Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Обнаружение туберкулёзных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота в реакции агрегирования иммунных комплексов

РГЗ од

О и '¡рг^ЩШрТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА с- - ним РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

АЛЭ1АТИНСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕПП ЗООВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ПЕРДЕБАЕВ Ербол Абдирасилович

ОБНАРУЖЕНИЕ ТУБЕРКУЛЁЗНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ АГРЕГИРОВАНИЯ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ

16.00.03 — Ветеринарная микробиология, иммунология, эпизоотология, и инфекционные болезни животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

АЛМАТЫ -1993

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии Алматинского Ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института.

Научный руководитель

Ведущая организация

Официальные оппоненты

— член-корреспондент Казахской, академии сельскохозяйственных наук, доктор взтеринарных наук, профессор Т.С. САЙДУЛДИН

— Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт.

— доктор медицинских наук, профессор Б. К. САНСЫЗБАЕВ.

кандидат ветеринарных наук Б.М. ТУЯКБАЕВА

Защита состоится „

1993 г.-в

о

часов

на заседании специализированного сов/та Д18.01.02 при Алматин-ском зооветеринарном институте (480011, Алматы, пр. Абаи, 28).

С дссертацией можно ознакомиться в библиотеке зооветеринарного института.

/Л

Автореферат разослан

1993 г.

Ученый секретарь

специализированного совета кандидат ветеринарных клу/л

доцент // ^Ы.Н. АХМЕТСАДЫКОВ

0Б1ЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.Туберкулёз крупного рогатого скота является распространённой инфекционной болезнью в ряде областей республики и наносит немалый экономический ущерб сельскому хозяйству. Оздоровление неблагополучных хозяйств от этой инфекции достигается путём полной замены поголовья животных или проведением систематических аллергических исследований с последующей сдачей на убой реагирую-цих животных. Аллергическому методу диагностики туберкулёза, в силу ряда известных причин, свойственны серьезные недостатки. Поэтому использование его в качестве основного и единственного метода массового прижизненного исследования крупного рогатого скота не обеспечивает полного и своевременного выявления заражённых животных (Н.П.Урбач, 19£0; А.И.Кузин, 1582; Е.И.Буряк, 1986; О.Я.Кассич, 1985, 1991).

В настоящее время для прижизненной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота, особенно, нереагирущего на туберкулин, предложены и испытнваются различные серологические методы: РСК, РГ, РИГА, Ш, РДСКК и др. Т.С. Сайдулдиным (1931) разработана реакция агрегирования иммунных комплексов (РАИС). Автор испытал РМ-{ для диагностики су-ауру верблюдов и бруцеллёза людей и крупного рогатого скота. Полученные результаты свидетельствовали о высокой чувствительности и специфичности этого метода.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось определение диагностического значения РАЖ при туберкулёзе крупного рогатого скота. Для достижения этой цели ставили следующие задачи:

I. Уточнить отдельные параметры методики пзстзнолки и учета результатов РАЩ для обнаружения туберкулёзник антител в сыворотках крови крупного рогатого скота,

2. Испытать в качестве антигена в РАЖ туберкулин ПЦЦ для млекопитающих.

3. Сравнить диагностическую эффективность внутрикожной пробы и РАЖ при исследовании крупного рогатого скота на туберкулёз.

4. Уточнить диагноз на туберкулёз, установленный по РАИС, путём проведения контрольных убоев с последующими патологоана-томическим и бактериологическим исследованиями.

Научная новизна. Впервые определено диагностическое значение РАМ при туберкулёзе крупного рогатого скота и предложена методика постановки и учёта результатов реакции.

Апробация работы. Проведено комиссионное испытание методики постановки и учёта результатов РАЖ при исследовании сывороток крови крупного рогатого скота на туберкулёз. Результаты испытания представлены на рассмотрение Научно-Технического Совета МСХ республики Казахстан. По приказу Р 20-I-I7/I Главного управления ветеринарии МСХ республики- Казахстан от 6 ноября 1991 г. проведено производственное испытание диагностического значения РАШ при туберкулёзе крупного рогатого скота.

Материал диссертации долонены на Ш Республиканской научно-практической конференции молодых учёных и специалистов (г.Алматы, 1991 г.), I Международной конференции по аграрным проблемам (г.Алматы, 1993 г.).

Практическая ценность работы. Применение РАШ в качестве дополнительного к аллергической внутрикожной пробе метода позволяет выявить инфицированных животных, нереагирую'дих на туберкулин, и тем самым, способствует более ускоренному оздоровлению хозяйств от туберкулёза. Разработана "Методическая рекомендация по постановке и учёту РАЖ при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота".

Внедрение результатов исследований. С применением РАН в качестве дополнительного диагностического метода оздоровлены от туберкулёза крупного рогатого скота колхоз им.Чапаева Туркестанского района Юкно-Казахстанской области и совхоз "Колутон-ский" Астраханского района Акмолинской области. Производственное испытание метода проведено в условиях 14 хозяйств 7 областей республики Казахстан.

На защиту выносятся:

1. Методика постановки и учёта результатов РАШ для диагностики туберкулёза крупного рогатого скота.

2. Результаты испытания диагностического значения РАШ при туберкулёзе крупного рогатого скота.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 4 работы, подготовлена I методическая рекомендация.

Объём и структура дгссептацкг. Работа изложена 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов, собственных '/сследованпй, заключения, выводов, предложения для практики, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 17 таблицами. Список литературы яключает 117 наименований, в том числе 36 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛ M МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 1990-93 г.г. на кафедре эпизоотологии Алматинского зооветеринарного института, в ветеринарных лабораториях и хозяйствах Ютло-Каоахстанской, Восточно-Казахстанской, Талды.сорганской, Алматинской, Западно-Казахстанской, КостанаЯ-ской и Акмолинской областей.

Материал для исследований получен от крупного рогатого скота из неблагополучных и благополучных хозяйств, при убое тшвот-

ных на мясокомбинатах, из пунктов временной передержки больного туберкулёзом скота. Всего исследовано на туберкулёз по РАЖ и аллергическим методом 6249 животных, в.т.ч. - 3923 из неблагополучных хозяйств, 250 - из пункта временной перечеркни, 2326 -- из благополучных хозяйств. Диагностическому убою подвергнуто 49 коров. Для постановки биологической пробы использовано 34 морские свинки.

Диагностические исследования на туберкулёз: внутрикожную аллергическую пробу с туберкулином ПЦЦ для млекопитающих, симультанную пробу с сухим очищенным комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (KAM) и видоспецифическим туберкулином, бактериологические исследования проводили согласно "Наставлению по диагностике туберкулёза чивотных, утверждённому ГУВ Госагропро-ма СССР от 25 февраля 1936 г. Для выделения чистой культуры возбудителя использовали среды Левенштейна-Иенсена и Гельберга. Патологический материал ог убитых животных подвергали обработке по методам Гона, Левенштейна-Сумиоши, Аликаевой. •

При бактериологическом исследовании проводили обычную бактериоскопию мазков, окрашенных по методу Циля-Нильсена.

Перед постановкой биологической пробы морских свинок проверяли на туберкулёз введением 25 единиц туберкулина для млекопитающих. Заражённых животных содержали до 3 месяцев, результаты учитывали по общепринятой методике.

Статистическая обработка результатов серологических исследований проводилась, по методике Т.С.Сайдулдина (1931).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Разработка отдельных параметров методики постановки и учёта РАШ

Методика постановки и учёта РАИК разработана Т.С.Сайдулдикым

(1931) применительно для диагностики су-ауру верблюдов и бруцеллёза людей и крупного рогатого скота. Для обнаружения туберкулёзных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота в качестве исходной использовалась методика постановки реакции на бруцеллёз.

Б качестве лимитирующего фактора в РАЖ нами были испытаны 3 варианта конглютинирующей сыворотки: с инактивированной системой пропердина и стабилизированная сернокислым магнием (I вариант); с активной пропердиновой системой и имеющая в своём составе уксуснокислый натрий в качестве стабилизатора (П вариант); с инактивированной системой пропердина и содержали уксуснокислый натрий (Ы вариант). I' вариант препарата оказался непригодным в РАШ. В опыте со П и Ш вариантами конглютинирую ;ей сыворотки средние титры антител в испытуемых сыворотках составили, соответственно, 1:13(+11,9^-13,03) и 1:0(+14,93;-13,0£). Разница между этими показателями статистически достоверна (Р<. 0,02). Исходя из полученных результатов, мы выбрали конглютинирукщую сыворотку с активной пропердиновой системой и содер-ка'дую уксуснокислый натрий в качестве стабилизатора (П вариант), как наиболее эффективную в РАЖ.

Для определения оптимальных концентраций борной кислоты (консервант) и уксуснокислого натрия (стабилизатор) в составе сухой конглютинируючей сыворотки для РАШ были испытаны следующие варианты этого препарата: содержащая 2% борной кислоты; 4% борной кислоты; борной кислоты и уксуснокислого натрия; 4% борной кислоты и о% уксуснокислого натрия. Средние титрьг туберкулезных антител в Ю позитивных сыворотках при использовании двух первых вариантов конглютинирукщей сыворотки, содеп'-ацих, соответственно, 2/9 и 4% борной кислоты, были одинаковыми и.составили - 1:7

(+23,93;~24,8&). В РАЖ с конглютинирукцей сывороткой, содерка-щей кроме борной кислоты (2?. и 4'">), ещё и уксуснокислого натрия, этот показатель равнялся 1:Ю(+32,9^;-24,Г$). Разница меч-.ду показателями РАЖ с двумя первыми и_двумя последними вариантами конглютинирую'цей сыворотки оказалась существенной (Р<0,05). Для использования в РАЖ на туберкулёз мы выбрали конглютинирукгцую сыворотку, стабилизированную уксусно-кислого натрия и законсервированную борной кислоты.

Титровать конглютичу.'пуюх',о сыворотку для РАЖ в пр'/сутствг-ч туберкулина для млехопитаючрх из-за его ачтнкомплеме; парных свойств оказалось невозможным. Нами было решено проводить титрование этого компонента без антигена.'

За титр конглютинирую'цей сыворотки принимали её наименьпее значение, обуславливаюцее полную конгдютинацню эритроцитов.

Так как в отсутствие антигена титр комплемента бывает выше, чем в его присутствии, то необходимо было определить рабочий титр конглюткнирующей сыворотки в РАЖ. Для этого провели специальный опыт с Ю позитивными сыворотками крови от больных туберкулёзом животных. Конглютинирую:цую сыворотку в реакцию брали в титре установленном опытны!.! путём (предельный титр), а также с надбавками к этому титру, соответственно, 0,05 мл; 0,10 мл; 0,15 мл. Конглю-тинирую'дая сыворотка, использованная в РАЖ по титру без надбавки, не обеспечивала высокой чувствительности метода. Средний титр иммунных сывороток в РАЖ с надбавками к титру конглютинкрую^ей сыворотки (0,05 мл; 0,10 мл; 0,15 мл) был одинаков - 1:9(+32,9л; -24,8^), тогда как в опыте с препаратом, использованным по титру без падбавк;* - 1:51+23,Р?.;-13,7Я). Разница мет.цу этил:: показателями статист/чески достоверна (Р<0,05).

Экспериментально установлено, что тепловая инактивация пепы-

туемой сыворотки значительно сннто'ет чувствительность РАЖ. Кроме этого, высокие температуры (65°С и выше) случат причиной появления самозадерячк реакции в контроле без антигена..Опыт проводили на позитивных, сомнительных и отрицательных в РАЖ на туберкулёз сыворотках крови крупного рогатого скота. РАЖ ставили в 5 вариантах: без инактивации испытуемой сыворотки; с инактивацией при 59-60°С; 61-62°С; 63-64°С; 65-бб°С. Лучший результат получен в опыте без инактивации, где средний титр специфических антител составил I:9(+32,9^;-24,8?5), тогда как при 59-бО°С получен титр 1:5(+23,1%;-18,7£). Разница между этими показателями статистически достоверна (Р<0,05). Исходя из результатов проведённого эксперимента, мы сочли целесообразным не проводить тепловую инактивацию испытуемых сывороток при постановке РАЖ на туберкулёз.

Б качестве антигена испытали туберкулин ПЦЦ для млекопитающих. В опыте использовали 30 позитивных в РАЖ сывороток крови от больных туберкулёзом коров. С целью определения оптимальной концентрации антигена, наиболее полно выявляющей специфические антитела при строгой специфичности полученных результатов, был применён метод шахматного титрования. Туберкулин в РАЖ взял:; в разведениях 1:5; 1:6; 1:7; 1:0; 1:9; 1:10; 1:15; 1:20; 1:25. Смесь иммунной.сыворотки, антигена, копглютипируючей сывпрстки и индикаторной системы после выемки из бани выдергивали при комнатной температуре 11-18 часов, в каждую пробирку вносили 0,05 мл трилона "Б" и энергично встряхивали.Учёт результатов проводили по степени остаточной конглютинации.

С разведениями туберкулина 1:5-1:7 туберкулёзные антитела обнаружены в 8 сыворотках в титре 1:5, а в Ю пробах - в титрах 1:10 и 1:20 и в двух случаях в титре 1:40. Средние титры антител с этими разведениями антигена составили I:Щ+9,3"?-;-8,5?).

С разведением туберкулина 1:8 у?:е б гшунных сывороток реагировали в титре 1:40, а средний титр антител составил 1:13(+9,3^; -8,К?). С разведением антигена 1:9 получен средний титр 1:15 (+9,3^;-8,5^).. Наиболее высокий средний татр - 1:18(-^,3^;-8,5Г,), получен в опыте с разведением туберкулина 1:10. 4 сыворотки реагировали в титре 1:5, 3- в титре .1:10, 6 - в титре 1:20 • 12 - в титре 1:40. Разница между тмтрами антител, полученными с двумя последними концентрациями антигена (1:9 и 1:Ю), оказалась статистически в низкой степени достоверной (Р=0,05). С рабочим титрам туберкулина ГЩЦ 1:5 получен средний титр антител в РАШ 1:7 (+5,7£У-5Д"?). При разведении антигена 1:20 среднмй титр антител составил всего 1:5(+5,7^;-5,4^). Из полученных данных следует, что в разведении 1:Ю туберкулин проявляет наивысшую активность в РАШ. При рабочем титре антигена 1:15 и выше, происходит снижение титров антител в испытуемых сыворотках. Разница между показателями РАЖ с разведениями туберкулина 1:10 и 1:15 оказалась в высо'кой степени достоверной (Р<0,01). На основании результатов проведённого опыта, в РАЖ в качестве рабочего титра туберкулина выбрано его разведение 1:10, что соответствует 5000 ТЕ/мл.

Концентрация гемолизина в индикаторной системе таеде существенно влияет на специфичность и чувствительность РАЖ. По этой причине в специальном опыте определяли оптимальное количество этого препарата. Индикаторную систему готовили путём смешивания 2%-ной взвеси эритроцитов барана и-кроличьей гемолитической сыворотки в двукратном, трёхкратном, четырёхкратном и пятикратном гемолитических титрах. Точную концентрацию .взвеси эритроцитов определяли фотометрированием на фотоэлектрокалориметре;. (£ЭК), используя кривую показателя оптической плотности гемолизирован-

них эритроцитов (2.11.1{асымов,1900). Средний титр антител в РЛИК с двойной литической дозой гемблизина составил ItV^S.Ify-lB.Ti). При использовании гемолитической сыворотки в утроенном тетре получен средний титр 1:18(132,9ri;-24,8r5). Статистически разница меяду зтгмк показателями оказалась достоверной (Р<0,02). Лучший результат, с точки зрения специфичности и чувствительности., получен в опыте с четырёхкратным титром гемолизина. Б этом случае средний титр антител составил 1:2б(+23,1^;-18,7^), а в контроле без антигена конглюткнат полностью распадался под действием трилона.Разница меаду средними титрами РАИК с утроенной и четырёхкратной лктической дозой гемолизина статистически недостоверна (Р?0,05). С пятикратной дозой гемолитической сыворотки во всех случаях произошла самозадержка реакции в контролях без антигена при среднем титре антител I:43(+23,I$;-I8,7£). Таким образом, гемолизин в двойном гемолитическом титре не обеспечивает высокуи чувствительность испытуемого метода. Пятикратная же доза этого препарара отрицательно влияет на специфичность реакции. Наиболее эффективной оказалась четырёхкратная доза гемолизина, которая обеспечивала выявление антител в-.более высоких" титрах.

Необходимо было также определить время внесения трилона "Б", то есть, начала II фазы реакции. По данным литературы на агрегирование комплексов антиген-антитело-комгиемент-конглвтинин-эритроцит--гемолизин затрачивается примерно 9-12 часов. Нами установлено, что конглютинацня наступает быстрее при температуре 22...25°С.При I4...I7°C конглютинацня несколько затягивалась во рремени до 16... ...19 часов. Исходя из оптимальной продолжительности I фазы реакции, решили вносить трилон после выдерживания реакции при комнатной температуре в течение 14-18 часов.

В специальном опыте дня уточнения оптимальной дозы трилона"Б" испытан его I^-ный раствор в обьёме 0,025, 0,05, 0,075 и 0,1 мл.

Наийблес высокие титры антител выявлены с двумя первыми (0,025 и 0,05 мл) дозами трилона, с которыми спедние показатели составили соответственно, 1:17(+32,9^;-?;1,{Г.) и I:I3C+32,. Разница между этими показателями оказалась статистически недостоверной (Р>0,05). При этом с дозой 0,025 мл в 4 случаях получены неспеци-фпческие реакции в виде остаточной конглютинации в контроле без антигена и в разведении негативной сыворотки 1:5 с антигеном.Разница между средники титрами P/uiX с дозами трилона 0,05 и 0,075 мл Ц:7;+23,1^;-1сЗ,7*) оказалась в высокой степени достоверной (Р< 0,01), Исходя из этих данных, доза трилона "Б" 0,05 мл признана наиболее оптимальной.

Но результатам проведённых исследований нами предложена методика постановки РА.К при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота, схема которой приведена в таблице I.

Учёт результатов реакции ведётся по 4-бальной системе:

минус - полный распад конглгатината с образованием гомогенной ' EjuecH свобод!гых эритроцитов;

1 крест - слг'бо заметная зернистость эритроцитов на фене свободных клеток, просветление жидкости незначительное;

2 креста - хорошо заметная зернистость скученных эритроцитов с заметным просветлением жидкости;

3 креста - крупная зернистость скученных эритроцитов со зна-ч/тольным или полным просветлением жидкости.

Диагностическая оценка результатов реакции:

- положительным результатом реакции считают выраженную остаточную конглютинацию (++,+++) в разведении сыворотки крови 1:5 и слабую остаточную конглютинацию (+) в разведениях 1:5 и 1:10.

- за .сомнительны" результат реакции принимают слабую остаточную конглютиняц;го С-О в разведении 1:5 ислытуемсй сыаоротки.

- отсутствие остаточной конглютинацни в разведении сыворотки крсви 1:5 принимают за отр!щательннй результат реакции.

Таблица I

Схема постановки РАШ для диагностики туберкулёза крупного рогатого скота

Компоненты 'Пои массовом 'Ппи повтооном нсслед^-

» ' " о

реакции ^исследовании в ,ванпи в 3 разведениях

!1 разведении | ^ | £ { з

Испытуемая сыворотка, мл 0,05 0,05 0,05 0,025

Физиологический раствор,

мл - 0,20 0,45 0,20 0,225

Антиген в-рабочем разведении, мл 0,25 - 0,25 0,25

Кэнглютинкрущая сыворотка в рабочем разведении, мл 0,25 0,25 0,25 0,25

Водяная баня, 37°С - 30 минут

Индикаторная система, мл 0,25 0,25 0,25 0,25

Водяная баня, 37°С - I чап

При комнатной температуре - 14-18 часов

ТрИЛОН'Ъ" , 1/о—ный

раствор, мл . .0,05 • 0,05 0,05 0,05

Учёт результатов реакции в крестах по степени остаточной конглютинации

ИСПЫТАНИЕ РАДО ДЛЯ ДЖНОСТШШ ТУБЕРКУЛЁЗА КРУШОГО РОГАТОГО СКОТА

Основываясь на результатах исследований по разработке и уточнению отдельных параметров методикк постановки и учёта' РАИС, мы провели производственное испытание этого метода при диагностике туберкулёза крупного .р&гатого скота. Для этого аллергически и в

Рау)К были исследованы квотные из хозяйств с различней эпизоотической ситуацией по туберкулёзу. Крупный рогатый скот, реагировавший хотя бы по одному кз тестов, убивали с целью проведения пато-логоанатомического и бактериологического исследований. Такче при оздоровлении неблагополучного гурта определена динамика выяления больных животных по РАЖ и внутрикочной пробе.

Сравнительное испытание РАЙИ и аллергического метода проводилось в 9 неблагополучных по туберкулёзу хозяйствах б областей. При анализе результатов аллергического и серологического исследований реагирующих животных разделили на 3 группы:

- первая группа - реагирующие на туберкулин при отрицательных результатах РАИК;

- вторая группа - реагируюцие одновременно по РАЖ и аллергически;

- третья группа - реагирую цие только по РАЩ;:

За суммарные результаты аллергического и серологического методов принимали обдее число животных, признанных больными хотя бы по одному из диагностических тестов. Результаты сравнительного испытания РАЖ и туберкулиновой пробы приведены в таблице 2.

Б совхозе "Притобольский" при сероаллергическом- исследовании 624 коров туберкулёз диагностирован у 142(22,75). Положительные результаты РАШ и внутрикоадого теста совпали в 14(2,2£) случаях, только на туберкулин реагировали 44(7,0£), по РАШ - 04(11,4&) животных. .

Сыворотки крови 1ь0 коров совхоза "Талгарский" были исследованы по РА11К после удаления из гурта животных с реакциями на специфический аллерг.ен. В 26(14,4?,) случаях обнаружены антитела в диагностических титрах.

В совхозе "Байчегнрсчий" аллергическим методом заболевание

Таблица 2.

Сравнительные результаты РАЖ и аллергического метода при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота

Наименование

Число

Выявлено реагируклцпх:

хозяйств ;исслед. ! I гтэуппа ! П группа 111 группа ! всего

I

¡животных!число ! % ! ч"сло ! п ! число ! % ! число

с-з "Притобольский" 624 -и 7,0 1-1 2,2 , • 84 13,4 112 22,7

с-з -Талгарский" 160 - - - - 2и 14, 14,1

с-з "Байчегирский" 137 13 10,09 10 7,Л а 15,3 46 33,5

с-з "Колутонский" 712 88 12,3 10 1,4 89 12,5 187 2о,2

ОПХ "Ьаречное" 316 3 0,9 - 57 18,0 60 16,9

к-з им.Чапаева 1614 20 1,2 18 1Д 43 2,6 81 5,0

уч.хоз им.Гагарина 33 27 81,8 6 18,2 - - 33 100,0

с-з "Ьысокогорский" 301 16 5,3 7 2,3 16 - 5,3 39 12,9

с-э "¡¿айкольский" 6 5 83,3 I 16,6 - - 6 100,0

Итого: 3923 218 5,5 66 1,7 336 8,5 620 15,8

установлено у 15(10,9Й) коров, по РАЖ положительные результаты получены с сывороткаии крови 21(15,3",) животного. Из них в Ю (7,2ч) случаях результаты совпали. Всего, тем или иным методом, выделено 46(33,5%) больных животных. .

Б 011Х "Заречное" исследовано 316 коров, из которых 3(0,97.) реагировали на туберкулин, а 57(18,0^) - по РАЖ.

В 1990-1991 г.г. в колхозе им.Чапаева проведено 8 сероаллер-гических исследований дойного гурта коров. Обоим методами в совокупности выявлено 77(4,ГЙ) больных туберкулёзом животных, среди них только по РАЖ реагировали 43(2,6?), аллергически - 16 (1,0%). Положительные результаты двух тестов совпали в 18(1,Ю случаях.

У 301 коровы из совхоза "Высокогорский" на введение туберкулина положительная реакция получена у 16(5,3,о) при отсутствии антител в крови. Результаты РАШ были положительными при отсутствии внутрикокной реакции с сыворотками 16(5,3^) животных. 7(".,3$) коров реагировали одновременно по двум тестам. Всего тубепсулёз диагностирован у 39(12,9%) «иьотных.

В учхозе им.Гагарина все 33 коровы реагировали на введение аллергена. По РАШ антитела в диагностических титрах обнару^ны лишь в 6(18,2%) случаях.

В совхозе "Майкольский" также из 6 коров, реагирукхцкс на туберкулин лишь в К16,Г,) случае получен положительный результат по РАЖ.

В совхозе "Колутонский"■двумя методами проверено 712 животных. Внутрикохной пробой выявлено 88(12,3"',), гю Рл1Е{ - ¿9(12,5/') животных. Одновременно'по обоим тестам реагировало 10(1,4)5) коров. Всего, туберкулёз диагностирован в 187(26,2') случаях.

Таким образом в 9 неблагополучных хозяйствах из исследован-

них 3923 животных, положительные результаты PAiK и туберкулиновой пробы совпали - 'у 66(1,71). Только аллергически реагировало - 2lo(5,5;J), антитела в диагностических титрах при отсутствии . внутрикожной реакции выявлены у 336(8,бй). Всего туберкулёз диагностирован у 620(15,6»).

По нашим данным среди больного туберкулёзом крупного рогатого скота количество давотных, реагирующих по обоим тестам, весь-ка незначительно и составляет около 1(У?. В подавляющем большинстве (примерно 90?)) случаев туберкулёз удаётся диагностировать только одним из двух методов, при чём положительные результаты РАЖ (третья группа) более чем в 1,5 раза поевыиавт аналогичный показатель внутрикожного теста (первая группа).

Ори исследовании по РАШ сывороток крови 2326 животных из 5 благополучных по туберкулёзу хозяйств, в двух хозяйствах по всем гуртам был получен отрицательный результат. В колхозе "Родина" из 1022 животных реагировало 6 в титре 1:5. В колхозе им.Ленина 3 коровы реагировали с титром 1:5 а одна с титром 1:10. 5 из 574 животных совхоза им.Атнгельды реагировали с титром антител 1:5. Частота таких неспецифических реакций у крупного рогатого скота из благополучных хозяйств составила 0,6%.

С целью оздоровления от туберкулёза, дойный гурт молочно-то-варной фермы колхоза им.Чапаева Туркестанского района ККно-Ка-захстанской области был- подвергнут систематическим исследованиям по РАЖ и аллергическим методом. Результаты исследований представ лени в. виде таблицы 3. Как и в ппедыдуцей таблице, реагирую: дие животные разделены на 3 группы.

Первое исследование выявило'31(15,3*> корову, из которых 9(4,4£). реагировали аллергически, 16(7,91) по РАЖ и 6(2,9^) одновременно по обоим методам. При втором исследовании 3(1,5*)

Таблица 3

Результаты систематических исследований животных по РАЖ и туберкулиновой пробе

лопгкеск.

» I

'Количество

Выявлено реагирующих:

исследований;исследований}животных I ! ; I группа ! П группа ! Ш гоуппа ! всего

'число ! % !число ! % ! число! г* !число 7«

I ■ 31.07.90 • 202 9 4,4 6 2,9 16 7,9 31 15,3

2 09.09.90 200 3 • 1,5 7 3,5 14 7,0 24 12,0

3 18.11.90 201 3 1,5 4 2,0 8 4,0 15 7,4

- 4 10.12.90 202 I 0,5' I 0,5 5 2,5 7 3,5

5 02.02.91 200 - - - - - - -

6 06.03.91 202 - - - - - - -

7 14.06.91 203 - - - - - -

0 07.09.91 204 - - - - - - -

к т о го: _ 16 18 _ 43 — 77 _

коровы реагировали на туберкулин, 14(7,СК) - по РАШ, 7(3,ей) -по двум тестам. Всего выявлено 24(12,0^) животных. Третьим и четвёртым исследованиями заболевание диагностировано, соответственно, у 15(7,4^) и 7(3,4^) коров, из них: внутрико?;ной пробой - ЗЦ.5Я) и К0,Ш), по РАЖ - 8(4,($) и 5(2,53), обоими методами - 4(2,0$) и 1(0,5%). Двумя последующими проверками (5 и 6) больных животных не выявлено. А отрицательные результаты двукратных (7 и d) контрольных исследований дали основания считать ферму оздоровленной.

Дяя уточнения диагноза на туберкулёз, установленного аллергическим методом и по РАЖ, 49 коров были подвергнуты убою с последующим ■патологоанатомическим и бактериологическим исследованиями. Результаты суммированы в-таблице 4. Для удобства сравнительного анализа полученных дан!шх животные были разделены на 3 группы. Первую группу составили 17 животных,' реагировавших только по туберкулиновой пробе. Из них при послеубойном осмотре характерные для болезни изменения обнаружены лишь у 2(11,7^). У этих яе животных и е^ё у 6, всего у 8(47,03), диагноз подтверждён результатами бактериологического исследования.

У животных, реагировавших по обоим методам (II группа), специфические для туберкулёза изменения обнаружены в 45Й случаев. Бактериологическое исследование в 19(95,0%) случаях выявило наличие возбудителя в патологическом материале.

Третью группу составили 12 коров, реагировавших только по РАЖ. У 4(33,3$) из них на вскрытии выявлены специфические для туберкулёза поражения. Бактериологические исследования в 10(83,3"^) случаях дали положительный результат.

Следовательно, диагноз на туберкулёз, установленный по РАЖ ■ при отсутствии реакции на аллерген, послеубойными исследованиями

Таблица 4

Результаты датологоанатомических и бактериологических исследований

Группы ! !Число 1 | Результаты' послеубойннх исследований

животных]исследов.j пат<анато-1 ¡животных !мическкй 1 ! 1 диагноз 1 !куль-'тула I ' ■ ' био-1пооба ! ' 'все 1 ------ ,число г о пГ

I группа (ЬТП +) (РАЖ -) 17 2 8 8 8 47,0

П группа (ЬТП +) (РАИК +) 20 9 19 19 19 95,0

Ш группа (ЬТ11 -) (РАЖ +) 12 4 Ю 10 10 83,3

Итог- о: 49 15 37 37 37 75,5

Примечание: ВТП - внутрнкожная туберкулиновая проба;

(+).- положительный результат исследования; (-) - отрицательный результат исследования;

подтверждён в 83,3% случаев.

Таким образом, патологоанатомические и бактериологические исследования подтвердили диагноз, установленный аллергическим методом (1 группа + Л группа), в 59,случаев. Тогда как результаты РАЖ (Г1 группа + Ш группа) подтверждены этими же методами в 77,ЕЙ случаев. Однако наиболее высокий показатель пос-леубойных исследований - 95,0^, получен во П группе животных, реагирующих на туберкулёз одновременно в виде клеточных и гуморальных реакций.

выводы

I. Наиболее эффективной в РАШ оказалась конглютинкруюдая сыворотка с активной проперциновой системой, стабилизированная 6% уксуснокислого натрия и консервированная 4% борной кислоты.

При постановке РАЖ на туберкулёз конглютинирукгцую сыворотку следует титровать без антигена, а испытуемую сыворотку не подвергать тепловой инактивации.

3. При проведении исследований по РА/ЯС в качестве антигена можно использовать туберкулин ПЦД для млекопитающих в концентрации ЬООО ТЕ/мл.

4. Оптимальнпй концентрацией гемолизина в РАШ является его четырёхкратный гемолитический титр.

5. После I фазы РАШ, аналогичной РСШС, смесь необходимо выдергивать при комнатной температуре 14-18 ч., доза трилона -

- 0,05 мл.

6. Положительным результатом РАШ на туберкулёз следует считать остаточную конглютинадию в разведении сыворотки 1:5 и слабую остаточную конглютинацию в разведении 1:10, а сомш-тельнкм -

- слабую остаточную конглютинацию в разведении сыворотки 1:5. Отсутствие остаточной конглютинации в разведении испытуемой сыворотки 1:5 соответствует отрицательному результату.

.7. На неблагополучных по туберкулёзу фермах крупного рогатого скота по РАШ выявляется значительно больше реагирухщих животных, чем по внутрикожному тесту.

8. Несмотря на высокую чувствительность, РАШ всё яе выявляет значительную часть животных, реагирующих на туберкулин. Поэтому этот метод мояет применяться только в качестве дополнительного.

9. При массовых диагностических исследованиях в неблагополуч-

ном стаде лишь незначительная часть кивотных реагирует одновременно по РАИК и аллергически, а в подавляющем большинстве случаев диагноз устанавливается по одному из этих методов.

Ю. РАЖ является достаточно специфичным методом диагностики туберкулёза. Бактериологическое и патологоанатомическое исследования в 83,32 случаев подтвердили диагноз установленный по РАШ. Б.благополучных хозяйствах по этому методу в редких случаях (0,6$) имеют место неспецкфу.ческие реакции в низких титрах.

II. Туберкулиновая проба и серологическое исследование в. РАЖ на туберкулёз крупного рогатого скота не могут заменить, а лишь дополняют друг друга.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ ДЛЯ ПРАКТИКИ

РАЖ с туберкулином 1ЩЦ для млекопитающих предлагается в качестве дополнительного метода диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в неблагополучных по этой инфекции хозяйствах.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЫЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Пердебаев Е.А.,Сайдулдин Т.С. Применение реакции агрегирования иммунных комплексов для диагностики туберкулёза крупного рогатого скота.// Тезисы докл.Ш Респ.конф.молод.уч. и специалистов. Алматы. С.59-60. 1991 г.

. 2. Пердебаев Е.А. Реакция агрегирования иммунных комплексов при'туберкулёзе крупного рогатого скота.//Тезисы докл. I Международной конференции по аграрным проблемам. Алматы.С. . 1993г.

3. Сайдулдин Т.С., Пердебаев Е.А. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в реакции агрегирования иммунных комплексов //Мнформ.листок. Алматы. 1993 г.

4. Пердебаев Е.А. Реахция агрегирования иммунных комплексов при оздоровлении неблагополучных пе туберкулёзу крупного рогатого скота хойЯ11ств//Деп.рукопись в КаэГосИНТИ . Алматы. 1993 г.

"Сиыр кан сарысуындагы туберкулез антиденеле1)!н иммунд1 кешендердг агрегациялау веакциясымен аныстау"

/Т У Й Н I/

ЙургхзЪгген зерттеулердхц максаты сиыр туберкулез! кез1нде иммундх кешендерд1ч агсегациялау тзеакциясыныц /ИКАР/ балаулык мацызкн аныктау болды.

ИКАР-ды кою тэсмхнщ мынандай буывдары ашкталды:конглюти-ниндеупи кан сагысуын титвлеу эд1с1,оныц кутмывдагы тутзацтанды-патын жэне сактайтын цоспалащыц мелшео!,сгг цоюектиеотв атжал-ган ППЦ туберкулин1нщ жумыс титш,зерттел1нет|н цан сагысуыньщ белсендШг1И жылудыц эсешмен жоюдыц кажетс хзд1Г1,гемолизиныщ М9ляеп1,1зеакциянйч I кезецхнщ узактыгы,тшлон "Б"-нщ жумыс до-засы,туберкулез ангиденелешнщ диагностикалык титсдет« .Осы зевттеулетздщ коотындысына суйене отырып.сиырлщ тубепкулеэ1 кв-згнде ИКАР-до кою жэне нэтижеспн багалау эд:стемесх усынылды.

ИКАР жэне аллергиялык эдхстеодх салыстышалы колдану сиытэ туберкулезг бойынша эю турл1 зкаглайдагы 14 шаруашылыкта 6249 мал-да жгсггзЬци .Жануарлапдац басым кепшЪихч /90 % -ке дейхн/ кол-даннлган тесттетщ тек бхсеухне гана реакция берд1.ИКАР бойынша оц нэтиже берген малдач саны туберкулин сынамасына Караганда 1,5 еседен кеп болды. Патанатомиялык жэне бактериологиялык тексеру максатымен аушга шьвдан 49 мал сойылды.Бул зетзттеулелэ сесология-лыц веакцияныц оц нэтижесгнщ 83,3 % -ш.ал аллергиялык эдхстщ кевсеткхшхн 59,1 % -хн вастадо.Сонымен катар,сауыктырылып жаткан шаруалылыкта тубеглсулезге шалдаккан жануатзлардыц айкындалу дина-микасы аныцталды.Налпы алганда,аллергиялык ЭД1С пен ИКАР бхюхн 61Р1 алмастыра алмайды.сондыктан олатз катай лггапзхлу1 кажет. Сиыю туберкулез гиен саукцтыгалш жаткан шатзуашылы^тасда ИКАР аллергиялык тексестге косымша балау эдтс! сдгтнде усылннады.

She object of investigation is appeared definition of meaning reaction aggregation immunity complex of tuberouloaia large horned oattie.

Defined statement of method« asperate parametra RAICidireotioaa for tltre conglutination wheys, concentration of etebllire cad preserve Ingredients in his structure, working titre*PPD-tuberouline for angrmala, unsuitable of thermal inaotlvation wheys under tests, oonoentratlon of gemollain, duration and tine conclusion In the 1-st phases of the reaction, working dose of trllon "£',' diagnostic titres of tuberculosis cntybodj:. On the basis of results adopting, of experiments proposed method statement and conclusion of R&IC in tuberculosis.

Comparing investigation of EAIC end allergic teste has Bech in 14 economy with different epizootic cituation to tuberculosis in large homed cattle. Shis attached allergic method and in RAIC investigated 6245 enimaln. 49 from has been killed mlth the aim to conduct patolo-gy anatomic and bacterlologloal experimente.

It turned out that over whelming mayority of animals react only one from being uses of tests. Hunter of good result more then 1,5hig-her In such point of allergic tests, end bacteriological investigation resulte confirmed RA.IC in 83,3% cases, then as allergic method about in 59,1$ cases,Find out, dinamic also appear diseased with tubei"-cuIoeIb animals In to a healthy state economy. Conclusion :c.llcr£ic

method and RAIC ocn not charge one to ano ther, but must tc.ce pcjral-

i

lei. K.'vIC propose in guantity additional diagnostic method in to a hcalty ctute was uncuoceenfull at tuberculosis 'in large horned cattle economy.