Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Оценка некоторых показателей качества и безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки

На правах рукописи

Хоменец Николай Геннадьевич

оценка некоторых показателей качества и

безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки

16 00 06 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

Работа выполнена на кафедре товароведения и безопасности сырья и продуктов биотехнологии Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ).

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор

Родин Владимир Ильич (МГУПБ)

Официальные оппоненты:

- заслуженный деятель науки РФ, Бутко Михаил Павлович доктор ветеринарных наук, профессор (ГНУ ВНИИВСГЭ)

- доктор биологических наук, Фомичев Юрий Павлович профессор (Государственное научное учреждение

Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства)

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский университет Дружбы народов

10

Защита состоится « » 2007 г в ^ часов

на заседании диссертационного совета Д 006.008 01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ВНИИВСГЭ) РАСХН по адресу 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Автореферат разослан « ^ » 2007г.

Ученый секретарь диссертационного совета

-Е.С. Майстренко

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы в различных странах ведутся работы в области генной инженерии, направленные на повышение эффективности растениеводства и животноводства, улучшение качества пищевого сырья, выращивание растений и животных, устойчивых к неблагоприятным факторам внешней среды, получение новых лечебно-профилактических препаратов и в других целях. Получены растения трансгенного происхождения более чем 120 видов, среди которых картофель, соя, томаты, кукуруза, рис, рапс и др Под трансгенными культурами в мире занято более 60 млн га. Некоторые виды растений разрешены для применения в качестве продуктов питания в 1 б странах

В настоящее время получены трансгенные мыши, кролики, свиньи, овцы с различными генными конструкциями (Шевелуха В С. и др ,1994, Brem G., 1988). Производство трансгенных животных даст возможность придать новые характеристики существующему физиологическому статусу например, изменить генную регуляцию, увеличить продуктивность и усилить сопротивляемость к различным заболеваниям (Георгиев ГЛ., 1989; Land R. В., Wilmut I., 1987; Мс Connel L J, 1986; Kappes N, 1999).

Исследования свидетельствуют о том, что определенные генные комбинации могут приводить к увеличению темпа роста живой массы клонированных животных.

Во ВНИИ животноводства под руководством академика РАСХН Л К Эрнста ведутся исследования по созданию трансгенных свиней с интегрированным геном релизинг-фактора гормона роста GRF (олигопептид, состоящий из 43 или 44 аминокислот с различной степенью гомологии между видами, который синтезируется в аркуатическом вентромедиальном ядрах гипоталамуса). Сравнительное изучение роста и

\

развития полученных поколений трансгенных и нетрансгенных поросят показало, что у трансгенных свиней наблюдалась тенденция к увеличению энергии роста. Экспрессия генов ЬвЮ? (генная конструкция гормона роста, соматолиберин человека, релизинг-фактор) оказывала положительное влияние на прирост живой массы в более позднем возрасте, когда экспрессия эндогенного соматотропина снижается. Изучение содержания соматотропина в крови трансгенных по ЬОЯР животных показало отсутствие заметных различий по этому показателю у подопытных и контрольных групп животных

Несмотря на достигнутые успехи, не представляется возможным использование полученной продукции в пищевых целях, так как не доказана, особенно с учетом отдаленных последствий, её безопасность для человека

Не исключено, что использование современных биотехнологий и генной инженерии может привести к негативным последствиям: изменению структуры и окраски мышечной ткани животных, рН, жесткости, влагоудерживающей способности, степени и характеру жирности (мраморность), а также консистенции, вкусовых и ароматических свойств мяса после термической обработки (Рогов И.А. и др. 2001).

Поэтому актуальной задачей является проведение широких исследований по контролю безопасности такого сырья и продуктов его переработки, хотя многие ученые считают, что введенный в объект ген -это участок ДНК, а его продукт - белок. В желудочно-кишечном тракте нуклеиновые кислоты расщепляются на нуклеотиды, а белки - на аминокислоты, которые не представляют опасности для человека

Выполненные нами патентные исследования и анализ доступных источников литературы показали, что в публикациях в основном уделено внимание методам клонирования животных и растений В тоже время

отсутствуют научно-обоснованные данные по их безопасности в качестве источников питания, что свидетельствует о необходимости выполнения исследований, связанных с разработкой методов контроля безопасности генетически модифицированных источников питания

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлась оценка качества и безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки, а также разработка методических рекомендаций по оценке этих показателей

Для выполнения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

- провести ветеринарно-санитарную экспертизу туш и внутренних органов, полученных от трансгенных свиней;

- провести токсикологическую оценку свинины трансгенного происхождения и изготовленных из нее вареных колбас и консервов на лабораторных животных (крысах), инфузориях (Те^акутепа руп/огтгэ), птице (перепелах и инкубационных перепелиных яйцах),

- дать физико-химическую оценку трансгенной свинине, вареным колбасам и консервам, изготовленным из этой свинины;

- провести гистологическую оценку трансгенной свинины и внутренних органов;

- выполнить исследования по микробиологической оценке свинины трансгенного происхождения, а также изготовленных из неё вареных колбас и консервов;

- выполнить исследования с помощью ПЦР по выявлению чужеродной ДНК в свинине, вареных колбасах и консервах, содержащих свинину трансгенного происхождения, в мышечной ткани перепелов, получавших мясокостную муку, изготовленную из трансгенной свинины;

- разработать методические рекомендации по оценке безопасности мясного сырья трансгенного происхождения.

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка свинины трансгенного происхождения по рекомбинантным генным конструкциям релизинг-фактора соматотропина (тМТШСЕР), а также изготовленных из нее вареных колбас и консервов С помощыбПЦР было показано, что в свинине, вареных колбасах и консервах, содержащих свинину трансгенного происхождения, обнаружена чужеродная ДНК Однако в мышечной ткани перепелов, получавших мясокостную муку от свинины трансгенного происхождения, чужеродной ДНК не зарегистрировано Предложена токсикологическая оценка безопасности свинины трансгенного происхождения, вареных колбас и консервов, изготовленных из этой свинины на новом виде тест-организмов - перепелах, инкубационных перепелиных яйцах, а также крысах и инфузориях {Те&акутепа руп/огтЫ) которая представлена в форме методических рекомендаций

Практическая ценность. Для токсикологической оценки трансгенной свинины и продуктов ее переработки в условиях специализированных лабораторий предложено использовать комплекс методов и тестов, а также перепелов с учетом прироста их живой массы при выращивании, яйценоскости, выводимости и развития эмбрионов на нескольких поколениях для выявления отдаленных последствий. На основании результатов исследований разработаны и предложены для практики Методические рекомендации. «Тест-системы по оценке безопасности мясного сырья трансгенного происхождения», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН (М., 2005).

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на IX международной выставке молодежных научно-технических проектов ЭКСПО-Наука под эщцой ЮНЕСКО (2003г); Пятой международной научно-технической конференции «Пища Экология Человек» (М.: МГУПБ, 2003), Пятой международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции» (М., МГУПБ, 2004), IV международной научной конференции студентов и молодых ученых (М.. МГУПБ, 2005); в материалах международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных» (М, 2006 г.); на совместном заседании ученого совета ВНИИВСГЭ и секции «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, доложены на ВВЦ (2006 г.), на межкафедральном совещании сотрудников ветеринарно-санитарного факультета МГУПБ. (2006 г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Материалы исследований экспонировались на ВВЦ в 2005-2006 гг и отмечены двумя почетными грамотами. Основные работы опубликованы в журнале, рекомендованном ВАК, и написаны автором лично. Доля участия автора в остальных публикациях составляет 70%.

Основные положения, выносимые на защиту:

-использование перепелов для комплексной оценки безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки с учетом отдаленных последствий

- токсикологическая оценка трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием;

- исследования микробной обсемененности трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием;

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, содержащего 201 наименований, в том числе 96 зарубежных авторов. Работа изложена на , содержит $ рисунков и 4Ж таблицы

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в течение 2003-2006 г.г на кафедре товароведения и безопасности сырья и продуктов биотехнологии МГУПБ и в лаборатории ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГНУ ВНИИВСГЭ) Россельхозакадемиии, входила в НИР МГУПБ по теме «Научное обоснование пищевой безопасности сырья и продуктов животного происхождения, полученных из генетически модифицированных источников» (№ 1-2-03)

При выполнении исследований материалами являлись- туши, мышечная ткань и внутренние органы от трансгенных и нетрансгенных (контроль) свиней и выработанные из свинины вареные колбасы и консервы

Образцы свинины отбирали в экспериментальном хозяйстве ВНИИ животноводства. Подопытными были трансгенные по рекомбинантным генным конструкциям рилизинг-фактору соматотропина (тМТ1МЖР) свиньи, их аналоги - нетрансгенные помеси ландраса с крупной белой породой четвертого поколения являлись контролем.

В процессе работы использовали общепринятые методы ветеринарно-санитарного, микробиологического, биологического и токсикологического контроля качества пищевых продуктов животного происхождения.

Качество мясного сырья оценивали по показателям, характеризующим мясную продуктивность и морфологический состав туш.

Влагоудерживающую способность мяса определяли методом прессования по Грау и Хамму в модификации ВНИИМПа. При химическом исследовании определяли содержание влаги, жира, белка и рН Интеграцию чужеродного гена определяли с помощью ПЦР

Отбор проб проводили по ГОСТ 7269 - 79 "Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести" и ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и метод отбора проб".

Микробиологический анализ сырья и колбас проводили по методикам, изложенным в ГОСТ 9958-81 "Изделия колбасные и продукты из мяса Методы бактериологического анализа"; ГОСТ 10444.9-88 "Продукты пищевые Метод определения Clostridium petfringens", ГОСТ Р 50454-92 (ИСО 3811-79) "Мясо и мясные продукты. Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий и Esherichia coli (арбитражный метод)", ГОСТ Р 50474-93, ГОСТ 19496-93, ГОСТ 21237-75.

Опыты по прямому скармливанию трансгенной свинины, колбас и консервов, изготовленных с её использованием, проводили на беспородных белых крысах.

Интегральный показатель хронической интоксикации (ИПХИ) у крыс подопытной и контрольной групп рассчитывали путем определения массы подопытных животных и их органов (сердце, почки, печень селезенка).

ИПХИ вычисляли по формуле.

Масса органа (г) х 100

ИПХИ, % = ------------------------------------

Масса крысы (г)

Токсичность трансгенной свинины, а также вареной колбасы и консервов, изготовленных из этой свинины, определяли также на инфузориях Те&акутепа руп/огтю.

Для регистрации хемотаксической реакции инфузорий применяли прибор "Биотестер-2", согласно методическим рекомендациям "Использование инфузорий ТеШкутепа руп/огтт в качестве тест-культуры на приборе "Биотестер-2" (экспресс-метод)" (Долгов В.А., Лапаев В.Э, 1991).

Токсикологическую оценку трансгенной свинины проводили также на перепелах Взамен мясокостной муки подопытной группе (20 голов) в рацион добавляли мясо-костную муку из трансгенной свинины. Контрольная группа получала обычный комбикорм для бройлеров (ГЖ-5). При этом определяли прирост живой массы, яйценоскость и выводимость перепелят после инкубации яиц (%), а также фиксировали развитие зародыша в яйце для исключения летальной мутации. С помощью ПЦР-анализа выявляли наличие или отсутствие чужеродной ДНК в мышечной ткани перепелов.

Относительную биологическую ценность исследуемых образцов изучали по методу разработанному Беленьким Н. Г., Долговым В. А. и др. (1992). Исследовали трансгенную свинину, вареную колбасу и консервы, изготовленные из трансгенной свинины Контролем служили аналогичные образцы нетрансгенной свинины, а также вареные колбасы и консервы, изготовленные из нее.

Результаты исследований обрабатывали статистически по Стьюденту

Определение токсичных элементов, антибиотиков, нитрозаминов, пестицидов и радионуклидов в образцах свинины опытного хозяйства

ВНИИ животноводства периодически проводится в Испытательном центре ВИЖа Упомянутые показатели находились в пределах, регламентируемых действующим СанПиН

Убою были подвергнуты 51 голова трансгенных и 51 голова нетрансгенных свиней. Для микробиологического контроля были отобраны по 54 пробы свинины трансгенного и нетрансгенного происхождения. Проведены 3 серии экспериментов на белых крысах (по 2 группы животных в каждой серии экспериментов), п=15 На 2-х группах перепелов (п=20) в 3-х поколениях проведены испытания мясокостной муки трансгенного и нетрансгенного происхождения. В шести образцах из свинины, вареных колбас и консервов определяли относительную биологическую ценность (ОБЦ). Шесть образцов были исследованы для определения токсичности с использованием тест-организма Те&акутепа руп/огтгв.

На рис. 1 представлена схема проведения исследований.

Рис 1 Схема проведения исследований

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Выявление чужеродной ДНК в траисгеиион свинине, вареных колбасах и консервах, содержащих свинину трансгенного происхождения и мышечной ткани перепелов

Важной задачей нашей работы явилось выделение чужеродной ДНК

из транс генной свинины, вареных колбас и консервов, содержащих трансгенную свинину. Исследованиями ПЦР установлено, что в лунке 1, отражающего содержание ДНК нетрансгенной свинины, не наблюдается четкой полосы гена тМТ1 /ЬСЮ-, как это видно на 7 и 8-ой полосе соответственно (рисунок 2). Эти же полосы отсутствуют при электрофорезе нетрансгенной колбасы и нетрансгенных консервов (3,5 лунки). Достаточно четко проявляются полосы ампликонов в лунках, содержащих ДНК трансгенной свинины, вареных колбас и консервов (2,4,6 лунки соответственно).

123456 789 10

Рисунок 2. ПЦР анализ гена тМТI/ЬСЯГ гормона роста человека, выделенного из свинины, вареных колбас, консервов трансгенного и нетранс ген но го происхождения и мышечной ткани перепелов.

1- отрицательный контроль (нетрансгенная свинина);

2- свинина трапегенная;

3- вареная колбаса (нетрансгенная);

4- вареная колбаса (трансгенная);

5- консервы (нетрансгенные);

6- консервы (трансгенные);

7,8- положительный контроль гормона роста человека;

9- мышечная ткань перепелов, не получавших трансгенную свинину;

10- мышечная ткань перепелов, получавших трансгенную свинину.

Амплификации гена тМТШОКР не наблюдается в ДНК перепелов, получавших и не получавших трансгенную свинину (9 и 10 лунки)

Приведенные данные свидетельствуют о том, что при постановке ПЦР с праймерами амплификонов на тМИ/ЬСЯР сайты полосы, соответствующие контрольным амплификонам, четко выявляются только с ДНК трансгенной свинины, вареной колбасы и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины Отсутствие амплификации с ДНК, выделенной из мышечной ткани перепелов, потреблявших и не потреблявших трансгенную свинину (9,10 лунки) свидетельствует о том, что фрагмент ДНК шМТ1/ЬСЫР не интегрирует в геном перепелов

Таким образом, введение в состав корма для перепелов свинины (в виде мясокостной муки), содержащей ген тМТШОКР гормона роста человека, в течение 2 месяцев, не приводит к его накоплению в составе мышечной ткани перепелов

2.2.2. Исследование токсичности трансгенной свинины и изготовленных из неё вареной колбасы и консервов с использованием тест-организма Те1гакутепа руп/огт1Б

С использованием тест-организма Те1гаЬушепа рупАэггшэ определяли

хемотаксическую реакцию после контакта простейших с вытяжками из исследуемых образцов на приборе «Биотестер-2» (табл 1)

Таблица 1

Величина хемотаксической реакции инфузорий на приборе «Биотестер-2» в условных единицах при исследовании трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных из трансгенной свинины.

Образец Показания прибора (условн ед) Степень токсичности

Свинина

Свинина трансгенная 168+12 (Р>0,5) Не токсично

Свинина нетрансген (контроль) 175+10 Заведомо нетоксично

Достоверность(Р) >0,05

Котбаса вареная

Из трансгенной свинины 160±10 (Р>0,5) Не токсично

Из нетрансген свинины (контр) 164+11 Заведомо нетоксично

Образец Показания прибора (условн ед ) Степень токсичности

Достоверность (Р) >0,05

Консервы

Из трансгенной свинины 171+12 (Р>0,5) Не токсично

Из нетрансгенной свинины (контроль) 174+11 Заведомо нетоксично

Достоверность (Р) >0,05

Как видно из представленных данных, подопытные образцы трансгенной свинины и продуктов ее переработки (вареные колбасы и консервы) не токсичны и показатели близки к значениям, полученным для контрольных образцов, что подтверждает статистическая обработка результатов

При изучении выживаемости инфузорий в 0,1% вытяжках исследуемых образцов было обнаружено, что через 3, 6 и 24 часа все клетки тетрахимен сохраняли подвижность, оставались живы и не были подвержены видоизменениям (при просмотре капли под микроскопом) Это свидетельствовало о безвредности водных вытяжек исследованных образцов. Результаты исследований по влиянию вытяжек изучаемых образцов на ростовую реакцию инфузорий представлены в таблице 2.

Таблица 2

Влияние вытяжек исследованных образцов на ростовую реакцию

Образец Средний результат

Свинина

Свинина трансгенная 16,4 +2,0

Свинина нетрансгенная (контроль) 17,2+1,7

Достоверность (Р) >0,05

Колбаса вареная

Из трансгенной свинины 15,8+1,2

Из нетрансгенной свинины (контроль) 16,2+1,4

Достоверность (Р) >0,05

Консервы

Из трансгенной свинины 16,0+1,1

Из нетрансгенной свинины (контроль) 16,8+1,2

Достоверность (Р) >0,05

Из результатов, представленных в таблице видно, что рост клеток инфузорий на подопытных образцах не отличается от контроля. Это свидетельствует о том, что исследуемые образцы не оказывают отрицательного влияния на ростовую реакцию тест-организма

2.2.3. Определение относительной биологической ценности (ОБЦ) трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных из трансгенной свинины, в опытах на инфузориях

Были исследованы шесть образцов, куда входили образцы

трансгенной и нетрансгенной свинины, а также вареные колбасы и консервы, изготовленные из трансгенной свинины и их контрольные нетрансгенные аналоги

Как показали результаты исследований, количество клеток инфузорий в 1 мл среды, включающей трансгенные и нетрансгенные образцы (контроль) близки по значениям 27,Зх104±11,0хЮ3— 28,8х104±8,8х103 (трансгенные образцы) и 27,8x104±10,3x1О3— 29,4x104±9,2x103 (нетрансгенные образцы) соответственно (Р>0,5), а ОБЦ (относительная биологическая ценность) в % составляет 97,7±0,8— 98,2±1,2 для подопытных и 100% для контрольных образцов, т е различия также недостоверны

2.2.4. Токсикологическая оценка трансгенной свинины и продуктов ее переработки

Для выполнения токсикологической оценки были поставлены

эксперименты на лабораторных крысах, простейших (ТеШкутепа руп/огтЫ), перепелах и перепелиных инкубационных яйцах.

2.2.4.1. Определение хронической токсичности

Исследования по определению хронической токсичности

трансгенной свинины по показателям прироста массы на белых крысах при

добавлении в рацион трансгенной свинины в течение 45 суток представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели прироста массы белых крыс при включении в рацион трансгенной свинины, вареной колбасы и консервов, изготовленных из

этой свинины

Группа животных Начальная живая масса г/гол Конечная живая масса, г/гол Валовый прирост массы г/гол Среднесут прирост массы г/гол

Трансгенная свинина

Подопытная (п=15) 115,00+2,80 238,00 ±7,60 123,00 ±3,70 2,73 ±0,14

Контрольная(п-15) 112,00+3,10 227,00 ±5,20 115,00 ±4,50 2,56 ±0,12

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Вареная колбаса

Подопытная 117,00+3,00 241,00 ±8,10 124,00 ±4,90 2,76 ±0,17

Контрольная 114,00 ±3,3 230,00 ±5,40 116,00 ±4,70 2,58 ±0,13

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Консервы

Подопытная 112,0+4,20 217,0 ±6,60 105,0+5,40 2,33±0,15

Контрольная 113,0 ±4,70 219,0±5,80 106,0+5,10 2,36+0,10

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Прирост живой массы у крыс подопытной группы составил 123,00 +3,70 г/гол при среднесуточном приросте 2,73 ±0,14 г/гол. соответствующие показатели у крыс контрольной группы, получавших нетрансгенную свинину, составили 115,00 +4,50 г/гол и 2,56 ±0,12 г/гол соответственно. Результаты в показателях недостоверны (Р>0,05).

Достоверных различий прироста массы, среднесуточного прироста у крыс подопытных и контрольных групп при скармливании свинины, вареной колбасы и консервов, изготовленной из нетрансгенной и трансгенной свинины не выявлено.

У крыс подопытной и контрольной групп после извлечения и взвешивания внутренних органов определен интегральный показатель хронической интоксикации (ИПХИ).

Результаты этих экспериментов представлены в таблице 4.

Таблица 4

Интегральный показатель хронической интоксикации при включении в рацион крыс трансгенной свинины, вареной колбасы и

консервов, изготовленных из этой свинины

Группа животных Внутренние органы крыс

Печень Селезенка Сердце Почки

Свинина

Подопытная (п=15) 4,63 ± 0,24 2,15 +0,07 0,80 ±0,05 0,97±0,06

Контрольная (п=15) 4,22 ±0,19 2,01 +0,08 0,73 ±0,06 0,92 ±0,05

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Вареная колбаса

Подопытная (п=15) 4,58+0,21 2,10+0,05 0,73±0,06 0,92±0,05

Контрольная (п=15) 4,27+0,15 2,02+0,04 0,67±0,09 0,87±0,07

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Консервы

Подопытная (п=15) 4,24+ 0,16 2,00 ±0,09 0,71+0,05 0,88± 0,04

Контрольная (п=15) 4,20+0,14 1,87±0,06 0,68+0,03 0,85±0,04

Достоверность (Р) >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Из представленных данных видно, что показатели начальной и конечной живой массы, а также валовый и среднесуточный прирост у крыс подопытной и контрольной групп достоверных различий не имеют. Не выявлено также достоверных различий у контрольных и подопытных групп крыс при введении в их рацион вареных колбас и консервов с использованием трансгенной свинины по сравнению с соответствующими показателями при введении в рацион обычной свинины, колбас и консервов, изготовленных из обычной свинины. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии достоверных различий по показателям ИПХИ у подопытных и контрольных групп животных (во всех случаях Р>0,05).

2.2.4.2. Токсикологическая оценка трансгенной свинины на перепелах

Одной из задач нашей работы явилась токсикологическая оценка трансгенной свинины и продуктов её переработки на перепелах, а также возможность их использования в качестве тест-объектов.

Подопытной группе птиц (20 голов) в рацион, взамен мясокостной муки, вводили мясокостную муку из трансгенной свинины в течение 2-х месяцев. Контрольная группа получала обычный комбикорм для бройлеров Учитывали прирост живой массы, яйценоскость и выводимость перепелят после инкубации полученных яиц (табл. 5) Определяли также ИПХИ и наличие чужеродного гена в мышечной ткани перепелов

Таблица 5

Развитие перепелов, яйценоскость и выводимость перепелят

Группы Кол-во гол Живая масса, г Яйценоскость Выводимость

начальная конечная через 30 дн ) за 30 дн. масса яйца, г. гол %

Подопытная несушки петушки 16 4 155,0±7,0' 140,0±6,02 160,0±8,01 147,0±7,02 336 11,0*0,5' 121 93,8

Контрольная несушки петушки 16 4 158,0±6,0' 137,0±5,02 164,0*8,0' 14 0,0±6,02 342 10,5±0,42 122 93,1

Достоверность (Р1) >0,05 >0,05 >0,05

Достоверность (Р*) >0,05 >0,05 >0,05

В результате проведенных экспериментов было установлено, что показатели начальной и конечной живой массы курочек-несушек и петушков существенно не отличались друг от друга Яйценоскость курочек-несушек в подопытной и контрольных группах составила 336 шт/мес. и 342 шт/мес. соответственно, что свидетельствует об отсутствии достоверных различий.

Масса каждого яйца в подопытной и контрольной группах составляла 11,0+0,05 г и 10,5+0,4 г соответственно (Р>0,05) Отмечена

высокая выводимость перепелят, 93,8 и 93,1% в подопытной и контрольной группах соответственно.

Интегральный показатель хронической интоксикации (в %) при включении в рацион трансгенной свинины составил по печени 3,18+0,14, по сердцу 1,68+0,05. В контрольной группе эти показатели составили соответственно 3,29+0,15 и 1,66+0,05 (Р>0,05) Результаты этих экспериментов представлены в таблице 6.

Таблица 6

Интегральный показатель хронической интоксикации (%) при включении в

ращион перепелов трансгенной свинины.

Группы перепелов Внутренние органы, г.

печень сердце

Подпытная 3,18±0,14 1,68±0,05

Контрольная 3,29±0,15 1,66±0,05

Достоверность (Р) >0,05 >0,05

Как показали гистологические исследования, внутренние органы трансгенных свиней, а также подопытных 1фыс, которым в корм добавляли трансгенную свинину, не отличались от внутренних органов нетрансгенных свиней и контрольной группы крыс, получавших в составе корма обычную свинину

Прижизненный контроль эмбрионов показал их нормальное развитие в период инкубации и отсутствие случаев летальной мутации Выведенные перепелята в подопытной и контрольной группах были здоровыми и не отличались друг от друга. Не отмечено случаев аномального тератогенного и мутагенного влияния трансгенной свинины на рост и развитее перепелиных эмбрионов

На основании полученных данных разработаны методические рекомендации, утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН (28.12.2005)

2.2.5. Микробиологическая оценка свинины трансгенного происхождения и изготовленных из нее вареных колбас и консервов

Отобранная свинина до проведения исследований, хранилась в

холодильнике при 4°С Микробиологическому контролю было подвергнуто 54 пробы свинины трансгенного происхождения и 54 пробы нетрансгенной свинины При этом определяли КМАФАиМ, бактерии группы кишечных палочек, сальмонеллы, токсигенные анаэробы Из исследованных образцов свинины (подопытной и контрольной), вареных колбас и консервов выделены мезофильные аэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы в количестве 0,71х103-0,92х103 КОЕ/г По культурально-морфологическим, биохимическим и серологическим показателям не выявлены сальмонеллы, токсигенные анаэробы, листерии и плесени То есть микробная обсемененность исходных компонентов для изготовления колбас и консервов не превышала показатели, регламентируемые СанПин 2 3 2 1078-01

В образцах вареных колбас, изготовленных с добавлением трансгенной свинины, КМАФАнМ составляло 0,82х103+0,52х102 и не отличалось от аналогичного показателя (0,91х103+0,61х102) контрольных образцов (Р>0,05)

Консервы, изготовленные из трансгенной свинины по микробиологическим показателям не отличались от контрольных (из нетрансгенной свинины) и соответствовали промышленной стерильности группы А, что показано в таблице 7

Таблица 7

Микробиологические показатели исходного сырья, колбас

Показатели Виды сырья КМАФАнМ, КОЕ/г БГКП (коли-формы) КОЕ/г Патогенные, в т ч сальмонеллы в 25г Дрожжи, КОЕ/г Плесени, КОЕ/г Ь топос^опепеэ в 25г

Свинина трансгенная 3,71x1040,80x10' Не обнаружены Не обнаружены Не обнаружены Не обнаружены Не обнаружены

Свинина контрольная В,86х103+0,92х10'! —II— —II— —II— —II— —И—

Говядина нетрансген ная 0,92x1(^+0,48x10' —II— —II— —II— —II— —II—

Вареная колбаса с добавлением трансгенной свинины 0,82х103+0,52х 102 0,70+0,04 —И— —II— —II—

Вареная колбаса (контроль) 0,91хЮ'±0,61x10" 0,80+0,06 —II— —И— —И—

2.2.6. Ветеринарно-санитарная оценка туш и внутренних органов, полученных от трансгенных свиней

Убой свиней проводился в соответствии с правилами ветеринарно-

санитарной экспертизы под контролем государственного ветеринарного врача Все свиньи, предназначенные для убоя, были клинически здоровы, что подтверждалось результатами предварительного ветеринарного осмотра

В соответствии с требованиями товароведной оценки туши свиней были отнесены ко второй (мясной) категории

Подсвинки (свинки и боровки) имели живую массу 45-55кг Хрячки были кастрированы в 2-недельном возрасте

Образцы свинины были отобраны в экспериментальном хозяйстве ВНИИ животноводства При этом убою в 2003, 2004 и 2005 гг были подвергнуты 51 голова трансгенных и 51 голова нетрансгенных свиней

Образцы для исследования отбирались после регистрации в лабораториях ВИЖ на наличие в них генной конструкции релизинг-

фактора соматотропина тМТ1/МЖР для подопытной группы и отсутствия для контрольной.

Незначительные различия отмечены в выходах мышечной и костной тканей, шкурки, в технических зачистках у подопытных групп свиней после убоя (в %), которые составили 55,20±2,50; 11,30+0,90; 5,30±0,60 и 1,60+1,20 соответственно. У контрольных животных эти показатели составили соответственно 53,22±2,80; 11,25+0,70, 4,80±0,80 и 1,80±0,80. Различия во всех этих случаях оказались недостоверными (Р>0,5)

У трансгенных свиней был отмечен несколько больший выход жира-сырца (28,50+1,41%) на 2,90% (Р<0,05) по сравнению с выходом жира-сырца у нетрансгенных свиней (25,60+1,30%)

2.2.7. Физико-химические исследования мышечной ткани свиней

Уровень рН определяли в двух мышцах Ьг^ззтш скда} и заднем

окороке через час после убоя Для нетрансгенной свинины величина рН1 составила 6,29±0,11 Вторичное измерение величины рН24 проводили через 24 часа после убоя, что позволило отделить мясное сырье со свойствами ОББ и Р8Е (классификация качества свинины) и по величине РН24 -5,85+0,14

Величина рН] трансгенной свинины в парном состоянии составила 6,27+0,08. Через 24 часа величина рН24 была равна 5,82+0,12.

Таблица 8

Физико-химический показатель качества мяса (рН) подопытной и

контрольной свинины

Образцы свинины Величина рН

рн, РН24

Трансгенная свинина 6,27+0,08 5,82+0,12

Нетрансгенная свинина 6,29+0,11 5,85+0,14

Согласно представленным данным, величины рН трансгенной и нетрансгенной свинины близки по значениям, и в зависимости от сроков хранения после убоя различия её значений у подопытной и контрольной групп свинины недостоверны (Р>0,05).

Влагоудерживающая способность (ВУС) в % к общей влаге в парной трансгенной свинине составила 59,40+0,11; в охлажденной - 54,2+0,14. Соответствующие показатели для нетрансгенной свинины составили 60,14+0,06 и 55,2+0,10 Как свидетельствуют полученные данные, различия в показателях ВУС во всех случаях недостоверны

В таблице 9 представлены данные о количестве жира и золы в составе образцов трансгенной и нетрансгенной свинины

Таблица 9

Количество жировой ткани и золы в 100 г трансгенной и _нетрансгенной свинины_

Показатели Образцы трансгенной свинины Образцы нетрансгенной свинины

Жир, % 28,5 25,6

Зола, % 0,95 0,98

При гистологических исследованиях внутренние органы подопытных крыс, которым в корм добавляли трансгенную, свинину не отличались от внутренних органов контрольной группы крыс, получавших в составе корма обычную свинину.

выводы

1 Введение в состав корма перепелам мясокостной муки, полученной от трансгенной свинины, содержащей ген шМТШОКР гормона роста человека, не приводит к накоплению гена в составе мышечной ткани перепелов.

2 Использование тест-организма ТеШкутепа руп/огтЫ подтвердило отсутствие токсичности образцов трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием с высокой степенью достоверности (Р>0,05).

3. Относительная биологическая ценность трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием и определенная с помощью тест-организма ТеО-аНутепа руп/огтк с высокой степенью достоверности (99,95%), близка по значению к аналогичному показателю нетрансгенных образцов.

4. При токсикологической оценке трансгенной свинины на перепелах не установлено отрицательного влияния на показатели яйценоскости, выводимость перепелят, живой массы перепелов при выращивании, а также на интегральный показатель хронической интоксикации. Эмбрионы развивались нормально, мутагенного влияния трансгенной свинины на рост и развитие перепелиных эмбрионов не установлено. Результаты исследований позволяли использовать в качестве тест-организма перепелов для комплексной оценки свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки с учетом отдаленных последствий

5. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины в хронических экспериментах на белых крысах- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста,

которые составили у подопытной группы, получавшей вареные колбасы -

124,00+4,90 г/гол и 2,76+0,17 г/гол и у контрольной - 116,00+4,70 г/голову и 2,58+0,13 г/голову соответственно (Р>0,05);

- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста, которые составили у подопытной группы, получавшей консервы 105,00+5,40 г/голову и 2,33±0,15 г/голову, у контрольной - 106,00 ±5,10 г/голову и 2,36+0,10 г/голову соответственно (Р>0,05),

6. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины по интегральному показателю хронической интоксикации (ИПХИ):

- по интегральному показателю хронической интоксикации (в %), который составил у подопытной группы, получавшей вареные колбасы

по печени 4,58+0,21, селезенке -2,10+0,05, сердцу - 0,73+0,06 и дочкам - 0,92±0,05, в контроле - 4,27+0,15; 2,02±0,04; 0,67±0,09 и 0,87+0,07 соответственно (Р>0,05),

- по интегральному показателю хронической интоксикации, который составил у подопытной группы, получавшей консервы

по печени 4,24+ 0,16; селезенке -2,00+0,09; сердцу - 0,71+0,05 и почкам -0,88+0,04, в контроле - 4,20+0,14; 1,87±0,06, 0,68+0,03 и 0,85±0,04 соответственно (Р>0,05)

7 Микробная обсемененность трансгенной свинины по КМАФАнМ не отличается от аналогичного показателя контрольной (нетрансгенной) свинины и составляет соответственно 0,71х103+0,80х102 и 0,86x103+0,92x102 (Р>0,05) Других микроорганизмов,

регламентированных СанПиН 2 3.2 1078-01 в исследованных образцах свинины, предназначенной для изготовления колбас и консервов не обнаружено В образцах вареных колбас и консервов, изготовленных из трансгенной свинины по микробиологическим показателям не отличались от контрольных (из нетрансгенной свинины) и были промышленно стерильны

8. При ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя трансгенных свиней (с использованием генной конструкции релизинг-фактора соматотропина тМЛ/ЬСШ7) и нетрансгенных свиней не выявлено различий Незначительные различия отмечены в выходах мышечной и костной тканей, шкурки, технических зачисток. У нетрансгенных свиней получен меньший выход жира-сырца (25,60+1,30%) на 2,90% (Р>0,05) по сравнению с выходом жира-сырца у трансгенных свиней (28,50+1,41%)

9 Влагоудерживающая способность в % к общей влаге в составе парной трансгенной свинины находилась в пределах значений 59,40+0,11; в составе охлажденной - 54,2+0,14, соответствующие показатели для нетрансгенной свинины составили 60,14+0,06 и 55,2+0,10. Критерий достоверности при этом составлял (Р>0,05)

10 При гистологических исследованиях внутренних органов подопытных крыс, получавших трансгенную свинину и контрольных морфологических отличий не выявлено.

Предложения для практики. На основании материалов исследований разработаны Методические рекомендации «Тест-системы по оценке безопасности мясного сырья трансгенного происхождения», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН (М., 2005), которые могут быть использованы в специальных лабораторных и научно-исследовательских учреждениях для контроля свинины трансгенного и нетрансгенного происхождения и продуктов ее переработки

Список опубликованных работ

1. Хоменец Н.Г. Контроль качества и безопасности трансгенной

А/%

свинины и продуктов ее переработки // Ветеринария. - М:, 2006,- С.41.

2. Хоменец Н.Г Исследования безопасности пищевых продуктов, полученных из сырья трансгенного происхождения // Международный

молодежный научный конгресс «Молодежь Наука Общество» сборник материалов. - М.. ЗАО «ОП ВВЦ «Наука и образование», 2003.— С.11

3. Хоменец Н.Г. Изучение пищевой безопасности мясного сырья трансгенного происхождения // Родин В И // Живые системы и биологическая безопасность населения. Материалы IV Международной научной конференции студентов и молодых ученых - М.. МГУПБ, 2005. -С.133.

4. Хоменец Н.Г Оценка безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения на основе ДНК-диагностики // Горобчук Е А, Маргиева С.А., Родин В И, Каверин А В., Сетличкин В В , Узунян Д Г // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции. Материалы пятой международной научно-практической конференции. -М : МГУПБ, 2004.- С 45

5 Хоменец НГ. Токсикологический контроль вареной колбасы, изготовленной из трансгенной свинины // Сон К Н, Родин В И, Анненков А А // Пища. Экология Человек Материалы пятой научно-технической конференции М • МГУПБ, 2003 - С.101.

6 Хоменец Н.Г. Оценка безопасности трансгенной свинины в исследованиях на перепелах // Родин В.И // Живые системы и биологическая безопасность населения- Материалы IV Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.. МГУПБ, 2005 -С.146

7. Хоменец Н.Г. Разработка метода оценки качества и безопасности генетически модифицированной свинины и продуктов ее переработки // Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных. Материалы международной научно-практической конференции. - М.: ИзографЪ, 2006. - С 632.

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" ОГР № 1067746281514 от 15.02.2006г Москва, Талалихина, 33

Подписано к печати 25 09.2007г. Формат 60x84/16. Бумага "Офсетная №1" 80г/м2. Печать трафаретная Усл.печ.л 1,75. Тираж 100. Заказ 217.

www.frantera.ru

В последние годы в различных странах ведутся работы в области генной инженерии, направленные на повышение эффективности растениеводства и животноводства, улучшение качества пищевого сырья, выращивание растений и животных, устойчивых к неблагоприятным факторам внешней среды, получение новых лечебно-профилактических препаратов и в других целях.

В настоящее время получены трансгенные мыши, кролики, свиньи, овцы с различными генными конструкциями (Шевелуха B.C. и др., 1994; Вгеш G., 1988). Производство трансгенных животных даст возможность придать новые характеристики существующему физиологическому статусу: например, изменить генную регуляцию, увеличить продуктивность и усилить сопротивляемость к различным заболеваниям (Георгиев ГЛ., 1989; Land R. В., Wilmut I., 1987; Мс Connel L. J., 1986, Kappes N. 1999).

Исследования свидетельствуют о том, что определенные генные комбинации могут приводить к увеличению темпа роста живой массы клонированных животных.

Увеличение производства и повышение качества мясного сырья, в том числе свинины, во многом зависят от повышения мясной продуктивности животных, сокращения потерь в процессе производства и переработки, совершенствования критериев оценки качества мяса и организации его рационального использования (Эрнст JI.K.,1999).

В структуре перерабатываемых в России животных на конец 2004 г. доля свинины составляет 22,2% (Дорогова Л., 2004). Статистика свидетельствует о том, что увеличение производства так называемого красного мяса, то есть мяса животного происхождения в мире в основном обеспечивается за счет повышения удельного веса свиноводства как наиболее скороспелой отрасли животноводства. Значительное место ему отводится и в нашей стране.

Во ВНИИ животноводства под руководством академика РАСХН JI.K. Эрнста ведутся исследования по созданию трансгенных свиней с интегрированным геном релизинг-фактора гормона роста GRF (олигопептид, состоящий из 43 или 44 аминокислот с различной степенью гомологии между видами, который синтезируется в аркуатическом вентромедиальном ядрах гипоталамуса). Сравнительное изучение роста и развития полученных поколений трансгенных и нетрансгенных поросят показало, что у трансгенных свиней наблюдалась тенденция к увеличению энергии роста животных. Экспрессия генов hGRF (генная конструкция гормона роста, соматолиберин человека, релизинг-фактор) оказывала положительное влияние на прирост живой массы в более позднем возрасте, когда экспрессия эндогенного соматотропина снижается. Изучение содержания соматотропина в крови трансгенных по hGRF животных показало отсутствие заметных различий по этому показателю у подопытных и контрольных групп животных.

Рост производства свинины в мире достигается главным образом за счет интенсификации отрасли и увеличения поголовья этих животных. Важным фактором интенсификации свиноводства являются широкое внедрение метода гибридизации, повышающего продуктивность помесей, совершенствование продуктивных и племенных качеств разводимых пород свиней, вовлечение в сферу производства лучших из них, отличающихся высоким выходом мяса, а также улучшение технологии подготовки животных к убою и их переработки. (Эрнст J1.K. и др., 2001).

Для осуществления этих задач ученые занимаются решением ряда проблем, влияющих на качество и безопасность готового продукта, уделяя особое внимание научному обоснованию и практическому воплощению возможности прижизненного формирования у животных требуемых характеристик получаемого от них мясного сырья.

Проведенные за последние годы исследования показали, что с помощью генной инженерии, то есть путем интеграции в организм специфических генов, можно не только ускорить и значительно улучшить продуктивные показатели животных, но и повысить приспосабливаемость их к окружающей среде, создать популяции животных, генетически устойчивых к ряду инфекционных заболеваний, направленно изменять наследственные признаки (Эрнст J1.K. и др., 2001).

К настоящему времени селекционерами получены растения трансгенного происхождения более чем 120 видов, среди них картофель, соя, томаты, кукуруза, рис, рапс, хлопок, лен, табак и другие. Такие страны, как Китай, Индия и Индонезия, насчитывающие 2,5 млрд. населения, выращивают и используют в пищу трансгенные культуры, а 16 стран, население которых составляет 3,2 млрд. человек, несмотря на продолжающиеся споры о преимуществах и недостатках трансгенных культур, продолжают увеличивать посевные площади под генетически модифицированные культуры. Если в 1996 году площади, занятые под ГМ культурами, составляли 1,7 млн. га, то в 2002 г. — 58,7 млн. га, то есть произошло 34-х кратное увеличение. В области животноводства также ведутся работы. Цель экспериментов - это ускорение роста животных с помощью переноса генов гормона роста, повышение резистентности организма к неблагоприятным факторам внешней среды, получение биологически активных веществ медицинского и ветеринарного назначения и др.

В настоящее время получены трансгенные мыши, кролики, свиньи, овцы, куры и перепела с различными генными конструкциями (Шевелуха B.C. и др.,1994; Brem G., 1988). Живая масса полученных трансгенных крольчат и поросят не отличалась при рождении от контроля, хотя в экспериментах на мышах отмечали более быстрый рост трансгенных мышей, которые имели большую массу, чем в контроле, в 1,5-2,4 раза (Brem G. et. al., 1986; Pristo et al., 1999). Некоторые авторы приводят экспериментальные данные, в которых отмечают, что скорость роста трансгенных свиней не изменялась.

Новые технологии выращивания животных, направленные на повышение их продуктивности путем выведения трансгенных особей, предусматривают использование так называемых «агентов перераспределения», которые, изменяя метаболизм животного, способствуют усиленному росту ткани и снижению накопления жира. Вместе с тем при выведении новых пород животных с заранее заданными свойствами и качественными показателями возникает большое число проблем. Это связано с тем, что целенаправленное воздействие на усиленный рост мышечной ткани как при племенной работе, так и при использовании современных биотехнологий и генной инженерии может привести к негативным последствиям: может изменяться структура и окраска мышечной ткани, рН, жесткость, влагоудерживающая способность, степень и характер жирности (мраморность), а также консистенция, вкусовые и ароматические свойства мяса после термической обработки (Рогов И.А. и др. 2001).

Не представляется возможным использование полученной животноводческой продукции в пищевых целях, так как не доказана, особенно с учетом отдаленных последствий, её безопасность для человека. В этой связи важнейшей задачей является проведение широких исследований по контролю безопасности такого сырья и продуктов его переработки, хотя многие ученые считают, что введенный в объект ген - это участок ДНК, а его продукт - белок. В желудочно-кишечном тракте нуклеиновые кислоты расщепляются на нуклеотиды, а белки расщепляются на аминокислоты, которые не представляют опасности для человека. По мнению Рогова И.А. (2000), на сегодняшний день в мире нет ни одного научного аргумента против использования таких изученных и разрешенных к применению трансгенных культур, как соя, картофель, кукуруза и др. Об этом свидетельствуют результаты медико-биологических исследований Института питания РАМН (Сорокина Е.Ю. и др., 2003). По их данным, трансгенная соя и кукуруза не представляют опасности для человека. И, тем не менее, сегодня важна информированность переработчиков и потребителей сельскохозяйственной продукции о происхождении растительного сырья.

Кроме того, необходимо проводить длительные эксперименты на различных видах животных, птиц и простейших с использованием различных методов с целью выявления отдаленных неблагоприятных последствий при употреблении ГМ продуктов питания.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1. Введение в состав корма перепелам мясокостной муки, полученной от трансгенной свинины, содержащей ген mMTl/hGRF гормона роста человека, не приводит к накоплению гена в составе мышечной ткани перепелов.

2. Использование тест-организма Tetrahymena pyriformis подтвердило отсутствие токсичности образцов трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием с высокой степенью достоверности.

3. Относительная биологическая ценность трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием и определенная с помощью тест-организма Tetrahymena pyriformis с высокой степенью достоверности (99,95%), близка по значению к аналогичному показателю нетрансгенных образцов.

4. При токсикологической оценке трансгенной свинины на перепелах не установлено отрицательного влияния на показатели яйценоскости, выводимость перепелят, живой массы перепелов при выращивании, а также на интегральный показатель хронической интоксикации. Эмбрионы развивались нормально, мутагенного влияния трансгенной свинины на рост и развитие перепелиных эмбрионов не установлено. Результаты исследований позволяли использовать в качестве тест-организма перепелов для комплексной оценки свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки с учетом отдаленных последствий.

5. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины в хронических экспериментах на белых крысах:

- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста, которые составили у подопытной группы, получавшей вареные колбасы - 124,00+4,90 г/гол и 2,76+0,17 г/гол и у контрольной - 116,00+4,70 г/голову и 2,58+0,13 г/голову соответственно;

- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста, которые составили у подопытной группы, получавшей консервы 105,00+5,40 г/голову, и 2,33+0,15 г/голову; у контрольной - 106,00 +5,10 г/голову и 2,36+0,10 г/голову соответственно;

6. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины по интегральному показателю хронической интоксикации (ИПХИ):

- по интегральному показателю хронической интоксикации (в %), который составил у подопытной группы, получавшей вареные колбасы по печени 4,58+0,21, селезенке -2,10+0,05, сердцу - 0,73+0,06 и почкам - 0,92+0,05, в контроле - 4,27+0,15; 2,02+0,04; 0,67+0,09 и 0,87+0,07 соответственно;

- по интегральному показателю хронической интоксикации, который составил у подопытной группы, получавшей консервы по печени 4,24+ 0,16; селезенке -2,00+0,09; сердцу - 0,71+0,05 и почкам -0,88+0,04, в контроле - 4,20+0,14; 1,87+0,06; 0,68+0,03 и 0,85+0,04 соответственно.

7. Микробная обсемененность трансгенной свинины по КМАФАнМ не отличается от аналогичного показателя контрольной (нетрансгенной) свинины и составляет соответственно 0,7 lxl03+0,80х 102 и 0,86х103+0,92х102. Других микроорганизмов, регламентированных СанПиН 2.3.2.1078-01 в исследованных образцах свинины, предназначенной для изготовления колбас и консервов не обнаружено. В образцах вареных колбас и консервов, изготовленных из трансгенной свинины по микробиологическим показателям не отличались от контрольных (из нетрансгенной свинины) и были промышленно стерильны.

8. При ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя трансгенных свиней (с использованием генной конструкции релизинг-фактора соматотропина mMTl/hGRF) и нетрансгенных свиней не выявлено различий. Незначительные различия отмечены в выходах мышечной и костной тканей, шкурки, технических зачисток. У нетрансгенных свиней получен меньший выход жира-сырца (25,60+1,30%) на 2,90% по сравнению с выходом жира-сырца у трансгенных свиней (28,50+1,41%).

9. Влагоудерживающая способность в % к общей влаге в составе парной трансгенной свинины находилась в пределах значений 59,40+0,11; в составе охлажденной - 54,2+0,14; соответствующие показатели для нетрансгенной свинины составили 60,14+0,06 и 55,2+0,10. Критерий достоверности при этом составлял.

10. При гистологических исследованиях внутренних органов подопытных крыс, получавших трансгенную свинину и контрольных морфологических отличий не выявлено.

Предложения для практики. На основании материалов исследований разработаны Методические рекомендации: «Тест-системы по оценке безопасности мясного сырья трансгенного происхождения», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН (М., 2005), которые могут быть использованы в специальных лабораторных и научно-исследовательских учреждениях для контроля свинины трансгенного и нетрансгенного происхождения и продуктов ее переработки.