации при экспозиции 60 минут.

7. Препараты ДП-2 и 5-761 в дозах 1/20 и 1/50 ЛДвд при длительной аппликации животным (360 дней) не вызывали статистически достоверных изменений в гематологических и биохимических показа-

телях подопытных крыс. Отмечались лишь изменения в лейкоцитарной формуле подопытных кроликов; увеличился процент сегментоядерных нейтрофилов на 3-5 месяцы наблюдения, которые к концу опыта были близки'к соответствующим показателям контрольной группы.

8. Препараты ДП-2 и £5-761 по токсикологическим показателям отнесены (согласно ГОСТу 12.1.007-76) к умеренно опасным соединениям (3 класс опасности), являются малотоксичными, не обладают кумуляцией, кожно-резорбтивным и сенсибилизирующим действиями; удовлетворяют требования, предъявляемые к дезинфицирующим средствам и могут быть использованы в качестве дезинфицирующих средств для обеззараживания кишечного сырья при изготовлении кетгута.

9. Добавление карбоната натрия к препарату Ф-761 в соотношени1' 1:0,1-0,2 усиливает его антибактериальное действие от 2 до 8 раз, снижает токсичность, повышает экономическую эффективность предлагаемой композиции по сравнеш-.я с исходным препаратом Ф-761 и удовлетворяют требования технологических процессов изготовления кетгута.

10. Производственные испытания показали, что применение в качестве антисептиков препарата ДП-2 в концентрации 0,05$, препарата $-761 в концентрации 0,2д соответствует технологическим требованиям. Готовый кетгут соответствует техническим условиям.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ДРВДШЕНЙЯ

1. Для обеззараживания килечного сырья в процессе изготовления кетгута предлагаются новые высокобактерицидные и хорошо обезжиривающие сырье антисептини ДП-2 и 5-761, не облад; шие токсичностью, кумуляшей, кожно-резорбтивными, сенсибилизирующими свойствами, удовлетворяющие требования технологических процессов производства кетгута (положительное решение ВНИИГШ на выдачу патента № 5006229/.12/057120 от 1.07.1991 и .акта комиссионных испытаний от 24.02.1989 г.

2. Рекомендации по применению композиции, состоящей из карбоната натрия и препарата $-761 в соотношении 1:0,1-0,2, обладающей высокой бактерицидной активностью и низкой токсичностью согласно акта приемочных испытаний установочных серий поверхностно-активного вещества 6-761, обладающего бактерицидным действием, от 19.04.1991.

•СПИСОК ОПУБЛИКОВАНИЙ РАБОТ ПО ТЕЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Угрюмова B.C., Равилов А.З., Чернышева 1.3., Сафина Ч.М. Обеззараживание кишечного сырья при изготовлении кетгута. -Тезисы докладов респ. научно-пронзв. конф. 1990,- с. 55.

2. Угрюмова B.C., Равилов А.З., Юсупова Г.Р., Герасимов В.В., Сафина Ч.М. "Оценка токсикологических показателей дезинфектан-тов из отходов химической промыплленности". Тезисы докладов научной конференции "Экологические проблемы фармакологии". Казань, 1990,- с. 106-107.

3. Равилов Л.З., Угрюмова B.C., Сафина Ч.М. Изыскание антисептиков для обезгаракиванля сырья при изготовления кетгута,- Сб. научных трудов КВИ, 1992.- С. II5-II6.

4. Сафина Ч.М. Патоморфологические показатели у животных, обработанных антисептиками ДП-2 и 5-761,- Сб. научных трудов ¡ИИ, 1992,- с. II6-II8.

5. Фахретдинов П.С., Угромова B.C., Равилов л.З., Романов Г.В., Чернышева Л.З., Сафина Ч.М. Антисептическое и обеззараживающее средство для кишечного сырья при изготовлении кетгута. Материалы научной конференции "Актуальные проблемы дезинфекции, стерилизации и дератизации". г.Москва, 1992 г.

6. Фахретдинов П.С., Угрюмова B.C., Равилов А.3., Юсупова Г.Р., Чернышева Л.З., Даминова P.M., Романов Г.В., Молодых Й.В., Красиков Ю.В., Зеленая O.A., Петрякова Н.К., Гильмутдинов И.Г., Зуев S.A., Вафина Р.Г., Сафина Ч.М., Иайхатдаров Н.Х. "Средство для обезжиривания коллагенсодеряащего сырья". Решение патентной экспертизы по заявке Р 5006229/12/057120 от 1.07.91 г>

Q-OUC^VLUJSC^

Заказ й 96. Подписано а печать 15.03.93. Формат 60 х 84 /16 Букага писчая. Печать офсетиая. I п.л. Тиран 100 экз. ДСП. Участок офсетной печати КВИ. Казань-'гёОО?^. Ветинститут.