Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункцональное развитие гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки у плодов и новорожденных телят

□□3485746

На правах рукописи _

ТЕМЛЯКОВА ВАЛЕНТИНА СЕМЕНОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ ГЛАДКОЙ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ СТЕНКИ ТОЛСТОЙ КИШКИ У ПЛОДОВ И НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- з дек 2009

Саранск - 2009

003485746

Работа выполнена на кафедре морфологии и физиологии животных Аграрного института в ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Здоровинин Владимир Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Пронин Валерий Васильевич

(Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. Д.К.Беляева, г. Иваново)

кандидат биологических наук, доцент Грызлова Лариса Владимировна

(Мордовский государственный педагогический институт им. М.Е. Евсевьева, г. Саранск)

Ведущая организация: Российский университет дружбы народов,

г. Москва

Защита состоится «19» декабря 2009 г. в «Ю00» часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.117.15 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, д.68).

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им. М.М. Бахтина ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева».

Автореферат диссертации опубликован на сайте Мордовского государственного университета www.mrsu.ru. Е-таП:с150У@тгеи.ги

Автореферат разослан « » /{ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета () .//У'^ Т.А.Романова

1. ОБЩАЯ ХАРЕКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1.Актуальность темы. Гладкая мышечная ткань широко представлена в организме в различных отделах желудочно-кишечного тракта (Гладкий А. П., 1953; Заварзин А. А., 1967; Витебск в, 1970; Гладкий А. П., Баженов Д. В., 1976); в воздухоносных путях (Есипова И. К., 1975; Непомнящих Г. И., 1979), в мочеполовой системе (Гладкий А. П., 1957; Бакишев Н. С. и Орлов Р. С., 1971); в кровеносных и лимфатических сосудах (Ирьянов Ю. М., 1984; Жук Н. Н., 1985; Чумаков В. 10., Борисов А. В., Горяева Н. Н., Горяев П. А., 1987, 1999).

Всестороннее изучение систем и органов живого организма с точки зрения морфологии, цитологии и гистохимии позволит более детально и углубленно понять биохимические процессы, протекающие в животном организме, а значит и создает базу для разработки систем полноценного сбалансированного кормления животных, что обеспечит получение максимальной продуктивности (Лапшин, 1988; Тельцов и др., 1993).

Анализ данных литературы, свидетельствует о недостаточном внимании к вопросам комплексного изучения закономерностей развития мышечной ткани стенки толстой кишки крупного рогатого скота в эмбриогенезе. Работы Л. П. Тельцова (1969; 1984), В. Г. Ульянова (1969), В. К. Бирих, Г. М. Удовина (1972), А. Ф. Рыжих, Л. К. Хабибуллиной (1978) частично касаются развития мышечных слоев тонкой и толстой кишок, но выполнены на других породах крупного рогатого скота и отмечают специфические породные особенности. Однако наиболее детального изучения развития мышечной ткани стенки толстого кишечника у плодов и у телят черно-пестрой породы новорожденного этапа не проведено.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью данной работы является изучение закономерностей формирования мышечной оболочки стенки толстой кишки, мышечной пластинки слизистой оболочки в раннем онтогенезе (у плодов коров от 2 - мес. и у телят от рождения до 15-сут. возраста).

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

1. Изучить динамику роста и длины толстой кишки и ее составляющих слепой, ободочной и прямой кишок на фоне роста массы и длины телят от рождения до 15 суток.

2. Проследить морфогенез гладкомышечной ткани на раннем онтогенезе и изучить морфометрическими методами динамику роста ядра и цитоплазмы клеток мышечной ткани, а также их ядерно-цитоплазменное отношение (ЯЦО). Определить уровень митотического индекса (МИ) и индекса апоптоза (ИА) различных клеточных дифферонов мышечной оболочки.

3. Гистохимическими и микроскопическими методами исследования проследить динамику нуклеопротеидного, белкового и углеводного обменов в клетках мышечной ткани находящихся на разных уровнях дифференциров-ки.

Работа является самостоятельным разделом комплексной темы кафедры морфологии и физиологии животных Мордовского госуниверситета "Ме-

ханизмы морфогенеза и законы индивидуального развития организмов (в норме и патологии)", N государственной регистрации 01200704777.

1.3. Научная новизна. Получены новые сведения по морфогенезу гладкомышечной ткани стенки толстой кишки. Изучена закономерность формирования мышечной оболочки и ее слоев в связи с внутрипородными особенностями. Установлена динамика роста ядра, цитоплазмы, ядерно-цитоплазменного отношения, а также МИ и ИА клеток мышечной ткани. Рассмотрена динамика нуклеопротеидного, белкового и углеводного обменов у плодов и телят черно-пестрой породы на разных этапах развития.

1.4. Научно-практическая значимость работы. Проведенные исследования позволяют наиболее полно и четко рассмотреть: вопросы последовательного формирования и развития оболочек толстого отдела кишечника; особенности развития мышечной оболочки и ее слоев в разные этапы эмбрионального развития; специфичность архитектоники и развития мышечной ткани слизистой и мышечной оболочки; дифференцировку мезенхимных клеток в миобласты, миобластов в миоциты; динамику роста ядра и цитоплазмы, ЯЦО, МИ и ИА миобластов, миоцитов стенки толстой кишки; возрастную динамику полисахаридного, белкового, нуклеопротеидного обмена гладкомышечной ткани. Впервые предложена периодизация развития гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки у плодов коров и у телят новорожденного этапа.

Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут использоваться для написания учебных руководств, пособий и в учебном процессе на ветеринарных, биологических факультетах высших учебных заведений.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту. 1. Закономерность формирования и гетерохронность развития оболочек стенки слепой, ободочной и прямой кишок.

2. Динамика развития мышечной оболочки и ее слоев также мышечной пластинки слизистой оболочки.

3. Развитие гладкомышечной ткани на разных этапах эмбрионального развития крупного рогатого скота и у телят новорожденного этапа развития.

4. Динамика роста площади ядра, цитоплазмы и ядерно-цитоплазменного отношения гладкомышечной ткани толстого отдела кишечника плодов и телят новорожденного этапа.

5. Нуклеопротеидный, белковый и углеводный обмен в клетках мышечной ткани на различных уровнях дифференциации.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (г. Саранск, 2008); материалах международной научно-практической конференции, посвященной памяти профессора С.А. Лапшина (г. Саранск, 2008; 2009); материалах международной научно-практической конференции «Роль биологии и ветеринарной медицины в реализации государственной программы развития сельского хозяйства на 2008-2012 гг.» (г. Оренбург, 2008); XXXVII Огаревских чтениях

Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (г. Саранск, 2009); трудах Кубанского государственного аграрного университета серия: Ветеринарные науки (г. Краснодар, 2009).

1.7. Реализация результатов исследования. Основные положения диссертации опубликованы в 6 научных работах, включая 2 работы в центральных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ. Полученные данные используются в научных и учебных целях на кафедре морфологии и физиологии животных Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева; Казанской академии ветеринарной медицины; Ивановской, Брянской, Костромской сельскохозяйственных академий.

1.8. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах компьютерного текста и включены разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Список включает 210 научных работ, в т.ч. 45 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 29 таблицами и 49 рисунками (графиками и микрофотографиями).

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Сбор материала от животных черно-пестрой породы проводился в зимне-стойловый период в 2002-2007 годах во время убоя животных на пищеком-бинате «Саранский» и мясокомбинате «Атяшевский» совместно с профессором Здоровининым и аспирантом Дубровским М.В. В.А. Животные принадлежали хозяйствам Республики Мордовия «Россия», «Пушкинский», «Искра». Все хозяйства благополучны по инфекционным и инвазионным болезням. Коровы содержаться в зимне-стойловый период в типовых четырёх рядных коровниках на сбалансированных по нормам ВИЖа рационах, а в летне-пастбищный период на выпасах с дополнительной подкормкой комбикормами. Телята до 5 - 6 - суточного возраста содержаться в индивидуальных клетках родильного отделения, а далее в секционных профилакториях группами по 8-10 телят в каждой. Первый раз телята получали молозиво не позднее 1 -1,5 часа после рождения, затем в течение недели по 1,5 литра 4 раза в сутки, через равные промежутки времени. С 10 - 15-суточного возраста телята переводились на сборное молоко и грубые корма. Исследования проведены на 69 датированных плодах и 19 телятах новорожденного этапа развития. Гистологические и гистохимические исследования проводились в научно-исследовательской лаборатории «Гистофизиология» кафедры морфологии и физиологии животных Аграрного института Мордовского госуниверситета. Материалом для исследований служили толстая кишка и её составляющие: слепая, ободочная и прямая кишки. У плодов и телят определяли пол животного, измеряли затылочно-копчиковую длину тела и его массу. После вскрытия плодов и телят извлекали толстый отдел кишечника измеряли длину и массу (без химуса) всей кишки и её составляющих. Одновременно отбирали и фиксировали материал для макроскопических, гистологических, гистохимических исследований.

Для гистологических и гистохимических исследований кусочки материала брали: в слепой - из среднего участка; в ободочной - из краниального, среднего и каудального участков; в прямой - из краниального и каудального участков. Отобранный материал фиксировали в 12,0 % растворе формалина, в жидкости Карнуа и в фиксаторе по Максимову (Меркулов, 1969). Уплотнение материала проводили путем заливки в парафин (Меркулов, 1969; Кононский, 1976).

Изучение специфичности возрастных особенностей строения кишечной стенки и составляющих ее оболочек в слепой, ободочной и прямой кишках проводили на депарафинизированных срезах, полученных на роторном микротоме МПС-2.

Срезы окрашивались гематоксилин-эозином, по Маллори (выявление колагенновых волокон) Вейгерту (выявление эластических волокон). Гистохимическим путем были выявлены белки кислые и общие по методу Микель-Кальво; выявление дисульфидных (-Б-Б-) групп белков проводили по методу Пирса, а сульфгидрильных (-БН-) групп - по методу Бенрнетта и Зелигмана, а также карбоксильных (-СООН-) и аминных (ЫН2) групп белков (Меркулов, 1969; Кононский, 1976).

Цито - и гистохимическими методами исследования выявляли рибо-нуклеолротеиды (РНП) и дезоксирибонуклеопротеиды (ДНП) метиловым зе-леным-пиронином по Браше, ДНК- по Фельгену-Розенбеку (Пирс, 1962; Лилли, 1969; Кононский, 1976). В качестве контроля на ДНК служили препараты, обработанные кристаллической ДНК-азой, 5% хлорной кислотой (при 60° С в течении 30 минут), а также препараты, не подвергавшиеся гидролизу в горячем (+60° С) 1 М растворе соляной кислоты перед окраской их фуксин-сернистой кислотой. Контрольные срезы на РНК инкубировали в растворе панкреатической РНК-азы (1 мг/мл при 37° С в течении 1 часа) и 1 М растворе соляной кислоты, подогретой до 37° С в течении 3 часов (Пирс, 1962). Освобождение нуклеиновых кислот (НК) от белковых компонентов проводили в растворе трипсина (0,1 мг/мл при 37° С в течение 30 минут) и в 4 % растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (при 90° С в течение 15 минут).

Толщину всей кишечной стенки, кишечной стенки без ворсинок, мышечной и серозной оболочек измеряли при помощи окуляр-микрометра ОК -15, во всех возрастных группах. Кроме того определяли относительный рост в процентах (Б0 и относительный прирост (Б2) по Броди толщины мышечной и мышечной пластинки слизистой оболочки ко всей кишечной стенке.

Электронно-микроскопические исследования (ЭМИ) слепой, ободочной, прямой кишок проводились на ультратонких срезах в лаборатории электронной микроскопии медицинского факультета МГУ им. Н.П. Огарева, при консультации профессора П.П. Круглякова. Материал предварительно исследовался на полутонких срезах, окрашенных толуидиновым синим. Ультратонкие срезы делали на ультрамикротоме Щгакщ с помощью стеклянных ножей. Срезы, смонтированные на сетках или блендах, окрашивались ура-нил-ацетатом (5,0% раствором в метиловом спирте) в течение 10-12 минут, контрастировались цитратом свинца по Е.Яеупокк (1963) 3-5 минут или по

J.Verable, R.Coggeshae (1965) 1-1,5 минуты и просматривались в электронном микроскопе ЭМВ-125.

Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия t Стьюдента. Вычисления производили на CELERON - 1700, с помощью программы MegCTAT. Использован текстовой процессор Microsoft Word 2003. Динамика показателей отражена на графиках, построенных с использованием программы Microsoft Word 2003.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Динамика роста массы и длины тела плодов, роста массы и длины толстой кишки (слепой, ободочной, прямой)

Познание закономерностей индивидуального развития являются биологической предпосылкой для животноводства, для разработки системы полноценного питания, организации профилактики и диагностики различных заболеваний. Научная школа профессора Л.П. Тельцова занимается изучением развития пищеварительной системы. Впервые разработана периодизация развития пищеварительной системы у животных в онтогенезе.

Полученные данные по исследованию динамики роста массы и длины тела, массы и длины толстой кишки у плодов от 2 мес. до 15-сут. возраста телят свидетельствуют о неравномерности их роста и асинхронности.

Масса и длина тела плода за раннеплодную стадию увеличиваются от 27,0±8,0 г до 3200,0±400,0 г, длина - 7,6±0,5 до 34,3±2,1 см; за среднеплодную соответственно - до 12670±660,0 г, длина - до 56,4±0,5 см. За позднеплодную -до 29150,0±950,0 г и до 84,5±3,0 см. и этап новорожденное™ соответственно 44200,0±2420,0 длина -102,9±5,6 см.

Масса толстой кишки за раннеплодную стадию увеличивается от 0,299±0,002 до 9,713±0,910 г, и длина от 14,1±1,2 до 59,6±5,3 см. За среднеплодную стадию соответственно увеличивается до 40,374±4,03 г, а длина - до 101,4±Ю,4 см. За позднеплодную стадию масса толстой кишки увеличивается до 132,399±14,57 г; а длина - до 163,1±15,2 см. и этап новорожденное™ соответственно 339,7±18,12 длина - 239,5±22,2 см.

Масса и длина слепой кишки увеличиваются соответственно по стадиям развития - от 0,075±0,001 до 0,980±0,051 г и от 1,2±0,01 до 5,3±0,4 см; до 6,960±0,25 г и до 8,1±0,8 см; до 13,150±0,3 г и до 14,6±0,8 см., до46,0±4,1 г. и 22,5±2,1 см.

Эти показатели (массы и длины) ободочной кишки увеличиваются по стадиям - от 0,218±0,002 до 7,689±0,15 г и от 13,0±0,3 до 43,0±1,9 см; до 30,346±1,74 г и до 88,2±12,7 см; до 76,433±3,66 г и до 120,2±7,9 см, до166,1±7,21 г. и 165,0±16,1 см.

Масса и длина прямой кишки но стадиям исследования увеличивается -от 0,305±0,005 до 5,994±0,140 г и от 3,9±0,1 до 16,4±0,6 см: до 23,660±0,99 г и до 28,5±19 см; до 73,767± 1,33 г и до 40,3±1,3 см, 127,6+3,25 г и 52,0+3,8 см.

Проведенные исследования по динамике роста массы и длины тела плодов, роста массы и длины толстой кишки (слепой, ободочной, прямой) свидетельствуют о неравномерности их развития в эмбриогенезе. Асинхронность имеет темпы повышенного и пониженного роста. При исследовании трех стадий плодного этапа развития и новорожденного установлено, что наибольшая интенсивность роста тела плода происходит на раннеплодной стадии (2-5 мес.), когда масса тела увеличивается в 118,5 раз. Эта закономерность описана в работах Л. П. Тельцова (1984), В А. Здоровинина (1994). Л.П. Тельцова, В.А. Здоровинина, О.В. Красовитовой (2001). Аналогичная закономерность выявляется при изучении динамики роста массы толстой кишки и ее отделов - слепой, ободочной, прямой. Однако рост массы тела плода за среднеплодную стадию развития выше, чем на позднеплодной стадии, а в росте массы толстой кишки и ее отделов интенсивность роста за позднеплодную стадию выше, чем за среднеплодную. То есть коррелятивной зависимости между динамикой роста массы тела и массы толстой кишки, как между массой толстой кишки и ее отделов не установлено. При исследовании массы толстой кишки и массы плодов коррелятивная зависимость четко прослеживается (Тельцов, Здорови-нин, Красовитова, 2001).

Темп относительного роста по Броди массы тела понижен на 5, 9 мес,- а толстой кишки - на 5, 8, 9 месяцах и у новорожденного теленка, а повышен массы тела - на 3-4 мес., а толстой кишки - на 3, 4, 6, 7 месяцах. Причем динамика роста массы толстой кишки и ее отделов не всегда совпадает.

В динамике роста длины тела плода и длины толстой кишки также не установлено коррелятивной связи. Линейный рост тела плода ускорен на 3, 4, 7 месяцах, а толстой кишки - на 3, 4, 6, 9 месяцах. Снижен темп роста длины тела на 5, 6, 8, 9 месяцах. Прямо пропорциональная зависимость синхронного роста между линейным ростом тела и толстой кишки устанавливается только на 3 и 4 месяцах (г =0,87 и 0,84) (когда толстая кишка развивается также как тонкая), пониженного синхронного роста - на 5 месяцев (г =0,37) асинхронного роста - на 6, 7, 9 месяцах (когда толстая кишка развивается как специфический орган). Очевидно развитие толстой кишки в филогенезе, как специфического органа, происходило позднее, чем тонкой кишки.

Установлено, что в развитии массы толстой кишки и ее отделов - слепой, ободочной и прямой имеется биологический ритм, он равен 2 месяцам, как и роста массы тела, хотя во времени они не совпадают. В динамике роста длины тела и толстой кишки установлен биологический ритм - около 3-4 месяцев.

Во-первых, зная фазы подъема и спада интенсивности роста, можно направленно влиять на рост массы тела и толстой кишки, а также на линейный рост тела плода и толстой кишки через питание матери (Самчук, 1990). Во-вторых, целенаправленное кормление матерей в различные фазы интенсивной, пониженной и асинхронной корреляции позволяет влиять на рост массы тела (Лапшин, 1988; Решетникова, 1991) и массы толстой кишки, на линейный рост тела и толстой кишки, как одновременно так и раздельно. В целом, ли-

нейный рост тела плода и толстой кишки опережает рост массы тела и массы толстой кишки.

3.2. Развитие гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки у плодов н телят новорожденного этапа развития

Закладка слоев мышечной оболочки стенки толстой кишки происходит в конце зародышевого и начале плодного этапов развития (на 50-70-е сутки). Специфичность строения слоев мышечной оболочки осуществляется в возрасте 2,5 мес., несколько позднее слои мышечной оболочки приобретают дефинитивное строение и определяются, как внутренний (кольцевой) и наружный (продольный). Дифференциация из мезенхимных клеток миобластов сопровождается укорочением отростков, сближением клеток и образованием синцития. Ядра дифференцирующихся клеток приобретают округлую форму, в цитоплазме образуются толстые, короткие филаменты. У плодов 3-мес. возраста в центре внутреннего (кольцевого) слоя мышечной оболочки стенки толстой кишки наблюдается дифференциация миобластов в молодые гладко-мышечные клетки. И к 4-месячному возрасту плода внутренний слой мышечной оболочки толстой кишки в основном состоит из миобластов, молодых мышечных клеток и миоцитов, которые формируют мышечные пучки. Тогда как наружный (продольный) слой мышечной оболочки состоит преимущественно из миобластов и молодых мышечных клеток, находящихся в стадии дифференциации.

Развитие мышечной оболочки плода происходит неравномерно и прежде всего зависит от локализации и возраста: 1) Какой отдел толстой кишки (слепая, ободочная, прямая кишка) берется во внимание; 2) Какой участок (краниальный, средний, каудальный) данной кишки взят для исследования; 3) На каком этапе развития плода проводятся исследования.

Почти одновременно с процессом формирования слоев мышечной оболочки идет закладка мышечной пластинки слизистой оболочки. Это происходит в момент углубления эпителия основания ворсинок в слизистую оболочку и образования кишечных крипт в 3,5-мес. возрасте развития плода. В прямой кишке она состоит из двух тонких прерывистых слоев, тогда как в ободочной и слепой кишках она представлена в виде 2-3 непрерывных слоев миобластов.

Динамика роста толщины кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки слепой кишки за период исследования от 2 мес. плодов и до 15-суточного возраста телят увеличивается в 58,5 и 52,6 раза.

В процентном отношении рост толщины мышечной оболочки и её слоев слепой кишки за раннеплодную стадию к 15-суточным телятам составляет кольцевого слоя 14,2%, продольного слоя - 12,9%, мышечной оболочки в целом - 13,8%. За среднеплодную стадию развития соответственно - кольцевой . слой 30,0%, продольный слой - 29,8%, мышечная оболочка в целом - 29,9%, за позднеплодную стадию развития - кольцевой слой 56,8%, продольный слой -57,5%, мышечная оболочка в целом - 56,9%. На этапе новорожденно-сти толщина мышечных слоёв слепой кишки носит колебательный характер,

первоначально на 1 сутки наблюдается снижение, затем с 3-суточного возраста постепенный подъём до 15 суток.

Толщина мышечных слоев ободочной кишки на всех её участках, по сравнению с мышечными слоями слепой кишки меньше, а прямой больше чем в слепой.

Относительный рост кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки ободочной кишки за плодный этап развития от 2 до 9 мес. увеличивается в краниальном участке кольцевой и продольный слой в 11,9 раза, в среднем - в 9,1 и 8,4 раза, каудапьном - в 11,1 и 10,1 раза соответственно. За раннеплодную стадию развития динамика относительного роста кольцевого и продольного слоев составляет 4,1 и 4,2 раза - в краниальном, 3,0 и 2,9 раза -в среднем, 2,7 и 2,8 раза - в каудальном участках ободочной кишки. За сред-неплодную стадию увеличивается рост кольцевого слоя в участке в 2,5 раза, в среднем - в 2,8; в каудальном - 3,2 раза, продольного слоя соответственно в 2,4; 2,8; 2,9 раза. За позднеплодную стадию увеличение кольцевого слоя составляет 1,2; 1,1 и 1,3 раза, продольного - 1,1; 1,2 и 1,3. У телят новорожденного этапа развития относительный рост кольцевого слоя в краниальном и среднем участках ободочной кишки увеличивается соответственно в 1,4 раза. В каудальном участке происходит уменьшение на 4,3 %. Продольный слой увеличивается в краниальном и среднем участке в 1,4 раза, а в каудальном участке уменьшается, как и кольцевой слой на 3,4% . среднем участке в 1,4 раза, а в каудальном участке уменьшается, как и кольцевой слой на 3,4% .

За исследуемый период развития слои мышечной оболочки прямой кишки увеличиваются в краниальном участке, кольцевой слой и продольный слой в 17,3 раза. В каудальном участке слои увеличиваются кольцевой в 14,8 раза, а продольный - в 18,6 раза.

Относительный рост кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки прямой кишки у 2 - месячных плодов по отношению к 15-суточным телятам в процентах увеличивается в краниальном участке кольцевой слой в 17,5 раза, продольный слой в 17,2 раза, в каудальном - в 14,9 и 18,5 раза соответственно. На раннеплодной стадии относительный рост кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки прямой кишки увеличивается в краниальном участке в 4,0 и 4,5 раза, в каудальном - в 3,1 и 4,4 раза соответственно. На среднеплодной стадии развития - в 2,7 и 2,5 раза в краниальном участке и в 1,8 и 1,7 раза - в каудапьном. На позднеплодной стадии рост кольцевого слоя в краниальном участке увеличивается в 1,1 раза и каудальном участке прямой кишки увеличивается в 1,3 раза, рост продольного слоя -в 1,2 и в 1,5 раза соответственно. У новорожденных телят до 15-сут. возраста относительный рост кольцевого и продольного слоев составляет в краниальном участке 1,5 и 1,4 раза, в каудальном - 1,7 и 1,6 раза соответственно.

Таким образом, динамика относительного роста кольцевого слоя мышечной оболочки за раннеплодную стадию превышает рост продольного слоя и всей мышечной оболочки. Затем темп относительного роста продольного слоя и всей мышечной оболочки увеличивается и на среднеплодной, а

также позднеплодной стадии он выравнивается с динамикой роста кольцевого слоя в прямой, ободочной и слепой кишках.

Гетерохронность развития всей кишечной стенки и ее составляющих оболочек в период раннего онтогенеза обеспечивает нормальное функциональное развитие всей толстой кишки. Общий биологический ритм развития мышечной оболочки стенки толстой кишки, а также кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки составляет 2-3 мес., но по промежуткам во времени в разных отделах (слепой, ободочной и прямой) и разных слоях он не совпадает, обеспечивая гетерохронность развития всей мышечной оболочки. Асинхронность отражается в повышенных и пониженных темпах прироста всех структур мышечной оболочки на различных стадиях развития плодов и телят новорожденного этапа развития.

Коррелятивный анализ между кольцевым и продольным мышечными слоями показал следующие результаты: в слепой кишке коэффициент корреляции равен г = 0,9 у плодов, г = 0,8 у телят новорожденного этапа развития. В ободочной кишке г = 0,9 у плодов в краниальном, среднем и каудальном участках и г = 0,5 у телят новорожденного этапа развития на всех участках ободочной кишки; в прямой кишке г = 0,9 у плодов от 2 до 9 мес., г = 0,1 у телят до 15-сут. возраста (в краниальном участке); г = 0,9 у плодов и г = 0,8 у телят (в каудальном участке).

Таким образом описанная гистология строения мышечной оболочки слепой, ободочной, прямой кишок у плодов от 2 месяцев до 15-суточных телят является морфофункциональным статусом для животных черно-пестрой породы. Эти сведения могут быть использованы, как норма, при сравнении с изменениями при различных заболеваниях кишечника.

На этапе новорожденности телят происходит становление дефинитивного (окончательного) строения кишечной стенки толстой кишки. В динамике роста мышечной оболочки, кольцевого, продольного слоев и МП слизистой оболочки слепой, ободочной, прямой кишок установлены специфические отличия: а) по толщине мышечной оболочки ее кольцевого и продольного слоев, мышечной пластинки слизистой оболочки; б) по относительному росту мышечной оболочки ее кольцевого и продольного слоев, мышечной пластинки слизистой оболочки.

Общий биологический ритм развития мышечной оболочки стенки толстой кишки, а также кольцевого и продольно го слоев мышечной оболочки составляет 2-3 мес., но по промежуткам во времени в разных отделах (слепой, ободочной и прямой) и разных слоях он не совпадает, обеспечивая гетерохронность развития всей мышечной оболочки.

3.3. Дифференцировка и морфометрия клеток гладкомышечной ткани стенки толстой кишки

Молодые гладкомышечные клетки 2-мес. плодов имеют ядра палочковидной формы, в которых выявляются 2-3 ядрышка. Цитоплазма клеток вытянута, интенсивно окрашивается эозином. В миоцитах, образующиеся из , молодых гладкомышечных клеток, в цитоплазме параллельно ядру форми-

руются толстые короткие миофиламенты. На раннеплодной стадии развития плода (2-5 мес.) наиболее мощным является внутренний слой мышечной оболочки. В его толще происходит дальнейшая дифференциация молодых гладкомышечных клеток в зрелые мышечные клетки - миоциты. К 4-месячному возрасту плода внутренний слой мышечной оболочки прямой кишки состоит в основном из молодых гладкомышечных клеток и зрелых миоцитов, которые формируют мышечные пучки. Наружный (продольный) слой мышечной оболочки представлен в основном дифференцирующимися миобластами и молодыми гладкомышечными клетками. К 4-мес. возрасту плода в середине этого слоя обнаруживаются единичные гладкие мышечные клетки. Дифференциация мышечной ткани стенки толстой кишки продолжается и у новорожденных животных.

Для слепой кишки характерно увеличение площади ядра миобластов в 1,4 раза, миоцитов - в 1,7 раза, площадь миобласта увеличивается в 1,2 раза, миоцита - в 3,2 раза. В ободочной кишке площадь ядра миобластов увеличивается в 1,4 раза, миоцитов - в 1,7 раза, а площадь клетки у миобластов увеличивается в 1,1 раза, у миоцитов - в 3,1 раза. Площадь ядра миобластов стенки прямой кишки у плодов коров и новорожденных телят постепенно увеличивается в 1,4 раза, а площадь клетки - в 1,2 раза. Площадь ядра миоцитов у плодов и новорожденных телят достоверно увеличивается в 1,7 раза, а площадь клетки - в 3,1 раза.

Увеличение площади ядра и клетки происходит неравномерно. Изменение площади ядра миоцитов в прямой, ободочной и слепой кишках имеет 3 стадии: первая - увеличение площади от 3-мес. возраста зародыша до 1-сут. возраста телят; вторая - снижение у 3- и 5-суточных телят; третья - увеличение у 10- и 15-сут. телят. Аналогичная динамика изменения площади выявлена и для клетки: первая стадия - увеличение у плодов от 3 мес. до рождения; вторая стадия - снижение у 1 - сут. телят; третья стадия - увеличение от 3 до 15-сут. возраста телят.

По сравнению с миоцитами, изменение площади ядра и площади клетки миобластов в слепой, ободочной и прямой кишках имеет тенденцию более медленного, но равномерного увеличения с 3-мес. возраста плода до этапа новорожденности.

Ядерно-саркоплазменное отношение (ЯСО) миобластов в прямой кишке коррелирует в сторону повышения или понижения и у новорожденных телят оно повышается до 0,6, тогда как у 3-мес. зародышей составляет 0,9. В период от 3 до 7 мес. ЯСО находится в пределах 0,9-0,8-0,9, что свидетельствует о стабильности в развитии ядра и цитоплазмы миобластов.

Ядерно-саркоплазменное отношение миоцитов прямой кишки в раннем онтогенезе повышается в среднем 2,4 раза (от 1,3 у 3-мес. плодов до 3,1 у 15-сут. телят). Изменение ЯСО протекает в 5 стадий: первая - повышение у плодов 3-5 мес.; вторая - снижение у плодов 6-7 мес. и сохранение до 8 мес.; третья - повышение у 9-мес. плодов и сохранения у новорожденных; четвертая -снижения у 1-сут. телят; пятая - повышение у телят от 3 до 15-сут. возраста. Нахождение ЯСО в пределах 1,3 - 1,2 - 1,3 у плодов от 6 мес. до рождения

свидетельствует о стабильности ЯСО, развития ядра и цитоплазмы миоцитов в данном возрасте. Наиболее интенсивно ЯСО повышается на этапе новорожденное™ (от 1,3 у новорожденных до 3,1 у 15-сут. телят). В ободочной и слепой кишках ЯСО миобластов в целом снижается в 1,5 раза (от 1,0 у 3-мес. плодов до 0,6 у новорожденных телят). Изменение ЯСО происходит по следующим стадиям: первая - повышение у плодов 3-4 мес.; вторая - повышение у плодов 5-мес. возраста и третья - снижение от 6-мес. возраста до новорожденных телят. Наиболее стабильным ЯСО выглядит от 4 до 7-мес. возраста плодов, затем наблюдается его повышение.

ЯСО миоцитов ободочной и слепой кишок изменяется в 5 стадий: первая - повышение у плодов 3-5 мес.; вторая - снижение у плодов 6, 7, 8 и сохранения в слепой кишке до 9 мес.; третья - повышение у новорожденных телят; четвертая - снижение у 1-сут. телят; пятая - повышение у телят от 3 до 15-сут. возраста. Стабильность ЯСО в возрасте плодов от 7- мес. до этапа но-ворожденности - в ободочной кишке, от 6-мес. возраста плодов до новорожденных телят - в слепой кишке, говорит о стабильном развитии ядра и цитоплазмы миоцитов в данном возрасте.

Митотический индекс (МИ) миобластов кольцевого слоя мышечной оболочки плодов коров черно-пестрой породы 2-месячного возраста во всех кишках очень высокий. В этом возрасте мышечная ткань включена в активный процесс самоформирования. Впоследствии МИ миобластов заметно снижается в раннем онтогенезе от 18,4 + 0,8 до 6,8 + 0,2 %о в прямой кишке, от 18,3 ± 0,8 до 6,6 ± 0,2 %0, в ободочной кишке, от 18,5 ± 0,8 до 6,4 ± 0,2 %о в слепой кишке. Индекс апоптоза (ИА) миобластов увеличивается от 0,6 + 0,01 до 2,0 ± 0,032 %о в прямой кишке, от 0,6 _+ 0,01 до 2,0 + 0,03 2 %о в ободочной кишке, от 0,6 + 0,01 до 2,1 + 0,032 %о в слепой кишке.

Изменение МИ молодых гладкомышечных клеток протекает аналогично в слепой ободочной и в прямой кишках в три стадии: первая - снижение у плодов от 3 до 7 мес.; вторая - увеличение с 8 мес. до этапа новорожденно-сти; третья - снижение от 1-сут. до 15-сут. возраста телят. Изменение ИА миобластов в слепой, ободочной и прямой кишках происходит в три стадии: первая - увеличение у плодов от 3 до 5 мес.; вторая - снижение у плодов 6-7 мес.; третья - увеличение у плодов 8-9 мес. и до 15-сут. возраста телят. Отношение МИ к ИА миобластов в раннем онтогенезе уменьшается от 30,7 до 2,3 у 15-сут. телят в прямой кишке, в ободочной кишке - от 30,5 до 2,2, в слепой кишке - от 30,8 до 2,2. Изменение отношений МИ к ИА миобластов в слепой, ободочной и прямой кишках протекает в несколько стадий: 1 стадия -снижение у плодов 3-6 мес.; вторая - увеличение на 7 мес.; третья - снижение у плодов 8, 9 мес. и до 15-сут. возраста телят.

МИ молодых гладкомышечных клеток заметно увеличивается в прямой кишке от 8,0 + 0,3 до 18,6 + 0,8 %о, в ободочной кишке - от 8,0 + 0,3 до 17,7 + 0,8 %о в слепой кишке - от 8,2 + 0,3 до 18,6 _+ 0,8 %о. ИА миоцитов в свою очередь снижается одинаково в слепой, ободочной и прямой кишках - от 2,5 + 0,1 до 0,2 + 0,01 %о. Отношение МИ к ИА миоцитов увеличивается в пря-

мой кишке от 3,2 до 93,0; в ободочной кишке - от 3,2 до 93,5; в слепой кишке - от 3,2 до 93,0.

Дифференциация молодых гладкомышечных клеток в миоциты проявляется: 1) Увеличением Бя, Бк, снижением ЯСО; 2) Появлением в саркоплазме тонких нитей миофиламентов; 3) Увеличением количества митохондрий; 4) Снижением МИ к 7-мес. возрасту развития плода и дальнейшим увеличением к рождению, затем вновь снижением к 15-сут. возрасту телят, постепенным подъемом ИА.

С момента рождения до 15-сут. возраста телят промежуточный этап переходит в дефинитивный этап и ему свойственно: 1) Увеличение Бя и особенно Бк, снижение ЯСО, МИ и увеличение ИА; 2) Дефинитивность строения и специфическая деятельность слоев мышечной оболочки, мышечной пластинки слизистой оболочки и миобластов; 3) Относительная дефинитивность строения межклеточного вещества соединительной ткани мышечной оболочки; 4) Дальнейшее формирование и специализация рецепторного аппарата нейронов (Кизим, 2001).

Характерной чертой ГМК стенки толстой кишки является наличие множественных впячиваний клеточной мембраны. Они образуют структуры похожие на пузырьки. При сокращении ГМК количество их увеличивается. ГМК между собой соединены щелевыми контактами. Плазматическая мембрана обладает типичной трехслойной организацией. Снаружи к ней прилегает нежная внеклеточная базальная мембрана. За базальной мембраной и в более обширных внеклеточных пространствах между клетками и волокнами видны многочисленные коллагеновые и эластические волокна. Внутриклеточные мембранные структуры сосредоточены главным образом в цилиндрических областях миоплазмы, прилегающих к полюсам ядра. Эта область содержит митохондрии, аппарат Гольджи, пузырьки покрытые рибосомами, а также множество свободных рибосом. Гранулярная эндоплазматическая сеть более развита только в незрелых (малых) миоцитах. Это связано с синтезом белков, для построения межклеточных структур. Ядро содержит выраженные глыбки хроматина и два или несколько ядрышек. В сократившихся ГМК ядро принимает изогнутую форму.

Миоциты мышечной оболочки кишечной стенки слепой кишки у плодов 6-месячного возраста представлены в основном средними (по величине) клетками. Ядра имеют вытянутую форму. В области полюсов ядра хорошо развиты митохондрии, аппарат Гольджи и эндоплазматическая сеть,- Плотные образования цитоплазмы находятся в стадии формирования. Цитоплазматические пузырьки крупные, щелевые контакты оформлены. Миоциты мышечной пластинки слизистой оболочки, стенки слепой кишки плодов 6 месячного возраста формируют два слоя по 4-6 рядов в каждом слое. Мышечная пластинка слизистой оболочки стенки ободочной и прямой кишок в целом также образует два слоя из 6-8 рядов. Ядра имеют вид вытянутых эллипсоидов, с хорошо выраженной ядерной оболочкой. По сравнению с миоцитами мышечной оболочки кишечной стенки их миоплазма содержит значительно больше плотных образований, меньше количества митохондрий и плазматических пузырьков. Электрон-

но-микроскопические исследования миоцитов мышечной оболочки стенки ободочной и прямой кишок показали, что они в целом имеют аналогичное строение, как и миоциты слепой кишки.

В 7 - 9-месячном возрасте плодов миоциты мышечной оболочки формируют пучки миофибрилл. Количество телец увеличивается. Митохондрии становятся плотными, вытянутой формы, аппарат Гольджи накапливает секрет, полости увеличены. При сокращении миоцита ядро и вся клетка сжимается. Очертание оболочки ГМК не ровное. Митохондрии также сжимаются, а аппарат Гольджи не обнаруживается. Количество клеточных телец увеличивается, а точнее они выявляются четче.

У телят 10 - 12-суточного возраста происходит увеличение ядра и мио-плазмы ГМК. Количество ядрышек в ядре увеличивается, как и плотных телец. Это свидетельствует о повышенной функциональной нагрузке миоцитов в этом возрасте. При сокращении ядро и миоплазма меняют конфигурацию. Пространство межклеточного вещества увеличивается, в нем осмифилиру-ются коллагеновые волокна. Наибольшее количество плотных телец выявляются в миоцитах прямой кишки, по сравнению с миоцитами остальных кишок. В 15 - суточном возрасте телят миоциты мышечной оболочки принимают дефинитивное строение как у взрослых животных (Чернов 2005). С увеличением ядра и миоплазмы увеличивается количество плотных телец. Наряду с синтезом и накоплением миофибриллярного аппарата наблюдается прорастание и контактирование нервных структур с сократительными элементами, что в свою очередь обуславливает начало мышечной активности гладких миоцитов ультраструктурно проявляющихся в изменении конфигурации ядра гладких миоцитов. Ядерная оболочка приобретает складчатый вид, в ней образуется большое количество инвагинаций. В цитоплазме ГМК обнаруживаются крупные митохондрии, что также свидетельствует о мышечной активности и энергетических затратах.

Проведенные исследования по цитологической характеристике миоцитов мышечной оболочки толстой кишки у плодов телят черно-пестрой породы в возрасте от 2 месяцев до 15-суточного возраста позволяют сделать следующие обобщения:

1. Миоциты слоев мышечной оболочки и мышечной пластинки слизистой оболочки имеют аналогичные размеры: длинного диаметра ядра, короткого диаметра ядра, площади ядра, длины гладкомышечных клеток, ширины гладкомышечных клеток, площади гладкомышечных клеток, цитоплазменно-ядерного отношения. Это свидетельствует о едином дифферонном составе клеток мышечной пластинки и мышечных слоев оболочки.

2. С увеличением возраста животного от 5 до 9 месяцев происходит увеличение длинного диаметра ядра, площади ядра, длины и ширины глад-комышечной клетки, площади клетки и ЦЯО. Достоверное увеличение (Р<0,05) этих показателей наблюдается в возрасте от 5 месяцев до 9 месяцев.

3. Увеличение площади ядра и цитоплазмы миоцитов мышечной пластинки стенки прямой кишки происходит с 4 - месячного возраста (Р<0,05).

Это косвенно свидетельствует о высокой функциональной нагрузке на мышечную пластинку слизистой оболочки этого органа.

4. Электронно-микроскопически (ЭМИ) в гладкой мускулатуре выявляются миоциты, характеризующиеся различным уровнем электронной плотности цитоплазмы, т е. темные - сокращенные, и светлые - релаксированные. В состав гладкой мышечной ткани также входят покоящиеся ма-лодифференцированные предшественники. Эти мелкие клетки характеризуются слабым развитием внутриклеточных органелл, высоким ядерно-цитоплазменным показателем и тесно интегрированы с окружающими ГМК.

ЭМИ показали, что ГМК одноядерные, веретенообразной формы с заостренными концами. Сократительный материал не разделен на фибриллы. На продольных срезах видны разнообразные прилегающие к клеточной мембране дифференциальные участки, получившие название клеточных телец. На поперечных срезах они имеют вид плотных, почти округлых образований. Характерной чертой ГМК является наличие множественных впячиваний клеточной мембраны. Они образуют структуры похожие на пузырьки. При сокращении ГМК количество их увеличивается. ГМК соединены между собой щелевыми контактами. Плазматическая мембрана обладает типичной трехслойной организацией. Снаружи к ней прилегает нежная внеклеточная ба-зальная мембрана. За базальной мембраной и в более обширных внеклеточных пространствах между клетками и волокнами видны многочисленные коллагеновые и эластические волокна.

3.4. Динамика нуклеиновых кислот, белков в миоцитах мышечной оболочки стенки толстой кишки

Цитохимические исследования дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) показали, что в кариоплазме миоцитов мышечной оболочки стенки толстой кишки она выявляется в виде крупных и различных мелких глыбчатых образований. Интенсивность реакции ДНК ядер миоцитов в стадии интерфазы остается без изменения. Интенсивность реакции ДНК в ядре и в цитоплазме миоцитов обусловлена наличием различных фракций и местом нахождения в миоцитах МП слизистой оболочки и кольцевого и продольного слоев мышечной оболочки. В процессе дифференцировки в миоцитах происходит смена гомогенного и диспергированного распределения ДНК ядра на неравномерное и гетерохроматическое. Двухцепочечная ДНК выявляется в цитоплазме миоцита в области локализации митохондрий.

Проведенные цитохимические исследования нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) в миоцитах мышечной оболочки толстого отдела кишечника у плодов и телят новорожденного этапа развития чёрно-пёстрой позволяют сделать следующие обобщения: 1) Интенсивность реакции ядра и цитоплазмы миоцитов обусловлена наличием различных фракций ДНК и РНК, содержание которых зависит от локализации миоцитов: в ГМК МП слизистой оболочки; в ГМК мышечной оболочки кольцевого слоя; в ГМК продольного слоя. 2) Реакция на ДНК и РНК также зависит от принадлежности

миоцитов к различным отделам толстой кишки (в слепой, ободочной, прямой); 3) Гладкомышечные клетки имеют различную реакцию на содержание нуклеиновых кислот; 4) По длине толстой кишки - миоциты слепой кишки содержит меньше РНК, чем миоциты ободочной и прямой кишок, то есть выявляется кау-дально-краниальный градиент; 5) В динамике двухцепочной ДНК в гладкомы-шечных клетках сохраняется относительная стабильность. В процессе диффе-ренцировки миоцитов происходит смена гомогенного и диспергированного распределения ДНК ядра на неравномерное и гиперхроматическое. Двухцепочная ДНК выявляется в цитоплазме миоцитов в области локализации митохондрий.

В гладкомышечных клетках слепой кишки суммарные белки по Бонхе-гу выявляются в виде зерен, распределенных по всей кариоплазме, придающие ей фиолетовую окраску. У плодов 5 - месячного возраста отмечается следующая картина. В ядре и цитоплазме миоцитов интенсивность окраски суммарных белков примерно соответствует реакции всех кишок. Ядра миоцитов МП содержат среднего размера гранулы суммарных белков, которые распределены по всей кариоплазме, наиболее интенсивная окраска суммарных белков отмечается в области ядерной оболочки. Цитоплазма миоцитов заполнена гранулами средней величины, которые расположены по всей её площади. В кариоплазме миоцитов продольного слоя наблюдается увеличение количества крупных, интенсивно окрашенных, гранул суммарных белков. В цитоплазме миоцитов гранулы распределены равномерно по всей клетке. В миоцитах циркулярного слоя интенсивность окраски уменьшается.

В 7 - месячном возрасте плодов отмечается небольшое снижение интенсивности реакции в миоцитах слепой кишки относительно предыдущих возрастов. Очевидно, это связано со снижением суммарных белков в ядре и цитоплазме миоцитов. В ядрах миоцитов МП видны крупные глыбки суммарных белков темно-синего цвета, около ядерной оболочки также видна тёмная полоса с утолщениями, в цитоплазме гранулы средних размеров распределённых по всей площади. В гладкомышечных клетках отмечается снижение окраски. В ядрах клеток кольцевого и продольного слоев наблюдаются синие гранулы суммарных белков, распределённых по всей кариоплазме. В цитоплазме миоцитов суммарный белок выделяется в виде гранул, распределенных по всей клетке.

В 9 - месячном возрасте плодов отмечается снижение интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах слепой кишки относительно предыдущих возрастов. В ядрах миоцитов МП видны крупные глыбки суммарных белков синего цвета, около ядерной оболочки так же видна тёмная полоса с утолщениями. В цитоплазме миоцитов гранулы средних размеров распределены они по всей площади. В продольном слое гладкомышечные клетки имеют более светлое окрашивание. Гладкомышечные клетки кольцевого слоя характеризуются некоторым уменьшением интенсивности реакции гранул суммарных белков, распределенных по всей клетке.

У новорожденных телят в гладкомышечных клетках слепой кишки наблюдается увеличение содержания суммарных белков. Об этом свидетельствует увеличение количества крупных интенсивно окрашенных гранул. Гра-

пулы распределены по всей клетке. Ближе к периферии клетки отмечается повышение интенсивности реакции. 10- суточный возраст телят характеризуется снижением интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах слепой кишки, по сравнению с предыдущим возрастом. В ядрах миоцитов МП видны глыбки темно-синего цвета, около ядерной оболочки фиолетовая полоса, в цитоплазме гранулы средних размеров распределённых по всей площади. Гладкомышечные клетки циркулярного слоя имеют более светлое окрашивание. В миоцитах продольного слоя так же идёт повышение интенсивности реакции на белки. В ядрах миоцитов отмечаются синие гранулы суммарных белков, распределённых равномерно по всей кариоплазме. В цитоплазме миоцитов суммарный белок выявляется по Бонхегу в виде более темных крупных гранул, распределённых по всей клетке. У 15-суточных телят интенсивность реакции на суммарные белки миоцитов слепой кишки остаётся практически на том же уровне, что и у 10-суточных телят.

Интенсивность реакции на суммарные белки в миоцитах мышечной оболочки ободочной кишки слабее, чем слепой кишке. В гладкомышечных клетках ободочной кишки у плодов 5-месячного возраста отмечается следующая картина. Ядра миоцитов МП содержат среднего размера гранулы суммарных белков, которые распределены по всей кариоплазме. Наиболее интенсивная реакция отмечается в миоцитах в области ядерной оболочки. Цитоплазма миоцитов заполнена крупными гранулами, которые расположены по всей цитоплазме, окрашиваются они в синий цвет. У гладкомышечных клеток продольного слоя интенсивность реакции сохраняется. В кариоплазме миоциов наблюдается увеличение количества крупных, интенсивно окрашенных гранул. В цитоплазме миоцитов гранулы распределены равномерно. В гладкомышечных клетках кольцевого слоя интенсивность окраски увеличивается.

В 7 - месячном возрасте плодов отмечается небольшое снижение интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах ободочной кишки относительно предыдущего возраста. Очевидно, это связано со снижением суммарных белков в ядре и цитоплазме миоцитов. Гладкомышечные клетки продольного слоя имеют более тёмное окрашивание. Миоциты циркулярного слоя характеризуются некоторым снижением интенсивности окраски гранул, распределенных по всей клетке. В 9- месячном возрасте плодов отмечается снижение интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах ободочной кишки относительно предыдущего возраста. В ядрах миоцитов МП видны глыбки средних размеров суммарных белков. Около ядерной оболочки видна тёмная полоса с утолщениями. В цитоплазме миоцитов гранулы средних размеров, распределёны они равномерно по всей площади, придающие ей голубую окраску. В миоцитах продольного слоя отмечается увеличение интенсивности реакции на суммарные белки. В миоцитах кольцевого слоя ядра содержат гранулы, окрашивающие в синий цвет. Вся кариоплазма миоцитов заполнена мелкими гранулами. Ближе к ядерной оболочке они сливаются и образуют тёмную полоску. В цитоплазме миоцитов наблюдаются гранулы среднего размера. Они распределёны равномерно по всей клетке.

У новорожденных животных в гладкомышечных клетках ободочной кишки наблюдается увеличение содержания суммарных белков. Об этом свидетельствует увеличение количества крупных интенсивно окрашенных гранул. Гранулы распределены по всей клетке. Ближе к периферии миоцитов отмечается повышение интенсивности окраски. Миоциты МП окрашиваются более интенсивно.

10-суточный возраст животных характеризуется снижением интенсивности реакции суммарных белков в миоцитах ободочной кишки по сравнению с предыдущим В ядрах миоцитов МП видны глыбки темно-синего цвета, около ядерной оболочки - темная полоса, в цитоплазме - гранулы средних размеров распределённых по всей площади. Гладкомышечные клетки продольного слоя имеют более тёмное окрашивание. В миоцитах кольцевого слоя так же наблюдается повышение интенсивности окраски. В ядрах миоцитов циркулярного слоя синие гранулы суммарных белков распределённых по всей кариоплазме. В цитоплазме миоцитов суммарный белок представлен в виде более светлых гранул, распределённых по всей клетке и образующих сеть. У телят 15-суточного возраста интенсивность реакции на суммарные белки в миоцитах ободочной кишки остаётся практически на том же уровне, что и у 10 - суточных животных.

Интенсивность реакции на суммарные белки по Бонхегу в гладкомышечные клетки прямой кишки значительно больше, чем ободочной кишки. Ядра миоцитов МП содержат крупные гранулы суммарных белков, которые распределены по всей кариоплазме. Наиболее интенсивная реакция на суммарные белки в миоцитах отмечается в области ядерной оболочки. Цитоплазма клеток заполнена крупными гранулами, которые расположены по всей площади клетки, которая принимает синий цвет. В кариоплазме миоцитов продольного слоя наблюдается увеличение количества крупных, интенсивно окрашенных гранул суммарных белков. В цитоплазме миоцитов гранулы распределены равномерно по всей клетке. В гладкомышечных клетках кольцевого слоя интенсивность реакции на суммарные белки уменьшается. Гранулы суммарных белков распределены по всей кариоплазме, наибольшее их количество в области ядерной оболочки.

В 7 - месячном возрасте плодов отмечается небольшое снижение интенсивности реакции суммарных белков в миоцитах прямой кишки относительно предыдущего возраста. Очевидно, это связано со снижением суммарных белков в ядре и цитоплазме миоцитов. В ядрах миоцитов МП видны крупные глыбки суммарных белков темно-синего цвета. Гладкомышечные клетки продольного слоя имеют более светлое окрашивание. Миоциты кольцевого слоя характеризуются некоторым уменьшением интенсивности окраски гранул суммарных белков, распределенных по всей клетке.

В 9-месячном возрасте плодов отмечается снижение интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах прямой кишки относительно предыдущего возраста. В ядрах миоцитов МП видны небольшие глыбки суммарных белков, темно-синего цвета, около ядерной оболочки также видна тёмная полоса. В цитоплазме миоцитов гранулы средних размеров распределённых

по всей площади. В миоцитах продольного слоя отмечается увеличение интенсивности реакции. В гладкомышечных клетках продольного слоя ядра содержат гранулы, окрашивающиеся в синий цвет. Ближе к ядерной оболочки они сливаются и образуют тёмную полосу. В цитоплазме миоцитов кольцевого слоя наблюдаются мелкие гранулы светло-синего цвета, распределены они по всей клетке.

У новорожденных телят в гладкомышечных клетках прямой кишки наблюдается увеличение содержания суммарных белков. Об этом свидетельствует увеличение количества крупных, интенсивно окрашенных гранул. Гранулы равномерно распределены по всей клетке. Ближе к периферии клетки отмечается повышение интенсивности реакции. МП окрашивается более интенсивно.

10 - суточный возраст животных характеризуется снижением интенсивности реакции на суммарные белки в миоцитах прямой кишки по сравнению с предыдущим возрастом. В ядрах миоцитов МП видны глыбки темно-синего цвета, около ядерной оболочки - темная полоса, в цитоплазме - гранулы средних размеров распределённых по всей площади. В ядрах миоцитов отмечаются синие гранулы суммарных белков, распреде-лёны по всей кариоплазме. В цитоплазме миоцитов суммарные белки выявляются в виде светло-синих гранул. Они распределёны по всей клетке и образуют сеть. У 15-суточных телят интенсивность реакции на суммарные белки в миоцитах прямой кишки остаётся практически на том же уровне, что и у 10 - суточных телят.

Таким образом, в процессе исследования выяснено:

1. В толстом отделе кишечника наиболее интенсивная реакция на суммарные белки в миоцитах МП слизистой оболочки, менее интенсивная в миоцитах продольного слоя, а наименьшая в миоцитах кольцевого слоя кишечника. Количество общего белка зависит от функционального состояния клетки и возраста животных. По интенсивности реакции белков в миоцитах можно предположить, что МП слизистой оболочки подвержена более интенсивной физиологической нагрузке, поэтому в нем более интенсивно идут обменные процессы.

2. Наибольшая интенсивность реакции на суммарные белки наблюдается в миоцитах прямой кишки. Можно предположить, по функциональному значению прямая кишка занимает наивысшее положение. Далее идет снижение интенсивности реакции до ободочной кишки. В слепой - практически на уровни ободочной кишки наблюдается снижение, а в прямой - подъём.

4. В динамике содержания суммарных белков в миоцитах толстой кишки (в целом) выявляются 3 последовательные стадии:

- от 5 мес. до 7 - 9 мес. - снижение суммарных белков;

- от 9 мес. до рождения - накопление суммарных белков;

- от 1 до 15 сут. - снижение суммарных белков.

Очевидно, до 7 месяцев у плодов идёт интенсивное становление пищеварительной функции. В возрасте 1-15 суток у животных наблюдается интенсивная реакция в миоцитах на общие белки.

ВЫВОДЫ

1. Динамика роста массы и длины тела, массы и длины толстой кишки и ее отделов (слепой, ободочной и прямой кишок) следует закону неравномерного и асинхронного роста. Асинхронность выражается в повышенных и пониженных темпах роста. Длина тела, толстой кишки и ее отделов по коррелятивным данным опережает рост массы тела и толстой кишки, а масса тела - рост массы толстой кишки и ее отделов. Развитие толстой кишки, как органа, на плодном этапе и у новорожденных телят протекает в 2 периода. Первый период - интенсивных формообразовательных процессов или формирования временного органа до 5 - 5,5-мес. возраста плода. Второй - формирование дефинитивного органа у плодов от 5 - 5,5 мес. до 15-сут. возраста телят. Масса тела и толстой кишки положительно коррелируют между собой (г = +0,58), как и длина (г = +0,96).

2. Кольцевой слой мышечной оболочки наиболее развитый, по сравнению с продольным. Динамика его роста у плодов от 2 до 5 мес. по всем отделам одинакова и увеличивается в сред нем в 2, 3 раза.

Продольный слой мышечной оболочки подвздошной кишки, формируется позднее. На раннеплодной стадии (2-5 мес.) он отстает в развитии, на среднеплодной стадии (5-7 мес.) почти догоняет кольцевой слой и к моменту рождения выравнивается с ним.

3. Гистогенез гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки на плодном и новорожденном этапах развития подчинен: каудально - краниальному градиенту для толстой кишки (как органа); брыжеечно - дистальному градиенту структур и ткани кишечной стенки; асинхронному и гетерохронному развитию клеточных дифферонов гладкомышечной ткани в зависимости от их локализации; определенной динамикой изменения площади ядра и всей клетки, ЦЯО, МИ и ИА.

4. Дифференциация миобластов в молодые гладкомышечные клетки сопровождается увеличением основных и кислых белков, исследуемых групп белков, РНК,. Дифференциация молодой гладкомышечной клетки в миоцит характеризуется увеличением кислых, основных и суммарных белков, РНК, групп белков, особенно карбоксильных и аминных, утратой равномерного распределения ДНК в ядре, снижением гликогена. После 6-7-мес. возраста плодов коров, по данным ГХИ, уровень гликогена в миоцитах становится минимальным, в связи с утратой его во время сокращения мышечных элементов.

5. Гистогенез гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки на раннем онтогенезе имеет два периода. Первый - формирования тканевых систем или временной гладкомышечной ткани (до 5 - 5,5-мес. возраста плода), который имеет этапы: закладки (до 3-мес. возраста плода) и формирования (у плодов от 3 до 5 - 5,5 мес.) временной гладкомышечной ткани. Второй период - дефинитивного развития (у плодов от 5 - 5,5 мес. до 15-сут. возраста телят). Последний имеет этапы: начального дефинитивного развития (у плодов

от 5 - 5,5 мес. до рождения) и промежуточного дефинитивного развития (у телят от рождения до 15 сут.).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований: по динамике роста массы и длины тела, массы и длины толстой кишки; по возрастной архитектонике стенки слепой, ободочной и прямой кишок, тканей и образующих их оболочек; по закономерностям развития тканей стенки толстой кишки; об источниках образования клеточных дифферонов тканей и их дифференцировке, по динамике роста площади ядра и цитоплазмы клеточных дифферонов, их ЦЯО, МИ и ИА; по локализации и динамике содержания нуклеиновых кислот, нуклеопроте-идных, углеводных и белковых веществ; по периодизации развития толстой кишки составляющих ее оболочек и тканей относятся к фундаментальным и могут быть использованы:

- При написании соответствующих разделов и справочных руководств по сравнительной анатомии, эмбриологии, гистологии и эволюционной физиологии;

- Для чтения лекций и проведения лабораторно-практических занятий в учебном процессе, по эмбриологии, общей и частной гистологии, цитологии анатомии и физиологии на биологических, ветеринарных и зоотехнических факультетах высших учебных заведений;

- В лабораторных исследованиях породных и индивидуальных особенностей развития пищеварительной системы крупного рогатого скота с целью установления адаптационных возможностей;

2. Данные о динамике напряжённости, темпах и биологических ритмах роста массы, длины тела и толстой кишки, толщины кишечной стенки, её оболочек, а также о формах взаимосвязи между динамикой роста массы тела и массой толстой кишки, ростом длины тела и длины толстой кишки позволяют специалистам - практикам и экспериментаторам целенаправленно влиять на их развитие.

3. Выполненная работа открывает новые направления: в анатомии, гистологии, эмбриологии - изучение периодизации, этапности, критических фаз развития тканей и органов; в физиологии - изучение «эмбрионального пищеварения», как первого этапа становления специфической пищеварительной функции. Познание их в возрастном, эволюционном и сравнительном аспектах является биологической основой управления развитием и повышением продуктивности животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Темлякова B.C. Ультраструктура гладкой мышечной ткани толстого отдела кишечника плодов и новорожденных телят / B.C. Темлякова, В.А. Здоровинин, Л.П. Тельцов // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2008. - № 4 (20). - С. 40-42.

2. Темлякова B.C. Нуклеиновые кислоты мышечной ткани толстой кишки у телят новорожденного этапа развития черно-пестрой породы / В.А. Здоровинин, B.C. Темлякова, Л.П. Тельцов // Ресурсосберегающие экологически безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф. С.А. Лапшина. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2008. С. 297-300.

3. Темлякова B.C. Рост стенки ободочной кишки у телят новорожденного этапа развития / В.А. Здоровинин, B.C. Темлякова, Л.П. Тельцов // Ресурсосберегающие экологически безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф. С.А. Лапшина. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2008. С. 300310.

4. Темлякова B.C. Ультраструктура эпителиоцитов толстого отдела кишечника новорожденных телят / В.А. Здоровинин, B.C. Темлякова // XXXVII Огаревские чтения: материалы науч. конф.: в 3 ч. ч.2.: Естественные науки. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2009. - С.66-68.

5. Темлякова B.C. Динамика роста плодов и толстой кишки у крупного рогатого скота черно-пестрой породы / B.C. Темлякова, В.А. Здоро-випнн, Л.П. Тельцов //Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки. - 2009. - №1 (ч. 2.) - С. 226227.

6. Темлякова B.C. Закономерности развития гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки в эмбриогенезе / B.C. Темлякова, В.А. Здоровинин, Л.П. Тельцов //Ресурсосберегающие экологически безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции: материалы V Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф. С.А. Лапшина. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2009. С. 453-455.

Подписано в печать 10.11 09. Объем 1,25 пл. Тираж 100 экз. Заказ № 1591. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

ВЫВОДЫ

1. Рост массы тела и толстой кишки и её отделов (слепой, ободочной и прямой кишок), также и длина у плодов коров черно-пестрой породы и новорожденных телят протекает по закону неравномерного развития. Масса и длина тела толстой кишки за исследуемый период (от 2 мес. плодов до 15 сут. телят) увеличивается в 113,6 раза и 14,9 раза.

Рост длины толстой кишки в эмбриогенезе и на новорожденном этапе, как и рост длины тела, определяет рост их массы.

Масса толстой кишки у плодов и новорожденных телят относительно (по Броди) имеет повышенные темпы на 3, 4, 6 и 7 мес. и 8 и 12 сут. и пониженные темпы 5, 8, 9, новорожденные и 3, 5, 10 сут. В динамике длины повышение 3, 4, 6, 9 мес., 5, 8, 12 сут. и понижение - на 5, 7, 8 мес., новорожденных, 1, 3, 10 и 15 сут. В развитии плода установлена критическая фаза (по массе и длине) в развитии тела на 6 и 7 мес., в развитии толстой кишки 6 и 8 месяце.

2. Кольцевой слой мышечной оболочки наиболее развитый, по сравнению с продольным. Динамика его роста у плодов от 2 до 5 мес. по всем отделам одинакова и увеличивается в среднем в 2, 3 раза.

Продольный слой мышечной оболочки прямой кишки, формируется позднее. На раннеплодной стадии (2-5 мес.) он отстает в развитии, на средне-плодной стадии (5-7 мес.) почти догоняет кольцевой слой и к моменту рождения выравнивается с ним.

3. Гистогенез гладкой мышечной ткани стенки толстой кишки на плодном и новорожденном этапах развития подчинен: каудально - краниальному градиенту для? толстой кишки (как органа); брыжеечно - дистальному градиенту структур и ткани кишечной-стенки; асинхронному и гетерохронному развитию клеточных дифферонов гладкомышечной ткани в зависимости от их локализации; определенной динамикой изменения площади ядра и всей клетки, ЯЦО, МИ и ИА.

4. Дифференциация миобластов в молодые гладкомышечные клетки сопровождается увеличением основных и кислых белков, исследуемых групп белков, РНК. Дифференциация молодой гладкомышечной клетки в миоцит характеризуется увеличением кислых, основных и суммарных белков, РНК, групп белков, особенно карбоксильных и аминных, утратой равномерного распределения ДНК в ядре.

5. Наибольшая интенсивность реакции на суммарные белки наблюдается в миоцитах прямой кишки. Снижение интенсивности реакции на суммарные белки наблюдаются в ободочной и слепой кишке. В динамике содержания суммарных белков в миоцитах толстой кишки (в целом) выявляются 3 последовательные стадии: - от 5 мес. до 7 - 9 мес. - снижение суммарных белков;

- от 9 мес. до рождения - накопление суммарных белков;

- от 1 до 15 сут. - снижение суммарных белков.

В толстом отделе кишечника наиболее интенсивная реакция на суммарные белки в миоцитах мышечной пластинки слизистой оболочки, менее интенсивная в миоцитах продольного слоя, а наименьшая - в миоцитах кольцевого слоя кишечника. Количество общего белка зависит от функционального состояния клетки локализации и возрастного аспекта животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные данные о закономерностях морфогенеза мышечной пластинки слизистой оболочки и гладкомышечной ткани толстой кишки у плодов и новорожденных телят черно-пестрой породы являются фундаментальными и рекомендуются для использования в, учебном процессе-в, высших учебных заведениях ветеринарного и зоотехнического профиля, при написании соответствующих разделов; и справочных руководств по анатомии, гистологии, эмбриологии и эволюционной физиологии.

2. Данные о динамике напряжённости, темпах и биологических ритмах роста массы, длины тела и толстой кишки, толщины кишечной стенки, её оболочек, а также о формах взаимосвязи между динамикой роста массы тела и массой толстой кишки, ростом длины тела и длины толстой кишки позволяют специалистам - практикам и экспериментаторам целенаправленно влиять на их развитие.

3. Полученные сведения по возрастной архитектонике мышечной оболочки и мышечной пластинки слизистой оболочки толстой кишки плодов и новорожденных телят черно-пестрой породы, образующих их клеточных дифферонов по возрастной динамике, ЯЦО, МИ и ИА, по локализации и содержанию нуклеиновых кислот, нуклеопротеидных и белковых групп рекомендуются для использования специалистам-практикам и экспериментаторам в своей работе.