Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 16.00.06
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения
На правах рукописи
Морозова Елена Николаевна
ГАРМОНИЗАЦИЯ КРИТЕРИЕВ И МЕТОДОВ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА И БЕЗОПАСНОСТИ ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
16.00 06 — Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва-2005
Работа выполнена в отделе технического регулирования, стандартизации и сертификации Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИВСГЭ РАСХН)
Научный руководитель:
доктор биологических наук
Вячеслав Владимирович Светличкин (ГНУ ВНИИВСГЭ)
Официальные оппоненты:
- заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук, профессор
- доктор биологических наук, профессор
Михаил Павлович Бутко (ГНУ ВНИИВСГЭ) Юрий Павлович Фомичев (ГНУ ВНИИЖ)
Ведущая организация: Московский государственный университет прикладной биотехнологии
Защита состоится « 26 » января 2005 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.006.008.01. при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, 5).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.
Автореферат разослан
ы
»асим£}\Л 2оо^г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук
Е.С. Майстренко
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы.
Вступивший в силу 1 июля 2003 года Федеральный закон «О техническом регулировании» создал основу для проведения государственной реформы технического регулирования. Суть преобразований сводится к тому, чтобы на основе рационального сочетания свободного предпринимательства и государственного регулирования, гармонизации с международной практикой этой деятельности обеспечить безопасность продукции и повышение ее конкурентоспособности.
Реформа предопределяет необходимость гармонизации основных элементов технического регулирования, обеспечивающих безопасность и качество продукции: технических регламентов, стандартов, процедур подтверждения соответствия, аккредитации, контроля и надзора.
Одной из основных целей реформирования системы технического регулирования является повышение эффективности защиты рынка от-опасной продукции. Для этого необходимо внедрение стандартов оценки безопасности и качества продуктов, отвечающих международным критериям.
Одним из основных критериев подтверждения соответствия продукции, согласно Федеральному закону «О техническом регулировании», является ее идентификация.
Идентификация продукции способствует исключению из торговли недоброкачественной и фальсифицированной продукции, представляющей серьезную угрозу для здоровья населения.
Идентификация сырья и продуктов животного происхождения является важным элементом в системе Государственного ветеринарного надзора. Актуальное значение при этом имеют такие критерии, как определение видовой принадлежности мяса и рыбы, определение видового состава мясных и рыбных продуктов и определение фальсифицирующих примесей, в частности, определение примесей из генетически модифицированных источников.
Известны различные методы идентификации продуктов животного происхождения, они основаны на электрофоретическом анализе белков, биохимических, гистологических исследованиях (Хвыля СИ. и др., 1994; Писарева В.М., 1996; Кузнецова Т.Г., 1997; Kim H. et al., 1986; Jman I.M., 1990; Rehben H., 1990; Helle A. et al., 1996; Taylor H. et al. 2000).
Весьма чувствительными и специфичными способами идентификации продуктов животного происхождения являются методы ДНК-диагностики. Они позволяют проводить анализ термообработанных образцов (Комаров А.А., Обухов И.Л., 2000; Комаров А.А., 2001, Chikuni К. et al., 1990; Hunt D.J., 1997; Kappes S.M. et al., 1997; Jamamato M. et al., 1998; Tortaglia M. et al., 1998; Buntjer J.B., Lamine A., 1999; Lockhart D.J., Winzeler E.A., 2000).
Тест-системы на основе иммунологического анализа просты в исполнении, экспрессны и специфичны (Серегин И.Г. и др., 1997; Mecedo-Silva ., Bardos S.F., 2000).
Важным является проведение сравнительных исследований различных тест-систем идентификации с целью их оценки для использования в качестве арбитражных методов при подтверждении соответствия или в качестве скрининговых тестов при мониторинговых испытаниях.
Решение проблем идентификации сырья и пищевых продуктов внесет определенный вклад в обеспечение гарантий качества и безопасности продукции.
Учитывая, что Российская Федерация интегрирует в мировую экономику, можно ожидать глобального расширения каналов поступления на внутренний рынок широкого ассортимента пищевых продуктов, полученных из генетически модифицированных источников (ГМИ) (Романов Г.А., 2000).
Безопасность пищевых продуктов из ГМИ является ключевым фактором, определяющим возможность их широкого использования в питании. Мнения по этому вопросу противоречивы, однако потребитель должен располагать информацией о содержании в продукции ГМИ (Попова М.Ю. и др., 2003).
Во вступившем в силу Федеральном законе «О техническом регулировании» предусмотрено совершенствование систем подтверждения соответствия продукции. Большую приоритетность получило добровольное подтверждение соответствия в форме добровольной сертификации.
Добровольное подтверждение соответствия стало действенным инструментом повышения конкурентоспособности отечественных товаров, продукции и услуг на рынке.
Таким образом, совершенствование контроля безопасности и качества пищевых продуктов на основе внедрение гармонизированных методов идентификации мяса и определения компонентов из генетически модифицированных источников (ГМИ), фальсифицирующих продукцию животного происхождения, является важным аспектом подтверждения соответствия этой продукции. Актуальной задачей гармонизации механизма подтверждения соответствия продукции становится также разработка новых систем добровольной сертификации, включающих критерии и методы оценки безопасности и качества, отвечающие международным стандартам.
Цель и задачи исследований.
Целью исследований являлась гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения при подтверждении соответствия продукции.
В задачи исследований входило:
провести сравнительный анализ литературных данных по зарубежным и отечественным критериям и методам оценки безопасности и качества продуктов животного происхождения;
- гармонизировать методы определения видовой принадлежности мяса с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК - диагностики;
- разработать модифицированную методику идентификации свинины на основе ПЦР и ДНК-диагностики;
- определить чувствительность и специфичность методов идентификации свинины на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики;
- разработать методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики;
- гармонизировать методику определения компонентов из генетически модифицированных источников (ГМИ), фальсифицирующих продукцию животного происхождения, с использованием стандартизованной по международным требованиям тест-системы на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа;
- разработать гармонизированные критерии и методы оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля".
Научная новизна:
Проведен сравнительный анализ литературных данных по зарубежным и отечественным критериям и методам оценки безопасности и качества продуктов животного происхождения н определены основные направления их гармонизации.
Проведена гармонизация критериев и методов идентификации мяса и определения ГМИ с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
Проведена гармонизация методов идентификации свинины с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики.
Разработана модифицированная методика идентификации свинины, включающая выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификации ДИК с биотинилированными праймерами, гибридизации меченных ампликонов с ДНК-зондами, иммобилизованными на планшетах и
детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом.
Определены чувствительность и специфичность метода на основе иммунодиффузии, позволяющего проводить идентификацию до 5% свинины в сырье и сырых продуктах питания.
Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% свинины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.
Показана возможность определения до 0,01% ДНК ГМИ с использованием стандартизованной тест-системы на основе амплификации с биотинилированными праймерами, последующей гибридизацией со специфичными ДНК-зондами и детектированием гибридных молекул по иммуноферментному типу.
Разработаны гармонизированные критерии и методы оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения для системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля".
Практическая ценность.
На основании результатов исследований разработаны:
«Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 18.03.2004г.);
«Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе ДНК-диагностики» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 18.03.2004г.);
- разработаны требования к системе добровольной сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля» (система добровольной сертификации
представлена для утверждения в Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии, октябрь 2004 г.).
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены
на:
- заседании Ученого совета ВНИИВСГЭ (2004 г.);
- межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2004 г.);
- IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002 г.);
- II Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2003г.);
- V Международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2004 г.).
Публикации. Результаты исследований отражены в 7 научных статьях. Положения, выносимые на защиту.
- Изучение российских и международных критериев и методов оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения и определение основных направлений их гармонизации.
- Исследования по гармонизации методов определения видовой принадлежности мяса с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК - диагностики.
- Разработка модифицированной методики идентификации свинины на основе ПЦР и ДНК-диагностики.
- Определение чувствительности и специфичности методов идентификации свинины на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики.
- Исследования по гармонизации методики определения компонентов из генетически модифицированных источников (ГМИ), фальсифицирующих продукцию животного происхождения, с использованием стандартизованной по международным требованиям тест-системы на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
- Разработка гармонизированных критериев и методов оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля".
Структура и объем работы.
Диссертация состоит из введения, литературного обзора, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений.
Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц и 12 рисунков. Список литературы включает 193 источника отечественных и зарубежных авторов. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Материалы и методы исследований.
Работа проводилась в период с 2001 по 2005 гг. Диссертационная работа выполнена на основании плана научно-исследовательских работ ВНИИВСГЭ и включает часть темы 05.02.29.1.
В качестве материалов использовали Федеральный закон "О техническом регулировании", декларации Европейского Союза, "Кодекс Алиментариус", "Соглашение по применению санитарных и фитосанитарных мер" (СФС) и "Соглашение по техническим барьерам и торговле" (ТБТ), Санитарные правила и нормы (СанПиН 2.3.2.1078-01), документы Ветеринарного законодательства.
Экспериментальная часть работы проводилась в отделе технического регулирования, стандартизации и сертификации и лаборатории санитарной микробиологии ГНУ ВНИИВСГЭ, лаборатории "Союзэкспертиза" Торгово-промышленной палаты РФ.
Были проанализированы также литературные, патентные источники, ГОСТы, методические указания, методические рекомендации по различным методам исследования, применяемых для определения показателей безопасности и качества животноводческой продукции, включая биохимические, микробиологические, хроматографические,
радиологические, иммунологические методы и методы генной диагностики.
В экспериментальных исследованиях использовали тест-наборы серии SureFood на основе ПЦР и ИФА производства Германии, предоставленные фирмой "Стайлаб", для идентификации свинины и определения ГМИ, а также тест-наборы серии PRIME, производства США, для идентификации свинины на основе метода иммунодиффузии.
2.2 Результаты исследований.
2.2.1 Совершенствование методов определения видовой принадлежности мяса на основе ДНК-диагностики и иммунодиффузии.
Одним из основных критериев подтверждения соответствия продукции, в свете новой концепции технического регулирования, является ее идентификация.
Появление в обороте недоброкачественной, фальсифицированной мясной продукции, несоответствующей международным стандартам, представляет серьезную угрозу для здоровья населения.
Гармонизация методов идентификации продукции может проводиться как путем прямого внедрения существующих стандартизованных по международным требованиям тест-систем, так и разработкой новых тест-систем отвечающих международным стандартам.
За рубежом для обеспечения строгого соответствия условий производства тест-наборов и реагентов и их стандартизации приняты требования системы сертификации серии ISO 9000
Наиболее перспективными в плане определения видовой принадлежности мяса и мясопродуктов являются иммунологические методы и методы ДНК-диагностики.
Задачей первого этапа наших исследований являлась гармонизация методов определения видовой принадлежности мяса с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК - диагностики.
Для решения этой задачи использовали тест-систему серии PRIME производства США и тест-систему серии SureFood, производства Германии для идентификации мяса и мясных продуктов из свинины.
Наборы реагентов выпускаются под контролем системы качества сертификации по стандарту ИСО - 9001.
Тест системы серии PRIME дают возможность идентифицировать свинину в мясопродуктах иммунологическим методом. Принцип реакции (метод иммунодиффузии по Оухтерлони) основан на диффузии диагностических антител и испытуемого антигена из пропитанных дисков в гель, при этом в случае их взаимодействия образуется полоса преципитации между противоположными дисками.
Компонентами анализа являются испытуемый материал (сырое мясо, мясопродукты), диски с иммобилизованными антителами к белкам свинины и диски сравнения с иммобилизованными антигенами.
Всего исследовано 10 образцов в 3 повторностях.
Исследование выполнялось в несколько стадий.
От образца исследуемой продукции отбирали пробу по возможности без жира и соединительной ткани, соблюдая меры предосторожности, для предотвращения загрязнения исследуемой пробы мясным соком предыдущих проб;
Постановка реакции иммунодиффузии занимала по времени 10-20 минут (без учета времени доведения всех компонентов набора до комнатной температуры) и заключалась в следующем: на чашку с гелем пинцетами размещали в подписанные на геле зоны соответствующие диски, уже пропитанные специфичными антителами; диск, пропитанный
соответствующим антигеном и диски, пропитанные мясным соком исследуемых образцов.
Далее чашку инкубировали в термостате с постоянной комнатной температурой в течение суток.
Учет и оценку результатов проводили визуально по линии преципитации между дисками.
Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе иммунодиффузии, позволяющего проводить идентификацию до 5% свинины в сырье и сырых продуктах питания (таблица 1).
Таблица 1
№ п/л Исследуемые образцы Специфичные антигены для идентификации образцов методом иммунодиффузии
свинина
1 2 3
1 Сырая говядина -
2 Сырая свинина +
3 Сырая баранина
4 Сырое мясо курицы
5 Сырая свинина 50 %, курица 50 % +
6 Сырая свинина 80 %, курица 20 % +
7 Сырая свинина 95 %, курица 5 % +
8 Сырая говяжья печень _
9 Сырой шницель +
10 Сырой бифштекс
+ - положительная реакция преципитации - - отрицательная реакция преципитации
Набор SureFood® показал возможность ускоренно и эффективно идентифицировать видоспецифичную ДНК различных животных в составе
продовольственного сырья, кормов и готовой пищевой продукции посредством полимеразой цепной реакции (ПЦР), ДНК-гибридизации и детектирования гибридных молекул на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
Благодаря короткому размеру продукта ПЦР (размер ампликона составляет 125 пар оснований), определение видоспецифичной ДНК может выполняться не только в продовольственном сырье, но и в образцах, подвергнувшихся глубокой переработке, например, в готовых пищевых продуктах, мясокостной муке, комбикормах и т.д.
В задачи наших исследований входило определение чувствительности и специфичности метода для идентификации свинины.
Всего исследовано 27 образцов в трех повторностях.
Исследование выполнялось в три стадии:
1. Изоляция и очистка ДНК исследуемой пробы (использовались реагенты наборов SureFood PREP Aimal из проб продовольственного сырья и не термообработанных пищевых продуктов и SureFood PREP Aimal X из проб продовольственного сырья и пищевых продуктов, подвергнутых термической обработке).
2. ПЦР амплификация фрагмента общего гена с помощью специфического биотинилированного праймера.
3. Детекция ПЦР-ампликонов в лунках ИФА-планшета с помощью специфических гибридизационных зондов
Связывание биотинилированных продуктов ПЦР в лунках стрептавидин-покрытого планшета.
- Денатурирование связанных продуктов ПЦР и удаление несвязанных нитей ДНК.
- Гибридизация связанных продуктов ПЦР с помощью специфических меченых зондов.
- Детекция гибридизационных зондов с помощью иммуносорбции антител с последующей цветной реакцией.
Показана высокая чувствительность и специфичность метода с использованием тест-системы серии SureFood, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% свинины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных (Таблица 2).
Таблица 2
№ п/п Описание образца Идентификация видоспецифичной ДНК / код зонда
свинина
1 2 3
] Сырая говядина _
2 Сырая свинина +
3 Сырая баранина -
4 Сырая курица
5 Сырой гусь -
6 Сырая индейка
7 Сырая индоутка _
8 Сырая утка
9 Сырая свинина 5%, индейка 95% +
10 Сырая свинина 1%, индейка 99% +
11 Сырая свинина 0,5 %, индейка 99,5% +
12 Сырая свинина 0,5 %, говядина 99,5% +
13 Сырые пельмени "Моя семья"
и Говяжий паштет "Нате", Чешская респ., п/н банки 27/96 +
15 Гусиный паштет "Нате", Чешская респ., п/н банки 26/96 -
16 Вареная говядина _
17 Вареная свинина +
18 Вареная баранина
19 Вареная курица
20 Вареный гусь -
Продолжение таблицы 2 15
1 2 3
21 Вареная индейка
22 Вареная индоутка
23 Вареная утка -
24 Вареная колбаса +
25 Сырокопченая колбаса "Брауншвейгская", Микояновский МК, ГОСТ 16131-86 +
26 Говяжий студень _
27 Свиной студень +
28 Желатин, "Распак", ГОСТ 11293-89 +
+ - положительная реакция
- - отрицательная реакция
Предложенные методы и тест-системы могут быть использованы как в научных исследованиях, так и в широкой практике для контроля качества продукции и выявления фальсифицирующих примесей.
2.2.2. Разработка модифицированной методики идентификации свинины на основе ПЦР и ДНК-гибридизации.
Как было показано в предыдущем разделе, тест-набор серии SureFood позволял с высокой чувствительностью и специфичностью проводить идентификацию свинины. Однако, методика пробоподготовки достаточно длительная, трудоемкая, включает много этапов центрифугирования, а также использование дорогостоящих препаратов протеиназы К и
хроматографических колонок для очистки ДНК.
С целью оптимизации способа идентификации свинины нами разработана методика на основе амплификации и ДНК-гибридизации с модифицированной пробоподготовкой.
Для выделения ДНК использовали СТАВ-буфер, состоящий из 3%-СТАВ, ЮOMM TrisHCL до рН 8.0 и 20мМ EDTA СТАВ-буфер, в
более низких концентрациях он применялся ранее для идентификации говядины.
1 г мяса или мясной продукции гомогенизировали, с 10 мл нагретого до 65 °С СТАВ-буфера. Гомогенат инкубировали при температуре 65 °С в течение 30 мин. Остатки разрушенных тканей осаждали центрифугированием в течение 2 мин при 500g. К супернатанту добавляли равный объем хлороформа и встряхивали в течение 10 мин. Центрифугировали 5 мин при 500g. Отбирали верхнюю водную фазу и еще раз повторяли обработку хлороформом. К полученному объему раствора ДНК добавляли двойной объем охлажденного до 0°С изопропанола и осаждали ДНК центрифугированием при 5 000 g в течение 10 мин, осадок ДНК подсушивали и растворяли в дистиллированной воде. Далее проводили ПЦР, гибридизацию с ДНК-зондами на свинину и детектирование гибридных молекул по иммуноферментной методике с компонентами тест-набора SureFood.
При анализе термообработанных продуктов проводили экстракцию ДНК с помощью СТАВ-буфера, однократную депротеинизацию изопропанолом и дальнейшую очистку ДНК, амплификацию, гибридизацию и детектирование гибридных молекул с компонентами набора SureFood.
Как показали исследования, выход ДНК по модифицированной методике был на уровне или несколько превышал количество ДНК, получаемое при использовании тест-системы SureFood. При этом соотношения оптических плотностей равнялось
соответственно 1,8 и 2 , что свидетельствовало о достаточной очистке ДНК от белка и полисахаридов.
Данные, приведенные в таблице 3, показывают высокую сдецифичность идентификации свинины по модифицированной методике и корреляцию результатов с результатами, полученными с использованием тест-набора SureFood.
Таблица 3
Специфичность идентификации свинины с использованием различных
методов
Исследуемые образцы Результаты выявления ДНК свиньи
с помощью модифицированной методики с помощью методики SureFood
Сырая свинина + +
Сырая говядина - -
Сырая индейка - -
Сырая свинина 0,5 %, индейка 99,5% + +
Вареная свинина + +
Сырокопченая колбаса «Брауншвейгская» + +
Вареная колбаса + +
Таким образом, разработанная модифицированная методика позволяет оптимизировать пробоподготовку при идентификации свинины, сократив при этом в 2 раза количество этапов пробоподготовки и исключив использование дорогостоящих препаратов К протеиназы, а для сырых продуктов и хроматографических колонок.
2.2.3. Сравнительный анализ и гармонизация методов определения компонентов из ГМИ, фальсифицирующих продукцию животного происхождения.
Как известно, для определения ГМИ используются методы генной диагностики: полимеразно - цепная реакция, ДНК-микрочиповая технология и анализ нуклеотидных последовательностей, амплификация генов с последующей ДНК-гибридизацией, а также метод иммуноферментного анализа.
• В настоящее время как у нас в стране, так и за рубежом определение ГМИ проводят по 35 S промотору и NOS терминатору. Эти нуклеотидные
последовательности являются в настоящее время универсальными областями растительных ДНК, участвующими в трансформации генов, поэтому они были взяты за основу при разработке международных стандартов и российских ГОСТов для определения ГМИ.
В качестве арбитражного количественного метода при определении ГМИ принят метод ПЦР в реальном времени.
Однако, при проведении большого числа мониторинговых исследований сначала используют недорогостоящий качественный ПЦР -анализ.
При этом наборы, основанные на классической схеме с использованием электрофореза, делают анализ несколько трудоемким.
На следующем этапе наших исследований мы проводили оценку возможности использования наборов SureFood США для выявления ГМИ в растительных продуктах. Как было уже отмечено, производство наборов серии SureFood стандартизовано по международной системе ИСО 9000.
Набор SureFood дает возможность ускоренно и эффективно идентифицировать специфичную ДНК промотора 35S и терминатора NOS в составе продовольственного сырья, кормов и готовой пищевой продукции посредством полимеразой цепной реакции (ПЦР), ДНК-гибридизации и детектирования гибридных молекул на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
В процессе испытаний были получены результаты, подтверждающие высокую специфичность и чувствительность определения ГМИ с помощью тест-системы серии SureFood.
Чувствительность тест-системы серии SureFood позволяла выявлять до 0,01% ДНК ГМ-происхождения (таблице 4).
Показана корреляция результатов определения ГМИ с помощью тест-системы серии SureFood и классической методики с использованием электрофореза.
Таблица 4
Определение чувствительности тест-системы серии 8игеРссё для определения ГМИ
Процент трансгенной ДНК Результаты анализа (по интенсивности окрашивания гибридных молекул)
Для промотора 35Б Для терминатора NOS
1 2 3
5% ++++ ++++
1% ++++ ++++
0,5% ++++ ++++
0,1% +++ +++
0,05% ++ ++
0,01% + +
Положительный контроль +-Н-+ +-Н-+
Отрицательный контроль - -
Полученные результаты свидетельствуют о том, что тест-система 8игеРссё обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Она более практична в исполнении по сравнению с классической методикой с использованием электрофореза, позволяет проводить компьютерное протоколирование конечного результата и вследствие этого может быть рекомендована для качественного определения ГМИ.
2.2.4. Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности сырья и пищевых продуктов в системе добровольного подтверждения соответствия.
На следующем этапе были проведены исследования по разработке требований системы добровольной сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля».
Основной целью при разработке системы являлось создание требований для получения высококачественных продуктов питания.
Система должна предусматривать оценку не только самой продукции, но и предприятий выпускающих эту продукцию.
Для оценки предприятий, производящих продукцию, были выбраны критерии ХАССП (англ. НЛССР - Hazard Analysis and Critical Control Points
- анализ рисков и критические точки), которая является основной моделью управления качеством и безопасностью продукции на пищевых предприятиях развитых стран мира.
С использованием приведенных выше гармонизированных критериев и методов оценки безопасности и качества продукции, нами были разработаны требования для добровольной системы сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля».
Система сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля» основана на критериях применяемых к детскому питанию и включает дополнительные гармонизированные требования:
- не допускается наличие в мясе и мясопродуктах антибиотиков (пенициллина и стрептомицина);
- не допускается наличие в мясе и мясопродуктах субстанций, обладающих анаболическим эффектом (стильбенов, тиреостатиков, стероидов, зеранола, тренболон ацетата, меленгестрол ацетата, дексаметазона, гестагенов);
- не допускается наличие в мясе и мясопродуктах хлорорганических соединений (полихлорированные бифенилы, альдрин, гептахлор, эндрин);
- не допускается наличие в мясе и мясопродуктах антибактериальных препаратов (сульфаниламидов и квинолов);
- не допускается наличие в мясе и мясопродуктах антигельминтиков (ивермектинов, авермектинов, тиабендазола, триклабендазола, фебантела, фенбендазола, оксифендазола, эприномектина);
- выявляются радиационно-обработанные продукты питания (допустимый уровень 10 кГр);
- в 25 г мясной продукции не допускается наличие микроорганизмов (Escherichia coli O157:H7, Campylobacter Jejuni, Yersinia enterocolitica);
в мясных продуктах допускается содержание генетически-модифицированных примесей не более 1 %.
Таким образом, разработанная система добровольной сертификации содержит критерии и методы оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения, отвечающие международным нормам, что является существенным вкладом в гармонизацию систем подтверждения соответствия в свете новой концепции технического регулирования.
ВЫВОДЫ
1. Анализ научно-технической литературы показал, что критерии и методы оценки безопасности и качества продукции, в том числе животного происхождения требуют гармонизации в различных аспектах технического регулирования: в системах Государственного контроля и надзора, в системах подтверждения соответствия, при стандартизации.
2. В соответствии с новой концепцией технического регулирования, добровольная сертификация приобретает важную роль в системах подтверждения соответствия как механизм, повышающий конкурентоспособность продукции и обеспечивающий ее безопасность и качество.
3. Проведена гармонизация критериев и методов идентификации мяса и определения ГМИ с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
4. Разработана модифицированная методика идентификации свинины, включающая выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификации ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизацию меченных ампликонов с ДНК-зондами, иммобилизованными на планшетах, и детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом.
5. Чувствительность и специфичность метода на основе иммунодиффузии, позволяющего проводить идентификацию до 5% свинины в сырье и сырых продуктах животного происхождения.
6. Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе амплификации с последующей гибиридизацией, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% свинины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.
7. Проведена гармонизация метода определения компонентов из ГМИ, фальсифицирующих продукцию животного происхождения с использованием стандартизованной тест-системы на основе амплификации с биотинилированными праймерами, последующей гибридизацией со специфичными ДНК-зондами и детектированием гибридных молекул по иммуноферментному типу. Чувствительность метода позволяла определять до 0,01% ДНК ГМИ. Метод более практичен в исполнении, по сравнению с классической методикой с использованием электрофореза, позволяет проводить компьютерное протоколирование конечного результата и вследствие этого может быть рекомендована для качественного определения ГМИ.
8. Разработаны требования системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля". Система добровольной сертификации содержит гармонизированные критерии и методы оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения, отвечающие международным нормам.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
Для использования в научных учреждениях и исследовательских лабораториях могут быть рекомендованы разработанные нами:
Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии, 18.03.2004г.);
Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе ДНК-диагностики (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии, 18.03.2004г.);
- Разработаны требования к системе добровольной сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля» (система добровольной сертификации представлена для утверждения в Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии, октябрь 2004 г.).
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
1. Морозова Е.Н. / Об изменениях внесенных в ГОСТ "Рыба мороженная" // Материалы 4-ой Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции", МГУПБ, Москва, 2002, стр. 82-83.
2. Морозова Е.Н. / Анализ современного состояния международных и отечественных критериев и методов оценки безопасности и качества продукции животного происхождения // Труды ВНИИВСГЭ "Проблемы ветеринарной санитарии и экологии", Москва, 2003, стр. 21-27.
3. Морозова Е.Н. / Вопросы гармонизации отечественных правил и методов оценки безопасности и качества животноводческой продукции с международными нормативными документами // Материалы II Международной научной конференции студентов и молодых ученых "Живые системы и биологическая безопасность населения", МГУПБ, Москва, 2003, стр.6-8.
4. Светличкин В.В., Писарева В.М., Кононенко А.Б., Галкин А.В., Морозова Е.Н., Тихомирова Т.А., Маргиева С.А., Соколова Ю.Н. / Видовая принадлежность мяса на основе ДНК-диагностики // "Практик", 2004, № 34, стр. 30-33.
5. Светличкип В.В., Писарева В.М., Кононенко А.Б., Кузькин Б.П., Галкин А.В., Морозова Е.И., Тихомирова Т.А., Маргиева С.А., Узунян Д.Г. / Определение видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии // "Практик", 2004, № 7-8, стр. 28-31.
6. Морозова Е.Н., Маргиева С.А., Писарева В.М., Родин В.И., Светличнкин В.В. / Идентификация мяса и мясопродуктов с использованием стандартизованных тест-систем ДНК- и иммунодиагностики // Материалы V Международной конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветерииарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции", МГУПБ, Москва, 2004, стр. 29 -30.
7. Смирнов A.M., Туник А.Н., Светличкин В.В., Писарева В.М., Коноиеико А.Б., Морозова Е.Н. / Определение видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе ДНК-диагностики и иммунодиффузии // «Ветеринария», 2004, принята в печать.
ВНИИВСГЭ. г. Москва, Звенигородское шоссе, 5 Заказ 03//. Тираж 100 экз.
1731
Оглавление диссертации Морозова, Елена Николаевна :: 2005 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.
1.1. Техническое регулирование и подтверждение соответствия продукции.
1.2. Сравнительный анализ зарубежных и отечественных критериев и методов оценки безопасности и качества продуктов животного и растительного происхождения.
1.3. Идентификация мяса и методы анализа.
1.4. Фальсификация продуктов животного происхождения компонентами из генетически модифицированных источников (ГМИ). Методы их определения.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Цель и задачи исследования -.
2.2. - Материалы и методы исследования.
2.2.1. Методика определения видовой принадлежности мяса на основе иммундодиффузии.
2.2.1.1. Отбор и подготовка проб для исследования.
2.2.1.2. Постановка реакции иммунодиффузии.
2.2.1.3. Учет и оценка результатов.
2.2.2. Методика определения видовой принадлежности мяса на основе ДНК-диагностики.;.
2.2.2.1. Выделение и очистка ДНК животных из проб продовольственного сырья и не термо-обработанных пищевых продуктов с помощью тест-набора SureFood® PREP Animal.
2.2.2.2. Выделение и очистка ДНК животных из проб продовольственного сырья и пищевых продуктов, подвергнутых термической обработке с помощью тест-набора SureFood® PREP Animal X.
2.2.2.3. Постановка ПЦР.
2.2.2.4. Исследование продуктов ПЦР методом гибридизации с последующим иммуноферментным анализом и оценка результатов.
2.2.3. Методика определения ГМИ на основе ПЦР и электрофоретического детектирования.
2.2.4. Методика определения ГМИ на основе амплификации, ДНК-гибридизации и иммуноферментного детектирования.
2.2.5. Статистическая обработка результатов.
2.3. Результаты исследования.
2.3.1. Совершенствование методов определения видовой гф принадлежности мяса на основе ДНК-диагностики и иммунодиффузии анализа.
2.3.2. Разработка модифицированной методики идентификации свинины на основе ПЦР и ДНК-гибридизации.
2.3.3 Сравнительный анализ и гармонизация методов определения компонентов из ГМИ, фальсифицирующих продукцию животного происхождения.
2.3.4. Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности сырья и пищевых продуктов в системе , добровольного подтверждения соответствия.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Морозова, Елена Николаевна, автореферат
Актуальность темы.
Вступивший в силу 1 июля 2003 года Федеральный закон «О техническом регулировании» создал основу для проведения государственной реформы технического регулирования. Суть 'преобразований сводится к тому, чтобы на основе рационального сочетания свободного предпринимательства и государственного регулирования, гармонизации с международной практикой этой деятельности обеспечить безопасность продукции и повышение ее конкурентоспособности.
Реформа предопределяет необходимость гармонизации основных элементов технического регулирования, обеспечивающих безопасность и качество продукции: технических регламентов, стандартов, процедур подтверждения соответствия, аккредитации, контроля и надзора (19, 71).
Одной из основных целей реформирования системы технического регулирования является повышение эффективности защиты рынка от опасной продукции. Для этого необходимо внедрение стандартов оценки безопасности и качества продуктов, отвечающих международным критериям.
Одним из основных критериев подтверждения соответствия продукции, согласно Федеральному закону «О техническом регулировании», является ее идентификация.
Идентификация продукции способствует исключению из торговли недоброкачественной и фальсифицированной продукции, представляющей серьезную угрозу для здоровья населения.
Идентификация сырья и продуктов животного происхождения является важным элементом в системе Государственного ветеринарного надзора. Актуальное значение при этом имеют такие критерии, как определение видовой принадлежности мяса и рыбы, определение видового состава мясных и рыбных продуктов и определение фальсифицирующих примесей, в частности, определение примесей из генетически модифицированных источников.
Известны различные методы идентификации продуктов животного происхождения, они основаны на электрофоретическом анализе белков, биохимических, гистологических исследованиях (38, 55, 89, 134, 144, 168, 181).
Весьма чувствительными и специфичными способами идентификации продуктов животного происхождения являются методы ДНК-диагностики. Они позволяют проводить анализ термообработанных образцов (30, 31, 108, 111, 139, 180).
Тест-системы на основе иммунологического анализа просты в исполнении, экспрессны и специфичны (73, 154).
Важным является проведение сравнительных исследований различных тест-систем идентификации с целью их оценки для использования в качестве арбитражных методов при подтверждении соответствия или в качестве скрининговых тестов при мониторинговых испытаниях.
Решение проблем идентификации сырья и пищевых продуктов внесет определенный вклад в обеспечение гарантий качества и безопасности продукции.
Учитывая, что Российская Федерация интегрирует в мировую экономику, можно ожидать глобального расширения каналов поступления на внутренний рынок широкого ассортимента пищевых продуктов, полученных из генетически модифицированных источников (ГМИ) (63).
Безопасность пищевых продуктов из ГМИ является ключевым фактором, определяющим возможность их широкого использования в питании. Мнения по этому вопросу противоречивы, однако потребитель должен располагать информацией о содержании в продукции ГМИ (59).
Во вступившем в силу Федеральном законе «О техническом регулировании» предусмотрено совершенствование систем подтверждения соответствия продукции. Большую приоритетность получило добровольное подтверждение соответствия в форме добровольной сертификации.
Добровольное подтверждение соответствия стало действенным инструментом повышения конкурентоспособности отечественных товаров, продукции и услуг на рынке.
Таким образом, совершенствование контроля безопасности и качества пищевых продуктов на основе внедрение гармонизированных методов идентификации мяса и определения компонентов из ГМИ, фальсифицирующих продукцию животного происхождения, является важным аспектом подтверждения соответствия этой продукции. Актуальной задачей гармонизации механизма подтверждения соответствия продукции становится также разработка новых систем добровольной сертификации, включающих критерии и методы .оценки безопасности и качества, отвечающие международным стандартам.
Цель и задачи исследований.
Целью исследований являлась гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения при подтверждении соответствия продукции.
В задачи исследований входило: провести сравнительный анализ литературных данных по зарубежным и отечественным критериям и методам оценки безопасности и качества продуктов животного происхождения;
- гармонизировать методы определения видовой принадлежности мяса с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК - диагностики;
- разработать модифицированную методику идентификации свинины на основе ПЦР и ДНК-диагностики;
- определить чувствительность и специфичность методов идентификации свинины на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики;
- разработать методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики;
- гармонизировать методику определения компонентов из генетически модифицированных источников, фальсифицирующих продукцию животного происхождения, с использованием стандартизованной по международным требованиям тест-системы на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа;
- разработать гармонизированные критерии и методы оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля".
Научная новизна:
Проведен сравнительный анализ литературных данных по зарубежным и отечественным критериям и методам оценки безопасности и качества продуктов животного происхождения и определены основные направления их гармонизации.
Проведена гармонизация критериев и методов идентификации мяса и определения ГМИ с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
Проведена гармонизация методов идентификации свинины с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики.
Разработана модифицированная методика идентификации свинины, включающая выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификации ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизации меченных ампликонов с ДНК-зондами, иммобилизованными на планшетах и детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом.
Определены чувствительность и специфичность метода на основе иммунодиффузии, позволяющего проводить идентификацию до 5% свинины в сырье и сырых продуктах питания.
Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% свинины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.
Показана возможность определения до 0,01% ДНК ГМИ с использованием стандартизованной тест-системы на основе амплификации с биотинилированными праймерами, последующей гибридизацией со специфичными ДНК-зондами и детектированием гибридных молекул по иммуноферментному типу.
Разработаны гармонизированные критерии и методы оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения для системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля".
Практическая ценность.
На основании результатов исследований разработаны:
Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 18.03.2004г.);
Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе ДНК-диагностики» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 18.03.2004г.);
- разработаны требования к системе добровольной сертификации «Гильдия Поставщиков Кремля» (система добровольной сертификации представлена для утверждения в Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии).
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:
- заседании Ученого совета ВНИИВСГЭ (2004 г.);
- межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2004 г.);
- IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002 г.);
- II Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2003г.);
- V Международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2004 г.).
Публикации. Результаты исследований отражены в 7 научных статьях.
Положения, выносимые на защиту.
- Изучение российских и международных критериев и методов оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения и определение основных направлений их гармонизации.
- Исследования по гармонизации методов определения видовой принадлежности мяса с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе иммунодиффузии и ДНК - диагностики.
- Разработка модифицированной методики идентификации свинины на основе полимеразой цепной реакции (ПЦР) и ДНК-диагностики.
- Определение чувствительности и специфичности методов идентификации свинины на основе иммунодиффузии и ДНК-диагностики.
- Исследования по гармонизации методики определения компонентов из генетически модифицированных источников, фальсифицирующих продукцию животного происхождения, с использованием стандартизованной по международным требованиям тест-системы на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
- Разработка гармонизированных критериев и методов оценки безопасности и качества сырья и продуктов животного происхождения системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля". и
1. ЛИТЕРАТУНЫЙ ОБЗОР
Заключение диссертационного исследования на тему "Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения"
ВЫВОДЫ
1. Анализ научно-технической литературы показал, что критерии и методы оценки безопасности и качества продукции, в том числе животного происхождения требуют гармонизации в различных аспектах технического регулирования: в системах Государственного контроля и надзора, в системах подтверждения соответствия, при стандартизации.
2. В соответствии с новой концепцией технического регулирования, добровольная сертификация приобретает важную роль в системах подтверждения соответствия как механизм, повышающий конкурентоспособность продукции и обеспечивающий ее безопасность и качество.
3. Проведена гармонизация критериев и методов идентификации мяса и определения ГМИ с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем на основе полимеразой цепной реакции, ДНК-гибридизации и иммуноферментного анализа.
4. Разработана модифицированная методика идентификации свинины, включающая выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификации ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизацию меченных ампликонов с ДНК-зондами, иммобилизованными на планшетах, и детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом.
5. Чувствительность и специфичность метода на основе иммунодиффузии позволяет проводить идентификацию до 5% свинины в сырье и сырых продуктах животного происхождения.
6. Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе амплификации с последующей гибиридизацией, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% свинины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.
7. Проведена гармонизация метода определения компонентов из ГМИ, фальсифицирующих продукцию животного происхождения с использованием стандартизованной тест-системы на основе амплификации с биотинилированными праймерами, последующей гибридизацией со специфичными ДНК-зондами и детектированием гибридных молекул по иммуноферментному типу. Чувствительность метода позволяла определять до 0,01% ДНК ГМИ. Метод более практичен в исполнении, по сравнению с классической методикой с использованием электрофореза, позволяет проводить компьютерное протоколирование конечного результата и вследствие этого может быть рекомендована для качественного определения ГМИ.
8. Разработаны требования системы добровольной сертификации "Гильдия Поставщиков Кремля". Система добровольной сертификации содержит гармонизированные критерии и методы оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения, отвечающие международным нормам.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2005 года, Морозова, Елена Николаевна
1. Александрова Н.А. и др. Методы оценки качества мяса и мясопродуктов за рубежом//М., 1997, с. 156.
2. Алехина Л.В., Андреенко В.И., Ивашов В.И. Современные методы анализа качества мяса и мясопродуктов // Мясная промышленность, АгроНИИТЭИММП, М., 1991, с. 35.
3. Беляев Е.Н., Тутельян В.А. Качество и безопасность продуктов детского питания в России: медико-биологические требования и результаты мониторинга // Вопросы питания, 1996, № 5, с. 8-12.
4. Бутко М.П. Организация и современные методы проведения ветеринарно-санитарной экспертизы. Киев 1984.
5. Бутко М.П., Шапкина Л.П. Санитарно-гигиенические проблемы экспертизы мяса пернатой дичи // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с.90.
6. Бурков В.И., Боровков М.Ф., Колесниченко И.С., Касаткин B.C. Ветсанэкспертиза мяса и жира диких 'животных и пернатой дичи // Ветеринария, Москва, 2003, №2, с. 55 -60.
7. Версан В.Г. Актуальные проблемы введения в действие Федерального закона «О техническом регулировании» // Стандарты и качество, 2003, № 5, с. 30-32.
8. Витт С.В., Сапоровская М.Б., Беликов В.Н. Об анализе аминокислот методом газо-жидкосткой хроматографии // Журнал аналитической химии, 1966, т. 21, № 2, с. 227-231.
9. Долгов В.А., Лавина С.А. Методические аспекты оценки качества и безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 162.
10. Донченко Л.В., Надыкта В.Д. Безопасность пищевого сырья и продуктов питания // М., Пищепромиздат, 1999, с. 352.
11. Донченко JI.B., Надыкта В.Д. Безопасность пищевой продукции // М., Пищепромиздат, 2001, с.525.
12. Дубцова Г.Н., Кирюхина М.Н., Дубцов Г.Г. Мясные кулинарные изделия, обогащенные растительным белком // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с.166-168.
13. Езерская Е.Я., Галочкин В.А. Идентификация видоспецифичных мышечных белков сельскохозяйственных животных и птицы.// Сельскохозяйственная биология. Сер.биология животных, 1999, № 6, с.3-9.
14. Журавская Н.К., Алехина Л.Т., Опряшенкова JI.M. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов // М., Агропромиздат, 1985, с. 296.
15. Заяс Ю.Ф. Качество мяса и мясопродуктов // М., Легкая и пищевая промышленность, 1981, с. 312.
16. Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса домашних и диких животных.// Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, Чуваш, с.-х. акад. Чебоксары, 1999, с.23.
17. Карелин А.И., Макаров В.А., Боровков М.Ф. Словарь ветеринарных, зоогигиенических и санитарных терминов. М.: Росагропромиздат., 1990.
18. Комаров А.А. Методы оценки качества и безопасности кормов и кормовых добавок // Ветеринария, № 1, 2001, с. 51 -56.
19. Комаров А. А., Обухов И. Л. Определение видовой принадлежности мясных ингредиентов в кормах для собак и кошек методом ПЦР // Восьмой международный конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. М., 2000, е., 27-28.
20. Комаров А.А., Обухов И.Л., Сорокина М.Ю., Панин А.Н. Определение видовой принадлежности тканей жвачных животных.// Ветеринария 2000., №3., с. 59-62.
21. Комаров А.А., Панин А.Н., Вылегжанина Е.С. Методы контроля анаболиков в продукции животноводства // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с.251-252.
22. Кривононосов М.В. Организация защиты качества продуктов питания // Международный медицинский журнал (г. Харьков), 1998, 4, № 4, с.104-106.
23. Крылова Н.И., Лесковская Ю.Н. Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения // М., Пищевая промышленность, 1968., с. 316.
24. Кузнецова Т.Г. Оценка морфологических свойств мясного сырья и колбасных изделий по микроструктурным показателям // М., Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, 1997.
25. Лабораторные исследования в ветеринарии: химико-токсикологические методы. Под. ред. Антонова Б.И. // М.: Агропромиздат, 1989, с. 319.
26. Лори Т.А. Наука о мясе // М., Пищевая промышленность, 1973, с. 198.
27. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М., изд. «Мир»., 1994, с. 159-172.
28. Могильный М.П., Калашнова Т.В. Пути повышения качества продуктов питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 363-364.
29. Мысик А.Т., Белова С.М., Фомичев Ю.П. и др. Справочник по качеству продуктов животноводства // М., Агропромиздат, 1986, с. 254.
30. Нечаев А.П. Научные основы и технологические решения получения жировых продуктов для здорового и лечебно-профилактического питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 377-379.
31. Николаева М.А., Лычников Д.С., Неверов А.Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов // М., Экономика, 1996, с. 84-95.
32. Новоселов В.П., Шаронова Д.А. Методы геномной «дактилоскопии» в экспертизе идентификации личности и кровного родства // Новосибирск, «Наука» РАН, 1999, с. 1- 134.
33. Обухов И.Л., Панин А.Н., Груздев К.Н. Использование ПЦР в практических ветеринарных лаборатория // Ветеринария, 1997, №2., с.24-27.
34. Олехнович А.А., Корчагина Л.Б., Иванова Т.В., Фомина Е.А. Новый способ экспрессной оценки интегральной фальсификации пищевых продуктов // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 390.
35. Оррисс Г., Паакканэн Ю. Codex Alimentarius научная основа для защиты потребителя и торговли продуктами питания // «Вопросы питания», 2000, № 3, с. 28-32.
36. Остерман М.Б. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами // М., Наука, 1983, с. 4-45.
37. Парук А.П., Курмакаева Т.В. Использование биофизических методов при определении фальсификаций мяса // Практик, Москва, 2004, № 7-8, с.14-17.
38. Писарева В.М. Идентификация белков животного происхождения в пищевых продуктах электрофоретическим методом // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва 1999.
39. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. Утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, 27 декабря 1983 г. М., ВО «Агропромиздат», 1988.
40. Правила проведения сертификации пищевых продуктов и продовольственного сырья.//М., 1999.
41. Производственно-технический контроль и методы оценки качества мяса и птицепродуктов. Под ред'. Горбатова В.М. // М., «Пищевая промышленность», 1974, с. 274.
42. Попова М.Ю., Булыгина Е.С., Кузнецов Б.Б., Жаринов А.И., Рогов И.А., Скрябин К.Г. Определение содержания и выделение ПЦР-пригодной ДНК из коммерческих препаратов переработки сои // Биотехнология, Москва, 2003, № 2, с. 86-94.
43. Рогов И.А. Новые технологии производства продуктов здорового питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 440-441.
44. Родин В.И. Сравнительная оценка методов ветеринарно-санитарного контроля пищевого сырья и готовых продуктов.// Материалы международной научно-технической конференции «Пищевой белок и экология». М. 2000, с. 188-189.
45. Романов Г.А. Генетическая инженерия растений и пути решения проблемы биобезопасности // Физиология растений, Москва, 2000, том 47, № 3, с. 342-353.
46. Романенко Г.А. • Обеспечение качества и безопасности сельскохозяйственной продукции // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с.444-445.
47. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. Под редакцией Скурихина И.М., Тутеляна В.А. // М., Изд. «Брандес», « Медицина», 1998, с. 232.
48. Самуйленко А .Я., Кузнецов Д.П., Кузнецова С.В. иммуноферментный анализ в ветеринарной медицине // Ветеринария, № 12, с. 20-24.
49. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов // М., 2001.
50. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды // М., изд. «Мир», 1987, с. 47-64.
51. Сафронова A.M., Батурин А.К., Старовойтов M.JI. Анализ потребления мясопродуктов населением России // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с.464-466.
52. Светличкин В.В. Сертификация животноводческой продукции // Материалы международной научной конференции «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, Москва, 1999, с. 21-31.
53. Сенченко Б.С., Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса по температуре вспышки наружного и внутреннего жира некоторых видов животных.// Кубанский государственный аграрный университет, 1999, Вып.375, с.119-121.
54. Системы анализа рисков и определения критических контрольных точек: НАССР/ХАССП // Москва, 2002, с.593.
55. Скалинский Е.И., Белоусов А.А. Микроструктура- мяса.// М., Пищевая промышленность, 1978, с. 155-175.
56. Слесаренко Н.А., Курмакаева Т.В., Якушев С.В. Морфологические критерии определения видовой принадлежности мяса.// Современные вопросы интенсификации кормления, содерж. животных и улучшения качества продуктов животноводства, М.,1999, с. 103-105.
57. Смирнов A.M., Симецкий М.А., Таланов Г.А. Состояние и перспективы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии // Ветеринария, 2001, № 10, с. 3-7.
58. Стент Г. Молекулярная генетика // М., изд. «Мир», 1974, с. 535.
59. Татулов Ю. Качество свинины одного из основных видов сырья мясной промышленности // Свиноводство, 1997, № 6, с. 24-26.
60. Технология мяса и мясопродуктов. Под ред. Рогова И.А. // ВО «Агропромиздат», 1988, с. 756.
61. Указания по организации Государственного надзора за содержанием гормональных стимуляторов роста и тиреостатиков в продукции животного происхождения № 12-7/900 // Утверждены Главным государственным ветеринарным инспектором РФ 4 октября 1999.
62. Фомичев Ю.П. Техническое регулирование и контроль качества молока в процессе производства // Практик, Москва, 2004, № 7-8, с.8 -13.
63. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, 1986, №11, с. 1508-1513.
64. Хвыля С.И. Микроструктурный анализ, идентификация и фальсификация мясных продуктов// Пищевая промышленность, 1998, № 5, с. 68-69.
65. Хвыля С.И. Соевые белковые продукты и возможности их идентификации // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 539-540.
66. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа// Мясная промышленность,1994, №6, с. 9-11.
67. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика//М, изд. «Мир», 1999, с.558.
68. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот // В кн. Молекулярная клиническая диагност., методы, М., 1998, изд. «Мир», с. 374394.
69. Черняева М.Н. Анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов. // Ветеринария, 2001, №6, с.47-50.
70. Чумак P.M. Иммуноферментный анализ и рекомбинантные антигены // Лаб. Диагностика, 1999, № 3, с. 3-6.
71. Чуркина И.В., Сазонова А.А., Черепанов С.В., Смирнов А.Ф. Геномная дактилоскопия кур с использованием в качестве зонда ТГ-обогащенной минисателлитной ДНК // Сельскохозяйственная биология,1995, №2, с. 53-55.
72. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биотопов // В ' кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., изд. «Мир», 1999, с. 395-425.
73. Экологическая биотехнология (Под ред. Форстера К.Ф., Вейза Д.А.) // Л., изд. «Химия», 1990, с. 21-39.
74. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Анализ пищевых продуктов и напитков с помощью хроматографических методов // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 595-596.
75. Abraham J., Rajulu P.V. Species identification in unprocessed meats through agarose isoelectric focusing of urea-extracted proteins and myoglobin // Indian J.anim.Sc., 1992, v. 62, № 1, p. 69-74.
76. Adessi C., Matton G., Turcatti G., Mermod J., Mayer P., Kawashima E. Solid phase DNA amplification: characterisation of primer attachment and amplification mechanisms // Nucleic Acids Research, 2000, 28, 20, p. 87.
77. Agrowal S., Cristodoulou C., Gait M. Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides // Nucl. Acid. Res. 1986. V. 14, p. 6227-6245.
78. Araki H. Et al. Histochemical properties of muscle fiber in breiler chickens // Jap. Soc of Sci Fish. 1993, v.34, № 2, p. 137-144.
79. Bauer F., Rippel-Rachle B. Tierartenidentifizierung bei Fleisch und Fleischwaren.// Wien.tierarztl.Mschr., 1998, Jg.85,H.8.-S.260-266.
80. Beard J. Gene probes Locate waterborne diseases // New Sci, 1987, № 1562, p. 237.
81. Beneke В., Hagen M. Eignung der PCR (Polymerase-Ketten-Reaktion): Tierartennachweis in erhitzten Fleischerzeugnissen.// Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78,N 9.-S.1016-1019.
82. Bennet H.S. The structure and functional muscle // Academic Press, New York, v.l, 1960, p. 137.
83. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells // Annu rep, 1985, Basel Inst. Immunol, Basel, p. 1-10.
84. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isolation Procedure Based on Selective Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles // J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, № 3, p.615-619.
85. Buntjer J.B.,Lamine A.,Haagsma N.,Lenstra J.A. Species identification by oligonucleotide hybridisation: the influence of processing of meat products // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 1, p. 53.57.
86. Calvo J.H.,Zaragoza P.,Osta R. Random amplified polymorphic DNA fingerprints for identification of species in poultry pate // Poultry Sc., 2001, v. 80, № 4, p. 522-524.
87. Cassiman I. Diagnosis of genetic diseases by probes // Acta clin. Belg, 1988, p. 181-184.
88. Chikuni K, Matsunaga T, Tanabe R. Determination of mitochondrial cytochrome В gene sequence for red deer and the differentiation of closely related deer meat // Meat Sci, 1990, v. 49, № 4, p. 379-385.
89. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids axtracted from cells of higher animals // In: Molecular techniques and approach in developmental biology, ed. by M. J. Chrispeels. N. Y., 1973, p. 223301.
90. Codex Alimentarius // Vol. 10, FAO, WHO, 1991, 223 p.
91. Codex Alimentarius Volume Thirteen. Methods of analysis and sampling //Vol. 13,FAO, WHO, 1994, 134 p.
92. Codex Alimentarius Volume Ten. Meat and meat products including soups and broths // Vol. 10, FAO, WHO, 1994, 222 p.
93. Cooper M.G. Species identification of meat product by standard methods //Ed.Patt., 1985, v 6, p. 135-141.
94. Сох K.H., DeLeon D.V., Angerer L.M. Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes // Developmental Biology, 1987, v. 101, p.485-502.
95. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates'// Europ. J. Biochem., 1970, v. 12, p.133-142.
96. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA // "Biochem. Biophys. Res. Commun.", 1966, v.23, p. 641646.
97. Ding H.,Xu R.-J.,Chan D.K.O. Identification of broiler chicken meat using a visible/near-infrared spectroscopic technique // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 11, p. 1382-1388.
98. Erlich H.A. PCR technology.// Stockton Press, New York, 1989.
99. Fairbrother K.S.,Hopwood A.J.,Lockley A.K.,Bardsley R.G. Meat .speciation by restriction fragment length polymorphism analysis using an alpha-actin cDNA probe // Meat Sc., 1998, v.50, № 1, p. 105-114.
100. Fei S.,Okayama T.,Yamanoue M.,Nishikawa I.,Mannen H.,Tsuji S. Species identification of meats and meat products by PCR // Anim.Sc.Technol., 1996, v.67, № 10. p. 900-905.
101. Fleming I., Lumbley J. Validation of new techniques for the analysis of foods // Food Sciens and technology today, v. 9., № 2, 1995, p. 84-85.
102. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin // Nuc. Acid Res., 1985, № 3, p.745.
103. Gillespie D., Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane // J. Molecul. Biol., 1965, v. 12, p.829-842.
104. Gudibande R., Kenten J. Electrochemiluminescen T-label for DNA probe assays // Biotechnol Adv, 1997, v. 15, № 3-4, p. 721.
105. Harbing S., Harbing M. Detection of DNA via an ion channel switch biosensor// Analytical Biochemistry, 2000, 2"82, p. 70-79.
106. Harris S., Jonet D. Optimisation of the PCR // Brit. J. Biomid. Sci. 1997, v. 54, X»3, p. 166-173.
107. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds // Mullis K.B. Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 314.
108. Heinert H.H. et al. The analysis of the beef forcemeat on the contents of the alimentary components // Fleischwirtschaft, 1980, v. 2, p. 421-240.
109. Heinzelmann R. Beurteilung von Eber-, Zwitter-und Krvptorchideii (Binneneber) fleisch.// Fleischwirtschaft, 1999, Jg.79,N 9.-S.34-39.
110. Helle N. Et al. Methods of allocation DNA from chicken. // Arch. Fur Lebensmittelhygiene, 1996, v. 3, № 2, p. 48-51.
111. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, v. 97 (1), p 222-227.
112. Hoffmann K. Identification and determination of meat and foreign proteins by means of dodecvlsulfat poliacrylamid gel electrophoresis // Ann. Nutr. Alim., v. 3 1, № 2, 1997, p. 207-215.
113. Hopmar A., Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nucleic acid probes and sulfhydrvl-hapten ligands // Nucl. Acud. Res., 1986, v. 14, № 16, p. 6471-6488.
114. Hopwood A.J., Fairbrother K.S., Lockley A.K. Bardsley R.G. An actin gene-related polymerase chain reaction (PCR) test for identification of chicken in meat mixtures // Meat Sc., 1999, v. 53, № 4, p. 227-231.
115. Hunt D.J. et al. Fatty acid changes deering development of zygotic // Physiol. Plantarium. 1997, v.81, № 4, p. 447-454.
116. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press, San Diego, California, 1990, p. 16-21.
117. ISO 9001. Quality systems models for quality assurance in design, 1987, pp. 6-8.
118. Jannsen E. Method adapted to PhastSystem // Z. Lebensm. Unterrs. Forsh.,-1986.-V. 182,-p .479-483.
119. Jremstein M. and Hognes D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene // Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1975, p. 3961-3965.
120. Kim H. et al. Applying of different methods for allocation DNA //J. of Food Sci., 1986, v. 5, № 3, p. 68-71.
121. King N.L. Kurt L. Analysis of raw beef samples for adulterant meat species by enzyme staining of isoelectric focusing gels // J. Food Sci.,—1982.-v.47,-p.l608-1612.
122. Kofoth M. Aktuelles aus der intemationalen Fleischforschung // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 68-69.
123. Koh M.C.,Lim C.H.,Chua S.B.,Chew S.T.,Phang S.T.W. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprints for identification of red meat animal species // Meat Sc., 1998, v. 48, № 3/4, p. 275-285.
124. LeProust E., Pellois J., Yu P., Zhang H., Gao X. Digital light-detected synthesis. A microarray platform that permits rapid reaction optimization on a combinatorial basis // Journal of Combinatorial Chemistry, 2000, 2, p. 349-354.
125. Liberona H.E., Moxham J.M., Timbs D.V. Qualitty controlprocedures in an automated serological testing laboratory // N.Z. Vet. J., 1978, 26, № 23, p. 60, 65-66.
126. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, №11, p. 6633.
127. Lowry O.H., Rosebrough N.J.,- Farr A.L. et al. The classical and sensitive methods for measuring the concentration of proteins // J. Biol. Chemistry., v. 193, 1951, p. 265-270.
128. Ludke H.,Bargholz J.,Leiterer M. Wertbestimmende und Einige toxische Inhaltsstoffe in Fleisch und Verarbeitungsprodukten von Pute und Schwein. Schr.-R// Verb.Dt.Landw.Unters.Forsch.-Anst., Darmstadt, 1993, № 37, -S. 669-672.
129. Macedo-Silva A.,Barbosa S.F.C.,Alkmin M.G.A.,Vaz A.J.,Shimokomaki M., Tenuta-Filho A. Hamburger meat identification by dot-ELISA // Meat Sc., 2000, v. 56, № 2, p. 189-192.
130. Marmur J., Doty P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids. I. Deperidens on composition of the configurational stbility of deoxyribonucleic acid // Nature, 1959, v.183, p.1427-1431.
131. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // J. Molecul. Biol., 1961, v.3, p.585-594.
132. Martin R., Haza A.I., Horales P. Detection and quantification of goats chees in ewes chees using a monoclonal antibody and two ELISA formats // J. Sc. Food Agr. 1997, v.79, № 7, p. 35-41.
133. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids // Biotech. Adv., 1991, v.9, p. 185-196.
134. Moio L., DiLuccia A., Addeo F. Fast isoelectric focusing of milk proteins on small ultrathin polyacrylamide gel containing urea // Electrophoresis. 1989, v.10, p.535-539.
135. Moio L., Sasso M.L., Chianese L., Addeo F. Rapid detection of bovin milk in ovine, caprine and water buffalo milk or cheese by gel isoelectric focusing on PhastSystem. // Ital. J. Food Sci., 1990, v.3, p. 71-176.
136. New analytical system to improve food quality management // Int. Labmate, 2001, 25, № 7, p. 36.
137. Ouchterlony O. // Progress in Allergy. 1958, v. 6, p. 30
138. Partis L.,Croan D.,Guo Z.,Clark R.,Coldham T.,Murby J. Evaluation of a DNA fingerprinting method for determining the species origin of meats // Meat Sc., 2000, v. 54, № 4, p. 369-376.
139. Paz de Репа M., Concepcion Cid M., Bello J. A method for identification of frozen meat used for production of cooked ham // Meat Sc., 1998, v. 48, №3/4, p. 257-264.
140. Ranki M. Sandweich hybridization as a convmient method for detection ofnucleic acids in crude samples // Gene, 21, 1983, p. 77.
141. Rehbein H., Kress G., Schmidt T. Application of PCR-SSCP to cpecies identification of fishery products // J. of the Sci of Food and Agric., 1997, v. 74, № 1, p. 35-41.
142. Rehben H. Electrophoretic techniques for species identification of fichery products. -Z, Lebensm. Unters Forsch., 1990, v. 191, p. 1-38.
143. Renand G. Perspectives ^'amelioration genetique de la qualite de la viande // Elevages beiges, 1993, № 12, p. 9-11.
144. Renz M., Kiirz C. A colorimetric method for DNA hybridization // Nlicleic Acids Res., 1984. v. 12, № 8, p. 13435-13444.
145. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Erlich H.A. Genetic ahalisis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, vol. 86, p. 6230-6234.
146. Sakurai M., Hikono H., Ohta M. Production and characterization of monoclonal antibodyes that zecognize bovine kit zeceptor //Veter. Immunol. Immunopathol. 1997, v. 68, № 2/4, p. 101-112.
147. Sausern J. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroohoresis // J.Molec.Biolog., 1975, 98, p. 503.
148. Seymour C. Electrophoresis technology: food and reverage analysis // Food Tech. Europe, 1993, Sept/Nov., p.127-152.
149. Skarpeid H.-J.,Moe R.E.,Indahl U.G. Detection of mechanically recovered meat and head meat from cattle in ground beef mixtures by multivariate analysis of isoelectric focusing protein profiles // Meat Sc., 2001, v. 57, № 3, p. 227-234.
150. Smith D.M. Immunoassays in Process Control and Speciation of Meats // Food technologi, 1995, № 2, p. 116-117.
151. Sperner В., Schalch В., Gabert J., Greil В., Stolle A Einsatz des Salmotyre fleischsaft ELISA // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 81-84.
152. Swatland H.J. Early PSE detection.Ontario swine research rev // Guelph,1997, 1997, p. 50-51.
153. Tartaglia M., Saulle E., Pestaloza S. Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived material // Journal of food protection, vol. 61, № 5, 1998, p. 513-518.
154. Taylor A. Et al. Extraction and ESI-CID-Ms/Ms analysis of myoglobins fran different meat species // Food Sci. &Techn. Tod., 2000, v. 69, № 1, p. 81-86.
155. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids // Nucl. Acid Res., 1986, № 2, p. 1017-1028.
156. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe // J. Clin. Microbiol., 1991, v.29, № 5, p. 933-939.
157. Varga C.,Strelec V.,Volk M. Poultry meat in the production of meat products // Agriculture, 2000, v. 6, № 1, p. 49-52.
158. Vermer Wheelock. Food safety: A key issue for consumers // Int. J. Dairy Technol., 1998, 51, №1, p. 11-14.
159. Vo-Dinh t., Anarie J., Isola N., Landis D., Wintenberg A., Ericson M. DNA biochip using a phototransistor integrated circuit // Analytical Chemistry, 1999, 71, p. 358-363.
160. Vollenhofer S., Burg K., Schmidt J., Kroath H. Genetically modified organisms in foods screening and specific detection by polymerase chain reaction //J.Agric.Food Chem/1999,47 (12): 5038-5043.
161. Westin L., Xu X., Miller C., Wang L., Edman C., Nerenberg M. Anchored multiplex amplification on a microelectronic chip array // Nature Biotechnology, 2000, 18, 2, p. 199-204.
162. Wolf C., Burgener M.,Hubner P.,Luthy J. PCR-RFLP analysis of mitochondrial DNA: differentiation of fish species // Food Sc.Technol., 2000, v .33, №2, p. 144-150.
163. Wolf C.,Rentsch J.,Hubner P. PCR-RFLP analysis of mitochondrial DNA: a reliable method for species identification // J.agr.Food Chem., 1999, v. 47, №4, p. 1350-1355.
164. Yamanaka M.,Kudo T.,Itagaki Y.,Sato S.,Nakamura T. Sex identification of beef by polymerase chain reaction // Anim Sc.J., 1999, v.70, № 8, p. 111-113.
165. Yman I. M. Meat and fish species identification by isoelectric focusing // Food laboratory news, v.6, N2, 1990, p. 28-45.
166. Zimmermann S., Zehner R.,Mebs D. Tierartenidentifizierung aus Fleischproben mittels DNA-Analyse // Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78, № 5.-p.530-533.