Применение озона в бактериологической диагностике туберкулеза

Свириденко, Наталья Александровна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Применение озона в бактериологической диагностике туберкулеза

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Свириденко, Наталья Александровна Омск 2008 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Применение озона в бактериологической диагностике туберкулеза

На правше рукописи

СВИРИДЕНКО НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ПРИМЕНЕНИЕ ОЗОНА В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2008

003450364

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных СО Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Бажин Михаил Аристоклевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Аликин Юрий Серафимович,

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Донченко Николай Александрович

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Защита состоится «сЮ» ноября 2008 г. в « /5 » часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Россельхозакадемии

Автореферат разослан «ю » октября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Туберкулез остается одной из главных медико-ветеринарных проблем в мире. Среди инфекционных болезней людей и животных, одно из ведущих мест занимает туберкулез. Высокий уровень заболеваемости регистрируется повсеместно, в том числе и в странах, занимающихся разведением крупного рогатого скота. По данным А.Х. Найманова с соавт. (2004), в инфекционной патологии крупного рогатого скота туберкулез занимает второе место после лейкоза и составляет 11,4%.

Успех борьбы с туберкулезом во многом зависит от своевременной постановки диагноза. Решающая роль в системе противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе животных принадлежит диагностике. В связи с этим разработка и совершенствование способов, повышающих эффективность лабораторной диагностики, продолжается со времен обнаружения «бактерий Коха» и является весьма актуальным, до настоящего времени.

Индикация микобактерий включает в себя микроскопический, культу-ральный и биологический методы, каждый из которых имеет свои недостатки и преимущества (А.И. Каграмманов, 1959; В.И. Голышевская, Т.Т. По-песку, 1989; Г.Ф. Коромыслов, 199В).

Наиболее чувствительным методом выделения микобактерий по праву считается культуральный, позволяющий получать результаты, даже при минимальном количестве возбудителя туберкулеза в исследуемом материале.

В связи с тем, что туберкулез человека и животных и по сей день является огромной проблемой, целесообразно совершенствование микробиологической диагностики туберкулеза, направленное на повышение чувствительности известных традиционных методов и разработку новых, ранее не используемых в микробиологической практике.

Разработка, усовершенствование бактериологической диагностики туберкулеза и внедрение ее в научных и практических учреждениях ветеринарии и медицины является весьма актуальной.

Цель и задачи исследований. Цель работы: усовершенствование бактериологической диагностики туберкулеза с применением озона для стимуляции скорости и интенсивности роста микобактерий.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить видовой спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды, определить оптимальную концентрацию озона для стимуляции роста.

2. Изучить влияние оптимальной концентрации озона для стимуляции скорости и интенсивности роста микобактерий туберкулеза, выделенных из биологического материала морских свинок и крупного рогатого скота.

3. Изучить действие озонированного физиологического раствора in vivo на высеваемость микобактерий туберкулеза.

4. Изучить культурально-морфологические, биохимические и патогенные свойства культур микобактерий во второй генерации, при культивировании их с озонированным физиологическим раствором.

Научная новизна. Определен видовой состав микобактерий, циркулирующих в хозяйствах Омской области с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу. Изучены культурально-морфологические, биохимические и патогенные свойства культуры M.bovis, шт. 14 (ВНИИБТЖ).

Впервые разработан способ культивирования микобактерий с использованием озонированного физиологического раствора.

Установлена оптимальная концентрация озона, позволяющая сократить сроки появления и повышающая интенсивность роста микобактерий туберкулеза из биологического материала.

Впервые определены оптимальные условия применения озона in vitro и in vivo дли повышения высеваемости микобактерий из биологического материала.

Изучены культурально-морфологические свойства культур, обработанных озоном, определена патогенность и вирулентность после воздействия на них озона.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований по определению ввдового спектра микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды обитания, создают в хозяйствах Омской области основу дифференцированного проведения противотуберкулезных мероприятий как профилактических, так и оздоровительных. Полученные данные свидетельствуют, что проблема ликвидации туберкулеза животных, в частности крупного рогатого скота, не может быть полностью решена без учета роли среды обитания животных.

Разработанный способ культивирования микобактерий с использованием озонированного физиологического раствора ускоряет и повышает интенсивность роста микобактерий в 1,8-2 раза и может быть использован в ветеринарных бактериологических и научных лабораториях.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИБТЖ (2004-2008 гг.), Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (г. Санкт-Петербург, 2005); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (г.Омск, 2005); Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ (г.Омск, 2007); Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию аграрной науки Сибири (г.Омск, 2008).

Публикация материалов исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 научных статей, в том числе одна в научном журнале, ре-

комендованном ВАК Минобразования РФ («Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»).

Внедрение результатов исследований. По результатам исследований разработаны методические рекомендации «Использование озона при культивировании микобактерий туберкулеза» утвержденные ученым советом ГНУ Всероссийский НИИ бруцеллеза и туберкулеза СО Россельхозакаде-мии (протокол № 2 от 18 апреля 2008) и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 28 мая 2008).

Данные об использовании озона при культивировании микобактерий туберкулеза животных используются в учебном процессе при изучении курса эпизоотологии и микробиологии в Институте ветеринарной медицины ОмГАУ.

На основании результатов исследований составлена заявка на изобретение "Способ культивирования микобактерий", получена приоритетная справка № 2008117497 от 30.04.08. и уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 10.06.08.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 127 страницах компьютерного набора и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и приложение. Список литературы представлен 324 источниками, в том числе 274 отечественных и 50 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 22 таблицами, 3 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Видовой спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды из хозяйств Омской области.

2. Способ культивирования микобактерий туберкулеза с использованием озонированного физиологического раствора.

3. Культурально-морфологические и патогенные свойства культур микобактерий, полученных с применением озонированного физиологического раствора.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность кандидату ветеринарных наук, заведующей лабораторией диагностики туберкулеза Н.С. Боганец за методическую помощь, научному сотруднику лаборатории диагностики туберкулеза Л.Т. Аппельганц, кандидату ветеринарных наук, заведующей сектором приготовления питательных сред А.Д. Панкратовой -за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертации.

¿СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в 2004 - 2008 годах в лаборатории диагностики туберкулеза животных Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза живот-

ных Сибирского отделения Россельхозакадемии и в хозяйствах Омской области с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Исследования проведены в соответствие с тематическими планами НИР по заданиям:

- 02.01.09 «Разработать теоретические и практические основы молеку-лярно-генетической диагностики туберкулеза животных, индикации и идентификации микобактерий из различных объектов» (2001-2005 гг.).

- 08.01.04. «Создать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением молекулярных вакцин. Выявить молеку-лярно-генетические и иммунологические аспекты паразито-хозяинных отношений при туберкулезе животных и обосновать ускоренную диагностику с учетом изменчивости свойств возбудителя» (2006-2010 гг.).

Проводили сравнительное изучение информативности наиболее распространенных и часто используемых в ветеринарной бактериологической практике сред: Левенштейна-Йенсена, Финн-2, Гельберга, Фаст-ЗЛ, Пет-раньяни и «Новая» с культурой М.bovis шт. 8, M.tubercwlosis H37RV, M.avium шт. 19, Mfortuitum.

Интенсивность роста культур оценивали в плюсах по методу Г.Н. Першина (1971).

Культурально-биохимические свойства изолированных кислотоустойчивых микобактерий изучали во второй генерации после накопления бактериальной массы, согласно методическим рекомендациям «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий», М.1981. Также использовали диагностические тесты согласно схеме дифференциации микобактерий, разработанной в ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (1976) с учетом модификаций, предложенных А.Л. Лазовской, И.Н. Блохиной (1976), М.П. Зыковым, Т.Б. Ильиной (1972), Т.Б. Ильиной (1975, 1980), А.М. Кадочкиным (1979), Н.М. Макаревич с соавт. (1985). У ряда культур микобактерий изучали патогенность, вирулентность на различных видах лабораторных животных.

Биологическую пробу проводили на морских свинках, которых заражали подкожно в дозе 1мг культур микобактерий в 1 мл физиологического раствора или 1 мл суспензии биологического материала.

Перед началом работы морских свинок, используемых в экспериментах, подвергали аллергическому исследованию ППД-туберкулином для млекопитающих. Биопробу проводили на животных, не реагирующих на

ППД-туберкулин. Ускоренную биологическую пробу выполнили по методике, представленной в описании к патенту № 226-54-03 «Способ ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных» (Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, А. Д. Панкратова, В.Г. Ощепков, 2005).

При патологоанатомическом исследовании проводили отбор проб биологического материала. Индекс пораженности туберкулезом внутренних органов разных видов лабораторных животных (белые мыши, морские свинки) определяли по методикам А.И. Тогуновой (1964) и Ю.К. Вейсфейлера (1975), М.В. Триус (1976), Feldman (1943).

Для проведения экспериментов исследованы 304 пробы биологического материала от крупного рогатого скота, реагировавшего на ППД-туберкулин. В работе использованы лабораторные животные: 240 беспородных морских свинок, живой массой 250-300 г. и 160 белых мышей живой массой 18-20 г., содержащихся в виварии с соблюдением правил и норм кормления (И.П. За-паднюк и др., 1974), ухода и гуманного обращения.

Для изучения возможности применения озона в бактериологической диагностике туберкулеза в качестве ростостимулирующего средства, определяли его оптимальную концентрацию.

Исследования проводили с музейными культурами {M.bovis шт. 14 (ВНИИБТЖ), Mtuberculosis H37Rv (ЦНИИТ МЗ)), эпизоотическими музейными штаммами культур M.bovis, биологическим материалом от морских свинок (40 голов) и от крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин для млекопитающих, из хозяйств Омской области с различной эпизоотической ситуацией.

В экспериментах использовали озонированный физиологический раствор. Озон получали на синтезаторе озона А-с-ГОКСф-5-04-ОЗОН путем барбатирования озоно-кисдородной смесью стандартного физиологического раствора до необходимой концентрации.

Данные экспериментальных исследований обработаны методами математической статистики по методике, описанной А.Т. Усович, П.Т. Лебедевым (1970); Г.Ф. Лакиным (1990), рассчитывая средние значения (М±т), достоверность разницы опытных и контрольных показателей (Р) с помощью программы Microsoft Excel.

Подробно схемы опытов, методы и методики исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Видовой спектр микобактерий, изолированных

от крупного рогатого скота и внешней среды в Омской области

Исследования по изоляции культур микобактерий выполнены с материалом от крупного рогатого скота из благополучных и неблагополучных

по туберкулезу хозяйств Омской области. Бактериологическим методом исследовано 249 проб биологического материала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота благополучных (171 проба) и неблагополучных (78 проб) по туберкулезу хозяйств (табл. 1). При этом от животных обеих категорий хозяйств изолировали 106 или 42,6% культур разных видов микобактерий.

От крупного рогатого скота неблагополучных по туберкулезу хозяйств изолировано 22 культуры (53,7%) М. bovis, что вполне закономерно для этой эпизоотологической категории. Вместе с тем одна культура М bovis выделена от реагирующей на туберкулин коровы, официально числящейся благополучной по туберкулезу фермы. В двух случаях (4,9%) причиной неблагополучия хозяйств явился возбудитель туберкулеза человеческого вида (MJuberculosis).

Таблица 1 - Видовой спектр культур микобактерий из биоматериала от крупного рогатого скота хозяйств Омской области

Показатель Категории хозяйств по туберкулезу Всего

неблагополучные благополучные

Исследовано проб 78 171 249

Изолировано культур, всего 41 65 106

- процент изоляции 52,6 38,0 42,6

Изолировано культур М bovis 22 1 23

- процент изоляции 53,7 1,5 21,7

Изолировано культур M.tuberculosis 2 - 2

- процент изоляции 4,9 - 1,9

Изолировано культур атипичных микобактерий 9 51 60

- процент изоляции 21,9 78,4 56,6

Не идентифицировано культур 8 13 21

- процент не идентифицированных 19,5 20,0 19,8

В результате комплексных исследований (аллергические, патологоана-томические, бактериологические) с учетом культурально-биохимических свойств по всем тестам классификации из биологического материала от крупного рогатого скота хозяйств Омской области изолировали 60 культур атипичных микобактерий. При этом их количество в 5,6 раза превалировало в благополучных по туберкулезу хозяйствах с парааллергическим (неспецифическим) фоном сенсибилизации крупного рогатого скота к ППД-туберкулину для млекопитающих (78,4%). В 19,8% случаях изолированные культуры микобактерий идентифицировать не удалось.

Из представителей микобактерий 2 группы по классификации Раньона (скотохромогенные) изолирован 1 вид (§ог<1опае), 3 группы (нефотохромо-

генные) - 6 видов (M.gastri, M.xenopi, М. terrae, М. triviale, комплекса M.avium-intracellulare, M.nonchromogenis) и 4 группы (быстрорастущие атипичные) - 7 (M.phlei', M.fortuitum, M.smegmatis, M.vaccae, M.diernhoferi, Mflavescens, M.perigrinum). Из общего количества культур атипичных ми-кобактерий, изолированных из биоматериала от крупного рогатого скота неблагополучных по туберкулезу хозяйств, выделены 14 видов культур. Фото-хромогенные микобактерии 1 группы по классификации Раньона нами не выделены.

Наиболее распространенными в структуре атипичных микобактерии явились M.phlei, M.perigrinum - идентифицировано по 7 культур (11,7%), M.smegmatis - 6 культур (10,0%) и Mfortuitum - 5 культур (8,2%).

Бактериологическим методом (микроскопия мазков, посев на питательные среды, биопроба на лабораторных животных) исследовали 1,80 проб материала: соскобы и смывы со стен, полов, кормушек, кормовых проходов, почву, подстилочный материал, корма, воду. Изолированы 56 культур ми-кобактерий (табл. 2).

Таблица 2 - Видовой спектр микобактерий, изолированных из объектов внешней среды обитания крупного рогатого скота благополучных по туберкулёзу хозяйств Омской области ____

Классификация Структура

Вид микобактерий Выделено по Раньону, атипичных

культур группа микобактерий, %

avium-intracellulare 3 3 5,4

gordonae 7 2 12,5

vaccae 1 4 1,8

fortuitum 14 4 25,0

smegmatis 17 4 30,4

phlei 4 4 7,1

scrofulaceum 5 2 8,9

не идентифицированы 5 - 8,9

ВСЕГО: 56 2-4 100,0

Анализ видового спектра изученных микобактерий показал, что в него вошли 7 представителей атипичных видов микобактерий. Сопоставление структуры видового состава показало, что 7 видов атипичных микобактерий, изолированных из объектов внешней среды, входят в состав видов, изолированных из биоматериала от крупного рогатого скота. Несмотря на то, что количественный состав выделенных видов меньше, из объектов внешней среды, дополнительно изолирована культура Мжго/и1асеит, относящаяся ко 2-ой группе по классификации Раньона.

Наиболее часто изолировали следующие виды атипичных микобактерий: M.smegmatis (30,4%), М./огШШт (25,0%) и М^оЫопае (12,5%). Определенное эпизоотологическое значение имеют Мжго/и1асеит (8,9%), М.ркШ (7,1%), М.сктт-Шгасе11и1аге (5,4%) и М.хассае (1,8%).

Полученные данные свидетельствуют, что проблема ликвидации туберкулеза животных, в частности крупного рогатого скота, не может быть полностью решена без учета проведения санитарно-профилактических мероприятий на животноводческих фермах и прилегающих к ним территориях.

2.2.2 Усовершенствование бактериологической диагностики туберкулеза 2.2.2.1 Изыскание оптимальной концентрации озона для стимуляции скорости и интенсивности роста музейных штаммов микобактерий на плотных питательных средах

Одним из направлений усовершенствования бактериологической диагностики туберкулеза является применение стимуляторов роста микобактерий, с этой целью использовали озон.

Опыты проводили на музейной культуре бычьего (М.Ьоу1ч шт.14) и человеческого (М.ШЬегси1оя1я шт.Нз7Ку) видов. Суспензию культур микобактерий в опытной группе готовили с помопц>ю озонированного физиологического раствора. Физиологический раствор озонировали прямым барбатированием озоно-кислородной смесью на синтезаторе озона А-с-ГОКСф-5-б4-ОЗОН, предназначенного для получения озоно-кислородной смеси с концентрацией озона на выходе аппарата до 50 мг/л из газообразного кислорода (ГОСТ 5583-78) путем электросинтеза. Синтезатор озона представляет собой автоматизированный прибор непрерывного действия. Концентрация озона в озоно-кислородной смеси регулируется за счет изменения частоты питающего озонатор напряжения, а также за счет изменения расхода кислорода, продуваемого через озонатор.

В экспериментах использовали следующие концентрации озона: в первом варианте - 4 мг/л, во втором - 8 мг/л. В контрольных пробирках использовали стандартный физиологический раствор. Наблюдения за посевами проводили ежедневно до появления первичного роста, а затем каждые 7 дней.

Показатели скорости и интенсивности роста культур М.Ьотх шт.14 и МЛиЪегсгйоъЬ шт.Н37Яу представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Показатели роста культур микобактерий туберкулеза с применением озонированного физиологического раствора

Штамм Концентрация озона мг/л Старость и интенсивность роста (дни)

7 14 17 21 30

МЬоуи шг.14 4 + -н- +++ +++ н-н-

8 + + + + -н-

контроль + + -н- ++ +4+

М.ЫЬегси1ош НА 4 ++ ++ ++ -Н-+ +-Н-

8 + + -н- ++ ++

контроль + ++ ++ ++ +++

Примечание: + -1-50 колоний, ++ - 50-100 колоний, +-Н- - > 100 колоний.

Первичный рост во всех пробирках отмечали на 7 сутки, различной интенсивности. Обильный рост культур М.Ьта шт. 14 в опытных пробирках наблюдался на 17 сутки при концентрации озона 4 мг/л, по всей поверхности среды во всех пробирках колонии сухие, крошковагые, мелкие, типичные для данного вида. В контрольных пробирках на 7 сутки наблюдали скудный, а на 17-30, более обильный рост сухих, мелких, крошковатых колоний цвета слоновой кости, характерных для Мбоуи шт. 14.

В опытах с чистой культурой МлиЬегсиШ'к шт.Н3711у показатели скорости первичного роста на среде Левенштейна-Йенсена также отмечали на 7 сутки различной интенсивности.

Дополнительная обработка 50% опытных пробирок на 17 сутки озонированным физиологическим раствором в тех же концентрациях привела к замедлению накопления бактериальной массы в обоих вариантах по сравнению с контролем.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о том, что однократная обработка озонированным физиологическим раствором с более низкой концентрацией озона (4 мг/л) приводит к увеличению интенсивности роста культур микобактерий как бычьего, так и человеческого видов. Повторная обработка озонированным физиологическим раствором замедляет интенсивность роста и образование новых колоний микобактерий.

В таблице 4 представлены результаты опыта по наблюдению за ростом Мбот шт.14 на средах Левенштейна-Йенсена, Гельберга и Финн-2 с использованием озона в 4-х концентрациях (0,1; 0,25; 0,5; 1,0 мг/л). В контрольных пробирках для приготовления суспензии культур использовали стандартный физиологический раствор.

Таблица 4 - Первичный и интенсивный рост М.Ъот$ штамм 14 на плотных питательных средах с различной концентрацией озона_

Кон- Рост на питательных средах,

центра- сутки (М±ш)

ция Левенштейна-Йенсена Финн-2 Гельберга

озона, мг/л первичный интенсивный первичный интенсивный первичный интенсивный

0,1 16,0±0,44 21,8±0,49 13,6±0,98 22,6±0,40 12,6±1,03 21,2±0,49

0,25 5,8±0,37 13,0±0,63 6,0±0,44 12,8±1,15 5,8±0,37 12,4±1,07

0,5 6,0±0,31 12,2±1,12 6,0±0,44 12,8±1,15 5,8±0,37 12,2±1,15

1,0 17,2±0,37 23,6±0,4 роста нет роста нет 13,2±0,91 25,6±0,6

контроль 13,2±0,97 22,2±0,49 8,83±0,6 21,0±0,54 8,0±0,89 21,8±0,49

На среде Гельберга начало роста отмечали на 5,8±0,37 сутки при концентрации озона 0,25-0,5 мг/л, что достоверно быстрее, чем на контрольных пробирках в 1,3 раза (8,0±0,89; р<0,01). При концентрации 0,1 и 1,0 мг/л

рост отмечали на 12,6±1,03 и 13,2±0,91 сутки соответственно, что в 0,6 раза позднее, чем в контроле (р<0,001).

При использовании озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 0,25-0,5 мг/л накопление бактериальной массы в опытных, пробирках отмечали на 12,4±1,07 - 12,2±1,15 сутки, что достоверно быстрее в 1,8 раза чем в контрольных (21,8±0,49; р<0,001).

На среде Левенштейна-Йенсена появление первичного роста при концентрации озона 0,25-0,5 мг/л отмечали на 5,8±0,37 - 6,0±0,31 сутки, что достоверно быстрее, чем в контрольных пробирках в 2,3 раза (13,2±0,97; р<0,001). При концентрации 0,1 и 1,0 мг/л рост М. bovis несколько замедляется и регистрируется на 16,0±0,44 и 17,2±0,37 сутки соответственно, что в 1,3 раза позднее, чем в контроле. Интенсивность роста культуры в опытных пробирках отмечали на 12,2±1,12-13,0±0,63 сутки при использовании озона в концентрации 0,25-0,5 мг/л, что достоверно быстрее, чем в контроле в 1,8 раза (22,2±0,49; р<0,001).

На среде Финн-2 в опыте начало роста при концентрации озона 0,250,5 мг/л отмечали на 6,0±0,44 сутки, что достоверно быстрее, чем в контроле в 1,5 раза (8,83±0,6; р<0,05). Интенсивность накопления бактериальной массы при использовании озона в концентрации 0,25-0,5 мг/л значительно превышает показатели полученные в контрольных пробирках на 12,8±1,15 сутки в 1,6 раза быстрее, чем в контроле (21,0±0,54; р<0,001).

Результаты опыта по наблюдению за ростом культуры M.tuberculosis H37Rv на среде Левенштейна-Йенсена с использованием озона в 4-х концентрациях (0,1; 0,25; 0,5; 1,0 мг/л) представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Интенсивность роста культуры МЛ-иЬегсгйояк Н37КУ на среде Левенштейна-Йенсена с различной концентрацией озона на 10 сутки_

Интенсивность роста (колоний) (М±ш) Концентрация озона, мг/л

ОД 0,25 0,5 1,0 контроль

16,75±1,7* 37,0±0,7*" 33,25±1,4*" 15,0±2,6* 21,5±0,6

Примечание: -р<0,05; -р<0,001; -р<0,0001

Интенсивность накопления бактериальной массы культуры МЛиЬегсиктя Нз7ЯУ в момент появления первичного роста при использовании озона в концентрации 0,25 и 0,5 мг/л достоверно выше, чем в контроле (21,5±0,6; р< 0,0001).

Результаты проведенных исследований роста культур микобактерий показали, что концентрация озона 0,1 мг/л и 1,0 мг/л угнетает первичный рост (р<0,05), (р<0,01), тогда как концентрация озона 0,25 и 0,5 мг/л ускоряет появление (р<0,001) первичного роста и увеличивает интенсивность накопления бактериальной массы. Первичный рост регистрируется на 5-7 су-

тки, интенсивный на 10-12 сутки, а в контрольных пробирках соответственно: 10-15; 21-23 сутки.

В опытах по применению оптимальной концентрации озона использовали эпизоотические штаммы культур микобактерий, изолированные из биологического материала от крупного рогатого скота, реагировавшего на ППД-туберкулин для млекопитающих (табл. 6).

Таблица 6 - Интенсивность роста культур М. bovis на среде Левенштейна-Йенсена с применением озонированного физиологического раствора_

№ п/п Хозяйства, в которых выделены культуры Интенсивность роста, (колоний) на 10 сутки (М±т)

+ озон(03) контроль

1 Ильинский 23,8±2,59"* 6,33±1,2

2 Охотниковский 19,5£2,63"* 8±0,58

3 Родина 12,75±5,31 6,67±2,4

Примечание: - р < 0,0001

Первичный рост культур микобактерий туберкулеза отмечался на 10 сутки во всех пробирках с различной интенсивностью. В опытных пробирках интенсивность роста культур микобактерий составила от 12,75±5,31 до 23,8±2,59 колоний. В контрольных - от 6,33±1,2 до 8±0,58 колоний. Значительное накопление бактериальной массы в опытных пробирках по сравнению с контролем установлено на 20-21 сутки.

Таким образом, использование озона в концентрации 0,25 или 0,5 мг/л при культивировании микобактерий сокращает сроки выращивания микобактерий туберкулеза и повышает интенсивность накопления биомассы, при этом существенных различий в культивировании микобактерий на испытуемых питательных средах с использованием озонированного физиологического раствора не установлено.

2.2.2.2. Воздействие оптимальной концентрации озона для стимуляции скорости и интенсивности роста микобактерий туберкулеза из биоматериала от морских свинок и крупного рогатого скота

Для изучения воздействия оптимальной концентрации озона (0,25 мг/л) для индикации микобактерий из биоматериала от лабораторных животных были проведены эксперименты на 40 морских свинках, зараженных суспензией культуры M.bovis шт.14 в дозе 1 мг/мл. В течение всего опыта вели клинические наблюдения. На 5-6 сутки в месте введения культуры развился воспалительный инфильтрат, переходящий в дальнейшем в абсцесс. На 10 сутки увеличивались регионарные лимфатические узлы, достигающие через 30 дней размеров горошины. Абсцессы у морских свинок вскрывались на 10-12 сутки и

к 13-15 суткам на их месте появлялись хорошо выраженные язвы с казеозными массами.

Морским свинкам через месяц после заражения внутрибрюшинно ввели 1 мл стандартного ППД-туберкулина для млекопитающих, с целью воспроизведения анафилактического туберкулинового шока и ускорения гибели инфицированных животных.

При патологоанатомическом вскрытии определяли индекс пораженно-сти для каждого животного и для группы. Показатель поражений оценивали в баллах по 4-балльной системе, устанавливали средний показатель путем вычисления средних арифметических величин из индивидуальных показателей. Средний показатель составил 18,6 баллов.

Посев биоматериала от морских свинок, зараженных культурой Мйоук штамм 14, на среду Левенштейна-Йенсена (по 10 пробирок) проводили по общепринятой методике (контроль) и с использованием озонированного физиологического раствора в концентрации 0,25 мг/л озона.

Первичный рост культур микобактерий в опытных пробирках регистрировался на 11,7±0,2 сутки, в контроле на 19,4±0,23 сутки (р<0,001), что достоверно быстрее в 1,7 раза (табл.7).

Интенсивность роста культур из биоматериала на 21 сутки в опытных пробирках, с использованием озонированного физиологического раствора, составила 23,5±2,91 колоний, что достоверно и в 2,8 раза выше, чем в контроле (8,28±1,24; р < 0,0001).

Таблица 7 - Рост культуры Мботй шт. 14 на среде Левенштейна-Йенсена

№ п/п Биоматериал от мор- Первичный рост, Интенсивность роста,

ских свинок, сутки число колоний на 21 сутки

проба (М±т) <М±т)

+ОЗОН (Оз) Контроль +ОЗОН (Оз) Контроль

1 №1 11,8±0,2 19,6±0,24 23,0±3,99 7,8±1,4б

2 №2 11,81-0,2 19,4±0,24 21,6*2,01 10,2±0,99

3 №3 11,8±0,2 19,4±0,24 25,2±2,03 7Д±1,91

4 №4 12,0±0,01 19,2±0,2 27,0±3,05 9,0±1,22

5 №5 11,6±0,24 19,4±0,24 23Д±3,99 7,8±0,86

6 №6 11,4±0,24 19,4±0,24 21,8±2,96 9,8±0,66

7 №7 11,8±0,2 19,4±0,24 21Д±2,37 7,8±1,5

S №8 11,8±0,2 19,6±0,24 23,6±2,16 9,4±0,86

9 №9 11,6±0Д4 19,4±0,24 24,0±2,6 6,6±1Д2

10 №10 11,б±0,24 19,2±0,2 24,4±3,93 7,2±1,83

Среднее по группе 11,7±0,2 19,4±0,23 23,5±2,91 8,28±1,24

Кроме этого исследовали 40 проб биологического материала от крупного рогатого скота из хозяйств с различной эпизоотической ситуацией, реагировавшего на ППД-туберкулин для млекопитающих, параллельно двумя метода-

ми: общепринятым, согласно «Наставления по диагностике туберкулеза животных» (2002), и с использованием озона (табл. 8).

Таблица 8 - Результаты исследований проб биоматериала от крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин с применением озонированного физиологического раствора

№ Содержание Количество Изолировано Сроки появления %

п/п озона проб культур первичного роста выделений

(мг/л) (сутки)

1 0,25 40 9 19,2±1,8 22,5

7. - 40 4 24,25±4,46 10,0

контроль

При использовании общепринятого метода изолировали 4 культуры (10,0%), с использованием озонированного физиологического раствора 9 культур (22,5%).

Таким образом, при бактериологических исследованиях 40 проб биологического материала от крупного рогатого скота, реагировавшего на ППД-туберкулин с использованием озона, удалось выделить в 2,25 раза больше культур микобактерий различных видов, чем при использовании общепринятого метода.

2.2.2.3.Использование in vivo тонированного физиологического раствора для повышения высеваемости из биологического материала от экспериментально зараженных морских свинок

Воздействие озонированного физиологического раствора при низкой концентрации озона на микобактерии туберкулеза in vitro ускоряет скорость и повышает интенсивность роста высеваемых культур микобактерий, что позволило предположить о возможности использования озонированного физиологического раствора in vivo.

Морские свинки (40 голов) были заражены суспензией микобактерий М. bovis штамм 14 в дозе Í мг/мл. Затем 30 морским свинкам на 7-й день после заражения вводили внутрибрюшинно 5 мл озонированного физиологического раствора, содержащего 2 мг/л озона, введение проводили трехкратно с интервалом 7 дней, т.е. закончили через месяц после заражения. Десяти морским свинкам в контрольной группе озонированный физиологический раствор не вводили. На протяжении всего периода велись клинические наблюдения за опытными животными.

Развитие патологического процесса, степень поражения паренхиматозных органов зараженных животных определялись визуально с оценкой поражения по 4-х бальной шкале (описано выше).

Индекс пораженное™ органов у морских свинок с использование озона in vivo составил в среднем по группе 10,2, в контроле - 18,9 баллов.

При этом высеваемость микобактерий была выше из биоматериала от морских свинок, зараженных M.bovis штамм 14 с внутрибрюшинным введение озонированного физиологического раствора

2.2.2.4. Кульщрально-морфологические, биохимические и патогенные свойства культур микобактерий, обработанных озоном

Тинкториальные и морфологические свойства выделенных культур микобактерий изучали микроскопическим методом. Для этого готовили мазки из колоний, выросших с использованием озона, высушивали на воздухе, фиксировали над пламенем и окрашивали по Циль-Нильсену. Промывали, высушивали, просматривали мазок и устанавливали наличие кислотоустойчивости у микробов изучаемого штамма. Все культуры, идентифицированные как M.bovis, имели вид преимущественно прямых и изогнутых палочек различной д лины, часто зернистых.

У изолированных кислотоустойчивых культур микобактерий, изучали культуральные свойства во второй генерации после пересева первичного роста на среде Левенштейна-Йенстена.

Определяя видовую "принадлежность выделенных культур, отмечали отсутствие роста на среде Левенпггейна-Йенсена с содержанием салицилата натрия и на среде с содержанием 5%-ного хлорида натрия, что характеризует M.bovis. Все прочие микобактерии дают пышный рост.

Для идентификации микобактерий проводили посев на среду Левенштейна-Йенсена и инкубировали при разных температурных режимах. Учет и регистрацию появления роста проводили в первые 10 суток - каждые 2-3 суток, в последующие 3 недели - каждые 5 дней. Отмечали рост колоний при температуре 37-38°С и отсутствие его при 22 и 45°С. При регистрации роста культур обращали внимание на сроки обнаружения первичного роста, характер роста, характеристику колоний.

Проведены исследования по изучению культурально-морфоло-гических, биохимических, биологических свойств музейных и эпизоотических штаммов культур микобактерий, культивированных на средах с использованием озона, в результате которых было установлено: сроки обнаружения первичного роста музейных культур M.tuberculosis H37RV и Mbovis штамм 14; штаммов культур выделенных от крупного рогатого скота, реагировавшего на ППД-туберкулин для млекопитающих, в хозяйствах Омской, Тюменской и Новосибирской областей при температурном режиме (22; 37,5; 45°С) в опытных пробирках не отличались от контрольных. Характер роста на питательных средах, как в опытных, так и в контрольных пробирках был идентичен.

Тинкториальные свойства культур полученных с использованием озонированного физиологического раствора при окраске по Циль-Нильсену были сохранены. Присуща толерантность к 5%-ному хлориду натрия.

Для определения патогенных и вирулентных свойств микобактерий бьгчьего вида, обработанных озоном, проводили инфицирование морских свинок M.bovis в общепринятой дозе. Для заражения готовили суспензию культур микобактерий, выращенных на твердых питательных средах. Бактериальную массу снимали бактериологической лопаточкой, взвешивали на торсионных весах, помещали в стерильную ступку и тщательно растирали с небольшим объемом озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 0,25 мг/л. Клинические наблюдения велись на протяжении всего периода. Морские свинки, инфицированные культурой M.bovis, обработанной озоном пали на 48,2±1,6 сутки, в контрольной группе на 45,8±1,3, что свидетельствует о высокой вирулентности.

3. ВЫВОДЫ

1. В неблагополучных хозяйствах Омской области из биологического материала от крупного рогатого скота выделены культуры микобактерий: M.bovis (53,7%), M.tuberculosis (4,9%) и атипичных микобактерий (21,9%). В благополучных хозяйствах Mbovis (8,3%) и атипичных микобактерий (78,4%): M.gordone, Mgastri, M.xenopi, М. terrae, М.triviale, M.avitim-intracellulare, M.nonchromogenis, M.phlei, M.fortuitum, M.smegmatis, M.vacca, M.diemhofiri, Mflavescens, M.perigrinum. В 19,8% случаях - культуры микобактерий не идентифицированы. Из объектов внешней среды и животноводческих помещений идентифицированы 7 видов античных микобактерий: Mmegmatis, M.fortuitum, Mgordone, M.scrofulacenm, Mphlei, комплекса M.avium-intracellulare и Mvacca.

2. Озонированный физиологический раствор, приготовленный на синтезаторе озона А-с-ГОКСФ-5-04-ОЗОН, при концентрации 0,25 или 0,5 мг/л ускоряет и повышает интенсивность роста микобактерий на плотных питательных средах в 1,8-2 раза.

3. Интенсивность роста изолятов культур микобактерий при культивировании их на плотных питательных средах с использованием озонированного физиологического раствора в 2-4 раза выше, чем при традиционном методе.

4. Первичный рост культур микобактерий, изолированных из биологического материала морских свинок, зараженных Mbovis, на среде Левенштей-на-Йенсена с использованием озонированного физиологического раствора регистрируется на 11,7±0,2 сутки, без применения озона (19,4±0,23 сутки), что в 1,8 раза позже.

5. Применение озонированного физиологического раствора, для изоляции культур из биологического материала от крупного рогатого скота из хо-

зяйств с различной эпизоотической ситуацией, позволяет выявить в 2,25 раза больше культур, чем при общепринятом методе.

6. Озонированный физиологический раствор, введенный внутрибрю-шинно инфицированным морским свинкам М. bovis, повышает высеваемость микобактерий туберкулеза из биологического материала в 2 раза.

7. Культуры М.bovis, культивированные с использованием озонированного физиологического раствора, во второй генерации сохраняют тинктори-альные, культурально-морфологические, биохимические и патогенные свойства. Для культур микобактерий присуща устойчивость к 5% хлориду натрия, они не образуют пигмент на свету и в темноте, не растут на среде Левенштейна-Йенсена при температурах 22 и 45°С, проявляют рост при температуре 37-38°С, являются вирулентными для лабораторных животных.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕД ЛОЖЕНИЯ

1. Определение видового спектра микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и среды его обитания, создают основу для разработки и проведения диагностических, оздоровительных и профилактических мероприятий.

2. Разработан способ культивирования микобактерий туберкулеза на плотных питательных средах с использованием озона

3. Методические рекомендации "Использование озона при культивировании микобактерий туберкулеза», утвержденные ученым советом ГНУ Всероссийский НИИ бруцеллеза и туберкулеза СО Россельхозакадемии (протокол № 2 от 18 апреля 2008) и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 28 мая 2008).

4. На изобретение "Способ культивирования микобактерий", получена приоритетная справка № 2008117497 от 30.04.08. и уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 10.06.08.

5. Данные об использовании озона при культивировании микобактерий туберкулеза животных используются в учебном процессе при изучении курса эпизоотологии и микробиологии в Институте ветеринарной медицины Ом-ГАУ.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ускоренный метод постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных / Соавт.: Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, А.Д Панкратова и др. // Тез. докл. международ, науч.-практ. конгресса «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». С.-Пб, 2005. -С. 51-52.

2. Изучение бактерицидного действия озона на рост культуры микобакте-рий туберкулеза / Соавт.: A.B. Лысов, Н.С. Боганец, А.П. Рахвалов и др.// Омский научный вестник. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Матер, юбилейной науч.- практ. конф., посвящ. 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей. Омск, 2005. №4 - С.63-64.

3. Видовой спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и средь! его обитания в регионе Сибири / Соавт.: Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, Н.М. Колычев и др. // сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ. 6-й межрегион, науч.-практ. конф. - Омск, 2006.- С. 18-23.

4. Характеристика культуры M.bovis шт. 14 (ВНИИБТЖ) / Соавт.: Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, Л.Т. Аппельганц // сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ. 6-й межрегион, науч.-практ. конф. - Омск, 2006.- С.24-28.

5. Совершенствование бактериологической диагностики туберкулеза / Соавт.: Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, Л.Т. Аппельганц // сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ. 6-й межрегион. науч.-практ. конф. - Омск, 2006.- С.29-33.

6. Использование озонированного физиологического раствора в бактериологической диагностике туберкулеза / сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ.

6-й межрегион. науч.-практ. конф.- Омск, 2007.- С. 142-146.

7. Действие озона на рост микобактерий из биологического материала от морских свинок зараженных M.bovis / сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ.

7-й межрегион, науч.- практ. конф., посвящ. 180-летию аграрной науки Сибири - Омск, 2008,- С. 228-230.

8. Применение озонированного физиологического раствора в бактериологической диагаостике туберкулеза / Соавт.: Н.С. Боганец, МА. Бажин, Л.Т. Аппельганц // Развитие АПК Азиатских территорий. Тр. XI-й Междунар. науч.-праст. конф.- Новосибирск, 2008. -С.18-22.

9. Использование озона в бактериологической диагностике туберкулеза / Соавт.: Н.С. Боганец, Л.Т. Аппельганц // Сибирский вестник с.-х. науки. -Новосибирск, 2008. - №7.- С. 84-87.

Подписано к печати 06.10.2008. Формат бумаги 60x84 1/16. Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз.

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ООО «Вариант-Омск» 644043, г. Омск, ул. Фрунзе, 1, кор, 3, оф.13. Тел./факс: 211-600

Оглавление диссертации Свириденко, Наталья Александровна :: 2008 :: Омск

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Возбудитель туберкулеза и его свойства.

1.2. Диагностика туберкулеза животных.

1.2.1. Методы прижизненной диагностики туберкулеза животных.

1.2.2. Методы бактериологической диагностики туберкулеза.

1.2.3. Культуральный метод диагностики туберкулеза.

1.3. Озон.

1.3.1. Историческая справка об озоне.

1.3.2. Химические и физические свойства озона.

1.3.3. Биологические аспекты применения озона.

1.3.4. Применение озона при инфекционной патологии.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Свириденко, Наталья Александровна, автореферат

Актуальность темы. Туберкулез остается одной из главных медико-ветеринарных проблем в мире. Среди инфекционных болезней людей и животных, одно из ведущих мест занимает туберкулез. Высокий уровень заболеваемости регистрируется повсеместно, в том числе и в странах, занимающихся разведением крупного рогатого скота. По данным А.Х. Най-манова с соавт. (2004), в инфекционной патологии крупного рогатого скота туберкулез занимает второе место после лейкоза и составляет 11,4%.

В начале XXI века эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации, несмотря на тенденцию улучшения, в целом ряде регионов остается напряженной. Экономический ущерб от болезни за последние 45 лет в РФ превысил 85 млрд. рублей. При этом экономика страны потеряла около 6 млн. голов крупного рогатого скота, 15,3 млн. тонн молока, 1,6 млн. тонн мяса и 3,5 млн. голов приплода (Ю.И. Смо-лянинов с соавт., 2005).

Одно из главенствующих мест в диагностике туберкулеза занимает микробиологическая диагностика, основой которой является выделение культуры возбудителя.

Индикация микобактерий включает в себя микроскопический, куль-туральный и биологический методы, каждый из которых имеет свои недостатки и преимущества (А.И. Каграмманов, 1959; Г.Ф. Коромыслов, З.С. Газарх, 1967; В.И. Голышевская, Т.Т. Попеску, 1989).

Наиболее чувствительным методом выделения микобактерий по праву считается культуральный, позволяющий получать результаты даже при минимальном количестве возбудителя туберкулеза в исследуемом материале.

Бактериологической диагностики туберкулеза постоянно усовершенствуется. Разработки велись в разных направлениях: создание новых питательных сред - Е.А. Финкель (1985), В.А. Аникин (1987), Е.Д. Андро-никашвили с соавт., (1987), Е.А. Щеголева (1989), Л.М. Ходун (1996), А.С. Донченко с соавт., (2004), Р.А. Нуратинов, З.К. Казиахмедов (2004) и др.; усовершенствование ранее известных - Б.Я. Хайкин, Н.С. Боганец (1985), Т.В. Коронелли, Н.И. Фатеева (1986), Е.С. Чичибабин (1987; 1990), Г.К. Самилло, Е.Н. Ромашева (1988), Р.А. Нуратинов с соавт. (2006); использование стимуляторов роста МБТ - JI.A. Таллер (1995), В.Н. Донченко, С.В. Ионина (1997); Т.Д. Абдыроманова с соавт., (2008); В.Г. Ощепков с соавт., (2008) и др.

В связи с изложенным, разработка и усовершенствование бактериологической диагностики туберкулеза и внедрение ее в научных и практических учреждениях ветеринарии и медицины является весьма актуальной.

Цель и задачи исследований.

Цель работы: усовершенствование бактериологической диагностики туберкулеза с применением озона для стимуляции скорости и интенсивности роста микобактерий.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

3. Изучить действие озонированного физиологического раствора in vivo на высеваемость микобактерий туберкулеза.

Впервые определены оптимальные условия применения озона in vitro и in vivo для повышения высеваемости микобактерий из биологического материала.

Практическая ценность работы. Определение видового спектра микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды, создает в хозяйствах Омской области основу для разработки и проведения противотуберкулезных мероприятий как профилактических, так и оздоровительных. - - - -----

Культивирование микобактерий с применением озонированного физиологического раствора ускоряет и повышает интенсивность роста микобактерий в 1,8-2 раза и может быть использована в ветеринарных бактериологических и научных лабораториях.

По материалам работы разработаны методические рекомендации «Использование озона при культивировании микобактерий туберкулеза», утвержденные ученым советом ГНУ Всероссийский НИИ бруцеллеза и туберкулеза СО Россельхозакадемии (протокол № 2 от 18 апреля 2008) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 28 мая 2008г.).

Получена приоритетная справка на изобретение «Способ культивирования микобактерий» № 2008117497 от 30.04.2008 и уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 10.06.08.

Апробация работы Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИБТЖ (2004-2008 гг.), Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2005); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2005); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей ОмГМА (Омск, 2005); Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ (Омск, 2007); Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию аграрной науки Сибири (Омск, 2008); XI Международной научно-практической конференции по научному обеспечению АПК азиатских территорий (Новосибирск, 2008).

Основные положения диссертации, выводы и практические предложения доложены, обсуждены на межлабораторном заседании ВНИИБТЖ и рекомендованы к защите (протокол № от 4 июля 2008 г.). ---

Основные положения, выносимые на защиту.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в т.ч. одна в журнале рекомендованном ВАК Минобразования РФ «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», материалах конференций, сборниках научных трудов НИУ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 3 рисунками. Список литературы включает 324 источника, в том числе 50 иностранных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Применение озона в бактериологической диагностике туберкулеза"

5. ВЫВОДЫ

1. В неблагополучных хозяйствах Омской области из биологического материала от крупного рогатого скота выделены культуры микобактерий: M.bovis (53,7%), M.tuberculosis (4,9%) и атипичных микобактерий (21,9%). В благополучных хозяйствах M.bovis (8,3%) и атипичных микобактерий (78,4%): M.gordone, M.gastri, M.xenopi, M.terrae, M.triviale, M.avium-intracellulare, M.nonchromogenis, M.phlei, M.fortuitum, M.smegmatis, M.vacca, M.diernhofiri, M.flavescens, M.perigrinum. В 19,8% случаях - культуры микобактерий не идентифицированы. Из объектов внешней среды и животноводческих помещений идентифицированы 7 видов атипичных микобактерий: M.smegmatis, M.fortuitum, M.gordone, M.scrofulaceum, M.phlei, комплекса M.avium-intracellulare и M.vacca.

3. Озонированный физиологический раствор, приготовленный на синтезаторе озона А-С-ГОКСФ-5-04-ОЗОН, при концентрации 0,25 или 0,5 мг/л ускоряет и повышает интенсивность роста микобактерий на плотных питательных средах в 1,8-2 раза.

4. Интенсивность роста изолятов культур микобактерий при культивировании их на плотных питательных средах с использованием озонированного физиологического раствора в 2-4 раза выше, чем при традиционном методе.

5. Первичный рост культур микобактерий, изолированных из биологического материала морских свинок, зараженных M.bovis, на среде Левенштейна-Йенсена с использованием озонированного физиологического раствора регистрируется на 11,7±0,2 сутки, что в 1,8 раза раньше, чем без применения озона (19,4±0,23 сутки).

6. При использовании озонированного физиологического раствора для изоляции культур из биологического материала от крупного рогатого скота из хозяйств с различной эпизоотической ситуацией позволяет выявить в 2,25 раза больше культур, чем при общепринятом методе.

7. Озонированный физиологический раствор, введенный внутрибрю-шинно инфицированным морским свинкам M.bovis, повышает высевае-мость микобактерий туберкулеза из биологического материала в 2 раза.

8. Культуры M.bovis, культивированные с использованием озонированного физиологического раствора, во второй генерации сохраняют тинк-ториальные, культурально-морфологические, биохимические и патогенные свойства. Для культур микобактерий присуща устойчивость к 5% хлориду натрия, они не образуют пигмент на свету и в темноте, не растут на среде Левенштейна-Йенсена при температурах 22 и 45°С, проявляют рост при температуре 37-38 °С, являются вирулентными для лабораторных животных.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

•1. Определение видового спектра микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и среды его обитания, создают основу для разработки и проведения диагностических, оздоровительных и профилактических мероприятий.

2. Разработан способ культивирования микобактерий туберкулеза на плотных питательных средах с использованием озона.

1.4.3акл ючение

Следует отметить, что изучению свойств озона посвящено большое количество работ. Многие авторы указывают на их многогранность и отсутствие единого мнения о механизме действия озона на микроорганизмы.

Отмечена зависимость биологического действия озона от концентрации и длительности применения.

Крайне не достаточно изучено действие озонированного физиологического раствора на микобактерии туберкулеза.

Приведенные в литературе данные убедительно доказывают целесообразность применения озона в диагностике туберкулеза при культивировании микобактерйй15~ц^ью~сокращения сроков появления первичного роста и повышения интенсивности.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Исследования проводились с 2004 по 2008 гг. в лаборатории диагностики туберкулеза животных Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ГНУ ВНИИБТЖ) Сибирского отделения Россельхозакадемии и в хозяйствах Омской области с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Тема диссертационной работы является составной частью принятой рабочей программы (2005-2010 гг.). Исследования проведены в соответствие с тематическими планами НИР по заданиям:

- 02.01.09 «Разработать теоретические и практические основы моле-кулярно-генетической диагностики туберкулеза животных, индикации и идентификации микобактерий из различных объектов» (2001—2005 гг.).

- 08.01.04. «Создать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением молекулярных вакцин. Выявить моле-кулярно-генетические и иммунологические аспекты паразито-хозяинных отношений при туберкулезе животных и обосновать ускоренную диагностику с учетом изменчивости свойств возбудителя» (2006-2010 гг.).

Для исследований использовали биологический материал от 304 голов крупного рогатого скота и лабораторных животных: 240 беспородных морских свинок, живой массой 250-300 г. и 160 белых мышей живой массой 18-20 г., содержащихся в виварии с соблюдением правил и норм кормления (И.П. Западнюк и др., 1974), ухода и гуманного обращения.

Кроме того, для исследования были использованы коллекционные, официально зарегистрированные культуры M.bovis, шт. 8, М.tuberculosis H37Rv , M.avium шт. 19, M.fortuitum и эпизоотические культуры музейных штаммов микобактерий.

В опытах с чистой культурой наряду с эталонными штаммами использовали культуру M.bovis штамм 14, выделенную Э.Д. Лакман в 1975 г., впоследствии которой была присвоена аббревиатура M.bovis шт. 14 (ВНИ-ИБТЖ). Ее свойства были изучены и подробно описаны в разделе (3.2.2.).

Бактериологические (микроскопический, культуральный, биологический методы) исследования проводили в соответствии с нормативно-технической документацией: «Методы лабораторной диагностики туберкулеза», ГОСТ 26072-89 (СТ СЭВ 3457-81), «Наставление по диагностике туберкулеза животных» (1986, 2002). Предпосевную обработку биологического материала от лабораторных животных и крупного рогатого скота проводили по методу Гона в модификации Левенштейна и Сумиоши. Кусочки органов и тканей измельчали в ступке, растирали и заливали 6-8 % -ным раствором серной кислоты в соотношении 1:4. Пробу центрифугировали в течение 10-15 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, а осадок еще 2 раза отмывали физиологическим раствором путем центрифугирования.

Для микроскопического исследования готовили мазки культур микобактерий и мазки отпечатки из биологического материала, окрашивали по методу Циля-Нильсена и изучали под иммерсией светового микроскопа.

Проводили сравнительное изучение информативности наиболее распространенных и часто используемых в ветеринарной бактериологической к. J практике сред: Левенштейна-Иенсена, Финн-2, Гельберга, Фаст-ЗЛ, Пет-раньяни и «Новая».

Приготовленный для посева материал высевали на 5 или 10 пробирок указанных выше питательных сред. Информативность используемых плотных питательных сред оценивали по интенсивности и скорости роста. Выделенные первичные культуры изучали и описывали по общепринятой схеме. Для пересева платиновой петлей (диаметр 2-3 мм) снимали 1 -2 петли культуры и переносили в стерильную пробирку или пенициллиновый флакон. Бактериальную массу тщательно растирали в 1-1,5 мл физиологического раствора, который добавляли порциями в пробирку (флакон). Приготовленную суспензию вносили пастеровской пипеткой по 2-3 капли в пробирки с плотными питательными средами. Пробирки перекрывали ват-но-марлевыми пробками, которые парафинировали через 2 суток. На пробирках делали надписи с указанием питательной среды, номера экспертизы, даты посева и температурного режима культивирования. Посевы помещали в термостат и инкубировали при температуре 37-38°С. Для дифференциации использовали следующие температурные режимы: 20-22, 3738 и 45°С. Учет появления роста, в первые 10 суток культивирования, проводили каждые двое-трое суток и каждые пять дней в последующие три недели. Пробирки, в которых появлялся рост посторонней микрофлоры, утилизировали. Оценку интенсивности роста культур проводили в крестах по методу Г.Н. Першина (1971).

Культурально-биохимические свойства изолированных кислотоустойчивых микобактерий изучали во второй генерации после накопления бактериальной массы с предварительной проверкой культуры на чистоту визуально и в мазках, согласно методических рекомендаций «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерии», М.1981.

У выделенных культур микобактерий изучали следующие показатели:

- скорость роста на питательных средах по методике W. Kappler (1968);

- рост при различных температурных режимах - 22, 37, 45 и 52° С;

- морфологию колоний (величина, форма, поверхность, консистенция);

- тинкториальные свойства при окраске по Цилю-Нильсену;

- пигментообразование в темноте и на свету по методике J. Cubica (1973);

- активность каталазы по методике L. Wayne (1972);

- деградацию салицилата натрия по методике М. Tsukamura (1966);

- формамидазную активность по методике М. Tsukamura (1988);

- устойчивость к хлориду натрия;

Перечисленные диагностические тесты использовали согласно схеме дифференциации микобактерий, разработанной в ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (1976) с учетом модификаций, предложенных М.П. Зыковым, Т.Б. Ильиной (1972), A.JI. Лазовской, И.Н. Блохиной (1976), A.M. Кадоч-киным (1979), Т.Б. Ильиной (1980, 1987), Н.М. Макаревич с соавт. (1985). У ряда культур микобактерий изучали патогенность, вирулентность на различных видах лабораторных животных (белые мыши, морские свинки).

Биологическую пробу проводили на морских свинках, заражали подкожно в дозе 1мг культур микобактерий в 1 мл физиологического раствора или 1 мл суспензии биологического материала.

Накануне исследований морских свинок, используемых в экспериментах, проверяли аллергически ППД - туберкулином для млекопитающих. У свинок на боку выщипывали или выбривали шерсть. Вводили внутрикожно ППД-туберкулин в дозе 25 ME на 0,1 мл растворителя или стерильного физиологического раствора. Реакцию учитывали через 24 часа. Положительная реакция проявляется гиперемией кожи в месте введения, уплотнением и припухлостью диаметром 5 мм и более, иногда с некрозом в центре.

Биопробу проводили на животных, не реагирующих на ППД-туберкулин. Ускоренную биологическую пробу проводили по методике описанной в патенте № 226-54-03 «Метод ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных» (Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, А.Д. Панкратова, В.Г. Ощепков, 2005). Метод основан на воспроизведении анафилактического туберкулинового шока, в сравнении с традиционным, сокращает срок экспертизы на 29 суток, или в 1,8 раза. Анафилактический шок и гибель морских свинок в течение 10-26 часов воспроизводится внутрибрюшинным введением 1 мл стандартного ППД туберкулина для млекопитающих (50000 .ME) через 30 суток после заражения биологическим материалом от животных, содержащим патогенные микобактерии. Здоровые морские свинки индифферентны к туберкулину в дозах до 10 мл.

При гибели в течение срока наблюдения проводили вскрытие трупов. При отсутствии падежа животных усыпляли через 3 месяца после заражения.

При патологоанатомическом исследовании проводили отбор проб биологического материала.

Индекс пораженности туберкулезом внутренних органов разных видов лабораторных животных (белые мыши, морские свинки) определяли по методикам А.И. Тогуновой (1964) и Ю.К. Вейсфейлера (1975), М.В. Триус, А.А. Клебанова (1976).

Изучали возможность применения озона в бактериологической диагностике туберкулеза в качестве ростостимулирующего средства, для этого определяли его оптимальную концентрацию для воздействия на микобак-терии туберкулеза.

Исследования проводили с культурами, используя музейные (M.bovis, шт. 14, М.tuberculosis H37RV) и эпизоотические культурэ M.bovis, изолированные от крупного рогатого скота больного туберкулезом (кооператив «Ильинский», совхоз «Охотниковский», колхоз «Родина»). А также биологический материал от морских свинок (40 голов) и от крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин для млекопитающих, из хозяйств Омской области с различной эпизоотической ситуацией.

В экспериментах использовали озонированный физиологический раствор. Озон получали на синтезаторе озона А-с-ГОКСф-5-04-ОЗОН путем барбатирования озоно-кислородной смесью стандартного физиологического раствора до необходимой концентрации. Синтезатор озона представляет собой автоматизированный прибор непрерывного действия и предназначен для получения озоно-кислородной смеси с концентрацией озопа на выходе аппарата до 50 мг/л из газообразного кислорода (ГОСТ 5583-78) путем электросинтеза. Концентрация озона в озоно-кислородной смеси регулируется за счет изменения частоты питающего озонатор напряжения, а также за счет изменения расхода кислорода, продуваемого через озонатор.

Данные экспериментальных исследований обработаны методами математической статистики по методике описанной А.Т. Усович, П.Т. Лебедевым (1970); Г.Ф. Лакиным (1990), рассчитывая средние значения (М±ш), достоверность разницы опытных и контрольных показателей (Р) с помощью программы Microsoft Excel.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность кандидату ветеринарных наук, заведующей лабораторией диагностики туберкулеза Н.С. Боганец за методическую помощь, научному сотруднику лаборатории диагностики туберкулеза Л.Т. Аппельганц, кандидату ветеринарных наук, заведующей сектором приготовления питательных сред А.Д. Панкратовой - за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертации.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Видовой спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды в Омской области

3.1.1. Частота изоляции и видовой состав микобактерий

Проблема видового состава микобактерий и его региональных особенностей в эпизоотологии туберкулеза имеет не только теоретическое, но и большое практическое значение, так как создает основу для дифференцированного проведения противотуберкулезных мероприятий, как профилактических, так и оздоровительных. Определение видовой принадлежности изолированных культур микобактерий, персистирующих в организме животных и среде их обитания, позволяет более точно выявить ареал их распространения и источники инфицирования различных видов животных, человека и птиц.

Индикация микобактерий из биоматериала от животных Большинство исследований по изоляции культур микобактерий выполнены с биологическим материалом от крупного рогатого скота из благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств Омской области. Бактериологическим методом исследовано 249 проб биологического материала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота благополучных (171 проба) и неблагополучных (78 проб) по туберкулезу хозяйств Омской области (табл. 1). При этом от животных обеих категорий хозяйств изолировали 106 или 42,6% культур разных видов микобактерий, однако количество выделенных культур было выше в благополучных по туберкулезу хозяйствах.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Свириденко, Наталья Александровна

1. Александров, Н.А. Обнаружение микобактерий туберкулеза в тканях / Н.А. Александров // Тр. Саратовской НИВС- Саратов, 1967-Вып. 7.-С. 103-105.

2. Александров, О.В. Озонотерапия в клинике внутренних болезней /О.А. Александров, П.В. Стручков, А.В. Зубкова, М.В. Гуревич, А.Г. Куликов, В.Я. Зайцев // Российский медицинский журнал.- 2002.- №3.- С.47-50.

3. Алексеева, В.Л. Влияние озона на некоторые биохимические системы организма крыс / В.Л. Алексеева, А.А. Родникова, В.Я. Зайцев, Г.А. Си-негуб // Озон в биологии и медицине. Н.-Новгород, 1992. С. 19-20.

4. Алехина, С.П Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты / С.П. Алехина, Т.Г. Щербатюк // Н.-Новгород, 2003.- Гл.1.- С.3-11.

5. Алехина, С.П Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты / С.П. Алехина, Т.Г. Щербатюк // Н.-Новгород, 2003.- Гл.2.- С.12-36.

6. Алясова, А.В. Озоновые технологии в лечении злокачественных опухолей: Монография / А.В. Алясова, К.Н. Конторщикова, Б.Е. Шахов // Н.-Новгород, 2006. 204 с.

7. Аникин, В.А. Разработка и оптимизация средств для культураль-ной диагностики туберкулеза на основе препаратов микробного синтеза: автореф. дис. . канд. мед. наук / В.А. Аникин М., 1987. - 27 с.

8. Андроникашвили, Е.А. Улучшение бактериологической диагностики туберкулеза с помощью новых питательных сред / Е.А. Андроникашвили, Г.Д. Исмагулова, Н.К. Качанова//Пробл. туб 1987.-№ 12,-С. 43-46.

9. Андросова7"М.В7Идентификация микобактерий туберкулеза человеческого вида с помощью моноклональных антител / М.В. Андросова // VI Всерос. съезд фтизиатров. — Кемерово, 1987. С. 77-78.

10. Андросова, М.В. Иммунологический метод идентификации M.tuberculosis и M.bovis БЦЖ на основе применения моноклинальных антител / М.В. Андросова, М.А. Владимирский, В.М. Должанский, Г.И. Алексеева // Пробл. туб. -1989. № 5.- С. 43- 46.

11. Апсатаров, Э.А. Озонотерапия хирургической инфекции / Э.А. Апсатаров, С.А. Жанаилов, А.К. Алимжанов // Актуальные вопросы хирургической инфекции: Матер, науч.- практ. конф. Семипалатинск, 1991. - С. 16-17.

12. Байтерякова, Т.И. Персистирование микобактерий в организме крупного рогатого скота / Т.И. Байтерякова, И.Н. Рубцова, Ю.А. Макаров // Пробл. туб. 1987.- №11.- С. 59-62.

13. Балаклеевская, А.А. Влияние некоторых биологически активных веществ на рост и развитие туберкулезных микобактерий: автореф. дис. . канд. мед. наук. /А.А. Балаклеевская — Минск, 1970. — 19 с.

14. Бараускене, Л.П. Биологические и биохимические свойства патогенных для человека микобактерий как основа комплекса методов ускоренной идентификации и классификации: Автореф. дис. . докт. биол. наук. /Л.П. Бараускене М., 1977. - 29 с.

15. Белянин, И.И. Лечение сахарного диабета у больных туберкулезом легких с помощью озона и гемокарбоперфузии / И.И. Белянин, Е.И.Шмелев // Пробл. туб. 1995. - №1. - С.48-52.

16. Белянин, И.И. Бактерицидное воздействие растворенного озона на различные штаммы микобактерий туберкулеза in vitro / И.И. Белянин, С.Г. Сафонова // Пробл. туб. 1999. - №2. - С.48-49.

17. Белянин, И.И. Усиление эффекта химиотерапии туберкулеза парентеральным введением растворенного озона / И.И. Белянин, М.И. Тетю-хина // Пробл. туб. 2000. - № 6. - С. 57-61.

18. Белянин, И.И. Изменение устойчивости к изониазиду и рифампи-цину полирезистентного штамма микобактерий туберкулеза после обработки растворенным озоном // И.И. Белянин, Л.П. Мартынова, Е.И. Шмелев // Пробл. туб. 2002. - №1. - С.46-49.

19. Белянин, И.И. Снижение устойчивости полирезистентных микобактерий к изониазиду при лечении экспериментального туберкулеза озоном и изониазидом / И.И Белянин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2004. - №3. - С.95-98.

20. Белянин, И.И. Изменение лекарственной устойчивости микобактерий при одновременном использовании химиотерапии и внутривенных инфузий растворенного озона / И.И Белянин, Е.И. Шмелев // Пробл. туб. и болез. легких. 2004. - №7. - С.32-35.

21. Белянин, И.И. Использование растворенного озона при лечении экспериментального туберкулеза у мышей / И.И Белянин, Е.И. Шмелев, Л.П. Мартынова, Б.В. Никоненко // Пробл. туб. и болез. легких. 2004. -№10. - С.36-39.

22. Белянин, И.И. Снижение устойчивости микобактерий к противотуберкулезным препаратам в эксперименте и клинике (ближайшие и отдаленные результаты) / И.И. Белянин, Е.И. Шмелев // Пробл. туб. и болез. легких. 2007. - №2. - С.31-38.

23. Берджи, Д. Определитель Берджи: В 2 т.: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997. - 368 с.

24. Благодарный, Я.А. Вопросы природной очаговости туберкулеза и микобактериозов / Я.А. Благодарный, Н.М. Блехман // Природно-очаговые антропозоонозы. Тез. докл. IX Всес. конф. по природной очаговости болезней человека и животных - Омск, 1976. - С. 76-84.

25. Блинова, Ю.С. Применение озонотерапии в комплексном лечении беременных, больных сахарным диабетом: автореф. канд. дис. . мед. наук. / Ю.С. Блинова Барнаул, 2004.- 23 с.

26. Бобченок, А.П. Совершенствование бактериологической диагностики туберкулеза в Литовской ССР / А.П. Бобченок // Пробл. туб. 1984. - №8. - С. 9.

27. Боганец, Н.С. Совершенствование бактериологической диагностики туберкулеза: автореф. канд. дис. . вет. наук / Н.С. Боганец — Казань,1986.- 20 с.

28. Боганец, Н.С. Питательные среды для культивирования микобактерий туберкулеза / Н.С. Боганец // Методы диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. Омск, 1988.- С. 132-137." ~

29. Боганец, Н.С. Метод ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных / Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, А.Д. Панкратова, В.Г. Ощепков // описание к автор, свид. № 2265403 от 10.12.2005.

30. Боганец, Н.С. Эффективность питательных сред в диагностике туберкулеза / Н.С. Боганец // Ветеринария, 2006. №3,- С. 28-30.

31. Бояринов, Г.А. Озонированное искусственное кровообращение. Экспериментальное обоснование и результаты применения / Г.А. Бояринов, В.В.Соколов// Н.-Новгород, 1999.-316 с.

32. Бояринов, Г.А. Растворимость и распад озона в физиологическом растворе / Г.А. Бояринов и др. // Нижегородский медицинский журнал. — 2000.- №2. С. 40-45.

33. Бояринов, Г.А. Растворимость озона в дистиллированной воде / Г.А. Бояринов и др. // Тез. докл. IV Всерос. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 2000.- С. 4.

34. Бронштейн, О.Н. Борьба с туберкулезом / О.Н. Бронштейн, М.В. Триус, А.А. Клебанова, А.С. Хольцман //- М., 1934. 258 с.

35. Бузмаков, И.Г. Причины неспецифической реакции у крупного рогатого скота в хозяйствах Алтайского края / И.Г. Бузмаков, JI.A. Кучина // Мат. Всес. науч. конф. по проблемам туберкулеза и бруцеллеза животных. -Омск, 1980.-С. 58-59.

36. Васильев, И.Т. Озонотерапия в неотложной хирургии / И.Т. Васильев, Р.Б. Мумладзе, И.Н. Лебединский // Тез. докл. III Всерос. науч.-практ. конф. «Озон и методы эфферентной терапии в медицине». -Н.-Новгород, 1998. С. 60-61.

37. Вейсфейлер, Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерий /Ю.К. Вейсфейлер — Будапешт. Академия наук Венгрии. 1975. - 333 с.

38. Веретельников, Ю.В. Средства окислительной терапии в травматологической практике / Ю.В. Веретельников, В.В. Александров, B.C. Кольцов // Материалы IV Всерос. науч.- практ. конф. «Озон и методы эфферентной медицины». Н.-Новгород, 2000. С.89.

39. Ветохин, И.Л. Физико-химические, физиологические и лечебные свойства озона: сб. науч. работ Белорус, науч.- исслед. кожно-венерологич. институт. 1954.- Т.4.- С. 116-Т29.

40. Вилькер, М.К. К вопросу о бактериологической диагностике при туберкулезе /М.К. Вилькер // Советская врачебная газета.-1933.- №22.-С.1080-1082.

41. Владимиров, Ю.А. Перикисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // М.: 1972. 234 с.

42. Вокк, Р.А. Влияние озона на состав фосфолипидов E.coli и Mycobacterium kansasi / Р.А. Вокк // Научные доклады высшей школы. Биологические науки. 1977. - №12.-С. 108-111.

43. Воробьева, З.Г. Реакция агглютинации латекса для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / З.Г. Воробьева, A.JI. Лазовская // Тез. докл. науч.- практ. конф. Новосибирск, 1995. - С. 74-75.

44. Гаврилов, В.Б. Кинетика инактивации микроорганизмов при ограниченной и избыточной подаче озона /В.Б. Гаврилов, Т.В. Трухачева // Тез. докл. II Всерос. науч.- практ. конф. «Озон в биологии и медицине». -Н.-Новгород, 2000. С. 97.

45. Голышевская, В.И. Совершенствование микробиологической диагностики туберкулеза / В.И. Голышевская, Т.Т. Попеску // Пробл. туб. — 1989. -№ 10.-С. 38-40.

46. Голышевская, В.И. Бактериологические методы исследования при заболеваниях органов дыхания / В.И. Голышевская // Пробл. туб.— 1997 — №5.-С. 51-53.

47. Григорьев, М.М. Определение причин неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота /М.М. Григорьев, А.Г. Дрогун, А.П. Лысенко // Ветеринарная наука производству. 1989 . - Т. 18. - С. 10-14.

48. Грошев, А.Н. Сферы клинического применения озонотерапии на современном этапе / А.Н. Грошев, М.А. Кажура, А.А. Хайдак и др. // Тез. докл. II Всерос. науч. практ. конф. «Озон в биологии и медицине» -Н.-Новгород.- 1995.-С.48-49.

49. Густов, А.В Озонотерапия в неврологии / А.В. Густов, С.А.Котов, К.Н. Конторщикова, Ю.П. Потехина // Н.- Новгород, 1999. 179 с.

50. Донченко, А.С. Внутривенная туберкулиновая проба у кроликов /А.С. Донченко, В.Н. Ланько // Вест, с.-х Казахстана.- Алма-Ата, 1971.-№ 8.- С. 56-60.

51. Донченко, А.С. Комплексная дифференциация неспецифических туберкулиновых реакций в условно благополучных пунктах / А.С. Донченко и др. // Профилактика болезней с.-х. животных, сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. ИЭВ-СиДВ. Новосибирск, 1980. - С. 32-34.

52. Донченко, А.С. Основные принципы борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота / А.С. Донченко // Сб. науч. тр. СО ВАСХНИЛ.-Новосибирск, 1984.-С. 13-17.

53. Донченко, А.С. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота: Монография / А.С. Донченко, Н.П. Овдиенко, Н.А. Донченко // Новосибирск, 2004.-309 с.

54. Донченко, В.Н. Влияние биостимулятора на интенсивность роста возбудителя туберкулеза бычьего вида / В.Н. Донченко, С.В. Ионина //

55. Матер, науч. конф. «Ассоциативные инфекции с.-х. животных и новые подходы к их ликвидации». Барнаул, 1997. - С. 22-23.

56. Дорожкова, И.Р. Микробиологическая диагностика туберкулеза и микобактериозов / И.Р. Дорожкова // Туберкулез (ред. А.Г. Хоменко).-М.: «Медицина», 1982.-С. 102-128.

57. Драбкина, P.O. Микробиология туберкулеза / P.O. Драбкина.— М.: «Медгиз», 1963.-255 с.

58. Дыхно, М.М. Современные направления в изучении микробиологии туберкулеза / М.М. Дыхно, З.Н. Кочемасова, Т.И. Козулицина // Актуальные вопросы теоретической и клинической фтизиатрии. -М., 1980.- С. 72-80.

59. Дюсенова, Г.М. Использование хемилюминесцентного метода для диагностики туберкулеза в условиях эксперимента на крупном рогатом скоте / Г.М. Дюсенова, JT.A. Таллер // Матер. Всерос. науч. конф. по проблемам хронических инфекций. Омск, 2001 - С. 176-179.

60. Ерохин, В.В. Ультраструктура вирулентных туберкулезных микобактерий / В.В. Ерохин, З.С. Земсков, И.Р. Дорожкова // Микробиология-1972.-№ П.-С. 80-84.

61. Ерохин, В.В. Строение микобактерий туберкулеза по данным электронной микроскопии / В.В. Ерохин // Пробл. туб.- 1982 — № 3 — С. 55-59.

62. Ефименко, Н.А. Озонотерапия в хирургической клинике / Н.А. Ефименко, Н.Е. Чернеховская // М.: Российская медицинская академия последипломного образования, 2001. 160 с.

63. Жумашев, А.С. Внутривенная туберкулинизация крупного рогатого скота / А.С.Жумашев // Вест. с.-х. науки Казахстана, 1973. № 7. - С. 70-73.

64. Зайцев, В.Я. Озонотерапия /В.Я.Зайцев, С.Д. Разумовский // Материалы III Всерос. науч.- практ. конф. «Озон и методы эфферентной терапии в медицине». Н.-Новгород, 1998. С.11-12.

65. Западнюк, И.П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Е.А. Захария // Киев: « Вища школа», 1974. Изд. 2 - 304 с.

66. Зыков, М.П. Потенциально-патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов / М.П. Зыков, T.Bi Ильина.-М., 1972.- 176 с.

67. Зыков, М.П. Микробиология туберкулеза / М.П. Зыков.— М., 1976.-160 с.

68. Зубеева, Г.Н. Озонотерапия в лечении нарушений ритма сердца / Г.Н. Зубеева, И.М. Мотылев, В.И. Барановский // Тез. докл. IV Всерос. науч.- практ. конф. «Озон и методы эфферентной терапии в медицине». Н.-Новгород, 2000. С.50.

69. Зуев, Б.М. Обзоры. Озонотерапия в гинекологии / Б.М.Зуев, Н.М.Побединский, Т.А. Джибладзе // Акушерство и гинекология. 1998.-№1.- С. 35-37.

70. Иванов, О.Л. Озонотерапия в дерматологии (обзор литературы) / О.Л. Иванов, И.В. Кошелева // Рос. журн. кожных и венерических болезней. 2000. - №4. - С. 37-45.

71. Иванова, И.П. Физико-химические свойства озонированных растворов / И.П. Иванова, К.Н; Конторщикова // Тез. докл/П Всерос. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине» Н.-Новгород. 1995. - С. 10-11.

72. Идов, И.Э. Аспекты применения озона в медицине: Обзор литературы / И.Э. Идов // Анест. и реаним. 1997. - №1. - С. 56-63.

73. Ильина, Т.Б. Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий: Метод, рекомендации.—Д., 1980.-21 с.

74. Ильина, Т.Б. Дифференциация микобактерий tuberculosis и bovis с помощью салицилового теста и редукции нитратов / Т.Б. Ильина // Пробл. туб.- 1987.-№ 1-е. 57-61.

75. Ионина, С.В Рост микобактерий на плотных питательных средах /С.В. Ионина // Матер, науч. конф. молодых ученых СО РАСХН «Сибирская аграрная наука III тысячелетия». Новосибирск, 2000. - С. 152-153.

76. Ионина, С.В. Повышение диагностической эффективности питательных сред для культивирования микобактерий туберкулеза: автореф. дис. . канд. биол. наук / С.В. Ионина Новосибирск, 2001 — 18 с.

77. Каграманов, А.И. Лабораторные исследования при туберкулезе /А.И. Каграманов //ММЭ.- 1959.-Т. 10.-С. 739.

78. Кадочкин, А.М*. Изучение атипичных нефотохромогенных микобактерий комплекса авиум интрацеллюляре и их патогенности для лабораторных животных и крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. вет. наук / A.M. Кадочкин - М., 1979 - 13 с.

79. Каратаев, С.Д. Озонотерапия хеликобактерзависимых заболеваний: автореф. дис. . д-ра мед. наук. / С.Д. Каратаев. -М.,2000. 25 с.

80. Каримова, Л.М. Характеристика микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота; реагирующего"^ на туберкулин в хозяйствах Западной Сибири и их идентификация: автореф. дис. . канд. вет. наук / Л.М. Каримова. Омск, 1993. - 18 с.

81. Кассич, Ю.Я. Реакция связывания комплемента и ее применение при оздоровлении стад крупного рогатого скота от туберкулеза: автореф. дис. . докт. вет. наук / Ю.Я. Кассич.— М., 1979. — 40 с.

82. Качалина Т.С. Озоновые технологии в акушерстве и гинекологии: монография / Т.С. Качалина, Г.О. Гречканев // Н.-Новгород, 2007. 292 с.

83. Коваль, Н.Н. Перспектива улучшения состава питательных сред для бактериологической диагностики туберкулеза /Н.Н. Коваль //Пробл. туб. 1977.-№ 9.-С. 70-73.

84. Ковганко, П.А. Озонотерапия у беременных с активным туберкулезом легких / П.А. Ковганко // Материалы VII российского съезда фтизиатров. Москва. 3-5 июня 2003г. М.: 2003.- С. 21-23.

85. Коган, Б.И. Способ подготовки микобактерий для электронно-микроскопических исследований / Б.И. Коган // Информ. листок Омского ЦНТИ.-№ 173.- 1988.-4 с.

86. Козулицина, Т.И. Современное направление в изучении микобакте-риальной популяции / Т.И. Козулицина, В.И. Голышевская и др. // IX Всесо-юз. съезд фтизиатров: тез. докл. — Кишинев: «Штиинца», 1979. — С. 161-162.

87. Козулицина, Т.И. Современные методы идентификации кислотоустойчивых микобактерий / Т.И. Козулицина, Н.М. Макаревич, A.M. Ка-дочкин // Материалы Всесоюз. науч. конф — Омск, 1980 С. 65-69.

88. Колупаев, А.В. Коррекция вагинальной микрофлоры у женщин репродуктивного возраста с использованием озонотерапии / А.В. Колупаев, И.П. Погорельский, В.И. Пантелеев // Нижегородский медицинский журнал. Приложение. Н.-Новгород, 2005. С. 117-118.

89. Колычев, Н.М. Случай выделения у ястреба—тетеревятника палочки туберкулеза / Н.М. Колычев // Науч. тр. ОВИ- Омск, 1970 Т. 27 — Вып. 2,-С. 16-18.

90. Колычев, Н.М. Сравнительная оценка двух методов бактериального контроля качества дезинфекции при туберкулезе / Н.М. Колычев // Патогенез, лечение и профилактика болезней жвачных животных в Западной Сибири.- Омск, 1985 С. 49-57.

91. Колычев, Н.М. Зоопатогенные бактерии и меры борьбы с ними: Монография / Н.М. Колычев, В.Г. Ощепков // Омск, 2001.- 632 с.

92. Колычев, Н.М. Индикация, дифференциация и идентификация микобактерий: Монография / Н.М. Колычев, В.Н. Кисленко, Л.М. Каримова // Омск: ИВМ ОмГАУ, 2004. - 332 с.

93. Конев, С.В. Экспериментальные основые механизмы лечебного действия озона. Озонобиология: молекулярно-мембранные основы / С.В. Конев, В.К. Матус // Тез. докл. I Всерос. научн.- практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.- Новгород, 1992. С.3-4.

94. Конопельцев, И.Г. Применеие озонированного рыбьего жира для профилактики и лечения коров, больных эндометритом / И.Г. Конопельцев, А.В. Филатов, А.А. Костяев // Реаниматология и интенсивная терапия. Анестезиология. Приложение. 2000. №4. - С. 126.

95. Конопельцев, И.Г. Ультраструктурные изменения у микроорганизмов при обработке озонированным рыбьим жиром / И.Г. Конопельцев, Е.В. Видякина, А.А. Костяев // Нижегородский медицинский журнал. Приложение. 2005. - С. 236-237.

96. Конопельцев, И.Г. Эффективность озонированного изотонического раствора натрия хлорида при профилактике и лечении задержании последа у коров / И.Г. Конопельцев, А.И. Попов // Нижегородский медицинский журнал. Приложение. 2005. - С. 238-240.

97. Конторщикова, Е.Ю. Патогенетическое обоснование применения озонотерапии в послеоперационном периоде у онкологических больных: авто-реф. дис. . канд. мед. наук / Е.Ю. Конторщикова Н.-Новгород, 2005. - 21 с.

98. Конторщикова, К.Н. Изменение белкового и липидного спектра плазмы крови под действием озона / К.Н. Конторщикова, Н.Н. Андреева// Тез. докл. II Всерос. науч.-практ. конф. «Озон. Получение и применение»: -М.: 1992.-С.7.

99. Конторщикова, К.Н. Биохимические основы эффективности озонотерапии / К.Н. Конторщикова // Тез. докл. II Всерос. науч.- пркт. конф. «Озон в биологии и медицине» Н.-Новгород. 1995.- С. 8-9.

100. Конторщикова, К.Н. К вопросу о биорегуляторном эффекте озона / К.Н. Конторщикова // Тез. докл. III Всерос. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 1998. С. 12-13.

101. Конторщикова, К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии / К.Н. Конторщикова // Метод, рекомендации. Н.-Новгород, 2000. - 24 с.

102. Конторщикова, К.Н. Лабораторные алгоритмы для оценки безопасности и эффективности озонотерапии / К.Н. Конторщикова // Клин. лаб. диагностика. -2001. -№10. -С. 42.

103. Конторщикова, К.Н. Озонотерапия: биологические механизмы эффективности / К.Н. Конторщикова // Экспериментальная и клиническая дерматокосметология. 2004. - №3. - С. 13-21.

104. Корнева, И.Н. Конструирование ПЦР-тест-систем обнаружения и идентификации микобактерий туберкулеза у животных / И.Н. Корнева,

105. B.Д. Демкин // Ветеринарная патология 2004- № 1-2(9).- С. 95-96.

106. Коромыслов, Г.Ф. Результаты исследований крупного рогатого скота, инфицированного различными микобактериями / Г.Ф. Коромыслов, З.С. Газарх//Науч. тр.ВИЭВ.-М., 1967. Т. 33. - С. 310-319.

107. Коронелли, Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов // Успехи микробиологии. 1977. - №12. - С. 164-189.

108. Коронелли, Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов / Т.В. Коронелли // М.: Изд-во. Моск. ун-та, 1984.- 160 с.

109. Коронелли, Т.В. Культивирование туберкулезных и условно-патогенных микобактерий на среде с н-алканами / Т.В. Коронелли, Н.И. Фадеева//Проблемы туберкулеза. 1986. - С.44-46.

110. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А.И. Коротяев, С. А. Бабичев // С.-Пб.: «Специальная литература». 1998.-290 с.

111. Космодамианский, В.Н. Бактериология и патогенез туберкулеза /В.Н. Космодамианский //- М.: «Медгиз», 1950. 200 с.

112. Космодамианский, В.Н. Возбудитель туберкулеза и его свойства / В.Н. Космодамианский // Руководство по туберкулезу. М., 1959. - Т. 1—1. C. 54-90.

113. Костина, З.И. Эпидемиология и профилактика туберкулеза / З.И. Костина, Ю.П. Рыкушин // Л.: Медицина, 1983. 168 с.

114. Костюк, В.В. ПЦР при контроле благополучия скота по туберкулезу / В.В. Костюк // Ветеринарная"патология, 2004 № 1 -2(9).- С. 105-107.

115. Кошелева, И. Кислородно-озоновая терапия / И. Кошелева, П. Морозов, Л. Смирнов // Врач. 2005,- №3.- С.47-50.

116. Краткая химическая энциклопедия, т.З.М.: «Советская энциклопедия», 1964. 654 с.

117. Куварин, А.С. Иммунный статус у животных, инфицированных различными микобактериями: автореф. . дис. канд. биол. наук / А.С. Куварин Новосибирск, 2005.- 19 с.

118. Кудрин, А.Н. Фармакология с основами патофизиологии /А.Н. Кудрин // М.: «Медгиз», 1977 186 с.

119. Кудрявцев Б.П. Использование озонированных растворов в комплексном лечении перитонитов / Б.П. Кудрявцев, С.И. Мирошин, С.В. Семенов // Тезисы докл. II Всерос.науч.-практ.конф. «Озон в биологии и медицине» Н. Новгород, 1995. - С. 36-37.

120. Кузин, А.И. О природе так называемых неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота / А.И. Кузин // Науч. тр. Вологодского молочного ин.-та. 1966. - Вып. 51. - С. 220-235.

121. Кузин, А.И. Внутривенная туберкулиновая проба /А.И. Кузин // Профилактика заболеваний с.-х. животных. Вологда, 1974. - С. 72-77.

122. Кузин, А.И. Опыт ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота / А.И. Кузин // Ветеринария. 1981. - № 5. - С. 32-34.

123. Лаз1фёвГ П.С. Экспресс-метод распознавания туберкулеза крупного рогатого скота / П.С. Лазарев, С.Х. Хабибуллин, А.А. Петров // Информ. листок. Челябинский ЦНТИ. — 1974. № 416. - 4 с.

124. Лазовская А.Л. Патогенные и условно-патогенные микобактерии / А.Я. Лазовская, И.Н. Блохина // Волго-вятское книжное издательство. -Горький, 1976. 48 с.

125. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин // — М.: «Высшая школа», 1990.-352 с.

126. Лакман, Э.Д. Серологическая диагностика туберкулеза / Э.Д. Лак-ман// Профилактика инфекционных болезней животных в промышленных комплексах: Материалы науч.-произв. конф.-Омск, 1976-Вып. 27-С.81-82.

127. Лакман, Э.Д. Иммунологические реакции при туберкулезе крупного рогатого скота и их значение в борьбе с этой инфекцией / Э.Д. Лакман // Матер. Всес. науч. конф. по проблемам бруцеллеза и туберкулеза животных. Омск, 1980. - С. 26-27.

128. Ленюшкина, А.А. Терапия неонатальных инфекций озоном / А.А. Ленюшкина // « Инфекции в начале XXI века. Современные технологии в интенсивной терапии и диагностике инфекций в неонатологии, акушерстве и реаниматологии»: материалы семинара. М., 2004. С.7.

129. Ложин, Н.И. К вопросу дифференциации специфических и неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота. / Н.И. Ложин // Сельское хозяйство за рубежом. — 1964. — № 3. С. 50—56.

130. Лунин, В.В. Физическая химия озона / В.В. Лунин, М.П. Попович, С.Н. Ткаченко // М.: Медицина, 1996. 464 с.

131. Любарский, В.А. К морфологии туберкулезных бацилл в связи с вопросом об исследовании мокроты на туберкулезные палочки /В.А. Любарский // сб. статей по микробиологии памяти П.И. Шатилова.— Харьков.- 1922.-С. 130-148.

132. Ляпунова, А.Д. Сравнительная характеристика микобактерий туберкулеза на двух плотных питательных средах / А.Д. Ляпунова, С.А. Бриллиантова, Г.П. Пресман // ЛабГделоГ- 1984. -№ 7. С. 442-443.

133. Макаревич, Н.М. Пути совершенствования современных методов лабораторной диагностики туберкулеза / Н.М. Макаревич, И.Р. Дорожкова// Бюл. ВИЭВ.- 1983.-Вып. 51.-С. 24-28.

134. Максимов, В.А. Применение озона в медицине: Обзор литературы / В.А. Максимов, А.А. Чернышев, С.Д. Каратаев, В.Я. Зайцева // Терапия: экспресс-информация. 1993.- Вып.7.- С. 12-16.

135. Максимов, В.А. Озонотерапия / В.А. Максимов, A.JT. Чернышев, С.Д. Коротаев // Пособие. М.: 1998. 30 с.

136. Мартынов, Ю.В. Индуцированная хемилюминесценция лейкоцитов при экспериментальном туберкулезе крупного рогатого скота / Ю.В. Мартынов, JI.M. Ходун // Туберкулез с.-х. животных: сб. науч. тр. ВАСХНИЛ ВНИИБТЖ.-Омск, 1989.-С. 39-43.

137. Маслеников, О.В. Озонотерапия. Внутренние болезни / О.В. Маслеников, К.Н. Конторщикова // Пособие. — Н.-Новгород, 1999. — 56 с.

138. Маслеников, О.В. Озонотерапия. Внутренние болезни / О.В. Маслеников, К.Н. Конторщикова//Н.-Новгород, 2003. 131с.

139. Маслов, Е. Оптимизация непрямого иммуноферментного анализа для выявления антител к M.bovis / Е. Маслов, А.А. Бойко, И.А. Хорьков // Ветеринария. 1986. - № 10. - С. 64-68.

140. Матус, В.К. Электронно-микрокроскопический анализ действия озона на дрожжевые клетки / В.К. Матус, Ж.В. Прокопова, A.M. Мельникова, В.А. Кириллов // Цитология. 1982. - №8.- С. 954-957.

141. Матус, В.К. Озон как инструмент повышения^фармакологического потенциала клеток / В.К. Матус, М.А. Мартынова, A.M. Мельникова,

142. Л.Н. Баранец// Тез. докл. II Всеросс. науч.- практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 1995. С. 6.

143. Маянский, А.Н. Микобактерии: туберкулез и микобактериозы / А.Н. Маянский Н.-Новгород, 2000.-74 с.

144. Мирошин, С.Н. Результаты изучения сравнительной бактерицид-ности озонированных и не озонированных антисептиков / С.Н. Мирошин, Г.Н. Ладыгина // Тез. докл. I Всерос. науч.- практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 1995. — С. 10.

145. Модель, Л.М. Биология и биохимия туберкулезных микобактерий / Л.М. Модель. АМН СССР.- М., 1952.- 247 с.

146. Модель, Л.М. Наблюдение над питанием туберкулезных бацилл /Л.М. Модель, Е.Ф. Сидельникова // Материалы по обмену веществ туберкулезных бацилл-М., 1955.-Т. 8.-№ 2 — С. 156-167.

147. Модель, Л.М. Биология туберкулезных микобактерий и иммунология туберкулеза /Л.М. Модель // М.: «Медгиз», 1957 315 с.

148. Назарук, М.И. Способ выращивания микобактерий туберкулеза / М.И Назарук, О.И. Белякова, А.Ф. Шавловский и др. // Описание изобретения к авт. свид. № 3448706/28-13 от 09.04.1982.

149. Найманов, А.Х. Полимеразная цепная реакция при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / А.Х. Найманов, Н.П. Овдиенко, Е.П. Осипова и др. // Ветеринарная патология 2004 - № 1-2(9).- С. 96-99.

150. Наставление по диагностике туберкулеза животных. — М.: 2002 — 69 с.

151. Нечваль, И.Т. К вопросу дифференциации туберкулиновых реакций / И.Т. Нечваль, Е.И.Буряк, С.И. Кованда, В.Д. Свиридов, П.С. Шеверенко, Н.П. Ляшенко // Ветеринария. 1973. -№ 6. - С. 52-53.

152. Нуррулин, А.А. Возможность использования туберкулина (ППД) в качестве тест-антигена для иммуноферментного анализа / А.А. Нуррулин // Меры борьбы с хроническими инфекциями в животноводческих комплексах. Казань, 1986. - С. 21-22.

153. Обухов, И.Л. Усовершенствование коммерческих ПЦР-тест-систем для диагностики туберкулеза животных / И.Л. Обухов, Н.К. Букова, О.В. Клименкова // Ветеринарная патология 2004 — № 1-2(9).- С. 94-95.

154. Овдиенко, Н.П. Дифференциация неспецифических реакций на туберкулин для млекопитающих у крупного рогатого скота /Н.П. Овдиенко, А.И. Кузин // Материалы науч. практ. конф. по проблемам бруцеллеза и туберкулеза животных. - Омск, - 1980. - С. 116-118.

155. Овдиенко, Н.П. Идентификация различных видов микобактерий методом иммуноферментного анализа / Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, М.В. Головченко, Д.М. Мирзоев, Л.Н. Черноусова // Инфекционная патология животных / сб. науч. тр. Омск, 2001. - С. 171- 172.

156. Овсянов, Н.И. совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных / Н.И. Овсянов, М.А. Овладеева, К.Н. Наумова // ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1987. - С. 86-92.

157. Околелов,-В.Ит Идентификация микобактерий лазерной спектроскопией / В.И. Околелов, А.П. Татаринов, Е.С. Мартынова // Ветеринария.- 1991—№ 2 — С. 28.

158. Околелов, К.В. Применение спектрофотометрии для диагностики туберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота / К.В. Околелов // Проблемы и перспективы развития науки в институте ветеринарной медицины / сб. науч. трудов ИВМ.- Омск, 2002,- С. 189-193.

159. Папонов, В.А. Влияние озона налейкоциты человека У В.А. Па-понов, А.В. Симонов, С.П. Редько // Тез. докл. I Всерос. науч.- практ. конф. «Озон в биологии и медицине» Н.-Новгород, 1992. - С. 13-14.

160. Перетягин, С.П. Техника озонотерапии / С.П. Перетяган, Г.А. Бояринов, Д.М. Зеленов и др. // Метод, рекомендации. Н.-Новгород, 1991. 15 с.

161. Перетягин, С.П. О многофакторном механизме лечебного действия озона / С.П. Перетягин // Тез. докл. V Всерос. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 2003. С.6-1.

162. Першин, Г.Н Методы экспериментальной химиотерапии / Г.Н. Першин М., 1971140 с.

163. Привалов, П.Я. Биофизика/ПЛ. Привалов.-М.: «Колос», 1963 163с.

164. Приймак, А.А. Воздействие озоно-кислородной смеси на микобактерии туберкулеза и условно-патогенные микроорганизмы / А.А. Приймак, А.Н. Калюк, А.Г. Киргинцев // Пробл. туб. 1991. - №4. - С.7-10.

165. Разумовский, С.Д. Озон иего реакции~с~органическймй соединениями / С.Д. Разумовский, Г.Е. Зайков // М.: Наука, 1974. 322 с.

166. Разумовский, С.Д. Кислород элементарные формы и свойства / С.Д. Разумовский // М.: Химия, 1979. - 304 с.

167. Разумовский, С.Д. Озон в процессах восстановления качества воды / С.Д. Разумовский // Журн. Всесоюз. хим. общества им. Д.И. Менделеева. 1990.- T.XXXV.- №1,- С. 77-88.

168. Разумовский, С.Д. Физико-химия озона и ее биохимические и медицинские приложения / С.Д. Разумовский // Тез. докл. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине». — Н.-Новгород, 1995. — С.4.

169. Разумовский, С.Д. Стабильность озона в растворах и пути ее повышения / С.Д. Разумовский // Материалы IV Всерос. науч.-практ. конф. «Озон и методы эфферентной терапии в медицине». Н.-Новгород, 2000. - С.7.

170. Риллинг, 3 Практическая озонокислородная терапия / 3. Риллинг, Р. Вибан//Информационно-практическое пособие. Гейдельберг, 1985. - 160с.

171. Рудой, Н.М. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза / Н.М. Рудой М.: «Медицина», 1975 - 287 с.

172. Румачик, И.И. Методические основы лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / И.И. Румачик // Ветеринария-1987.-№12.-С. 62-64.

173. Румачик, И.И. Методические подходы при культуральном исследовании материала на туберкулез / И.И. Румачик // Актуальные проблемыинфекционной патологии и иммунологии животных. Материалы межд. науч.- практ. конф. М., 2006. С. 354-361.

174. Рябов, С.В. Исторические аспекты развития озонотератии /С.В. Рябов, Г.А. Бояринов// Тезисы докладов IV Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине». Н.-Новгород, 2000.-С. 1-2.

175. Самилло Г.К. Пути повышения высеваемости и ускорения роста микобактерий на модифицированной среде Финн-И / Г.К. Самилло, Е.Н. Ромашева//Пробл. туберкулеза.- 1988. № 12. - С. 62-63.

176. Саудегеров, С.К. Возможность использования антигенов из атипичных микобактерий в РСК для дифференциальной диагностики туберкулеза / С.К. Саудегеров, А.С. Донченко // Диагностика инфекционных болезней животных. Новосибирск, 1993.-С. 16-19.

177. Сафин, М.А. Внутривенная туберкулиновая проба у крупного рогатого скота / М.А. Сафин // Матер, науч. конф. КГВИ. Казань, 1971. -С. 249-251.

178. Смолянинов, Ю.И. Социально-экономическое значение туберкулеза крупного рогатого скота / Ю.И. Смолянинов, С.Ю. Смолянинов,

179. B.Ф. Бордюг // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: сб. науч. тр. СО РАСХН ВНИИБТЖ. Омск, 2004.- С. 4-22.

180. Смолянинов, Ю.И. Экономический ущерб от туберкулеза крупного рогатого скота в России /Ю.И. Смолянинов, Н.А. Донченко,

181. C.Ю. Смолянинов, В.Ф. Бордюг, Н.Н. Кощеев // Ветеринарная патология. -2005.-№ 1 (12).-С. 104-112.

182. Смолянская, А.З. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / А.З. Смолянская.— М.: «Медицина», 1967.-317 с. --------

183. Сорокина, С.Р. Использование озонированных растворов в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта: автореф. дис. . канд. мед. наук. / С.Р. Сорокина Тверь, 1997.- 21 с.

184. Справочник по микробиологическим и вирусологическим исследованиям / Под ред. М.О. Берира.- М.: «Медицина», 1982 375 с.

185. Стальная, И.Д. Современные методы в биохимии / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Под ред. В.Н. Ореховича. М., 1997. - С.66-68.

186. Стопка, П. Озон. Физические, химические, биохимические характеристики озона, его местонахождение в природе, обнаружение и использование /П. Стопка // Новое в стоматологии, 2005, №4., С.80-83.

187. Суворов, Е.А. О некоторых вопросах эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота в Куйбышевской области / Е.А.Суворов // сб. науч. тр. / Куйбышевская НИВС. 1968. - Вып. 5. - С. 156-165.

188. Таллер, Л.А. Совершенствование лабораторных методов выделения и идентификации микобактерий туберкулеза у крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. вет. наук / Л.А. Таллер Омск, 1995. - 19 с.

189. Татаринов, А.П. Ультрафиолетовые резонансные спектры комбинационного рассеяния микобактерий туберкулеза / А.П. Татаринов, Е.С. Мартынова, В.И. Околелов // Сиб. вест. с.-х. науки. — 1990.- №4.- С. 61-66.

190. Тимаков, В.Д. Микробиология / В.Д. Тимаков, B.C. Левашев, Л.Б. Борисов // М.: «Медицина», 1983 512 с.

191. Тогунова, А.И. Туберкулез / А.И. Тогунова // Руководство по микробиологической-диагностике инфекционных болезней. М.: «Медицина», 1964.-422 с.

192. Триус, М.В. О выделении чистой культуры туберкулезной палочки по методу Левенштейна Сумиоши / М.В. Триус, А.А. Клебанова // Вопр. туберкулеза - 1976 - №11- С. 6-18.

193. Тургенбаев, К.А. Аллергическая диагностика туберкулеза животных СКЖ-туберкулином / К.А. Тургенбаев, В.И. Пионтковский, Е. Хасенов // Инфекционная патология животных, сб. науч. тр.— Омск, 2001.-С. 187-192.

194. Усович, А.Т. Применение математической статистики при обработке экспериментальных данных в ветеринарии / А.Т. Усович, П.Т. Лебедев // Омск, 1970.-43 с.

195. Федорова, Т.А. Применение медицинского озона в клинике акушерства и гинекологии / Т.А. Федорова // Материалы семинара «Новые технологии в акушерстве, гинекологии и неонатологии». М.: 2002 С. 184.

196. Финкель, Е.А. Сухие питательные среды для диагностики туберкулеза / Е.А. Финкель, Ю.Б. Погребинская // Фрунзе: «Кыргызстан», 1977— 130 с.

197. Финн, Э.Р. Высеваемость микобактерий туберкулеза на различных средах и их сочетаниях / Э.Р. Финн //Лаб. дело.- 1970.-№10.- С. 618-620.

198. Финн, Э.Р. Пути повышения высеваемости и ускорения роста микобактерий туберкулеза / Э.Р. Финн // Пробл. туб.- 1974.- №12.- С. 72-75.

199. Финн, Э.Р. Пути оптимизации микобактериологических исследований во фтизиатрии / Э.Р. Финн, Н.Н. Машенцева и др. // Тез. докл. IX Всесоюз. съезда фтизиатров. — Кишенев: «Штиинца», 1979. С. 168-169.

200. Хазипов, Н.З. Туберкулез крупного рогатого скота / Н.З. Хазипов, М.А. Сафин, Г.З. Идрисов. М.: «Агропромиздат», 1985. - 128 с.

201. Хайкин, Б.Я. Сравнительная характеристика питательных сред для идентификации микобактерий и возможности повышения их информативности / Б.Я. Хайкин, Н.С. Боганец / Науч.-техн. бюл. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. 1985. Вып.30 - С. 34-37.

202. Хамзин, Р.А. Иммуноферментный метод при, диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Р.А. Хамзин, М.А. Сафин, К.Г. Идрисова // сб. науч. тр. КГВИ. Казань, 1985. - С. 89-95.

203. Харитонов, М.В. Методические указания по дифференциации неспецифических и поствакцинальных аллергических реакций на туберкулин от специфических у крупного рогатого скота /М.В. Харитонов, М.Г. Нигматуллин // сб. науч. тр. КГВИ. Казань, 1982. - С. 20.

204. Харитонов, М.В. О дифференциации неспецифических реакций от специфических /М.В. Харитонов // Ветеринария, 1983. № 1. С. 30-31.

205. Ходун, JI.M. Современные проблемы научных исследований диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / JT.M. Ходун // сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. Омск, 1988. -С. 89-95.

206. Ходун, JI.M. Метод иммуноферментного анализа для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / J1.M. Ходун, Н.И. Цунская // Туберкулез с.-х. животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ Омск, 1989.-С. 31-34.

207. Ходун Л.М. Использование биолюминесцентных методов в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Л.М. Ходун, Ю.В. Мартынов // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных: сб. науч. тр. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. Новосибирск, 1991.-С. 37-44.

208. Ходун, Л.М. Среда Фаст-ЗЛ для ускоренного выделения микобактерий туберкулеза / Л.М. Ходун // Ветеринария, 1996. № 8. - С. 51-52.

209. Ходун, Л.М. Лабораторные методы экспресс-диагностики туберкулеза животных / Л.М. Ходун // Тез. докл. науч.- произв. конф. посвящ. 100-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России. Курск, 1996, С. 335-338.

210. Худадов, Г.Д. Способ ускоренного выращивания микобактерий туберкулеза / Г.Д. Худадов, М.И. Алексеева // Описание изобретения к авт. свид. № 600220/31 от 23.05.59.

211. Цунская, Н.И. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота методом ИФА / Н.И. Цунская, Л.Т. Аппельганц // Система мер борьбы с туберкулезом животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ ВНИИБТЖ.— Новосибирск, 1991.-С. 35-37.

212. Черноградский, И.ГТ. Безглицериновые среды для исследований при туберкулезе /И.П. Черноградский, В.Г. Захаров // Ветеринария—1973.— № 12,-С. 113-114.

213. Чичибабин Е.С. Питательные среды для выращивания микобактерий / Е.С. Чичибабин // Пробл. туб.- 1987.- № 2.- С. 56-58.

214. Чичибабин, Е.С. Совершенствование питательной среды для выращивания микобактерий туберкулеза / Е.С. Чичибабин // Пробл. туб — 1990.-№ 4 С. 60-61.

215. Чурбаков, Н.К. О неспецифической реактивности у крупного рогатого скота, выявляемой аллергендиагностикой туберкулеза в хозяйствах Казахстана: автореф. дис. . канд. вет. наук / Н.К. Чурбаков Фрунзе, 1967. - 21 с.

216. Шаров, А.Н. К вопросу аллергической диагностики туберкулеза / А.Н. Шаров // Материалы науч. конф. по проблемам туберкулеза и бруцеллеза животных. — Омск, 1980.— С. 17—18.

217. Шаров, А.Н. ПЦР при диагностике туберкулеза /А.Н. Шаров, JI.A. Ерошенко, И.П. Суханов и др. // Ветеринария 2001.-№ 10 — С. 19-22.

218. Шаров, А.Н. ПЦР при диагностике туберкулеза / А.Н. Шаров, Л.А. Ерошенко, И.П. Суханов, С.Л. Кальнов // БИО. 2002. - № 12. - С. 29-30.

219. Шахбанов, А.А. Ультратонкая структура микобактерий туберкулеза typus avium / А.А. Шахбанов, И.Д. Грушаев // Ветеринария.- 1970-№11.- С. 63-64.

220. Шахбанов, А.А. Ультратонкая структура туберкулезных микобактерий /А.А. Шахбанов, В.М. Кушнарев // Микробиология.-1972.- № 10.-С. 16-19.

221. Шишков, В.П. Туберкулез животных. Методы диагностики и профилактики / В.П. Шишков, А.В. Ткачев-Кузьмин, С.П. Качанова. -М., 1986.-45 с.

222. Шмелев, Н.А. Туберкулез его предупреждение и лечение / Н.А. Шмелев // М.: Знание, 1954. 24 с.

223. Шмелев, Н.А. Справочник фтизиатра: справочное издание / под ред. Н.А. Шмелева, В.Л. Эйнис. Изд. 3-е, испр. и доп. - М.: Медицина, 1975.- 408 с.

224. Щеголева, Р.А. Модификация жидкой питательной среды Со-тона для выращивания микобактерий туберкулеза / Р.А. Щеголева // Лаб.дело.- 1989.- №5. С.78-79.

225. Ющенко, А.А. Культивирование микобактерий на средах, модифицированных перфторорганическими соединениями / А.А^ Ющенко, О.А. Иртуганова, А. Маслов // Бюл. эксперим. биологии и медицины — М., 1987.- 12 с.

226. Яковлева Е.К. Влияние обработки крови озоном на метаболизм легких при РДС / Е.К. Яковлева, Л.В.Горбунова, К.Н. Конторщикова, И.В. Мухина // Тез. докл. I Всерос. науч.-практ. конф. «Озон в биологии и медицине» Н.-Новгород, 1992. - С. 10-11.

227. BjQrkman, G. Bekampandet av notkreacturstuberculosen I Sverige / G. Bjorkman // Svensk Veterinartingning, 1982. V. 34. - № 2. - P. 59-64.

228. Blanchard. J.S. Molecular mechanisms of dryg resistance in Mycobacterium tuberculosis / J.S. Blanchard // Ann. Rev. Biochem. 1996. - Vol.65. -P.215-319.

229. Bocci V. Studies on the biological effects of ozone. 1. Induction of interferon gamma on human leucocyter / V. Bocci, L. Paulesu // Haematologica. -1990.-Vol. 75.-P. 510-515.

230. Bocci, V. Autohaemotherapy after treatment of blood with ozone / V.Bocci // Areapprais. 1 .Int.Med.Res.-1994.- 5-6.№22(3).p. 131 -144.

231. Bocci, V. Ozone as a bioregulator. Pharmacology and toxicology of ozoneterapy today / V. Bocci // J.Biolog. Regulators and Homeostatic agents. — 1997.- Vol. 10.- №2/3. P.31 -53.

232. Bocci, V. Oxygen-ozone Terapy / V. Bocci, L. Paulesu // Haema-tologica. London. 2002. - Vol. 75. - P. 440.

233. Boniske R. The occurrence of atypical mycobacteria in the environment of man and animal. Exc. Med. Int. Congr., 1962, 37, ser. 119. - P.361-368.

234. Cardendale, M.T. Is there a role for medical ozone in the treatment of HIV and associated infections? / M.T.Cardendale, J.Griffits // Proceedings of the 11-th Ozone World Congress. San Francisco, 1993. - P.l32 - 145.

235. Corner, L The duration of cattle to inoculation wich atypical mucobac-teria/L. Comer// Austral. Vet. S. -1988. V.57.- №5. - P. 216-219.

236. Corner, L Comparison of media for the primary isolation of M.bovis for Veterinary and medical diagnostic laboratories / L. Corner, C. Nicolacopou-los // Austr. Vet. J. -1988. V.65. - №7. - P. 202-205.

237. De las Gadigas T. Use of the ozonized oil on patients with vulvovaginitis / De las Gadigas Т., Bastard V., Menendez S. et al.// Havana, 1990.- Vol.35-P.78-95.

238. Eberhardt, H.G. The efficacy of ozone therapy as an antibiotic / H.G. Eberhardt // Ozone World Congress. San-Fracisco, 1993. Vol.1.- P. 18-26.

239. Eberhardt, H.G. The pharmacokinetic profile of oxygen-ozon therapy / H.G. Eberhardt // Abstracts of 2nd International Symposium on Ozone applications. Havana, 1997. - P. 20-21.

240. Garber, G.E. The use of ozone-treated blood in the therapy of HIV infection and immune disease: a pilot study of safety and efficacy / G.E. Garber et al. // AIDS. 1991. - №5. - P.981-984.

241. Griffin, F. Nev Tb test cut control costs. Diagnosis no longer meams a visit to Heartbreak Hotel / F. Griffin //The deer Farmer. 1988. - № 50. - P. 53-54.

242. Imaeda Т. Deoxyribonucleic acid relatedness among selected strains of Mycobacterium bovis, Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium microti and Mycobacterium africanum. Int. J. Syst. Bacteriol. 1985. Vol. 35. - P. 147 - 150.

243. Kappler, W.L. Identification le differenciation et la classification des Mycobacteries / W.L. Kappler //Bull. Un. Int. Tuberc.- 1968.- Vol. 38.- P. 49-51.

244. Karlic, H Ozone and ionisi sierender strahlung in vivo - modeleine pilostudie an vier genakologischen tumorenl / H. Karlic, H, Kucera, M. Metka et al. // Strahlenther und Oncol. - 1987. - Vol. 163. - P. 37-42.

245. Kovats, I. Istrasivangie vriednosti Kompravativnog testas jedaskim koncentraci jama avijarnjng i bovinog PPD-tuberculina u dijagnostici tubercu-lose goveda /I. Kovats// Veber. Glasnik, Beograd, 1979. 339. - S. 707-713.

246. Krucku, I. Cinost a ukuln Tbc laboratore SVU po eradicaci tubercu-locu scota /I. Krucku// Veterinarstvi, 1973. 23, 10: 461-463.

247. Middlebrook, G. Bacteriology of tuberculosis: laboratory methods /G. Middlebrook, M.L. Cohn // Amer. Journal of Public Health.- 1954.- Vol. 48.-P. 844-853.

248. Middlebrook, G. Isoniazid resistance and catalase activity of tybercula bacilli / G. Middlebrook // Am. Rev. Tuberc. 1954.- Vol. 69.- P. 471-472.

249. Morris, Y.A. The Identification of antigenic determinants of M. bovis Using Monoclonal Antibodies. / Y.A. Morris, C.Y. Thom // Y. General Microbiol. 1985.-Vol. 131.-P. 1825-1831.

250. Poplunar, L. Stadium riedenich tuberculenov pro terenum diagnostica u novadcicno dabudca / L. Poplunar, S. Haladei, O.Vrtiak, K. Lactis// Veter. Glas. 1972.-Vol. 14.-№6.-P. 171-178.

251. Ratlenge C. The Mycobacteria. Meadowfield press, 1977. - 130 p.

252. Richalmi, P Ossigeno-Ozono terapia./ P.Richalmi, M. Franchini, L. Valdenassi //Pavia-Bergamo. -1995.- P. 155-159.

253. Rilling, S The basis clinical applicacion of ozone therapy / S. Rilling // Ozonchrichten. 1985. - №4. - P. 7-17.

254. Rilling, S The Use of Ozone in Medicine. / S. Rilling, R. Viebahn // New Jork. Haug. 1987. - 180 p.

255. Rilling, S. Ossigeno-Ozono terapia in Medicine / S. Rilling, R. Vieban // Ozone World Congress, 9-th, Proceedings. New York, 1989. - P. 134-145.

256. Runyon, E.H. Differencination der mikobacteries anonims (atipigues) et des bacillus tuberculeux des manimiferes / E.H. Runyon // Bull. Tuberc., 1959.- V. 29. P.72-82.

257. Runyon, E.H. Anonimous Mycobacteria in pulmonary disease / E.H. Runyon // Med. Clin. Amer., 1989. V. 43. - P. 273-277.

258. Santiesteban, R. Ozone therapy in the optic nerve dysfunction / R. Santiesteban // Proceedings of the XI Ozone World Congress. San-Fr., 1993. - P. 41-49.

259. Schonbein, C. Notice of CF Sch, the discaveres of ozone / C. Schon-bein // Ann. Report of the Board of Regents of the Smith sonial Inst. 1968. Wast. DC. US government priting office. 1969. P. 185-192.

260. Stopka, P Ozon. 1. Fyzikalni chemicke biologicke vlastnosti a ucincky, vyakyt v pnirode, detekce, manipulace. Progresdent.- 2003. №6. - P. 8-11

261. Sredovic, S. Vrednost intravenose tuberculinica cije govedi kao exper-tizne probe /S.Sredovic// Magar allatorvosok Lapia, 1957. V. 11. - № 3-4. -P. 465-469.

262. Sweet, F Ozone selectivity inhibits growth of cancer ctlls / F. Sweet et al. // Science. 1980. - Vol. 209, N. 4459. -P.931-933.

263. The effect of ozonation. Water Sci Technol. 2002

264. Tsukamura, -M— Differentiation- of Mycobacterium tuberculosiefrom ofher Mycobacteria by sodium salicylate succeptibility /М. Tsukamura// Americ. Rev. Resp. Dis.- 1966,- V. 86.-P. 81-83.

265. Tsukamura, M. Factors influencing the incidence of lung disease due to Mycobacteria othen than tubercle bacilli / M. Tsukamura // Kekkaku. 1977. - Vol. 52. - № 8. - P. 367-372.

266. Tsukamura, M. Infections due to Mycobacterium simiae, Mycobacterium asiaticum and Mycobacterium shimoidei / M. Tsukamura // Kekkaku. -1988. Vol. 63. - № 4. - P. 255-260.

267. Vieban, R. The use of ozone in medicine / R. Vieban // KarlF. Haug Publishtrs, Heidelbetg. - 1944. - P. 178.

268. Wayne, L.G. Differentiation of Mycobacterium by their effect on Tween-80 /L.G. Wayne // Amer Rev. resp. Dis. 1964,- V. 86.- P. 579-581.

269. Wolff, H. Das Ozon und seine Eigenschaftein. Arzti. Praxis XII, 1961. P. 909-914.

270. Wolf, H. Das medizinische Ozon / H. Wolf-Heiderlberg, 1979.- 130 p.

271. Wolf, H. Das medizinische Ozon / H. Wolf // 2 Auflage. Heiderlberg, 1982.-250 p.

272. Zang, Y. Molecular mechanisms of isoniazid drug at the from line of the tuberculosis control / Y. Zang, B. Young // Trends Microbiol.-1993. №1,-P. 109-113.

273. Zee, H. Ozone auto-haemotherapy in lower limb ulcerations / H. Zee, A. De Monte // Proceedings of the XV Ozone World Congress. London, 2001. -P. 148.