Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Особенности проявления цитробактериоза, кандидамикоза у рыб и санитарная оценка рыбопродуктов

На правах рукописи

1В5

г

Ожередова Надежда Аркадьевна

ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ ЦИТРОБАКТЕРИОЗА, КАНДИДАМИ КОЗА У РЫБ И САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА РЫБОПРОДУКТОВ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

0 5 ДЕК 20С8

Ставрополь — 2008

003455185

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, доктор

биологических наук, профессор Дмитриев Анатолий Федорович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Тимченко Людмила Дмитриевна

доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Людмила Александровна

доктор ветеринарных наук, профессор Филиппов Николай Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Кубанский государственный

аграрный университет»

Защита состоится 23 декабря 2008 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.062.02 в ФГОУ ВГТО «Ставропольский государственный аграрный университет» по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан » /^-^ьЛ^ГХ2008 г.

Ученый секретарь у . /1

диссертационного совета Квочко А. Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Повышение жизненного уровня населения нашей страны, обеспечение его всеми необходимыми продуктами питания, а также безопасность продовольственного сырья и пищевой продукции являются важнейшими задачами на современном этапе. В решении этих проблем существенное значение приобретает увеличение производства и потребления рыбы, которое к настоящему времени сократилось в 2 раза по сравнению с 1990 годом. Вместе с тем ее производство всегда оказывалось в 2—3 раза дешевле в сравнении с производством мяса. В то же время по своей питательной ценности рыба мало уступает мясу сельскохозяйственных животных, а по степени усвояемости в организме человека значительно превосходит говядину. Дальнейшему увеличению и сохранению запасов промысловых и прудовых рыб в значительной степени препятствуют почти ежегодные вспышки новых, недостаточно изученных инфекционных заболеваний рыб, названных краснухоподобными (жаберными), ранее не регистрировавшихся в российских водоемах и обусловливающих массовую гибель рыб.

Вспыхнувшие в середине 50-х годов прошлого столетия указанные эпизоотии среди холодноводных в сравнительно короткое время довольно быстро охватили прудовые карповые хозяйства, расположенные в различных климатических зонах, начиная от северо-запада и центральной черноземной полосы России до Северного Кавказа, от Волго-Каспийского региона до Западной Сибири. Однако, несмотря на проводимые исследования, природа этих заболеваний до сих пор остается невыясненной. Изучением этой патологии занимались многие исследователи: А. Ф. Вылегжанин, 1964; Е. С. Цой, 1978; В. Д. Ящук, 1988; А. М. Валедская, 1991; М. А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов, 1995; В. И. Афанасьев, Л. И. Лаврентьева, Г. В. Афанасьев, Г. И. Сапожников, 1997; К. В. Бурлаченко, Л. И. Бычкова, 2003; Л. В. Ларцева, Я. М. Болдырева, 2004; С. Г Виноградова, Е. М. Харенко, 2005; О. В. Казимирченко, 2006; N. Tereza et al, 1980; D. Guston, В. Austin, 1990; Carunsagar, 1992. Однако роль C.freundii в патологии рыб до сих пор остается неясной.

В рыбохозяйственных водоемах, в частности в прудовых хозяйствах, отмечается заболевание рыб кандидамикозом (Бахтиярова 3. Г., 1987; Петрович С. В., Войнова Н. В., 1989; Ларцева Л. В., 2004). Вместе с тем, несмотря на отдельные исследования, специфика проявления указанного заболевания, механизм заражения рыб возбудителями этой болезни также до сих пор остаются недостаточно изученными.

На фоне вспыхнувших эпизоотий краснухоподобных (жаберных) заболеваний рыб в ряде регионов прикаспийской зоны, в частности в Астраханской области, и других зонах среди населения, употреблявшего в пищу

пораженные рыбные продукты, стали отмечаться вспышки пищевых заболеваний невыявленной этиологии. По данным ФАО, на долю эпидемий рыбного происхождения ежегодно приходится до 20-35 % от общего количества вспышек пищевых заболеваний, наблюдаемых в мире.

В связи с нередким выделением из организма рыб, пораженных красну-хоподобными (жаберными) заболеваниями, нитробактерий и дрожжепо-добных грибов рода Candida, серьезной опасностью их отдельных представителей, таких как C.freundii и С. albicans, для организма человека были проведены специальные исследования по изучению степени контаминации указанными микроорганизмами рыбы и рыбных продуктов, а также степени их патогенности. Тем более что в специальной научной литературе имеются указания об опасности C.freundii, выделяемых из других видов пищевых продуктов, для организма человека. О возможности нитробактерий, в том числе и C.freundii, вызывать пищевые заболевания у людей сообщали В. П. Рагинская, 1973; А. А. Покровский, 1985, и С. А. Шевелева, Н. Р. Ефи-мочкина, А. А. Иванов, Н. П. Турурушкина, Т. И. Фролочкина, 2004; а на способность гриба С. albicans обусловливать одноименное заболевание кан-дидамикозом у человека указывали П. Н. Кашкин, 1958; Н. П. Блинов, 1964; А. М. Ариевич, 3. Г. Степанищева, 1965; Е. Н. Морозов, 1971; В. Н. Кулага, 1974, и Р. Н. Реброва, 1979.

Ряд исследователей (Себряков Е. В., 1985; Сутеева Т. Т., 1987; Ларце-ваЛ. В., 2004) выявили высокую обсемененность грибами рода Candida отдельных видов пищевых продуктов животного происхождения и указывают на их эпидемиологическую опасность в возникновении кандидамикоза у детей при употреблении в пищу таких продуктов. Однако вопрос о распространении цитробактерий и дрожжеподобных грибов рода Candida, обнаруживаемых в рыбе, пораженной краснухоподобными (жаберными) заболеваниями, до настоящего времени предметно не изучался.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось изучение роли цитробактериоза и кандидамикоза в этиологии краснухоподобных (жаберных) заболеваний карповых рыб, особенностей проявления этих заболеваний у рыб и санитарная оценка рыбопродуктов, контаминирован-ных цитробактериями и грибами рода Candida.

Для достижения этой цели с учетом степени изученности проблемы были поставлены следующие задачи:

1. Провести эпизоотический мониторинг в рыбохозяйственных водоемах России и в Ставропольском крае по изучаемым заболеваниям рыб.

2. Изучить особенности клинического, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандидамикоза рыб.

3. Изучить биологические свойства цитробактерий и грибов рода Candida, выделенных у карповых рыб.

4. Выяснить устойчивость C.freundii и гриба С. albicans к физико-химическим факторам и антибиотикам.

5. Разработать систему диагностических, лечебно-профилактических мероприятий при цитробактериозе и кандидамикозе карповых рыб.

6. Провести санитарную оценку рыбы и рыбных продуктов при цитробактериозе и кандидамикозе.

Научная новизна работы. Впервые нами были выяснены источники распространения цитробактерий в российских водоемах, особенности клинического, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандида-микоза рыб, изучена специфика биологических свойств возбудителей этих болезней, патогенность которых подтверждена экспериментально заражением подопытных рыб и белых мышей.

Выявлена восприимчивость подопытных рыб к возбудителям цитробактериоза при трех температурных режимах (+5...+7°С, +15... + 17 °С, +20...+25 °С), при семи способах заражения (водном, пероральном, жаберном, кожном, внутримышечном, интраперитониальном, контактном), и впервые доказана возможность заражения этими микроорганизмами подопытных растительноядных рыб (пестрых толстолобиков). Аналогичные эксперименты по заражению подопытных рыб были проведены и с возбудителями кандидамикоза, которые показали положительные результаты, особенно при водном и пероральном способах их заражения.

Выяснены условия роста и размножения возбудителей цитробактериоза и кандидамикоза, их отношение к различным физическим (высокой и низкой температуре) и химическим факторам, разработаны методы диагностики, включающие дифференциацию изучаемых заболеваний.

Впервые дана полная санитарная характеристика рыбных продуктов, контаминированных нитробактериями и дрожжеподобными грибами рода Candida.

Совокупность выполненных нами исследований является актуальной научной разработкой, направленной на сохранение запасов промысловых рыб, повышение их продуктивности и качества рыбной продукции.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате комплексных исследований нами получены теоретические и практические данные по цитробактериозу и кандидамикозу рыб, на основании которых можно устанавливать комплексный диагноз указанных заболеваний карповых рыб с учетом результатов анализа эпизоотической ситуации, особенностей клинических, патоморфологических проявлений заболеваний, биологических свойств возбудителей болезней и осуществлять проведение дифференциальной диагностики цитробактериоза и кандидамикоза рыб от сходных болезней, что позволит успешно проводить лечебно-профилактические мероприятия. Представленные сведения по санитарной оценке способствуют улучшению качества рыбопродуктов.

Основные аспекты практического использования результатов изложены в методических рекомендациях по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза), утвержденных в Российской академии сельскохозяйственных наук 1 июля 2008 г., одобренных секцией «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины (протокол № 3 от 27 сентября 2007 г.), а также в методических рекомендациях «Диагностика цитробактериоза рыб» и «Диагностика кандидамикоза рыб», одобренных секцией животноводства и ветеринарии научно-технического совета МСХ Ставропольского края (протокол № 2 от 10 марта 2006 г.).

Результаты исследований могут быть использованы в практической деятельности сотрудниками ветеринарных лабораторий, рыбоводами, фермерами, специалистами, интересующимися вопросами инфекционной патологии, при составлении руководств, учебных и справочных пособий.

Основные положения, выносимые на защиту:

— Одной из причин вспышек краснухоподобных (жаберных) заболеваний рыб в рыбохозяйственных водоемах России, в том числе Ставропольском крае, являются возбудители цитробактериоза, кандидамикоза или их ассоциативное проявление.

— Особенности клинического, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандидамикоза у рыб.

— Возбудители цитробактериоза и кандидамикоза — C.freundii, С. albicans — имеют характерные биологические свойства, при экспериментальном заражении особей вызывают заболеваемость и летальный исход.

— У рыб, инфицированных цитробактериозом и кандидамикозом, снижаются товароведческие показатели, а технологическая обработка тушек обеспечивает их обезвреживание.

Реализация результатов исследований. Результаты полученных исследований внедрены в рыбоводных хозяйствах Ставропольского края (ООО «Лотос», ЗАО «Голубая Нива», рыбколхоз «Зеркальные пруды», прудах с. Арз-гир у индивидуального предпринимателя А. Д. Геращенко), а также в ГУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория» и сельскохозяйственном кооперативе — рыболовецкая артель «Гулькевическая» Краснодарского края.

Кроме того, материалы диссертационной работы используются в учебном процессе по курсу микробиологии на кафедрах Ставропольского государственного аграрного университета, Московской ГАВМиБ им. К. И. Скрябина, Донского государственного аграрного университета, Новосибирского государственного аграрного университета, Костромской государственной сельскохозяйственной академии, Карачаево-Черкесской государственной технологической академии, Калмыцкого государственного университета, Дагестанской государственной сельскохозяйственной академии, Кубанского государственного аграрного университета.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований диссертационной работы доложены и одобрены на научных конференциях Ставропольского государственного аграрного университета (1993, 1996, 2001, 2004, 2005, 2007), Алтайского (1995, 1996, 1998, 2000, 2002), Краснодарского (1996) и Башкирского (1999) государственных аграрных университетов, Российской академии сельскохозяйственных наук (1996), Бурятской сельскохозяйственной академии (1998), Калмыцкого государственного университета (2003), Вятской сельскохозяйственной академии (2005).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 44 работах, опубликованных в тематических сборниках, материалах конференций, 3 рекомендациях. В центральных научных журналах опубликовано 7 статен, издана 1 монография.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 360 страницах, содержит 79 таблиц, 19 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и предложений. Список литературы включает 383 источника, в том числе 111 — иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований. Работа выполнялась на кафедрах эпизоотологии и микробиологии, анатомии и гистологии, патологической анатомии и ветсанэкспертизы, в межфакультетской биохимической лаборатории Ставропольского государственного аграрного университета, в прудовых хозяйствах и естественных водоемах Ставропольского края, стационарно неблагополучных по изучаемым заболеваниям, а также в отдельных рыбохозяйственных водоемах других областей Северного Кавказа при возникновении эпизоотии. В Ставропольском крае в процессе проводимых исследований использовали рыбу, выловленную из 6 прудовых хозяйств и 5 естественных водоемов. В каждом рыбохозяйственном водоеме Ставрополья взятие материала проводили в течение трех и более лет в весенний, осенний, летний, а иногда и в зимний периоды года. Основными объектами исследований являлись различные виды карповых рыб (карп, карась, толстолобики). Исследованию подвергали преимущественно товарную рыбу в период ее массового вылова. Всего в процессе проведения исследований в рыбохозяйственных водоемах, стационарно неблагополучных по изучаемым заболеваниям, было исследовано только в прудовых хозяйствах 22084 экземпляра карповых рыб, в том числе 9 892 — на наличие цитробактериоза и 12192 — кандидамикоза, морфологическому исследованию подвергнуто — 244, бактериологическому — 171, микологическому — 334 экземпляра рыб. При экспериментальном заражении и наблюдении было использовано 353 экземпляра подопытных рыб (карпов и пестрых толстолобиков), 144 ла-

бораторных животных (белых мышей). В процессе проведения морфологического, химического и аминокислотного состава тушек пораженных рыб было проведено 252 анализа мяса, а при выяснении устойчивости нитробактерий и грибов рода Candida к различным физико-химическим факторам, в том числе тепловой, холодильной обработке и посолу, было выполнено 32 эксперимента. Взятие материала для бактериологического, микологического и других методов исследования проводили от пораженных рыб в рыбоводных хозяйствах, стационарно неблагополучных по цитро-бактериозу и кандидамикозу. Отбор проб проводили на месте с первичным высевом материала на питательные среды, и брали их только от тех живых пораженных рыб, которые имели специфические для заболеваний клинические и морфологические изменения, или же доставляли их в живом виде в лабораторию в зависимости от складывающихся условий. При взятии проб соблюдали правила асептики. В питательные среды в процессе проведения микологического исследования добавляли растворы пенициллина и стрептомицина по 200-250 ЕД на 1 мл каждого препарата.

2.2. Бактериологическое исследование рыб на наличие C.freundii. При проведении бактериологического исследования на наличие указанного вида микроорганизма были использованы карповые рыбы, выращенные в 3 прудовых хозяйствах, стационарно неблагополучных по цитробакгериозу, — Сергиевское (СПК «Александровское»), Донское (ООО «Волна»), Курсавское (СПК «Курсавский») и в 3 естественных водоемах (оз. Восточный Маныч, Отказ-ненское и Чограйское водохранилища), имевших специфические клинические и патоморфологические изменения для цитробактериоза. К этим признакам относились более рельефно выраженное кроваво-красное окрашивание поверхности тела рыб, геморрагическое поражение внутренних органов и наличие изъязвлений слизистой нисходящего отдела кишечника, а также проявление некроза жаберного аппарата. Выделение и идентификацию культур нитробактерий проводили в соответствии с методическими указаниями А. А. Покровского (1985) и других исследователей. Первичные высевы материала проводили на среды Симонса с цитратом натрия и инкубацией в термостате в течение 24—48 часов при температуре +25...+26 °С. После выделения чистой культуры проводили пересевы на среду Эндо, агар Плоскирева, висмут-сульфитный агар. Морфологию цитробактерий определяли в мазках, окрашенных по Граму, а подвижность бактерий выявляли в висячей капле. Ферментативную активность определяли на углеводах (глюкозе, сахарозе, лактозе, маните, мальтозе, сорбите, ксилозе, рамнозе, инозите и араби-нозе, выявляли отношение к р-галактозидазе, мукату). Изучали гемолитические, протеолитические и толерантные свойства. Воспроизводили реакции на индол, сероводород и ставили реакцию Фогес — Проскауера. Проводили серологическую идентификацию с помощью специфических сывороток. 8

При определении патогенности изучаемых культур ставили биопробу на подопытных сеголетках и годовиках карпов при интраперитониальном введении суспензии высоковнрулентных культур нитробактерий.

При изучении влияния на виды рыб температуры и способа заражения высоковирулентньши культурами С. freundii Ьыло использовано 154 экземпляра подопытных сеголетков карпов, содержащихся при 3 температурных экспозициях (+5...+7 °С, +15...+17 "С, +20...+25 °С). Помимо подопытных рыб при экспериментальном заражении нитробактериями интраперитониаль-ным путем были использованы 72 белые мыши.

Отбор проб образцов мышечной ткани, внутренностей от пораженных и здоровых рыб осуществляли в соответствии с ГОСТ 24-896-81, а также ГОСТ 76-31-85. Отбор проб для микробиологических исследований проводили в соответствии с ГОСТ 26-669-85.

Гистологические исследования проводили по общепринятой методике, срезы окрашивали гематоксилин-эозином, а с целью наилучшей идентификации C.freundii — по модифицированному способу Боголепова.

2.3. Микологическое исследование на наличие грибов рода Candida. Материал для микологического исследования брали от рыб только в тех рыбоводных хозяйствах, которые являлись стационарно неблагополучными по кандидамикозу — Новомарьевском (СХП «Волна»), Благодат-ненском (колхоз «Зеркальные пруды»), Невинномысском (СХП «Не-винномысский») и 2 естественных водоемах (Новомарьевский лиман и Сенгилеевское водохранилище). Пробы, подлежащие исследованию, отбирали лишь от тех рыб, которые имели ясно выраженные клинические признаки и морфологические изменения, свойственные для изучаемого заболевания. К таким признакам относили темное окрашивание передней части тела, образование белых пятен на голове, глазном яблоке, изъязвление кожи в области головы, а иногда боков, брюшную водянку и некроз жаберных лепестков и концевых участков отдельных плавников. Исследование пораженных рыб на наличие дрожжеподобных грибов проводили в соответствии с рекомендациями, приводимыми в руководствах П. Н. Кашкина (1956), Н. П. Блинова (1964), Р. Н. Ребровой (1978) и другими исследователями. Первичные посевы материала проводили на среды Сабуро, которые выдерживали в термостате до 2—3 и более суток при температуре +25...+26 °С. Затем изучали тип выросших колонии после отбора 2-3 наиболее типичных, присущих грибам рода Candida, и просмотра мазков, окрашенных 1 %-ным водным раствором генцианвиоле-та или 1 %-ным раствором основного фуксина, проводили дальнейшее выделение чистых культур кандид на средах Сабуро, сусло-бульоне и сусло-агаре. Также осуществляли изучение ферментативных свойств на 5 углеводах (глюкозе, сахарозе, лактозе, мальтозе и галактозе). Изучали

характер роста кандид на средах Пагано-Левина-Трейо, агаре Литмана, Никерсона. Гемолитическую активность выявляли при росте грибов Candida на кровяном агаре. Выявление хламидоспор и псевдомицелия проводили путем посева грибов в толщу кукурузного агара с использованием двух температурных экспозиций (+25 °С, +37 °С), а типа филамента-ции — на картофельном агаре.

При экспериментальном заражении использовали 199 сеголетков карпов с введением высоковирулентных культур грибов С. albicans и С. guilliermondii, с содержанием рыбы при температурных экспозициях +20 °С, +25 °С. При определении патогенности выделенных культур грибов их вводили 72 белым мышам интраперитониальным способом. Наблюдения за подопытными рыбами и белыми мышами проводили в течение 1 месяца.

Изучение и идентификацию грибов рода Candida проводили в соответствии с наставлением Департамента ветеринарии МСХ РФ от 14.07.03 г., № 13-5-02/СВ-27.

Гистологические исследования проводили по общепринятой методике, срезы окрашивали гематоксилин-эозином, а с целью выявления грибов — по методу Шиффа.

2.4. Качественная и санитарная оценка рыбных продуктов, обсемененных C.freundiiu С. albicans. При изучении товароведческих и качественных показателей тушек рыб при указанных заболеваниях их разделяли на 2 группы: доброкачественную и злокачественную рыбную продукцию. К доброкачественной рыбной продукции относили рыбу, имеющую на поверхности тела отдельные очаги геморрагического поражения или единичные изъязвления, а к злокачественной — при наличии брюшной водянки или множественных язв на поверхности тела, а также снижении консистенции (дряблости) мышечной ткани и диффузном поражении жабр. Во всех группах рыб, в каждой из которых находилось по 3—4 тушки, определялась живая масса, морфологический состав съедобных и несъедобных частей. Морфологический состав определяли путем взвешивания каждого экземпляра рыбы, после чего проводили разделение каждой тушки на съедобную и несъедобную части, а мышечную ткань, снятую с одной или двух половинок тушек, использовали для определения химического и аминокислотного состава. Химический состав рыбных продуктов (содержание воды, белка, жира и золы) определяли по общепринятым методикам: белок — по способу Кьельдаля, жир — по Сокслету, золу и влагу — методом высушивания, калорийность — расчетным способом. Аминокислотный состав изучали методом хроматографии с помощью аминоанализатора «Хитачи». Идентификацию аминокислот проводили путем сравнения характеристики удерживания аминокислот исследуемой пробы и достоверных аминокислот стандартной смеси.

Устойчивость C.freimdii, патогенных форм дрожжеподобных грибов рода Candida (С. albicans, С. guiliiermondii) определяли при различных способах технологической обработки рыбных продуктов: тепловой и холодильной обработке, посоле и мариновании — путем введения суспензий указанных бактерий и грибов в толщу кусков рыбы в количестве 1—1,5 млрд микробных тел на 1 мл с последующим воздействием избранных физических и химических факторов с рекомендуемыми режимами их применения. При тепловой обработке рыбных продуктов использовались температуры +60 °С, +70 "С, +85 °С, +100 "С в зависимости от их технологического назначения. При охлаждении тушек рыб применялись температуры, близкие к—1...0 °С, замораживании —30...—25 "С. При посоле — обработка ее при различных способах посола: слабом — 3—7 %-ном содержании поваренной соли, среднем — 10-12 %-ной концентрации и 16—17 %-ном содержании соли.

Результаты экспериментальных исследований обрабатывали с применением методов вариационной статистики по Стьюденту (А. Т. Усович, П. Лебедев), а аминокислотный состав обсчитывали с применением двустороннего критерия Стьюдента в программе Primer of Biostatics 4.03 для Windows-95, на IBM-совместимом компьютере. Достоверным считали различия по критерию Стьюдента при р<0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ АНАЛИЗ 3.1. Цитробактериоз карповых рыб

3.1.1. Анализ эпизоотической ситуации в рыбохозяйственных водоемах.

В истекшем столетии в водоемах нашей страны были отмечены две крупные вспышки эпизоотий среди рыб, принявшие массовый характер. Первая вспышка эпизоотий нового заболевания в отличие от краснухи отличалась тем, что она протекала в летнее и осеннее время года, а также сопровождалась не только проявлением геморрагического поражения кожных покровов, но и некротическим поражением жабр, чего ранее у карповых рыб не отмечалось. Возникшее неизвестное инфекционное заболевание сопровождалось массовой гибелью рыб, достигавшей 50—60 % и более. Ввиду специфики эпизоотического и клинического проявления заболевание было названо краснухоподобным (жаберным). Вспыхнувшее заболевание одновременно было отмечено в середине 50-х годов прошлого столетия в дельте реки Волги, в регионах северо-запада, центральной, южной зонах и даже в Западной Сибири. Особенно крупная вспышка эпизоотии была отмечена в дельте реки Волги, впервые возникшая летом 1956 года и охватившая северо-западную часть Каспия. В результате вспышки эпизоотии в дельте реки Волги с 1956 по 1960 годы погибло или было преждевременно выловлено, по П. Д. Неловкину (1963), более 4 млн экземпляров промысловых

волжских рыб, преимущественно волжского сазана. Источником вспышки указанной эпизоотии, как и в других регионах, явились белые амуры, вселенные в водоем в 1954-1955 годах, по Е. Н. Казанчееву (1974). В последующие годы вспышки новых инфекционных заболеваний были отмечены во многих российских прудовых хозяйствах и естественных водоемах. Развитие эпизоотии указанных болезней уже происходило через 1—3 года после вселения растительноядных рыб. По данным ветеринарной службы, в период с 1956 по 1963 годы в России количество неблагополучных пунктов по крас-нухоподобной (жаберной) болезни составляло 12, в 1964 году — 131, в 1965 году - 128, в 1966 году - 150, в 1968 году - 120, в 1969 году - 102, в 1973 году — 178, в 1993 году — 91 и в 2006 году — более чем в 20 областях. В указанные годы краснухоподобное (жаберное) заболевание приобрело тенденцию распространения из традиционно неблагополучных южных и северо-западных регионов в уральские и западно-сибирские.

Возникшие новые заболевания рыб в первую очередь поражали отечественные виды рыб (карпов, карасей и других), а по мере увеличения вирулентности возбудителей стали заболевать и погибать растительноядные рыбы. Передача возбудителей болезни из одного водоема в другой происходила преимущественно с рыбопосадочным материалом.

Впервые на наличие цитробактерий в организме пораженных рыб обратили внимание научные сотрудники Астраханского рыбвтуза, выделившие эту бактерию из организма больных промысловых рыб в дельте реки Волги. Патогенность выделенной C.freundii была также подтверждена при экспериментальном заражении подопытных рыб (карпов и сазанов). В 1965 году заболевание рыб цитробактериозом было установлено в процессе их бактериологического исследования в Краснодарском и Ставропольском краях.

С целью подтверждения наличия указанного заболевания нами проводилось бактериологическое исследование и изучение степени распространения цитробактериоза у рыб в стационарно неблагополучных рыбоводных хозяйствах Ставрополья (3 прудовых и 3 естественных водоемах) в период с 1986 по 2006 годы. При изучении степени распространения цитробактериоза было осмотрено 13690 экземпляров преимущественно двухлетков товарных карповых рыб, имевших специфические признаки заболевания (геморрагическое поражение кожных покровов и воспалительные процессы в жабрах, в основном некротического характера). В результате проведенного исследования симптомы, специфические для заболевания, были выявлены в 3226 случаях (23,6 %), втом числе из 9892 экземпляров прудовых рыб — в 2470 случаях (25,0 %) и из 3798 экземпляров из естественных водоемов — в 756 случаях (19,9 %).

Достаточно высокую степень поражения прудовых рыб цитробактериозом можно объяснить большой плотностью посадки рыб, а неблагополучие естественных водоемов — отсутствием проведения лечебно-профилактических мероприятий.

Это заболевание при исследовании 7156 экземпляров карпов было выявлено в 2021 случае (28,2 + 0,31 %), 3354 сазанов - в 699 (20,8 + 0,60 %), 2234 пестрых толстолобиков — в 340 (15,2 + 0,01 %), 647 серебряных карасей — в 96 (14,8 + 0,44 %) и 299 белых толстолобиков - в 70 (23,4 + 2,09 %). Во всех случаях результаты были достоверными, р<0,001.

В связи с сезоном года болезнь в Сергиевском прудовом хозяйстве (СПК «Александровское») наблюдалась во все периоды года, в том числе она выявлялась весной в 10,7 % (годовиков) случаев, летом (двухлетков) — 21,2 %, осенью (двухлетков) — 24,8 % и зимой (сеголетков) — 3,6 %.

3.1.2. Клинико-морфолошческие проявления цитробактериоза. Заболевание рыб цитробактериозом протекает в виде острого и хронического течения. Острое течение болезни в условиях Северо-Кавказского региона у карповых рыб отмечается преимущественно в весенне-летнее время года и особенно тяжелый характер приобретает у карпов, сазанов и белых толстолобиков. При исследовании 1017 экземпляров двухлетков карпов острое течение болезни было выявлено в 162 случаях (15,9 %), 579 сазанов — 126 случаях (21,8 %), 2234 пестрых толстолобиков — 117 (5,2 %), 299 белых толстолобиков — 27 (9,0 %).

У пораженных рыб в различных участках поверхности тела возникало резко выраженное кроваво-красное окрашивание, сочетавшееся с мелкими кровоизлияниями не только по бокам, но и в области груди, брюшка, плавников и возле ротовой полости. В подчешуйчатых кармашках кроме отдельных кровоизлияний скапливался и транссудат, обусловливающий еро-шение чешуи. У некоторых рыб развивалась брюшная водянка, экзофтальмия и гидремия мышечной ткани. Отмечалось наличие пояска гиперемии кровеносных сосудов вдоль боковой линии.

Хроническое течение болезни сопровождалось изъязвлением в кожном покрове.

При остром течении болезни было исследовано 112 экземпляров рыб, а при хроническом — 30 (табл. 1).

В процессе изучения патоморфологических признаков, обнаруженных во внутренних органах и тканях рыб, пораженных цитробактериозом, помимо кожного покрова и жаберного аппарата изменения выявляли в кишечнике, печени, почках, селезенке, а также в мышечной ткани (табл. 1).

При остром течении болезни патоморфологические изменения отмечались во всех слоях кожи (эпидермисе, дерме и гиподерме) и проявлялись в диапедезных кровоизлияниях, очаговой инфильтрации лимфоидными элементами и развитии отдельных очагов некроза. Бокаловидные клетки, находящиеся в эпидермисе и продуцирующие слизь, находились в состоянии гипертрофии. В собственной коже и подкожной клетчатке проявлялись диа-педезные кровоизлияния, а в гомогенном экссудате определялось наличие эритроцитов, лейкоцитов и нейтрофильных элементов.

Таблица 1 — Патоморфологические изменения во внутренних органах и тканях рыб, пораженных цитробактериозом

№ п/п Формы течения болезии и патоморфологические изменения Количество больных рыб Число пораженных органов и тканей

Острое течение болезни

1 Кровоизлияния в кожных покровах 112

2 Некротическое поражение жабр 86

3 Экссудативно-катаральное воспаление кишечника 26

4 Кровоизлияния в печени 29

5 Кровоизлияния в селезенке, почках 112 46

6 Брюшная водянка 8

7 Кровоизлияния под эпикардом и в мышцах сердца 7

8 Экзофтальмия 9

9 Атрофия задней доли плавательного пузыря 12

Хроническое течение болезни

1 Некротическое поражение жабр (в стадии регенерации) 29

2 Изъязвления кожи, в мышцах 30 30

3 Язвенный стоматит 2

4 Дистрофия печени 20

В подкожной клетчатке выявлялись очаги лимфоидной инфильтрации, а в отдельных случаях — некротическое поражение, распространявшееся на дерму. Жабры в первоначальный период воспаления покрывались слизью, продуцируемой бокаловидными клетками, находящимися в состоянии гипертрофии. Клетки респираторного эпителия подвергались десква-мации, слущиванию и обнаруживались в гомогенном экссудате. Межуточная ткань у карпов и сазанов была инфильтрована лимфоидными, нейтрофильными элементами и эозинофильными гранулоцитами. Жаберные лепестки подвергались слипчивому воспалению. При развитии геморрагического поражения наблюдалась гиперемия кровеносных сосудов по ходу жаберных лепестков, а в гомогенном экссудате обнаруживалось наличие эритроцитов и лимфоидных элементов, а также цитробактерий, в клетках которых просматривалось желтовато-зеленоватое окрашивание. В последующем регистрировали очаги некроза по ходу жаберных лепестков и в области их апикальных концов. В очагах некроза выявлялась гомогенная зернистая масса, состоявшая из некротизированных эпителиальных клеток, коллагеновых волокон и хондриоцитов. Жаберная ткань при этом принимала пестрое окрашивание, одни участки которой были красными, другие оказывались анемичными, а третьи — серыми. В кишечнике

на фоне выраженной гиперемии и точечных кровоизлияний в слизистой оболочке восходящего отдела выявлялось слущивание покровного эпителия в просвет кишечной трубки и некроз в апикальной части ворсинок. Слизистая и подслизистая оболочка были разрыхлены и отечны, а иногда инфильтрованы лимфоидными элементами. Мышечные волокна представлялись набухшими и в отдельных местах гиперемированными. Печень у рыб не разделяется на дольки, а состоит из секреторных трубочек. В ней находили застойную гиперемию, нарушение белочной структуры, признаки дистрофии с проявлением глинистой окраски ее паренхимы рыхлой консистенции, нередко прояшшлись очаги зернистого перерождения ее клеток и наличие в строме лимфоидной инфильтрации. В почках определялась гиперплазия, наличие кровоизлияний, размягчение и темное окрашивание ее пульпы, кровенаполненность и наличие отдельных клеток цитробактерий зеленоватого цвета. Просветы в извитых канальцах суживались, эпителий нередко находился в состоянии дистрофии и слущивания. Селезенка у рыб не разделяется на красную и белую пульпу, не имеет трабекул. В отдельных случаях в ней находили гиперемию застойного характера, инфильтрацию незрелыми лимфоидными элементами. В мышечных волокнах, прилегающих к области боковой линии, выявляли ценке-ровский некроз и фрагментацию.

Хроническое течение болезни было выявлено у карпов в пределах 8,9 %, сазанов — 11,2 %, пестрых толстолобиков — 10,0 % и белых толстолобиков — 14,4 %. Основным патоморфологическим симптомом являются язвы, находящиеся в различных местах кожного покрова рыб, а также воспалительные процессы различного характера, обнаруживаемые в жаберном аппарате, отчасти в кишечнике и внутренних органах. При гистологическом исследовании в коже, прилегающей к местам еще неполностью заживших изъязвлений, проявлялось разрушение эпидермиса, дермы и гиподермы, а также образование серозного экссудата с находящимися в нем нейтрофильными лейкоцитами и дегенеративными клеточными элементами. В период заживления язв и эрозий экссудативные процессы заканчивались и развивались процессы организации, состоящие из массы регенерируемых фибробластов и коллагеновых волокон, находящихся между мышечными волокнами. Развивалась интенсивная пролиферация клеток эпителия. В конечной стадии заживления обширных язв регистрировали развитие рубцовой ткани. Жаберная ткань находилась в состоянии регенерации, и в ряде мест лепестки покрывались регенерируемым слоем респираторного эпителия, а в отдельных местах выявлялись соединительнотканные элементы. В нисходящем отделе кишечника у карпов и сазанов иногда определялись изъязвления слизистой и воспалительные процессы дифтери-тического характера, выявляемые окраской по Вейгерту. Эпителий крипт в нисходящем отделе находился в состоянии слизистой дистрофии и некроза.

В паренхиме печени еще выявлялись отдельные очажки с зернистым перерождением печеночных клеток.

3.1.3. Биологические свойства C.freundii. Бактериологическое исследование рыб на наличие C.freundii проводили в период с 1986 по 2006 годы. Материал, необходимый для исследования, брали от больных рыб только в тех рыбоводных хозяйствах, которые являлись стационарно неблагополучными по цитробактериозу в течение многих лет и лишь от тех экземпляров, которые имели ясно выраженные патологические изменения в коже, жабрах, кишечнике и внутренних органах.

Всего бактериологическому исследованию был подвергнут 171 экземпляр пораженных рыб, в результате чего было выделено 142 культуры C.freundii от такого же количества рыб, что составило 83,0 %. Из 96 исследуемых карпов C.freundii была выделена в 80 случаях (83,3 %), из 25 сазанов — в 24 (96,0 %), из 6 серебряных карасей — в 3 (50,0 %), из 24 пестрых толстолобиков — в 17 (70,8 %) и из 20 белых толстолобиков — в 18 (90,0 %).

В связи с течением болезни степень поражения рыб также была неодинаковой. При остром течении — из 129 исследуемых рыб C.freundii была изолирована в 103 случаях (79,8 %), а при хроническом — в 26 (20,2 %). Изучение степени контаминации пораженных тушек карпов с острым течением болезни показало, что ее основным биотопом являлись кишечник (90,9 %), печень (81,8 %), жабры (72,7 %) и пораженные мышцы (63,6 %).

При изучении специфики морфологических, культурально-биохимичес-ких и патогенных свойств C.freundii было установлено, что по морфологии выделенная нитробактерия в односуточной культуре представляет собой палочку величиной в 0,5x1,0 мкм и 0,6x1,2 мкм. По методу Грама C.freundii окрашивались отрицательно. При изучении подвижности нитробактерий было установлено, что все изучаемые культуры оказались наиболее подвижными при температуре +22...+24 °С, спор и капсул не образовывали. Проявляли оптимальный рост на средах Симонса с цитратом натрия. Росшие на среде Эндо колонии разделялись на 2 основные группы: лактозоот-рицательные, не ферментировавшие или очень слабо ферментировавшие лактозу, и лактозоположительные, расщеплявшие молочный сахар. Первая группа C.freundii росла на этой среде в виде округлых прозрачных или слаборозового цвета колоний, а вторая — красных, в отличие от Е. coli, без металлического блеска. На агаре Плоскирева лактозоотрицательные культуры С. freundii образовывали слегка розоватые (в тон среды) колонии, а лактозоположительные колонии принимали более интенсивную розово-красную окраску с темным центром. На висмут-сульфит агаре нитробактерии росли в виде колоний коричневого или черного цвета с весьма неприятным запахом, на среде Хью-Лейфсона — в виде темно-синих колоний. При изучении характера роста С. freundii на агаре Симонса было установ-16

лено, что по истечении 1—2-суточного роста при температуре инкубации +24...+26 °С преимущественно обнаруживались гладкие и очень редко шероховатые колонии. Консистенция их хотя и представлялась сметанообраз-ной, но была менее влажной. Края колоний чаще всего оказывались ровными, лишь иногда — волнистыми; врастания их в толщу среды не наблюдалось. Все изучаемые культуры С./геипсШ проявляли оптимальный рост на средах с малонатом натрия, утилизировали цитрат натрия в среде Симон-са, показывали положительную реакцию на р-галактозидазу, ферментировали глюкозу, лактозу, маннит, мальтозу, арабинозу, ксилозу, сорбит, рамнозу, непостоянно ферментировали сахарозу и лактозу, не сбраживали инозит. Иногда проявляли положительную реакцию на сероводород и всегда отрицательную — на индол. Представлялись положительными в реакции с метилротом, отрицательными — в реакции Фогас — Проскауера, восстанавливали нитриты в нитраты. В процессе изучения культурально-биохимических свойств цитробактерий выяснялись и их факторы патоген-ности, к которым относили протеолитическую, гемолитическую активность и галотолерантность. Патогенные культуры цитробактерий обладали протеолитической активностью. Все 142 выделенные культуры этих бактерий при выращивании на кровяном агаре уже через 3—5 суток вызывали гемолиз эритроцитов, то есть они обладали гемолитической активностью. В зависимости от температурных условий выделенные культуры С./геипсШ проявляли визуальный рост при +15...+17 "С, а также при более высокой температуре +25...+26 °С. При изучении фактора галотолерантности к хлориду натрия было установлено, что все изучаемые культуры сохранялись на плотных и жидких питательных средах (РПА, РПБ) с содержанием в них 3—5 %, 1 % и иногда 10 % соли. При серологической идентификации все изучаемые культуры принадлежали к С./геипсШ.

При экспериментальном заражении 154 подопытных сеголетков или годовиков рыб суспензиями высоковирулентных культур С./геипсШ в дозе 103— 104микробных тел на 1 мл погибло 44 экземпляра рыб (28,6 %), заболело — 55 (35,7 %) и не заболело — 55 (35,7 %). В зависимости от вида рыб чаще всего заболевали сазаны (72,5 %), затем карпы (67,5 %) и реже всего пестрые толстолобики (47,0 %). В зависимости от способа заражения подопытные рыбы чаще всего заболевали или погибали при интраперитониальном введении суспензий культур (100 %), затем пероральном (82,1 %) и жаберном (60,0 %). Подопытные рыбы заболевали при трех температурных экспозициях (+5...+7 °С, +15...+17 "С, +25...+26 °С). При экспериментальном заражении суспензиями цитробактерий подопытных карпов, сазанов и пестрых толстолобиков было также установлено, что обнаруживаемые у них патоморфологические изменения оказывались еще более выраженными в сравнении с естественно инфицированными рыбами, а в зависимости от метода заражения они проявлялись по-разному.

У подопытных карпов, сазанов, зараженных через кожу, контактным и внутримышечным способами, обнаруживаемые патоморфологические изменения преимущественно развивались в кожных покровах. Они состояли в геморрагическом поражении кожных покровов, расположенных в области боков, грудных и брюшных плавников, а также образовании изъязвлений и проявлении некроза в области межлучевых перепонок и концевых участков плавников. Наличие кровоизлияний также отмечалось и в более глубоких слоях кожи, дерме и гиподерме. В других участках пораженной кожи отмечали инфильтрацию эпидермиса нейтрофильными элементами и эозинофильными гранулоцитами, а также пролиферацию эпителиальных клеток. При образовании изъязвлений в краевых участках отмечали некроз клеток всех слоев кожи и фрагментацию мышечных волокон. В отдельных местах появлялось наличие серозного экссудата и дистрофия слизевых клеток. Выявлялись очаги инфильтрации межуточной ткани лим-фоидными элементами.

При жаберном способе заражения основные патологические изменения сосредоточивались в жаберном аппарате. В первый период инокуляции на поверхности жабр находили достаточное количество слизи, в особенности на первой дужке, продуцируемой бокаловидными клетками. Проявление патологических изменений обильно начиналось с апикальных концов жаберных лепестков, которые затем распространялись на лепестки других дужек. В первоначальный период воспаления лепестки представлялись уплотненными и отечными. В пространствах между лепесточками в этот период обнаруживалось большое количество слущенных эпителиальных клеток и воспалительного экссудата, что приводило к слиянию лепестков. Жаберные капилляры представлялись расширенными, а их эндотелий набухшим. На следующем этапе воспалительного процесса из-за нарушения проницаемости стенок капилляров отмечалось наличие эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофильных гранулоцитов в бледно-окрашенном гомогенном экссудате. Межуточная ткань была инфильтрована лимфоцитами. В момент развития некроза отмечалось резко выраженное отторжение респираторного эпителия. В строме лепестков выявлялись зеленовато-желтого цвета цитробактерии, обнаруживались воспалительные процессы, некроз, происходило отторжение жаберных лепестков. Мышечная ткань жаберных дужек представлялась набухшей и находилась в стадии резко выраженного воспалительного процесса.

При пероральном и водном способах заражения у подопытных рыб также отмечались достаточно выраженные патологические изменения, в особенности в кишечнике. В слизистой восходящего отдела отмечались кровоизлияния и очаги некроза, а в мышечной оболочке — набухание мышечных волокон. В слизистой нисходящего отдела также выявлялись отдельные кровоизлияния и изъязвления. 18

При интраперитониальном заражении у подопытных рыб обнаруживалось геморрагическое воспаление кишечника в обоих отделах и во внутренних органах.

У инфицируемых рыб находили и другие патологические изменения во внутренних органах в зависимости от способов инокуляции суспензиями культур нитробактерий. При пероральном и водном способах заражения печень иногда представлялась увеличенной, приобретала слегка глинистую очаговую окраску. У отдельных больных рыб отмечали наличие кровоизлияний в ее паренхиме. Почки представлялись увеличенными, имели темноватую окраску, а иногда в их пульпе встречались и отдельные кровоизлияния. Селезенка помимо увеличения имела темноватую окраску и была пропитана массой точечных кровоизлияний, что особенно интенсивно проявлялось у рыб при интраперитониальном способе заражения.

При экспериментальном заражении 72 белых мышей суспензиями культур С./геипсШ интраперитониальным путем в дозе 500 млн клеток на 1 мл в 38 случаях (52,8 %) была отмечена их гибель, в 18 (25,0 %) — заболевание, а в 16 случаях (22,2 %) мыши не заболели. При жизни у подопытных белых мышей наблюдались признаки возбуждения и симптомы гастроэнтерита, а после их гибели наличие гнойников в печени, признаки геморрагического и некротического поражения в кишечнике и внутренних органах, обусловленные проявлением токсикоза.

3.1.4. Устойчивость С./геипсШ к физико-химическим факторам и лечебным препаратам. При изучении устойчивости С./геипсШ к физико-химическим факторам и лечебным препаратам установлено, что под воздействием ультрафиолетового облучения культуры инактивировались в течение 35 минут с начала опыта. Под влиянием высокой температуры двухсуточные культуры цитробактерий, эмульгированные в физиологическом растворе, содержащем 1 млрд микробных тел в 1 мл при температуре +70 °С теряли свою жизнеспособность по истечении 5 минут, +80 °С — 1-2 минут и + 100 °С — в течение 30 секунд. При низкой температуре (—25 "С) они сохраняли свою жизнеспособность по истечении 12 и 24 часов. При воздействии 3 %-ного раствора формальдегида цитробактерии инактивировались по истечении 1 часа, 1 %-ного раствора хлористого йода — 1 часа, 10 %-ного раствора свежегашеной извести и раствора 1:1000 марганцевокислого калия не погибали в течение 2-3 часов.

При испытании устойчивости 60 культур С./геипсШ к лечебным препаратам было установлено, что под влиянием фуразолидона высокочувствительными и среднечувствительными оказались 49 культур (81,7 %), хлор-тетрациклина — 16 культур (26,7 %), террамицина — 7 культур (11,7 %). Бактериостатическая активность С./геипсШ к фуразолидону составляла 0,1— 0,28 мкг/мл, а к хлортетрациклину — 0,2—0,78 мкг/мл. Бактерицидная ак-

тивность указанных препаратов соответственно равнялась 0,2-0,76 и 5,3610,2 мкг/мл.

В связи с высокой бактерицидностью фуразолидона по отношению к С./геипсШ совместно с ихтиопатологической службой Ставропольрыбпрома осуществлялось применение этого препарата для лечения рыб, пораженных цитробактериозом. В задачи нашей работы входило бактериологическое исследование карповых рыб в неблагополучных рыбоводных хозяйствах края и выяснение степени чувствительности выделяемой нитробактерии к фура-золидону.

При этом на 1 тонну гранулированного корма совместно с ветеринарной службой Ставропольрыбпрома при остром течении болезни в состав корма вводили 600 г указанного препарата, а при хроническом течении — 300 г. Скармливание его осуществляли до конца вегетационного периода. При этом проводили три курса лечения, каждый из которых длился 15 дней с промежутками между пятидневками 2 дня, а между курсами 10-12 суток. В результате проведенных мероприятий в рыбоводных хозяйствах края была ликвидирована гибель рыб, а степень заболеваемости их снизилась до 2—3 %. Рыбопродуктивность в течение 20 лет в период с 1968 по 1988 годы увеличилась в три раза, с 6,8 ц/га до 18,6 ц/га. У карпов увеличилась и масса тела, которая приближалась к кондиционной (450 г).

Помимо проведения специфических лечебно-профилактических мероприятий в условиях прудовых хозяйств Ставрополья создавался оптимальный гидрохимический режим с поддержанием реакций среды в воде в пределах 8,0—8,5. При этом в воду прудов вносили 2,5 ц/га свежегашеной извести, проводили дезинфекцию хлорной известью (5 ц/га), а ложе прудов при летовании обрабатывали 3 %-ным раствором формальдегида с помощью параформалиновых камер. Не допускается вселение в водоем рыб без соблюдения правил карантина.

3.5.1. Качественная и санитарная оценка рыбы и рыбных продуктов при цигробактериозе. Рыба является ценным пищевым продуктом. Под влиянием различных заболеваний, в том числе и цитробактериоза, в результате развития различных патоморфологических процессов (геморрагического и язвенного поражения кожи, брюшной водянки) могут снижаться ее товарные качества.

В зависимости от степени поражения такую рыбу разделяли на 2 группы: доброкачественную — при наличии на ее теле единичных красных пятен или язв и злокачественную — при выявлении множественных красных пятен, ерошения и отслоения чешуи, большого количества язв или брюшной водянки. При определении морфологического состава было взято по 4 экземпляра сазанов и белых толстолобиков в каждую из 3 исследуемых групп (табл. 2). 20

Таблица 2 — Морфологический состав тушек рыб, пораженных цитробактериозом (л = 4)

Исследуемые рыбы Масса, г Съедобные части Несъедобные часта

г % г %

Доброкачественная форма

Сазан 400,0 208,0 52,0+0,24* | 192,0 48,0+0,24*

Толстолобик белый 404,0 204,0 50,6+0,21* | 200,0 49,4+0,21*

Злокачественная форма

Сазан 370,0 190,0 51,2+0,45* 180,0 48,8+0,34*

Толстолобик белый 360,0 182,0 50,6+0,27* 178,0 49,4+0,27*

Здоровые

Сазан 480,0 260,2 54,2+0,46* 219,8 45,8+0,05*

Толстолобик белый 440,0 239,0 54,4+0,09* 201,0 45,6+0,09*

* Степень достоверности р<0,001.

При анализе данных таблицы 2 видно, что определялась масса тушек, содержание несъедобных и съедобных частей. При доброкачественной форме масса тушек у 2 летков товарных сазанов снижалась на 80 г (20,0 %), а при злокачественной — на 110 г (22,9 %). У белых толстолобиков аналогичные показатели соответственно сокращались на 36 г (8,2 %) и 80 г (18,1 %) в сравнении с теми же видами здоровых рыб.

При определении химического состава мяса было установлено, что у обоих видов рыб (сазанов и белых толстолобиков) и при двух формах поражения снижалось содержание всех видов компонентов (белка, жира и золы) при повышении содержания влаги. Калорийность мышечной ткани у сазанов при доброкачественной форме снижалась на 12,7 %, а при злокачественной — на 17,7 %; у белых толстолобиков аналогичные показатели соответственно равнялись 14,6 % и 20,2 % в сравнении со здоровыми теми же видами рыб.

У рыб, пораженных цитробактериозом, выявлялись значительные различия количества аминокислот в сравнении со здоровыми того же вида рыбами, и в первую очередь в содержании незаменимых аминокислот. У сазанов при злокачественной форме количество их снижалось на 9,9 % и доброкачественной — 5,2 %, а у белых толстолобиков соответственно на 9,4 % и 4,3 %. Особенно резко в мышечной ткани при злокачественной форме поражения у сазанов из числа незаменимых аминокислот снижалось содержание лизина, изолейцина и лейцина, а у белых толстолобиков при той же форме болезни количество метионина, изолейцина и фенилаланина в сравнении со здоровыми рыбами. Помимо снижения количества незаменимых аминокислот в мышечной ткани больных рыб отмечалось и уменьшение заменимых аминокислот.

Цитробактерии, обнаруживаемые в различных видах пищевых продуктов, представляют серьезную опасность для здоровья человека, вызывая у него, по материалам В. П. Рагинской (1973), С. А. Шевелева (2004) с соавторами, пищевые токсикоинфекции, поражение желче- и моче-выводящих путей, отиты, остеомиелиты и воспаление оболочек головного мозга. Между тем рыба, пораженная цитробактериозом, до настоящего времени в необеззараженном виде продолжает поступать для пищевых целей. Следует отметить и то, что при неблагоприятных условиях хранения рыбной продукции в торговой сети при температуре +5...+6 "С по истечении 1 суток количество клеток С. /геипсШ увеличивается на 1 — 2 порядка.

Были проведены эксперименты по выяснению устойчивости патогенных культур С./геипсШ при различных способах технологической обработки рыбных продуктов, применяемых в рыбной промышленности. К этим способам относятся тепловая (варка, жарение, горячее и холодное копчение, стерилизация рыбных консервов), холодильная (замораживание, подмораживание и охлаждение) обработки, посол (слабый — 3-5 %, средний — 10-12 %, сильный — 16-17 % соли) (табл. 3).

Таблица 3 — Сроки инактивации C.freundii в рыбных продуктах

№ п/л Способы технологической обработки рыбных продуктов Сроки инактивации цитробактерий

1 Тепловая обработка (варка) Погибают через 20-25 минут

2 Жарение Погибают через 20 минут

3 Горячее копчение(+100°С) Погибают через 1 час

4 Холодное копчение (+36...+38 °С) Не погибают через 2 суток

5 Стерилизованные рыбные консервы (+120°С,) Погибают в течение 1 часа

6 Посол крепкий (содержание ооли — 16-17 %) Погибают через 14 суток

7 Замораживание (-25 °С) Сохраняются 1 сутки

8 Охлаждение (-2...0 °С) Сохраняются 10 суток

Как видно из данных таблицы 3, при тепловой обработке рыбных продуктов использовали варку, консервирование, горячее и холодное копчение. При варке кусков рыбы массой 150—160 г и толщиной 3—4 см, при закладке в кипящую воду, инактивация цитробактерий наступала через 20— 25 минут и жарении кусков рыбы в 130 г толщиной 3-4 см — 20 минут. При горячем копчении мелкой рыбы массой 150—200 г, проводимом при температуре +100 °С, цитробактерии теряли свою жизнеспособность по ис-

течении 1 часа, а при холодном, осуществляемом при +36...+38 °С, — оставались жизнеспособными в течение 2 суток. В рыбных консервах они инак-тивировались по истечении установленного режима стерилизации при температуре + 120 °С через 1 час. При холодильной обработке использовали охлаждение, подмораживание и замораживание, соответственно проводимые при температурах -2...0 °С в течение 10 суток, -4...—2 °С — в течение 1 месяца, -25 °С — в течение 24 часов. При всех используемых низких температурных режимах нитробактерии не инактивировались. В кусках соленой рыбы массой 100 г и толщиной 3-4 см при слабом 5 %-ном содержании соли и температуре +2...+4 °С цитробактерии сохранялись в течение 3 месяцев, среднем — 10 %-ном — 2 месяцев и крепком — 16-17 %-ном — погибали уже через 14 суток.

Следовательно, холодное копчение и замораживание не освобождают продукт от цитробактерии, а тепловая обработка (варка, жарение, горячее копчение и изготовление консервов) способствует их быстрой гибели.

3.2. Кандидамикоз карповых рыб

3.2.1. Эпизоотологическая ситуация в рыбохозяйственных водоемах. Впервые на наличие кандидамикоза у холодноводных, в частности у речных раков, указывал X. С. Горегляд (1965). В последующие годы кандидамикоз у холодноводных был отмечен и в водоемах России — в дельте реки Волги и в водоемах Северного Кавказа. В условиях Ставрополья кандидамикоз у карпов был впервые выявлен 3. Г. Бахтияровой в 1975 году в прудовом хозяйстве «Ставропольское», протекал он на фоне интенсивного кормления придонных рыб кормами с дрожжевыми добавками. В результате предварительного эпизоотического исследования было установлено, что во всех указанных хозяйствах в течение ряда лет преимущественно в летний период года ежегодно отмечались вспышки неизвестного заболевания, протекавшего с признаками некротического поражения глаз, жабр, брюшной водянки, которые в отдельные годы обусловливали гибель преимущественно карпов и сазанов. Микологическое исследование больных рыб показало ншшчие в их органах и тканях дрожжеподобного гриба С. albicans, оказавшегося патогенным для подопытных карпов. При этом также было установлено, что первые случаи проявления этого заболевания обычно отмечались в конце апреля — начале мая, когда температура воды повышается до +18 °С и своего пика достигают в июне — июле. При этом в первую очередь заболевали карпы, а затем сазаны и гораздо реже — растительноядные рыбы, в основном пестрые толстолобики. Вспышки заболевания увязывались с началом кормления рыб искусственными кормами, содержащими дрожжевые добавки, а также сточными водами, сбрасываемыми с ближайших птицефабрик, неблагополучных по кандидамикозу, с обитанием на прудах домаш-

них и диких водоплавающих птиц, нередко являющихся носителями возбудителей кандидамикоза.

Помимо указанных факторов источниками заражения рыб кандидами-козом служат и остатки неиспользованных кормов, которые способствуют размножению в них кандид, а также неправильно избранная антибиотико-терапия, применяемая в ряде прудовых хозяйств, и рыба, вселяемая в водоемы без соблюдения правил карантина.

Эпизоотическое обследование осуществляли преимущественно в период отлова двухлетков карповых рыб, проводившегося весной, летом и осенью. В результате чего у рыб были выявлены признаки, присущие кандида-микозу, такие, как некротическое поражение глаз, жабр, потемнение кожи в передней части туловища, брюшная водянка, наличие кровоизлияний на кожных покровах. Заболевание чаще всего проявлялось у карпов, сазанов и реже у растительноядных рыб, в основном пестрых толстолобиков. Достаточно высокая степень пораженности придонных рыб кандидамико-зом объясняется высокой обсемененностью дрожжеподобными грибами рода Candida кормов, используемых для кормления указанных видов рыб, и другими факторами.

Растительноядные рыбы в сравнении с карпами и сазанами заболевали кандидамикозом гораздо реже, что связывается со спецификой их питания растительной пищей, хотя пестрые толстолобики в ограниченном количестве принимают искусственные корма.

У карпов кандидамикоз проявляется в 28,9 + 0,55 %, у сазанов — 23,1 + 2,47 %, у пестрых толстолобиков — 11,5 + 0,23 % и белых толстолобиков — 5,4 + 0,40 % случаев. Во всех случаях результаты были достоверными, р<0,001. Болезнь преимущественно встречается в поздне-весеннее и летнее время года и увязывается с началом кормления рыб.

3.2.2. Клинико-морфологическое проявление кандидамикоза. Заболевание карповых рыб кандидамикозом протекает в виде острого и хронического течения, чаще всего проявляется у карпов и сазанов. При клиническом исследовании 1481 экземпляр пораженных карпов, проведенном в 3 прудовых хозяйствах, стационарно неблагополучных по кандидамикозу, симптомы острого течения болезни были выявлены в 340 случаях (23,0 %), а из 1021 экземпляра исследуемых сазанов — в 45 случаях (4,4 %).

При изучении патоморфологических изменений во внутренних органах и тканях рыб, пораженных кандидамикозом, были использованы 102 экземпляра холодноводных, из организма которых при микологическом исследовании были выделены патогенные культуры С. albicans. Патоморфо-логические изменения, обнаруживаемые у пораженных рыб, преимущественно встречались в кожных покровах, жабрах, кишечнике и почках (табл. 4).

Таблица 4 — Патоморфологические изменения во внутренних органах н тканях рыб при кандидамикозе

№ п/п Формы течения болезни н патоморфологические изменения Количество больных рыб Число пораженных органов и тканей

Острое течение болезни

1 Некротическое поражение жабр 65

2 Кровоизлияния и некротические очажки в почках 13

3 Некротическое поражение глазного яблоки 78

и кожи головы 16

4 Кровоизлияния в кожных покровах 63

5 Катаральное воспаление кишечника 58

Хроническое течение бочезни

1 Некротическое поражение жабр (в стадии регенерации) 23

2 Изъязвления кожи в области туловища 24

3 Язвенный стоматит 24 3

4 Некротическое поражение кишечника 11

5 Некроз в почках 3

6 Паиофтальмия 3

Как видно из данных таблицы 4, при остром течении болезни было исследовано 78 экземпляров рыб, а при хроническом — 24.

Обнаруживаемые патологические изменения у этих рыб в принципе имели одинаковую картину. На кожных покровах, чаще всего расположенных в области головы, а иногда на глазном яблоке находили белые пятна, потемнение чешуи в передней части туловища, а также кровоизлияния и очаги геморрагического поражения. Края этих очагов различной величины и конфигурации имели резко очерченные границы или носили разлитой характер. Вследствие пропитывания геморрагическим экссудатом возникало ерошение чешуи вокруг очагов воспаления. У отдельных рыб геморрагическому поражению подвергались грудные и брюшные плавники, иногда наблюдалась брюшная водянка с экзофтальмией и кратерообразным выпячиванием ануса. Особенно неблагополучным по кандидамикозу представлялось Новомарьевское прудовое хозяйство (СХП «Волна»), в котором клинико-морфологические проявления заболевания у карповых рыб, и в особенности у карпов и сазанов, были весьма демонстративными.

Хроническое течение заболевания сопровождалось образованием на теле рыб язв или эрозий.

В коже помимо очагов геморрагического поражения, отдельных кровоизлияний и очагов некроза при гистологическом исследовании в начальный период болезни выявляли гиперсекрецию слизи и водяночную дистрофию бокаловидных клеток эпидермиса, наличие в серозном экссудате эритроци-

тов и лейкоцитов. В последующей стадии воспалительного процесса наблюдали инфильтрацию клеток собственного эпителия нейтрофильными лейкоцитами и присутствие в экссудате распадающихся эритроцитов и лейкоцитов. В дерме и гиподерме определялись очаги инфильтрации лимфоидных клеток и наличие дрожжеподобных клеток, выявляемых реактивом Шиффа, регистрировалось и наличие очагов некроза. Довольно существенные изменения обнаруживались и в жаберном аппарате рыб. Жабры холодноводных состоят из четырех пар жаберных дужек. На каждой из них с наружной стороны располагаются жаберные лепестки, основу которых составляют жаберные лучи, формирующиеся из гиалинового хряща и прикрепляющиеся к жаберной дужке. Поперек жаберных лепестков находятся респираторные складки, называемые лепесточками или вторичными пластинками и покрытые с поверхности респираторным эпителием, между которым располагаются бокаловидные клетки, продуцирующие слизь. В жабрах определяемые воспалительные изменения обычно начинались с апикальных концов жаберных лепестков, а затем распространялись до жаберной дужки. В первоначальной стадии воспаления отмечалась десквамация респираторного эпителия и скопление между пластинками экссудата и клеточного детрита. Выявлялся и тромбоз в жаберных капиллярах. В последующей стадии в области верхушек лепестков развивалась инфильтрация лимфоидными клетками и нейтрофильными гранулоцитами. Постепенно наблюдаемые патологические изменения распространялись до базальной мембраны. В толще лепестков выявлялись дрожже подобные клетки, окрашивающиеся реактивом Шиффа в красный цвет, а в местах их локализации обнаруживались некроз респираторного эпителия, бесструктурная зернистая масса и ядра клеток. Некроз захватывал коллагеновые волокна, хрящевые лучи складок и мышечные волокна. Пораженные участки жабр приобретали серую окраску. По мере затухания воспалительного процесса развивались пролиферативные процессы или болезнь принимала хронический характер.

В кишечнике помимо катарально-десквамативного поражения наблюдались одельные кровоизлияния в слизистой оболочке восходящего отдела, а позже некротическое поражение. В очагах некроза, распространявшихся в отдельных участках и на нижележащем слое, обнаруживались дрожжепо-добные клетки, окруженные с периферии лимфоидными элементами. В под-слизистом слое в воспалительных очагах определялось наличие лимфоцитов и нейтрофильных лейкоцитов, в мышечном — кровоизлияния и набухание волокон, гиперемия кровеносных сосудов. В слизистой нисходящего отдела кишечника наблюдались нарастание количества бокаловидных клеток, инфильтрация лимфоцитами и гистиоцитами, очажки некроза и присутствие в некротической массе дрожжеподобных клеток. В почках определялась гиперемия гемопоэтической ткани с наличием в ней очагов некроза и дрожжеподобных клеток. В селезенке обнаруживалась гиперемия застойного харак-26

тера; в отдельных местах стенки кровеносных сосудов были инфильтрованы лимфоидными элементами, а эндотелий представлялся набухшим. В паренхиме печени выявлялись отдельные очаги с жировой и зернистой дистрофией, а также гранулемы, в центре которых отмечалось налнчие дрожжепо-добных клеток, окруженных с периферии зоной лимфоидных клеток.

Патоморфологические изменения, обнаруживаемые во внутренних органах и тканях рыб, пораженных кандидамикозом, встречались гораздо чаще у карпов и сазанов и значительно реже у планктофагов.

Хроническое течение болезни у товарных двухлетков карповых рыб преимущественно встречалось осенью в конце вегетационного периода и характеризовалось образованием в кожных покровах у карпов, сазанов язв и эрозий у толстолобиков. У карпов заболевание выявлялось в 7,2 % случаев, у сазанов — 2,1 %, у пестрых толстолобиков — 1,6 % и белых толстолобиков — 4,0 %. При образовании язв у придонных рыб в патологический процесс вовлекались не только кожа, но и мышечная ткань. Дно и бока язв приобретали красный цвет, а края были отечными и иногда некротизированными. В сравнении с цитробактериозом язвы были менее глубокими. Локализация язв чаще всего увязывалась с боками, и реже они выявлялись в области груди и брюшка. У растительноядных рыб вместо язв выявлялись эрозии, поражавшие только кожу. При благоприятных условиях к конпу осени вместо язв и эрозий развивалась рубцовая ткань и происходило заживление. При гистологическом исследовании вначале образования язв находили полное разрушение эпидермиса, дермы, гиподермы, а также прилегающей мышечной ткани. Вблизи язв отмечали инфильтрацию лимфоидными элементами и развитие покровного эпителия. Выявлялись и некротические процессы. В некротизированной ткани обнаруживались отдельные дрожжеподобные клетки. В период заживления в препаратах, приготовленных из краевых поверхностных участков, обнаруживали пролиферацию клеток эпителия и постепенное утолщение дермы. На границе с мышечной тканью также наблюдали интенсивную пролиферацию фибробластических элементов, гистиоцитов и коллагеновых волокон. Пролиферация фибробластов была заметна и между мышечными волокнами. При исследовании кожи также встречались отдельные участки регенерируемого эпидермиса. В жабрах, как и в кожных покровах, к концу осеннего периода развивались процессы регенерации, но у отдельных рыб чаще всего по ходу жабр все еще сохранялись небольшие некротические очажки, которые постепенно заменялись тонким слоем респираторного эпителия или соединительнотканными элементами.

В кишечнике в отдельных участках восходящего отдела отмечался хронический десквамативный катар. Покровный эпителий слизистой оболочки находился в состоянии слущивания. Слизистые и подслизистые оболочки в ряде участков были утолщены и уплотнены в связи с разрастанием соединительной ткани. Встречались и очаги некроза в верхушечной части ворси-

нок. В некротизированных очажках ворсинок наблюдались дрожжеподоб-ные клетки и элементы псевдомицелия. В извитых канальцах почек обнаруживалась дистрофия цилиндрического эпителия, в канальцах — остатки клеток дегенерированного эпителия, лейкоцитов, лимфоцитов и отдельные элементы псевдомицелия, окрашивающиеся реактивом Шиффа в красный цвет. В гемопоэтической ткани почек находились отдельные гранулемы, в центре которых выявлялась некротическая масса и нити псевдомицелия, а по периферии — лимфоидные элементы. В печени наблюдались отдельные очажки жировой и зернистой дистрофии вблизи адвентициальных клеток, кровеносных сосудов; а также отдельные гранулемы с лимфоидной структурой. У растительноядных рыб обнаруживались аналогичные изменения, такие же, как у карпов и сазанов, но в отличие от них они были менее выраженными; вместо язв у толстолобиков развивались лишь эрозии, находившиеся в различной стадии заживления. В жабрах, в участках, ранее подвергавшихся воспалительным процессам, происходила регенерация респираторного эпителия, а в отдельных участках на месте слущенного эпителия развивались соединительнотканные элементы. При завершении воспаления процессы регенерации развивались в других тканях и внутренних органах толстолобиков.

3.2.3. Биологические свойства грибов рода Candida. В процессе проведения микологического исследования рыб было использовано 334 экземпляра карпов, сазанов и толстолобиков, выловленных в стационарно неблагополучных по кандидамикозу рыбоводных хозяйствах и имеющих специфические клинические и морфологические показатели, свойственные указанному заболеванию.

В результате проведенного исследования в 284 случаях были выделены грибы рода Candida, основная часть которых по этиологической структуре (97,9 %) относилась к грибу С. albicans и гораздо реже (2,1 %) — к С. guilliermondii. Пораженность рыб кандидамикозом преимущественно наблюдалась в весенне-летнее время года. Изучение степени обсемененности тушек и внутренних органов пораженных карпов показало, что основным биотопом являлись кишечник (100 %) и почки (88,9 %). По морфологии клетки гриба С. albicans в двухсуточной культуре, выращенной на агаре Сабуро, преимущественно имели округлую форму величиной в 3,6x3,6 мкм. Внутри клеток обнаруживались ядра и вакуоли. При сравнительном изучении различных способов окраски кандид было установлено, что наилучшие результаты имели место при окраске мазков 1 %-ными водными растворами генцианвиолета и основного фуксина. При выращивании грибов на агаре Сабуро при температуре +25...+26°С через 3 суток выросшие колонии в 102 случаях (35,9 %) относились к гладкому S-типу, а в 182 случаях (64,1 %) — шероховатому R-тлпу (табл. 5).

Таблица 5 — Результаты микологического исследования на наличие гриба С. albicans, С. Guilliermondii

Ка п/п Исследованные рыбы Количество исследованных рыб Выделено колоний и % поражения

S-типа R-типа

1 Карпы 185 66 119

2 Сазаны 58 21 37

3 Толстолобики пестрые 34 13 21

4 Толстолобики белые 7 2 5

Итого 284 102 182

По морфологии колонии S-типа при росте на агаре Сабуро приобретали белое, реже кремовое окрашивание, выпуклую, блестящую поверхность, сметанообразную консистенцию с ровными краями и нередко врастали в толщу среды. Колонии R-типа имели ясно выраженную шероховатость. На жидкой среде Сабуро гриб проявлял глубинный рост, помутнение и образовывал осадок белого цвета. Все культуры гриба S-типа ферментировали глюкозу и мальтозу с образованием кислоты и газа, а в отдельных случаях сахарозу и галактозу, но не ферментировали лактозу, проявляли специфический рост на агаре Литмана, Пагано-Левина-Трейо и Никерсо-на. При росте на кровяном агаре вызывали гемолиз все культуры гриба С. albicans, в том числе и росшие в виде шероховатых колоний на кукурузном агаре, которые при температуре +25...+37 °С образовывали хламидос-поры, псевдомицелий, а по типу филаментации относились к Mycocandida.

Гриб С. guilliermondii в сравнении с грибом С. albicans по морфологии в двухсуточной культуре состоял из овальных или полиморфных клеток величиной в 2,2x2,6 мкм и 1,8x3,1 мкм. При микроскопии в мазках, приготовленных из односуточных культур, обнаруживали вакуоли и небольшое ядрышко. В момент первичного выделения из организма больных рыб на агаре Сабуро через 3 суток при температуре +25 °С гриб рос в виде белых округлых, плоских, с матовой или блестящей поверхностью колоний и иногда с радиальной исчерченностью, тягучей консистенцией, с ровными или волнистыми краями и короткими отростками нитей псевдомицелия. Врастания колоний в толщу питательных сред не обнаруживалось. В жидкой среде Сабуро уже по истечении 1—2 суток выращивания и несколько позже происходило помутнение и образование осадка серого цвета на дне пробирки и пленки на ее поверхности. При изучении ферментативной активности гриба на тех же 5 видах углеводов, что и при изучении предыдущего вида гриба, было выяснено, что испытуемые культуры ферментировали только 2 вида углеводов (глюкозу и сахарозу), и лишь с образованием кислоты, а 3 других вида (мальтозу, лактозу и галактозу) не изменяли. Они проявляли специфический рост на агаре Литмана, средах Пагано-Левина-

Трейо и Никерсона. Две испытуемые культуры из 6 относились к гладким колониям. По типу роста, изучаемому при температуре инкубации +25...+36 °С, они были отнесены к Mycotorulae. На кукурузном агаре образовывали слабо выраженный псевдомицелий по истечении 5 суток, но образование хламидоспор не отмечалось.

При экспериментальном заражении суспензиями высоковирулентных культур грибов С. albicans было использовано 199 экземпляров подопытных годовиков карповых рыб, в результате чего погибло 70 экземпляров (35,2 %), заболело 67 (33,7 %) и не заболело — 62 (31,2 %). В зависимости от вида рыб из 157 подопытных карпов погибло или заболело 101 (64,3 %), из 22 сазанов — 20 (90,9 %) и из 20 пестрых толстолобиков — 16 (80,0 %). Основная масса подопытных рыб заболевала в течение 14 суток после заражения. Из различных симптомов специфическими для кандидамикоза можно считать развитие у них при жизни круговых движений, потемнение чешуи, кожи в передней части тела, образование белых пятен на глазном яблоке и роговице глаз, некротическое поражение жаберного аппарата, межлучевых перепонок, плавников, геморрагическое поражение кожных покровов и очаговые изъязвления кожи, обычно расположенные по бокам тела рыб. У пестрых толстолобиков так же, как у карпов и сазанов, в зависимости от способа инокуляции культуры грибов кандида определялось наличие очагов некроза по ходу жаберных лепестков, а также развитие очагового геморрагического поражения кожи. При внутримышечном, кожном и интра-перитониальном способах заражения наблюдалось ерошение чешуи и очаговое геморрагическое поражение кожных покровов. В кишечнике выявлялось катаральное геморрагическое и некротическое поражение слизистой, а в почках — гиперплазия, потемнение и некротическое поражение, подтверждаемое гистологическим и микологическим способами.

Суспензии культур гриба С. guilliermondii оказались менее вирулентными для подопытных рыб в сравнении с грибом С. albicans. В зависимости от способа заражения суспензиями этого вида гриба из подопытных рыб чаще всего погибали или заболевали 29,2 % и не заболевали 70,8 % карпов.

Помимо рыб проводилось и экспериментальное заражение подопытных белых мышей. При заражении суспензиями культур гриба С. albicans в дозе 500 млн клеток на 1 мл, проводимом интраперитониальным способом из 72 мышей погибло 32 экземпляра (44,4 %), заболело 15 (20,8 %) и не заболело — 25 (34,7 %). При жизни зараженные мыши плохо принимали корм, были малоактивными или наоборот возбужденными, и вместе с калом у отдельных животных отмечалось выделение слизи, капелек крови и гноя. При вскрытии погибших мышей отмечались тусклый цвет почек и наличие в них небольших некротических узелков серого цвета, которые иногда обнаруживались в паренхиме печени и в области брыжейки. В кишечнике наблюдались признаки катарального, геморрагического и гнойного пораже-30

ния. В 4 случаях наличие некротических очажков отмечалось в легочной ткани. Суспензии гриба С. guilliemondii, вводимые белым мышам, оказались малопатогенными.

3.2.4. Устойчивость С. albicans к физико-химическим факторам и антибиотикам. В процессе выяснения степени устойчивости гриба С. albicans к физико-химическим факторам было установлено, что при воздействии высокой температуры гриб С. albicans при температуре +60 °С погибал через 8—10 минут, +70 °С — через 2-3 минуты и +80 °С — через 1 минуту; под влиянием ультрафиолетового облучения — через 30-35 минут; под воздействием 2 %-ного раствора формальдегида суспензии гриба инактивировались по истечении 2 часов, а 3 %-ного — 1 часа; под воздействием 1 %-ного раствора хлористого йода — 1 часа. В то же время под влиянием раствора марганцево-кислого калия в разведении 1:1000 гриб оставался жизнеспособным в течение 2 часов, а 10 %-ного раствора свежегашеной извести — 3 часов.

При изучении степени устойчивости гриба к фунгицидным препаратам, проводимом по методу бумажных дисков, было установлено, что из 3 испытуемых препаратов (нистатина, леворина и гризеофульвина) наибольшую чувствительность гриб С. albicans проявил к нистатину (98,0 %), лево-рину (65,0 %). Фунгистатичность нистатина составила 0,1-0,2 мкг/мл, а леворина — 0,38—0,76 мкг/мл. Фунгицидность указанных препаратов, проводимая по методу серийных разведений, соответственно составляла 0,36— 0,76 мкг/мл и 0,76—12,5 мкг/мл.

В связи с весьма высокой чувствительностью кандид к нистатину лечебная и профилактическая их эффективность была испытана в лабораторных условиях на подопытных годовиках карпов с лечебной и профилактической целью. При испытании водонерастворимого нистатина подопытные рыбы содержались при температуре воды +20...+25 °С. При проведении экспериментов с лечебной целью рыбам ежедневно в глотку с помощью катетора вводили по 105 клеток высоковирулентных суспензий культур С. albicans, а после появления первых симптомов болезни (геморрагического поражения кожи) в течение 10 дней зместе с кормом вводили по 30 тыс ЕД препарата. По истечении указанного срока все подопытные карпы выздоровели. При испытании водонерастворимого нистатина с профилактической целью каждой рыбе после одномоментного заражения рыб суспензиями высоковирулентных культур 104 клеток вместе с кормом ежедневно вводили по 15 тыс ЕД водонерастворимого нистатина в течение 14 суток. За этот период ни одна подопытная рыба не заболела. В то же время контрольные рыбы, по 8 рыб в каждом опыте, не получавшие препарата, заболевали или погибали. При микологическом исследовании подопытных карпов, подвергавшихся обработке с лечебной или профилактической целью, наличия в их организме гриба С. albicans не было установлено. У контрольных

же рыб, не подвергавшихся обработке, было выявлено наличие гриба в их организме.

3.2.5. Качественная н санитарная оценка рыбы и рыбных продуктов при кавдидамикозе. К числу рыб с доброкачественной формой относили карпов и пестрых толстолобиков при наличии у них на поверхности тела единичных (1—2) очагов с геморрагическим поражением кожи или единичных воспалительных язв, эрозий, а также отдельных некротических очажков в жабрах и единичных белых пятен в области глаз. К рыбам со злокачественной формой причисляли особей в случае наличия у них брюшной водянки, множественных язв или эрозий, дряблости мышечной ткани или диффузного некротического поражения жабр с одновременным наличием белых пятен в области кожи головы и глаз.

Анализ морфологического состава тушек показывает, что их масса у карпов при доброкачественной форме снижалась на 82 г (15,7 %), злокачественной — 122 г (23,4 %), а у пестрых толстолобиков при тех же формах поражения она была соответственно ниже на 60 г (9,2 %) и 120 г (18,5 %) в сравнении с теми же видами здоровых рыб.

Выявленные в химическом составе мышечной ткани изменения зависели от вида рыб и формы поражения (табл. 6.).

Таблица 6 - Химический состав мышечной ткани рыб при кандидамикозе (я = 4)

Виды рыб Влага, % Белок, % Жир, % Зола, % Калорийность, кДж

Доброкачественная форма

Карп 77,44+0,06 14,26+0,04 7,32+0,06 0,90+0,06 529,6+1,27*

Толстолобик пестрый 78,74+0,06 16,44+0,06 3,81+0,06 0,90+0,06 430,9+0,33*

Злокачественная форма

Карп 80,00+0,06 12,43+0,06 6,41+0,06 0,80+0,06 463,4+1,20*

Толстолобик пестрый 80,82+0,06 15,23+0,18 2,84±0,06 1,00+0,06 372,1+2,82*

Здоровые

Карп 73,02+0,06 16,88+0,06 8.68+0,03 1,20+0,04 628,0+0,90*

Толстолобик пестрый 76,87+ 0,03 17,34+0,06 4,65+0,50 1,10±0,06 1478,9+2,33*

* Степень достоверности р<0,001.

При анализе данных таблицы 6 видно, что калорийность мышечной ткани карпов при злокачественной форме снижалась на 26,2 %, а у пестрых толстолобиков — 22,3 %; при доброкачественной форме у тех же видов рыб соответственно равнялась 15,7 % и 10,0 % в сравнении со здоровыми рыбами того же вида. Эти данные показывают, что мясо рыб, пораженных кан-дидамикозом, становилось менее калорийным и имело более низкую пищевую ценность. 32

При изучении аминокислотного состава белков мышечной ткани рыб было установлено, что у карпов при злокачественной форме поражения количество незаменимых аминокислот снижалось на 16,9 %, а у пестрых толстолобиков на 14,9 %; аналогичные показатели при доброкачественной форме соответственно составляли 8,9 % и 7,3 % в сравнении со здоровыми рыбами того же вида. Из числа незаменимых аминокислот у обоих видов рыб выявлялось резкое снижение изолейцина, метионина и лейцина. Количество заменимых аминокислот также снижалось, особенно аргинина, ги-стидина и глицина.

В специальной научной литературе по проблеме кандидамикоза, а также в излагаемых нами материалах к настоящему времени накоплено достаточное количество сведений, свидетельствующих об опасности грибов кандида и для человека, способных при известных обстоятельствах вызывать у него одноименное заболевание. Вместе с тем степень опасности для человека гриба С. albicans до сих пор остается недостаточно выясненной. К сожалению, до сих пор рыба и рыбные продукты не подвергаются санитарной экспертизе и в необеззараженном виде продолжают поступать для пищевых целей, что создает угрозу для возникновения у населения массовых пищевых и иного характера заболеваний.

В связи с изложенным нами также были проведены исследования по выяснению устойчивости гриба С. albicans при различных способах технологической обработки рыбных продуктов изучаемого вида гриба, представляющего большую опасность для человека (табл. 7.).

Таблица 7 - Сроки инактивации гриба С. albicans в рыбных продуктах

№ Способы технологической обработки Сроки инактивации

п/п рыбных продуктов С. albicans

1 Тепловая обработка (варка) Погибают через 20-25 минут

2 Жарение Погибают через 18-20 минут

3 Горячее копченне (+100 °С) Погибают через 1 час

4 Холодное копчение (+36...+38 °С) Не погибают 2 суток

5 Стерилизованные рыбные консервы (+120 °С) Погибают через 1 час

6 Посол крепкий (содержание соли — 16-17 %) Сохраняются 14 суток

7 Замораживание(-25 СС) Сохраняются 1 сутки

8 Охлаждение (-2...0°С) Сохраняются 10 суток

Как видно из данных таблицы 7, при варке рыбы суспензии гриба С. albicans инактивировались по истечении 20-25 минут, при жарении кусков рыбы массой в 130 г и толщиной 3 см гриб С. albicans инактивировался по истечении 18—20 минут. При горячем копчении мелкой рыбы массой в 100-150 г, проводимом при температуре +100 "С, указанный гриб инактивировался по истечении 1 часа, а при холодном копчении, осуществляе-

33

мом при температуре +36...+38 °С гриб С. albicans не инактивировался и оставался жизнеспособным в течение 2 суток. В опытных образцах рыбных консервов суспензии того же вида гриба инактивировались по истечении установленного режима стерилизации, проводимой при температуре +120 °С через 1 час. При определении устойчивости гриба С. albicans в процессе холодильной обработки в опытных образцах рыбы установлено, что при охлаждении тушек карпов массой в 250—300 г при температуре —2...0 °С суспензии гриба оставались жизнеспособными в течение 10 суток, а при замораживании яри температуре -25 °С — 1 суток. При испытании различных способов посола на выживаемость гриба С. albicans было установлено, что при слабом способе посола (3—6 %-ном содержании поваренной соли) суспензии гриба С. albicans сохранялись в жизнеспособном состоянии на протяжении 3 месяцев, при среднем посоле (10-12 %-ном содержании поваренной соли) — до 2 месяцев и 16-17 %-ном количестве соли — 14 суток.

Следовательно, холодильная обработка рыбных продуктов (охлаждение и замораживание), холодное копчение не обеспечивают гибель грибов кандида, а их тепловая обработка (варка, жарение, горячее копчение и изготовление рыбных консервов) способствует быстрой гибели дрожжепо-добных грибов.

4. ВЫВОДЫ

1. В рыбохозяйственных водоемах Северо-Кавказского и других регионов ежегодно регистрируются вспышки новых краснухоподобных (жаберных) заболеваний карповых и других видов рыб, нередко сопровождающиеся их гибелью и снижением рыбопродуктивности. Основным источником вспышки указанных заболеваний рыб явились дальневосточные растительноядные рыбы, вселенные в водоемы без соблюдения правил карантина. Одной из основных причин возникновения вспышек указанных болезней являлся цитробактериоз.

2. Экстенсивность заболевания карповых рыб цитробактериозом в рыбохозяйственных водоемах Ставропольского края составляет 23,6 %, в том числе у карпов — 28,2 + 0,31 %, сазанов — 20,8 + 0,60 %, серебряных карасей — 14,8 + 0,44 %, пестрых толстолобиков — 15,2 + 0,01 % и белых толстолобиков — 23,4 + 2,09 %. Болезнь более интенсивно проявляется в весенне-летний, а иногда и в осенне-зимний периоды года, что увязывается с теплолюбивыми и холодолюбивыми свойствами ее возбудителя — C.freundii.

3. Цитробактериоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется проявлением септицемии, множественных кровоизлияний в коже, ерошением чешуи, иногда с экзофталь-мией, некрозом жаберных лепестков. В кишечнике выявляется деск-

вамативно-катаральное воспаление, кровоизлияния в слизистой и очаговое некротическое поражение. Наблюдается брюшная водянка и наличие в брюшной полости экссудата с розоватым или красноватым оттенком. В селезенке и почках отмечается увеличение и пролиферация гемопоэтической ткани, в печени — кровоизлияния и очаги зернистой дистрофии, плавательном пузыре — лишь атрофия задней камеры. При хроническом течении болезни отмечается наличие кровоточащих язв в кожном покрове с некротическим ободком, изъязвления в ротовой полости. В восходящем отделе кишечника выявляется некроз в апикальной части ворсинок, а в нисходящем — изъязвления в слизистой оболочке. В селезенке и печени обнаруживались островки атрофии в лимфоидной ткани, в печени — некротические очажки. В мышечной ткани вдоль боковой линии — распад мышечных волокон по типу ценкеровского некроза.

4. Возбудитель цитробактериоза, выделенный от больных рыб, относится к роду Citrobacter, семейству Enterobacteriaceae, виду freundii. По морфологии С. freundii представляет собой грамотрицательную подвижную палочку величиной 0,5-1,5 мкм. Он проявляет оптимальный рост на среде Симонса с цитратом натрия, на среде Эндо растет в виде розовых и красных колоний, на висмут-сульфит агаре — коричневых или черных колоний с неприятным запахом, на мясо-пептонном бульоне образует желто-зеленое окрашивание. С. freundii ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу, сорбит, рам-нозу, но не изменяет инозит, расщепляет мукат, обладает гемолитическими свойствами.

5. Нитробактерия чувствительна к высоким температурам, химическим веществам и отдельным антибиотикам. При температуре +70 °С погибает через 5 минут, 100 °С — 1 минуту. Под влиянием ультрафиолетового облучения инактивируется через 35 минут. При воздействии 2 %-ного раствора формальдегида погибает через 2 часа, 3 %-ного — через 1 час, 3 мг %-ного раствора хлорной извести — через 60 минут; чувствительна к фуразолидону, иногда — тетрациклину.

6. При экспериментальном заражении 154 экземпляров подопытных карповых рыб культурами С. freundii при трех температурных экспозициях (+5...+7 °С, +15...+17 "С, +20...+25 °С) и семи различных способах инокуляции через 3-30 суток погибло 44 экземпляра рыб (28,6 %), заболело 55 (35,7 %) и не заболело — 55 (35,7 96). Подопытные рыбы чаще всего заболевали и погибали при интраперитониальном (100 %), пероральном (82,1 %) и жаберном (60,0 %) способах заражения с проявлением у них кровоизлияний на коже, в кишечнике, некротического поражения жабр, дистрофии печени. Из 72 подопытных белых мышей, зараженных суспензиями культур С. freundii, погибло

38 (52,8 %), заболело с развитием геморрагического поражения кишечника, гнойников в печени и проявлением токсикоза — 18 (25,0 %), не заболело - 16 (22,2 %).

7. Тушки рыб, пораженные цитробактериозом, в товароведческом отношении имеют более низкие показатели в сравнении с теми же видами здоровых рыб. При доброкачественной форме поражения масса тушек сазанов была ниже на 20,0 %, а при злокачественной — 22,9 %; белых толстолобиков — ниже на 8,2 % и 18,1 %. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. При злокачественной форме калорийность мышечной ткани у сазанов меньше на 17,7 %, а у белых толстолобиков — на 20,2 %. При доброкачественной форме те же показатели соответственно снижались у сазанов на 12,7 % и у белых толстолобиков — на 14,6 %. Сумма незаменимых аминокислот у сазанов при злокачественной форме уменьшалась до 9,9 % и у белых толстолобиков — до 9,4 %, а при доброкачественной соответственно — до 5,2 % и 4,3 % в сравнении со здоровыми рыбами.

8. В рыбохозяйственных водоемах Ставрополья у карповых рыб также отмечается заболевание кандидамикозом. Степень поражения их в неблагополучных прудовых хозяйствах составляет 23,7 %. У карпов проявляется в 28,9 + 0,55 %, сазанов — 23,1 + 2,47 %, пестрых толстолобиков — 11,5 + 0,23 % и белых толстолобиков — 5,4 + 0,40 %. Болезнь преимущественно встречается в поздне-весеннее и летнее время года, увязывается с началом кормления рыб.

9. Кандидамикоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется одновременным появлением кровоизлияний в кожных покровах, образованием некротических белых пятен на роговице глаз, глазном яблоке; в жабрах выявляются признаки геморрагического воспаления и некроза; кишечнике — катарального и некротического поражения; почках — кровоизлияний и присутствия очагов некроза. При хроническом течении болезни наблюдаются язвенно-некротические изменения в различных участках кожи, кишечнике и развитие очагов некротического характера в почках, в центре которых обнаруживаются дрожжеподобные клетки.

10. У карповых рыб, пораженных кандидамикозом, преимущественно выделяют 2 вида патогенных грибов — С. albicans и С. guilliermondii. Гриб С. albicans в односуточной культуре состоит из округленных клеток величиной 1,3x1,3 мкм; на агаре Сабуро образует выпуклые белого или кремового цвета колонии сметанообразной консистенции с ровными или волнистыми краями; ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, иногда галактозу; не ферментирует лактозу. На кукурузном агаре образует хламидоспоры и псевдомицелий, а по типу

филаментации относится к Mycolorula. Гриб С. guilliermondii в отличие от гриба С. albicans по морфологии состоит из овальных и полиморфных клеток, на агаре Сабуро растет в виде плоских белого цвета колоний, не врастающих в толщу среды; ферментирует только глюкозу и мальтозу. При росте на кукурузном агаре не образует хлами-доспоры, псевдомицелий слабо развит, по типу филаментации относится к Mycocandida.

11. Возбудители кандидамикоза неустойчивы к высокой температуре, химическим веществам и ряду фунгицидных препаратов. При температуре +60 °С они погибают через 8-10 минут, +70 °С — через 2-3 минуты, +80 °С — через 1 минуту; сохраняются при температуре —2...О °С до 6 месяцев и более. Под влиянием ультрафиолетового облучения теряют свою жизнеспособность через 35 минут. Под воздействием 2 %-ного раствора формальдегида погибают через 2 часа, а 3 %-ного — через 1 час, 1 %-ного раствора хлористого йода — через 60 минут, раствора хлорной извести с содержанием 3 мг %-ного активного хлора — через 60 минут. Из фунгицидных препаратов наиболее высокую чувствительность проявляют к нистатину (100 %) и леворину (85,7 %). Фунгистатичность этих препаратов соответственно составляет 0,11,2 мкг/мл, а фунгицидность — 0,38-0,76 мкг/мл.

12. При экспериментальном заражении 199 экземпляров подопытных рыб культурами грибов С. albicans и С. guilliermondii погибло 70 особей (35,2%), заболело 67 (33,7 %) и не заболело 62 (31,2 %). Гриб С. albicans обладает более выраженными патогенными свойствами. В зависимости от способа заражения наиболее отчетливые результаты были получены при интраперитониальном (100 %), пероральном (81,4 %) и жаберном (77,4 %). Заболевание протекает с признаками кровоизлияний и очагового некроза кожных покровов, кишечника, глаз, жабр и внутренних органов. При экспериментальном заражении 72 белых мышей суспензиями культур С. albicans интраперито-ниальным способом в 32 случаях (44,4 %) была отмечена их гибель, а в 15 случаях (20,8 %) — заболевание с образованием в почках некротических узелков и в 25 случаях (34,7 %) заболевание не было выявлено.

13. У рыб, больных кандидамикозом, в значительной степени снижается масса тела и качество рыбной продукции. При доброкачественной форме поражения у карпов масса тела уменьшается на 15,7 %, у пестрых толстолобиков — 9,2 %, а при злокачественной форме соответственно — 23,4 % и 18,5 %. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. Калорийность мышечной ткани карпов при злокачественной форме ниже на 26,2 %, у пестрых толстолобиков — 22,3 %

и при доброкачественной форме соответственно — 15,7 % и 10,0 %. Сумма незаменимых аминокислот у карпов при злокачественной форме поражения снижается на 16,9 %, а у пестрых толстолобиков — на 14,9 %, а при доброкачественной соответственно — на 8,9% и 7,3 % в сравнении со здоровыми рыбами.

14. При доброкачественной форме кандидамикоза и цитробактериоза обеззараживание тушек рыб происходит при тепловой обработке, посоле или консервированиии. Тепловую обработку путем варки необходимо проводить не менее 20-25 минут, жарение — 20 минут, горячее копчение — 1 час, консервирование в соответствии с установленными режимами стерилизации для рыбных консервов и посол с 16—17 %-ным содержанием поваренной соли — не менее 14 суток. Охлаждение, замораживание, холодное копчение не инактивируютдрожжеподоб-ные грибы и С./геипсШ. При злокачественной форме заболеваний, положительном результате микологического или бактериологического исследования пораженную рыбу желательно подвергать варке в течение 25-30 минут, а затем направлять в корм животным.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использовать в ветеринарной практике разработанные «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза)», одобренные секцией «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины (потокол № 3 от 27 сентября 2007 г.), утвержденные в РАСХН 1 июля 2008 г.

2. Методические рекомендации «Диагностика цитробактериоза рыб», «Диагностика кандидамикоза рыб», одобренные секцией животноводства и ветеринарии научно-технического совета МСХ Ставропольского края.

3. С лечебной и профилактической целью при цитробактериозе карпов и других видов рыб следует использовать фуразолидон, тетрациклин, а также другие высокоэффективные антибактериальные препараты, а с кандидамикозом — водонерастворимый нистатин и леворин, обладающие высокими фунгицидными свойствами по отношению к возбудителям указанного заболевания.

4. Товарную рыбу, выловленную из водоемов, неблагополучных по указанным заболеваниям, необходимо предварительно подвергать сортировке, с разделением на больную и здоровую, и ускорять ее доставку в охлажденном виде к потребителям или на рыбоперерабатывающие предприятия. Больную рыбу необходимо подвергать термической обработке.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вылегжанин, А. Ф. О причинах вспышки эпизоотии «краснухи» рыб / А. Ф. Вылегжанин, Н. А. Ожередова//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1993. — С. 75-78.

2. Ожередова, Н. А. Кандидамикоз пушно-меховых животных и рыб / Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы Междунар. конф. — Барнаул, 1995. — С. 89-90.

3. Ожередова, Н. А. Микологическая диагностика кандидамикоза пушно-меховых животных и рыб / Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии : материалы Междунар. конф. — Барнаул, 1995. — С. 116.

4. Ожередова, Н. А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыб при зоо-нозах / Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии : материалы Междунар. конф. — Барнаул, 1995. — С. 133.

5. Ожередова, Н. А. Цитоморфологическая характеристика гриба С. albicans/ Н. А. Ожередова // Современные достижения биотехнологии : материалы Всероссийской конф. — Ставрополь, 1996. — С. 73—74.

6. Ожередова, Н. А. Кандидамикоз карпов и пушно-меховых животных / Н. А. Ожередова // Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней сельскохозяйственных животных и птиц: материалы науч. конф., посвящ. 50-летию Краснодарской НИВС. - Краснодар, 1996. — Ч. 1. — С. 84.

7. Ожередова, Н. А. Особенности эпизоотологии, клинического проявления кандидамикоза рыб и основные свойства возбудителя / Н. А. Ожередова // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных : сб. науч. тр. / Ставропольский СХИ. - Ставрополь, 1996. - С. 41-43.

8. Ожередова, Н. А. Антифугицидные препараты при кандидамикозе рыб / Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы патологии животных и человека : материалы науч.-практ. конф. — Барнаул, 1996. — С. 105-106.

9. Ожередова, Н. А. Цитоморфологическая характеристика гриба С. albicans/ Н. А. Ожередова //Актуальные проблемы патологии животных и человека: материалы науч.-практ. конф. — Барнаул, 1996. — С. 106.

10. Вылегжанин, А. Ф. Диагностика болезней ластоногих животных / А. Ф. Вылегжанин, Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы патологии животных и человека: материалы науч.-практ. конф. — Барнаул, 1996.-С. 115.

11. Ожередова, Н. А. Кандидамикоз карпов и методы борьбы с ним / Н. А. Ожередова // Рыбоводство и рыболовство : науч.-произв. журнал. - 1997. - № 3-4. - С. 36-37.

12. Ожередова, Н. А. Морфология кожного покрова жаберного аппарата и внутренних органов в норме и при патологии / Н. А. Ожередова // Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования морфологических дисциплин : материалы Междунар. конф. вет. морфологов. —Улан-Удэ, 1998. — С. 189-191.

13. Ожередова, Н. А. Кандидамикоз карпов и меры борьбы с ним / Н. А. Ожередова //Актуальные проблемы вет. образования : материалы Междунар. конф. — Барнаул, 1998. — С. 155-156.

14. Ожередова, Н. А. Обсемененность грибом С. albicans организма карповых рыб / Н. А. Ожередова // Актуальные проблемы вет. образования : материалы Междунар. конф. — Барнаул, 1998. — С. 156-157.

15. Ожередова, Н. А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы и рыбных продуктов, обсемененных дрожжеподобными грибами / Н. А. Ожередова/ Современные научные и практические проблемы животноводства, ветеринарной медицины и перспективы их решения : материалы науч. -пракг. конф. — Уфа, 1999. — С. 171-172.

16. Ожередова, Н. А. Морфологический и химический состав мяса рыбы, обсемененного грибами кандида / Н. А. Ожередова // Современные научные и практические проблемы животноводства, ветеринарной медицины и перспективы их решения : материалы науч.-практ. конф. — Уфа, 1999. - С. 172-173.

17. Ожередова, Н. А. Влияние экологических условий на проявление цит-робактериоза у рыб и птиц / Н. А. Ожередова // Проблемы экологической безопасности Северо-Кавказского региона : материалы реги-нальной конф. — Ставрополь, 2000. — С. 146-147.

18. Вылегжанин, А. Ф. Анализ эпизоотической ситуации по болезням рыб в рыбохозяйственных водоемах / А. Ф. Вылегасанин, Н. А. Ожередова / Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии : сб. науч. тр. — Барнаул, 2000. — С. 78-80.

19. Ожередова, Н. А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы и рыбных продуктов, обсемененных цитробактериями / Н. А. Ожередова // Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии : сб. науч. тр. — Барнаул, 2000. — С. 144-145.

20. Ожередова, Н. А. Цитробактериоз карпов и его диагностика / H.A. Ожередова // Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии : сб. науч. тр. — Барнаул, 2000. — С. 145-146.

21. Ожередова, Н. А. Диагностика цитробактериоза карповых рыб / Н. А. Ожередова // Ветеринарная служба Ставрополья. — 2001. — № 2. — С. 9-10.

22. Ожередова, Н. А. Основные свойства возбудителя цитробактериоза карповых рыб / Н. А. Ожередова // Ветеринарная служба Ставрополья. - 2001. - № 2. - С. 10-12.

23. Ожередова, Н. А. Изучение антагонистических свойств микробов / Н. А. Ожередова, Е. В. Светлакова//Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. / Ставрополькая ГСХА. — Ставрополь, 2001. — С. 32-34.

24. Ожередова, Н. А. Инфекционные болезни рыб и их дифференциация в водоемах Северного Кавказа / Н. А. Ожередова //Достижения ветеринарной медицины — XXI веку: материалы Междунар. конф. — Барнаул, 2002. - Ч. 1. - С. 76-78.

25. Ожередова, Н. А. Санитарная оценка рыбы и рыбных продуктов, обсемененных нитробактериями / Н. А. Ожередова // Вестник ветеринарии. - 2003. - № 26. - С. 17-20.

26. Ожередова, Н. А. Санитарная оценка продуктов убоя каспийских тюленей, обсемененных нитробактериями/ Н. А. Ожередова// Прикаспийский регион: Человек и природная среда: материалы заочной науч. конф. — Элиста, 2003. - С. 65-66.

27. Дорофеев, В. И. Влияние 1 % раствора формальдегида на кислой фракции электрохимически активированной воды на сапрофитную споровую и грибковую микрофлору / В. И. Дорофеев, Н. А. Ожередова, Н. И. Дет-цель // Актуальные проблемы охраны здоровья животных: материалы II Междунар. науч. -практ. конф., посвящ. 65-летию ф-та ветеринарной медицины / Ставропольский ГАУ. — Ставрополь, 2004. — С. 139-142.

28. Ожередова, Н. А. К вопросу лечения кандидамикоза / H.A. Ожередова //Актуальные проблемы охраны здоровья животных : материалы II Междунар. науч. -практ. конф., посвящ. 65-летию ф-та ветеринарной медицины / Ставропольский ГАУ. — Ставрополь, 2004. — С. 196-197.

29. Ожередова, Н. А. Качество рыбных продуктов, пораженных цитро-бактериозом, и пути их улучшения / Н. А. Ожередова // Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-гинекологичес-ких заболеваний и биотехники размножения животных : материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 75-летию Вятской гос. сельскохозяйственной академии. — Киров, 2005. — С. 117—118.

30. Ожередова, Н. А. О причинах острых кишечных инфекций / Н. А. Ожередова, Ю. В. Котова, А. А. Грабовская // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: материалы 69-й науч.-практ. конф. / Ставропольская ГАУ. — Ставрополь, 2005.-С. 97-100.

31. Ожередова, Н. А. Распространение, особенности клинического проявления и диагностика кандидамикоза рыб в Ставропольском крае / Н. А. Ожередова // Вестник Ставропольского госуниверситета: научный журнал. - 2005. — Вып. № 42. — С. 60-65.

32. Ожередова, Н. А. Цитробактериоз и особенности его проявления у карповых рыб (распространение, клинико-морфологические изменения, диагностика) / Н. А. Ожередова // Рыбное хозяйство. — 2006. — №2.-С. 77-78.

33. Ожередова, Н. А. Особенности проявления цитробактериоза рыб в Ставропольском крае / Н. А. Ожередова // Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. — Ростов н/Д, 2006,-№2.-С. 120-126.

34. Ожередова, Н. А. Диагностика цитробактериоза рыб : методические рекомендации / Н. А. Ожередова, А. Ф. Дмитриев, Т. И. Лапина. — Ставрополь : АГРУС, 2006. - 24 с.

35. Ожередова, Н. А. Диагностика кандидамикоза рыб: методические рекомендации / Н. А. Ожередова, А. Ф.Дмитриев, Т. И. Лапина. — Ставрополь : АГРУС, 2006. - 24 с.

36. Ожередова, Н. А. Цитробактериоз карповых рыб в регионе Северного Кавказа / Н. А. Ожередова// Рыбное хозяйство. — 2006. — № 4. — С. 65-67.

37. Ожередова, Н. А. Патоморфологические изменения при цитробакте-риозе рыб / Н. А. Ожередова, Т. И. Лапина // Естествознание и гуманизм. Современный мир, природа и человек: сб. науч. работ. — Т. 3. — № 4. - Томск, 2006. - С. 37-38.

38. Ожередова, Н. А. Особенности проявления цитробактериоза рыб : монография / Н. А. Ожередова. — Ставрополь : АГРУС, 2007. — 100 с.

39. Ожередова, Н. А. Качественная и санитарная оценка рыбных продуктов при цитробактериозе / Н. А. Ожередова // Ветеринария. — 2007. — №5.-С. 51-53.

40. Ожередова, Н. А. Некоторые аспекты инфекционной патологии рыб / Н. А. Ожередова, А. С. Ожередов // Актуальные проблемы ветеринарного акушерства, гинекологии и биотехники размножения животных : сб. науч. тр. по материалам Междунар. науч.-практ. конф. (г. Ставрополь, 15-18 мая 2007 г.) — Ставрополь, 2007. - С. 150-151.

41. Ожередова, Н. А. Эпизоотический мониторинг цитробактериоза карповых рыб в Ставропольском крае / Н. А. Ожередова // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных : сб. науч. тр. по материалам 71-й науч. конф. / Ставропольский ГАУ. - Ставрополь, 2007. - С. 69-71.

42. Ожередова, Н. А. Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза) / Н. А. Ожередова. - М.: РАСХН, 2008. - 18 с.

43. Дмитриев, А. Ф. Кандидамикоз карповых рыб / А. Ф. Дмитриев, Н. А. Ожередова // Ветеринарный врач. — 2008. — № 4. — С. 49-52.

44. Ожередова, Н. А. Химический состав мышечной ткани рыб при кан-двдамикозе / Н. А. Ожередова // Ветеринарный врач. — 2008. — № 6.

Подписано в печать 20.11.2008. Формат 60х84'/16. Бумага офсетная. Гарнитура «Times». Печать офсетная. Усл. печ. л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ № 631.

Отпечатано в типографии пздательско-полиграфического комплекса СтГАУ «АГРУО г. Ставрополь, ул. Мира, 302.

Актуальность темы. Повышение жизненного уровня населения нашей страны, его обеспечение всеми необходимыми продуктами питания, а также безопасность продовольственного сырья и пищевой продукции является одной из важнейших задач на современном этапе. В решении этой проблемы существенное значение приобретает увеличение производства и потребления рыбы, которое к настоящему времени сократилось в 2 раза по сравнению с 1990 годом. Вместе с тем, ее производство всегда оказывалось в 2-3 раза дешевле в сравнении с мясом. В то же время по своей питательной ценности рыба мало уступает мясу сельскохозяйственных животных, а по степени усвояемости в организме человека значительно превосходит говядину. Вместе с тем, дальнейшему увеличению и сохранению запасов промысловых и прудовых рыб в последние годы в значительной степени препятствуют почти ежегодные вспышки новых, недостаточно изученных инфекционных заболеваний рыб, названных краснухоподобными (жаберными), ранее не регистрировавшихся в российских водоемах и обусловливающих массовую гибель рыб.

Вспыхнувшие в середине 50-х годов прошлого столетия указанные эпизоотии среди холодноводных в сравнительно короткое время довольно быстро охватили прудовые карповые хозяйства, расположенные в различных климатических зонах, начиная от северо-запада и центральной черноземной полосы до Северного Кавказа, от Волго-Каспийского региона до Западной Сибири. Однако, несмотря на проводимые исследования, природа этих заболеваний до сих пор остается невыясненной. Изучением этой патологии занимались ряд исследователей (А.Ф. Вылегжанин, 1964; Е.С. Цой, 1978; В.Д. Ящук, 1988; Валедская A.M., 1991; М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов, 1995; В.И. Афанасьев, Л.И. Лаврентьева, Г.В. Афанасьев, Г.И. Сапожников, 1997; К.В. Бурлаченко, Л. И. Бычкова, 2003; Л.В. Ларцева, Я.М. Болдырева, 2004;С.Г Виноградова, Е.М. Харенко, 2005; О.В. Казимирченко,

2006; N. Tereza et al, 1980; D. Guston, В. Austin, 1990; Carunsagar, 1992). Однако роль С. freundii в патологии рыб до сих пор остается неясной.

В рыбохозяйственных водоемах, и в частности, в прудовых хозяйствах, отмечается заболевание рыб кандидамикозом (З.Г. Бахтиярова, 1987; C.B. Петрович и Н.В. Войнова, 1989; Ларцева Л.В., 2004). Вместе с тем, несмотря на отдельные исследования, специфика проявления указанного заболевания, механизм заражения рыб возбудителями этой болезни также до сих пор остаются недостаточно изученными.

На фоне вспыхнувших эпизоотий краснухоподобных (жаберных) заболеваний рыб в ряде регионов прикаспийской зоны и в частности, в Астраханской области и других зонах, среди населения, употреблявшего в пищу пораженные рыбные продукты, стали отмечаться вспышки пищевых заболеваний невыявленной этиологии. По данным ФАО, на долю эпидемий рыбного происхождения ежегодно приходится до 20-35% от общего количества вспышек пищевых заболеваний наблюдаемых в мире.

В связи с нередким выделением из организма рыб, пораженных крас-нухоподобными (жаберными) заболеваниями, цитробактерий и дрожжепо-добных грибов рода Candida, серьезной опасностью их отдельных представителей, таких как С. freundii и С. albicans для организма человека, были проведены специальные исследования по изучению степени контаминации указанными микроорганизмами рыбы и рыбных продуктов, а также степени их патогенности. Тем более, что в специальной научной литературе имеются указания об опасности С. freundii, выделяемых из других видов пищевых продуктов, для организма человека. О возможности цитробактерий, в том числе и С. freundii вызывать пищевые заболевания у людей сообщали В.П. Рагинская, 1973; A.A. Покровский, 1985; С.А. Шевелева, Н.Р. Ефимочкина, A.A. Иванов, Н.П. Турурушкина, Т.И. Фролочкина, 2004; а на способность гриба С. albicans обусловливать одноименное заболевание кандидамикозом у человека указывали П.Н. Кашкин, 1958; Н.П. Блинов, 1964; A.M. Ариевич,

З.Г.Степанищева, 1965;Е.Н. Морозов, 1971; В.Н. Кулага, 1974; Р.Н. Реброва, 1979.

Ряд исследователей (Е.В. Себряков, 1985; Т.Т. Сутеева, 1987; JI.B. Лар-цева, 2004) выявили высокую обсемененность грибами рода Candida отдельных видов пищевых продуктов животного происхождения и указывают на их эпидемиологическую опасность в возникновении кандидамикоза у детей при употреблении в пищу таких продуктов. Однако вопрос о распространения нитробактерий и дрожжеподобных грибов рода Candida, обнаруживаемых в рыбе, пораженной кранухоподобными (жаберными) заболеваниями, до настоящего времени предметно не изучался.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось изучение роли цитробактериоза и кандидамикоза в этиологии краснухопо-добных (жаберных) заболеваний рыб, особенностей проявления этих заболеваний у рыб, санитарная оценка рыбопродуктов, контаминированых нитробактериями и грибами рода Candida.

При решении этой цели с учетом степени изученности проблемы были поставлены следующие задачи:

1. Провести эпизоотический мониторинг в рыбохозяйственных водоёмах России и в Ставропольском крае по изучаемым заболеваниям рыб.

2. Изучить особенности клинического, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандидамикоза рыб.

3. Изучить биологические свойства цитробактерий и грибов рода Candida, выделенных у карповых рыб.

4. Выяснить устойчивость С. freundii и гриба С. albicans к физико-химическим факторам и антибиотикам.

5. Разработать систему диагностических, лечебно-профилактических мероприятий при цитробактериозе и кандидамикозе карповых рыб.

6. Провести санитарную оценку рыбы и рыбных продуктов при цитробактериозе и кандидамикозе.

Научная новизна работы. Впервые нами были выяснены источники распространения цитробактерий в российских водоемах, особенности клини-кого, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандидамикоза рыб, изучена специфика биологических свойств возбудителей этих болезней, патогенность которых подтверждена экспериментально заражением подопытных рыб и белых мышей.

Выявлена восприимчивость подопытных рыб к возбудителям цитробактериоза при трех температурных режимах (+5°С +7°С, +15°С +17°С, +20°С +25°С), при семи способах заражения (водном, пероральном, жаберном, кожном, внутримышечном, интраперитониальном, контактном) и впервые была доказана возможность заражения этими микроорганизмами подопытных растительноядных рыб (пестрых толстолобиков). Аналогичные эксперименты по заражению подопытных рыб были проведены и с возбудителями кандидамикоза, которые показали положительные результаты, особенно при водном и пероральном способах их заражения.

Выяснены условия роста и размножения возбудителей цитробактериоза и кандидамикоза, их отношение к различным физическим (высокой и низкой температуре) и химическим факторам, разработаны методы диагностики, включающие дифференциацию изучаемых заболеваний.

Впервые дана полная санитарная характеристика рыбных продуктов, контаминированых цитробактериями и дрожжеподобными грибами рода Candida.

Совокупность выполненных нами исследований является актуальной научной разработкой, направленной на сохранение запасов промысловых рыб, повышение их продуктивности и качества рыбной продукции.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате комплексных исследований нами получены теоретические и практические данные по цитробактериозу и кандидамикозу рыб, на основании которых можно устанавливать комплексный диагноз указанных заболеваний карповых рыб с учетом результатов анализа эпизоотической ситуации, особенностей клинических, патоморфологических проявлений заболеваний, биологических свойств возбудителей болезней и осуществлять проведение дифференциальной диагностики цитробактериоза и кандидамикоза рыб от сходных болезней, что позволит успешно проводить лечебно-профилактические мероприятия. Представленные сведения по санитарной оценке способствуют улучшению качества рыбопродуктов.

Основные аспекты практического использования результатов изложены в методических рекомендациях по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза), утвержденных в РАСХН, 1 июля 2008 г., одобренных секцией «Инфекционной патологии животных» Отделения ветеринарной медицины (протокол № 3 от 27 сентября 2007 г.), а также в методических рекомендациях «Диагностика цитробактериоза рыб», «Диагностика кандидамикоза рыб», одобренных секцией животноводства и ветеринарии научно-технического совета МСХ Ставропольского края (протокол №2 от 10 марта 2006 г.).

Результаты исследований могут быть использованы в практической деятельности сотрудниками ветеринарных лабораторий, рыбоводами, фермерами, специалистами интересующимися вопросами инфекционной патологии, при составлении руководств, учебных и справочных пособий.

Основные положения, выносимые на защиту:

Одной из причин вспышек краснухоподобных (жаберных) заболеваний рыб в рыбохозяйственных водоемах России, в том числе Ставропольском крае являются возбудители цитробактериоза, кандидамикоза или их ассоциативное проявление.

Особенности клинического, патоморфологического проявления цитробактериоза и кандидамикоза у рыб.

- Возбудители цитробактериоза и кандидамикоза — С. freundii, С. albicans, имеют характерные биологические свойства, при экспериментальном заражении вызывают заболеваемость и летальность особей.

- У рыб инфицированных цитробактериозом и кандидамикозом снижаются товароведческие показатели, а технологическая обработка тушек обеспечивает их обезвреживание.

Реализация результатов исследований. Результаты полученных исследований внедрены в рыбоводных хозяйствах Ставропольского края (ООО «Лотос», ЗАО «Голубая Нива», рыбколхоз «Зеркальные пруды», прудах с. Арзгир у индивидуального предпринимателя Геращенко А.Д.), а также в ГУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория» и сельскохозяйственном кооперативе - рыболовецкая артель «Гулькевическая» Краснодарского края.

Кроме того, материалы диссертационной-работы используются в учебном процессе по курсу микробиологии на кафедрах Ставропольского государственного аграрного университета, Московской ГАВМиБ им. К.И. Скрябина, Донского государственного аграрного университета, Новосибирского государственного аграрного университета, Костромской государственной сельскохозяйственной академии, Карачаево-Черкесской государственной технологической академии, Калмыцкого государственного университета, Дагестанской государственной сельскохозяйственной академии, Кубанского государственного аграрного университета.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований диссертационной работы доложены и одобрены на научных конференциях Ставропольского государственного аграрного университета (1993, 1996, 2001, 2004, 2005, 2007), Алтайском (1995, 1996, 1998, 2000, 2002), Краснодарском (1996) и Башкирском (1999) государственных аграрных университетах, Российской академии сельскохозяйственных наук (1996), Бурятской сельскохозяйственной академии (1998), Калмыцком государственном университете (2003), Вятской сельскохозяйственной академии (2005).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 44 работах, опубликованных в тематических сборниках, материалах конференций, 3 рекомендациях. В центральных научных журналах опубликовано 7 статей, издана 1 монография.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 360 страницах, содержит 79 таблиц, 19 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и предложений. Список литературы включает 383 источника, в том числе 111 иностранных авторов.

4. ВЫВОДЫ

1. В рыбохозяйственных водоемах северокавказского и других регионов ежегодно регистрируются вспышки новых краснухоподобных (жаберных) заболеваний карповых и других видов рыб, нередко сопровождающиеся их гибелью и снижением рыбопродуктивности. Основным источником вспышки указанных заболеваний рыб явились дальневосточные растительноядные рыбы, вселенные в водоемы без соблюдения правил карантина. Одной из основных причин возникновения вспышек указанных болезней являлся цитробактериоз.

2. Экстенсивность заболевания карповых рыб цитробактериозом в рыбохозяйственных водоемах Ставропольского края составляет 23,6%, в том числе у карпов - 28,2+0,31%, сазанов — 20,8+0,60%, серебряных карасей — 14,8+0,44%, пестрых толстолобиков — 15,2+0,01% и белых толстолобиков — 23,4+2,09%. Болезнь более интенсивно проявляется в весенне-летний, а иногда и в осенне-зимний периоды года, что увязывается с теплолюбивыми и холодолюбивыми свойствами ее возбудителя — С. ГгеипсШ.

3. Цитробактериоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется проявлением септицемии, множественных кровоизлияний в коже, ерошением чешуи, иногда с экзофтальмией, некрозом жаберных лепестков. В кишечнике выявляется десквамативно-катаральное воспаление, кровоизлияния в слизистой и очаговое некротическое поражение. Наблюдается брюшная водянка и наличие в брюшной полости экссудата с розоватым или красноватым оттенком. В селезенке и почках отмечается увеличение и пролиферация гемопоэтической ткани, в печени — кровоизлияния и очаги зернистой дистрофии, плавательном пузыре - лишь атрофия задней камеры. При хроническом течении болезни отмечается наличие кровоточащих язв в кожном покрове с некротическим ободком, изъязвления в ротовой полости. В восходящем отделе кишечника выявляется некроз в апикальной части ворсинок, а в нисходящем — изъязвления в слизистой оболочке. В селезенке и печени обнаруживались островки атрофии в лимфоидной ткани, печени - некротические очажки. В мышечной ткани вдоль боковой линии — распад мышечных волокон по типу ценкеровского некроза.

4. Возбудитель цитробактериоза, выделенный от больных рыб, относится к роду Citrobacter, семейству Enterobacteriaceae, виду freundii. По морфологии С. freundii представляет собой грамотрицательную, подвижную палочку, величиной 0,5-1,5 мкм. Он проявляет оптимальный рост на среде Симонса с цитратом натрия, на среде Эндо растет в виде розовых и красных колоний, висмут-сульфит агаре - коричневых или черных колоний с неприятным запахом, на мясопептонном бульоне образует желто-зеленое окрашивание. С. freundii ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу, сорбит, рамнозу, но не изменяет инозит, расщепляет мукат, обладает гемолитическими свойствами.

5. Цитробактерия чувствительна к высоким температурам, химическим веществам и отдельным антибиотикам. При температуре +70°С погибает через 5 минут, 100°С — 1 минуту. Под влиянием ультрафиолетового облучения инактивируется через 35 минут. При воздействии 2%-ного раствора формальдегида погибает через 2 часа, 3%-ного — 1 час, 3 мг%-ного раствора хлорной извести - 60 минут; чувствительна к фуразолидону, иногда - тетрациклину.

6. При экспериментальном заражении 154 экземпляров подопытных карповых рыб культурами С. freundii при трех температурных экспозициях (+5°С +7°С; +15°С +17°С; +20°С +25°С) и семи различных способов инокуляции через 3-30 суток погибло 44 экземпляров рыб (28,6%), заболело 55 (35,7%) и не заболело 55 (35,7%). Подопытные рыбы чаще всего заболевали и погибали при интраперитониальном (100%), пероральном (82,1%) и жаберном (60,0%) способах заражения с проявлением у них кровоизлияний в коже, кишечнике, некротического поражения жабр, дистрофии печени. Из 72 подопытных белых мышей, зараженных суспензиями культур С. freundii, погибло 38 (52,8%), заболело с развитием геморрагического поражения кишечника, гнойников в печени и проявлением токсикоза 18 (25,0%), не заболело 16 (22,2%).

7. Тушки рыб, пораженные цитробактериозом, в товароведческом отношении имеют более низкие показатели в сравнении с теми же видами здоровых рыб. При доброкачественной форме поражения масса тушек сазанов была ниже на 20,0%, а при злокачественной — 22,9%; белых толстолобиков - ниже на 8,2% и 18,1%. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. При злокачественной форме калорийность мышечной ткани у сазанов меньше на 17,7%, а у белых толстолобиков — на 20,2%. При доброкачественной форме те же показатели соответственно снижались у сазанов на 12,7% и у белых толстолобиков — на 14,6%. Сумма незаменимых аминокислот у сазанов при злокачественной форме уменьшалась до 9,9% и у белых толстолобиков — до 9,4%, а при доброкачественной соответственно — до 5,2% и 4,3%, в сравнении со здоровыми рыбами.

8. В рыбохозяйственных водоемах Ставрополья у карповых рыб также отмечается заболевание кандидамикозом. Степень поражения их в неблагополучных прудовых хозяйствах составляет 23,7%. У карпов проявляется в 28,9+0,55%, сазанов - 23,1+2,47%, пестрых толстолобиков — 11,5+0,23% и белых толстолобиков - 5,4+0,40%. Болезнь преимущественно встречается в поздне-весеннее и летнее время года, увязывается с началом кормления рыб.

9. Кандидамикоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется одновременным появлением кровоизлияний в кожных покровах, образованием некротических белых пятен на роговице глаз, глазном яблоке; в жабрах выявляются признаки геморрагического воспаления и некроза; кишечнике — катарального и некротического поражения; почках - кровоизлияний и присутствие очагов некроза. При хроническом течении болезни наблюдаются язвенно-некротические изменения в различных участках кожи, кишечнике и развитие очагов некротического характера в почках, в центре которых обнаруживаются дрожжеподобные клетки.

10. У карповых рыб, пораженных кандидамикозом, преимущественно выделяют 2 вида патогенных грибов - С. albicans и С. guilliermondii. Гриб С. albicans в односуточной культуре состоит из округленных клеток величиной 1,3x1,3 мкм; на агаре Сабуро образует выпуклые белого или кремового цвета колонии сметанообразной консистенции, с ровными или волнистыми краями; ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, иногда галактозу, не ферментирует лактозу. На кукурузном агаре образует хламидоспоры и псевдомицелий, а по типу филаментации относится к Mycotorula. Гриб С. guilliermondii, в отличие от гриба С. albicans, по морфологии состоит из овальных и полиморфных клеток, на агаре Сабуро растет в виде плоских белого цвета колоний, не врастающих в толщу среды; ферментирует только глюкозу и мальтозу. При росте на кукурузном агаре не образует хламидоспоры, псевдомицелий слабо развит, по типу филаментации относится к Mycocandida.

11. Возбудители кандидамикоза неустойчивы к высокой температуре, химическим веществам и к ряду фунгицидных препаратов. При температуре +60°С они погибают через 8-10 минут, +70°С - 2-3 минуты, +80°С — 1 минуту; сохраняются при температуре 0 -2°С до 6 месяцев и более. Под влиянием ультрафиолетового облучения теряют свою жизнеспособность через 35 минут. Под воздействием 2%-ного раствора формальдегида погибают через 2 часа, а 3%-ного - 1 час, 1%-ного раствора хлористого йода — 60 минут, раствора хлорной извести с содержанием 3 мг%-ного активного хлора — 60 минут. Из фунгицидных препаратов наиболее высокую чувствительность проявляют к нистатину (100,0%) и леворину (85,7%). Фунгистатичность этих препаратов соответственно составляет 0,1-1,2 мкг/мл, а фунгицидность - 0,38-0,76 мкг/мл.

12. При экспериментальном заражении 199 экземпляров подопытных рыб культурами грибов С. albicans и С. guilliermondii погибло 70 особей (35,2%), заболело 67 (33,7%) и не заболело 62 (31,2%). Гриб С. albicans обладает более выраженными патогенными свойствами. В зависимости от способа заражения наиболее отчетливые результаты были получены при интраперитониальном (100%), пероральном (81,4%) и жаберном (77,4%). Заболевание протекает с признаками кровоизлияний и очагового некроза кожных покровов, кишечника, глаз, жабр и внутренних органов. При экспериментальном заражении 72 белых мышей суспензиями культур С. albicans интраперитониальным способом в 32 случаях (44,4%) была отмечена их гибель, а в 15 случаях (20,8%) заболевание с образованием в почках некротических узелков и в 25 случаях (34,7%) заболевание не было выявлено.

13. У рыб, больных кандидамикозом, в значительной степени снижается масса тела и качество рыбной продукции. При доброкачественной форме поражения у карпов масса тела уменьшается на 15,7%, у пестрых толстолобиков - 9,2%, а при злокачественной форме соответственно — 23,4% и 18,5%. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. Калорийность мышечной ткани карпов при злокачественной форме ниже на 26,2%, у пестрых толстолобиков - 22,3% и при доброкачественной форме соответственно -15,7% и 10,0%. Сумма незаменимых аминокислот у карпов при злокачественной форме поражения снижается на 16,9%, а у пестрых толстолобиков - на 14,9%, а при доброкачественной соответственно — 8,9% и 7,3%, в сравнении со здоровыми рыбами.

14. При доброкачественной форме кандидамикоза и цитробактериоза обеззараживание тушек рыб происходит при тепловой обработке, посоле или консервированиии. Тепловую обработку путем варки необходимо проводить не менее 20-25 минут, жарение — 20 минут, горячее копчение — 1 час, консервирование в соответствии с установленными режимами стерилизации для рыбных консервов и посол с 16-17%-ным содержанием поваренной соли - не менее 14 суток. Охлаждение, замораживание, холодное копчение не инактивируют дрожжеподобные грибы и С. freundii. При злокачественной форме заболеваний, положительном результате микологического или бактериологического исследования, пораженную рыбу желательно подвергать варке в течение 25-30 минут, а затем направлять в корм животным.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использовать в ветеринарной практике разработанные «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза)», одобренные секцией «Инфекционной патологии животных» Отделения ветеринарной медицины, протокол № 3 от 27 сентября 2007 г., утвержденные в Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН) 1 июля 2008 г.

2. Методические рекомендации «Диагностика цитробактериоза рыб», «Диагностика кандидамикоза рыб», одобренные секцией животноводства и ветеринарии научно-технического совета МСХ Ставропольского края.

3. С лечебной и профилактической целью при цитробактериозе карпов и других видов рыб следует использовать фуразолидон, тетрациклин, а также другие высокоэффективные антибактериальные препараты, а с кандидамикозом - водонерастворимый нистатин и леворин, обладающий высокими фунгицидными свойствами по отношению к возбудителям указанного заболевания.

4. Товарную рыбу, выловленную из водоемов, неблагополучных по указанным заболеваниям, необходимо предварительно подвергать сортировке, с разделением на больную и здоровую, и ускорять ее доставку в охлажденном виде к потребителям или на рыбоперерабатывающие предприятия. Больную рыбу необходимо подвергать термической обработке.