Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Получение сыворотки для диагностики сибирской язвыв реакций преципитации

ЭОК 619:616.798.751-04

Крлжазба кукыгында

Нэутиев Назымбек Ибатоллаулы

ТОПАЛАНДЫ ПРЕЦИПИТАЦИЯ РЕАКЦИЯСЫНДА БАЛАУ Ш1Н К.ОЛДАНЫЛАТЫН КДН САРЫСУЫН ДАЯРЛАУ

16.00.03- мал дэр1герлж микробиология, вирусология, эпизоотология, микология микотоксикологиямен б1рге жэне иммунология

Мал дэрн-ерлк гылымдарыньщ кандидаты гылыми дэрежесш алу ушш дайындалган диссертациясыньщ

АВТОРЕФЕРАТЫ

Алматы 2004

Рылыми жумыс Кдзактыц гылыми-зерттеу малдэр1герлж инсти-тутынын биохимия жэнс микробиология, вирусология жоне иммунология зертханаларында, К^зак улттык аграрлык университетшщ вироздарга кдрсы зертханасында орындалды.

Рылыми жетекипск

ветеринария гылымдарыньщ докторы,профессор, К,Р УРА академии Т.С.Сайдулдин

Ресми оппонентерк

ветеринария гылымдарыньщ докторы, профессор М.С. Мамадалиев

ветеринария гылымдарыньщ кандидаты, доцент Х.Х.Кдцырбеков

Жетекии ужым:

ААК, "С.Сейфуллин атындагы Кдзак аграрлык, университет!"

К,оргау 2004 жылдыц маусым айыньщ 11 жулдызында сагат 14°" Д 18.01.01 диссертациялык кецестщ можинсшде Кдзак улттык аграрлык университетшде етед1. Мекен-жайы 480013, Алматы каласы, Абай дацгылы 28, аудитория 218.

Диссертациямен К,азак улттык, аграрлык университетшщ ютапханасында танысуга болады.

Автореферат " с?__" мамыр 2004 ж. таратылды.

Диссертациялык кенестщ

галым хатшысы Тулибаев К,.Э.

К1Р1СПЕ

Такырыптьщ езектшп. Ауьал шаруашылыгындагы езгерштерге, онда меншт ортурл1 кржалыктардьщ пайда болуына байланысты, сонымсн катар нарыктык катынастардыц дамуынан сл1м1зде кептеген мат жоне адам денсаулыпдна улкен задал келпретш, Tinri кейде ол!мге сокдьтратын аса Kayinri зооантропонозды аурулар етек ала бастады. Солардыц алдыцгы кдтарында топалац тур.

Топатац Онтуст1к Казахстан, Алматы, Шыгыс Кдзакстан жоне Акдюла облыстарында сонгы кезде жш кездесш жур. Соцгы жылдарда [2000-2002] республикамызда осы дерттен 80-нен астам адам ауырып, CKeyi каза тапты.

Бурынгы социалиста жуйеге арналган ауыл шаруашылык матдарыныц арасындагы топаланга карсы журпзшген алдын алу, сауыктыру шаралары, шдет ошактарын жою унпн журпзшетш ветсринариялык-санитариялык ic орекеттср осы кездсп озгерютерге байланысты жеткшкп турде нэтижесш бере алмауда. Бул ¡ндстп ауруларга карсы журпзьтетш ветеринариялык шараларды тубсгешмен озгертудщ кажстплтнш долсл!.

K/i3ipri кезде топалацды аныктау, TipKey жене оньщ топырактагы ошакдарын есепке ату женшде б1ркдтар ¿стер аткарылыуда. Дегенмен де бул жумыстар топалацныц ел1 де болса республика колемшде улксн шыгындар сжслушс тоскдуыл бола ашауда.

Топалацныц таратуына жол бермей, оныц ¿идет ошактартарын жою yuiiH журпзшетш жумыстардыц Heri3rici-6aTay эдютсрщ жан-жакты зерттеп, opi карай дамыту.

Осы зсртгеу жумысын журпзудщ кджетгшп топатац коздырушысы Вас. anthracis-Ti баска антракойдты жэне жакын туыс турлсршен ажыратудыц ете к.иындыльтгынан жене осы максатта кодданылатын диагностикумдардыц талапка сай емеспгшен туындайды.

Bacillus туыстасы 48 турл1 анаэробты жене факультатива аэробты микробтарды 6ipiKTipeÄi. Топалан коздырушысына ец жакындары: Вас. cereus, Bac.mucoides, Bac.megaterium.

Дегенмен, аэробты бациллалардын, коптеген тобынан тек кана Вас. anthracis адам мен жануарларда ешммен аякталатын ауру TypiH коздыра алатын касиеттерге ие. Бул коздырушыныц жогарыда ататган зардапты емсс, спора тузстш микробтармсн морфологиялык. жэне осшдж Kacucrrcpi такылеттес келед1. öcipece бул уксастыктар Вас. anthracis пен Вас. cereus-Te жаксы байкалады.

Осы мэл1меттерд1 ескере отырып б1здщ туйгешм1з, Ka3ipri коммерциялык топатацньщ преципитациялаушы кдн сарысуымен Вас. anthracis-ri туыстыкжагынан жакын, спора тузе алатын аэробты микробтардан серологиялык жолмен ажырату кателжтерге ушыратуы мумюн.

Табигатта жалган топалац жэне оган у крас микробтардыц кец таралуына байланысты серологиялык; балау журпзгснде, оспрссс тср1 шиюзатын Асколи реакциясында тсксергснде топтык преципитация коршга топалацга кдте балау крюдыц б1рден-б1р ссбсб1 болады.

Топалацньщ прсципитациялаушы кан сарысуыньщ (ТПК.С) жеткШкп тел1мслздш жоне белсендшгшщ томендинп оны алу жолдарын ол1 дс болса жетыд1руд1 керек етть Осы багытта С.А. Алексеев [1912], Н.А. Покшишевский [1910], С.К. Бсззубсц [1927], С.Г. Колесов [1955], Н.М. Никифорова., М.И. Ананьев [1947], С.Г. Колосов., В.А. Грачевтар [1951] коптеген сцбск аткарды.

Топалацньщ прецепитациялаушы кан сарысуыньщ бслсендипп мен тслшдипгш арттыру, иммундсуии антигеннщ крршаган орта мен продуцент-мал организмше залалын томендету, иммуногендипп жогары антиген тандау, тшмд1 иммундсу ксстссш жасау жолында коптеген кызметтер аткзрылып келедь

Тшт1 Е. Велснтидщ [1911] оз1 Вас. anthгacis-тi антракойдтардан ажырату ушш преципитация рсакциясы жарамайды деген болжамга келедь Топалацньщ жонс антракойдты штаммдардыц преципитация жоне комплимент байланыстырушы реакцияларында салыстырмалы серологиялык; зерттсуд1 Н.А.Покшишевский [1913] жургтзш топалац жонс антракойдты штаммдардыц айкде преципитацияга тусстшш алгаш рст хабарлады.

Н.М. Никифорова [1951], М.В. Рево [1940], Ф.Е.Смирновтыц [1945] зерттеулерше жоне 1939 жылгы биофабриканыц ТПК,С-ын тексеру ушш курылган комиссияныц мол1метгершс суйснсск ТПК.С жсткшкп турде белсенд1 смес жоне 20-35 %-ке дейш тс.тогаз нотижелер корсетедт

Келт1р1лген деректер топалацды катес1з балау ушш колданылатын диагностикумдардыц тсл1мдь~пп мен белсендингш арттыру, кетстш шыгындардыц колемш азайту багытындагы журпзшетш гылыми зерттеу жумыстарыньщ кундылытыньщ дол ель Мол1мсттер бойынша соцгы бес жылдыкта осы багытта тек б1здщ республикамызда гана смсс коршшсс ТМД елдершде де зерттеу жумыстары жургшлмсгсн.

Жумыстыц мацсаты. Топалацныц преципитациялаушы к,ан сарысуыньщ бслссндшп мен татщиппн арттыру ушш продуцента иммундсудщ нотижел1 кестесш жасау, онд1р1ске сапалы, экономикалык, тшмд1 диагностикум даярлау жолдарын енпзу. Осы макраттарды орындау ушш томевдепдей мвдетгерд! ал га крйдык; -продуцент жануарларды иммундсу ушш антигендерд! тандау; -продуцент жануарлардыц турш аныктау; -тшмд1 гипериммундеу кестесш аныктау;

-даярланган преципитациялаушы топалац кан сарысуын коммерциялык, топалац кан сарысуымен салыстырмалы турде зерттеу;

-даярланган преципитациялаушы топалац к,ан сарысуын онд1р1спк сынак;тан отгазу,

-топалацныц преципитациялаушы кдн сарысуыньщ норматива-техникалык, кужаттарын оз1рлеу (дайындау жоне кддагатау туралы нускэу, техникалык, шарттары, колдану туралы одютеме).

Жумыстыц голыми жацалык^ары. Продуцент-малдарды иммундеу ушш бурын колданылган антиген турлер1 жаца антигендермен уйлеспрЫп крлданылды. Жанатшмд1 иммундеу ксстеа пайдаланылды. Жумыстыц гылыми жацалыгы Кдзак,стан Республикасыныц Улттык, патенглк всдомствосыныц №11488-1Ш Аддын ала патен-пмен далелдендо (01.03.2002). Зсртгсу жумыстары алынатын ТПК,С-ныц бслсендипп мен тсл1мдиппн арттыруды коздейдь Тожлрибе барысында протективт! антигенд! (РА) оару жоне болт алу ушш жана турлснд1рген арнайы коректж орта ойлап табылды жоне онд1ру жолы арзандатьшды.

Аткарьглган жумыстыц нотижесшде К,азак;станда топалацды серологиялык; балау ушш диагностакумдарды ор1 карай жстьтару максатындагы зерттеулер озш1н, жалгасын тапты. Алгаш рет республикамызда осы аса катер.-и ауруды батау ушш колданылатын диагностикумдардьщ ачу жшын арзандату, оны ондру кезшде крршаган органыц каушевдтн камтамасыз етстш зсртгсу жумысгары журпзитд!. Осьшыц нотижесшде сл1\пзде ветфинария сатасында ксц крлданылатын ТПК,С-ын ондру жолга крйылды (№ ПВО 08.03.27-2001 Прксу куалт).

0нд1р1скс белсендЫп жогары, тел!мд1 ТПК,С енпзшш, оньщ нормативт1 техникалык, кужаттары К,Р АШМ ветеринария Департаментшде [09.01.2001] бектлш, тшст1 органдардан руксат алынды (ТШ 640КР 17286-19Ю-ЖШС-003-2001).

Жумыстыц теориялык; жоне практикалык; кундылыгы. Зерттеу жумысыньщ нотижелершдс алынган диагностикалык препарат атпздщ иетеринарнялык, зертханаларында топаланды преципитация реакциясында балау ушш колданылады (№ ПВО 08.03.27-2001 Лркеу куолт). Топалацнын преципитациялаушы кдн сарысуын алудыц жаца жолына нормативтж-тсхникалык, кужаттар оз1рленш К,Р АШМ ветсринариялык, Департаментшде бсктлдк

Крргауга усынылган непзп кдгидалар

1. ТПК,С-ын оз1рлеу кезшде гипериммундеу уш1н колданылган антигендерд1 тацдау барысында журпзшген зерттеулердщ деректер1

2. Эр турл! гипериммундеу ксстслершщ салыстырмалы нотижелер1

3. Журпзьпген зсрттсу ношжссшдс тандап алынган шпериммундеу кестсс1

4. Жаца тсхнологиямен даярланган диагностикум сапасынын, бурынгыларымен салыстырмалы корсстюштср!

Зерттеу нотижелершщ жариялануы. Диссертация бойынша жарык корген жумыстар Крз МРЗИ-да уйымдастырылган гылыми-тож1рибслж

конфсренциясында (Алматы-1999), 1 -Халыкзралык, встсринарлык конгресс (Алматы-2002) материалдарында, 2-Халыкаралык встсринарлык, конгресс (Алматы-2003) материалдарында, К^з YAY-нщ патологиялык анатомия жоне паразитология кафедрасында (Алматы-2003), К,аз МРЗИ-щ кызыметкерлершщ зертхана аралык жиналысында (Алматы-2004), К,аз YAY-híh кызыметкерлершщ кафедра аралыкжиначыеында (Алматы-2004) каралып, таткыланды.

К,Р АШМ встеринариялык Департамент! 2001 жылдыц 9 акпанында 6ckítkch топшшвды преципитациялаушы кан сарысуынын, техникалык кужаттарында (дайындау жонс кддагалау туралы нускау, техникалык шартгары, колдану туралы од1стеме) жарык кордь

Зерттеу нэтижелершщ жариялануы. Дисссртацияньщ такырыбы бойынша 8 гылыми жумыс жарык корд1, оньщ шшдс К,азакстан Республикасыньщ Улттык патентпк всдомствосынын 1 Алдын ала патснт1, 1 Авторлак куолт жонс К,Р АШМ жанындагы ветсринариялык Дспартаментшдс бсктлген нормативт1к-техникалык кужаттар.

Жумыстьщ ko.icmí мен курылымы. Дисссртациялык жумыс компьютермсн тершген (Word редакторы, Times kaz шрифтц 14 opin колс\п, б1рлж интервал) 124 беттсн турады. Клркпсдсн, одеби шолудан, оз1нд1к зерттеулерден, корытындыдан, OHflipicTÍK усыныстардан, 215 елдеп жоне шетелдеп авторлардан алынган, колданылган одебиеттср tí3ímíhch, 11 ксстеден, 3 сурсттсн куралган.

НЕПЗП Б0Л1М

1. Крлдаиылган материалдар мен од1стер

Тожршбел1к жумыстар 1995-1998 жьшдары Кдзактыц гылыми зерттеу малдор1герл1к инетитутынын, биохимия жоне микробиология, вирусология жоне иммунология зертханаларында, 2000-2003 жылдары Кдзактыц ¥лттык Аграрлык Университет! нщ вироздарга карсы зсртханасында жоне Алматы обылысыныд шаруашылыктарында жургтзшдь

Микроорганизмдср: Bac.anthracis-тщ СТИ-1, 55-ВНИИВВиМ, Це н конски идщ 2-nii вакциначык штаммдары жоне Bac.antracoidcs, Bac.ccreus, Bac.megaterium жапган топалац штаммдары.

Кррекпк орталар: 2-3% ет пептон агары рН-7,2-7,5; ет пептон сорпасы рН-7,2-7,5; протсктивт1 антигенда алу уипн арнайы кррекпк ортатар (Г.В.Дунаев [1972], В.А.Доценколар [1979] бойыншажэнс турленд1рген).

Препараттар: Коммерциялык топалац кан сарысуы 54, 57, 53-iiií сериялар (Орлов биофабрикасыньщ), тож1рибедеп ТПК,С-ры. Топалацнын, стандартты антигсндер1 1,12,23,32 (Орлов биофабрикасыныц) жоне 03ÍMÍ3 оз1рлеген 1 сериялар. Cay жонс

топалацмсн ауырган мал тсрьлсршен, ор турл1 агзалардан оз1рленгсн экстракталар.

Ертндиер: 0,9%-Ti х л орлы натрий сртндкп (физиологиялык) pH 7.2-7,4; 5%-т\ карбол кышкылы; 10 жонс 30%-Ti хлорлы кальций ертндга; 10%-Ti cipKc кь1шкылды натрий ертнд1а; 5%-Ti хлорамин; 0,5%-Ti натрий пирофосфат ертнд1с1 .

Аспаптар мен приборлар: МБИ маркасындагы биологиялык микроскоп; темпсратурасы 36-37°С термостат; температурасы 2-4°С муздаткыш; МСТ 9586-75 вертикальды автоклавы; В-В02 типшдеп торсионды таразылар; вакуумды соргыш аппарат; шутель-аппарат.

Жануарлар: Зерттеу жумысы барысында салмагы ксмшдс 350 кг болатын 14 жылкы; 201 тещз шошкалары, 27 коян пайдаланылды.

бешдердеп Tipi спора санын И.П. Ашмарин мен A.A. Воробьев [1962] одш бойынша аныктадык.

Топалацныц бактсрийялык, стандартты антигенш (БСА) 03iMi3 оз1рлеген кезде продуцент ретшде 55-ВНИИВВиМ штаммын крлдандык. Эз1рлеу одкп биоонд]р1стсп коммерциялык бактсрийялык, стандартты антигеншщ тосипмен журпз1.тд1.

Штаммдардьщ вегетативи ociHiH алу жоне т.б касисттсрш тексеру кезшде Heri3iHeH колданылган корект1к орталарды оз1рлеу, стсрильдеу, шыны ыдыстарды тож1рибс барысында даярлау Н.С.Егорова [1976] бойынша журпзшдт

Топалац крздырушыларынан споралы жоне вегстативп осшдср алу. Всгетатигт осшдерд1 топалац штаммдарын термостатта 3б-37°с-де ЕПА-да 22-24 саг инкубациялау аркылы алдык Концентрацияланган BcrcTaTHBTi ociH суспензияларын томендепдей алдык,: ЕПС-гы осшнщ жалпы колемше 0,2% калий кнасцыларын костык, Квасцыларды 4%-Ti cpiTii-ui туршде ор 95,0 см3-ке 0,5 с.м3-тан костык, Крспаны 20-30 мин тундырып ,сифон ныц комспмен бетщдеп болтн алып тастадык Споралы ocirmi тегпктж вегетатинп ociHzii термостатта 36-37°С-де ЕПА-да 96-144 саг инкубациялау, кешн стсрильдд физиологиялык сртнд1мен шайып, керекп концентрацияга дейш езу аркьшы алдык. Концентрацияны Л.А.Тарассничтщ стандарт коюлышньщ комспмсн аныктадык

Алынган вегстативт1 жоне споралы осшдердщ тазалыгын тексеруде жалпы микробиологиялык од ¡стер колданылды.

Преципитациялаушы кан сарысуындагы фенолдыц калдык колемш жоне ЕПС мен ЕПА-дьщ сапасын аныктауды М.А.Бабичтщ [1970] одгамен журпздж.

Протективт1 антигснд1 адсорбциялау кезшде колданылган алюминиидщ сулы тотыгыньщ коллойдты сртшд!сшщ сапасын З.А.Агапова [1970] 0Д1с1мен аныктадык

Арнайы KopeKTiK орталарды оз1рлеу кезшде колданылган вика тукымыныц гидролизатын Т.С.Кодошников [1972] бойынша

ез1рледж. К,орытылу мелшерш триптофан реакциясымен аныктадык. Дайындалган коректж орталардыц рН-7,2-7,6 келт1рш Зейтцстщ СФ типшдсп cy3rici аркылы стсрильдеп, KepcKTi мелшердеп стерильд1 колбаларга куйып пайдаландык-

Антракстыц ociHiHiH эр см3-гы Tipi бактерия санын Кохтыц OÄici бойынша аныктадык,.

Цснконскийдщ 2 вакциналык штаммыныц тсщз шошкдлары ушш DCL-100 дозасын аныьсгау. Ол уиин Ценковскйдщ 2-nii вакциналык; штаммын ЕПС-да ecipin, тазалыгын, тел1мдшгш TeKcepreciH тартаковскийдагы ЕПА-га, споралык ociH алу ушш, себшд1 жасап термостаткэ 36,6°С койдык Эр тоул1к сайын микроскоптыц комепмен езшген тамшы немесе шнген тамшыда жене Ауески едю1мен есшнщ спора тузуш тексерш отырамыз. Спора 6-7 тэулжтерде 100% жетедь Осыдан соц оащц стсрильд! физиологиялык ертшд1мен шайып алып, эр см3 спора санын Мемшекетпк кддагалау институтыныц 10 стандарт коюлыгыньщ комепмен, стерильд1 физиологиялык ертщщмен езе отырып 100 млн топалац спорасына жетюздж. Осы колсмнен керскп мелшерд1 алып (ец аз спора санынан бастап) тэж1рибеге алынган тещз шошкэ тобындагы барлык малга уыттылышн аныктадык, ол 200 мыц Ценковскйдщ 2-nii вакциналык штаммыныц спорасы болды.

Зсрттелшетш сынамалардан Асколи реакциясы ушш экстракта оз1рлсу. Жаца TepiHi кэйшымен усакгап турап (3x3 мм) устше 1 фамга 10 см3 кдтынасында физиологаялык ершцщ куямыз. Экстрацияны 10-15 мин кайнатумен (термопреципитация) не 8-10°С-кд 16-20 сагаткц крю аркылы (салкын одк) отк1зд1к. Аталган уакыт откесш экстрактаны молдорленгенше асбест макгасы не лигнин аркылы суздос Макганыц кдлындыгы 1 -2 саг калемщде мецщр экстракта алуга мумкщщк беру керек.

Tepi жонс жун шиюзаттарын (кспт1ршгсн, муздатылган, кургак туздалган, ылгалды туздалган) белек-болек автоклавта залалсыздандырдык. Сынамаларды 1,5 атм 30 мин немесе 1 атм 1 саг келемшде стерильизациядан етюздж.

Залалсыздандыру аякталгасын сынамаларды мукцят (3x3 мм) автоматтандырылган курылгымен, не колмен усактадык, терщеп жун кайшымен алдын ала кцылып тасталынды. Сынама негурлым усакталып туралса, антиген согурлым толык экстракцияга туседь

Сынамаларды нем1рлеп белек-болек шыны ыдыстарга 1 г-нан салдык та устше 0,3 % кристалды карбол кышкылы бар 10 см3 физиологиялык ерт!нд1 куйдык- Экстракцияны 16-20 сагатта 15-16 °С отизд1к. Алынган экстрактаны диаметр! 39 мм болатын сузпге с алынган асбест макгасы аркылы, толык, мавдрленгенше сузш алдык. Егер фильтрат модщр болмаса кдйта суздпс.

К,ургактай жене ылгалды туздалган сынамаларды Асколи реакциясында тексеру кезшде ТПК,С-ныц тыгыздыгын арттыру ушш 3-4 % химиялык таза натрий хлор ид ¡н костык-

Патологиялык материалдан экстракта оз1рлегенде жаца патматериалды 18-20 саг тсрмостатка койып, жаца смсстсрщ б!рдсн экстракцияга койдык- Экстракциялауды ею одшпен журпздж: саткын жоне ыстык-

Ыстык од!с. Зсрттелшетш патологиялык материатдыц кссшдЬсрш (1-2 гр) шыны ыдыска сатып устше 1:10 кдтынасында физиологиялык сртцщ куйдык- 30-40 мин су моншасында кэйнатылды.

Суык одю. Патологиялык материатды (1-2 гр) ¡шшдс кумы бар ступкада усактадык. Шыны ыдыскд салып устше 1:10 кдтынасында карболданган (0,3%-т1) физиологиялык ертнд1 куйдык- Сузу жогарыда корсетшгендей журпзшд1.

Экстракталарды оз1рлеу барысында оларды ном1рлсп, сынаматардыц шатыспауын катац кадагатап отырдык-

Крлданылатын Вае.ап1Ьгас!я штаммдарыньщ культуральды, морфологиялык жонс биологиялык касиеттерше байланысты ажырату жаты биологиялык одктермен журпзшдь

Продуцснт-жануарларды иньекдиялау одга, инъскциялау орнын оцдеу. Антигендсрд1 инъскциялау зерттеу жумысыныц барысында нспзшен куре тамырга, тер1 астына, булшык етке енпзу аркылы журпзицц. Инъекция стсрильд1 встсринарлык багыттагы шыны шприцтердщ (арнаулы инелер1 бар), б1р рст колданылатын медициначык шприцтердщ комепмен аткарылды. Улкен колемде антиген турлерщ енпзу керек болганда Жанэ шпришн, медицинатык б1р рст колданылатын 200 см3-тык шприцтсрд1 арнаулы монтаж жасау аркылы колдандык-

Инъекциялау орныныц жунш кайшыныц комепмен киып, керек жагдайда устарамсн тазатап, антиген енпзер алдына 70° этил спирпмен немесс 5% йодтыц ертшдгамен он дед ¡к.

Продуцент-жануарлардан сынама уинн жоне ощир1спк максатга кан ату. Жануарларды гипфиммундсу кезщдс ор турл1 тексеру максатында аз молшердсп канды Бабров инсстщ комепмен куре тамырдан, стсрилвд пробиркатарга ачдык, Алынган канды 3-4 саг термостатга устап, кешн 18-20 сагатка саткын жерге койдык- Уакыт откссш бетшдеп болшген кан сарысуын болек пробиркага куйып алып, пайдаландык-

Гипериммундеу аякталгасын (10-14 тоулжтсн соц) кан атар атдында жьшкыларды 12 саг аш устаймыз, судан шектегсшм1з жок-Дсне кызуы калыпты продуценттерден 15-20 липрлж шыны ыдыстарга б1рщци морте атганда ор кг-нан 0,8 см3 колемшде, катгандарында 16,0 см3 колемшде кан атдык. 0нд1р1ст1к максаттагы кдн арнаулы ветеринарлык сырткы диаметр! 7 мм, ¡шюс! 5,5 мм болатын инемен жабдыктатган резина шланганьщ кемепмен улкен шыны ыдыстарга алынды. К^н сарысуын канды цитрациялау, сеператорлау жоне плазмасын дефибринизациялау аркылы белш алдык-

К,ургатылган, жан,а жэнс муздатылган тер1 шшазаты мен патологиялык материалды текссру кезшде реакцияны 10-12 минуттан кейш 15 минут аратыгында, кургатылып туздалган шиюзатты тексеру кезшде — 30 минуттан кейш, ылгалды туздалган шигазатты тексергснде -1 сагаттан кейш, патологиялык, материалды тсксергенде 1-2 минуттан кешн окыдык. Реакция ей компоненттщ косылган жершде айтылган уакытта акшыл-сур сакина пайда болса оц деп (+), бодмаса тср!с (-) деп окылды. Егер анык емес сакина болса куд1кп (+-) деп саналды.

Сынамаларды тексеру кезшде косымша кздагалаулар койылды.

1. ТПК.С + БСА (оц реакция кезшде сакина 1 минутка дешн уакытта сакина пайда болуы ттс).

2. Код1мп кдн сарысуы + БСА (реакция тер1с болуы шарт).

3. Физиологиялык ертнд1 + ТПК.С (реакция терю болуы шарт)

Даярланган ТПК,С-ыньщ сапасын текссру кез1нде томендегтдей

кадагалаулар койылды.

1. Тож1рибсдсп ТПК.С + БСА (5-6 сериямсн) реакция 1 минутка дейшп уакытта оц болуы шарт.

2. Тож1рибсдсп ТПЬСР + топалацмен ауырган малтерешен (3-4 сынама) оз1рленген экстракта (реакция 2 минутка дейшп уакытта оц батуы шарт).

Диффузды преципитация рсакциясын (ДПР) кою тост: Ец ыцгайлысы агардагы гельдеп косарланган диффузияга непзделген Ухтерлони одга.

Мол1меттерд1 статистикалык овдсуд1 Е.К.Мсркурьснпц [1970] од1с1мен журпздж.

2 ЗЕРТТЕУ ЖУМЫСТАРЫНЫН, НЭТИЖЕС1

2.1 Продуцент-жануарларды иммундеуин антигеидерд! тавдау

Вас.апШгаав-тщ (М-71; СТИ-1; 55-ВНИИВВиМ; 34Р2) ор турл! штаммдарыныц преципитациялык антигенд1к курамын зертгей келе

A.А.Маничев [1996] олардыц курам ын да Асколи рсакциясыньтц нспз! болатын термолобилд1 жоне термотуракты антигендердщ барын аныктады. Деректерд1 ескере отырып б1з зерттеу барысында иммундеуин антигендердщ штамм-продуценп ретшде Вас. ап1Ьгас15-т1ц вакциналык 55-ВНИИВВиМ жоне СТИ-1 штаммдарын колдануды жон корд ¡к. Алдымен тацдап алынган 55-ВНИИВВиМ мен СТИ-1 штаммдарыныц протективт1 антиген болу касиет1 аныкталды. Оларды ос1ру ушш Г.В. Дунасвтыц [1972] №5 белокты, №11 белоксыз,

B.А. Доцснконыц [1979] №1 белоксыз коректж орталары жоне №11А, №1А белоксыз коректж орталарга оз1м1зше озгерктер енпзу аркьшы колдандык. Ценковскийдщ 2 штаммыныц 100% споралы осшш уытты штамм ретшде колдандык. Алдын-ала зерттеуден оныц тец1з шошкаларына БСИОО 200 мыц спора екеш аныкталды.

Пайдаланылган корекпк орталардыц курамы:

№5 белокты корекпк орта:

Вика тукымдарынын гидролизаты - 50 см3

Жылкы кдн сарысуы - 15 см3

Натрий бикорбанаты - 0,65 гр.

Глюкоза - 0,5 гр.

рН - 7,2-7,4

№11 белоксыз корекпк орта: 60 см3

Вика тукымдарынын; гидролизаты -

Дистиллденген су - 40 см3

Пептон - 1 гр.

Глюкоза - 0,5 гр.

Натрий бикорбанаты - 0,7 гр.

РН - 7,2-7,4

№1 белоксыз корекпк орта:

199 корекпк орта - 188 см3

Дистиллденген су - 160 см3

10% желатин - 10 см3

Натрий бикорбанаты - 2,1 гр.

Глюкоза - 1,5 гр.

Активтелшген ком1р - 0,35 гр.

РН - 7,2-7,4

втпзшс турленд1рген №11 А корекпк ортасы:

Вика тукымдарыньщ гидролизаты - 60 см3

Дистиллденген су - 40 см3

Пептон - 1 гр.

Глюкоза - 0,5 гр.

Натрий бикорбанаты - 0,7 гр.

Жылкы кдн сарысуы - 20%.

рН - 7,2-7,4

0з1м1зшс турленд1рген №1 А корекпк ортасы:

199 корекпк орта - 180 см3

Пептон - 3 гр.

Натрий бикорбанаты - 2,1 гр.

Глюкоза - 1 гр

10% желатин - 10 см3

Активтелшген ко\«р - 0,35 гр.

Дистиллденген су - 160 см3

Жылкы кан сарысуы - 20%.

рН - 7,2-7,4

Эр 100см3 корекпк ортага штамм-продуценттердщ ет сорпасындагы вегетативп осшшщ 500.000 т1р1 клеткаларын екпк. Епндшер 22-24 сагат 36-37° термостатта еарыдт Барлык есшдшер Зейтц сузпшшщ СФ пластинкаларьшда алдын ала центрифугланбаган кушнде сузшдь

Сузшдшердщ тазалыгы боялмаган жугындыларда микроскоп аркылы жэне Граммен боялган жугындыларда тексершда. Сонымен катар ЕПС мен ЕПА-га егшдалер жасалынды. Протективт! антигсщц адсорбциялау Ю.В. Езепчуюгщ [1968] од1а бойынша журпзшдь Эр корекпк ортадан сузшп алынып, адсорбцияланган антигенге 10 тещз шошкаларынан туратын (эр штамм-продуцентке 5 тенДз шошкдсынан) топтар жэнс 7 тещз шошкаларынан кддагалау тобы Курылды. Антигсндер тещз шошкаларына 3 рст: 1,2 жоне Зсм3 колсмшдс арасында 7 тэутк салып курсак аумагыныц тср1 астына сг1тд1. Сонгы иммундсуден 10 тэул1к отксн соц барлык зсрттеудеп жоне кадагалау тобындагы тещз шошкэлары уытты штаммсн егщщ. Барлык тещз шошкаларына 15 тоулж бойы бакылау журпздж. Тож1рибе 57 тещз шошкасында жупзщц. Орташа керсетк1штер1 1 кестеде керсетшген.

1 кесте-Зейтц сузпсш пайдалану аркылы РА-д1 сузуге корекпк ортанын курамыныц эсер!

Антиген турлер1 Тец1з шошкдларыныц саны (орташа кор-сеткштер1) Теж1рибе нетижес1 Алыанган мвлшетп статистик алы к, оцдеу

"Пр1 калганы (орташа кер-сетк!штен) елген1 (орташа кврсет-к1штер1)

1. Хй5 белокты к,орект« ортадан алынган 20% алюминий суды тотыгымен адсорбцияланган протективт! антиген (РА) 10 6 4 М-10 10 ± 1,56 Р > 0,95

2. №11 беложсыз корекпк ортадан алынган 20% алюминий сулы тотыгымен адсорбцияланган протективт1 антиген 10 10 М-10 10 ±3,33 Р < 0,95

3. № 1 белоксыз корекпк ортадан алынган 20% алюминий сулы тотыгымен адсорбциялангаи РА 10 1 9 М-10 10 ±2,85 Р < 0,95

4. Озш1зше турленд1рген Ка 1 А корекпк ортадан алынган 20% алюминий сулы тотыгымен адсорбциялангаи РА 10 7 3 М-10 10 ±2,03 Р > 0,95

5. вз1м1зше турленд1рген Ла 1 А Корекпк ортадан алынган 20% алюминий сулы тотыгымен адсорбциялангаи РА 10 9 1 М-10 10 ¿2,85 Р < 0,95

Кдцагалау тобындагы жет1 тсщз шошкдлары 16-48 сагат ¡инндс олд1. 2 топтагы барлык, тещз шошкалары да олд1. Бул Г.В. Дунае нтщ [1972] деректер1мен сойкес келдь Ойтксш бслоксыз корекпк ортада оскен протсктшт антигенд1 Зсйтд сузпнпмсн сузу кезшде барльщ РА сузг1ште тутылып калады. Ал жылкы кан сарысуын косу протсктшш антигеннщ сузпштсн отуше оны турактандыру аркылы осср стедь Оган 1,4 жонс 5 топтарга колданылган антигендерден атынган дерсктер куо. Ал 3 жоне 5 топтагы антигендердщ нотижеа корсктж ортаньщ курамына 199 корекпк орта, активтелшген ко.\йр жоне желатин косу протсктшт антигеннщ коп ж и наклал у ы на жаксы осср стстшщ белпс1.

Протективт1 антигснд1 алу кезшде пайдатанылган корекпк орталардын экономикалык тшмдшшн оларды колданып атынган РА-мен иммунделшген тещз шошкаларыньщ аман калу корсет1ипмен (%) корекпк орта компонентерше кеткен шыгынды (тенге) математикалык ондеу аркылы аныктадык (2 кесте).

2 кестс-Протсктивп антиген алу кезшде пайдатанылган турл1 корекпк ортатардыц колданудын, экономикатык тшмдшп (ор 1000 см3-ке)

Корегаж орпшардиц Курамы Керекп мелшер1 Багасы (тен) Жалпы багасы (тен.) Алынган РА-мен ег-ген тешз шош-н Т1р1 кз-уы (%) Эко. ТшмдЫп <%)

№ 5 белокгы |_Вика тукым.гидрол. 770см3 770 761,3 60 60

Жылкы кан сарысуы 231см' 462

Натий бикорбанаты 10,01гр 20,02

Глюкоза 7,7 гр 2,31

ЗЕЙТЦ СУЗПС1 1 дана 100

№11 белоксыз Вика тукым.гидрол. 600см3 600 1158,7 0 0,9

Дистиллденген су 400см3 20

Пептон 110 гр 90

Глюкоза 5 гр 1,5

Натий бикорбанаты 7гр 14

КЕРАМИ.СУЗП 4 дана 1000

№1 бслоксыз 199 кор.орта 526см' 263 1304,6 10 9,9

Дистиллденген су 448см' 22 4

10%-т1 желатин 28см' 5,6

Натий бикорбанаты 5,88гр 11,76

Глюкоза 1,4гр 0,42

Лкшкг.гамр 0,98гр 1,47

КЕРЛМИ.СУЗП 4 дана 1000

№11А озшпше турлен- Д1Р1ЛГСН Вика тукым.гидрол. 516см3 51,6 299,5 70 69,8

Дистиллденген су ?44см' 17,2

Пептон 8,6гр 77,4

Глюкоза 4.3гр 1,29

Натий бикорбанаты 6,02гр 12,04

Жылкы кан сарысуы 20см" 40

ЗЕИТЦ СУЗПС! 1 дана 100

199 крр.орта 432см' 216

№1А Пептон 7,2гр 64,8

631М13ШС Натай бикорбанаты 5,04гр 10,08

турлен- Глюкоза 24гр 7,2 759,3

дфшген 10%-т1 желатин 24см' 4,8 90 90,09

Активт.кошр 0,84гр 1,26

Дистиллденген су 384см> 19,2

Жылкы кзн сарысуы 168см1 336

ЗЕИТЦ СУЗПС1 1 дана 100

Нотижесшдс оз1\пзшс озгсртшгсн №1А корекпк ортага кстстш шыгын (759,3 тен) №11А корекпк ортасына кететш шыгыннан (299,5 тсн) жогары болганымсн, алынган РА-нщ тшмдипп жогары скснж корт отырмыз. Осы тургыдан Караганда №1А корекпк ортаны топалац штаммдарын оЫрш, РА-д1 болш алу максатында пайдаланудын экономикалык тшмдипп 90,09% екенш аныктадык В.А.Додснконьщ [1979] корекпк ортасына оз1\пзше озгсртулер енпзу аркылы тел1мд1 жонс белсенд1 ТПК,С алу максатында иммундеупп антиген репнде кодданылатын РА-д1 сузу кезвде одеттс кодцанылатын пайдаланылуы кыиьш, кымбат керамикалык сузгшерд1 арзан Зейтц сузпамен алмастыруга мумкшдк жасадык- Осы одюпен алынган РА иммунделшген тож1рибсдсп тсц1з шошкдларыныц 90% уытты штаммен зардаптаганнан кешн аман кадды (1 сурст).

90 80 70 60 50 40 30 20 10

2 3 4 5 6

№ 1- э оелокгы корекпк орта № 2- 11 белоксыз корекпк орта №3-1 белоксыз корекпк орта № 4- Оз1м1зше турленд1рген 11А корекпк ортасы № 5- Оз1\пзше турленд1рген 1А корекпк ортасы № 6- Кддагалау тобы

1 сурет-Арнайы корекпк орта курамыныц Зейтц сузпа аркылы протективп антигеннщ етуше есер1

Осы тэжрибеден кейш иммундеу ушш колданылатын антигендерд1 салыстырмалы зерттеуд1 жатгастырдык. 55-ВНИИВВиМ мен СТИ-1 штаммдарынан темендепдей иммундеуип антиген турлерш даярладык-

а) Штаммдардыц 22-24 сагаттьщ вегетативт1 еспйн

б) Штаммдардыц нативт1 протективп антигенш

в)Штаммдардан алынган протективт1 антигенд1 20%-т1 алюминийдщ сулы тотыгында адсорбциялау аркылы дайындалган антигендер.

г)Штаммдардан алынган протективт1 антигенд1 0,2%-т1 формалинмен турактандыру аркылы алынган антигендер

К,олданылатын антигендердщ теж1рибедеп продуцент — жануарлардыц агзасына типзетш зардабы тешз шошкаларында аньщталды. Ол ушш ер антигешпц турше 4 тещз шошк.асынан туратын топ курдык,- Барлыгы 32 тешз шошкдлары пайдаланылды.

Протектшш антигещц оз1рлсу жогарыда керсетшген од1спен журпзшдь Вегетативп есш (эр см3-да 2-3 млн т1р1 клетка бар) жэне РА турлер1 тер! астына арасына 3 кун салынып 3 мэрте 1,2 жене 3 см3-тан енпзшдк Тэж1рибедеп тещз шошкдларын 15 теулж бойы бакыладык- Тож1рибе нетижеа 3 кестеде.

3 кесте- Крлданылатын иммундеуип антигендердщ зардаптылыгы

Штамм тур1 Антигеннщ турлер1 Тещз шошкаларыныц саны

тэж1рибедеп 15 тэулнс бакылаудан сон

СТИ-1 1. Вегетатшт осш 4 4

2. Нативи РА 4 4

3. 20% алю-ц сулы то-н адс-н РА 4 4

4. 0,2% формолинмен турактандырылган РА 4 0

55- внии ВВиМ 5. Вегетативп есш 4 4

6. Нативи РА 4 4

7. 20% алюминйдщ сулы тотыгымен адсосорбця-н РА 4 4

В. 0,2% формолинмен турактандырылган РА 4 0

Тэхарибе нэтижесшен байкаганымыздай 4 жэне 8 топтагы тещз шошкаларыныц 6epi бакылау мерз1мшде елд!, ягни, 0,2% формалинмен РА-д1 турактандыру продуцент-жануар агзасына зиянды эсер стед1. Осыган байланысты бул антиген турлсрш ары карай зерттеуд1 жен деп таппадык. К,олданылган кос штаммда вакцинд1 сондыктан коршаган ортага жэне 6noeHflipic кызыметкерлерше Kayinri болып саналмайды [Н.Г.Ипатенко 1987]. Таццап алынган антигендердщ иммуногещц белсендшп тещз шошкаларында аныкталды. Антигендерд! эз1рлеу жогарыда корсетшген эдютермен журпзшдь Тэж1рибе б1рдей иммундеуип антиген турлер1мен 4 марте кдйталанды. Барлыгы 112 тещз шошкдсы пайдаланылды. Вегстативт! eciH ( эр см3-да 2-3 млн Tipi клетка бар) жэне РА турлер1 Tepi астына арасына 3 кун салынып 3 марте 1,2 жэне 3 см3-тан енпзивд. Соцгы иммундеуден кей1и 15 тэуиктен сон, барлык тож!рибедеп жэне кздагалау тобындагы тещз шошкалары алдын ала титрленген Ценковскийдщ 2-ini вакциналык, штаммымен Tepi астына (200 мьщ спора) егицц. Тэж1рибе нэтижеа 4 кестеде керсетшген.

4 кесге - Крлданылатын иммундеуип антигендердщ иммуногендшш

Штамм -rypi Антиген- II in турлер! Тешз шошкдлары-ныц саны Toxip6He нэтижеа Кддагалау тобы Алынган MoniM-fli статис-к ондеу

(орташа KepceTKimi) Tipi калганы (орташа корсстю-uii) елгеш (орташа керсет-Kiuii) Tipi калганы олгеш

СТИ-1 1. Веге-тативт1 eciH 4 4 0 - 16 М= 4 4 ± 1

2. Нативт1 PA 4 3 1 16 М= 4 4 ±0,7

3. 20% алю-дщ суды тотыг-н адсорбции РА 4 3 1 М= 4 4 ±0,7

55- вниив ВиМ 4. Вегетати Ш1 ОС1Н 4 4 0 16 М= 4 4± 1

5. Натигт РА 4 3 1 М=4 4 ±0,7

6.20% алю-дац сулы тотыгымен адсорбцияланган РА 4 4 0 М=4 4±1

Корш отырганымыздай тек 1,4,6 топтагы антигендер гана жаксы нотиже корсета, калган 2,3,5 топтагы антигендермен иммунделшген тепдз шошкалары уытты штаммен зардаптаудан кейш белгип б1р дорежеде (25%-т1) шыгынга ушырады. Жогарыда журпзшген зерттеулердщ нэтижелерше суйене отырып топаланды дауалауга арналган преципитациялаушы кан сарысуын алу максатында томендегщей антиген турлерш 1р1 продуцентерд1 гипериммундеуге пайдалануды жен деп таптык-

а) 22-24 сагаттык СТИ-1 штаммынан алынган вегетатшт ест (куре тамырга)

а) 22-24 сагаттык 55-ВНИИВВиМ штаммынан алынган вегетативт1 есш (курс тамырга)

б) 55-ВНИИВВиМ штаммынан алынган, 20% алюминийдщ сулы тотыгымен адсорбцияланган протективп антиген (тер1 астына)

2.2 Продуцент-жануарлардыц турш тандау

Топалацныц преципитациялык кан сарысуын ещцру кезшде продуцент-жануарларды дурыс тацдаудьщ, алынатын ешмнщ сапасына, озшдж кунына типзетш эсер1 зор. ТПК,С-ын алу кезшде жылкыларды, коянды, есекп, койды жене т.б мал тулжтерш колданган. Усак малды колданып тел1мд1 ТПК.С алуга болады, белсенд1 кан сарысуын алу ушш узак иммундеуге есекп алган жен, ейткеш топалац бацилласыньщ метаболикалык ешмдерше баска малга Караганда тез1мд1 [С.Е.Беззубец 1927, С.Г.Еолесов., В.Н.Грачев 1955, А.А.Маничев 1996, С.М.Кузнецов 1968]. Б1рак ТПК,С-ын енд1р1стж максатта алу кезшде продуценттердщ б1реушен белшш алынатын кан сарысуыныц

келемш жэне иммудщк жауап беру кабшетш ескерген жен. Осы тур гы дан Караганда продуцент-жануар ретвде ТПК,С алу кезшде ец колайлы мал тулт-жылкы. Иммундеу ушш 3 пен 7 жас аралыгындагы салмагы кем1нде 350 кг болатын жылкьшар алынды. Дурысында еркек малды алган жен. Продуцент жануардыц преципетин тузу касиетш тексеру ушш ipiKTep алдында кан сарысуын белш алып (3-4см3) устше дистиллденген су куямыз. Иммундеу ymiH осы тест кезшде TyiíipmiKTcpi ipi, пайда болу уакыты аз болган донорды жарамды деп санаймыз. 1р1ктелшген малдарды 6ip ай карантинде устадык. Осы мерз1м ¿иинде оларды эр турл1 ауруларга тексердж. Cay продуцент-жануарларды гипериммундеуден 1 ай бурын 55-ВНИИВВиМ вакцинасымен иммундеуден етк1зд1к.

2.3 Tn¡Mfl¡ гипериммундеу кестесш аныктау

Теж1рибе кез1нде мешинше жаксы нетиже берген иммундеуип антигендерд1 колдана отырып 4 тур л i едшпен гипериммундеу кестесш жасадык. Барлык од i степ продуцентерд1 грундтиммундеу б1рдей журпзшд!, ягни, 55-ВНИИВВиМ штаммыныц споралы ocíhí Tepi астына бес мерте устемелеп егшдь BipiHiiii жэне екшии инъекция арлалыгында 8 тэулж, калган иньекциялар аралыгында 4 тэулж. EKÍHmi иньекциядан бастап Tepi ¡шше 0,1 см3-ден жтберд1к. öciimeri Tipi спора саны 2,5-3,0 млрд. см3.

1 едю. СТИ-1-штаммыньщ 22-24 сагаттык вегетативт1 gcíhíh арасына 3-4 тэугпк салып удемелеп ecin отыратын мелшермен куре тамырга. Вегетативтт есшдеп микроб клеткасыныц саны 2,0-3,0 млрд. см3. Тэж1рибеге 3 жылкы алынды. Барлыгы еркек малдар. Алдын ала тексеру нэтижеанде жукдалы аурулардан cay ckchí аныкталды. Кдн сарысуы орташа алганда уш жылкыда 22 иньекциядан кейш белсещц болды.

2 одю. 55-ВНИИВВиМ штаммыньщ 22-24 сагаттык вегетативт1 eciHi. Ery мелшер1, аралыгы дел СТИ-1 штаммыныюндей. Тэж1рибеге 3 еркек жылкы алынды. Кдн сарысуы орташа алганда уш жылкыда 20 иньекциядан кейш белсещи болды.

3 едк. СТИ-1 мен 55-ВНИИВВиМ штаммдарыныц 22-24 сагаттык вегетативт1 осшдерш ксзектест1ре куре тамырга егу. Алынган малдардыц 6epi еркек, алдын ала жукпалы ауруларга тексершген. Ery молшер1, аралыгы жогаргы ею эдютегщей. Кдн сарысуы орташа алганда терт жылкыда 19 иньекциядан кейш бслсещц болды.

4 эдю. Бул кестеде дел З-mi эдютепдей тек гипериммундеу кезшде продуцент жануарларга косымша арасына 7 тэулж салып Tepi

астына 20 см3-тен 55-ВНИИВВиМ штаммынан алынып 20% алюминийдщ сулы тотыгымен адсорбцияланган протективт1 антиген егинп отырды. Крн сарысуы орташа алганда торт жы.жыда 16 инъекциядан кейш белсенд1 болды.

Продуцент-малдардыц канындагы преципитиногендердщ молшершщ кебекмн аныктау максатында 10-11 инъекциядан ксйш Асколи реакциясында кан сарысуларын тексере бастадык. К,ан сарысуын стандартты бактерийялык топалан антигешмен жэне топалацмен ауырган малдардыц тер1сшщ 3-4 экстракталарымен реакция кою аркылы тексердж. Егер реакция стандартты топалац антигешмен 1 мин ¡шшде, топалац тер1 экстракталарымен 2-3 минутка дейшп уакытта етсе гипериммундеуд1 токтаттык (ТПК,С-ныц белсенд1 болу мерз1м1 тож1рибедеп жануарлардыц орташа корсетыцпмен бершген). 1314 инъекциядан кейш тэж1рибедеп продуцент малдардыц канында преципитиногендер пайда бола бастаганы аныкталды. Ал продуценттердщ кобшде 15-16 инъекциялардан (2,4 одктер) бастап кан сарысуы жсткинкп дсцгейде белсенд1 болды. К,ан сарысуы белевши болган малдардан соцгы инъекциядан ксйш 10-14 теул1к откен соц кан алып, салыстырмалы тексеруден отюздж.

К,аз1рп кезде Ресейдеп Орлов фабрикасыныц А.А.Маничев [1996] тосшмен ТПК,С-ын енд1ру ушш гипериммундеуге кеткен уакыттан (21 инъекция) бгздщ кестемен 4 од1с бойынша ещцршген ТПК,С-ын алуга кеткен уакыт (16 инъекция) 15-20 тоулжке аз. 0нд1р1ст1к максатта ТПК,С-ын алу кезшде б1рнеше ондаган жануарларды устау керекттн жэне ер продуцентгщ б1р теул1ктег1 азыгына кететш шыгынын ескеретш болсак, гипериммундсу мсрз1мш кыскарту диагностикумныц озшдж кунын томендетудщ кепМ. Гипериммундеу мерз1мш кыскартудыц экономикалык тшмдшп 80,9%.

2.4 Даярланган жоне онд1р1ст!к преципитациялаушы к,ан сарысуларын салыстырмалы турде зерттеу

Эр турл1 иммундеупи антигендерд1 колданып даярланган преципитациялаушы топалац кан сарысуы мен коммерциялык преципитациялаушы топалац кан сарысуыныц белсендшп мен тел1мд1лтн салыстырмалы турде карастырдык- Реакция Асколи бойынша преципитация од1с1мен журпзыдь Б1рдсй компоненттермен реакция 3-5 марте койылды, мэл1меттердщ орташа керсетьаштер1 6-7 кестелерде керсетшген (мэл1меттер секундпен бершген).

6 кесте-Эр турл1 сдастермсн алынган жоне коммсрциялык, топалац прсципитациялаушы кдн сарьгсуларын ы ц белсендшт

Эр турл! жолмен алынган антигендер Коммерциялык, ТПК.С (Орлов) Эр турл1 од1сгермен даярлангап ТПК.С

54 сер. 57 сер. 53 сер. 1-едк; 2-ед1с 3-вдк: 4-еди;

Топ-ц ста-ты бакт-к антиг-дср1 1 серия (Орлов) 38+1,15 35+1,29 35+1,73 35+ 1,0 35+2,54 35+2,8 25±2,04

12 серия (Орлов) 35 ±1,9 40+4,08 38±2,85 35±1,68 37±2,51 38 ±1,0 30+2,85

3 серия (Оздш.) 42 ±4,8 35 ±3,6 37±2,48 35±3,51 35±2,85 40±3,26 35±2,89

Ауырган мал тер-ц экс-ры 11 серия (кой) 40±1,77 45+1,77 43±1,47 45±2,54 40±2,54 40±2,51 35±0,64

2 серия (кой) 60±4,56 60+3,34 60±4,56 60±6,25 60 ±7,9 55±5,97 47±2,85

7 серия (еши) 45+2,89 50 ±5,4 50 ±5,0 60±11,3 55 ±5,4 50+4,08 45±2,88

15 серия (коян) 50±7,64 60±13,8 55±2,04 55±2,89 50±3,48 50 ±9,7 40+2,54

Топала-н олген КОЯН-Ц апа-ныц эк-ар Бауыр 37+1,47 35 +1,0 37+1,95 35+2,34 35+2,89 37±3,34 30+2,85

Кекбауыр 38+2,04 35+2,12 40 ±3,0 40+2,44 38+4,3 35+1,52 30±0,64

Буйрек 40+3,24 45+3,16 38+2,54 45+3,24 50+3,51 40+3,39 35+2,89

7 кесте - Эр тур л i эдштермен алынган жене коммерциялык топалацныц преципитациялаушы кан сарысуыныц тел1мдп1п

Ор "i-yp/ii жолмен алынган антиген-дер Коммерциялык, ТПК.С (Орлов) Ор тур л i ед ¡стер мен даярланган преципитациялаушы ТПК,С

54 серия 57 серия 53 серия 1-елзс 3-ед1с 4-едю

Cay мат Tepicinen езфленген экстракталар 3 (ной) - - - - - - -

5 (№Й) - - - - - - -

I (ешкО - - - - - - -

10 (ipi кара) - - - - - - -

Жалран топалац мик-ры (ант-ер топ-ньщ бакт-лык стан-ты анти-н алу тосп-ен жасалынды) Пае. cereus + + - + + - + - -

Вас. ajithracoides н— +— + ■ - _

Вас. megatenum — - - - - - -

Ескерту: (+) — оц реакция; (—) — реакция 15 минутка дешн жок; (Н—) — KyaiKTi реакция.

Кестелерден керш отырганымыздай 2 жене 4 едктермен алынган топалацныц преципитациялаушы кан сарысулары коммерциялык топалацныц преципитациялаушы кан сарысуларынан белсендшп мен тсуимдшп жагынан кем туспсйдь Тек 4 эд1спен кыска мерз1мде продуценттерд1 гипериммундеуге болатыны, онд1р1лген ТПК,С тсжрибслер жузшде белсенд! жене тсл1мд1 екет аныкталды.

Даярланган ТПК,С-ныц сакталу мерз1мше байланысты белсендштнщ темендеуш 4 едюпен даярланган 3,5,6 серияларды ер уш-алты айда топалацныц стандартты бактерийялык антигсндсршщ б1рнеше серияларымен жоне топалацмен ауырып елген мал тершершен оз1рлснген экстракталармен Асколи бойынша преципитация реакциясын кою аркылы тексерд1к. Эр уакытта реакция б1рдей компоненттермен 3-5 мерте койылды. Алынган мол!меттерд1 еаралай келе уакыт оте тож1рибедеп ТПК,С-ньщ белсендшп орта есеппен 20 айда 11,6 ± 0,71 сек темендегенш аныктадык.

Журпзшген зерттеу жумыстарыныц нетижесшде коршаган орта мен продуцент-малдыц агзасына зияны аз иммундеуцп антигендерд1 пайдаланып топалацныц преципитациялаушы кан сарысуын алудыц жаца технологиясын усындык- Бул кезде ТПК,С-ын алуга кететщ экономикалык шыгындардыц колем1 азайып, жаца иммундеуип антигендермен гипериммундеу кестесшщ аркасында иммундеу уакыты кыскартылды жене теж1рибедеп продуценттер шыгынга ушыраган жок-

55-ВНИИВВиМ штаммыныц споралы осшш грундтиммундеуге, 55-ВНИИВВиМ штаммыныц 22-24 сагаттык вегетативн осшш, осы штаммнан алынган 20% алюминийдщ еулы тотыгымен адсорбцияланган РА жоне СТИ-1-штаммыныц 22-24 сагаттык вегетативт1 есшш гипериммундеуш1 антиген ретшде колданылып алынган топалацныц преципитациялаушы кан сарысуы комиссиялык жэне енд1рют1к сынактан етт1.

Топалацныц преципитациялаушы кан сарысуын алудыц жаца жолына нормативпк-техникалык кужаттар ез1рленш К,Р АШМ ветеринариялык Департаментшде бектлдь

ТУЖЫРЫМДАР

1. Топалацды прсципитациялаушы кан сарысуыныц продуцент!» иммундсуге кажетп протсктинт! антигеннщ озшдж кунын штаммды оарстш арнайы коректж ортатарга 20% калыпты жылкы кан сарысуын косу жоне сузу ушш Зсйтц сузпшш пайдатану аркылы арзандатуга болады, бул кездеп коректж ортаныц курамы протсктивп антигеншц коп жинакталуын жоне болшуш камтамасыз стедь Осы одюпен онд!р!лгсн протективи антигенд! колданудьщ экономикалык тшмдшш 90,09 %.

2. Вас. апЙп^Б-тщ 55-ВНИИВВиМ жоне СТИ-1 штаммдарынан оз^рленген б1р тоулжтж осшдершщ иммуногендтнде айырмашылык жок- 55-ВНИИВВиМ штаммынан алынган протективт! антигеннщ иммуногендт СТИ-1 штаммынан даярланган такылсттсс антигенджшен 25%-ке ж о тары.

3. Вас. апЛгаав-тщ протсктшт антигенш турактандыру ушш продуцент организ!мше зияндылыгына байланысты 0,2% формалин жарамсыз, ал антигенд1 20% алюминийдщ сулы тотыгымен адсорбциялау сапасын арттырып, иммуногендштн жогарлатады.

4. Топалацныц прсципитациялаушы кан сарысуын алу максатында иммундеуип антигендер ретшде Вас.апИ1гас!8-тщ 55-ВНИИВВиМ жоне СТИ-1 штаммдарынан алынган 22-24 сагаттык вегстативт! осшдерш, 55-ВНИИВВиМ штаммынан болшш алынып, 20% алюминийдщ сулы тотыгымен адсорбцияланган протективт! антигенд! пайдалану тшмдь

5. Топлацныц прсципитациялаушы кан сарысуын онд!рктж максатта ату ушш продуцент ретшде сатмагы 350 кг жогары болатын, 3-7 жас арачыгындагы жылкыларды пайдаланып, иммундеу атдында кан сарысуын дистиллденген сумен преципитациялык сынама аркылы тексеру кажет.

6. Продуцент — жылкылардан топатацныц прсципитациялаушы кан сарысуын алу ушш грундтиммундеу ушш 55-ВНИИВВиМ штаммыныц ор см3- де 2,5-3,0 млрд споралы оанш тер1 астына жоне тер! !ш!не егш, гипериммундеу ушш куре тамырга арасына 34 тоушк салып ор см3- де 2-3 млрд т!р! вегстативт! клеткасы бар СТИ-1 жоне 55- ВНИИВВ и М штаммдарыныц вегстативт! осшш устемелеп, 55-ВНИИВВиМ штаммынан алынып 20% алюминийдщ сулы тотыгымен адсорбцияланган протективт! антигенд! арасына жет1 тоул!к сатып тер! астына 20 см3-тан ж1бергенде, сапасы жагынан коммерциялык топлацныц преципитациялаушы кан сарысуынан кем туспейт!н диагностикум алынды жоне бул кезде гипериммундеу мерз1м1 15-20 тоул!кке кыскарады.

7. Усынылган эд1с бойынша даярланган топалацныц преципша-циялаушы кан сарысуыньщ белсендшт мен типмдшт Kaaipri кезде колданылып журген коммерциялык диагаостикумнан кем емес. Жаца технологияныц экономикалык тшмдшп 80,9 %.

0НД1Р1СКЕ УСЫНЫСТАР

1 .Ветеринариялык; зертханаларда пайдалану ушш прсципитациялаушы топалан кан сарысуы усынылды (№ ПВО 08.03.27-2001 TipKey куелт, № 11488 енертабыска бсриген алдын ала патент, № 32515 автордыц куолт).

2.Биологиялык QHflipicKe топлацныц преципитациялаушы кан сарысуын алудыц жаца технологиясы усынылды (нормативт1к-техникалык кужаттар: дайындау жене кадагалау туралы нускау; техникалыкшартгары ТШ 640KP 17286-1910-ЖШС-003-2001; коддану туралы одютсме).

Диссертациялык; жумыстьщ такырыбы бойынша жарык; корген жумыстар Ti3i.vii

1. Ноутиев Н.И Прсципитациялаушы топалац кан сарысуын алу ymiH иммуногенд1 антигенд1 тацдау. Инфекционные и паразитарные болезни с/х животных. Сборник науч. тр. Каз НИВИ. Том 47. Стр.168-171. Алматы 1999.

2. Наутиев Н.И Изыскание методов получения эффективной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки. Первый международный ветеринарный конгресс. Материалы 10-11 октября 2002г. Алматы. Казахстан. Стр.84-86.

3. Ахмедсадыков H.H., Омарбекова У.Ж., Наутиев Н.И., Хусаинов.Д.М Изыскание оптимальных методов получения сибиреязвенного антигена. Первый международный ветеринарный конгресс. Материалы 10-11октября 2002г. Алматы. Казахстан. Стр.79-83.

4 Неутиев Н.И Преципитациялаушы топалац кан сарысуын алу кезшдеп иммундеу од1стср1н жетйвдру. 1здешстер, Нотижелер журналы. 85-89 б. Кезектен тыс саны. Алматы каласы 2003жыл.

5. Неутиев.Н.И Эр турл1 ед1стермен алынган топалацныц преципитациялаушы кан сарысуыньщ тел1мдшп мен бслссндшп. 2-mi халыкдралык ветеринарлык конгресс. 1здешстер, Нотижелер журналы. 59-64 б. Кезектен тыс саны. Кдзакстан. Алматы каласы 2003жыл.

6. Онд1р1спк жсксмснчпк. КР-ныц патента к всдмоствосыныц №5 арнайы бллютеж. бнертабыска бериген алдын ала патент №11488 "Топалацньщ прсципитациялаушы кдн сарысуын алу тосЫ", авторлары: Сайдулдин Т.С; Ахмедсадыков Н.Н ; Ноутиев Н.И жоне т.б.

7. Автордыц куолш. №32515 "Топалацньщ прсципитациялаушы кан сарысуын алу тосип", авторлары: Сайдулдин Т.С; Ахмедсадыков Н.Н; Ноутиев Н.И жоне т.б.

8. "Топалацньщ прсципитациялаушы кан сарысуына" нормативпк-техникалык кужаттар (дайындау жоне кддагалау туралы нускау; тсхникатык,шарттары ТШ 640КР 17286-1910-ЖШС-003-2001; Колдану туралы одктеме). К,урастырушылар: Сайдулдин Т.С; Ахмедсадыков Н.Н; Ноутиев Н.И. КД3 АШМ ветеринариялык Дспартамснтшде 9.01.2001 жылы беыген.

Наутиев Назымбек Ибатуллиевич

"Получение сыворотки для диагностики сибирской язвы

в реакций преципитации" Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

16.00.03-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологиеи и иммунология

РЕЗЮМЕ

Исследования посвящены разработке способа и технологий получения сибиреязвенной сыворотки для реакции преципитации с целью обнаружения преципитиногена в исследуемом материале.

Начальным этапом нашей работы было изыскание наиболее активного иммунизирующего антигена из вакцинных штаммов Вас. агйЬгаЙБ 55- ВНИИВВиМ и СТИ- 1. С этой целью были испытаны следующие варианты антигенов(из каждого выще названных штаммов):

а) Протективный антиген (нативый);

б) Протективный антиген (кенсервированный 0,2% формалином);

в) Протективный антиген (адсорбированный в 20% гидгоксале);

г) Вегетативная культура, в форме взвеси после 22-24 часавого роста на агаре.

Предварительными сравнительными исследованиями было установлено, что накопление и выделение в большом количестве протективного антигена (РА) происходит при выращивании штамма Вас.апШгааБ 55-ВНИИВВиМ.

Далее, получение РА осуществляли по предложеной нами методике. При этом культивирование Вас.апШга^Б проводили на среде В.А.Доценко [1979] с добавлением в нее 20% нормальной лошадиной сыворотки в качестве стабилизатора.

Фильтрацию выращенной культуры производили через СФ Зейтца, вместо используемого ранее керамического фильтра, что удешевляло процесс изготовления РА и повышало его иммуногенность.

С целью усиление проявления действия РА нами испытаны 0,2% раствор формалина и 20% р-р суспензии гидроксала.

В результате проведенных исследований было установлено, что наличие гидроксала оказывало положителный эффект на накопление прсципитинов в крови подопытных животных, это значительно (15-20 дней) сокращало сроки гипериммунизации продуцентов и снижало себестоимость продукции.

С целью повышения специфичности и активности препарата по отдельности и вместе испытывались 22-24 часовые вегетативные культуры из штаммов СТИ-1 и 55- ВНИИВВиМ. Установлено, что

использование для иммунизации продуцентов смеси взвесей 22-24 часовых вегетативных культур двух штаммов (55- ВНИИВВиМ и СТИ-1 ) усиливало иммунизирующий эффект.

Гипериммунизацию животных с целью получения высокоактивной и дастаточно спецефичной преципитирующей сыворотки проводили по следующим схемам:

1 . Взвесь вегетативной формы 22-24 часовой культуры штамма Вас. апШгаиз СТИ-1. Вводили интровенозно, в возрастающей дозе,до получение достатотчно активной сыворотки, с интервалом 3-4 дня.

2 . Суспензия Вас. апШпгая штамма 55- ВНИИВВиМ находящихся в вегетативной форме, приготовленная из 22-24 часовой культуры. Метод и доза ведения аналогично выше описанной.

3 . Взвеси вегетативных форм штаммов Вас. ап^гааБ СТИ-1 и 55-ВНИИВВиМ , поочередно, в возрастающей дозе, внутривенно с интервалом 3-4 дня.

4. Указанные выше взвеси (схема 3) с добавлением в нее адсорбированного на гидроксале протективного антигена, выделенное нами из Вас. апШгайв 55-ВНИИВВиМ.

Для иммунизации исползовали здорвых в отношении инфекционных болезней жеребцов, средней упитанности, 3-5 летного возрасте, массой 350 кг и более. Кроме того, при отборе животных для гипериммунизации, нами провадился тест на растворимость воды в сыворотке крови. С этой целью от животных брали кровь, отделяли сыворотку, помещая ее в отдельную пробирку, в количестве 3,0-5,0 см3 и добоаляли в нее такой же обьем дистиллированной воды. При этом имело место образование капель различных по величине и скорости их появления. Для иммунизации брали лошадей, в сыворотке которых, при проведении описанной пробы в наиболее короткое время образовались большие капельки.

Всех отобранных животных содержали в карантинном отделении в течении 30 суток и по его истечении осматривали клинически и использовали по назначению

Из 4-х испытанных лучей оказалась та схема, согласно которой жеребцам внутривенно в возрастающих дозах вводили поочередно взвеси вегететивных культур Вас. апШгааз 55-ВНИИВВиМ и СТИ-1 и РА полученного из штамма 55-ВНИИВВиМ с содержанием 20%-ного гидроксала.

Новизна способа получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки подтверждена получением охранных документов Патентного ведмства РК (Автор.свид. №32515 от 12.08.2000г. и предпатент №1 1488 от 01.03.2002г.), а на нее производство и применение разработона НТД (инструкция по изготовлению и кентролью, технические условия, наставление по применению), которая утверждена Департаментом ветеринарии МСХ РК от 09.01.2001г. По работе сделаны соответствующие "Выводы" и "Практические предложения".

Nautiev Nazymbek Ibatullievich

"Preparation of serum to be used for anthrax diagnostic in the reaction of precipitation"

The dissertation on competiton of a scientifik degree of tne candidate of veterinary sciences

16.00.03 — Veterinary microbiology, virusology, epizootology, mycology with mycotoxicology and immunology

SUMMARY

Researches are devoted to the developing of methods and the technologies of the anthracis scrum preparation for reaction of precipitation to detect the precipitinogen in the examinated material.

At first we looked for more active protecting antigen from vaccinal strains of Bac.anthraxis 55-BHHHBBhM and CTH-1. For this purpose were tested following kinds of antigens (for cach named over):

a) Protective antigen (native)

b) Protective antigen (preserved by 0,2% formaline)

c) Protective antigen (adsorbed by 20% hydroxal)

d) Vegetative germ culture in the suspension form after 22-24 hours of the growth on the agar.

By preliminary comparative researches it was revealed, that the accumulation and allocation a lot of protective antigen (PA) occurs under cultivation of Bac. anthracis 55- BHHHBBhM.

Further receiving of PA was carried out with a help of the technique offered by us. Thus Bac.anthracis cultivation was carried out on V.A.Docenko medium (1979) with adding to it 20 % of normal horse serum as a stabilizer.

Filtration of the cultivating culture was made through C<D3 Zeits, instead of used before a ccramic filter, which made the process of preparation the PA less expensive and raised its immunogenecity.

The test was made with 0,2% formaline and 20% hydroxal suspension to increase PA action. As a result it was revealed that the hydroxal presence rendered a positive effect on precipitins accumulation in blood of experimental animal. It considerably (on 9-12 of days) reduced producent hyperimmunization terms and reduced the cost of a production.

With a purpose of increasing a specificity and activity of a specimen 22-24-hour vegetative cultures of strain CTH-1 and 55 BHHHBBhM were tested together and separately as revealed the use of suspensions

mix of both strains (55- BHHHBBhM and CTH-1) 22-24 hour vegetative cultures for producent immunization increased immunization effect.

Hyperimmunization of animals to get more active and specific precipitable scrum was carried out under the following plans:

1. Vegetative form suspension of 22-24 hour Bac.anthracis CTH-1 strain culture was injected intravenous, in a growing doze, till the reception of active scrum, with an interval 3-4 days suffices.

2. Suspension of Bac.anthracis strain 55 -BHHHBBhM in a vegetative form prepared from 22-24 hour cultures. A method and doze of introduction are similar to above described.

3. Vegetative form suspensions of Bac.antracis CTH-1 and 55- BHHHBBhM strains: serially, in a growing doze, intravenous, with an interval of 3-4 days.

4. The suspensions mentioned above (plan 3) with addition PA adsorbed in hydroxal and released by us from Bac.anthraxis 55-BHHHBBhM.

For immunizations were used healthy concerning infectious diseases stallions of medium weight, age of 3-5 years, weight of 300-350 kg. Besides, we carried out the test for serum water solubility in blood during selection of animals for hyperimmunization. For this purpose blood was collected blood from animals and was separated serum from. A scrum assays was placcd in separate tubes of 3,0-5,0 cm3 and added same volume of distilled water in it. Drops various in size and speed of occurrence were established.

For immunization those horses were taken who had large drops formed in their serums in the shortest time.

All collected animals were placed in quarantine box for 30 day. Afterwards they were examined clinically and used on purpose.

In accordance with the plan stallions were serially injccted with suspensions of by vegetative cultures Bac.anthracis 55-BHHHBBhM both CTH-1 intravenous in growing dozes as well as PA received from strain 55- BHHHBBhM with the contents %20 -s' hydroxal. This plan has appeared to be the best from 4 examined ones.

The novelty of a way to receive precipitable antracis serum is confirmed by the security documents of Patent department RK (Copyright certificate N2515 from 12.08.2000 andprcpatent N11488 from 01.03.2002). STD (instruction on manufacturing and control, specifications, manual on application) for manufacture and application was developed and authorized by Veterinarian Department of MA RK from 17.01.2001.

Appropriate "Conclusions" and "Practical" suggestions were made on this work.