Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Усовершенствование дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота

^ 1Г.Г.Г

На правах рукописи

СТЕБЛЕВА Галина Михаиловна

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДОМЕРЕНЦШЬНОЙ ПООТАЩШАЛЫЮЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЩШЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Новосибирск - 1998

Работа выполнена в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный руководитель доктор ветеринарных наук

ХЛЫСТУНОВ Анатолий Георгиевич

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор

ЧЕКИШЕВ Валерий Михайлович

Официальные оппоненты: - доктор ветеринарных наук, профессор

ОЩЕПКОВ Владимир Григорьевич

- доктор ветеринарных наук, НИКИФОРОВ Иван Порфирьевич

Ведущее учреждение - Институт ветеринарной медицины Омасого аграрного университета.

Защита состоится " _£_ " Р/Шлфа 1998 г. в часов на заседании диссертационного совета Д.020.23.01 при Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (633128, Новосибирская область, п.Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ)

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН.

Автореферат разослан " " г.

Ученый секретарь диссертационного совета ,?

доктор ветеринарных наук ус. ' А.А.Самоловов

- 3 -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы

Усовершенствование системы контроля эпизоотического процесса бруцеллеза остается для ветеринарной науки и практики до сих пор важнейшей проблемой.

Особенно актуально это в связи с тем, что, с одной стороны, постоянно разрабатываются новые методы диагностики и специфической профилактики инфекционных болезней животных, с другой - резко изменяются эпизоотические и социально-экономические условия ведения животноводства (Е.С.Орлов, 1967; М.М.Иванов, 1975; П.А.Триленко, 1976-, Г. А.Объедков, 1986; А.А.Новицкий,' 1989; И.А.Косшюв, 1992; С.К.Димов, 1993; С.И. Джупина, 1994, А.Г.Падалица с соавт., 1997 и др.).

В управлении эпизоотическим процессом бруцеллеза важная роль принадлежит средствам специфической профилактики с рациональными схемами их использования.

Так, было установлено, что высокой противоэпизоотической эффективностью обладают схемы реиммунизации крупного рогатого скота живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 либо по гомологичному фону, либо по фону первичной прививки живой вакцины из агглютиногенного штамма В. abortus 19 с интервалом 1-2 года. Наряду с этим была доказана необходимость использования в неблагополучных стадах рациональной поствакцинальной диагностики, обеспечивающей максимальную реализацию провоцирующих свойств вакцин в ранние сроки после прививок.

Особое значение в этой связи приобретает зпизоотологический мониторинг, представляющий собой систему наблюдений, анализа, оценки и прогноза изменений эпизоотической ситуации (В.В.Сочнев с соавт., 1991; С.И.Джупина, 1994; В.И.Сайченко, 1995; В.М.Авилов с соазт., 1997 и др.).

При этом для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, в разное время использовались различные диагностические средства и методы. Выл накоплен определенный научный и практический опыт (К.М.Салмаков, 1964, 1977, 1987; JI.B. Дегтяренко с соавт., 1978,

1988, 1991; И.П.Никифоров с соавт., 1980, 1997; Л.В.Дегтяренко,

1989, 1995; В.Г.Ощепков, 1990; И.А.Косшюв, 1992 и др.).

Однако в ветеринарной практике оставалась проблема: далеко не

всегда можно было сделать на основе оценки характера официально утвержденных серологических реакций РА и РСК однозначный вывод о благополучии или неблагополучии того или иного стада по бруцеллезу.

В этой связи очевидна необходимость оптимальной схемы эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота по бруцеллезу для зон с широким применением вакцины из штамма 82.

Сравнительно недавно в качестве дифференциального диагностического теста положительно зарекомендовала себя РИД с О-ПС антигеном (В.М.Чекишев с соавт., 1993).

Однако до настоящего времени не было обобщенных объективных результатов сравнительного изучения указанного и ранее известных средств и методов для использования в дифференциальной поствакцинальной диагностике.

1.2. Цель и задачи исследований

Цель исследований - усовершенствовать схему дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и на ее основе разработать и реализовать в производстве критерии эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82.

Задачи исследований;

- провести комплексное изучение эффективности нового диагностического метода (РИД с О-ПС антигеном) в сравнении с ранее известными для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82;

- с учетом полученных результатов усовершенствовать схему дифференциальной поствакцинальной диагностики и на ее основе -критерии эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82;

- апробировать разработанные критерии в производственных условиях.

1.3. Научная новизна

На основе результатов комплексного изучения эффективности РИД с О-ПС антигеном в сравнении с ранее известными диагностическими методами разработана оптимальная схема дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, а на ее основе - объективные критерии эпизоотической оценки стад

крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, с доказанной эффективностью. Установлена ведущая роль в них РИД с О-ПС антигеном, усовершенствованы методики ее постановки и учета.

Изучены нестандартные ситуации при использовании различных средств и методов поствакцинальной дифференциальной диагностики и предложены рациональные пути их решения.

1.4. Практическая значимость

Внедрение разработанной схемы дифференциальной поствакцинальной диагностики (с ведущей ролью в ней РИД с О-ПС антигеном) в значительной степени повышает противоэпизоотическую, противоэпидемическую и экономическую эффективность системы мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота.

1.5. Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: всероссийских координационных совещаниях по проблеме бруцеллеза и туберкулеза с.-х. животных (Омск, 1995, 1996); научно-практической конференции "Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири" (Новосибирск, 1995), научно-практической конференции, посвященной 65-летию Иркутской НИВС (Иркутск, 1997), Международной научно-практической конференции "Зооантропонозные болезни,, меры профилактики и борьбы" (Гродно, 1997), и ученых советах ИЭВСиДВ (1991-1997).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном заседании научных сотрудников ИЭВСиДВ (1998).

1.6. Публикация результатов исследований

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

1.7. Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 1 рисунком и 24 таблицами. Она состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список литературы включает 249 источников (из них 53 иностранных).

- 6 -

1.8. Внедрение результатов исследований

Разработана и внедрена в ветеринарную практику оптимальная схема поствакцинальной дифференциальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Результаты исследований вошли в "Методические указания по дифференциальной эпизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82", "Наставление по применению тест-ситемы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота", "Наставление по применению вакцины живой, сухой из штамма 82", "Ветеринарные правила ВП 13.3.1302-96", утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ, а также в план противобруцеллезных мероприятий по Новосибирской области на 1995-1997 гг.

1.9. Основные положения, вшоошне на защиту

Оптимальная схема поствакцинальной дифференциальной диагностики бруцеллеза и критерии эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 1990 по 1998 год в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока и хозяйствах Новосибирской области. '

Эксперименты, производственные опыты и наблюдения проводили на поголовье крупного рогатого скота различных возрастов (более 30 тыс.гол.) в хозяйствах с разнообразной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу.

Сбор и анализ результатов серологических исследований крупного рогатого скота на бруцеллез проводили в хозяйствах с разнообразной эпизоотической ситуацией по данному заболеванию.

Ретроспективную оценку эпизоотической ситуации бруцеллеза в различных районах Новосибирской области в целях изучения противо-зпизоотической эффективности внедряемой схемы поствакцинальной дифференциальной диагностики осуществляли на основе материалов учета и отчетности областных и районных ветеринарных учреждений, собственных эпизоотологических материалов, собранных лично во время эпизоотологических исследований и наблюдений в различных

очагах болезни.

В качестве диагностических методов при исследовании сывороток крови применяли РА, РСК с Б- и К-антигенами, РИГА до предельных титров, при исследовании молока - КР до предельных титров по общепринятым методикам с комплексной оценкой характера указанных серологических реакций у привитых вакциной из штамма 82 животных.

При постановке серологических реакций (РСК, РА) использовали единый биофабричный 3-антиген и бруцеллезные И-антигены (РСК) ВКИИБТЖ (Л.В.Дегтяренко) и ВНИВИ (К.М.Салмаков с соавт.). В РИГА использовали медицинский эритроцитарный диагностикум, выпускаемый Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов.

Постановку РИД (реакции иммунодиффузии) с О-ПС антигеном (профессор В.М.Чекишев с соавт.) осуществляли по общепринятой методике с отработкой ее оптимальных параметров.

В работе также использовали общепринятые бактериологические методы.

Методики отдельных производственных опытов и наблюдений изложены в соответствующих разделах диссертации.

Ряд исследований проведен совместно с А.Г.Хлыстуновым, В.М. Чекишевым, С.К.Димовым, Н.И.Куренской, В.И.Сайченко, Е.А.Киселевым.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Эпизоотическая оценка по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого жявимн противобруцеллез-нимн вакцинами, с использованием традиционных серологических методов дифференциальной диагностики (Э- и И-анткгены)

Первоначально комплекс диагностических исследований крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма 82, в целях дифференциальной эпизоотической оценки включал в себя следующие основные обязательные элементы: проведение эпи-зоотологического обследования хозяйства; изучение динамики и характера серологических реакций (РА, РИГА, РСК с Б- и I?-антигенами, КР с молоком); отбор для диагностического убоя животных с наиболее высокими титрами по большинству примененных диагностических тестов; бактериологические исследования взятого биоматери-

ала (лимфоузлы и внутренние органы), включая и биопробу; дифференциацию выделенных культур. Оценку эпизоотического состояния стада делали на основании полученных результатов.

Довольно часто объективное заключение по стаду можно было сделать на основании результатов эпизоотологического обследования фермы, хозяйства и оценки характера серологических реакций у животных после прививки.

При выделении положительно и сомнительно реагирующих по РА или(и) РСК с S-антигеном (PCK-S) животных сыворотки крови от них переисследовали в РСК с R-антигеном (PCK-R) с целью определения характера реакции. В случае невозможности определения характера реакции при однократном исследовании проводили комплексную проверку по РА и РСК с единым биофабричным S-антигеном и РСК с R-антигеном через 20-30 дней после предыдущего исследования с растит-ровкой сывороток до предельных титров.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота неблагополучных стад, где бруцеллез был установлен и бактериологически подтвержден, отмечали РА в титре 200 МЕ и выше и PCK-S в титре 1:20 и выше. При этом PCK-R была либо в более низких титрах, либо вообще отсутствовала.

Следует отметить, что высокие титры антител в РА и РСК с S-антигеном при исследовании сывороток крови привитых вакциной из штамма 82 животных неблагополучных стад довольно часто совпадали с положительными показателями КР с молоком и РИГА с сыворотками крови.

Анализируя характер серологических реакций на бруцеллез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств Новосибирской области в разные сроки после ревакцинации (бруцеллез исключен эпи-зоотологически и бактериологически), следуэт отметить, что в РА либо реагирующих не было, либо животные реагировали в титре не выше 100 №. У некоторых животных РА совпадала с PCK-S (1:5 и 1:10). PCK-.S отмечена в основном в титре не выше 1:10, очень редко 1:20 - 1:40.

Причем у животных, реагировавших в РА и (или) PCK-S, отмечены PCK-R в титрах, в большинстве, случаев превышающих таковые с S-антигеном на 1-2 порядка.

КР с молоком в благополучных по бруцеллезу стадах (с эпизоо-тологическими и бактериологическими доказательствами) была, как правило, отрицательной, у отдельных животных титр антител не пре-

вышал 1:4. При этом показания КР носили неспецифический характер, так как большинство таких проб положительно реагировало с димас-тином, что указывает на субклинический мастит.

В процессе нашей работы возникали сомнения по поводу животных, реагирующих в РСК-Б в титрах 1:5, 1:10 и тем более 1:20, если они реагировали в РСК-1? в равных титрах или только на один порядок выше и если эпизоотологическое обследование хозяйства бруцеллез исключало. Например, при исследовании коров из АО "Ирмень" Ордынского района, благополучного по бруцеллезу, из 18 коров в РА реагирующих не было, в РСК-Э прореагировало 13 проб (3 - 1:5, 7 -1:10 и 3 - 1:20). В РСК-Й реагировало 15 проб (1 - 1:5, 6 - 1:10, 7 - 1:20 и 1 - 1:40). В основном титры антител в РСК-Я превышали титры антител в РСК-Б на одно разведение или были равны, в то же время две пробы имели показатели с Б-антигеном выше, чем с Р-антигеном. При эпизоотологическом обследовании хозяйства бруцеллез не подтверждался. Аналогичную ситуацию наблюдали и в последующие годы как в данном хозяйстве, так и в ряде других ховяйств.

В таких случаях утверждать однозначно о наличии в хозяйстве бруцеллеза невозможно. Чтобы подтвердить наличие или отсутствие бруцеллеза, необходимо проводить бактериологическое исследование, на что затрачивается много времени и убою подлежат, возможно, здоровые животные.

Так, при проведении в Краснозерском районе (данные получены совместно с В.И.Сайчегасо) бактериологических исследований биоматериала от 84 животных с максимально высокими титрами серологических реакций было выявлено всего две культуры бруцелл на одной ферме. Обе отнесены к вакцинному штамму 82. По остальным 82 животным результаты бактериологических исследований (с постановкой биопробы) были отрицательными.

Обобщая результаты использования в целях эпизоотической оценки благополучных и оздоровленных стад, где выделяли положительно реагирующих на бруцеллез животных после вакцинации, описанного выше комплекса методов, можно сделать вывод, что он обладает достаточной степенью достоверности, однако при этом имеет и определенные недостатки.

В частности, идет речь о большом количестве методов, в том числе и о таком трудоемком, дорогом и длительном по времени, как бактериологический (включая биопробу).

Исходя из всего вышеизложенного, очевидной выглядит необхо-

димость поиска более простых и специфичных экспресс-методов дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза, пригодных для объективной эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82.

2.2.2. Род» РОД с О-ПС антигеном в комплексной дифференциальной посхвакцинаяьной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота

В связи с результатами, полученными в предыдущем разделе, в дальнейшем в комплекс диагностических методов включили РИД с 0-ПС антигеном, полученным В.М. Чекишевым с соавторами в ИЭВСиДВ.

РИД с 0-ПС антигеном вначале ставили согласно Временному наставлению от 10.09.92г.

В процессе нашей работы были внесены изменения в технику постановки и учет реакции, которые не раз были подтверждены при исследовании сывороток крови и в последующем включены в "Наставление по применению тест-системы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота", утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ в 1995 году.

Нами отмечено, что температура воздуха в помещении, к сожалению, далеко не всегда "комнатная" (как было указано во Временном наставлении), особенно в осенне-зимний и зимне-весенний периоды. При нашей работе, например, отмечали температуру воздуха в помещении 12-14°С и даже ниже.

В целях определения оптимальных температурных параметров был проведен специальный опыт.

При трехкратном повторении опыта с положительными сыворотками крови при температуре воздуха в помещении, где находился эксикатор с исследуемыми сыворотками, в пределах 12-14° С наблюдали задержку реакции. Через 24 часа (срок согласно Временному наставлению. ..) при вышеуказанной температуре (12-14°С) реакции не произошло (не прореагировала ни одна проба из испытуемых сывороток крови, а также и контроль). Слабую линию преципитации мы заметили только через 39-40 часов у трех проб- сывороток крови из тех пяти, которые при температуре 18-20°С и выше давали четкую реакцию через 24 часа. Через 48 часов после постановки РИД была положительной у шести проб сывороток крови (в том числе и в контроле), которые при температуре 18-20сС прореагировали через 24 часа. Те же

3 пробы, которые положительно реагировали в РИД при температуре воздуха 18-20° С и выше через 48 часов, дали линию преципитации только через 70-72 часа после постановки реакции в температурном режиме 12-14"С. Во всех восьми случаях линий преципитации была не настолько четкой, как при постановке этих же оувороток и контрольной позитивной сыворотки в РИД при комнатной температуре -18-20°С и выше.

При температуре 15-17°С как такбвой задержки реакции не произошло, но линия преципитации была менее вура^енной, чем при температуре 18-20°С и выше.

Опираясь на полученные данные, лриЬли к заключению, что при постановке РЯД температура не-долзша быть ниже 18-20"С. При температуре 20-27°С также отмечали- четнфо/линию. преципитации, но при более высоких температурах в термостате из-за конденсата, который создается во влажной камере, наблюдалось -сползание агара и искажение полученных результатов.

Как уже указывалось ранее, учет результатов.в РИД с 0-ПС антигеном согласно Временному наставлению от' 10.09.92 года предписывалось проводить через 24 часа после ее,постановки.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота из разных хозяйств в РИД прореагировало всего 71 животное, причем 24 из них дали положительную реакцию лишь через. 48 часов, а не через 24 часа. Поэтому необходимо отметить, что учет реакции следует вести не только через 24, но и через 4& часов, так как при этом дополнительно выявляется в среднем 33,8% реагирующих на бруцеллез животных. Дальнейшие наблюдения при исследовании этих проб сывороток крови (72 часа и более) не привели.к выявлению в РИД новых реагирующих на бруцеллез животных. При сравнении результатов РИД. с таковыми в РА и PCK-S не выявляли у животных с положительной РИД через 48 часов более низких титров антител в РА и РСК, чем у животных, пробы сывороток крови которых реагировали в РИД через 24 часа.

При изучении РИД мы встретились с еще одной проблемой: у отдельных проб сывороток крови, реагирующих в РИД через 24 часа и дающих четкую линию преципитации, эта линия через 48 часов переходит на рядом расположенные пробы сывороток крови, создавая тем самым впечетление положительной реакции у расположенной рядом пробы (на самом деле отрицательно реагирующей).

Следовательно, для получения более достоверных результатов

при выявлении животных, реагирующих на бруцеллез в РИД, необходима перестановка как минимум, тех проб сывороток крови, которые дают линию преципитации через 48 часов. При этом для более четкого учета результатов реакции сыворотку крови необходимо вносить не в каждую лунку, а через одну.

Попытка применить РИД с О-ПС-антигеном для исследования цельного молока и сыворотки молока закончилась неудачей. Это можно объяснить тем, что в молоке находятся иммуноглобулины другого класса Ой А).

В дальнейшем на большом фактическом материале наш были получены положительные результаты, свидетельствующие о возможности использования в комплексной поствакцинальной диагностике в качестве дифференциального метода РИД с О-ПС антигеном.

Специфичность показаний РИД была подтверждена как на привитом, так и на непривитом поголовье благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйств совместно с Е.А.Киселевым (1993). Установлено их отсутствие у животных через 1,5 и более месяцев после вакцинации и ревакцинации при наличии РА и РСК даже в высоких титрах.

Изучение эффективности РИД в сравнении с ранее известными диагностическими тестами проводили на многократно привитом против бруцеллеза вакциной из штамма 82 поголовье крупного рогатого скота (в том числе при реиммунизации с интервалом 1-2 года) неблагополучных и благополучных ферм. При этом прежде всего ориентировались на результаты, полученные в хозяйствах, где неблагополучие по бруцеллезу было доказано всеми имеющимися методами (эпизоото-логический, бактериологический и биологический).

Было установлено, что в хозяйствах, где не было никаких сомнений в их неблагополучии по бруцеллезу, даже при использовании только одного эпизоотологического метода, были зарегистрированы при комплексных серологических исследованиях с применением максимума диагностических тестов положительные показания РИД при высоких титрах антител в РА, РСК, РИГА и КР. (табл. 1).

В благополучных хозяйствах при выявлении реагирующих в РА и РСК показания РИД были отрицательные. При проведении бактериологических исследований были получены также отрицательные результаты. При дальнейшем наблюдении за такими хозяйствами благополучие по бруцеллезу сохранялось, (табл. 1).

Если говорить о чувствительности метода, то следует отме-

Таблица 1

Характер серологических реакций в сравнении с РИД с О-ПС антигеном у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма В.abortus 82

НАИМЕНОВАНИЕ АО Реагировало всего, голов Р И д PA-S (ME) PCK-S РИГА С ME) КР с молоком

всего 200 и выше всего 1:20 и выше всего 200 и выше всего 1:8 и выше

Н Е Б Л А Г 0 п 0 Я У Ч Н Ы Е X 0 3 Я й С Т В А

Лесное 134 32 50 17 132 50 14 10 26 23

Восток 63 16 2? 17 53 29 16 11 3 2

Рабочее 306 56 44 27 304 89 * * * *

Кирзинское 385 5 66 6 373 27 * * 2 -

Бородинское 56 27 50 13 51 - 63 53 ж *

¡[уланское 85 36 60 39 80 13 55 44 12 9

БЛАГ 0 п 0 ЛУЧНЫЕ X 0 3 Я И С т В А

йркень 50 - 7 - 45 - * * - _

Северное 20 - 1 - 19 - 5 - - -

Приобское 30 - - - 30 - * * - -

Дорогинское 221 - - - 221 4 - - 13 -

со

I

Примечание: * - исследования не проводились.

тить, что по данным, полученным совместно с другими авторами, в экспериментах на крупном рогатом скоте, искусственно зараженном вирулентной культурой штамма В.abortus 54 в дозе 200 млн м.к., в первый месяц после заражения РИД была положительной не более чем у 40% инфицированных животных.

В условиях неблагополучных хозяйств не все животные, реагировавшие положительно в РА, РСК, КР с высокими титрами антител, имели положительные показания РИД.

Анализируя комплексные серологические исследования сывороток крови коров в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, нами было установлено, что показания РИД в значительной степени коррелируют с высокими титрами антител в РА, РСК, РИГА и КР с молоком. Так, РИД в среднем выявляет от 80 до 100% реагирующих в РА в титрах 200 ME и вьше. За время нашей работы отмечали в большинстве случаев 100%-ное совпадение РИД и РА.

В отношении PCK-S и РИГА отмечалась несколько иная закономерность. РИД выявляет от 60 до 93% животных, реагирующих в PCK-S в титре 1:20 и выше, а реагирующие в РНГА в титре 200 ME и выше в 64-92% случаев совпадали с таковыми в РИД.

Результаты сравнительных исследований сыворотки крови в РИД и молока от этих животных в КР показали, что от 90 до 100% реагирующих в КР с молоком, реагировали положительно в РИД. Это показывает их высокую диагностическую ценность, учитывая при этом, что КР с молоком можно проводить через 15-20 дней после ревакцинации, когда другие методы нельзя использовать.

Телочки в 4-5-месячном возрасте и телки случного возраста не реагировали в РИД с О-ПС антигеном, в то время как при исследовании нетелей и первотелок, выращенных из этих телочек, выявляли реагирующих в РИД и количество их варьировало в зависимости от тяжести эпизоотической обстановки (от единичных до 50%).

Нами доказана эффективность РИД в качестве экспресс-метода для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств, где животных реиммунизировали вакциной из штамма 82.

Несмотря на то, что РИД не выявляет 100% инфицированных животных, это ни в коей мере не принижает ее достоинств, так как основное предназначение этого теста, как выяснилось и подтвердилось в процессе нашей работы, связано с тем, что РИД может быть использована:

- при оценке эпизоотической ситуации в благополучных по бру-

целлеэу хозяйствах, в которых имеет место выявление реагирующих на бруцеллез в РА, РСК с сывороткой крови и КР с молоком (при этом РИД может заменить бактериологический метод);

- для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных в неблагополучных хозяйствах;

- для ранней диагностики бруцеллеза через 1,5-2 месяца после иммунизации противобруцеллезной вакциной из штамма 82, что ускоряет сроки оздоровления;

- для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с применением вакцины из штамма 82.

2.2.3. Результаты изучения нестандартных ситуаций при использовании различных средств и методов дифференциала ной диагностики для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногеннаго втамма В.abortus 82

Нестандартные ситуации при использовании различных средств и методов дифференциальной поствакцинальной диагностики для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82, как показали результаты наших наблюдений, имеют место, хотя их не много. Они могут не подпадать ни под одно из положений действующих в настоящее время "Методических указаний по дифференциальной эпизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82".

Так, например, проблемы возникли с пунктом 3.1. вышеназванных " Методических указаний...".

Его редакция такова: "Выявление хотя бы одного животного, сыворотка крови которого дает положительный результат в РА выше 200 ME или(и) в РСК в разведении выше 1:20 или(и) в РИД, указывает на неблагополучие хозяйства (отделения, фермы) по бруцеллезу".

В хозяйствах с нестандартной ситуацией эпизоотологическим методом наличие бруцеллеза не подтверждается, однако результаты серологических исследований могут указывать и на возможную эпизоотическую опасность (положительные РИД, КР; высокие титры РА и РСК). Поэтому необходимы дополнительные исследования, в том числе

и бактериологические.

Весьма демонстративны по этому поводу результаты многолетних комплексных исследований в хозяйствах Краснозерского района, подученные совместно с В.И.Сайченко.

Все молочно-товарные фермы в Красноэерском районе с 1990 года оцениваются как благополучные по бруцеллезу.

В 1997 году из 174 реагирующих в целом по району животных РА и(или) РСК в высоких титрах были у 17 животных на 4 фермах. На этих же фермах выявлено 11 реагирующих в РИД (при бактериологическом исследовании материала от данных животных получен отрицательный результат, включая биопробу). Следует отметить, что на этих четырех фермах за указанный период всего положительно реагировало 130 животных, в том числе 125 - на двух: ТОО "Заря" и А0"Сибирь". Эпизоотологически бруцеллез на указанных фермах исключен. В качестве предполагаемой причины реакции - вакцинная их природа, причем в ТОО "Заря",установлено, что реагирующие появились через 7-14 дней после прививки животных данного стада против сибирской язвы. При переисследовании всего поголовья животных получены результаты, свидетельствующие о полном угасании динамики положительных реакций (РИД, РА и РСК). При последнем исследовании (январь 1998 г.) получены отрицательные результаты в РА, РСК и РИД.

С 1988 года по настоящее время в районе благоприятны и эпидемиологические показатели: нет ни острых, ни хронических случаев заболевания бруцеллезом людей.

Аналогичная ситуация отмечалась и в ряде хозяйств Ордынского, Черепановского, Кочковского и других районов. Результаты комплексных исследований подтвердили их благополучие по бруцеллезу.

2.2.4. Эффективность схемы дифференциальной поствакцинальной диагностики в системе эпизоотологического мониторинга при бруцеллезе крупного рогэтого скота

С учетом полученных результатов в ранее разработанные критерии эпизоотической оценки, основанные на эпизоотологическом обследовании хозяйства и результатах анализа характера различных серологических реакций, внесены определенные изменения, которые отражены в системе эпизоотодогического мониторинга (рис.1).

ЭПИ300Т0Л0ГИЧЕСК0Е ОБСЛЕДОВАНИЕ ХОЗЯЙСТВА (ФЕРНЫ) Основания считать хозяйство (Ферму), неблагополучной

ЕСТЬ

НЕТ 1

ОЦЕНКА ХАРАКТЕРА СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИИ выявлены животные с РА (200 НЕ и выше) и РСК (1:20 и выше)

ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭТИХ ЖИВОТНЫХ (РИД И КР)

ОПЕНКА ЭПИЗООТИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ

»

I

При наличии эпизоотоло-гических показаний, положительная РИД и (или) КР 1:16 и выше

ОЦЕНКА: БРУЦЕЛЛЕЗ

При отсутствии эпизоотологических оснований и любом характере реакций: повторные комплексные исследования через 1 месяц

Р Е з У 1

1

Л Ь Т А Т Ы

Положительные

Диагностический убой и бак. исследование биоматериала от животных с максимальной выраженностью реакций

отрицательные

ОПЕНКА: БЛАГОПОЛУЧИЕ

I

РЕЗУЛЬТАТЫ 1 i

Выделение полевого штамма

ОЦЕНКА: БРУЦЕЛЛЕЗ

Отрицательные

ОЦЕНКА: БЛАГОПОЛУЧИЕ

Рисунок 1. Система эпизоотологического мониторинга

С учетом этих критериев сложились три эпизоотологические категории ферм: неблагополучные, благополучные и требующие уточнения эпизоотической ситуации.

Если иметь в виду, что в качестве критериев потенциальной эпизоотической опасности при бруцеллезе у привитых животных являются положительные показания РИД, РА (200 МЕ и выше) и РСК (1:20 и выше), а также КР с молоком (1:8 и выше), то в 1995-98.гг. в большинстве районов области в том или ином масштабе возникла необходимость комплексной эпизоотической оценки стад по бруцеллезу. Основанием для объявления в последние годы неблагополучными по бруцеллезу ферм являются результаты эпизоотической оценки на основе указанной системы эпизоотологического мониторинга.

Об эффективности этой системы можно судить по следующим данным: на 1 ноября 1993 года было 309 пунктов, требующих выяснения эпизоотической ситуации. В период с 1993 по 1997 год неблагополучными были объявлены 29 ферм, то есть удалось предотвратить объявление неблагополучными 280 ферм.

На основании разработанных критериев в благополучных хозяйствах при массовых диагностических исследованиях крупного рогатого скота на бруцеллез не стали использовать РСК, кроме случаев, когда на той или иной ферме выявляются животные с положительной РА в титре 100 МЕ и выше.

Следует отметить, что в практику районных ветеринарных лабораторий РИД с О-ПС антигеном была внедрена в 1994 году в 11 районах из 30-ти (из 14,7 тыс. проб сывороток крови крупного рогатого скота, главным образом из числа положительно и сомнительно реагировавшего в РА и РСК, в РИД положительно реагировало 529 проб), в 1995 году в 19 районах (из 19,6 тыс. исследованных проб реагировало положительно в РИД 533). С 1996 года ее используют (хотя и не везде в больших объемах) практически во всех районах. В настоящее время в Новосибирской области проводится постоянная комплексная эпизоотологическая оценка по бруцеллезу всех ферм, где выделяются положительно реагирующие в РА и РСК.

С 1974 по 1997 год в Новосибирской области благодаря изучению, разработке и внедрению различных вариантов системы противоб-руцеллезных мероприятий, основанных на рациональных схемах применения вакцин и поствакцинальной диагностике (в том числе и дифференциальной) , удалось добиться снижения числа неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота ферм с 532 до 11, то есть в

48,3 раза.

По состоянию на 1 января 1998 года в области официально числится 11 неблагополучных пунктов в восьми районах из 30-ти: Татарский - 2, Усть-Тарский - 1, Венгеровский - 1, Чулымский - 1, Колывакский - 2, Тогучинский - 2, Болотнинский - 1, Мошковский -

I пункт (тогда как в 1974 году неблагополучными были все районы области).

Следует отметить, что если на 1 января 1997 г. в области было 15 неблагополучных пунктов в девяти районах, то в течение года

II из них было оздоровлено, но дополнительно было объявлено неблагополучными еще 7 ферм в шести районах.

Количество положительно реагирующего на бруцеллез крупного рогатого скота, выявляемого ежегодно, начиная с 1974 года снизилось к 1997 году также довольно значительно - с 41 тыс. до 2,4 тыс., или почти в 18 раз.

В таблице 2 приведены результаты исследования крупного рогатого скота (как непривитого, так и привитого против бруцеллеза) в целом по области в динамике: с 1991 по 1997 год.

При этом в качестве критериев потенциальной эпизоотической опасности взяты показания КР с молоком и РИД с 0-ПС антигеном. В данной таблице приведены цифры, убедительно показывающие, что общее количество реагирующих на бруцеллез животных неуклонно снижается, однако имеют место в последние годы достаточно медленные темпы этого снижения. Но, если иметь в виду темпы снижения степени эпизоотической опасности реагирующих животных, то они, судя по показаниям РИД и КР, значительно быстрее.

Так, количество положительно реагирующего на бруцеллез крупного рогатого скота среди невакцинированного поголовья с 1991 по 1997 год снизилось с 0,34 до 0,13% из числа исследованных. Среди вакцинированного поголовья количество положительно реагирующих снизилось за указанные годы с 1,0 до 0,30%. Среди телок случного возраста отмечена аналогичная тенденция (снижение с 0,46 до 0,15%).

Количество реагирующих в РИД с 1994 по 1997 год снизилось с 3,5 до 1,2% от числа исследованных.

Таким образом, на основании проанализированных материалов, очевидна, с одной стороны, потенциальная возможность полного оздоровления области от бруцеллеза в ближайшее время, с другой -наличие угрозы появления неблагополучных пунктов вновь как за

счет рецидивов, так и за счет заноса инфекции извне при несоблюдении принципов создания и поддержания в неблагополучных и угрожаемых популяциях перманентного иммунитета и максимального использования провоцирующих свойств вакцин в рациональных схемах поствакцинальной диагностики.

Таблица 2

Динамика реагирования на бруцеллез крупного рогатого скота в масштабе Новосибирской области за 1991-97 гг.

ПОКАЗАТЕЛИ Годы

1991 1994 1995 1996 1997

Исследовано невакциниро-ванного погол., тыс.гол. Реаг-ло положит-но, 'А 285,4 0,34 294,0 0,25 296,4 0,16 274,5 0,13 277,5 0,13

Исследовано привитого погол., твс,гол. Реаг-ло положит-но, 7. 1172.2 1.0 856,4 0,56 843,3 1,43 781,2 0,35 669,7 0,30

Мссл-но телок слдчного возраста, тыс.гол. Реаг-ло положит-но, 7. 122,2 0,46 83,2 0,38 85,1 0,21 73,2 0,15 76,2 0,15

Иссл-но по KP с молоком, тыс.гол. Реаг-ло положит-но, 7- 123,1 0,90 75,5 0,38 69,0 0,34 41,7 0,32 58,0 0,17

Исслед-но в РИД, тыс.гол Реаг-ло положит-но, 7- * * 14,7 3,5 9.6 2.7 24,7 1.7 25,5 1,2

Примечание: * - исследования не проводились Р ч< 0,05

Разработанная система апизоотологического мониторинга позволяет осуществлять надежный экспресс-контроль за изменением эпизоотической ситуации и тем самым помогает предотвращать эту угрозу за счет принятия оперативных оптимальных мер.

- 21 -3. ВЫВОДЫ

1. РИД с О-ПС антигеном, являясь специфичной серологической реакцией, играет ведущую роль в дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота:

- для оценки эпизоотической ситуации в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых имеет место выявление реагирующих на бруцеллез в РА, РСК с сывороткой крови и КР с молоком (при этом РИД может заменить бактериологический метод);

- для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных в неблагополучных хозяйствах;

- для ранней диагностики бруцеллеза через 1,5-2 месяца после реиммунизации противобруцеллезной вакциной из штамма 82, что ускоряет сроки оздоровления;

- для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с применением вакцины из штамма 82.

2. Оптимальным режимом постановки РИД с О-ПС антигеном являются температура (не ниже 18сС) и время учета реакции (24 и 48 часов). Это позволило повысить диагностическую эффективность РИД в среднем на 33,8%.

3. Положительные показания РИД с О-ПС антигеном в значительной степени (от 70 до 97,5%) коррелируют с высокими титрами антител в РА (200 ME и выше), РСК (1:20 и выше), а также в РИГА (200 ME и выше) и КР с молоком (1:8 и выше) и подтверждаются выделением от реагирующих животных полевых культур бруцелл. В этой связи в большинстве случаев отпадает необходимость первичной постановки диагноза бактериологическим методом.

4. При эпизоотической оценке по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, многократно привитого живой вакциной из слабоагглю-тиногенного штамма В.abortus 82, основными серологическими методами являются РА, РСК (с официальными S-антигенами) и РИД, а вспомогательными РИГА с сывороткой крови и КР с молоком.

Положительная РИД и высокие титры антител в РА- выше 200 ME, РСК - выше 1:20, а также в РИГА - выше 200 ME и КР с молоком -выше 1:8 свидетельствуют в большинстве случаев о наличии в таких стадах бруцеллеза.

При отсутствии эпизоотологических показаний дополнительно используется бактериологический метод (исследование биоматериала от животных с максимальными титрами реакций, биопроба. дифферен-

циация выделенных культур).

5. Я-антигены выполняют в дифференциальной поствакцинальной диагностике вспомогательную роль.

Их использование позволяет при высоких титрах И-антител, предполагать наличие у привитых животных реакций поствакцинальной природы. Однако это не всегда является решающим моментом в эпизоотической оценке по бруцеллезу такого стада, так как возможна циркуляция в нем полевых диссоциантов бруцелл.

6. В благополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 выявлены случаи положительного реагирования в РИД (до 0,8%), а также в РА, РСК и КР (даже высокие титры), не связанные с бруцеллезом. Такие реакции проявляются на фоне применения различных вакцин, в том числе про-тивосибиреязвенной.

Отсутствие в таких стадах инфекции подтверждается довольно быстрым угасанием реакций, отрицательными результатами бактериологических исследований биоматериала от реагирующих животных, отсутствием эпизоотологических и эпидемиологических показателей.

7. Внедрение в масштабах Новосибирской области разработанной на основе результатов проведенных исследований рациональной системы эпизоотологического мониторинга удалось предотвратить объявление неблагополучными 280 ферм.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДХОШШЯ

Результаты проведенных исследований явились основой для разработки и усовершенствования системы эпизоотологического мониторинга, которая в настоящее время широко внедрена в Новосибирской области и других областях и краях региона Сибири, и вошли в следующие нормативно-технические документы российского уровня:

- Методические указания по дифференциальной эпизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 4 апреля 1995 года (И 13-7-2/270);

- Наставление по применению тест-ситемы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП ГО 4 апреля 1995 года (И 13-7-2/271);

- Наставление по применению вакцины живой, сухой из штамма 82, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 26 февраля 1996

года (И 13-3-2/538);

- Ветеринарные правила ВП 13.3.1302-96, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП № 18 июня 1996 года.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАН??« РАБОТ

1. Стеблева Г.М. Роль РИД с О-ПС антигеном в дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота // Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе: Тез. докл. науч.- практич. конф. -Новосибирск (12-13 июля). - 1995. - С. 89-90.

2. Перспективы и тенденции оптимизации системы противобруцел-лезных мероприятий по принципу управления эпизоотическим процессом / С.К.Димов, А.Г.Хлыстунов, А.П.Красиков, А.Г.Падалица, Г.М.Стеблева, В.И.Сайченко, С.А.Кузлякин // (там же). - С. 81.

3. Поствакцинальная диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота / Г.М.Стеблева, А.Г.Хлыстунов, В.М.Чекишев, С.К.Димов // Проблемы адаптации с.-х. животных: Материалы науч.- практ. конф., посвящ. 65-летию Иркутской НИВС (Иркутск, 22-23 октября 1997 г.) / РАСХН. Сиб. отд-ние. - С.94-95.

4. Эпизоотологическое значение маралов, как потенциальных хозяев бруцелл / А.Г.Хлыстунов, Г.М.Стеблева, В.В.Бургардт, С.К.Димов // (там же). - С.95-97.

5. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе крупного рогатого скота /А.Г.Падалица, В.И.Сайченко, С.К.Димов, А.Г.Хлыстунов, Г.М.Стеблева, Н.И.Куренская, С.А. Кузлякин, И.А.Косилов, А.А.Новицкий //Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы: Материалы Международ, науч.-практ. конф. -(Гродно, 23-24 октября) - Минск, 1997. - С.92-94.

6. Проблема специфичности показаний РИД с О-ПС-антигеном у животных, привитых противобруцеллезными вакцинами различных типов / С.К.Димов, Г.М.Стеблева, А.Г.Падалица, В.И.Сайченко, А.Г.Хлыстунов, Н.И.Куренская, П.К.Аракелян, И.А.Косилов // (там же). - С. 96-97.