Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммуногенные и реактогенные свойства ассоциированной трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота

ДИССЕРТАЦИЯ
Иммуногенные и реактогенные свойства ассоциированной трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота - диссертация, тема по ветеринарии
АВТОРЕФЕРАТ
Иммуногенные и реактогенные свойства ассоциированной трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота - тема автореферата по ветеринарии
Ревякина, Елена Михайловна Москва 1998 г.
Ученая степень
кандидата ветеринарных наук
ВАК РФ
16.00.03
 
 

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Иммуногенные и реактогенные свойства ассоциированной трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота

^ Ц 0 «9«

На правах рукописи

УДК 619:616.98:578 825.15:636.22/28.

РЕВЯКИНА Елена Михайловна

ИММУНОГЕННЫЕ И РЕАКТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА АССОЦИИРОВАННОЙ ТРЕХВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА-З, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ - БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1998

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота и лошадей Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Научный руководитель - Константин Павлович Юров, доктор ветеринарных наук, профессор. Оффициальные оппоненты:

- Олег Иванович Сухарев, доктор ветеринарных наук, профессор (Нач. отдела Департамента Ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации ),

- Борис Васильевич Соловьев, кандидат ветеринарных наук (ВНИИиТБП). Ведущее учреждение - Московская Государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Защита диссертации состоится года в ._/£._часов

на заседании диссертационного совета Д 020.28.01. при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко по адресу: Ю9472. Москва, Кузьминки, ВИЭВ. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. Автореферат разослан « года.

Ученый секретарь диссертационного совета - кандидат ветеринарных наук Федор Григорьевич Терешков.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Инфекционные болезни молодняка крупного рогатого скота с преимущественным поражением респираторного и желудочно-кишечного тракта широко распространены в животноводческих хозяйствах и наносят им значительный экономический ущерб.

Часто вспышки массовых заболеваний вызываются вирусами инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) к другими. Во многих случаях имеют место смешанные вирусные инфекции или осложненные вторичной бактериальной микрофлорой, которые характеризуются особенно тяжелым течением и представляют серьезную проблему для ветеринарных врачей в плане их диагностики, лечения и профилактики.

Многочисленными исследованиями показано, что в предотвращении инфекции, а также в предупреждении рецидивов и уменьшении их продолжительности существенную роль играет специфическая профилактика.

Неблагополучие большинства животноводческих хозяйств по массовым респираторным инфекциям телят обуславливает необходимость применения мер для стабилизации эпизоотической ситуации в хозяйствах. В связи с этим вопрос создания новых высокоэффективных средств борьбы с вирусными заболеваниями очень актуален.

Цель и задачи исследования Целью исследования являлось изучение эффективности ассоциированной трехвалентной вакцины против инфекцион-

ного ринотрахеита, ларагриппа-3, вирусной диареи-болезни слизистых, разработанной в лаборатории вирусологии ВИЭВ, в условиях хозяйств, неблагополучных по массовым респираторным болезням телят.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1.Выяснить роль вирусов инфекционного ринотрахеита, па-рагриппа-3, диареи в этиологии респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Тульской области.

2.Провести оценку реактогенных и иммуногенных свойств ассоциированной трехвалентной вакцины Тривак против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3,вирусной диареи крупного рогатого скота в условиях проиводственно-контролируемого опыта.

3.Разработать рабочую схему иммунизации против ИРТ, ПГ-

3, ВД-БС телят и коров в хозяйствах, неблагополучных по респираторным заболеваниям.

4.Проверить возможность использования в качестве «протектанта», способного снять возможную повышенную реакцию на прививку вирусвакцины , препарата «Байферон».

Научная новизна

В условиях естественного эпизоотического процесса, при наличии активной циркуляции возбудителей, изучена динамика иммунного ответа у телят и коров на аттенуиро-ванные штаммы вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС при одновременном введении в виде ассоциированной вакцины.

Установлено, что при оптимальном соотношении доз вак-

цинных вирусов обеспечивается формирование сбалансированного иммунного ответа ко всем трем возбудителям, при этом отсутствуют отрицательные явления негенетического взаимодействия вирусов (интерференция, экзальтация, конкуренция антигенов). Показано, что глубоко аттенуирован-ный вирус ИРТ - интерфероноген («Байферон») при его аппликации на слизистую оболочку верхних дыхательных путей не оказывает отрицательного воздействия на формирование иммунитета у телят ни к одному вакцинному штамму после прививки им вакцины.

Практическая значимость

В производственно-контролируемых опытах изучена ре-актогенность и иммуногенная активность ассоциированной вакцины против основных возбудителей массовых респираторных болезней крупного рогатого скота: инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи-болезни слизистых .

Установлено, что вакцина слабореактогенна и иммуно-генна для стельных коров и новорожденных телят.

Разработана рабочая схема вакцинации в хозяйствах с острым течением инфекции и наличием естественного иммунного фона к указанным возбудителям, отрицательно влияю- . щим на формирование активного поствакцинального иммунитета.

Установлено, что глубокоаттенуированный штамм вируса ИРТ («Байферон») может быть использован в качестве имму-нопротектанта при вакцинации новорожденных телят трехва-

лентной вакциной.

Материалы диссертации использованы для разработки нормативно-технической документации на промышленное производство вакцины.

Публикация результатов исследований

По теме диссертации опубликованы две научные статьи.

Апробация работы

Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на совещании сотрудников отдела вирусологии ВИЭВ, Ученом совете ВИЭВ, научной конференции, посвященной 100-летию ВИЭВ.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 12 8 страницах машинописного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, список литературы, приложение. Список литературы содержит 18 9 источников, 62 отечественных и 127 зарубежных

Работа иллюстрирована 14 таблицами и 10 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работа выполнена в отделе вирусологии ВИЭВ и в хозяйствах Тульской области, неблагополучных по респираторным заболеваниям КРС.

Вирусы

Для исследований использовали вирус инфекционного ринотрахеита штамм ТК-А ВИЭВ, вирус диареи-болезни ели зистых штамм ВК-1В1 №36,вирус парагриппа-3 штамм ТА.

Культуры клеток

Для работы применяли перевиваемые линии культур клеток почки теленка МДБК, легких эмбрионов коров ЛЭК,сердца теленка СТ.

Подопытные животные

В опытах использовали 40 телят 2-5-дневного возраста, коров со сроком стельности 5,5-6,5 месяцев, содержащихся в хозяйстве, неблагополучном по респираторным заболеваниям молодняка крупного рогатого скота.

Реактогенные свойства вакцины изучали путем введения препарата телятам различного возраста. Клиническую реакцию учитывали путем ежедневного двукратного измерения температуры тела подопытных животных, осмотром-видимых слизистых оболочек носа, конъюктивы, влагалища, наличия

выделений и их характера, кашля, диареи.

Динамику антителообразования к вирусам ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 учитывали по нарастанию титра гуморальных антител в пробах сыворотки крови животных, полученных в разные сроки после иммунизации.

Оценку иммуногенных свойств вакцины проводили по результатам иммунного ответа в серологических реакциях и учету заболеваемости в подопытных (вакцинированных) и контрольных группах.

Серологические реакции

Уровень специфических антител в сыворотке крови животных определяли в реакции нейтрализации в культуре клеток к вирусам ИРТ и ВД-БС, а к вирусу ПГ-3 в реакции торможения гемагглютинации.

Реакцию нейтрализации ставили в пробирках методом двукратного разведения сыворотки с постоянной дозой вируса (10000 ТЦД 50/мл).

Реакцию торможения гемагглютинации проводили общепринятым методом.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение эпизоотической ситуации по массовым респираторным заболеваниям телят в Тульской области.

Массовые респираторные болезни крупного рогатого скота в Тульской области наносят животноводству значительный экономический ущерб. Ситуация по этим заболеваниям усугубляется условиями содержания и кормления, не

соответствующими зоогигиеническим нормам. Стельные коровы получают неполноценный рацион по белку, фосфору, кальцию, микроэлементам, витаминам. Рождающиеся телята имеют низкую естественную резистентность и недостаточную иммунологическую реактивность.

Вопрос достоверной лабораторной диагностики респираторных инфекций молодняка, выявление ведущего звена в сложном по этиологической структуре комплексе возбудителей имеет решающее.значение в проведении мероприятий по борьбе с этими болезнями.

Традиционное отношение практикующих ветеринарных врачей к респираторным инфекциям прежде всего как к заболеваниям бактериальной природы, возбудителями которых являются пастереллы, сальмонеллы, диплококки и другие, недостаточная техническая оснащенность ветеринарных лабораторий, не всегда имеющих возможность проводить исследования на вирусные инфекции, объясняет сложившееся положение, в силу которого самым распространенным диагнозом в период вспышек респираторных болезней у телят является сальмонеллез или пастереллез.

Анализируя полученные данные обобщенных результатов лабораторных диагностических исследований в хозяйствах области и эффективности противоэпизоотических мероприятий, которые основывались на вакцинопрофилактике бактериальных инфекций (пастереллеза, сальмонеллеза, дипло-кокковой инфекции), заболеваемости и падежа телят, сделан вывод, что объем вакцинации против сальмонеллеза и диплококковой инфекции в 1993 году и в последующие годы

в малой степени коррелирует с заболеваемостью телят респираторными инфекциями. Некоторая обратная зависимость отмечается между объемом вакцинации против пастереллеза и количеством заболевших телят. Однако, в целом, можно считать, что проводившаяся иммунизация против сальмонел-леза, пастереллеза и диплококковой инфекции не обеспечивала в полном объеме снижения заболеваемости молодняка крупного рогатого скота.

Можно также сделать вывод, что при проведении мероприятий против массовых респираторных болезней телят не достаточно уделялось внимания роли других возбудителей и не предпринимались адекватные меры по специфической профилактике, или вакцинация проводилась в малом объеме, таких вирусных инфекций как ИРТ, ПГ-3, ВД-БС.

Изучение реактогенных свойств вирусвакцины

«Тривак»

В работе использовали опытно-промышленную партию ассоциированной трехвалентной вакцины против ИРТ, ПГ-3, ВД-БС. Основными критериями изучения являлись иммуноген-ные и реактогенные свойства вакцины в конкретных условиях рядового хозяйства.

При оценке реактогенности вирусвакцины изучали местную и общую реакции на введение препарата животным различных возрастных групп (коровам со сроком стельности 5,5-6,5 мес., новорожденным телятам и телятам 13-15-дневного возраста).

Клинически на прививку вакцины реагировали три ново-

рожденных теленка (из десяти иммунизированных). У них наблюдали повышение температуры до 40°С, слезотечение, гиперемию и отечность конъюктивы. Признаки исчезли через три дня без ветеринарного вмешательства. Местная реакция на прививку практически отсутствовала.

У стельных коров и телят 13-15-дневного возраста выраженных симптомов повышенной реакции на введение препарата не зарегестрировали.

Таким образом, проведенные исследования показали безвредность вирусвакцины «Тривак» для коров и телят различного возраста. Отмеченная у новорожденных телят реакция не превышает принятые для вирусвакцин показатели.

Гуморальный ответ у животных, иммунизированных вакциной «Тривак»

Уровень гуморальных антител у животных к вирусам ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 после иммунизации определяли в реакциях торможения гемагглютинации и нейтрализации. Исследовали пробы сыворотки крови ,взятой в разные сроки: в момент вакцинации и ревакцинации, через 10, 20 дней после ревакцинации и через 60 дней после первого введения вакцины.

Иммунизация коров

Двадцать коров со сроком стельности 5,'5-6,5 месяцев вакцинировали вакциной «Тривак» двукратно с интервалом 14 дней. В момент вакцинации и ревакцинации у коров об-

наруживали вируснейтрализующие антитела к возбудителям ИРТ в титре 3,93+0,44 - 4,0+0,44 1од2, к ВД-БС 4,01±0,34 1од2 и антигемагглютинины к вирусу ПГ-3 в титре 5,9±0,37 1од2.

Установлено, что у 90% телят, рожденных от этих коров, в крови также содержатся антитела к вирусу ИРТ в титре 1:4-1:32, у 95% к вирусу диареи в титре 1:8-1:32, у 100% к вирусу ПГ-3 в титре 1:64-1:128.

Следует отметить, что титр колостральных антител у 2-3-дневных телят к вирусам ИРТ, ВД-БС был на уровне, выявленном в сыворотке крови коров-матерей, к вирусу ПГ-3 несколько выше материнского.

Колостральный иммунитет к вирусам ИРТ, ВД-БС наблюдали в течении двух месяцев, отмечая постепенное снижение уровня антител: к вирусу ИРТ он уменьшился от 2,877±1,209 1од2 до 1,930±1,760 1од2, к вирусу ВД-БС от 3,73±0,38 1од2 до 1,64±1,6 1од2. К вирусу ПГ-3 колост-ральные антитела на 60-й день исследования обнаружены не были.

Иммунный ответ животных к вирусу ИРТ после прививки «Тривак»

Иммунизация новорожденных телят

Новорожденных телят, имеющих относительно высокий колостральный иммунитет к вирусам ИРТ, ВД-БС,ПГ-3, иммунизировали в возрасте 2-3 дней вирусвакциной, через 14 дней провели ревакцинацию.

и

Рис. £ .Динамика вируснейтрализуюших антител к вирусу ИРТ в сыворотке крови новорожденных телят после иммунизации вакциной "Тривак ВИЭВ"

Титр антител в log 2

1 - опыт

2 - контроль

длительность

наблюдения,

сутки

О 10 20 ЭО 40 50 €0

Рис. с .Динамика вируснейтрализуюших антител к вирусу ИРТ в сыворотке крови телят. после сочетанноп, применении "Байферона" и вакцины "Тривак ВИЭВ"

Титр 5

антител в log 2

I I I I | I I I Г Р I | | | М I | I I I I | I I I )

О 10 20 30 40 50 60

1 - опыт

2 - контроль

длительность

наблюдения,

сутки

Динамика гуморальных антител к вирусу ИРТ у телят после прививки отражена на рисунке 1. Анализируя рисунок, можно отметить сероконверсию у иммунизированных животных. Максимальное повышение уровня поствакцинальных антител (на 1,91 1од2) наблюдали через 34 дня после прививки, титр вируснейтрализутоцих антител составил 4,985±0,65 1од2 и сохранился на том же уровне через два месяца после иммунизации животных.

У телят контрольной группы, которых не вакцинировали, отмечали снижение титра колостральных антител, к двухмесячному возрасту он составил 1,93±1,7б 1од2, вследствие переболевания четырех телят ИРТ.

Сочетанное применение «Байферона» и «Тривак» на новорожденных телятах

Несмотря на то, что в предварительных опытах была установлена низкая реактогенность вакцины «Тривак» для телят, мы считали необходимым изыскать способ предупреждения возможной отрицательной реакции на прививку ассоциированной трехвалентной вакцины у телят раннего возраста. С этой целью использовали коммерческий препарат «Байферон», представляющий собой живой культуральный вирус ИРТ (Штрауб), подвергнутый значительной степени ат-тенуации, обладающий при интраназальной аппликации выраженным интерфероногенным свойством. При этом, нас волновала возможность ингибирования иммунного ответа при последующей прививке вирусвакцины.

Исследования проводили на телятах 3-5-дневного воз-

раста. После обработки «Байфероном», путем распыления в носовую полость, животные в первые недели наблюдения оставались здоровыми, состояние их было удовлетворительное.

Через десять дней после применения интерфероногена телят иммунизировали вирусвакциной. Отрицательной реакции на введение «Тривак.» у телят не наблюдали.

Сравнительные исследования сыворотки крови телят после прививки «Тривак» с предварительной обработкой «Вайфероном» и без нее существенных различий не выявили. Следовательно, согласно принятой схеме иммунизации, «Байферон» не влияет на приживляемость вакцинных вирусов и не снижает иммунной реакции организма на вирус ИРТ.

Иммунный ответ у телят к вирусу ИРТ после сочетанно-го применения интерфероногена и вирусвакцины отражен на рис.2.

На рисунке видно, что повышение уровня гуморальных антител наблюдали через 10 дней после ревакцинации (от 1,56+1,45 1од2 до 4,083±1,110 1од2 ). Максимальную серо-конверсию отмечали через 34 дня после первого введения препарата, титр антител увеличился на 3,36 1од2 и сохранился на том же уровне через два месяца после прививки.

У телят контрольной группы титр вируснейтрализующих антител на протяжении срока наблюдения.оставался примерно одинаковым, незначительно отличаясь в разные сроки исследования.

Анализ динамики гуморальных антител к вирусу ИРТ у вакцинированных нами животных показал, что иммунный

ответ у телят 13-15-дневного возраста, 70% которых были серонегативны к ИРТ, и новорожденных телят, имевших ко-лостральные антитела,существенно не различается и достигает своей максимальной величины через 20 дней после ревакцинации. Следовательно, вакцина имеет достаточный запас иммуногенной активности в отношении вируса ИРТ.

Иммунный ответ к вирусу диареи-болезни слизистых после прививки «Тривак»

Изучая поствакцинальный иммунитет к вирусу диареи-болезни слизистых после иммунизации вирусвакциной, мы наблюдали разницу в динамике гуморального ответа у новорожденных и 13-15-дневных телят, которая отражена на рис.3,4.

На рис.3 видно, что новорожденные телята получили от своих матерей значительный колостральный иммунитет. Через 14 дней после вакцинации титр антител к ВД-БС практически не изменился , находясь на первоначальном уровне (3,6 1од2), что отличается от динамики антител к вирусу ИРТ.

Сероконверсию наблюдали через 10 и 20. дней после ревакцинации, титр антител составил 4,69±0,58 1од2 и 4,87±0,52 1од2 соответственно.

Эта особенность в динамике гуморальных антител к ВД-БС трудно интерпретируется, возможно, это явление объясняется наличием определенной степени иммунотолерантности у новорожденных телят. Если указанное справедливо, то проблема иммунопрофилактики вирусных

Рис. 3 Динамика вируснейтралиэуюших антител к вирусу ВД-БС в сыворотке крови новорожденных телят после иммунизации вакциной "Тривак ВИЭВ"

Титр 5,5 антител в 1од2

I II . | ) г П | I I I I I 1 : I I I I . I I 1 I I I

1 - опыт

2 - контроль

длительность

наблюдения,

сутки

Рис.4 Динамика вируснейтрализующих антител к вирусу ВД-БС в сыворотке крови телят, после сочетанного применения "Байферона" и вакцины "Тривак ВИЭВ".

Титр 5 антител в 1од 2

О 10 20 30 40 50 60

длительность

наблюдения,

сутки

респираторных инфекций многократно возрастает.

У телят 13-15-дневного возраста, как видно из рис.4, повышение уровня гуморального ответа выявили через 14 дней после прививки вакцины ( на момент ревакцинации), титр антител к вирусу диареи увеличился на 2,87 1од2. Затем наблюдали его дальнейший подъем, отметив наивысшее значение 4,43+0,62 1од2 через 20 дней после ревакцинации.

Уровень гуморальных антител через 20 дней после ревакцинации у новорожденных и 13-15-дневных телят незначительно отличаются друг от друга (4,87±0,52 и 4,4 3+0,62 1од2) .

Разница титра антител статистически недостоверна (Р<0,05)-Следовательно, иммунизация телят различного возраста вирусвакциной индуцирует у них выработку специфических антител к вирусу ВД-БС практически на одном уровне.

Иммунный ответ животных к вирусу ПГ-3 после прививки «Тривак» .

Рассматривая формирование иммунного ответа у телят различного возраста к вирусу парагриппа-3 после иммунизации вирусвакциной, мы наблюдали различия в динамике антигемагглютининов в период между первым и вторым введением вакцины.

В таблице 1 представлены данные средних значений титра антигемагглютинирующих антител к вирусу ПГ-3 после прививки « Тривак» телятам 13-15-дневного возраста и новорождённым.

Таблица 1 . Реакция антителообразования к вирусу ПГ-3 у телят, иммунизированных вакциной "Тривак ВИЭВ"

Группа телят Титр антител в (М ± м)

до иммунизации после иммунизации через:

14 дней 24 дня 34 дня 60 дней

Подопытная группа новорожденных телят 6,3 ±0,34 7,2 ±0,72 8,5 ±0,38 8,7 ±0,34 8,7 ±0,34

Контрольная группа новорожденных телят 6,4 ± 0,36 5,1 ±0,52 3,4 ± 1,34 2,1 ± 1,34

Подопытная группа телят13-15-дневного возраста 4,3 ± 1,7 6,5 ±1,27 8,0 ±0,59 8,2 ±0,44 8,2 ±0,44

Контрольная группа телят 13-15-дневного возраста 3,7+1,85 3,3 ± 1,67 2,8 ± 1,44 1,7 ±7,09

У новорождённых телят,имеющих высокий гуморальный иммунитет (б, 3±0, 34 - 6, 4+0,34 1од2.) , в момент ревакцинации отмечено незначительное повышение уровня гуморальных антител,титр антигеммаглютининов составил 7,2±0,72 1од2. У телят 13-15-дневного возраста во время второй вакцинации сероконверсия к вирусу ПГ-3 была 2,2 1од2.

На 10-й и 20-й день после ревакцинации у всех привитых телят происходило дальнейшее увеличение титра ан-тигемагглютининов.Основную сероконверсию у иммунизиро-. ванных новорождённых телят отмечали через 10 дней на 2,2 1од2 и через 20 дней на 2,4 1од2.

13-15-дневные телята вырабатывали гуморальные антитела к вирусу парагриппа-3, которые превышали исходный уровень на 3,7 1од2 через 24 дня после первого введения вакцины и на 3.9 1од2 через 34 дня.

В группах контрольных телят отмечали постепенное снижение титра антигемагглютининов и к двухмесячному возрасту антител к .ПГ-3 у них не было.

Эпизоотическая эффективность вакцины «Тривак»

Эпизоотическую эффективность ассоциированной трехвалентной вакцины оценивали путем сравнительного анализа заболеваемости и отхода телят в группах, подлежавших вакцинации, и неиммунизированных. Изучали данные, полученные в трех хозяйствах Тульской области (ТОО «Отчизна», ТОО «Дружба», СПК «Октябрьский»).

В ТОО»Отчизна» применяли вакцину «Тривак» в течении четырех лет. В первый год наблюдали стабилизацию эпизо-

отической ситуации по массовым респираторным заболеваниям телят.

В последующие три года использования вакцины отмечали снижение заболеваемости телят респираторными инфекциями в 2,7 раза и падежа от них в 3,1 раза. Иммунизация способствовала улучшению общего состояния молодняка КРС. Общая заболеваемость уменьшилась в 2,35 раза, падеж в 3 раза.

В СПК «Октябрьский» в 1995 году была зарегестриро-вана вспышка ИРТ, ПГ-3. Иммунизация телят этого хозяйства вирусвакциной «Тривак» привела к нормализации состояния животных, снижению заболеваемости и падежа. В последующие два года, в течении которых все поголовье СПК «Октябрьский» вакцинировали указанной вакциной, отмечалось существенное улучшение эпизоотической ситуации по респираторным болезням телят, несмотря на известные трудности, связанные с общим состоянием животноводства в хозяйстве.

В ТОО «Дружба» нами были проведены производственно-контролируемые опыты вакцины «Тривак».

Новорожденных телят, матери которых за 2,5-3,5 месяца до отела были иммунизированы вакциной, разделили на две группы: подопытную (телят 2-3-дневного возраста вакцинировали против ИРТ, ПГ-3, ВД-БС) и контрольную (телят не иммунизировали). В течении опыта заболели семь телят.

У одного теленка подопытной группы наблюдали сероз-но-слизистый ринит, слезотечение, кашель. Лечение проводили пенециллином, тетрациклином. Через неделю состояние животного было удовлетворительное.

Шесть телят контрольной группы болели с признаками поражения респираторного и желудочно-кишечного тракта. У животных отмечали лихорадку, конъюктивит, слезотечение, слизисто-гнойный ринит, кашель, диарею. Для лечения использовали антибиотики и сульфаниламидные препараты. После 10-20-дневного лечения состояние животных нормализовалось .

Заболеваемость телят подопытной группы составила 10%, контрольной 60%.

В другом опыте новорожденных телят обработали интра-назально «Байфероном», затем через десять дней животным подопытной группы привили вирусвакцину, телят контрольной группы не иммунизировали. За период наблюдения телята подопытной группы оставались здоровыми,состояние их было удовлетворительное.

Три теленка контрольной группы в возрасте 15-20 дней перенесли респираторное заболевание. У них наблюдали гипертермию, ринит, одышку, кашель. Лечение проводили пенициллином, стрептомицином, тетрациклином. Через 10 дней лечения состояние животных нормализовалось.

Заболеваемость телят контрольной группы составила 30%, в подопытной группе все животные остались здоровы.

Таким образом, данные, полученные в опытах, проведенных в ТОО «Дружба», свидетельствуют об эффективности вакцины в условиях хозяйства, неблагополучного по массовым респираторным болезням телят.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженной эффективности вакцины при ее применении в неблагополучных хозяйствах. Вакцинация способствовала улучшению эпи-

зоотической ситуации в хозяйствах и существенно снижала экономический ущерб, наносимый массовыми респираторными инфекциями..

Учитывая экономические трудности животноводческих хозяйств и связанные с ними многочисленные нарушения принятых зоогигиенических норм содержания и кормления животных, результаты, полученные в наших опытах, можно считать позитивными и показательными.

Таким образом, проведенные нами исследования дают основание сделать заключение о том, что иммунизация телят ассоциированной трехвалентной вакциной против ИРТ, ПГ-3, ВД-БС индуцирует у них образование иммунного ответа ко всем компонентам вакцины на достаточно высоком уровне.

Вакцина обладает низкими реактогенными свойствами. Она безвредна для стельных коров и новорожденных телят вызывает слабую поствакцинальную реакцию, которая не превышает известные для вирусвакцин показатели. Применение ее в неблагополучных хозяйствах позволяет существенно снизить экономический ущерб, наносимый респираторными заболеваниями.

гг

выводы

1.Заболевания телят в ряде животноводческих хозяйств Тульской области, проявляющиеся поражением органов дыхания, угнетением, задержкой в росте и значительным отходом, обусловлены инфекцией парагриппа-3, ринотрахеита, диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота.

2.Для профилактики массовых болезней телят в неблагополучных хозяйствах предложена многокомпонентная вакцина «Тривак», включающая аттенуированные штаммы вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС, которая испытана в производственных условиях на основные показатели: реактогенность, иммуноген-ность и противоэпизоотическую эффективность

3.Установлено, что в условиях естественного эпизоотического процесса вакцина «Тривак» слабореактогенна для стельных коров и телят различного возраста.

4.Применение вакцины для иммунизации телят, имеющих естественный иммунный фон, вызывает образование активного иммунитета ко всем трем возбудителям. При этом вакцинация стельных коров обеспечивает у них создание выраженного гуморального иммунитета и повышает уровень колост-ральных антител у новорожденных телят к ВД-БС,ИРТ,ПГ-3.

5.Включение интерфероногена «Байферона» в схему специфической профилактики респираторных болезней телят не оказывает отрицательного воздействия на формирование иммунного ответа на прививку вакцины «Тривак».

6.Ассоциированная трехвалентная вакцина против ВД-БС, ИРТ, ПГ-3 эффективна в хозяйствах, неблагополучных по этим вирусным инфекциям. Применение ее способствует сни женим заболеваемости животных и их отхода, существенно уменьшает экономический ущерб, наносимый массовыми респираторными инфекциями.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ РАБОТ

1.Юров К.П., Шуляк А.Ф., Ревякина Е.М., Майджи О.В. Эпизоотическая эффективность трехвалентной вакцины против респираторных заболеваний телят

//Бюлл.ЕИЭВ,№77,1996,с.13.

2.Ревякина Е.М., Шуляк А.Ф., Майджи О.В., Юров К.П. Иммунный ответ у животных на введение вакцины «Тривак» //ветеринария,1998,б,с.25-27.

 
 

Текст научной работы по ветеринарии, диссертация 1998 года, Ревякина, Елена Михайловна

ВСЕРОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМЕНИ Я.Р.КОВАЛЕНКО

ИММУНОГЕННЫЕ И РЕАКТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА АССОЦИИРОВАННОЙ ТРЕХВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА-3, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ - БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

РЕВЯКИНА Елена Михайловна

Диссертация

на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель -доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат премии Совета Министров СССР

К.П. Юров

Москва - 1998

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр

1. ВВЩШИВ 4

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.!, К рггтт сведения об шфекщшвш рвитрахеиге крухшого рогатого шт. 7 2,1.1 Юшншесш признаки ири шфещконном ршюграхеите крупного рогатого скота 8

2.1.2. Возбудогедге. инфещшвного рнтхрахеята жругшого рогатого скот 9

2.1.3, йшлушхехпри икфекциопшм равотрахевте крунвого рогатого сет 10

2.2, Краткие сведения о .вирусной диареи - болезни слтясгык кругтжо рогатого скота 11

2.2.1. Возбудш-ет вирусной диареи крупного рогатого скота 12

2.2.2. Клшшчесжве яризшжи: нри вирусной диареи крупного рогатого скат 13

2.2.3. Иммунитет ври 1»фусно#. диареи крупного рогатого скота . 15

2.3, Крат»® сведения о шрахршше-З крупного рогатого скота 15

2.3.1. Юшштаеоше признаки при нарагршше-З хрупвото рк>шюго скота 16

2.3.2. Воз%дртеш парахряиш-З крупного рогатого окота 17

2.3.3. Иммунитет при парагршше-З крупногорогатого скот 1Е

2.4, Специфическая профилактика ннфещион.шго ридаграхеита,, вирусной диарея, 1.9 дарагршш-З крупного рогатого скота

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 31 3.!. Материалы и метод ы. 31

3.1.1, Вирус 3 !

3.1.2. Культура клеток 3 2 ЗЛ.ЗЛ. Ьдашяш животные 3 2

3.1.4. Серологические реакции 33

3.1.5. Статистическая обработал результатов 34 3.2. Результаты исследований 35 3.2.1 .Изучение эпизоотической ситуации по массовым респираторным заболеваниям 35

телят в Тульской области

3.2.2. Оценка иммунного статуса у животных, используемых в прошводетвенно - кон- 41 гралируемых опытах

3.2.3. Изучение реактогенносш вирусвакцины "Тривак" в производственно - контроля- 43 руемых опытах

3.2.3Л. Реакгогенность вирусвакцины '"Тривак" для стельных коров 43

3.2.3.2. Реакгогенность вирусвакцины "Тривак" в опытах на телятах 2-3 дневного воз- 44 раста

3.2.3.3. Реакгогенность вирусвакцины "Тривак" в опытах на телятах 13-15 дневного 44 возраста

3.2.4. Гуморальный ответ у животных, иммунизированных вакциной "Тривак" 45

3.2.4.1. Иммунный ответ животных к вирусу НРТ после прививки ''Тривак" 46

3.2.4.2. Сочетанное применение интерфероногена и вирусвакцины "Тривак35 52

3.2.4.3. Иммунный ответ животных к вирусу диареи после прививки "Тривак" 59

3.2.4.4. Иммунный ответ животных к вирусу тарагринпа-З после прививки "Тривак55 71

3.2.5. Эпизоотическая эффективность вирусвакцины "Тривак" 83

4. ОБСУЖДЕНИЕ 90

5. ВЫВОДЫ 101

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 102

7. ПРИЛОЖЕНИЕ 121

-41. ВВЕДЕНИЕ

Инфекционные болезни крупного рогатого скота с преимущественным поражением респираторного и желудочно - кишечного тракта наносят животноводству значительный экономический ущерб, особенно в условиях современных крупных животноводческих комплексов и ферм. Приоритет в этиологии инфекционных болезней телят принадлежит возбудителям вирусной природы: инфекционного ринотрахеига (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), вирусной диареи - болезни слизистых оболочек (ВД-БС) и ряду других.

Часто вирусы действуют в ассоциации друг с другом, отчего заболевания принимают затяжной характер и протекают в более тяжелой форме.

Многочисленными исследованиями показано, что в предотвращении инфекции, >;,Д

\ /

у также в предупреждении рецидивов и уменьшении их тяжести и продолжительности существенную роль играет активная специфическая профилактика этих заболеваний (16,29).

Во всем мире широко используются различные профилактические средства. Основой в системе мер по борьбе с вирусными инфекциями является специфическая профилактика с использованием различного типа вакцин: живых, инактивированных, субъединичных и других.

Однако, несмотря на разнообразие применяемых препаратов, инфекционный ринотрахеит, парагрипп-3, вирусная диарея - болезнь слизистых распространены повсеместно и борьба с этими заболеваниями, создание новых эффективных средств очень актуальны.

В связи с вышеизложенным перед нами были поставлены следующие задачи: 1. Определить роль вирусов инфекционного ринотрахеига, парагриппа-З, вирусной диареи-болезни слизистых в этиологии респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота. ::

-52. Разработать рабочую схему иммунизации против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи телят и коров в хозяйствах, неблагополучных по респираторным заболеваниям.

3. Провести оценку реактогенных и иммуногенных свойств ассоциированной трехвалентной вакцины «Тривак» против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи крупного рогатого скота в условиях производственно-контролируемого опыта.

4. Проверить возможность использования в качестве «протектанта», способного снять возможную повышенную реакцию на прививку вирусвакцины, препарата «Байферон».

Научная новизна

В условиях естественного эпизоотического процесса , при наличии активной циркуляции возбудителей , изучена динамика иммунного ответа у телят и коров на аттенуированные штаммы вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС при одновременном введении в виде ассоциированной вакцины.

Установлено, что при оптимальном соотношении доз вакцинных вирусов, обеспечивается формирование сбалансированного иммунного ответа ко всем трем возбудителям, при этом отсутствуют отрицательные явления негенетического взаимодействия вирусов (интерференция, экзальтация, конкуренция антигенов). Показательно, что глубоко аттенуированный вирус ИРТ - интерфероноген (Байферон) при его аппликации на слизистую оболочку верхних дыхательных путей не оказывает отрицательного воздействия на формирование иммунитета у телят ни к одному вакцинному штамму после прививки им трехвалентной вакцины.

Практическая значимость.

В производственно-контролируемых опытах изучена реактоген-иммуногенная активность ассоциированной вакцины против возбудителей массовых респираторных бо-

ность и основных

лезней крупного рогатого скота: инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи - болезни слизистых.

Установлено, что вакцина слабореактогенна и иммуногенна для стельных коров и новорожденных телят.

Разработана рабочая схема вакцинации в хозяйствах с острым течением инфекции и наличием естественного иммунного фона к указанным возбудителям, отрицательно влияющим на формирование активного поствакцинального иммунитета.

Установлено, что глубокоаттенуированный штамм вируса ИРТ (Байферон) может быть использован в качестве иммунопротектанта при вакцинации новорожденных телят трехвалентной вакциной.

Материалы диссертации использованы для разработки нормативно-технической документации на промышленное производство вакцины.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1. Краткие сведения об инфекционном ринотрахенте крупного рогатого осота

Инфекционный риншрахеиг крупного рогатого скота - остро протекающая коша-гиозная герпесвирусная инфекция крупного рогатого скота, которая характеризуется преимущественно катзрально-некротическими поражениями респираторного тракта, лихорадкой, общим угнетением, конъюкгивитом, а также развитием пустулезнош вульво-вагикита и балано-постита при попадании вируса в половые органы животного.

Впервые инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота установлен в США в 1954 году (Schroeder, Moys et al.). В 1956г. Madin et aL выделили вирус ИРТ КРС из носовых истечений больных телят в культуре клеток. В последующие годы имели место многочисленные сообщения других исследователей о выделении вируса ИРТ от больного скота как в Америке, так и в других странах мира: Новой Зеландии (Webster, Manktelow, 1959), Канаде (Greig, 1961), Италии (Moreíti et al., 1964), Венгрии (Domen, Fadar, 1961) и других (131, 144, 170, 183, 104,91).

В Советском Союзе заболевание, сходное по клиническим и паталогоанатомиче-ским признакам с инфекционным ринотрахеитом крупного рогатого скота, наблюдал Ф.М. Пономаренко в 1938г. Вирус выделен и идентифицирован Н.Н. Крюковым в 1969 году (42,25).

В естественных условиях к вирус)' инфекционного рквотрахеита восприимчив крупный рогатый скот, в первую очередь откормочный молодняк, а также и взрослое поголовье. У лошадей и свиней, овец и коз наблюдалась легкая температурная реакция и образование антител после введения вируса ИРТ КРС (139,140).

Источником инфекции и основным резервуаром вируса являются больные и переболевшие животные.

Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота наблюдается в крупных хозяйствах с высокой концентрацией животных, с частой заменой скотта. Заболевание часто принимает характер энзоотии. В течение 1-3 недель болезнь охватывает всех животных стада и заканчивается переболеванием че^:; 4-6 недель (43,24).

Болезнь может возникнуть во все времена год а.

2.1.1. Клинические признаки при инфекционном ринотражеите крупного рогатого скота

Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота протекает с явлениями поражений респираторного аппарата. У больных животных наблюдают угнетенное состояние, повышение температуры до 42 °С (102), сильную гиперемию слизистой оболочки носовой полости (138). На 2-3 день появляется кашель и серозно-слизистые, слизисш-шойные истечения из носа. В тяжелых случаях на слизистой носовой полости появляются беловатые, тонкие, серозно-фибринозные наложения, при скарификации которых открываются легко кровоточащие язвы. В процессе болезни серозно-фибринозные наложения утолщаются, что приводит к частичному сужению воздухоносных проходов и затруднению дыхания (61).

Поражения органов дыхания часто сопровождаются коньюкгивишми. Конъюк-тива гиперемирована, отечна. Из кожьюктивального мешка выделяются слизистые, слизисто-гаойные истечения. В отдельных случаях устанавливали кератоконьюктивиты с помутневшем и изъязвлением роговицы (87,114).

Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота характеризуется пустулезным поражением слизистых оболочек генитального тракта. У коров появляются на поверхно-

сти наружных половых органов и слизистой влагалища гиперемирован-ные участки, многочисленные узелки и пузырьки, переходящие в пустулы. Во влагалище отмечается скопление слизистого, слизисто-гнойного экссудата (122, 149). Со временем пустулы могут сливаться, образуя псевдомембрану, при отделении которой обнажается поверхность с геморрагическим воспалением.

У быков возникают баланопоститы. Наблюдается незначительное опухание препуция, болезненность, из препуция выделяются истечения с примесью крови, на его коже и на слизистой полового члена многочисленные пустулы. При осложнении секундарной микрофлорой обнаруживаются обширные геморрагии и язвы, покрытые псевдодифтеритиче-ской мембраной. Впоследствии могут возникать парафимозы, обширные сращения пениса и препуциальной стенки (102).

Возбудитель инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота вызывает аборты у коров на различных стадиях беременности (148, 124,130,119,141).

Редкой формой проявления данного заболевания являются ме-нингоэнцефалиты, возникающие у телят 10-30 - дневного - 2-6- месячного возраста, протекающие с выраженными клиническими признаками поражения центральной нервной системы: депрессией, нарушением координации движения, шаткой походкой, спотыканием, круговыми движениями, запрокидыванием головы, саливацией, тремором всех мышечных групп,

А:

тетаническими сокращениями мускулатуры и плавательными движениями конечностей. Часто болезнь заканчивается летально (100, 136).

2.1.2. Возбудитель инфекционного ринотрахеита крупного рогатого

скота.

Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота относится к роду Varicellovirus подсемейства

Alphaherpesvirinae семейства Herpesviridae и имеет типичную морфологию вирусной частицы, характерную для данного

семейства (45). Еш вирион состоит из четырех структурных элементов: сердцевины, содержащей линейную двухцепочечную молекулу ДНК, икосадельтаэдрического кансида, состоящего из 162 кшгсомеров, тегумета, асимметрично расположенного вокруг капсида элек-тронноплотного, волокнистого материала, наружной трехслойной мембраны, имеющей на поверхности многочисленные тепломеры.

Вирус инфекционного ринограхеита довольно устойчив и сохраняет свою активность при -70 °С не менее 7 мес., при 4 °С - 30 дней, при 37 °С остается инфекционным в течение 4 дней. При 56 °С полная инактивация вируса наступает через 25 мин., при 22 °С через 20 дней (131).

Вирус чувствителен к действию хлороформа, эфира, трипсина, формалина, бензола, фреона (106, 174, 110). Вирус инфекционного ринограхеита крупного рогатого скота сохраняет свою активность при рН от 5 до 9.

2.1,3. Иммунитет при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота

Иммунный ответ крупного рогатого скота при введении в организм вирусного антигена сопровождается формированием гуморального (иммуноглобулины 1$гА, 1&М, 3&В), клеточного (Т-лимфоцкты: Тх, Тс, Тк) и секреторного (местная устойчивость респираторных органов слагается из структурно-физиологических, неспецифических и специфических факторов местного иммунитета) (59).

В крови переболевших и вакцинированных животных обнаруживают вирус-нейтрализующие (54, 27, 122, 131, 138), комплементфиксирующие, прецишимрующие (99, 152,39) антитела, а также антитела, выявляемые в реакции торможения гемаггяютинации и в реакции непрямой гемагглютинации (5,44,48,86,186).

Специфические антитела в сыворотке крови животных появляются через 8-14 дней после инфицирования (52,99,44,48,153,155), достигают максимального уровня к 28-30 дню.

Сведения о продолжительности иммунитета при инфекционном ринотрахеите различные. Введение аттенуированного вируса ИРТ создает у животных невосприимчивость к заражению в течение трех лет (137). По некоторым данным животные, переболевшие респираторной формой инфекционного ринотрахеита, повторно не заболевали. Многие авторы считают, что прочный иммунитет при данном заболевании составляет 6-18 месяцев. (136, 144, 168,13).

B.Moretti et al. (144) отмечают, что снижение тигра антител происходит после 10-

ти месяцев.

T.Z. Chow (83) обнаруживал антитела в сыворотке крови переболевших телок в течение 5,5 лет.

Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота обладает иитерфе-роногенными свойствами. Спустя 5 часов после введения вируса интерферон обнаруживают в носовых секретах и выявляют его до 8-х суток, причем em титр выше, чем в крови (64,187,177).

Колостральные антитела, поступающие с молозивом новорожденным телятам, обуславливают иммунитет у последних, при чем, как правило, титр гуморальных антител у них выше, чем у матерей (32). Уровень антител сохраняется высоким до 30 дней, значительно снижается к 60 дням. По некоторым данным колостральные антитела существуют в организме до 4-5 месяцев (70).

2.2. Краткие сведения о вирусной диареи- болезни слизистых крупного рогатою скота

Вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота характеризуется широким спектром клинических признаков, зависящих от форм течения инфекции, которая определяется биологическими свойствами возбудителя (7,10,15,34,159,156).

Впервые вирусная диарея как самостоятельное, заболевание было установлено Огафсоном и его сотрудниками в США, штате Нью-Йорк в 1946 году ври вспышках острой, часто со смертельным исходом, болезни крупного рогатого скота, характеризующейся диареей и эрозивными поражениями пищеварительного тракта (184, 10,106,110,73).

Вирус диареи среди крупного рогатого скота является обычно встречающимся патогеном в большинстве стран, так как, за малым исключением, животные переносят инфекцию в течение первых лет жизни, о чем свидетельствуют ретроспективно выявляемые к возбудителю гуморальные вируснейтрализующие антитела у 50-90% обследованного поголовья (183, 163,159,184,154,108,76,112).

Возникает данное заболевание во все сезоны года, но чаще в осенние и весенние месяцы с поражением, в основном, теляпг аг 4-6 - мее. возраста до 2-х лет. Однако заболевают и новорожденные телята, заражение их может происходить еще в неоштальннй период (169,33).

Главным источником в распространении вирусной диареи являются персистенгао инфицированные животные (84, 156, 176). Больные и переболевшие также служат источником инфекции (78). Передача заболевания возможна вакцинами, кошаминированными вирулентным штаммом вируса диареи через фегальвую сыворотку, используемую для выращивания культуры клеток или другим путем (143).

2.2.1. Возбудитель вирусной диареи крупного рогатого скота

Вирус диареи крупного рогатого скота относится к роду Ре^шгиз, семейства Р1аутлс1ае (98). Это РЕК - содержащий, мельчайший (40...60 нм) оболочечный вирус с икоса-эдрическим тип