Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Поствакцинальная диагностика бруцеллеза мелкого рогатого скота при различных схемах специфической профилактики

На правах рукописи

□ □345 1731

ДИМОВ Константин Сергеевич

ПОСТВАКЦИНАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СХЕМАХ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Новосибирск - 2008

003451731

Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Аракелян Петрос Карапетович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Салмаков Константин Михайлович,

доктор ветеринарных наук, профессор Храмцов Виктор Викторович

Ведущая организация: ФГУ Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ВГНКИ)

Защита состоится 2008 г. в « /Г » часов на заседа-

нии диссертационного совета Д.006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «¿^ » ^ j 2008 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

Стеблева Г.М.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В системе противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в нашей стране специфическая профилактика всегда играла решающую роль (П.Ф. Здродовский, 1953; В.А. Николаев, 1954; М.К. Юсковец, 1960; Е.С. Орлов, 1967; П.С. Уласевич с соавт., 1975; О.Ю. Юсупов, 1983; И.А. Косилов с соавт., 2001). Эффективность вакцин обеспечивал создаваемый и поддерживаемый у животных перманентный иммунитет в сочетании с планомерной поотарной заменой неблагополучного маточного поголовья иммунизированными здоровыми ярками. О неблагополучии хозяйств судили по косвенным эпидемиологическим и эпизоотологическим показателям - случаи заболевания людей бруцеллезом в острой форме, заражение производителей и аборты бруцеллезной этиологии (И.А. Косилов с соавт., 1999).

В девяностые годы массовый процесс распада крупных общественных и организация многочисленных территориально разобщенных мелких частных хозяйств (с совместным содержанием всех половозрастных групп животных) привел к экономическим и техническим сложностям эффективного осуществления официально регламентированных противобруцеллезных мероприятий, в частности, планомерной поотарной замены овец и коз. Ежегодные иммунизации животных против бруцеллеза живыми агглютиногенными вакцинами (в частности, вакциной из штамма 19) традиционным подкожным методом, обеспечивавшие противоэпизоотический и противоэпидемический эффекты, из-за длительно сохраняющихся поствакцинальных реакций, неподдающихся дифференциации, стали практически невозможными (П.К. Аракелян, 1997). В результате, резко возросла заболеваемость людей бруцеллезом в острой форме, главным образом за счет непосредственных контактов с овцами и козами неблагополучных по бруцеллезу отар (В.М. Авилов с соавт., 1999).

Применительно к современным условиям был предложен конъюнктиваль-ный метод иммунизации мелкого рогатого скота живыми агглютиногенными вакцинами в уменьшенной дозе, обеспечивающий поствакцинальную диагностику бруцеллеза в более ранние сроки с помощью РА и РСК (П.К. Аракелян с соавт.; 2001; JI.B. Жарова, 2002; A.C. Димова, 2003). Но определение оптимальных сроков поствакцинальных исследований животных, привитых по новым схемам, осталось необходимым.

В последнее время возобновился интерес ученых и практиков к РНГА. Особого внимания заслуживает эритроцитарный диагностикум, разработанный в Прикаспийском НИВИ(С.Г. Хаиров, 2001). При бруцеллезе мелкого рогатого скота в связи с новыми схемами иммунизации его эффективность не изучали.

В дифференциально-диагностическом и противоэпизоотическом отноше-нии 1 у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма В.abortus 82, эффективной оказалась РИД с О-полисахаридным (О-ПС) бруцеллезным антигеном (В.М. Чекишев с соавт., 1993; С.К. Димов, 1993; Г.М. Стеблева, 1998).

H.A. Морозова (2002) в экспериментальных условиях установила, что РИД с О-ПС антигеном не может быть использована для объективной дифференциальной диагностики бруцеллеза у многократно подкожно иммунизированных овец вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к. (реакция сохраняется в течение 12 месяцев у 2,0-5,9% здоровых привитых животных). Было выяснено, что изменение дозы вакцины и метода ее введения влияет на сроки сохранения у животных поствакцинальных РИД в плане их быстрейшего угасания. Однако, убедительных доказательств дифференциально-диагностического и противоэпизо-отического значения этого метода нет.

Известно, что официальный О-полисахаридный антиген для постановки РИД у животных разных видов готовят только из В. abortus (В.М. Чекишев с со-авт., 1993). Поэтому сравнительное изучение диагностической ценности при бруцеллезе у мелкого рогатого скота РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из В.abortus и B.melitensis, представляет научный и практический интерес с позиций возможной видоспецифичности.

Цель исследований - совершенствование поствакцинальной диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота при различных схемах специфической профилактики.

Задачи исследований:

- провести сравнительную оценку возможности использования РА, РСК, РИГА и РИД с официальным О-ПС антигеном в диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 19 по различным схемам;

- определить противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном в поствакцинальной диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота;

- изучить в экспериментальных и производственных условиях дифференциально-диагностическую эффективность РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из штаммов В.abortus и B.melitensis, при бруцеллезе у мелкого рогатого скота, в том числе после иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19 по различным схемам.

Научная новизна. Установлена возможность использования у мелкого рогатого скота при бруцеллезе диагностического комплекса (РА, РСК и РИГА с определенными титрами; РИД с официальным О-ПС антигеном) в ранние сроки (4 мес.) после подкожной и конъюнктивальной иммунизаций, а также проведенных на этом фоне неоднократных конъюнктивальных реиммунизаций вакциной из штамма 19.

В ранние сроки даже после однократной подкожной реиммунизации овец на фоне подкожной иммунизации оказалось возможным применение лишь РИД, и то с определенными издержками (выявление более 2% здоровых животных с реакциями вакцинного происхождения).

Подтверждена противоэпизоотическая и противоэпидемическая эффектив-

ность использования в поствакцинальной диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота РИД с официальным О-ПС антигеном.

В экспериментальных и производственных условиях при бруцеллезе мелкого рогатого скота доказаны диагностические преимущества РИД с О-ПС антигеном, изготовленным из B.melitensis (М- антигеном), по сравнению с официально выпускаемым О-ПС антигеном, изготовленным из В. abortus (А-антигеном).

Получены результаты, свидетельствующие об определенной видоспеци-фичности О-ПС антигенов, изготовленных из B.abortus и B.melitensis (А- и М-антигенов), обеспечивающей возможность их использования при эпизоотической оценке по бруцеллезу отар овец и коз, иммунизированных вакциной из штамма B.abortus 19, в любые сроки после вакцинации.

Получен патент РФ на изобретение № 2303458 «Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота» от 27 июля 2007 г.

Практическая и теоретическая значимость. Широкое внедрение результатов исследований позволит в значительной степени повысить эффективность контроля эпизоотического процесса бруцеллеза мелкого рогатого скота за счет новых схем иммунизации на основе конъюнктивального метода, а также ранней комплексной поствакцинальной диагностики (включая РИД, в том числе с О-ПС антигеном из B.melitensis) в целях выявления эпизоотически и эпидемически опасных животных.

Результаты сравнительного изучения О-ПС А- и М- антигенов являются основой для дальнейшего совершенствования схем дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза животных.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 6-й международной научно-практической конференции «Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана сельскому хозяйству» (Новосибирск, 2003), международной научно-практической конференции «Современные проблемы эпизоотологии» (Новосибирск, 2004), Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), 9-й международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного комплекса азиатских территорий» (Алматы, 2006), 3-й международной конференции «Состояние и перспективы развития производства ветеринарных биопрепаратов (Алматы, 2006), 6-й межрегиональной научно-практической конференции «Проблемы патологии человека и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе две статьи - в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Ветеринария»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах и включает разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список

литературы, приложение. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 7 рисунками. Список литературы содержит 193 источника, в том числе 32 работы иностранных авторов.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований использованы для разработки методических рекомендаций «Концепция оптимальной системы контроля эпизоотического процесса бруцеллеза мелкого рогатого скота в новых условиях овцеводства» (протокол № 3 от 14 сентября 2006 г.) и «Система противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в условиях Республики Тыва» (протокол № 2 от 30 июня 2008 г.), утвержденных подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхо-закадемии.

Основные положения, выносимые на защиту:

- сравнительная оценка возможности использования РА, РСК, РНГА и РИД с официальным О-ПС антигеном в диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота после иммунизации вакциной из штамма 19 по различным схемам;

- противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном в поствакцинальной диагностике бруцеллеза мелкого рогатого скота;

- экспериментальные и производственные данные о дифференциально-диагностической эффективности РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из штаммов В.abortus и B.melitensis, при бруцеллезе у мелкого рогатого скота, в том числе иммунизированного вакциной из штамма В.abortus 19 по различным схемам.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИСЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2002-2008 годах в ГНУ ИЭВСиДВ и ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии, в хозяйствах и госветучреждениях Республики Тыва и других регионов Сибири.

Часть исследований проведена совместно с сотрудниками ИЭВСиДВ и ВНИИБТЖ при практическом содействии ветспециалистов регионов.

Возможность использования в диагностике бруцеллеза мелкого рогатого скота, иммунизированного живой вакциной из агглютиногенного штамма В.abortus 19 по различным схемам, РА, РСК, РНГА, РИД с О-ПС антигеном (изготовленным из В.abortus) изучали как на здоровом, так и на естественно инфицированном поголовье(1008 гол.), подвергавшемся иммунизации (подкожно -доза 40 млрд. м.к., конъюнктивально - доза 4 млрд. м.к.).

От животных брали кровь до вакцинации и в различные сроки после нее. Серологические исследования сывороток крови в выше указанных реакциях

б

проводили согласно официально утвержденным наставлениям.

Противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном в поствакцинальной диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота определяли по результатам анализа эпизоотической и эпидемической ситуации бруцеллеза в Республике Тыва во взаимосвязи с проводимыми противобруцеллезными мероприятиями, регламентированными соответствующими нормативными и директивными документами (диагностические исследования, вакцинации и др.). Основой для таких исследований явились статистические, отчетные и аналитические данные Департамента ветеринарии, Министерств здравоохранения и сельского хозяйства Республики Тыва, других республиканских и кожуунных (районных) ветеринарных и медицинских учреждений, а также материалы комплексных эпизоотолого-эпидемиологических обследований отдельных кожуунов Республики Тыва с поголовьем более 100 тыс. гол. мелкого рогатого скота.

Диагностическую эффективность при бруцеллезе РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из штаммов В.abortus и B.melitensis, на первом этапе изучали при комплексном исследовании сывороток крови 49 гол. искусственно инфицированного вирулентными бруцеллами вида melitensis мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В.abortus 19 по различным схемам.

Сравнительную диагностическую эффективность указанных двух О-ПС антигенов в дальнейшем изучали по результатам комплексных серологических исследований сывороток крови овец (4170 проб), а также крупного рогатого скота (368 проб), в том числе иммунизированных против бруцеллеза по различным схемам, из неблагополучных и благополучных по бруцеллезу хозяйств.

Подробнее методы и методики решения отдельных конкретных задач изложены в соответствующих разделах диссертации.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Сравнительная оценка возможности использования РА, РСК, РИГА и РИД с официальным О-ПС антигеном в диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота после иммунизации вакциной из штамма 19 по различным схемам

Анализ результатов исследований на бруцеллез 100 гол. мелкого рогатого скота, привитого подкожно (40 млрд. м.к.) и 203 гол. - конъюнктивально (4 млрд. м.к.), показал, что через 4 месяца после прививки среди животных, привитых подкожно, всего реагировало в различных серологических реакциях 74%, в том числе в РА 100 ME и выше 3%, РСК 1:10 и выше - 23%, РИГА 1:100 и выше - 16%, РИД - 4%; среди животных, привитых конъюнктивально - соответственно 30,4%, 0,0% , 0,0% , 1,9% и 0,0%. Таким образом, в этот срок после

иммунизации можно исследовать комплексом методов (РА, РСК, РНГА и РИД) только сыворотки крови животных, привитых конъюнктивапьно.

Из 278 исследованных проб сывороток крови овец через один год после первичной подкожной иммунизации вакциной из штамма 19 РИД с официальным О-ПС антигеном (изготовленным из В. abortus) была отрицатель-ной во всех пробах. Выявлено 106 проб (38,1%), реагирующих с различной степенью интенсивности в РА, РСК и РНГА. Из общего числа исследованных в РА выявлено всего 69 проб (24,8%) в татре не выше 50 ME; в PCK-S -22 (7,9%), в том числе в титре 1:10 и выше - 7 (2,5%); в PCK-R -5 (1,8%), в т.ч. в титре 1:10 и выше 1 (0,36%); в РНГА - 73 (26,3%), в том числе в титре 1:100 и выше - 6 (2,2%). Следует отметить, что из шести проб, реагировавших в РНГА в титре 1:100, РА не выше титра 50 ME отмечали в двух, РСК- S в титре 1:5 — в одной, в титре 1:10 и выше - трех. Таким образом, очевидна возможность проведения исследований овец на бруцеллез с использованием всего комплекса реакций через 1 год после первичной подкожной иммунизации.

Далее изучили характер реакций у мелкого рогатого скота через 4 месяца после подкожной и конъюнктивальной реиммунизации на фоне первичной подкожной иммунизации.

Из 81 исследованной пробы сывороток крови животных через 4 месяца после подкожной реиммунизации РИД с О-ПС антигеном (изготовленным из В.abortus) была положительной в двух пробах (2,5%). Выявлено 69 проб (85,2%), реагирующих с различной степенью интенсивности в РА, РСК и РНГА. В РА выявлена всего 61 проба (75,3%), в т.ч. в титре не выше 50 ME - 57, в титре 100 ME - 4 (4,9%); в РСК- S -55 (67,9 %), в том числе в титре 1:10 и выше -22 (27,2%); в РСК- R - 8 (9,8), в т.ч. в титре 1:10 и выше - 1 (1,2%); в РНГА - 53 (65,4%), в том числе в титре 1:100 и выше - 31 (38,3%). Следует отметить, что из 31 пробы, реагировавшей в РНГА в титре 1:100 и выше, РА в титре 100 ME и выше и/или РСК в титре 1:10 и выше отмечены в 19 (61,3%) пробах.

Из 125 исследованных проб сывороток крови животных через 4 месяца после конъюнктивальной реиммунизации РИД с О-ПС антигеном (изготовленным из В.abortus) была отрицательной во всех пробах. Выявлено 75 проб (60%), реагирующих с различной степенью интенсивности в РА, РСК и РНГА. В РА выявлено всего 25 проб (20%), в т.ч. все в титре не выше 50 ME; в PCK-S - 32 (25,6%), в том числе в титре 1:10 и выше - 1 (0,8%); в PCK-R - 8 (6,4%), в т.ч. в титре 1:10 и выше 1 (0,8%); в РНГА - 49 (39,2%), в том числе в титре 1:100 и выше - 3 (2,4%). Следует отметить, что из 3 проб, реагировавших в РНГА в титре 1:100 и выше, во всех отмечали РА и/или РСК в титрах не выше 50 ME и 1:5 соответственно.

Таким образом, очевидна возможность проведения с незначительными издержками поствакцинальных исследований с использованием комплекса реакций через 4 месяца после конъюнктивальной реиммунизации на фоне первичной подкожной иммунизации. Использовать указанный диагностический ком-

плекс у мелкого рогатого скота в этот же срок после подкожной реиммунизации на фоне первичной подкожной иммунизации, как показывают полученные результаты исследований, не представляется возможным. РИД с О-ПС антигеном имеет при этом минимальные издержки, выявляя 2,5% животных с поствакцинальными реакциями.

Поствакцинальные реакции у здоровых овец, привитых первично вакциной из штамма 19 конъюнктивально в уменьшенной дозе, а затем реиммунизиро-ванных на указанном фоне этим же методом, изучали в двух благополучных по бруцеллезу хозяйствах на поголовье 200 гол.

До иммунизации и через 1 год после первичной иммунизации у животных РА, РСК, РНГА и РИД с О-ПС антигеном были отрицательными.

После трехкратной конъюнктивальной реиммунизации у животных через 2,5 месяца РИД и РА отсутствовали, а РСК в титре не выше 1:5 и/или РНГА в титре не выше 1:50 были у 3% исследованных животных.

Таким образом, доказана возможность использования комплекса диагностических реакций для серологических исследований на бруцеллез овец через 3 месяца после многократных иммунизаций вакциной из штамма 19 конъюнкти-вальным методом.

2.2.2. Противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном в поствакцинальной диагностике бруцеллеза мелкого рогатого скота

Противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном (изготовленным из В.abortus) в поствакцинальной диагностике бруцеллеза мелкого рогатого скота особенно демонстративно проявилось в Барун-Хемчикском кожууне Республики Тыва.

В 1998 году из-за резко обострившейся эпидемической ситуации (заболеваемость людей бруцеллезом на 100 тыс. населения в 1998 году составила 124,1 - при среднем показателе за 1992-97 годы 28,9) уровень вакцинации овец и коз, и, прежде всего, в частном секторе, возрос до 90,2% (при среднем уровне вакцинации в 1992-97 годах 38,1%). Уровень реагирования исследованного вакцинированного поголовья в РИД в 1998 году составил 5,8%. Затем он стал неуклонно снижаться - до 0,9% в 2001 году. Однако уже в 2002 году он вновь значительно возрос - до 3,6% (зарегистрировано 15 новых острых эпизоотических очагов; в них отмечена и основная заболеваемость бруцеллезом людей). Животных неблагополучных отар в этих очагах в течение последних лет вакцинации против бруцеллеза в большинстве случаев не подвергали. Уровень иммунизации поголовья овец и коз в целом по кожууну снизился с 90,2% в 1998 году до 57,7% в 2002 году.

В 2002 году в связи с чрезвычайной эпидемической ситуацией все поголо-

вье эпизоотических очагов было подвергнуто иммунизации вакциной из штамма 19 с полным охватом. Диагностические исследования и реиммунизации неблагополучного поголовья активно действующих эпизоотических очагов провели и в 2003-2004 годах. В этот период из 15 активно действующих эпизоотических очагов 10 были купированы.

При этом важно отметить, что в указанные годы в кожууне с нашим участием иммунизация (реиммунизация) всего неблагополучного поголовья мелкого рогатого скота вакциной из штамма 19 была проведена конъюнктивальным методом в дозе 4 млрд. м.к., что практически сняло проблему выявления РИД поствакцинального характера. Этим же методом иммунизацию мелкого рогатого скота против бруцеллеза в кожууне осуществляли и в 2005-2006 годах.

Уровень иммунизации животных указанным методом составил в 20032006 годах 54,2; 57,4; 44,4 и 45% соответственно.

Уровень же реагирования в РИД по результатам серологических исследований иммунизированных животных составил в 2003 году 0,9% от числа исследованных (в 2002 году - 3,6%), а в 2004-2006 годах - соответственно 1,6%; 6,4%; 2,9%. Следует отметить, что в указанные годы исследованиям подвергали практически лишь поголовье острых эпизоотических очагов (из-за отсутствия технических и финансовых возможностей).

Случаев заболевания людей острой формой бруцеллеза было выявлено в 2002 году - 32, в 2003 - 19, в 2004 - 15, в 2005 - 7, в 2006 году - 9.

Итак, очевидны противоэпизоотический и противоэпидемический эффекты, связанные с проведением на фоне иммунизаций поголовья овец и коз вакциной из штамма 19 как подкожно в дозе 40 млрд. м.к., так и, начиная с 2003 года, конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к., его диагностических исследований до очередной иммунизации, или после нее (используя провоцирующие свойства вакцины) с помощью РИД и убоя реагирующих. Возможные издержки, связанные с поствакцинальным происхождением реакций у животных, привитых подкожным методом, при ранней поствакцинальной диагностике с помощью РИД (уже через 3 месяца после прививки), не столь уж значительны и несопоставимы с положительным эффектом от купирования эпизоотических очагов, как источников заражения и заболевания людей.

2.2.3. Дифференциально-диагностическая эффективность РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из штаммов B.abortus и B.melitensis, при бруцеллезе у мелкого рогатого скота, в том числе иммунизированного вакциной из штамма B.abortus 19 по различным схемам

В.М. Чекишевым, автором официального О-ПС бруцеллезного антигена, получаемого из B.abortus, был изготовлен по идентичной технологии антиген из

вакцинного штамма B.melitensis Рев-1. Официальный антиген условно обозначили как А - антиген {abortus), опытный - М - антиген (melitensis).

Диагностическую активность А- и М-антигенов в РИД предварительно проверили при исследовании сывороток крови 49 гол. искусственно инфицированного вирулентными бруцеллами вида melitensis мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма 19 по различным схемам (таблица 1).

Таблица 1 - Результаты сравнительного изучения активности О-ПС А- и М- бруцеллезных антигенов в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, в экспериментальных условиях

Схема иммунизации Исследовано ЖИВОТНЫХ Реагировало в РИД

до заражения (х) после заражения (хх)

всего в т.ч. с антигенами всего в т.ч. с антигенами

А+М А М А+М А М

подкожно + конъюнктивалыга 40+4 млрд. м.к. 9 1 - 1 - 7 2 - 5

подкожно + подкожно 40+40 млрд. м. к. 9 6 - 6 - 5 3 1 1

кшыонгаивалшо+ютонкшвально 4+4 млрд. м.к. 9 - - - - 7 2 - 5

подкожно 40 млрд. м.к. 9 - - - - 3 2 - 1

конъюнктивапьно 4 млрд. м.к. 8 - - - - 6 5 - 1

итого (подопытные животные, аЬог1иБ+ теШегки:) 44 7 - 7 - 28 14 1 13

Контроль (теШепБ^) 5 - - - - 3 2 - 1

Примечание: А-антиген - изготовлен из штамма В.abortus 19

М-антиген - изготовлен из штамма B.melitensis Rev-1 х- на 50-й день после ревакцинации шт. В.abortus 19 хх- на 30-й день после заражения шт. B.melitensis

Интактные животные шестой группы (5 овцематок) служили контролем. Их одновременно с подопытными (первой, второй и третьей групп - через 50 дней после ревакцинации, а четвертой и пятой групп - по истечению 13 месяцев после первичной вакцинации) заражали культурой вирулентного штамма B.melitensis Н-102 в десятикратной инфицирующей дозе (1 млн. м.к.).

Через 50 дней после конъюнктивальной реиммунизации животных вакциной из штамма в малой дозе положительные показания с А-антигеном были у меньшего в 6 раз количества животных, чем в этот же срок после подкожной в полной дозе.

РИД была отрицательной во всех случаях через 50 дней после двукратной конъюнктивальной иммунизации в малой дозе, а также через 13 месяцев после первичной как подкожной, так и конъюнктивальной иммунизации.

Через 30 дней после заражения животных бруцеллами вида melitensis положительные показания РИД зарегистрировали во всех группах, включая контрольную. Однако закономерности реагирования были иными, чем до заражения. Преимущество было явно за М-антигеном. Так, в подопытных группах всего реагировало положительно с обоими антигенами 28 проб, из них только с М-антигеном - 13, а только с А-антигеном лишь одна проба (вторая группа - схема «подкожно+подкожно»). Остальные 14 проб реагировали с обоими антигенами. В контрольной группе положительная РИД была отмечена только у 3 животных (60%), причем только с М-антигеном - у одного. У двух животных положительную РИД зарегистрировали как с М-, так и с А-антигеном.

Из 18-и животных, зараженных В.melitensis как на интактном фоне, так и на фоне иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19, с подтвержденным бру-целлоносительством (таблица 2) в РИД реагировало 13 (72,2%). Из них только с А-антигеном реагировало одно животное (7,6%) , только с М-антигеном - 4 (30,8%), а с обоими антигенами - 8 (61,6%).

Таблица 2 - Результаты сравнительного изучения активности О-ПС А- и М-бруцеллезных антигенов в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, с подтвержденным бруцеллоносительством после искусственного заражения В. melitensis

Реагировало положительно в РИД

общее число в т.ч. с антигенами

Характеристика CQ X X X реагирующих А+М А М

<D CQ н %к % к об- % к об- % к об-

групп tr; О bti ч i> ш о и числу о m щему о m щему о ш щему

О О S * £ о исследованных Ч о м числу реагирующих с: о и числу реагирующих с; о числу реагирующих

вакцинированные и ревак-цинированные 13 10 76,9 6 60,0 1 10,0 3 30,0

неиммунизированные 5 3 60,0 2 66,6 - - 1 33,4

ИТОГО 18 13 72,2 8 61,5 1 7,7 4 30,8

Экспериментально установленная роль определенной видоспецифичности бруцеллезных А- и М-антигенов была подтверждена и в производственных условиях как на здоровых животных, иммунизированных вакцинами из штаммов В.abortus и В.melitensis (таблица 3), так и на овцах и крупном рогатом скоте из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с естественным течением инфекции (таблица 4). Кроме того, доказано явное преимущество по чувствительности у

овец М-антигена. Причем, из 3 убитых овец, реагировавших только на М-антиген, в двух случаях выделен возбудитель бруцеллеза B.melitensis. Реагирование крупного рогатого скота только на М-антиген можно объяснить реально возможными контактами данного стада с неблагополучными по бруцеллезу (возбудитель - B.melitensis) отарами овец.

Таблица 3 - Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных А- и М-антигенов в РИД при исследовании сывороток крови здоровых овец, иммунизированных вакцинами из штаммов В.abortus и B.melitensis, в благополучных по бруцеллезу хозяйствах

Реагировало положительно в РИД

S общее число в т.ч. с антигенами

Схема иммунизации (вакцинный штамм) fix "ii реагирующих А+М А М

iSi ± о о ° 3 ы о о 5 кол-во % к числу исследованных кол-во % к числу реагирующих кол-во %к числу реагирующих кол-во %к числу реагирующих

Рев-1+Рев-1 {B.melitensis) 200 12 6,0 3 25,0 1 8,3 8 66,6

19+19 (В. abortus) 98 6 6,1 5 83,3 1 16,6 - -

Таблица 4 - Результаты исследования сывороток крови от животных с естественным течением бруцеллеза в РИД с разными антигенами

X Реагировало положительно

Количество исследованнь х о общее в том числе с антигенами

Вид животных о о. о m и число реагирующих А+М %к числу реагирующих А %к числу реагирующих М %к числу реагирующих

овцы 21 18 4 22,2 - - 14 77,8

крупный рогатый скот 50 41 36 87,8 3 7,3 2 4,9

При исследовании 104 проб сывороток крови овец неблагополучной по бруцеллезу отары с естественным течением инфекции, вызванной Л.тие/йепш (без вакцинации) выявленные преимущества М-антигена были еще раз подтверждены: РИД о О-ПС антигенами была положительной в 28 пробах (26,9% от числа исследованных), в том числе с обоими антигенами (А и М) - в 20 про-

бах (19,2%) и только с М-антигеном - в 8 пробах (7,7%).

При комплексном серологическом исследовании 409 проб сывороток крови мелкого рогатого скота неблагополучной по бруцеллезу отары через 1 год после последней иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19 подкожно в дозе 40 млрд м.к. РИД с О-ПС антигенами была положительной в 23 пробах (5,6% от числа исследованных), в том числе с обоими антигенами (А- и М-) - в 15 пробах (3,7%) и только с антигеном М - в 8 пробах (1,9%).

Из 15 проб сыворотки крови'с положительной РИД с обоими антигенами РИГА с бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом в титре 1:200 и выше была в 11 пробах (73,3%). Из их числа РСК в титре 1:20 и выше была в 8 пробах (72,7%). В остальных трех пробах РСК была в титре не выше 1:10, РА - не выше 25 ME.

В 4 пробах с положительной РИД с обоими антигенами РИГА была в титре не выше титра 1:100 (РСК в двух пробах была в титре 1:5, в двух - 1:40; РА в трех пробах была отрицательной в одной - в титре 1:25)

Из 8 проб сывороток крови с положительной РИД только с М-антигеном РИГА с бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом в титре 1:200 и выше была в 6 пробах (75%). Из их числа РСК в титре 1:20 и выше была в 5 пробах (83,3%). В одной пробе РСК была в титре 1:10, РА - в титре 50 ME.

В двух пробах с положительной РИД только с М-антигеном РИГА была в титре 1:100 (РСК - в обеих пробах в титре 1:40, РА - в титре не выше 50 ME).

При комплексном серологическом исследовании 221 пробы сывороток крови мелкого рогатого скота неблагополучной по бруцеллезу отары через 1 год после последней иммунизации вакциной из штамма В. abortus 19 конъюнктиваль-но в дозе 4 млрд м.к. РИД была положительной в 14 пробах (6,3% от числа исследованных), в том числе только с М-антигеном во всех 14 пробах.

Из 14 проб сывороток крови с положительной РИД только с М-антигеном РИГА с бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом в титре 1:200 и выше была в 9 пробах (64,3%). Из их числа РСК в титре 1:20 и выше была во всех пробах, РА не превышала титр 50 ME.

В 5 пробах с положительной РИД только с М-антигеном РИГА была в титре 1:100 (РСК во всех пробах была в титре 1:20 и выше, РА - в титре не выше 50 ME).

Аналогичные результаты получены в ряде других отар.

Так, при исследовании 2302 проб сывороток крови мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма 19 по различным схемам, из 8 неблагополучных по бруцеллезу отар, в РИД всего с М- и А-антигенами реагировало 130 проб (5,6% от общего числа исследованных, в отдельных отарах от 3,9 до 22,5% от числа исследованных). От общего числа реагирующих на оба антигена реагировало 38, или 29,3% , только на М-антиген - 90 (69,2%), только на А-антиген - 2 (1,5%).

При исследовании же 480 проб сывороток крови иммунизированного вакциной из штамма 19 мелкого рогатого скота из трех благополучных по бруцел-

лезу отар, в РИД всего с М- и А-антигенами реагировало 3 пробы (0,6% от общего числа исследованных, в отдельных отарах от 0 до 2,1% от числа исследованных). От общего числа реагирующих на оба антигена реагировали все три пробы, соответственно только на М-антиген и только на А-антиген реагирующих не выявлено.

Из полученных результатов очевидны перспективы повышения уровня эффективности поствакцинальной диагностики бруцеллеза у мелкого рогатого скота за счет внедрения в широкую ветеринарную практику РИД с новым О-ПС антигеном, изготовленным по той же методике, что и официальный (из В.abortus), но из B.melitensis. Кроме того, очевидна дифференциально-диагностическая роль обоих антигенов при использовании их в схемах эпизоотической оценки по бруцеллезу стад вакцинированных животных.

3. ВЫВОДЫ

1. После первичной подкожной иммунизации мелкого рогатого скота вакциной из штамма В. abortus 19 диагностические исследования животных оказалось возможным проводить не ранее, чем через 4 месяца только с помощью РИД с официальным О-ПС антигеном (из В.abortus), а через год - с помощью всего изученного диагностического комплекса (включая РИД) с диагностическими титрами РА выше 100 ME, РИГА выше 1:100, PCK-S - выше 1:10.

2. После подкожной однократной реиммунизации животных вакциной из штамма B.abortus 19 на фоне первичной подкожной иммунизации этой же вакциной проводить диагностические исследования с помощью изученного диагностического комплекса оказалось невозможным. Наименьшими издержками обладала РИД с официальным О-ПС антигеном (более 2% здоровых животных с реакциями вакцинного происхождения).

3 Поствакцинальная диагностика после первичной конъюнктивальной иммунизации, а также конъюнктивальных реиммунизаций на фоне первичной конъюнктивальной, и даже подкожной иммунизации вакциной из штамма B.abortus 19 оказалась возможной с использованием всего диагностического комплекса через 3-4 месяца. На фоне первичной подкожной иммунизации установлена целесообразность учитывать в качестве диагностических титры РА выше 100 ME, РНГА - выше 1:100, PCK-S - выше 1:10, а на фоне первичной конъюнктивальной иммунизации - 100 ME и 1:100 и выше, 1:10 и выше соответственно.

4. Диагностические исследования мелкого рогатого скота на бруцеллез в неблагополучных по этой болезни отарах с помощью РИД с официальным О-ПС антигеном на фоне иммунизации животных вакциной из штамма 19, как подкожно в дозе 40 млрд. м.к., так и конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к., с убоем реагирующих, обеспечивают повышение уровня эффективности проти-

вобруцеллезных мероприятий. Так, в одной из неблагополучных территорий в течение четырех лет за счет этого удалось снизить число активно действующих эпизоотических очагов с 15 до 4 (в 3,7 раза), а число случаев заболевания людей бруцеллезом в острой форме - с 32 до 9 (в 3,5 раза).

5. У мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В.abortus 19 по разным схемам, с искусственным и естественным инфицированием бруцеллами вида melitensis, при использовании О-ПС М-антигена (из B.melitensis) , по сравнению с официальным О-ПС А-антигеном (из В.abortus), дополнительно выявляли в среднем в 2,25 раза больше инфицированных животных. Эпизоотическая опасность таких животных доказана наличием у них высоких титров РНГА и РСК (1:200 и выше и 1:20 и выше соответственно), а также результатами бактериологических исследований (положительная биопроба, выделение культур).

6. У искусственно и естественно инфицированных бруцеллами вида melitensis овец, иммунизированных вакциной из штамма В.abortus 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к. превалирует регистрация РИД с обоими О-ПС антигенами, а после иммунизации этой же вакциной конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. -только с О-ПС М-антигеном.

7. У здоровых овец положительную РИД только с О-ПС М-антигеном после иммунизации вакциной из штамма B.abortus 19 не наблюдали, а после иммунизации вакциной из штамма B.melitensis Рев-1 зарегистрировали в 66,6% случаев из общего числа реагировавших на оба антигена. Полученные результаты свидетельствуют об определенной видоспецифичности антигенов, изготовленных из B.abortus и B.melitensis.

4.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Использовать в системе противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в целях повышения уровня ее эффективности:

- конъюнктивальный метод иммунизации овец и коз вакциной из штамма 19, обеспечивающий специфическую защиту, а также выявление в ранние сроки после вакцинации инфицированных животных с помощью РА, РСК, РНГА и РИД;

- РИД с новым О-ПС антигеном, изготовленным из В.иге/г'Гелш'.у, позволяющим выявлять значительно большее количество инфицированных животных;

- РИД с О-ПС антигенами из В.аЪоПт и В.теШетгз для использования в схемах эпизоотической оценки по бруцеллезу вакцинированных животных.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Технологичность живой вакцины из штамма 19 на овцах для иммунизации и реиммунизации в уменьшенной дозе при конъюнктивальном методе введения / Соавт.: С.М. Достай, A.C. Димова, П.К. Аракелян и др. //Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана сельскому хозяйству: матер. 6-й междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2003. - С. 117-120.

2. Практическая реализация концепции оптимизации противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в Сибири / Соавт.: С.М. Достай, П.К. Аракелян, И.А. Косилов и др. // Современные проблемы эпизоотологии: матер, междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 20-23.

3. Современные проблемы эпизоотологического надзора при бруцеллезе в Сибири / Соавт.: A.C. Донченко, С.К. Димов, И.А. Косилов и др. // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: матер. Сиб. междунар. ветеринар, конгр.-Новосибирск, 2005.-С.112-113.

4. Практический опыт оптимизации системы противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в экстремальных эпизоотических, эпидемических и социально-экономических условиях / Соавт.: С.К. Димов, П.К. Аракелян, С.М. Достай и др. // Вестник с.-х. науки Казахстана. - 2006. - №6. - С.40-41.

5. Усовершенствование диагностики бруцеллеза у овец / Соавт. П.К. Аракелян, С.К. Димов, О.В. Бондарева // Современное состояние и перспективы развития производства ветеринарных биопрепаратов: матер. 3-й междунар. конф. - Алматы, 2006. - С. 124-127.

6. Эффективность конъюнктивального метода применения вакцины из штамма В.abortus 19 при бруцеллезе мелкого рогатого скота / Соавт.: П.К. Аракелян, И.А. Косилов, С.К. Димов и др. // Ветеринария. - 2006,- № 8. - С. 22-27.

7. РИД с О-ПС антигеном из B.melitensis для диагностики бруцеллеза у овец / Соавт.: П.К. Аракелян, И.А. Косилов, В.М. Чекишев и др. // Ветеринария. -2007.-№3. -С. 23-28.

8. Патент РФ 2303458 от 27.07. 2007 г. Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота / Соавт.: П.К. Аракелян, И.А. Косилов, Е.Б. Барабанова и др. // заявители и патентообладатели ГНУ ВНИИБТЖ и ГНУ ИЭВСиДВ по заявке № 2005122218/13 от 13.07.2005,-Бюл. № 21.

Подписано в печать 07.10.2008г. Формат 60x84/16 Объем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 194

Отпечатано в ООО ИПФ «Агрос» 630501, Новосибирская обл., пос Краснообск

Актуальность проблемы. В системе противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в нашей стране специфическая профилактика всегда играла решающую роль (П.Ф. Здродовский, 1953; В.А. Николаев, 1954; М.К. Юсковец, 1960; Е.С. Орлов, 1967; П.С. Уласевич с соавт., 1975; О.Ю. Юсупов, 1983; И.А. Косилов с соавт., 2001). Эффективность вакцин обеспечивал создаваемый и поддерживаемый у животных перманентный иммунитет в сочетании с планомерной поотарной заменой неблагополучного маточного поголовья иммунизированными здоровыми ярками. О неблагополучии хозяйств судили по косвенным эпидемиологическим и эпизоотологи-ческим показателям - случаи заболевания людей бруцеллезом в острой форме, заражение производителей и аборты бруцеллезной этиологии (И.А. Косилов с соавт., 1999). ;

В девяностые годы массовый процесс распада крупных общественных и организация многочисленных территориально разобщенных мелких частных хозяйств (с совместным содержанием всех половозрастных групп животных) привел к экономическим и техническим сложностям эффективного осуществления официально регламентированных противобруцеллезных мероприятий, в частности, планомерной поотарной замены овец и коз. Ежегодные иммунизации животных против бруцеллеза живыми агглютиногенными вакцинами (в частности, вакциной из штамма 19) традиционным подкожным методом, обеспечивавшие противоэпизоотический и противоэпидемический эффекты, из-за длительно сохраняющихся поствакцинальных реакций, неподдающихся дифференциации, стали практически невозможными (П.К. Араке-лян, 1997). В результате, резко возросла заболеваемость людей бруцеллезом в острой форме, главным образом за счет непосредственных контактов с овцами и козами неблагополучных по бруцеллезу отар (В.М. Авилов с соавт., 1999).

Применительно к современным условиям был предложен конъюнкти-вальный метод иммунизации мелкого рогатого скота живыми агглютиногенч. ными вакцинами в уменьшенной дозе, обеспечивающий поствакцинальную диагностику бруцеллеза в. более ранние сроки с помощью РА и РСК (П.К. Аракелян с соавт., 2001; JI.B. Жарова, 2002; A.C. Димова, 2003). Но определение оптимальных сроков поствакцинальных исследований, животных, привитых по новым схемам, осталось необходимым.

В последнее время возобновился интерес ученых и практиков к РНГА. Особого внимания заслуживает эритроцитарный диагностикум, разработанный в Прикаспийском НИВИ (С.Г. Хаиров, 2001). При бруцеллезе мелкого рогатого скота в связи с новыми схемами иммунизации его эффективность не изучали.

В- дифференциально-диагностическом и противоэпизоотическом отношении у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B.abortus 82, эффективной оказалась РИД с О-полисахаридным (О-ПС) бруцеллезным антигеном (В.М. Чекишев с соавт., 1993; С.К. Димов; 1993; Г.М. Стеблева, 1998).

H.A. Морозова (2002) в экспериментальных условиях установила, что РИД с О-ПС антигеном не может быть использована для объективной дифференциальной диагностики бруцеллеза у многократно подкожно иммунизированных овец вакциной из штаммаЛ9 в дозе 40*млрд. м.к. (реакция1 сохраняется в течение 12 месяцев, у 2,0-5,9% здоровых привитых животных). Было выяснено, что изменение дозы вакцины и метода ее введения влияет на сроки сохранения у животных поствакцинальных РИД в плане их быстрейшего угасания. Однако, убедительных доказательств- дифференциально-диагностического и противоэпизоотического значения этого метода нет.

Известно* что официальный О-полисахаридный антиген для постановки. РИД у животных разных видов готовят только < из B.abortus (В.М. Чекишев,с соавт., 1993). Поэтому сравнительное изучение диагностической ценности при бруцеллезе у мелкого рогатого скота РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из B.abortus и B.melitensis, представляет научный и практический интерес с позиций возможной видоспецифичности.

Цель исследований — совершенствование поствакцинальной диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота при различных схемах специфической профилактики.

Задачи исследований:

- провести сравнительную оценку возможности использования РА, РСК, РНГА и РИД с официальным О-ПС антигеном в диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 19 по различным схемам;

- определить противоэпизоотическое и противоэпидемическое значение РИД с официальным О-ПС антигеном в поствакцинальной диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота;

- изучить в экспериментальных и производственных условиях дифференциально-диагностическую эффективность РИД с О-ПС антигенами, изготовленными по аналогичной методике из штаммов В.abortus и B.melitensis, при бруцеллезе у мелкого рогатого скота, в том числе после иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19 по различным схемам. < :"

Научная новизна. Установлена возможность использования у мелкого рогатого скота при бруцеллезе диагностического комплекса (РА, РСК и РНГА с определенными титрами; РИД с официальным О-ПС антигеном) в ранние сроки (4 мес.) после подкожной и конъюнктивальной иммунизаций, а также проведенных на этом фоне неоднократных конъюнктивальных реим-мунизаций вакциной из штамма 19.

В ранние сроки даже после однократной подкожной реиммунизации овец на фоне подкожной иммунизации оказалось возможным применение лишь РИД, и то с определенными издержками (выявление более 2% здоровых животных с реакциями вакцинного происхождения). .

Подтверждена противоэпизоотическая и противоэпидемическая эффективность использования в поствакцинальной диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота РИД с официальным О-ПС антигеном.

В экспериментальных и производственных условиях при бруцеллезе мелкого рогатого скота доказаны диагностические преимущества РИД с О-ПС антигеном, изготовленным из B.melitensis (М-антигеном), по сравнению с официально выпускаемым О-ПС антигеном, изготовленным из В.abortus (А-антигеном).

Получены результаты, свидетельствующие об определенной видоспеци-фичности О-ПС антигенов, изготовленных из В.abortus и B.melitensis (А- и М-антигенов), обеспечивающей возможность их использования при эпизоотической оценке по бруцеллезу отар овец и коз, иммунизированных вакциной из штамма B.abortus 19, в любые сроки после вакцинации.

Получен патент РФ на изобретение № 2303458 «Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота» от 27 июля 2007 г.

Практическая и теоретическая значимость. Широкое внедрение результатов исследований позволит в значительной степени повысить эффективность контроля эпизоотического процесса бруцеллеза мелкого рогатого скота за счет новых схем иммунизации на основе конъюнктивального метода, а также ранней комплексной поствакцинальной диагностики (включая РИД, в том числе с О-ПС антигеном из B.melitensis) в целях выявления эпизоотически и эпидемически опасных животных.

Результаты сравнительного изучения О-ПС А- и М-антигенов являются основой для дальнейшего совершенствования схем дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза животных.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 6-й международной научно-практической конференции «Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана сельскому хозяйству» '(Новосибирск, 2003), международной научно-практической конференции «Современные проблемы эпизоотологии» (Новосибирск, 2004), Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), 9-й международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного комплекса азиатских территорий» (Алматы, 2006), 3-й международной конференции «Состояние и перспективы развития производства ветеринарных биопрепаратов (Алматы, 2006), 6-й межрегиональной научно-практической конференции «Проблемы патологии человека и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе две статьи в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Ветеринария»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах и включает разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 7 рисунками. Список литературы содержит 193 источника, в том числе 32 работы иностранных авторов.

5.ВЫВОДЫ

1. После первичной подкожной иммунизации мелкого рогатого скота вакциной из штамма В. abortus 19 диагностические исследования животных оказалось возможным проводить не ранее, чем через 4 месяца только с помощью РИД с официальным О-ПС антигеном (из В.abortus), а через год - с помощью всего изученного диагностического комплекса (включая РИД) с диагностическими титрами РА выше 100 ME, РИГА выше 1:100, PCK-S -выше 1:10.

2. После подкожной однократной реиммунизации животных вакциной из штамма В.abortus 19 на фоне первичной подкожной иммунизации этой же вакциной проводить диагностические исследования с помощью изученного диагностического комплекса оказалось невозможным. Наименьшими издержками обладала РИД с официальным О-ПС антигеном (более 2% здоровых животных с реакциями вакцинного происхождения).

3 Поствакцинальная диагностика после первичной конъюнктивальной иммунизации, а также конъюнктивальных реиммунизаций на фоне первичной конъюнктивальной, и даже подкожной иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19 оказалась возможной с использованием всего диагностического комплекса через 3-4 месяца. На фоне первичной подкожной иммунизации установлена целесообразность учитывать в качестве диагностических титры РА выше 100 ME, РИГА - выше 1:100, PCK-S - выше 1:10, а на фоне первичной конъюнктивальной иммунизации -100 ME и 1:100 и выше, 1:10 и выше соответственно.

4. Диагностические исследования мелкого рогатого скота на бруцеллез в неблагополучных по этой болезни отарах с помощью РИД с официальным О-ПС антигеном на фоне иммунизации животных вакциной из штамма 19, как подкожно в дозе 40 млрд. м.к., так и конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к., с убоем реагирующих, обеспечивают повышение уровня эффективности про-тивобруцеллезных мероприятий. Так, в одной из неблагополучных территорий в течение четырех лет за счет этого удалось снизить число активно действующих эпизоотических очагов с 15 до 4 (в 3,7 раза), а число случаев заболевания людей бруцеллезом в острой форме - с32до9(вЗ,5 раза).

5. У мелкого рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В.abortus 19 по разным схемам, с искусственным и естественным инфицированием бруцеллами вида melitensis, при использовании О-ПС М-антигена (из B.melitensis), по сравнению с официальным О-ПС А-антигеном (из В.abortus), дополнительно выявляли в среднем в 2,25 раза больше инфицированных животных. Эпизоотическая опасность таких животных доказана наличием у них высоких титров РИГА и РСК (1:200 и выше и 1:20 и выше соответственно), а также результатами бактериологических исследований (положительная биопроба, выделение культур).

6. У искусственно и естественно инфицированных бруцеллами вида melitensis овец, иммунизированных вакциной из штамма В. abortus 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к. превалирует регистрация РИД с обоими О-ПС антигенами, а после иммунизации этой же вакциной конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. - только с О-ПС М- антигеном.

7. У здоровых овец положительную РИД только с О-ПС М-антигеном после иммунизации вакциной из штамма В.abortus 19 не наблюдали, а после иммунизации вакциной из штамма B.melitensis Рев-1 зарегистрировали в 66,6% случаев из общего числа реагировавших на оба антигена. Полученные результаты свидетельствуют об определенной видоспецифичности антигенов, изготовленных из В.abortus и B.melitensis.

6.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Использовать в системе противобруцеллезных мероприятий у мелкого рогатого скота в целях повышения уровня ее эффективности:

- конъюнктивальный метод иммунизации овец и коз вакциной из штамма 19, обеспечивающий специфическую защиту, а также выявление в ранние сроки после вакцинации инфицированных животных с помощью РА, РСК, РИГА и РИД;

- РИД с новым О-ПС антигеном, изготовленным из B.melitensis, позволяющим выявлять значительно большее количество инфицированных животных;

- РИД с О-ПС антигенами из В.abortus и B.melitensis для использования в схемах эпизоотической оценки по бруцеллезу вакцинированных животных.