Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Распространение и роль некоторых представителей семейств Enterobacteriaceae в патологии пчел

Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии й.Р.Коваленко Российской А кпд о>«! и сельскохозяйственных наук-

На прявах рукописи

САЛИ1Ш Рафаэль Цаммедсалим. Оглы

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И РОЛЬ НЕКОТОРЫХ. ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ семейства Еп1егоЬ5сг.ег1асозо В а<.Т0Л0П2{ ПЧЕЛ

Специельность 16.00.03 - ветергашрная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва, 1934 г.

Работа выполнена в лаборатории но изучения СодеснеЯ пчел Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института ДВО РЛСХН, в отделе, ветеринарии Зонального научно-исследовательского института сельского хозяйства Северо-Востока ДБО РАСХН и Дальневосточном Гисударсттенноы Аграрном университете.

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Гробов О.Ф.

' Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Иегидевич 'O.A. (ВИоВ); доктор биологических, наук Микитюк В.В. (Белгородский СлИ); доктор, биологических наук Кнтиуарсв K.M. (МЗА)

Бедуа;ее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и апологии {Е'ЙМВСП)).

' Защита диссертации состоится " К " oig-fl^iW, 19г.

в_. . часов на заседании специализироисаного сойота

Д-020.28.01. по присуждению учений степени доктора, наук при Всероссийском научНо-исслсдовательском институте, экспериментальной ветеринарии -им. Я.Р. Коваленко.

Адрес института: 109472 г.Ыоскьа, Кузьминки, ВниВ.

С диссертацией ыокло ознакомиться в библиотеке BiLB . • Автореферат разослан "_"_199 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат ветеринарных, наук

-¿.Г. Теришкоь

I. ищлл ХАРАКТЕРИСТИКА РЛЕОШ

Актуальность темы. Носительство различных представителей семейства Er.torobactoriaceae КИрОКО распространено у ЗДОрОВЫХ пчел (А.И. Егорова, I966-I96B; С.Туззе!. , С. DurandI9£G М.Gilliam Д- Valentina . 1973 н др.); известны также многочисленные случая заболевания и массовой гибели этих насекомых от энтеробактерий. Вместе с тем до настоящего времен» нет четкой-нозологической классификации бактериальных болезней взрослых пчел. В руководствах по патологии пчел фигурируют в основном паратиф ( L.Dahr ,1919) И септицемия (С.Е. Burnside , 1925), причем не всегда учитывается, что возбудитель первой из них. а настоящем отнесен к роду Hafnia , . Отечественные исследователи (В.И. Полтев, 1948, 1054 я др.) считают септ/цдсмии самостоятельной болезнью с'отдельным возбудителем, в то время как многие зарубежные автору (A.pain0t et ai > 1949; H.'wnie • 1961;

w. Fritz3ch > r.Bremer ■ ^975 и др.) рассматривают ea как состояние обсемененности организма пчели различными микроорганизмами семейств Enterobacteciaceae И p3eudomonacea-e . В последние десятилетия наметилась тенденция более четкого определения- болезней с учетом родового названия возбудителя: сальмонеллезы (A. aorchert . 1974 и др.), колибактериоз (Л.Н. Гузева, 1961; К. Кынчев, 1982 и др.), гафниоз (P.M. Салимов, 1973 и др.). Отдельные .авторы (II. vassart et al « I9ÖÜ и др.) отрицают патогенное значение энтеробактерий, несмотря на их частое выделение из организма пчел при массовой гибели, ссылаясь на их наличие у здоровых насекомых.

Заболевания пчел и носительство энтеробактерий у них привлекает внимание исследователей также в связи с оценкой состоя- _ ния продуктов пчеловодства, сохранения знгеропатогенов (С.туззеь, М, Rousseau ,1967; A.B. Аганин, 1966; A.A. Поляков и др.1974

и др.) к возможности влитии среди обитания на микроорганизм. В.А. Триленко (1971) било показано, что выделенные от теплокровных сальмонеллы при пассаже через организм пчел изменяют свои свойства.

На Дольнем Востоке интенсивно развито пчеловодство. Значительный уцерб этой отросли народного хозяйства наносит периодически возникающая массовая гибель пчел, которая регистрируется с 1909 года (В.И. Полтей, 1947), Благодаря исследованиям местных пчеловодов, специалистов., ветеринарной службы, сотрудников ДольЗНИВ!;, Приморского филиала ДальЗНЯШ (Примор-_ екая НИВС) и других учреждений, а также работе многочисленных экспедиций 40-60-х годов в зоне дальнего Востока установлены нозематоз, амебиаз, падений и -шльцовый токсикозы, застуженный расплод, хронический вирусный паралич (ХВП), риккетсиоз, вар-рооз, браулез (А.Д. Леляков, 1929; В.И. Полтев, 1946, ГЭС/»; В.Л. Сальченко, 1964, 1972; П.Л. Талпалацкий, 1967-1970; . И.И. Чеботарев, 197о и др.). Среди бактериозов пчел известии сальмонеллез, гафниоэ (Л.В. Сляднев, 1266; В.Л. Триленко, 1966, 1969, 1971; P.M. Салимов, 1973). Согласно В.А. Триленко (1976), выделенные от больных пчел Хабаровского края культур Protons vulqails способны проникать в гемолимфу пчел и вызывать,их гибель. Все авторы до середины 70-х годов подчеркивают отсутствие гнильцовых болезней пчел в »той зоно. Одняко варрооз, впервые в нашей стране зарегистрированный на территории Дальнего Востока в 60-е годы, и организационные преобразования в пчеловодстве, ¿ювлегаше в раде мест перемещение и объединение пасек, завоз семей пчел и закупку вощины ■ из Европейской части бывшего Союза должны были отразиться на эпизоотической обстановке по болезням пчел в этой зоне.

В целом к моменту начала наших исследований состояние но бактериозам пчел в зоно Дальнего Востока оставалось поясним,

отсутствовали СЕедения о распространении, частоте обнаружения тех или иных возбудителей, длительность сохранения их в продуктах пчеловодства и т.д.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить распространение и значение энтеробакториЯ для медоносных пчел, разработать иетоды борьбы с бактериальными болезнями пчел. Для выполнения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить распространение бактериальных болезней пчел на Дальнем Востоке.

2. Изучить .морфологические, культурсльныз, биохимические

и серологические особенности.возбудителей. .<<

3. Установить длительность сохранения-.и изменчивость микроорганизмов п медах, воска (сотах) и искусственных кормах для пчел.

4. Определить патсгенность выделенных микроорганизмов для

пчел. . ; '•'..-.

5. Разработать меры борьбы и профилактики. .

Научная новизна. Впервые'На территории России установлены заболевания взрослых пчел, вызываемые шигеллами; в'зоне Даль- . него Востоки выявлен доброкачественный и кислый гнилец. Показано распространение бактериозов на пасеках Дальнего Востока. Установлено наличие шигелл в организме самок клеща Варроа якоб-сони,- черных муравьев и божьих коровок из гнезд семей пчел, неблагополучных по заболеваниям. Изучена длительность сохранения в меде.поске и воцине гафниЯ,пигелл,сальмонелл,протея,псев-домоноза', возбудителей гнильцов. Выявлена зависимость сохранения возбудителей онтеропатогенных бактерий, и возбудителей гнильцов от температуры хранения и ботанического состава меда. Показаны • измененил и способы восстановления культурально-биохинических и серологических свойств возбудителей, длительно сохранявшихся в

меде. Отработан комплекс мер борьбы с, бактериальными болезнями Езрослих пчел и с доброкачественным и кислим гнильцом в зоне Дальнего Востока.

Практическая значимость. Результаты исследований использованы при составлении инструкций "О мероприятиях по предупреждению и ликвидации заразных болезней пчел" п.2.15-2.20, утв. ЛУВ ЫСХ СССР 03.03.1977 г.; п.3.4 - утв. 1УВ ЛСХ СССР 27.12. 1984г.; п.2.5 - ГУВ ГК'СМ СССР п.3.12.03.1991 г.; временных методических«указаний по лабораторной диагностике протеоза пчел (Утв. ГУВ ГКПЗ 24.04.1991 г.)4 методических рекомендаций ("Основные заболевания пчел'на Дальнем.Востоке, их профилактика и лечение") (Новосибирск, .1990, Сибирское отделение ВАСХПИЛ), методических указаний '.'Бактериальные болезни медоносной пчелы в Приморском, Хабаровском краях и Амурской'области, их профи-, лактика и лечение", "По диагностике бактериальных болезней пчел в Приморском, Хабаровском краях и в Амурской области", утвержденных нач.ветотделов Приморского, Хабаровского краев и Амурской области пр.» 266 от 26.04.90 (ВАСХНИЛ ДО ЦЗШШСХ 1990), "Методические указания, по диагностированию шигелл (Зонне, ныо-кастл, флекснера)^ в меде и у членистоногих в зоне Дальнего Востока" БСХИ, 1993 г. "

Апробация работы. Материалы диссертации доложены .на второй Всесоюзной конференции молодых ученых, по ветеринарии ВАСХПИЛ (Москва, 1971); на XIX научной конференции (Благовещенск, 1971); на научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии Дальнего Востока и Забайкалья (Благовещенск, 1970); на всесоюзном семинаре "Современные методы изучения болезней пчел и меры их.профилактики" (Уфа, 1972); на первой научно-производст- ' венной конференции ветеринарных специалистов Приморья (Владивосток, 197э), на региональных семинарах по патологии пчел

(Владивосток, 1974; Хабаровск, 197о; Спасск, 1975); на ХХУ1-ом международном конгрессе (Аделаида, Австралия, 1977); на заседаниях ученого совета ДальЗНИБИ (Благовещенск, 1970-1980-1991-1992 гг.); на заседании ученого совета зонального' научно-исследовательского института сельского хозяйства Северо-Востока (Магадан, 1990-1991 гг.). ,

Публикация материалов исслед.овРний. По материалам диссер- . тации опубликовано 32 научных работы.

, Объем и структура диссертации. Диссертация изложена, на 381 странице: машинописного.текста. Текст иллюстрирован 92 ( таблицами, 6 фотографиями. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и ме.тодор, результатов исследований и их обсуэдения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Список литературы содержит 213 наименований работ (в том числе 64 зарубежных автора).

' Основные положения диссертационной работы, виносшые для зациты. Ла защиту выносятся: данные-по распространению-бактериальных болезней пчел на Дальнем Востоке, длительность сохранения и изменчивость микроорганизмов при нахождении'в меде, вое- . . ке,- искусственных кормах пчел, патогенность выделенных бактерий для пчел, меры борьбы с бактериозами пчел.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДД ИСШВДУВАШЙ "

Исследования проводили в течение 1970-1993 гг. в лабораториях по изучении болезней пчел Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института, Магаданского зонального научно-исследовательского института сельского хозяйств!? Северо-Востока и Дальневосточном а грарном универси- * тсто. Сбор, материала осуществляли в благополучных и. неблагополучных по гибели рчел пасеках зоны Дальнего Востока (Приморско-

го, Хабаровского краев и Ачурский области) и всдкниыч заьодов

ЭТОЙ 30HU.

.При осмотре 2575 ceuefi пчол: размеренных на 529 гасеках, s 100 хозяйствах, было отобрано 3744 пробы от взрослых пчел и расплода, в т.ч. обследс.вано 1332 семей (2259 проб), 186 пасек, ■42 хозяйства Приморского крал; 31Г> семей. (363 пробы), 131 пасека, 10 хозяйств Хабаровского края; 928 семей (1122.пробы), 212 пасек, 42 хозяйства Амурской области. Кроме того,.исследованию подвергнуты 30 проб ь'ощины, 53 пробы сот из семей пчел, 67 проб воска, 52¿ пробы меда, 54 пробы членистоногих из ульев. Всего исследовано 4472 пробы материала. •''

Бактериологический анализ проводили по методике В.И.Полтеьа, Е.В;11ешатаевой (1970), пробы меда исследовали по методике

A.И.Егоровой"<1971) и А.М.Смирнова (1972), воск и соты - по методике А.М.Смирнова (1972).

У предварительно обработанных с поверхности взрослых |1чел отдельно делали посозы из гемолимфы, грудных мышц и ккдгечника с содержимым. При выделении микроорганизмов в первых двух: случаях от пчел неблагополучных семей они рассматривались как возбудители болезни (Н. wiiie , ÍS&I), а яри обнаружении их в кишечнике -как носительстьо. Наличие специфических микроорганизмов у изменивши* цвет, $орыу, консистенцию личииок пчел позволяло ставить диагноз на доброкачественный и кислый гнилец. При анализе эпизоотического состояния обследуемых пасек гриниыали во внимание дачные исследований на другие болезни пчел, полученные coa рудника:,та

лаборатории.по изучению болезней пчел ДгльЗНИШ П.Л.Талпалацким,

¡i ••

B.Л.Сальченко и др., за что выражаем им глубокую благодарность. Для исследования членистоногих из ульев (по 10 экземпляров

клещей варроа, муравьев и их куколок, божьих коровок) и расплода лчел материал помещали в ступки в 70° спирт нв три минуты, пос-

vio" wего проуыЕали трехкратно стерильной водопроводно.1 водой (стерильность последней порции иода проверяли посевом на питательные среда), оатеу материал перекладывали в стерильные ступки, добавляя воду, растирали пестиком до получения однородной массы. Из суспензии, полученной от калдоЯ пробы, проводили высей на питательные среда '.ПБ, MIA, висмут-сульфит сгар, среды Левина, Длоскирева и 2ндо и инкубировали в териостате при температуре 37° d точение 24 часов.

Изучение норфологкческ их, культуральных и биохимических свойств культур, выделенных из различных источников, а такта полученных для сравнения микроорганизмов из лаборатории Госу- 1 дарственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов, Всесоюзного научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии; Научно-исследовательского института пчеловодства, Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии Всесоюзного центра по шигеллем, Государственного научно-исследовательского института стандартизации медицинских биологических препаратов, Института вакцин, и сывороток (Дания), Амурской областной еаннтарно-эпидемиологи-' ческой станции проводили по общепринятой методике (Н.И.Розанов, 1952;.В.Д, Тиуаков,.Д.М. Гольдфарб, 1958; М.О. Еиргер, 1967; В.И. Полтев и др. I960, 1971). Всего выделено 1246 культур, из которых 732 культуры оставлено для дальнейшего изучения, кроне того, использовали 36 музейных культур. . -

Антигенные свойства выделенных и полученных культур сальмонелл проверяли з реакции агглютинации с ноиорецепторньми "О" и "И" агглютинирующими к- адсорбированными (сухие) сальмонеллез.-ными сыворотками, полученными из Краснодарской биофабрики и Ленинградского научно-исследовательского, института вакцин и .. сывороток, с шигеллезньми сыворотками института вакцин и сывороток км.Мечникова. Ряд специфических сывороток получили путем

гипериммунизации кроликов культурами Ha£r>ia alvsi .Snigell, . Pseudomonas.'Ent. taecalis,Bac^alVe ^^ДбЛ^ЫНЫМИ на неблагополучных пасеках и эталонными штаммами. Иммунизацию проводили по A.A. Асадову ЦУЬЭ). -'

Сроки выживания некоторых зктеропатогенных микроорганизмов изучали в йеразведенном стерильном липовом, полифлерном и гре-чичном'медах или в сыте - Зи,о0,80%-ном водном растворе липового меда, а также ЗЗ.ЬО.бТ^-ом сахарном сиропе. Разведенный и не-■ разведенный жидкий мед и сахарный сироп оыли пропущены через : фильтры Зейтца (СФ), тюбле' фильтрации стерильность проверяли на жидких и твердых питательных средах (ШВ, ША, сусло агар, картофельный агар с глюкозой). Затем в каждый флакон с 10 мл продукта вносили смыв микроорганизмоб в дозе по I мл в концентрации X млрд. микробннх тел по оптическому стандарту. Инфицированные пробы меда и сахарного сиропа выдерживали в термостате при температуре 37° г в комнатных условиях при температуре 13-27°' и относительной влажности' 13-98%, в холодильнике при 4°. Определение сроков выживаемости культур в медах и сахарном сиропе через 3-6-13-20-30-44-ЪО-67-130-157-277-300-353-370 дней устанавливали посевом на Mllb, W1A; изучали их биохимические и антигенные свойства cö специфическими сыворотками. Культуры, давшие изменение цвета колоний на висмут-сульфит агаре, пересевали сначала на М11Ь, затем после 24 часов инкубирования в термостате не МПА и висмут-сульфит агар, определяли цвет и форму выросших кикробных колоний. При потере способности к агглютинации со специфическими сывороткйми агаровые культуры держали в холодильнике, через каждые сутки из них делали посевы на аналогичные среды, а затем проверяли в реакции агглютинации (РА) со специфическими сыворотками.

При совместном культивировании использовали культуры Н.

' alvei:'' И Sh.Sonne!

,. l#476), Sft. flexnerl • Uf 212) И

Sh. novcistl» (364). В пробирки с МПБ вносили По 0,1 мл суточной бульонной культуры гафний и одного из видов шигелл с концентрацией I млрд микробных тел в I мл. Параллельно проводили опыты по внесении 2 мл суспензии указанных микроорганизмов в 4 г меда (липовый, полифлерный, гречичный). Контролем служили чистый МПБ, мед, а также пробирки и флаконы, содержащие эти среды, в которые добавляли отдельную культуру указанных микроорганизмов. Инкубировали в термостате в течениэ 24 часов при 37°. По истечении срока их встряхивали. Из каждой пробирки и флакона брали по 0,1 мл культуральной жидкости и высевали на висмут-сульфат amp, вновь инкубировали в термостате (37°) 72 часа. Изучали форму, цвет выросших микробных колоний, биохимические свойства, проверяли их и РА со специфическими сыворотками.

Для определения выживаемости микроорганизмов в-ьоске и на вощине использовали суточные культуры девяти микроорганизмов. Перед инфицированием материал стерилизовали (воск нагревали до 80° в течение 45 минут; листы вощины с помощью бактерицидной лампы БУЗ-ЗО на расстоянии 1,5 м в течениэ 60 мин.), стерильность материала проверяли высевом растворенного воска и смыва с еощины на MIA и МТС. Стерильный воск при 35-40° разливали по '100 г в банки, куда вносили по 4 мл бактериальной суспензии,содержащей I млрд микробных тел в I мл-'На'лист вощины аналогичные суспензии в той же дозе и концентрации наносили с помощью пульверизатора. Контролем служили проба воска и листы вощины, которые не инфицировали. Опытные .и контрольные" образцы хранили при I4-2U0 и 4°С, Периодически исследовали на наличие в них иизнеспособных микроорганизмов. В качество контроля каждый ста!,!?,! микроорганизма высевали в три пробирки ШБ и колбы, содержащие 200 мл ШБ (рН 7,2-7,4). Культуры хранили при 37°, 14-26 и 4°С. Периодически высевали с них.на МПА, ШБ и определяли биохимические свойства культур..

Для определения сроков выживаемости 10 штаммов энтеропа-тогенных культур в 2$%-ном спиртовом экстракте прополиса и в Só°-HOii спирте поставили два опыта. Для обоих опытов использовали суточную бульонную культуру. В пробирки с 6,0 мл стерильного ыясопаптонного бульона вносили 0,0 мл культуры (с концентрацией I млрд.-микробных тел з I мл). Затек в первые 10 пробирок добавили 2й/о-ный спиртоиы£: экстракт прополиса в дозах, 0,1- 1,2 мл,-а в. остальные II лроб!грок - 9о°-ныГ; спирт в дозах С:,'1-1,4 мл.-Для контроля использовали бульонные культуры без добавления прополиса и спирта. Рее пробирки .инкубировали в термостате при 37°в течение 20 суток. Затем изучаемые культуры высевали ни КШ л ША,

Патогенность культур, выделенных от больных пчел и из продуктов пчеловодства, а также от теплокровных ehbothux, изучали на пчелах разного возраста. Дня заражения пчел использовали 29G выделенных niTCMMOB.H.alvel.Sh Sonnai ,Sh.nouoo3tlo,Sli. flc-xnori f

Ps.apisopticura,?rotous vulgaris , Sa 1. enter i tidio jartneri, Sal.

typhi murium. Пчел заражали инъекцией в гемоцель, скармли-

ванием, опрыскиванием в садке и контактно (путем подсадки здоровых пчел в инфицированные садки). 11ри инъекции в гемоцель вво-' дили 0,01 мкл смыва бактерий с концентрацией от одной тысячи до одного миллиарда, опрыскиванием один миллиард микробных тел в I мл. В контрольных группах пчелы получили смыв физиологического раствора со стерильного мясопептонього агара в тако.ч же количестве, как и ипытше. Опытных и контрольных пчел кормили бО^-кым сахарным сиропсм или медом и содержали при 3¡j° и относительной влсиности 80%. Б каждый' вариант опыта брали по 100 пчел. Пчел в садках осматривали утром и вечером. Учет гибели производили, начиная с третьего дня опыта до гибели 50 или I0Ü& пчел. Пчелам также скармливали фильтраты, содержащие продукты метаболизма микроорганизмов при их росте на жидкой питательной среде.

Для получения токсинов использовали культуры .'o.sonnno- (ÎM76), Sh.^e-'Cdjr.le ' ( VÔ4) , Ч € t (.'Л4У, 436). Б КСЭДНв двс КОЛбЫ с ÜÜU мл }Л1Ь сысевали суточную культуру микроорганизма. Колбы Фиксировали при 3'/°. Через '¿1 день содержимое колб фильтровали через фильтр оейтца(пластинки С Ф ).

В опытной группе из 20 пчел в течение суток скармливали токсины гафний и пигелл в дозе по 3 мл, а в последующем и:с кормили сахарным сиропом. Аналогичные контрольные группы насекомых получали только сахарный сироп. Ежедневно учитывали погибших пчел.

Среднюа продолжительность жизни пчел в каждом опыте определяли по методу Г.В. Ееденяпин» (1967). Опыта ставили трехкратно. Всего было поставлено ЬУ4 опита. Биометрическую обработку полученных данных проводили по методу, описанному l'.'J. лак иным (19ьь).1!з живых насекомых опытной и контрольной групп извлекали ккиечник и подвергали гистологическому анализу. Работа проведена совместно с кандидатом ветеринарных наук C.B. ЬреПтерманом. Из мышц погибших пчел делали посев на питательные среда. Подвергали заражению также лаоораторных аивотннх (белых мышеи и морских свинок) путем подкожного, внутриорюшного введения и скармливания та культур гафний, выделенных от больных пчел.. и шигелл» сонарулснннх у оольшх ладей и в продуктах пчеловодства, а также после неоднократного пассажирования их через организм пчел и различные меди. Заражение проводили по методике A.C. Лабинской (1968).■

Был поставлен опыт с цельи устрновить действие Уй-лучей бактерицидной лампы БУВ-50 на жизнеспособность 10 штаммов бактериальных культур на ША и в меде. Свежеприготовленный МПА, разлитый в чашки Петри (толщиной 3 мм), засевали изучаемыми культурами в дозе 1,0 мл с концентрацией I млрд.м.т. Мед в чашках Петри (по 50 г в каждой) инфицировали микроорганизмами из

' - IZ -

расчета 200 тью.м.т., б 1 г меда. Облучение проводили на рас-• стоянии 1,5 м в течение bU-80-100 минут, затем чаши Петри

закрывали и ставили в термостат при 37° на 24 часа. Контролем ' служил инфицированный тем тле микроорганизмом мед, но подвергав-сийся воздействию УФ-лучей. Результаты обеззараживания контролировали путем высева на питательные среды (í.'iib.f.IlA) из каждой пробы. Инфицированные пробы меда также нагревали.

Чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам определяли методом диффузии в агаре с применением дисков и методом серийного разведения в жидкой питательной среде по описанным методикам (Е.Н.Ведьмина и М.Сурер, I964; Ы.О. Биргер, IÍ/¿7; B.C. Дмитриева и С.М. Семёнов, 1965). Испытание эффективности некоторых антибиотиков на организм пчел в условиях лаборатории в садковых опытах осуществляли трехкратно с интервалом в три дня. В первом опыте 100 зара??.ешшм гафниями пчелам давали стреп-'томицкн + неОмицин + левомицетин. Первый курс лечения доза стрептомицина и неомицина составляла по 100 ед, левомицетина 0,2 мкг, во втором соответственно: по 1о0 ед. и 0,2 мкг, в третьем по 200 ед. и 0,2 мкг. Во втором опыте 100 зараженным пчелам давали неомицин + левомицетин 100 и 0,2 мкг, второй соответственно 150 и 0,2 третьей 200 и 0,2 мкг. В третьем опыте использовали стрептомицин в нарастающих дозах: 200, 300, 400 ед., в четвертом левомицетин - 0,2, 0,3, 0,4 мкг, пятом - стрептомицин + неомицин по 100, 150, 200 ед., е шестой - неомицин - 200, 300, 400 ед., в седьмом (контроль)- пчелы'получали сахарный сироп. Во всех опытах антибиотики смешивали с сахарнцм сиропом, разли-т вали по флаконам (по 10 мл) и давали пчелам.

Опцты по лечению гафниоэа были поставлены в мае на неблагополучней во гафниозу пасеке Кч 18/24 совхоза "Северный" Приморского края. В опыте участвовало. 160 пчелиных семей, которые были разделены"на 8 групп по 20 семей в каждой; шесть из них '

били подопытные, а две контрольные.

В первом опыте одна группа получала стрептомицин» первый курс лечения 200 тысяч ед., второй - 300, третьей - 400 тысяч ед., вторая левомицехин 0,1; 0,2;0,2 г, третья - иеомицин- 100; 150;.200 тысяч ед. и четвертая - неомицкн 100; Г50; 300 тысяч ед. и левомицетин ОД; 0,2; 0,2 г, пятая - стрептомицин 100; IÓ0; 200 тысяч ед. и неомицш! 100; 1о0; 200 тысяч ед., шестая стрептомицин 100; IbO; 200 тысяч ед., лепоиицеткн 0.Д; 0,2; 0,2 г и неокицин 100; IbO; 200 тысяч ед., седьмая (контрольная) группа получала чистый сахарный сироп, восьмая (вторая контрольная) группа находилась на естественных кормах. :

Каждую дозу антибиотиков растворяли в 100 мл кипяченой во-су (охлажденной), тщательно смешивали с 10 кг свег.епрнготовлсн-юго теплого сахарного сиропа (две части сахара и одна часть зоды), а затем разливали а чистые корлуззки по О,о кг на семью. Сормлеиие пчел проводили три раза с интервалом в три дня вече-юм и после прекращения лета (возвращение пчел в ульи). До дос-■ановки опыта в каждой груше была установлена сила семей в лочках. Затем в трех семьях подопытной и контрольной групп ,. ерез два дня после обработки брали материал и подвергали бак-ериологкческсму исследованию на наличие возбудителей. Материа-j высевали на среду висмут-сульфиХ агар в объема по 0,1 мл успенсии микробных культур для ка-едой группы и учитывали коли-гство выросших микробных колоний в течение 48 часов. Пасека сходилась под наблюдением в течение двух месяцев. При этом в 1ждой группе учитывали силу семьи и количество откаченного >да, Второй опыт проводился в той же пасеке в октябре, каждый > антибиотиков-давали в дозо 200 тысяч ед. трехкратно через w дня. При этом учитывали сохранность пчелиных - семей и силу улочках до и после зимовки.

. - 14 -" РЕЗУ.ДЬ1Ш И^СДЕДОЕ/ЖЙ

I. Бактериальные болезни пчел и пути их распространения на пасеках Дальнего Востока

В I970-IÜ09 годаху по данным трестов пчелоьодстьа Дальнего Востока,в зшнс-оесениий период в хозяГютиах отмечали гибель от 0,22 до 85,1/j семеП пчел, в период 1У79-Г1Ш годи в целок по зоне она составила 21,61%, в том числе по Амурской области I3,2ú%, Хабаровскому крпы - 16, L#, Приморскому крою - 37,0$. При осмотре семей пчел на неблагополучных пасеках наблюдали сильное беспокойство пчел, распад их клубе.. Пчелы слабеют, ползают с раздуты.: брюшком по рамка1.?, летку или на дне улья. Теряют способность лет«ть, появляется понос, иногда пиралич ножек и отсутствие реекцни на шсиние раздражения (сиет, стук). Колонне массы темно-бурого, серовато-грпзного или черного цнета, издают зловонный с-ишх. Передняя стенка улья, соты и рг.мки испачкали экскрементами.

При обследорЕнни в 1970-1980 года бактериальные болезни были зарегистрированы в 374 (14,0?.'/') семьях пчел на 116 (21,93^) пасеках 42 (42^>) хозяйств от обцего числа обслед'каньих. В том числе болезни взрослых пчел были обнаружены в 36 (36%) хозяйствах на 99 (1Н,'П%) пасеках в 314 (12,19д!) семьях пчел. Наиболее часто выделение больных семей пчел отмечено и Хабаровском (19,03? и Приморском краях (U.B9J'), Амурской области (7,44^,). Среди выделенных возбудителен преобладали n.aivoi - (41,íhUfc) к числу положительных проб, затем следуют sh.sonne i (2,b7$),sai.typhi tturiu» (1,37%) , Рл .api nspticum (I,23g), Sh.flexnori (Q\2?ío) и sal .ont .gaertneri (0,14%). Выделение указанных ВИДОВ микрог организмов из гемолимфи и мышц, а такке успешные опыты по заражению ими пчел позволяют говорить о наличии различных болезней на пасеках (рис.1). . .

А. 1,20%

6. 4,44%

8. 3.45% 7. 0,21%

Амурская область

Приморский край Хабаровский край

Рис.1. Бактериальные болезни шел на Дальнем Востоке {% к общему числу обследованных семей по краю(области)

1 - гафниоз о - сальмонеллез (заЫурт пигшт)

2 - сальмонеллез (ЗаХ.олЬ.дагСпегП б- шигеллез (Зп.ЗоппэП

3 - псевдомоноз 7 - - " - ('£Н.£1ахпегП

4 - кислый гнилец (гпс.«аесаИз) В - доброкачественный гнллец

СП

I

Отдельные болезни встречались самостоятельно в £3 (16,9/0 или в виде сыеианшх инфекций б 261 (В3,1&) семье пчел (рис.2). В подавляющем большинстве случаев из неблагополучных по болезаш взрослых пчел семей выделили два возбудителя (34,12$), реже вот- '' речали три (17,83$), четыре (1б,87£) и пять (16,29*). В 77,39^ бактериозы выявляли с различными паразитозами. Среди них превалировал варрооз (72,61?)), затем нозематоз (33,12^) и сравнительно редко амеДиаз (0,95!«). У 1/3 неблагополучных по бактериоза семей пчел регистрировался ХВП. В Амурской области преобладал гафниоз (¿0,72^), в Приморском крае он обычно встречался совместно с варроозом (48,11%), а в Хабаровском крае к последнему.' добавлялся ХВП (45,0£>. - . .-

Распространение указанных болезней взрослых пяел предполагает широкое носительство эйтеропатогекных бактерий, хотя основное внимание было направлено на обследование больных семей . \

пчел, тем не менее эти микроорганизмы были обнаружены в килечном содержимом у здоровых пчел 32.69& семей на 33,ü9% обследованных пасек в Хабаровском крае, при наличии 19,03% пораженных семей пчел на 25,19* пасек. Аналогичную картину можно было наблюдать и в Амурской области, где было 13,25$ семей - носителей на 30,66% пасек, при поражении 12,10% семей пчел на 19,61$ пасек в этой зоне. В то ке время в материале из Приморского края число пораженных семей пчел и неблагополучных пасек преобладало над подобными данными по носительству (15,09 против 6,31% семей и 22,04 против 12,37^ пасе^. Из кишечника взрослых пчел H.aivoi выделен ИЗ 5,13i проб, Sonne! 0,32$5,Sh.newcastle 0,32$

и Proteus vulgaris 0,24$ проб.

Инфкцированность взрослых пчел энтеропатогенными микроорганизмами в больных семьях пчел и носительство этих возбудителей

P::c. 2. 'louo- и с::гспшг

III ДаЛЬН'

ШЛИ

.cm

- CMC

Т'П'р'Тч'?

1. Сальмона.тлсз CSal-ent-aJCtn»ci)

2. Гафнисз ~

3. Гсфииоз + саррооз

4. Гафшоз.+" нозематоз . ■ о. Ггфнкоз Х£Л '

6. Га^нисз + смсбназ

7. ГафннОЗ + ШИГОЛЛСЗ (Sh.Sonnai)

8. Гафшоз + сальмоноллез (sal.typhi nurlun)

9. ГафИИОЗ + шигсллез (Sh.flexnerl) .

10. Гафниоз + псевдсмоноз

11. Шигеллез (Sh.Sonnel) СаЛЬ!.:0Н0ЛЛвз'(sal.typhi rcurlun)

12. Шигеллез (sh.sonpci). + варрооз -

13. Шигеллез (Sh.Sonnei) + пигеллез (Sh.fle*nari)

14. Сальмснеллез (Sai.typhi nuriu^) + ларрооз

15. Ольмснел'лез <Sal.typhl nuriua) + СИГОЛЛЙЗ (Sil. flexnerl)

16. Псевдомсноз + варрооз

17. Псепдсмонсзедэбиаз

18.- ПсеядомонЗз + нозематоз .

19. Псевдомоноз -+ ХШ '••..•' ' '

среди внешне здоровых насекомых влечет за собой загрязнение содержимого улья- Б 25,97% семей изучаемые энтеропатогеш были обнаружены у внешне здоровых личинок пчел. Из расплода выделяли гафнии, гафнии с шипеллами и сальмонеллами или различные виды шигелл. Из ГНИЛОСТНОЙ массы ЛИЧИНОК высевали Bac.alvei

EOt.fаеса1Is. : •

При исследовании меда возбудители были выделены в 64,69$ проб, в т.ч. 103 (57,64%) проб в Амурской области, 83 (100,0%) в Хабаровском и 153 (58,39$) Приморском краях. Из 339 культур на дол» н .ai ve i приходится 198 <0(3,41/5). sh.sonnoi 41 (12,09%). Sh.ílexnerl ' (4,13%), sh.newc'astle . 7 (2,06%) , Ps .apisept icura

' 41 . (12,09%),Sal.typhi murium • 2 (0,60$),Sac.a 1vei 10 (2,94$). и Ent. faecalia . 26 (7,6750. йти микроорганизмы.

встречались самостоятельно или в различных сочетаниях друг с

■ ^

другом.

При исследовании смывов с сотов из ульев положительными » оказались .45 (84,91%) проб, в т.ч. 17 (80,95%) по Амурской области, 4 (50,0%) по Приморскому и 24 (100,0%) пробах по Хабаровскому краям. Нз них H.aivei установлены в 12 (26,67%), Рз .apiseotícum 18 140,0%), Bac.alvei Ц (24,44%) И int.. faocalis 4 (8,89%) случаев.

Нал11чие больных пчел и загрязненность зозбуднтелями внутренней среда гнездо приводили к инфицированию паразитов пчел и насекомых, вторгающихся в улей. 1)нтеропатогенние микроорганизмы были обнаружены в 38,9% пробах клещей варроа, из организма этого паразита выделен sh.sonne i (42,86%), sh.fiexneri (ü7,I4%).

из тела взрослых муравьев н.al vei (23,08%), sh.sonnei (53,84%),sh.fiexnori (23,08%), все пробы этих насекомых были инфицированы энтеролатогенами. Причем эти возбудители, очевадно,

передаются потомству и в 66,7% проб куколок этих насеко.шх быд установлен H.aivoi (7a.,0t), sh.sonnei- (12,50%) )St,.flaxri2ri

(I2,ix)%). 5нгеропатогенныв микроорганизмы также встречаются в 1С0% случаев в тела летающих насекомых - божьих короаок, которые в обилии встречаются осенью на летках ульев пчел. Из !« организма выделен H.aivei (37,555), sh.sonnei (25,05?), Sh. tlexneri

(37,Sf).

Наличие неблагополучных семей пчел на пасеках, совместное хранение сотов и вытопленного из них воска приводят к загрязнению последнего. При исследовании этого продукта из хранилищ неблагополучных "пасек 06 (83,Ь6%) проб были положительными, в т.ч. I (20,056) из Амурской области и 55 (100,ОЙ) из Хабаров- ' . ского края. Из воска выделены H.alvei 43 (7б,79^),.рз.ар1-septicu.n Т3 (23,21%) Пробах, В T.4.P3.apisepticura 1(20,0$) ПО Амурской области, u.alvei 43 (78,18$), Рз .apiaepticura 12 (2I.8I5S) - в Хабаровском крао. В свои очередь, поступления обезличенного сырья на воскоэаводы и склады пчелоконтор, отсутствие отдельных помещений для хранения приводят к инфицирования готовой продукции. Смыеы с листов вощины Хабаровского воскоза-вода и Амурской пчелоконторы показали наличие и. a Ivel в 25 (83,33%), Sac.alvei j, Ent.faecalia в 5. (.16,67^) Пробах.

Таким образом, На пасеках Дальнего Востока среди болезней взрослых пчел регистрируются: гафниоз, иигеллезы, септицемия, сальмонеллеэы и болезни расплода (доброкачественный и кислый гнильцы). Преобладающей болезнью бактериальной природы у взрослых пчел в обследуемой зоне является гафниоз. Шигеллезы впервые установлены на территории нашей страны, гнильцы -.в зоне Дальнего Востока. Заболевание пчел протекает самостоятельно и в виде смешанных инфекций, в распространении которых, вероятно, значительную роль играет клещ варроа. Указанные болезни регистрируются на территориях административных единиц обследуемой зоны с различной частотой обнаружения и отличаются набором возбудителей. В Приморском крае в качестве причинного агента сальмонел-

хеэе установлен sai.ent.gartneri f не обнаружены шигеллы; у пчел Амурской области и Хабаровского края сальмонеллез обусловлен Sal.typhi n-arium , а ЕИГеДЛЭЗ Sh.Sonnei j в ¿ыурскОЙ -Области, КрСЫВ ТОГО, установлен Sh.flexneri. Среди взрослых пчел Дальнего Востока -распространено носительство энтеропато-генных бактерий. В неблагополучных семьях ичед и семьях -носи" телях этими возбудителяыи_,инфицированы личинки пчел, кед, соты, - паразиты пчел £клец варроа) и вЮргасцу.еся в улей членистоногие. В хранилищах неблагополучных пасСк» складах Контор пчеловодства и воскозаводо происходит инфицирование энтеропатогенеми. и возбудителями гнильцов воска.и готовой продукции (вощины).

. Сохраняемость и изменчивость микроорганизмов ••.* • ' а Продуктах пчалсводства . "•

При разработке способов борьбы с болезнями, вызываемыми онтеропатогенк&ык бактериями и гнильцами, санитарной оценке продуктов"пчеловодства, испольауеиыХ,в йийсу людьми, важно знать сохраняемость этих микроорганизмов в меде« сахарном сиропе, воске, сотах, влияние не них бактерицидной субстанции - прополиса. Для изучения зтого вопроса, помимо выделенных возбудителей, в опыты били взяты ряд музейных штаммов знтеропатогенных бактерий, выделенных ранее.у пчел в'других зонах страны.

Сохраняемость и изменчивость микроорганизмов при длительном культивировании. Предварительно определяли длительность сохранения и изменен;;з свойств выделенных возбудителей на питательных средах при 37°, Ii>—20° и 4°С, Полученные результаты явились контролем к аналогичным исследованиям'ho сохраняемости микроорганизмов в ^еде, воске, сотах «.прополисе при различных условиях ИХ хранения. На 1Я1Л при ¿7°'культуры U.-alvet,Sh.Sormei,Sn.£lejcneri, Sh .iiawcast le, Sal.'typhi muriura, . vul^aci s< Pa . a pi sopt icum

ВЫКвВПЛИ 60 ДНей.Сдс .al ve'l . И Cnt - £aecalis - ÜD ДНоЯ. При

температуре 15-20° и влажности 44-60% выживаемость культур Н.

alvíi (-?923) , 3h.3onnei ,3h.í1ехпггi > ?з . apisapt icum , Sal.typhi 3'jriun И ?r.vulgaris составила 126 ДНеЙ, H.alvoi (149) И 3'n .nowc33tl-3 - 130, Зас.а 1vo i и Erst. faccalis - 136 дней.

При 4°С культуры Bac.alvei И Snt.íascalia ВЫЖИЕЗЛИ - 210 дней, ü.alvoi u Sh.flaxneri - 228, ti Sh . Sonnei , ?s . api3^p t ic'jm Sal.typhi rauriu^i u Sh.nauc.a3tle - 230 ДНЭЙ, Pr.vulgaris

- 229 дней. Аналогичная зависимость длительности сохранения жизнеспособности культур отмечена при культивировании эт;гх: микроорганизмов на .'.SIB, хотя время выживания на этой среде было большим. При 37° У ü.alvei .'Í 149 , 438, Sh.Sonnai ,Sh-newcaatle

выживаемость составила 115 дней, а у sh. £íoxneri,е.coii .sal .pui-lorun,Bac.alvei,Snt.faecalis _ X34 ДНя; Sa 1 ■ ^/Р51 murium

(Д-20),РЗ .apiaspticum (2 2023) , pc01. у a 1.3 ar i з (- 18) -130 дней. Длительность хранения культур и,aiv3i,зм?з11,mc.aivet

faecal is на 'ЯА, • ШБ и температуры влияли на изме-

нение их свойств в отношенин молока, келатжц, сахарозы и .еор-Зита. Независимо от Температурного реаима и срока выживания потери агглютпнабильности у изучаемых культур не наблюдали. -

Учитывая встречающееся совместное пребывание ряда видов Зактерий в организме пчел и обсемененность ими кормов в гнезде, важно было выяснить влияние их друг на друга при совместном культивировании. В норме ü.alvei на среде висмут-сульфит агар 3,ает рост черных, культуры Sh.Sor,nei,Sh. neveastle,Sh. flexneri-зеленых колоний. При совместном 'культивирован*: ч a.aiv>i 0J923) : sh.noucastio ('? 64) на мясопептонном бульоне при 37° в течете суток и высеве на среду висмут-сульфит агар через 24 часа зтмечали рост эёленых колоний, .через 48-72-96 часов эти же колоши становились чернь'ми. После совместного выращивания культур H.aivci (IJ 923) и sh.fisxnorí (>í 212) на !Я1Б. в течение суток i высеве на среды висмут-сульфит агар отмечен рост зеленых коло-

ний, о через 48-96 часов- черных. Аналогичные данные получены при. совместном культивировании H.alvei (М 323) с культурой Sh sonnei № 476). После совместного культивирования возникают другие свойства: культуры H.alvei И Sh.Sonnei фермеНТИруют молоко, мочевину, лактозу, сорбит, хотя, каждая из этих культур перед совместным культивированием была не способна к расщеплению этих продуктов. Культуры Sh.Sonnei.Sh.nevcastie и Sh.£lexneri ПОСЛе СОВМвСТНОГО ЕЫрйЦИВаНИЛ С H.alvei на' ШБ потеряли способность агглютинироваться со специфическими сыворотками shineii 7 но давали полокительнув РА со специфическими гафииозншш сыворотками.

Сохраняемость микроорганизмов в медах различного происхождения. Длительность сохранения культур в' медах '(табл.1) оказывала влияние на культуральные, биохимические и серологические свойства микроорганизмов. При температуре 37°после пер, вых суток выживания б липовом и полифлерном медах не давали роста на висмут-сульфит агаре H.alvei В 717, 807, sh.sonnei 15 476 и sh.fiexnori В 212; в грочичном меде на 6-е сутки -Sh.Sonnei ; взятые ИЗ ЛИПОВОГО меда 7-18-37-е сутки Sh.Sonnei и sh.{lexneri j на среде висмут-сульфит агар росли в виде черных колоний, культуры не реагировали со специфическими сыворотками. Культура H.alvei изменила свои свойства к молоку, желатине, мочевине, декстрину, рафинозе и сахарозе после 1-6-23-го дня выкивания в липовом меде, shigeii - к молоку, сахарозе, инозиту, мочевине, лактозе.и сорбиту на 6-10-й день. В лоли-ферном меде эти изменения к молоку, желатине, лактозе, сахарозе и сорбиту отмечены у культур H.alvei на 3, 10, 20, 23-й день. У shigeii - к сахарозе, сорбиту, инозиту, молоку, желатине и мочевина на 3,18,51-й день..При хранении'в гречичном меде К. aivai изменила свои свойства к-молоку, желаете, мочевине, лактозе, сорбиту и инозиту на I, 3, о-й день, shigeii - к

молоку, зелстине, мочевине, лактоза, сахарозе и дульциту на 3, 13, 37, 61-67 и 103-Я день.

Таблица I

Максимальные сроки сохранения жизнеспособности микроорганизмов в медах разл!гшого происхождения ( в днях )

Температура хранения

Микроорганизмы 37° 5 13-27° : 4°

ЛИПО ВЫЙ :аоли-.флер-Гный ' "гре- :чич :ный 'ЛИПО :вый -поли-:флер-:ный Ггре- "чич :ный "ЛИПО :вый -ПОЛИ- :флер-:ный "гре-:чиц-:ный

I. Н. а 1 2 18 91 23 61 353 ЗоЗ- 270 353

2. 5Ь1де11а зрр (Зп. Зола» 1,5(1. юисазгЛ® {1ехпег1) 10 18 91 41 83 ЗоЗ ЗоЗ ЗэЗ 353

3. Ба 1. ри 11огил1 67 80 94 20 31 210 176- 269 270

4. Зл1.еуо111 гис^ия 60 80 95 18 30 210 176 270 270

Ь. Е.С011 13 20 60 20 30 195 146 270 300

6. Рг-уи1з зг1з 60 7 5 20 28 220 176 2601 300

7. Рз.ар^зер. ¡емт 13 26 87 20 29 2о5 176 255' '370

е. Тле.а 1уе1 29 48 120 186 220 353 176 360 370

9. Еп С . 11 .^са! 1 я 13 22 70 13 35 140 176 280 300

При снижении температуры хранения инфицированных медов наступали аналогичные изменения у выделяемых из них микроорганизмов через ^олее продолжительное время, зависели о? вида микроорганизма и ботанического состава меда. Восстановление цвета колоний и способности агглютинироваться специфической сывороткой отмечали на 13-е сутки после хранения культур при 4°С.

Изменения культуряльно-биохимических и серологических свойстп'у культур и эь17о 11 отмечены такае и поело

совместного их выращивания с дальнейшим хранением в различных медах. Культуры я.д1уе1 (!> 923), выраженные в течение 24 часов С культурами БЬ-Богте! , Sh.nevca3t.le И зП.Пехпгг! ,

после пребывания в липовом и гречичном медах б течение 24-96 часов при посеве на-среду висыут-сульфкт агг.р давали рост черных колоний. После пребывания в липовом меде ¡гультуры ii.aivoi и sh.sonnei свертывали молоко , разлагали арабпназу, мальтозу, 0бра301ЫВалИ Ь'КСЛОТу Б рамНОЗе. Il.alvéi- И Sh .ne-icnstle свертывали молоко, р'азлагг.ли арабинозу, рамнозу, г.'.у.козу и лактозу. H.alvei и sh.fiuxneri расщепляли мочешшу, !■ .злегали арабинозу, глюкозу, галактозу, мальтозу, лактозу, глицерин; ман-нит и сорбит. После соемёстного пребывания в полифкорком меде H.alvei и sh.newcaatie расщепляли мочевину, не разлагали рамнозу и лактозу. Культуры H.alvei и sh.fioxneri не разлагали сахарозу, a tí,aivoi и sh.flexneri . образовывали кислоту в сахарозе и разлагали сорбит. После совместного пребывания В гречичном меде культуры ii.alvei И Sh.Sonnei разлагали глюкозу, не разлагали сахарозу. H.alvei И Sh.newcaJ.tlo расщепляли мочевину, разлагали глюкозу, не разлагали лактозу и сорбит. Культуры шигелл не агглютинировали со 'специфическими 1 сыворотками и давали положительную реакцию с гафниоэноЛ сывороткой (кроме sh.newcastie из гречичного меда).

Сохраняемость в 30,оО и 80%-ном водном растворе меда. При температуре 37° выживаемость культур sai .puiiorum на 30^-ном липовом меде составила 296 дней, на ¿O^-нсм - 130 и на 80%-ном 67 дней. Ps.apisepticum , соответственно - 296, 130 и 13, Sh.newcastie - 296, 37,13, Sh.Sonnei - 296, 130, 13 дней, S h. flex ne ri ~ 277 ' 2SÖ> I3' Esch.coli - 296 , 296, 13, H.alvei » I49> - 277, 30, 13 дней.н-alvei (пт^ш Ж07)

- 296, 277, 67, Bac.alvei -277, 296, 29 ДНеЙ,Snt.Eaecalis

- 277, 37, 13 дней. При 13-27° выживаемость изучаемых культур в 30Í-HOM меде была до 186 дней, в 00%-ном - 139 (за исключением вас.alvei 186), а в 80%-ном меде - от 13 до 20 дней (за исключением вас.alvei - 186 дней). При 4° выживаемость

культур б 30-^0 и 8С£-ном пздо составила 1-16-176 дней. После 3, 6, 13-го дня выживания в ЗО^-иом липовом меде при температуре 37°, культуры Sh.Con.nai , £Ь. псислз Ь!» , 5П . Е^хпегЧ в отличие от исходных на среде висмут-сульфит агара дали рост черных колоний и потеряли способность агглютинироваться со споци^нческ-.п!;: сыворотками. Восстановление цвета колоний и

агглютпнабелыюсти культур sh.son.ici отмечали на 19-й день

• о

после хранения агаровых культур в холодильнике при 4 , а у гультур о'п . С I И Б!1 .пл\.'слз(:1е процесс ИЗМЕНЧИВОСТИ

оказался неоС^атиммм (наблюдение проводи.1.:! в течение 77 суток). Подобнее изменения через более продолжительный срок отмечены у микроорганизмов, высеваемых из кнфкцироьг.шшх 30, оО. и 80^-их растворов медов, сохранинпихся при 13-26 (Г_>~67 дней) и 4°С (106 дней). Длительность сохранят«'указала« свойств была обратно пропорционал;на концентрации меда и зависела от вида микроорганизма. При 37° изучаемые культуры изменяли свои свойства к молоку, желатине, лактозе и сахарозе после 3, 6, 13, 20 и 30 дней выживания на 30, 60 и БО^-ком липовом меде. При 13-26°С изменения свойств отмечены к молоку, желатине, лактозе, сахарозе, манниту и сорбиту на 3, 6, 13, 20, 30, 37, 67, 130, 157, 277 дней выживания в указанных разведениях этого меда. При 4°С резкие изменения по сравнению с исходными данными отмечены к молоку, желатине, лактозе, сахарозе и сорбиту после 3, 6, 13, 20, 30, 37, 75, 116 и 146 дней. •

Сохраняемость в 33, 50 и 67%-ннх ^одн^х растворах сахара. Изучаемые микроорганизмы в 33, 50 и 67^-кых растворах сахара сохраняются наиболее долго. Показатели их е..:;ивг.смости при 37° и комнатной температуре практически были идентичны с аналогичными данными по сохраняемости в 30 и 50^-ных растворах меда.

Некоторые культуры возбудителей изменяют свои св(-Гп. в

растворах сахара по отношению к росту ка висмут-сульфит агара, теряют способность вступать в реакцка со специфическими сыворотками. Восстановление агглютинабельности культур в некоторых случаях возможно при выдерживании их различное время при 4°С. Изменения биохимических свойств при хранении микроорганизмов в растворах сахара в основном касались молока, желатины, лактозы, сахарозы, маннита и сорбита.

Сохранность в воске. При комнатной температуре (14-28°) в воске выживаемость у Sh.Elexneri.Sh.Sonnei.Ps.apisepticu.T, и Ent - faecal is СОСТЭБИЛа 180, у Sal. pul lorium - 170, y ".ach . coli - 200 дней, lUalvei u Sil. neucas t le - 146, y Bac.alvei 230 дней. При 4°C они сохранялись до 210 дней, за исключением Bac.aivei - 240 дней. Аналогичные данные nd" выживанию микроорганизмов при комнатной температуре получены в вощине.

При 4° на сотах ИЗ девяти культур пять( H. a Ivo i ,Sh .Sonnet , Sil. £ lexneri , Sh .neucast le , nach .col i ) ВЫЖИВаЛИ ПО 240 ДНеЙ,

Sal. pul 1 orium - 260; Ps.apiaupticum - 250; Bnc.alvei - 300; Cnt.Eaec.iUs - 210 ДНеЙ .

Сохраняемость в 2й%<-ксм спиртовом экстракте прополиса и 96°-ном этиловом спирте. В пробирках, куда добавляли к 5 мл !£Ш 0,1 мл двадцатипятипроцентного спиртового раствора прополиса, все изучаемые культуры сохраняли жизнеспособность в течение 20 дней. При добавлении 0,5 мл раствора прополиса r.nt. taecaiis, t

ü.alvei t Sh.Sonnei, Sh . fl exn з с i , Sh . nowcast I e ■ Ks ch . со t i выживали ОДИН день; Ps.apisepticiKii - два; Sal .pullorum и вас.aiveb 10 дней. О,7"мл раствора прополиса задерживал рост у 7 культур, кроме Sal.pullorura.ps.apisepticum u 3ac.alvei. Полное отсутствие роста изучаемых культур отмечали в пробирках с содержанием 2,í>% прополиса. В контроле, где количество -96°спирт£ составила 0,1-0,2-0,3 мл сроки выживаемости изучаемых культур были равны 25 дням, за исключением культур H.aivei(24, 24 и 20

ней) и sn.£\jxnori (24 дня). При 0,5 мл содержания спирта ыжив.'-еыость H.oWsi и sh.novc.otie составили 3 дня; езсь. :оц И Sh.floxnori - в дней; H.alval -ti; Sh.Sonnai,Ent. :а-.»саНз u P3.api.u;>t icun - 7¡ y Sal.puilorura - 12 И y Oac. iitfdi - 24 дщ.. При 0,7 мл содержания спирта рост sai.puiiocu.n,

's.apiscpticum.Ent.fascalia u "h.Sonnai ОТМеЧСН В течение

1 дней, у '.!.alvci,Sh.novcd3tlo - 3 ДНЯ, у Sh.£ lexneci и lîsch. ;oli - в течение 4 и у Bac.aivei _ 24 дня. Полное

'тсутствие роста отмечали в пробирке, содержащеЯ 21$ спирта.

Результаты исследований показали, что выживаемость онтеро-атогенных микроорганизмов и возбудителей гнильца пчел зависит ■т температуры и окружающей среды.. Наименьшее сохранение отменно при температуре 37°, наибольшее - при +4°С. Однако различие ВИДЫ Salinonoll И Pr.vulgaris В ЛИПОВОМ И ГЮЛИфлерНСМ едах теряют жизнеспособность значительно раныш - при темпера-уре 13-27°, чем при 37°. В зависимости от длительного хранения ти микроорганизмы могут изменить свои биохимические и серологи!-еские свойства. Наибольшая изменчивость, затрагивающая биохими-еские свойства потери способности шигелл агглютинироваться спе-.ибк^е с к ими сыворотками, отмечена при их совместном культивиро-ании и длительном пребывании в медах. Восстановление их перво-ачальных свойств возмогло при Еыращивании на '/ПА, в термостате течение суток и последующем хранении в холодильнике различное ремя (до 13 и болызе суток). Эти условия, по-видимому, способ-TEyi.iT освобождению временно блокированных рецепторов клеток ступать во взаимосвязь с антителами специфических сывороток,не схлючено также сохранение отдельными клонами клеток исходных войств данного микроорганизма. Мода различного ботанического оствва неодинаково влияют на сохранность и изменчивость микро-рганизмов. Наиболее сильным бактерицидным действием обладал ли-овый мед, в меньшей степени полифдерный и слабым гречичный мед.

Активность медов резко ¡ЗНижается при их рас.Завлении водой. В 30 и о0$-ных медах, 33-50-67% водных растворах пищевого сахара сохраняемость и изменчивость свойств микроорганизмов приблизительно одинакова. Изучаемые микроорганизмы длительное время сохраняются также в воске, на поверхности сотов и вощины. Наимень-кая сохраняемость изучаемых микроорганизмов отмечена £ прополисе.

Патогенность микроорганизмов для пчел и лабораторных животных

При содержании здорових пчел в инфицированных садках из трех культур н.а1уе1 оказались патогенными две (.¥306, 230). Средняя продолжительность жизни пчел при этом составила 6,3 и 6,9 дня, в контроле - 16,6 дней (Р^ 0,05). При-контактном способе заражения здоровых пчел, содержащихся вместе с больными, из четырех культур н.а1^е1 патогенными били две (М38, 443). Заражение контактом привело к сокращению жизни пчел до 6,93 и 7,1В против 19,43 дней в контроле. При опрыскивании пчел из 22 культур с концентрацией микробных тел I млрд/мл патогенными были все культуры. Средняя продолжительность жизни пчел при этом сокращалась до 5,0-7.86 дней, пр..'.-ив 20,90-24,33 в контролях (Р 0,01-0,0э). При скармлиьании 28 культур с концентрацией микробных тел I млрд/мл патогенными оказались 22. Средняя продолжительность жизни в опытных группах колебалась от 33,3 дней до 8,93, в контроле от 18,06 до 24,об дней. При инъекции в геыоцель 100 тыс.микробных тел культуры № 438 н.а1уе1 гибель пчел в опытных группах наступала на Ь-е сутки, в контрольных - 22-е сутки.

Различия в патогенности культур ii.ai.vei зависят от места их первоначального выделения из организма пчел. Так,одиннадцать культур, выделенных из гемолимфы и мьшц пчел при опрыскивании и скармливании вызывали достоверную (Р ^-0,01-0,05) гибель пчел в ■ течение 3-7,5 дней. Б то хе время из II культур " н.а1уе1 с пер-

воначальнсП локализацией в юсечнике гибель на 6,3-11,0'день (Р-с 0,0Ь) вызывали восемь. Патогенность зависела

также от концентрации микробных тел, поступающих в организм здоровых пчал. При скармливании н.а!уе1 "306 в концентрации I млрд. микробных тел/мл гибель пчел наступала через 7,6 дня, при концентрации от 10 до 100 млн.микробных тел/ыл - пчелы погибали на десятый день , 10 тыс./ил - на 13 день. Время гибели пчел, как видно, находится в прямой зависимости от способа заражения. При заражении в гемоцель в дозе I мкл и концентрации 100 тыс.микробных тел в I мл -культурами !? 306 и 438 пчелы хили о,8 дня, а при скармливании - 9-12 дней. Заражение в гемоцель сокращало продолжительность жизни насекомых почти в два раза. В контрольных группах они :-хнли 23 дня.

Из 25 культур ,н.'а1уе1 . выделенных из воска, при скармливании патогенными для:пчел оказались 20.'Продолжительность жизни пчел з опытной группе составила от 5 до II дней, а в контрольной от 24 до 28 дней (Р < 0,014),02-0,ОЬ). Из 17 культур, выделенных из сотов путем скармливания, патогенными быЛи 13. Продолжительность кизни пчел составила от 5 до дней, в контроле - 25 (Р ^ 0,01- 0,02-0,06). При скармливании.патогенными,для пчел оказались 63,Ь% культур, выделенных-из расплода пчел, 80% - из меда, 83,3% из божьих коровок, муравьев и их' куколок. Сроки продолжительности жизни пчел в опытных-группа* составили от 3 до II дней, а в контрольных от 18 до 29 дней. • .

С учетом пьзмо:шостм изменения патогенноотн гафний иод действием сред, длпте.чоности культин'ировиния и хранения, (.-ыл поставлен ряд опытов. Культуры гафний )№ 923, 149, 810, 710, ; 717, 607 после 60 и 120 дней культивирования на .\11А'при 37°С * и последующего скармливания пчелам в концентрации I млрд. -мик-« ' робных кл'еток/мл оказались патогенными. Длительность яЯЬни опытных групп пчел была от-6 до 10 дней, в контроле 24-26 дней

(Р < 0,02-0,05). После длительного уультивиротш« на :£т (хранение в холодильнике при 4° в течение 22гЗ дней) ;:з ыестн культу н.alvei патогенными для пчел оказались четыре, длительность хизни пчел в опытной группе составила от S до 6,Б дня, а в контроле - 21 день (Р ^ 0,02-0,0о). В комнатных условиях при темпер; туре 13-27° после 23-37-61 дня выживания на полифлерном меде из трех культур п.alvei патогенным для пчел был один (W7I7) (Р^.0,02), апатогенньши - два (№ 710, Ь07). Аналогичное сохранс нис патогенности гафний в течение 67 дней в липовом меде при егс хранении в тех ко условиях отмечено для культуры Í? 710 и потеря у двух других. В то же время при комнатной температуре или в условиях холодильника (+4) болызинство изучаемых культур сохранили своз патогенность в различных медах до 212-239 дней, а в гречичном меде--tuja 37°-С - до 91 дня (срок исследования).

Во всех иинтах по заражению пчел культурами у заболевших насекли!.-; наблюдали скоьншость в движениях, слабость,' пчелы поллади с разяут:.:ми Cpwuouii, отмечали часту» дефекации, иногда наступал паралич ножек, крильеы, отсутствовало•реакция на раодра-хен/.е. 1!а вторые и третьи сутки после заражения у больных ичел к]и:еУН!'к вздут (грязно-серого цвета). У пчел контрольных групп кг '.--/х-лнСо видимых изменений не отмечено. . -

У заражениях культурами гафнкй с признаками заболевания ич«л г. пчел, >оторви скармливали в течение трех суток сахарный сироп с добавлением 2:1 фильтрата жидкой среды после культивировг ния в течение 24 часов на ней гафний !.' 149, стенка средней кишки была отечна, набухшая. Уыыешше волокна наружного слоя растянута, напряжены, четкость их послоГ'Ного расположения не прослеживалась. Оиптелий резко набухший, на некоторых его участках наблюдали грубую вакуолизацию и разрывы. Ндра в большинстве клеток набухиие, 'четкость их рисунка сглачена. Цитоплазма клеток просветлена и заполнена грубыми глыбками денатурированного балка.

Ворсинки нп апикальных концах клеток не просматриваются. Пери-трофическая мембранг. вместе с дегенерировснным эпителием образует грубую бесформенную массу, окрашенную окснфильно. В переднем отделе средней кишки в цитоплазме эпителиальных клеток и просвете кишки обнаруживается включения, интенсивно окрашенные эозином. Тонкая кишка набухшая. Слизистая оболочка отечна, в некоторых местах просматривается ее отслоение, отек складок. Ядра сохранены во всех клотках, расположены на беэальнкх концах. Цитоплазма отечная, вакуолязирована и состоит из грубых зерен.

У пчел', получавших токсины ii.aiv.ji (№ 438), типичным для некроза изменениям, подвержены апикальные концы эпителиальных клеток средней кишки.•Перитрофичекая мембрана дегенирироЕана и вытянута в виде грубых бесструктурных нитей. Различия в воздействии образующихся.при культивировании гафний токсинов на*

организм пчел.заключались в меньшей степени выраженности изменений в средней кишке, некрозе эпителия, гибели ядер клеток (культура К 149), в грубой деструкции перитрофической мембраны, повреждении апикальной части эпителиальных клеток (культура 43В).

Пассаж гафний через организм пчел приводит к изменению ряда их свойств. Из 10 культур н.ан-е1 у пяти после проведения их через пчел появилась способность к восстановлен!'» нитратов, у одной культуры она исчезла, все культуры приобрели способность разлагать мочевину, некоторые изменили отношение к реакции ¿огес-Проскаузра, к сахарозе, рафинозе, адениту, сорбиту, инозиту. При подкожном, вьутрибрюкном введении а.а17с-1 , выделен-1ых от больных пчел, и скармливании белым мышам и морским свинки; .заболевания и гибели последил« не наблюдали.

При скармливании пчела!.! в концентрации I млрд. микробных ел/мл 32 культур зь.вопле! , выделенных из больных пче.д, рас-лода, меда, клещей влрроа и разлмнж насекомых из улья, 28

культур оказались патогенными для пчел ( Р<С 0,GI-0,C2-0,0¿>). Г.родол.уитсльность жизни пчел составила от а до II дней; при к из ни пчел в контроле 24,9-27,5 суток._Е опытах г.ри опрыскивании из 20 культур -i.sannei патогенными для пчел были 17. 11родсл:аи?гельность жг.зн.1 пчел составила от 5 до 10 дней ¡I в контроле 21,0-24,d (?<с 0,01-С,02-С,С5). Кз 32 культур sh-.néxneti при скармливании патогенными были 23. Продолжительность кисг.'.и пчел в опыте от пути до-добили дней, а в контроле от 21 до 2ü дней (Р ^ 0,01-0,02г0,05>. Из 1Ü культур sh.fiexriori при опрыскивания'патогенными (Р <• 0,01-0,02-0,05) оказались 15. При скармливании все четыре культу- -ры sii.nc-ucasti е , выделенные из меда, были, натегецну для-пчел. -Продолжительность хизнп пчел составила в опыте ot и:астп до девяти дней, а в контрольных от 25 до 2Ü дней (F 0^01-0,02-0,0й}. При опрчекиьании две культуры отого микроорганизма достоверно снижали хкзгь пчэд до 7 дней против 24 дней в контроле (Р<- 0,01-0,02).

Культуры Sh.Gonnei ,Sh. ns'vcas t lo, oh . £ lexncri КССЛеОО И 126

дней ку "локирования на MIA при 37° и поеледувцего скармливания

' пчелам в дезе I млрд. м.к. в I мл оставались патогенными для пчел.

Длительносл'ь.зшзни насекомых в опыте была от 6 до 10, б контроле

до 22 дней (Р0,02-0,05). Выделенные от человека sh.sonaoi .

Sh newcastle к Sh.flexnqri Также ПРИВОДИЛИ К ГЛбвЛИ ПЧеЛ При

О

скармливании, опрыскивании, контактном способе заражения и инокуляции в гслацель. Эти микроорганизмы, внесенные в липовый мед и хранившиеся в' нем при 4°С 126 дней,' были апатогенны для белых мышей . Хранившиеся в то хе время и при тех хс условиях культуры этих шигелл на ША вызывали гибель животных. Из трех мышей в каждом ■ опыте от куль-туры Sh. Elexnori-. ПОГИО'ЛИ Все. Sh.Sonnei _ две, Sh.ns^castle „ - ОДМа J-ПЛДЬ. • - -

Признаки заболевания пчел иигеллезом сходаы с гафниозом. Гистологическое иссцед^аниз кишечника больных пчел'при заражении их культурами или фильтратами сред, на которых*выращивались эта

возбудители, ПОКЯЗЫВР-ЕТ, ЧТО .при . ('? 4.76) а сродней

кжке встречаются изменения. в поритг.-офнческой .мймбраьо. Происходит ее отслоение, коагуляция, деструкция. Апикальные кот?! эпителиальных .клеток в стадии зернистой дистрофии, и безальная часть их вакуолизиросана. Ядра у большинства клеток активны, но оттеснены к баэальнсй мембране. В тонкой кийке отсутствует хитин, эпителий нЬбухший, отмечается зернистая дистрофия с вакуолизацией. У пчел, зараженных яь.п?исазЫв _ ()? 64), изменения п средней юшке аналогичны с таковыми, как при п..»1уэ1 (;,> 149), но целостность клеточных структур сохранена больше. В тонкой кишке глубокие деструктивные и дегенеративные изменения со стороны слизистой оболочки: вакуолизация, отслоение. Хитин в виде бесформенных масс или глибок находится в просвете кишки. Токсин из культуры sh.ncvcas.tU' С вызвал изменения в перитрофпческой мембране, эпителиальные клетки были в состоянии дистрофии и вакуолизации.

Культуры шигелл, изменившие свои биохимические свойства и утерявшие способность к агглютинации специфическими сыворотками, после длительного хранения в медах, восстанавливаются при пассаже через организм пчел. Так, культуры зь.Боппа1похпог1 БЬ.г>е«сазс1е , давшие на висмут-сульфит агаре рост зеленых колоний и не агглютинировавшиеся со специфическими сыворотками, через три дня после первого пассажа через пчел на этом агаре росли в виде черных колоний. После второго пассажа рост черных колоний нп висмут-сульфит агаре наблюдали у культур зь.Е1ехпас1 и зь.поппо! , а зеленых - у зм.па«слг,с1е . После третьего пас-сака все дультуры па этой среде давали рост черных колоний. По сравнен!«) с исходными пассахирссанные культуры выделяли индол, образовывали сероводород, .свертывали молоко, ферментировали ара-бинозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, рафинозу, сорбит, дульцит, сбрезуЕЫЕалк кислоту-в рямнозе, газ в глюкозе, галактозе, глице-

рине, ыцнните и инозите. Способность к агглютинации со специфи-ческкми сыворотками восстанавливалась после первого пяссажа^она сохранялась во втором и третьем пассажах.

Все 10 культур сальмонелл (,Sal.typhi muriura - 9,Sa1.ent-gartneri _ I), выделенные от больных пчел, оказались патогенными для пчел (Р 0,01-0,02-0,05). Продолжительность шни пчел в опытных группах составила от 4,0 до 8,7 дней, в контроле от 27,5 -до 28,8 дней. Из восьми культур сальмонелл от теплокровных при скармливании патогенными для пчел оказались шесть (Р ^ 0,02-0,05). При опрыскивании из шести культур сальмонелл достоверную (Р < 0,05) гибель пчел вызыьала одна культура. Продолжительность-"жизни пчел в опытных группах при скармливании составила от 6,0 до 9 дней, а в контроле 16-27 дней. Признаки заболевания были аналогичны, как и при других онтеропатогенних бактериях. Пассаж сальмонелл теплокровных киеотных через организм пчел приводил к изменению свойств у некоторых кулЬ'тур этих микроорганизмов по отношен™ к мочевине, глюкозе, мальтозе, сахарозе.

Все ссмь культур возбудителя псевдомоноза, выделенные с вощины, и 19 культур из больных пчел, были патогенными для пчел (Р^ 0,01-0,02-0,0.5). Продолжительность ниэнп пчел составила от 4,5 деО.З дня, а в контрольных опытах - 25-28 дней. Признак распада тела пчел на ссгкснты был непостоянным. Девать культур Pr.vulgaris б опытах такжо оказались патогенными для пчел. Признаки заболевания были подобны вишеуказашсм. Во Н'.'ех случаях успешного заражения из мышц погибших пчел высевали исходные культуры микроорганизмов.

Таким образом, больсинстио культур, выделенных из пчел, меда, воска, вощины и из членистоногих, а также культур от теплокровных животных способны вызвать заражение пчел при скармливании, контактно, опрыскиванием г инъекции.:в геиоцель. При поступлении с кормом эти энтсропатогени и продукты их жизнедеятельности вузывают

характерно :1з«сие:шл н П'-лсчнаке имел, порез стенку кишечника микроорганизмы проиил'хт а 'гемолимфу и приводят к гибели насекомых . Длительность хг.зпн ;пф:ц:фок1.нкых пчел зависит от способа зарашг.'.я, особепюстсП культур и мост впдслския созбудитоля. Культур л иигелл , пидсленкно от человека, при длительном хранении в моде становятся шщруяеняъчи! для белых шяеЯ. Ь результате пас-с»..г.п через ерганко!.! пчел микроорганизм пэменгхт нсюторие куль-туральг.ио к биохимические сооиотп а. Восстановлен.!« : :у1 • ту г1 • • льно-С:'.ох;!\глчи<;к:'х и агглют.'.пнруи'^нх сасг.ств у ыиголл происходит при пасоа.-;о через организм г;чол. Еосипсн.'чго.ден::'; признаков болезн'* при заражения онтср^Сяктерикмя, иямоненпя в кгаечно.". стойко и гемолимфе и реизоляция «а последней испытуемых мк1грос>рг.'!1птй:!03 укали ет на нх п-тгогоннуа-роль у насекла:* и подтверждает правильности поставленного диагноза при обследовании неблагополучных сомой пчел на пасек;х Дальнего Востока.

1азработка мер борьбы и профилактики бактериальных болезней пчел

Результаты обследования пасек, складов, воскозапода, выделение и идентификация патогенных микроорганизмов позволили перейти к разработке мероприятий по борьбе с бактериальными болезнями пчел.

Для выявления энторопатегенов и возбуди"Л>лей гнильцових заболеваний пчел были изготовлен1; спеь',пф;гчеек:;е сыворотки для диагностики гафнкозп, пигеллеза, септицемии и гнильцов. Всего было получено 2,Ь л сыпорОтки; из них гафнпозной -1,0 л, шигеллезной 0,5 л, для выявления псевдомоноза - 0,й л и противогнильцовых -- О,5.л.

Специфичность и активность полученных с.ыпороток была проверена в лабораторных условиях с гомологичными и гетерологичными антигенами, Сьшорстки использовали в работе по диагностике и

идентификации возбудителей .бактериальных аабодеваний-Вразличных очагах гибели пчел на Дальнем Востоке. Эти сыворотки были также разосланы и проверены в Биробиджанской областной и Хабаровской краевой ветеринарных лабораториях',' а также Артемовской, Дальне-реченской Партизанской и Уссурийской ветеринарных лабораториях Приморского края; Архаринской и Благовещенской ветеринарных лабораториях Амурской области, Ростовской ветеринарной лаборатории, в лабораториях по изучению болезней пчел ВЮВ и БелНИВИ.

Разработке лечебных мероприятий предшествовало определение чувствительности выделенных 150 культур микроорганизмов к восьми антибиотикам. Все исследуемые микроорганизмы оказались высокочувствительными или чувствительными к левомицетину, стрептомици- • ну, неомицину за исключением 24/5 культур вас .аГлП к левомицетину, 23% и.<.к стрептомицину и II/' культур ре.а?1сорс1сит к нео-мицину. Отк антибиотики были взяты для изучения их бактериологических концентраций, доз и эффективности. Из взятых 10 культур

бактериостатические концентрации ьеомицина у девяти культур составляли 60 ед/мя, у одной культуры - 25 ед/мл, к лево-мпцо/ину у шести культур они равнялись 100 мг/мл, у четырех - 50 иг/мл. Действие стрептомицина было слабим, рост наблюдали у всех 10.культур. При применении комбинации двух антибиотиков бактерио-статичеокий эффект против трех культур гафний усилился в 10 раз, у пят,: культур см увеличился в пять раз, а у двух в 2,5 раза. При комбинации всех трех антибиотиков отмечено увеличение бакте-риостатического эффекта у одной культуры в 63 раза, шести культур в восемь раз, а у остальных - в 31,4-35 раз. Аналогичные данные получены при испытании этих комбинаций для других изучаемых возбудителе:';, усиление активности при комбинации двух антибиотиков было в 2,5 раза, а трех - от 2-4 до 32-63 раз. В лабораторных условиях наиболее высокий лечебный эффект отмечен у насекомых, получавших стрептомицин +" неомицик + лезомицетш. После первой и

третьей обработки рост изучаемых культур на среде не наблюдали при посеве суспензии, :о тело зараяешшх пчел. В контроле отвечали гибель пчел, из гемолтофы которых высевали гафнии.

Лечение, проведенное в'производственных условиях и мае,показало отсутсь-ие н.а1уе1 при высеве содеркнмого кишечника в группе сразу :ге после первой обработки их комбинаций ловсмицети-не, неомиЦина и стрептомицина (Р ¿10,06). Возбудитель гафниоза 1е был'обнаружен таете и в группе семей пчел, получ'овзих несмнцин и левомицетин (Р-^-О.ОЬ). В остальных подопытных группах количество по срявнешга с их числом до обработки значительно снизилось. В' середине июля,после окончания медосбора, п подопытных и контрольных группах проведена ревизия. Наибольший прирост п'-'ол (236,отмечен в группе,получавшей стрептомицин,лепемнце-Т1!н,не0мицин, от пчелиных се:,¡ей . этой группы получено og.ij.lo кеда (147 кг). 3 контроле прирост .пчел - 130,С^ и кед** - СО кг.

Двукратная обработка стрептомицином-«левоцицетином« нс-омкци-ном и неомицином + левомицетинсм тех же семой пчол в .октябре без изъятия сотое и кормовых запасов из них пркаела к сшшяш.' выделения гафний из кишечного содержимого пчел. Отот возбудитель не был установлен после третьей обработки антибиотиками (Р0,0^). После выставки семей пчел этой пасеки в апреле следующего года в контрольных и подопытных сеипюс Сила проведена ревизия, установлена их сила.Сохранность пчел за зимовку в группе, получавшей стрептомицин,левомицетин и неомицин,составляла в группе с неомицином и левсмицеткном - 4и£,в контроле - 15,Ь'-!.

Трехкратное скармливание 0,^ л сахарного сиропа (1:1), содержащего по 2С0 тас.ед.стрептомицина,левомицеткна и ноемнцнна, через три дня и проведение дезинфекционных мероприятий оказались . в одинаковой степени эффективными не только при гафниоэе, но и

при шигеллезах, спльмонеллезах, псездомонозе.а также при кислом . и доброкачественном гнильцах. Эти мероприятия при соблюдении сани-

тарных мер позволили оздоровить семьи пчел от бактериальных заболеваний на пасеках в 38 неблагополучных ..озяйствах Дальнего Востока и ввести эти. рекомендации в действие по борьбе с энтеро-патогенами. • ' .. _ " . -

В связи с опасностью энтеропатогенов для человека■ необходима организация бактериологического контроля меда и других продуктов гшелсЕогл'.тва на наличие oTirx возбудителей. При выделении следует учитывать изменчивость этих микроорганизмов з результате кон такта с продуктом. Мед, воск неблагополучных по энтеропатогенам пасек, очевидно, можно использовать после соответствующего ввдер-кивания^термической или какой-либо другой обработки в кондитерской, парфюмерной и фармацевтической промышленности. Во всяком случае,в предварительных опытах потеря жизнеспособности исследуе-Î.UX микроорганизмов наступала после нагревания меда при 90*° в течение 10 мин. или воздействия УФ-лучей бактерицидной лампы ВУВ-30 на расстоянии 1,5 м на тонкий слой меда в течение 100 минут.

ВЫВОДЫ

1. 3 1970-1980 гг. на территории Дальнего Востока бактериаль< нне бспезни взрослых пчел зарегистрированы б 12,19 % обследуемых семей на 18,713 пасек. Наибольшее выделениз неблагополучных пчелиных семей отмечено в Хабаровском крае (19,03$), меньше в Примор ском крае (8,8^) и Амурской области (7,44^). В хозяйствах Амурской области и Приморского края поражение расплода доброкачественным и кислым гнильцами выявлено в 2,33^ семей.

2. В Приморском крае гафниоз установлен в 13,51% обследована: пчелиных семей, псевдомоноз - 0,30$, сальмонеллез {sai .ont .-jartne ~ 0,07/., кислый гнилец - В Хабаровском крае гафниозом пора жено 11,75?' семей, шигеллезом ( ' sh-somai ) - 4,44^,

альмонеллеэом ( typhi .suriu«) • -2,5-1%, псивдомонозом -,22%. 3 Амурской области гафниоз обнаружен у 6,25 % сеней, игеллози с возбудителем ah .лзпгк.4 -0,75;?, а пи,пaxneri ,21%, сальмснеллез (sal. typhi nuriiin ) - 0,22%, доброкачест-знный гнилец - 3,455, кислый гнилец - у 1,29^пчелин1.:х семей.

3. Бактериальные болезни взрослых пчел встречаются самосто-гельно' (16,9 % семей) и ь виде смешанных инфекций (83,1 %), эеди которых преобладают бактериозы с различными иаразитозами г7,39%), преимущественно варрооэом (72,61%).

4. На гц.секах Дальнего Еостока носительство пнтеробактерий кишечном содержимом взрослых пчел зар егистриропаноуй,66% ¡следованных семей.

5. В неблагополучных семьях пчел и семьях-носителях инфи-[ровт-нность онтерог.атогенами личинок открытого расплода отмена в 25,97% семей, сотов из гнезд пчел - 84,94% проб,меда -;,7%, в клещей варроа - 38,9%, ьзрослых муравьев и божьих ковок из ульев - 100%, куколок муравьев - 66,7%. Возбудители ильцОл установлены на поверхности сотов в 28,3% проб, в меде -,69%: поступающий с отих пасек воск содержал онтеропатогены 83,58% проб, а изготовляемая на воскозаводе вощина имела на оей поверхности и в 83,33% проб и в 16,67% была инфицирована эбудителямм гнильцовых болезней пчел.

6. Сроки сохранения жизнеспособности возбудителей бекте-э'лъшх болезней пчел в меде, воске^прополисе зависят от ири-хч продукта и темш-м туры хранения. Наименьшая сохраняемости фооргбннэмов отмечена в прополисе, хранении инфицироишшых ;дуктов при 37°С; хгри 4°С, разведении меда, прополиса бикте-;идные свойства снижаются. Медн различного ботанического проведения неодинаково влияют на сохранение микроорганизмов,

наименьиая выживаемость их отмечена в липовом меде, слабее действует полифлерный мед, и наиболее 'длительно они остаются дизкеспа-собными в гречичнсм меде. Сальмонеллы и Рс.уи1таг1з значительно быстрее инактивируются в липовом и полифлерном меде при 13-27°, чем при 37°С. ' ,

7. Видовой состав микроорганизмов и длительность пребывания их в продуктах пчеловодства оказывают влияние на.изменение куль-туральных, биохимических свойств некоторых энтерспатогенных культур. •

8. Знтеропатогенные микроорганизмы от больных пчел, пчел- . -носителей, теплокровных животных, а также выделенные из меда, воска, вощины, членистоногих - паразитов и другйх вредителей, способны заряжать пчел при скармливании, опрыскивании, контактно или .... инъекцией в гемоцель. Длительность жизни инфицированных пчел зависит от способа заражения, количества микроорганизмов и агрессивности культур возбудителя. н.а17С1 ., выделенные из гемолимфы пчел, обладают больней патогенностыо для отих насекомых, чем подобные микроорганизмы из кишечника содержимого пчел.

9. При -поступлении с кормом энтеробактерми и продукты их ■жизнедеятельности вызывают"характерные изменения в кишечной стенке, проникает в гемолимфу'и приводят насекомых к гибели.

10. ii.aivt.-i от больных пчел не вызывают заболевания и гибели белых миыей и морских свинок при подкожном, внутрибрюаном заражении и скармливании. Культуры шкгелл, выделенные .от больных людей, поело 120-дневного пребывания в липовом меде при 4°С становятся авирулонтными для белых мышей. Сальмонеллы от теплокровных животных при пассаже через организм пчел изменяют свои культу рельные и биохимические свойства.

11. Восстановление исходных культуралышх, биохимических свойств энтеропятогенных микроорганизмов, способности к агглютинации со специфическими сыворотками у пиголл псслс длительного сохранения их в меде пли совместного присутствия шигеля и галлий в этом продукте происходит в ряде случаев при выдерживании 24-чсссе!ь;х культур не менее 13 дней при +4°С или пассаже через организм-пчел.

12. Изменчивость свойств микроорганизмов семейства Bntoro-b.ictuL-i,Tt-ae необходимо учитывать при диагностике заболеваний медоносных пчел и оценке санитарного, состояния продуктов пчело-

. водства. '

13. Успешное лечение онтеробактериозоа, псевдомоноза, а также доброкачественного .и кислого гнильца возможно при скармливании неблагополучным семьям пчел комбинации левомицетина, неомицина и стрептомицина растворенных rioi,200 тыс.ед. в 0,0 л сахарного сиропа (1:1), Трехкратно через три дня и осуцестплении санитарных и дезинфекционных мероприятий на неблагополучных пасеках. ' |.' :'■/.••

14. Для предупреждения,дальнейшего распространения патоген- " ных для пчел микроорганизмов необходимо тщательное выполнение санитарных мероприятий на пасеках, в местах хранения, заготовки, 'переработки и продажи продуктов пчеловодства^ а также проведение бактериологического контроля продуктов пчеловодства на. наличие опасных для человека антеуюпатогенов. •

практкчес!Ш арцутшш

1. Инструкция "О мероприятиях по предупреждению и ликвидации

заразных .болезней пчел", (утв.ГУБ МСХ СССР 3 марта " ' 44 1977~г.). : ;

2. Инструкция "О мероприятиях по предупреждению и ликвидации зе-\ ' разных болезней пчел?(утв.ГУВ УСХ СССР 27 декабря

' 1984 г.). ' ■

3. Методические рекомендации.'^Основные заболевания пчел на Даль-

нем Востоке, их профилактика и лечение*(Новосибирск 1980, Сибирское отд.ВАСХНИЛ).

4. Методические указание "Бактериальные болезни медоносной пчелы

в Приморском, Хабаровском краях и в Амурской облас-.711, их профилактика и лечение" (Магадан, 1990, ■ ВАСХНИЯ Дальневосточное отделение). о. Методические указания "По диагностике бактериальных болезней пчел п Приморском, Хабаровском краях и Амурской области" (Магадан, 1990, ВАСЯШЛ Дальневосточное отделение).

6. Инструкция "О мероприятиях по предупреждению и ликвидации за-

разных болезней пчел" (ута.П/В Госкомиссии Совета Министров ссср по продовольствию и закупкам 12 марта I99J г., пункт 2.Ь).

7. Временное методическое указание по лабораторной диагностике'

протеоза пчел (утв.ГУВ Госкониссии иоветй Мкнист—

ров СССР по продовольствию и закупкам 24 апреля

; i

1991 г. (Совместно с сотрудниками- ВИЭЗ).

8. ¡,'зтодические указинил по диагностированию шкгелл (зонне, ньв-

кастл, флекснера) в меде и у "членистоногих в зоне • Дальнего Востока, ВСХК, г.Благовещенск, 1993г.

СПИСОК РАБОТ, опубдикоип1шк>с по материалам диссертации

1. Реакция агглютинации бактерий полн-г.ьратпфозной группы, оделенных от пчел на плеск»* Приморского края и /муреной области, с поливалентной и монорецепторнои 0 и Н-агглх/гиниру!ощими сальмонеллезнымя сыворотками //Материалы XIX научной ко-нфз-ренции.- Благовещенск: СХЛ, 1971. - С. '32-33.

2. О частоте обнаружения микроорганизмов группы сальмонелл у пчел в Приморском крае и Амурской области //Материалы XIX научной конференции. - Благовещенск: СХИ, 1У71. - С. 39-40'.-

3. Некоторые биологические вопросы взаимоотношения бактерий к-'ли-паратифозных групп, выделенных у медоносной пчелы ( М1'^

игос-а ) с организмом хозяина //Вторая всесоюзная конференция молодых ученых По ветеринарии:-Тезисы докладов. - 1971.-с. 104. .. ' •

4. Сальмонеллы у пчел //Пчеловодство. - 1972. - .','7,. - С. 32.

Ь. К вопросу изучения паратифа у пчел //Проблемы ветеринарии Дальнего Востока. - Благовещенск: Хабар., кн.изд., 1972.-е. 66-67.

6. Паратиф пчел на Дальнем Востоке //Тезиен всесоюзного семинара "Современные метода изучения ботезней пчел и мер) их профилактики" - Уфа, 1972. - С. 43-46. :

7. Биологические особенности пгратифэзннхг бактерий, выделенных от пчел //Ветер,шарил. - 1972. - ?? II."- - С.64.

8. Эффективность лечения ггчел при паратифе //Ветеринария. -Д973.

• - Р 5. - С. 77-78. ! V

9. Результата бактериологических .и вирусологических исследований4

в'зоне неблагополучия по варрозу пчел //Бюллэтень/Всосовз. ] институт экспериментальной ветеринарии: Болезни птиц и пчел. ' 1976. - Вып.21. -'С. 61-62. (соавт. Ю.М.Куценко, В.Т.Кумков). (

1С.Результата бактериологических исследований меда на наличие (

возбудителя гафниоза пчел //Эпизоотология, профилактика и ло- I

чение болезней животных на Дальнем Востоке. - Благовещенск: Хабар, кн. изд., 1976. - С. 46-4о.

11. Распространение гафшоза пчел в зоне Дальнего Востока и серологические особенности его возбудителя/УЭпизоотология, профилактика и лечение болезней животных на Дальнем Востоке. -Благовещенск: Хабар.кн.изд., 1976. - С. 49-51.

12. Результаты изучения культуральНо-биохкмических, серологических и патогенных свойств, гафниозных бактерий, выделенных из различных медов//Опизоотология, профилактика и лечение болезней кивотных Па Дальнем Востоке. - Благовещенск: Хабар, кн.изд., 1976. - С. 52-54. .: ,

13^ Санитарная оценка меда, воска и вощины//Пчелсводсгво. -1977. - ii 5. - С. 31. •

14. Диагностика и лечение гафниоза пчел//Кнформ.листок АМУР. ЦШ1..- Благовещенск; 1977. " . ...

15. Изучение гафний, выделенных из меда//Ветеринария. - IS7d. -H. - С. 44-46.

IÛ. Некоторые особенности микробов из родов Ha£nia u Snigclla. результаты пассакирования Sh.Sonnai,Sh-Elexneci,Sh.navcastle через организм пчел и выпивание их в различных медах//Бо- ■ лезни сельскохозяйственных.животных и пчел зоны Дальнего Востока и меры борьбы, с ними. - Омск J978 С.77-83.

17. Антигенные особенности гафний и некоторых кигелл//Болезни сельскохозяйствен!!!«: животных и пчел зоны Дальнего Востока и меры борьбы с ними.'- Омск, 197Б. т С. 84-06.

18. Выживаемость некоторых возбудителей бактериальных болезней, пчел на ША в различных температурных условиях//Болезни сельскохозяйственных животных и пчел зоны Дальнего Востока и меры борьбы с ними. - Сыск. - 1978. - С. 102-112.

19. Выделение и выживаемость гафний и сигелл в различных медах //Повышение продуктивности сельскохозяйственных ¡кивотных на Дальнем Востоке. - Уссурийск, 197Ь. - Вып.47. - С.108-111).

20. Сроки выживаемости бактериальных культур в медях и сахарном сиропе в различных температурных условиях//Болезни животных на Дальнем Востоке. - Благовещенск: Хабар.кн.изд., 1978. -

' С. 20-23. . ч ■

21. Биологические свойства гафний и Ъигелл, "выделенных не меде //Болезни животных на Дальнем Востоке. -Благовещенск: Хабар.кн.изд., 1978. -С. 24-25.