Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные изменения в семенниках хряков при применении цереброспинальной жидкости

Г 1 и им

— > М',0 /■">; На правах рукописи *" ^

УДК:636.4:824.1:591.147.8

ЛЕТКИН АЛЕКСАНДР ИЛЬИЧ

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СЕМЕННИКАХ ХРЯКОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ

16.00.02- патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САРАНСК - 2000

Работа выполнена на кафедре незаразных болезней и радиологии Мордовского государственного университета имени Н.П.Огарева.

Научный руководитель - доктор биологических наук Зенкин Александр Сергеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Ежкова Маргарита Степановна доктор биологических наук, профессор Великанов Валерий Иванович

Ведущее учреждение - Ивановская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится2000 г. в 10 часов ш заседании диссертационного совета К 063.72.07 при Мордовском государственном университете им.Н.П. Огарева (430000, Саранск, ул, Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовскоп государственного университета им.Н.П. Огарева.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета,

доцент ./¿¿¿&Исе^- И.Р.Шашанов

Г, $

1. ОБЩАЯ'ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Цереброспинальная жидкость (ЦСЖ, лик-вор) является составной частью центральной нервной системы. В ее состав входят многие биологически активные-вещества, в том числе и синтезируемые в структурных образованиях головного мозга, и содержатся они в ликворе в оптимальных для функционирующего организма количествах (Пападато Л.Л. и др.,1935, 1949; Розен В.Б.,1984; Пу-латов А.П. и др., 1990; Cereco А.V.,1970; Deng Quan-sheng., 1989 и ДР-).

Широкий спектр биологически активных веществ ЦСЖ позволяет успешно использовать ее для модификации определенных функций в организме, в .том числе для коррекции некоторых физиологических и патологических состояний (Атанова Е.М. ,1953, 1954; Фридман А.П.,1971; Ткач В.В. и др.,1978,1986; Зенкин A.C. и др.,1995,1997; Пильгаев Ф.П.,1999).

Вместе с тем литературные данные убедительно свидетельствуют о том, что не проводится целенаправленная работа по изучению морфо-функционального состава ЦСЖ крупного рогатого скота при различных физиологических состояниях. Отсутствуют данные- о влиянии цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров на репродуктивные органы хряков, что и предопределило основу наших исследований.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась оценка состава цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров и изучение ее влияния на морфофункциональные изменения крови и семенники хряков при парентеральном введении.

Для достижения поставленной цели решались следующие конкретные задачи:

- разработать эффективный способ получения ЦСЖ от коров;

- оценить морфофункциональный состав цереброспинальной жидкости

бесплодных и беременных коров;

- изучить влияние разных доз ЦСЖ бесплодных коров на клини-ко-гематологические показатели и морфофункциональное состояние семенников у хряков;

- изучить влияние разных доз ЦСЖ беременных коров на клини-ко-гематологические показатели и морфофункциональное состояние семенников у хряков;

- разработать методические указания по экспериментальному и клиническому изучению цереброспинальной жидкости в качестве биологически активного средства в животноводстве.

1.3 Научная новизна. Впервые в сравнительном . аспекте изучен морфофункциональный состав ЦСЖ бесплодных' и беременных коров. Получены новые данные о влиянии ЦСЖ коров в. зависимости от их физиоло-

гического состояния на клинико-гематологические показатели хряков при ее парентеральном применении. Изучено влияние ЦСЖ бесплодных и беременных коров в зависимости от дозы и кратности ее введения на семенники хряков. Получен патент на изобретение: "Система для отбора цереброспинальной жидкости".

1.4. Практическая значимость работы. Полученные данные о влиянии ЦСЖ бесплодных и беременных коров на семенники хряков позволяют использовать ее для коррекции репродуктивной функции у самцов в животноводческой практике. Разработана система для отбора ЦСЖ у животных, которую можно использовать для практических целей в ветеринарных учреждениях. Разработаны методические указания: "Экспериментальное и клиническое изучение ликвора крупного рогатого скота в качестве биологически активного средства в животноводстве". Материалы исследований могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарном, биологическом и медицинском факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Результаты сравнительной оценки состава цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров.

2. Клинико-гематологические показатели хряков при применении цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров.

3. Морфофункциональные изменения в семенниках хряков при применении цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров.

1.5. Реализация результатов исследований. Основные научные подходы и положения диссертационной работы достаточно полно отражены в 11 опубликованных научных работах, в т.ч. 8 научных статьях, научном отчете, методическом указании и патенте на изобретение.

1.6. Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы изложены, обсуждены и доложены на научных конференциях (Ога-ревские чтения, конференция молодых ученых) Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева (Саранск, 1997, 1998, 1999), научном отчете НИИ "Агрокомплекс" по теме "Разработка способов получения, консервации и применения в животноводстве • ликвора крупного рогатого скота как биологически активного средства" за 1997 год; научно-практической конференции, посвященной' 40-летию ВНИИВВиМ (Покров, 1998), научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства (Казань, 1999).

1.7. Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 184 страницах машинописного текста. Состоит из общей характерис-

тики работы, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собстве?шых исследований и их обсуждения,, выводов, списка использованной литературы и приложений. Экспериментальный цифровой материал представлен в 18 таблицах и иллюстрирован 22 рисунками. Список использованной литературы включает всего 225 источников, в том числе 42 на иностранных языках.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 2.1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследования проводились в период с 1996 по 1999 гг. по программе 4.2.2.2.2.10. НИИ "Агрокомплекс" (г.Саранск)- "Повышение продуктивности сельского хозяйства Нечерноземной зоны Российской Федерации", госбюджетный НИР М53/12А-96- "Разработка способов получения, консервации и применения в животноводстве ликвора крупного рогатого скота как биологически активного средства" (№ государственной регистрации 01870063350). Общая схема исследований представлена в таблице.

ОБЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Серия Наименование Вид Груп- Кол-во Примечание

опытов исследовании жив-го па жив-ых

1. Получение церебро- Коровы 1 20 Бесплодные

спинальной жидкости -//- 2 20 Беременные

2. Оценка состава Коровы 1 10 Бесплодные

ЦСЖ -//- 2 10 Беременные

3. Изучение влияния ЦСЖ ЦСЖ:

бесплодных коров на Хряки 1 9 20 мл-однократно

клинико-гематологи- -//- ' 2 9 40 мл-однократно

ческии статус и мор- 3 9 20 мл-двукратно

фологические показа- -//- 4 9 Контроль

тели семенников

4. Изучение влияния ЦСЖ ЦСЖ:

беременных коров, на Хряки 1 9 20 мл-однократно

кл инико-г ематологи- -//- 2 -9 40 мл-однократно

ческии статус и мор^ 3 9 20 мл-двукратно

фологические показа- 4 9 Контроль

тели семенников

Отбор ЦСЖ (1-я серия опытов) осуществляли от бесплодных и беременных коров. Цереброспинальную жидкость- получали от клинически здоровых животных перед убоем. Данные благополучия здоровья животных подтверждались ветеринарными документами и при послеубойном осмотре туш и органов.

Во второй серии опытов была проведена оценка состава ЦСЖ бесплодных и беременных коров. Состав ликвора исследовали на кафедре незаразных болезней и радиологии Мордовского госуниверситета, в МГАВМиБ им. К.Н. Скрябина, ВНИИВВиМ (г.Покров) с использованием различных приборов и методик. Были определены следующие показатели ЦСЖ: плотность- методом Филлипса (Меньшиков В.В.,1987), резервная щелочность- по И.П.Кондрахину (1985), рН, концентрация общего белка, количество клеток крови- по И.И.Мироновой (1987), полипептидный состав- методом электрофореза в полиакрилашдном геле, сахар- методом фотоглюкозы (Макаров А.Ю. ,1984), количество хлоридо'в- методом меркулометрического титрования, содержание витамина Е- с помощью прибора "Милихром-4" (высокооптическая жидкостная хромотография), содержание амилазы, фосфатазы, холинэстеразы, карбоксилазы, вазоп-рессина, окситоцина, прогестерона, гонадотропного гормона- качественными методами, используемыми во ВНИИВВиМ, активность ACT и AJIT-с использованием наборов химических реактивов фирмы "JIAXEMA" (Словакия), содержание тироксина, трийодтиронина, кортизола- методом РИА, уровень макро- и микроэлементов- методом атомной адсорбционной спектрометрии.

Изучение клинико-гематологических показателей и морфофункцио-нального • состояния семенников при введении ЦСЖ бесплодных и беременных коров проводили на хряках 1-1.5 месячного возраста. Опыты проведены в две серии (3-я и 4-я) на базе подсобного хозяйства АО "Орбита" Октябрьского района Республики Мордовия. В 3-й серии опытов хрякам вводились различные дозы ЦСЖ бесплодных коров, в 4-й -ЦСЖ беременных (3-4 месяца) коров.

Животные в 3-й и 4-й сериях опытов по принципу аналогов были разделены на 4 группы, по 9 голов в каждой. Хрякам первой группы вводили ЦСЖ коров в дозе 20 мл однократно, второй группы- 40 мл однократно, третьей группы- 20 мл двукратно, с интервалом 10 дней. Четвертая группа служила контролем.

Ликвор вводили в мышцы внутренней поверхности бедра. Использовалась прижизненно полученная- ЦСЖ. Животные•всех групп находились в одинаковых условиях кормления и содержания. Рационы были составлены с учетом химического состава местных кормов в соответствии с нормами РАСХН (1995).

Клиническое состояние животных оценивали с использованием об-

непринятых методов исследования с учетом температуры тела, массы, 1астоты пульса и дыхательных движений.

Взвешивание животных и отбор проб крови для морфологических и биохимических исследований проводили до введения цереброспинальной жидкости, а затем каждый месяц до завершения опыта.

В цельной крови изучали содержание гемоглобина, эритроцитов, тейкоцитов, а также выводили лейкограмму. В сыворотке крови опреде-тяли содержание общего белка, кальция, фосфора и резервной щелоч-■юсти.

Исследование гематологических показателей проводили согласно общепринятых методик (Кондрахин И.П. (1985), Антонов В.И. (1991), <альницкий Б.В. (1987), Кудрявцевой Л.А. (1972).

Через 1, 2 и 3 месяца после введения ЦСЖ бесплодных и беременных коров хряков кастрировали (по 3 животных на срок). Семенники осматривали с целью выявления возможных макроскопических изменений. , Лаосу органа определяли путем взвешивания. Объем, относительную иассу и размеры семенников установили по B.C. Шипилову (1988), 1.А.Шилкиной (1978), Н.Н.Орловой (1988).

Микроскопические исследования семенников проводили по гистологическим препаратам. Для этого кусочки семенников толщиной 0.5 см, фиксировали в формалине возрастающей" концентрации (от 6 до 10 Z) или жидкости Карнуа. Затем органы заливали в парафин, учитывая рекомендации Б.Ромейс (1953), Г.А. Меркулова (1969). Срезы толщиной 5 икм окрашивали гематоксилин-эозином. \

Гистологические срезы изготавливались из центральной части семенников. Параметры измерения снимались только с канальцев, имеющих круглую форму. Морфологические характеристики половых желез хряков изучались под микроскопом "БИОЛАМ". В каждой группе просматривались препараты от трех животных.

При микроскопической оценке были выведены показатели долевого вклада интерстициальной ткани, просвета извитых семенных канальцев и сперматогенного эпителия семенника, относительного количества эн-цокриноцитов в органе, диаметра извитых семенных канальцев, числа канальцев со слущенным сперматогенным эпителием, а также выводились индексы сперматогенеза и активности семенников. Исследования проводились с учетом рекомендаций Г.Г. Автандилова (1973,1990), И.В.Са-ноцкого (1979,1986), Л.В.Даниловой (1978,1982), Л.А.Шилкиной (1987).

Статистическую обработку цифровых данных проводили на компьютере IBM PC с помощью программы STAT (Торопов В.Л., .1993). Достоверность полученных данных определяли по Стьюденту. Данные считались достоверными при Р<0.05.

- , £ 2.2. ОТБОР И ИЗУЧЕНИЕ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТАВА ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БЕСПЛОДНЫХ И БЕРЕМЕННЫХ КОРОВ В результате этих исследований отрабатывались вопросы получения ЦСЖ от бесплодных и беременых коров и оценка ее состава. Принимая во внимание возможность использования в ветеринарной практике больших количеств ликвора, нами были использованы различные способы \ системы для отбора биологических жидкостей (Чубарь В.К.(1951), Маг-да И.Н.(1963), Ткач В.В.(1984) и др.). На основании литературных \ собственных изысканий нами была предложена и использована для практических целей система для отбора цереброспинальной жидкости (Патент на изобретение №2125470. Приоритет от 12.03.97). Было установлено, что при отборе ЦСЖ от беременных коров необходимо соблюдать осторожность. Для предупреждения скручивания матки и других патологий коров фиксировать для отбора ликвора желательно в стоячем положении в станке или даже без станка.

Отбор цереброспинальной жидкости от бесплодных и беременных коров нами проведен в условиях АО "Максо" (Саранский мясокомбинат) и предприятия "Пищекомбинат" Республики Мордовия. Для этих целей использовали различные способы фиксации коров (в том числе фиксация i лежачем положении, стоя в станке и без станка) с использованием различных фиксационных инструментов и применением как известных методов и систем, так и различных их модификаций. Цереброспинальную жидкость для оценки состава и биологической эффективности получали от клинически здоровых коров. Данные клинического благополучия животных подтверждались при послеубойном осмотре туш и органов. Цис-тернальную пункцию производили после соответствующей обработки и стерилизации кожи животного в месте пункции, а также рук оператора и инструментария.

Несомненный интерес для обоснования биологического действия цел бесплодных и беременных коров имела проработка литературных ■ данных по биохимическому и морфологическому составу ЦСЖ бесплодных и беременных животных. Анализ свидетельствует о крайней ограниченности сведений по данному вопросу (Сулаквелидзе Т.С., 1980; Бургман Г.П., 1981; Макаров А.Ю.,1984). Имеющиеся литературные данные свидетельствуют о некоторых отличиях в биохимических и морфологических показателях крови у таких животных (Кудрявцев A.A., 1974; Кондрахин И.П.,1985; Карпуть И.М.,1986; Панова H.A.,1993).

Собственные экспериментальные данные по изучению физико-химических свойств ликвора показывают, что плотность ЦСЖ бесплодных и стельных коров составляет 1.007- 1.008 кг/л. Водородный показатель (pH) без достоверных отличий между животными и составляет. 7.4- 7.6. Резервная щелочность ликвора у всех животных колеблется в пределах

49-53 об/Z. Полученные результаты физико-химических свойств ЦСЖ бесплодных и беременных коров согласуются с данными ряда исследований (Макаров А.Ю. ,1978,1984; Цветанова E.H.,1986; Эйнштейн Э.Р.,1988; Панова H.A.,1993; Леткин А.И.,1997) и не сходны у разных животных.

Вместе с тем установлено, что биохимические показатели цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров имеют некоторые отличия. Так, содержание общего белка у бесплодных коров несколько выше аналогичного показателя у стельных коров. При этом отмечено, что в ликворе бесплодных коров содержание высокомолекулярных пептидов (с молекулярным весом от 60 до 70 кДа) выше, а низкомолекулярных (до 40-60 кДа)- ниже по сравнению с ЦСЖ беременных коров. Сходные данные отмечены Н.А.Пановой (1993).

Установлено также, что в ЦСЖ беременных коров концентрация Сахаров, тироксина, трийодтиронина, кортизола, активность ACT, коэффициент Де Ритиса выше, а содержание токоферола, хлоридов, кальция, калия и активность АЛТ ниже аналогичных показателей ЦСЖ бесплодных коров. Показано, что во всех исследованных пробах ликвора не обнаружено меди, ртути и мышьяка. Во всех пробах обнаруживаются гона-дотропный гормон, окситоцин, вазопрессин, а также ряд ферментов-амилаза, карбоксилаза. фосфатаза, холинэстераза.

В целом, полученные нами данные согласуются с некоторыми литературными данными по составу ЦСЯ животных (Шамбуров Д.А.,1954; Фридман А.П. ,1971; Макаров А.¡0. ,1973,1984; Цветанова Е. Н;,1986; Эйнштейн Э.Р., 1988; Панова H.A., 1993; Пильгаев Ф.П.,1999). Вместе с тем, они дополняют их в плане особенностей состава ЦСЖ бесплодных и беременных коров.

2.3. ИЗУЧЕНИЕ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СССТОЯНИЯ КРОВИ И СЕМЕННИКОВ У ХРЯКОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ЦСЖ БЕСПЛОДНЫХ И БЕРЕМЕННЫХ КОРОВ

Учитывая современные экологические условия, интенсивный характер ведения животноводства, состояние воспроизводства животных поиск различных средств воздействия на репродуктивные органы животных становится в настоящее время актуальным вопросом.

Особый теоретический и практический интерес представляют данные о влиянии ЦСЖ на репродуктивные органы и воспроизводительную способность человека и животных (Атанова Е.М.,1955; Куприянов С.Н. ,1955; Топало В.Г., 1986; Бондаренко В.И.', 1988).

Для изучения биологического действия ЦСЖ бесплодных и беременных коров на репродуктивные органы самцов нами были выбраны хряки, возраст которых составлял около 1-1.5 месяца. В этот период репродуктивные органы животных наиболее восприимчивы к различным факто-

1С

рам воздействия. Опыты по изучению биологического действия ЦСЛ бесплодных и беременных коров на клинико-гематологический статус \ морфологическое состояние семенников хряков проводились в нескольких сериях.

Выбор объектов исследований обосновывался тем, что большинстве исследователей изучали действие ЦСЖ на женскую половую систему. Принималась во внимание высокая чувствительность половой системы к различным внешним воздействиям, а также известная ее значимость е организме животных. О влиянии ЦСЖ на репродуктивные органы упоминается в работах Е.М. Атановой (1953, 1954, 1955), А.П.Фридмана (1957, 1971), В.И.Бондаренко (1988). В своих работах авторы не указывали происхождение ликвора, а именно физиологическое состояние, пол и возраст животных-доноров во время отбора ЦСЖ

Для изучения биологических эффектов ЦСЖ были выбраны различные ее дойы (20 мл и 40 мл однократно, 20 мл двукратно с интервалом 10 дней). Подбор доз ЦСЖ осуществляли согласно рекомендаций, предложенных В.В. Ткачом с соавт. (1986), А.С.Зенкиным и соавт (1999). Наблюдение за животными вели в течение 3-х месяцев после введения ЦСЖ.

Установлено, что клинические показатели подопытных животных при применении различных доз цереброспинальной жидкости бесплодных коров (температура тела, частота пульса и дыхательных движений) через 1, 2 и 3 месяца опыта имели возрастные изменения и достоверно не отличались от аналогичных показателей контрольных животных и физиологической нормы (Беляков И.М.,1968; Гомозков 0.В.,1981; Георгиевский В.И.,1990; Голиков А.Н.,1991). Аналогичные данные были получены при применении ЦСЖ беременных коров.

Введение некоторых доз ЦСЖ бесплодных и беременных коров сопровождалось более интенсивным приростом массы тела животных по сравнению с контрольными. Полученные данные согласуются с результатами исследований, проведенных Е.М.Долгушиным (1982), ' В.В. Ткачом (1986,1987), В.И. Бондаренко .(1988), ф.П.Пильгаевым (1998). Наибольший прирост-массы тела у хряков отмечен при применении ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл на животное. Данные результаты • можно сравнить с применением стимуляторов различного происхождения (Дьяков В.М.,1980; Журбенко А.М.,1983) и хирургической кастрацией самцов (Райцина С.С.,1970; Радченков В.П. и др., 1991).

Применение цереброспинальной жидкости как бесплодных, так и беременных коров не сопровождалось выраженным изменением основных гематологических показателей у хряков всех подопытных групп, по сравнению с контролем и физиологической нормой для животных данного вида и возраста. Полученные результаты удовлетворительно согласуются

с многочисленными исследованиями (Коромыслов В.Ф. и др.,1972; Кар-путь И.М.,1975,1986; Пильгаев Ф.П.,1999). Вместе с тем отмечено, что за весь период наблюдения уровень гемоглобина у животных, которым вводили ЦСЖ бесплодных и беременных коров, несколько выше, чем у животных контрольной группы. Повышенные значения данного показателя выявлено у животных, которым вводили'ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл на животное. Количество эритроцитов в крови у животных всех подопытных групп имело тенденцию к повышению по сравнению с аналогичным показателем контрольных животных. Однако изменения происходят в пределах границ физиологической нормы. Полученные результаты, по-видимому, объясняются общими закономерностями действия стимулирующих препаратов и сопоставимы с результатами исслед'ований И.А.Калашника (1979), А.Ф. КиселеЕОЙ (1983), Л.П.Маланина (1988).

Изменение количества лейкоцитов также происходило в пределах физиологической нормы. Отмечено увеличение их количества через 1 месяц после введения ЦСЖ бесплодных и стельных коров у животных всех опытных групп. Максимальное их количество выявлено у животных, которым вводили ЦСЖ двукратно с интервалом 10 дней. Через 2 и 3 месяца количество лейкоцитов уже колебалось в пределах границ физиологической нормы. Изменение количества лимфоцитов и нейтрофилов у животных всех групп в наблюдаемый период носило выраженные возрастные различия. Отмечена некоторая тенденция к повышенному уровню данных показателей у подопытных животных. Результаты проведенных исследований согласуются с данными Саноцкого И.В. и соавт. (1975), Д.Н. Лазарева и соавт. (1985) и вытекают из общих закономерностей реакции организма на вещества биологической природы.

При изучении морфологических изменений в клеточных структурах (в цитоплазме и ядре) не установлено каких-либо выраженных патологических изменений в клетках крови у хряков при применении ЦСЖ бесплодных и стельных коров.

Биохимическими исследованиями крови опытных хряков при применении ЦСЖ бесплодных и стельных коров достоверных отличий, по сравнению с контрольными животными, не установлено. Увеличение содержания общего белка у животных происходило в пределах физиологической нормы и носило характер возрастных изменений. Изменение резервной щелочности крови, кальция и фосфора происходит в пределах колебаний показателей здоровых животных.

Полученные'результаты сопоставимы с показателями животных данного вида и возраста (Кудрявцев A.A.,1974; Карпуть И.М.,1975, 1986).

В целом, проведенные исследования клинико-гематологических показателей свидетельствуют, что применение цереброспинальной жидкое-

ти, полученной от коров при различных физиологических состояниях, таких как бесплодие и беременность,' не вызывает выраженных достоверных отличий клинических показателей у опытных животных по сравнению с контрольными животными и физиологической нормой. Вместе с тем, отмечены более интенсивный прирост живой массы у хряков при однократном применении ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл, тенденция к повышенному уровню гемоглобина, количества эритроцитов и лейкоцитов. Происходило омоложение отдельных форм лейкоцитов. Не выявлено патологических изменений со стороны клеточных структур. Биохимические показатели крови находились в пределах физиологических границ I1 изменение их содержания носит характер возрастных различий.

При оценке биодогического'действия цереброспинальной жидкое^ бесплодных и беременных коров на репродуктивные органы хряков учитывались закономерности и динамика морфологических изменений в семенниках. Особое внимание было уделено изучению сперматогенеза.

Характер и выраженность морфологических изменений в семенника) у опытных хряков зависели от дозы, кратности введения и от каки> животных-доноров получали ЦСЖ.

Установлено, что через 1 месяц после введения ЦСЖ как бесплодных, так и беременных коров изменения в семенниках хряков носши выраженный характер и обнаруживались и при внешнем осмотре, и пр1 микроскопическом изучении структур семенников. При этом отмечен; увеличение абсолютной массы семенников при уменьшении их относительной массы. Увеличивались размеры семенников и уменьшался и; удельный вес. Эти и другие изменения связаны, в основном, с отека тканей семенника' в результате нарушения проницаемости кровеносны: сосудов. Аналогичные результаты были получены при различных вида воздействия химическими препаратами на семенники И.В. Саноцким ! др. (1979), Б. В. Грицуляком (1985), Л. А. Шилкиной (1987).'Изменялось соотношение основных структур семенников, нарушалась их гене ративная и инкреторная функции, что проявлялось уменьшением диамет ра извитых семенных канальцев, снижением относительного количеств ондокриноцитов, снижался индекс сперматогенеза у опытных хряков Следует отметить, что данные изменения в семенниках при применени ЦСЖ неспецифичны, так как аналогичные изменения наблюдаются пр введении токсинов, гамма-облучении, механической трагме, а такж применении гормональных препаратов (Райцина С.С.,1969; Орлов Н.Н.,1987 и др.).

Наибольшие морфологические изменения в семенниках хряков чере 1 месяц выявлены при двукратном введении ЦСЖ беременных коров в до зе 20 мл на животное. Полученные результаты, возможно, объясняютс отличиями состава ЦСЖ беременных коров по сравнению с бесплодными

а также кумуляцией биологических эффектов при двукратном ее введении (Мозгов И.Е.,1974; Маланин Л.П.,1988).

Через 2 месяца после введения ЦСЖ бесплодных и беременных коров в семенниках у подопытных хряков деструктивные процессы имеют тенденцию к нарастанию. Вместе с' тем установлено уменьшение отека ин-терстициальной ткачи семенников, увеличение их плотности по сравнению с аналогичным показателем контрольных животных. Наблюдается тенденция к увеличению масштабов морфологических изменений в семенниках в зависимости от дозы ЦСЖ. В этот период при изучении гис-тоструктуры установлено разрастание соединительной тканью межка-нальцевой части семенников. В результате этого плотность семенников подопытных хряков значительно выше аналогичного показателя контрольных животных. Индекс активности половых желез у подопытных хряков достоверно (Р<0.05) ниже аналогичного показателя контрольных животных.

На данный срок наблюдения количество эндокриноцитов у хряков всех подопытных групп значительно уменьшено. Кроме того, при применении ТТ.СЖ беременных коров обнаруживаются эндскрйноциты с различными патологическими изменениями. Степень выраженности данных изменений различна и находится в прямой зависимости от дозы вводимой ЦСЖ.

Изменения деструктивного характера наблюдались и со стороны извитых семенных канальцев. Отмечалось снижение их долевого вклада, /меньшение диаметра, а также возрастало количество канальцев со :лущенным сперматогенным эпителием. Снижение долевого вклада семен-гах канальцев происходило, в основном, за счет увеличения долевого зклада интерстициальной ткани, которая в свою очередь подвергалась значительному разрастанию соединительнотканными структурами. В результате наблюдается нарушение взаимосвязи стромы и паренхимы се-«енников. Аналогичные изменения наблюдала С.С.Райцина (1970,1985) 1ри воздействии на семенники различными физическими и химическими факторами. ~

• При введении ЦСЖ как бесплодных, так и беременных коров проис-содило уменьшение дизлетра извитых семенных канальцев. Наибольшее уменьшение данного показателя отмечено при двукратном введении ЦСЖ беременных коров.

Изучая состояние сперматогенного эпителия и половых клеток от-гечено, что через 2 месяца после введения различных доз ЦСЖ бесп-юдных и беременных коров наблюдалось увеличение количества семен-1ых канальцев с признаками десквамации сперматогенного эпителия. 1ри оценке индекса сперматогенеза установлено отсутствие сперматид [ спермиев у хряков, которым вводили ЦСЖ. Изучение морфологического :троения клеток сперматогенного эпителия позволило выявить признаки

некробиоза в них, а также изменения, характеризующиеся уменьшением размеров сперматогониев и сперматоцитов по сравнению с контрольными животными.

Через 3 месяца после ведения ЦСЖ бесплодных и беременных коров в семенниках хряков отмечались значительные деструктивные изменения основных их структур. Наблюдалось уменьшение диаметра извитых семенных канальцев, увеличение количества канальцев со слущенным ■сперматогенным эпителием. Происходило уменьшение долевого вклада семенных канальцев, снижение относительного количества эндокриноци-тов в половых железах опытных хряков по сравнению с аналогичным показателем контрольных животных. Кроме того, обнаруживались семенные канальцы, в которых отсутствует сперматогенный эпителий, а также отмечено зарастание просвета канальца. Отмечалось уменьшение относительного количества клеток сперматогенного эпителия и появление среди них различных патологических форм, что свидетельствовало с нарушении процессов сперматогенеза у подопытных хряков.

В целом, данные исследований биологического действия свидетельствуют о том, что при применении ЦСЖ бесплодных и беременных коров значительных отклонений клинико-гематологических показателей от контроля и физиологической нормы не происходит. Отмечено стимулирующее действие ЦСЖ коров на росто-весовые показатели подопытных животных. Наибольший прирост массы тела, а также тенденцию к повышенному содержанию в крови общего белка, гемоглобина, эритроцитов I лейкоцитов у хряков наблюдали при однократном применении ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл на животное. Однако, колебание гематологических показателей происходило в пределах физиологической нормы. Наибольшее стимулирующее действие на росто-весовые и клшико-гематологические показатели наблюдалось при однократном применении ЦС1 беременных коров в дозе 20 мл на животное.

Данные морфологического исследования семенников у хряков пр! применении ЦСЖ свидетельствуют о развитии деструктивных процессов I них. Степень морфологических изменений находилась в прямой зависимости от дозы и кратности 'введения ЦСЖ. При этом введение хряка) ЦСЖ беременных коров, по сравнению.с бесплодными, проявлялось боле! выраженными морфологическими изменениями в основных структурах семенников, а также значительным снижением их генеративной и инкреторной функции у животных. Наибольшие изменения в семенниках хряко: отмечены через 3 месяца после двукратного введения цереброспиналь ной жидкости беременных коров в дозе 20 мл на животное.

Обсуждая механизм биологического действия цереброспинально жидкости коров на репродуктивные органы хряков следует отметить что он представляет сложный биохимический процесс, затрагивающи

ногие жизненно важные органы и системы. Эти процессы предположи-ельны, до конца не изучены и представляют практический интерес для удущих экспериментов. По нашему мнению, первостепенную роль в ме-анизме играет головной мозг, в частности, его отдел - эпифиз, чгенно эпифиз влияет на процессы размножения, воздействуя на гипо-аламус и переднюю долю гипофиза,- а также непосредственно на репро-/ктивные органы. Так, установлено, что продукт деятельности эпифи-д- мелатонин, имеет ингибирувщее влияние на половую систему. В ЦСЖ ; мелатонин содержится и имеет высокую физиологическую активность Макаров А.Ю.,1984; Эвартау Э.Э.,1969). По сообщениям ряда авторов &зов Е.И., 1973; АжипаЯ.И., 1981; Голиков А.Н. и др. ,.1991; 1лп-)1п б.А., 1980), биологические вещества, вырабатываемые эпифизом, )гут поступать в желудочки мозга и с ликвором- в гипоталамические штры. С помощью мелатонина осуществляется контроль гипоталамуса > стороны эпифиза. Он участвует в регуляции выработки гонадотроп-IX гормонов, воздействуя через гипоталамус на гипофиз. Продуцируе-[е гипоталамусом статины и либерины поступают в гипофиз и регули-тот выделение лютеинизирукщего и фолликулостимулирующего гормонов. | данным В.И.Грищенко (1979), мелатонин, блокируя продукцию люли-рина, подавляет выработку лютеинезирущего гормона, а нродш^ст-нник мелатонина- серотонин, блокируя продукцию фоллиборинл, по-вляет выработку фолликулостимулирующего гормона. При парентераль-м введении цереброспинальной жидкости она может через ЦНС или не-средственно оказывать влияние на продукцию гонадотропных гормо-в и развитие половых органов.

Более выраженные морфологические изменения в семенниках у хря-в при применении ЦСЖ беременных коров, по всей вероятности, можно ьяснить повышенным уровнем эстрогенов у беременных животных и их рмозящим воздействием на мужскую; половую систему.

Следовательно, в семенниках хряков, в зависимости от происхож-тя, дозы и кратности введения ЦСЖ, в ранние сроки возникают из-1ения в сосудистом русле на микроциркуляторном уровне, в последуем развиваются изменения в их основных структурах, протекающие гчале в виде компенсированных дистрофий, а в дальнейшем обуслав-;ают стойкие гистоструктурные изменения.

Данные исследования представляют интерес для исследователей, гамающихся вопросами коррекции половой функции у самцов животных ¡личного вида без применения сильнодействующих гормональных пре-1атов и имеют определенные перспективы для практической ветерина-

ВЫВОДЫ

1. Разработан эффективный способ извлечения ЦСЖ у коров с уче-

том их физиологического состояния (различные стадии беременности бесплодие и т.д.). Материалы исследований использованы при разработке системы для отбора цереброспинальной жидкости (Патент I 2125470 от 27.01.99. Приоритет от 12.03.97 г.).

2. Установлено, что ЦСЖ бесплодных и беременных коров отличает ся по морфологическому и биохимическому составу. В ЦСЖ беременны коров, по сравнению с бесплодными, отмечается повышенное содержали •Сахаров, тироксина, трийодтиронина, кортизола и пониженное содержа ние токоферола, хлоридов, кальция и калия. В ЦСЖ бесплодных коро активность ACT и коэффициент Де Рйтиса ниже, a ACT- выше, чем у бе ременных коров.

3. Применение ЦСЖ бесплодных и беременных'коров не вызывает вь раженных изменений клинического статуса подопытных животных. Вмесм с тем, отмечено положительное влияние ЦСЖ на росто-весовые показа тели хряков. Наибольшее увеличение массы тела подопытных хряков ус тановлено при введении ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл на живо! ное.

4. Парентеральное введение хрякам ЦСЖ бесплодных и беремент коров в дозе 20.0, 40.0 мл однократно и 20.0 мл двукратно привод! к стимуляции процессов кроветворения, проявляющихся умеренным пов1 шением количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, а таю омоложением клеточного состава белой крови за счет палочкоядерш форм нейтрофилов. Более выраженная реакция кроветворения отмече] через 1 месяц после применения ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл : животное.

5. Результаты морфологического исследования семенников у хряк при применении различных доз ЦСЖ бесплодных коров свидетельствуют наличии в органе деструктивных процессов, проявляющихся уменьш нием относительной и абсолютной массы и увеличением их плотност уменьшением долевого вклада извитых семенных канальцев, спермат генного эпителия и увеличением долевого вклада интерстициальн ткани. Данные изменения наиболее выраженно проявляются через 3 м сяца после двукратного введения ЦСЖ в дозе 20 мл на животное.

6. При применении ЦСЕ беременных коров морфологические измен ния в семенниках у хряков носят сходный характер, как и при ввел нии ЦСЖ бесплодных коров, но более выражены и протекают интенсу нее. Наибольшие морфологические изменения в основных структурах с менников также установлены через 3 месяца после двукратного вве; ния ЦСЖ беременных коров в дозе 20 мл на животное.

7. Введение хрякам ЦСЖ бесплодных коров проявлялось нарушен! сперматогенеза. Установлено уменьшение количества половых клетс их лизис и рыхлое расположение. Через 3" месяца после двукратш

¡ведения ЦСЖ развитие половых клеток отмечено на стадиях сперматид t единичных спермиев.

8. Применение ЦСЖ беременных коров также сопровождалось наруше-;ием сперматогенеза у хряков.' Однако, через 3 месяца после двукрат-ого введения ЦСЖ в дозе 20 мл на животное развитие половых клеток ггмечено на стадиях сперматоцитов и единичных сперматид. Имелись звитые канальцы, в которых отсутствовали как половые клетки, так и перматогенный эпителий.

9. Морфологические изменения в семенниках хряков при применении С'Ж коров обусловлены изменением в сосудистом русле на микроцирку-яторном уровне. В последующем развиваются изменения в основных труктурах органа, протекающие вначале в виде компенсированных истрофий, а в дальнейшем развиваются стойкие гистоструктурные из-енения.

10. Разработаны методические указания:" Экспериментальное и кли-ическое изучение ликвора крупного рогатого скота в качестве биоло-ически активного средства в животноводстве". Проведенные исследо-ания свидетельствуют о перспективности дальнейших научных прорабс-эк по использованиям ЦСЖ коров с целью регуляции репродуктивной /нкции у самцов. Для этих целей наработаны препараты ЛИКГОО-УК и 4КР0С-5К2.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследования ЦСЖ могут быть использованы в вете-тарной практике для регуляции половой функции самцов животных, сработанная система рекомендуется для использования при отборе Ж в научных и практических целях.

2. Материалы научных исследований могут быть использованы в ¡ебком процессе на ветеринарных, биологических и медицинском фа-гльтетах, а также при написании учебников, учебных пособий и мо->графий.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ П0 ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зенкин A.C., Пильгаев Ф.П., Лабинов В.П., Родина В.II., Гар-'з В.И., Леткин А.И. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого юта как биологически активное вещество // Вестник ветеринарии.-•аврополь., N3. 1997.- С.28-30.

2. Зенкин A.C., Леткин А.И., Пильгаев Ф.Н., Горюнов A.B. Эффектный способ прижизненного получения ликвора крупного рогатого :ота /XXVI Огаревские чтения. Тез. науч. конф., поев. 40-летию Аг-.рного института Мордовского -госуниверситета им. Н.П. Огарева, аранск. ,,1997.- С.24-25.

3. Леткин А.И., Пильгаев Ф.П., Зенкин A.C. Некоторые биохими-ские показатели цереброспинальной жидкости крупного рогатого ско-

та в норме и при различных физиологических состояниях //XXVI Ог? ревские чтения. Тез. науч. конф., поев. 40-летию Аграрного институ та Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева,- Саранск.,1997 - С.44-45.

4. Оценка качественного состава цереброспинальной жидкост крупного рогатого скота в норме, патологических состояниях и разрг ботка ветеринарно-технических требований // Отчет о научно-исследс вательской работе.- Саранск, 1997,- 21 с.

5. Леткин А.И., Ивойлова Ю.В. Оценка действия цереброспинальнс жидкости крупного рогатого скота на репродуктивные органы хряко! //XXVII Огаревские чтения. Матер, науч. конф. Мордовского госум верситета им. Н.П.Огарева.- Саранск., 1998. - С.124-125.

6. Зенкин A.C., Бударков В.А., Боченков В.Ф., Денисов В.Т Пильгаев Ф.П., Леткин А.И., Белкин C.B., Лабинов В.Г1. Экспериме!: тапыюе и .клиническое изучение ликвора крупного рогатого скота качестве биологически активного средства в животноводстве //XXVI Огаревские чтения. Матер, науч. конф. Мордовского госуниверситет им. Н.П.Огарева. - Саранск, 1998. - С.123-124.

7. Зенкин A.C., Пильгаев Ф.П., Леткин А.И., Белкин C.B., Лаб!-нов C.B. Оценка цереброспинальной жидкости крупного рогатого скот и качестве биологически активного средства //Диагностика, прбфилан тика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями .w вотных. Матер. Меддунар. научно-практ. конф., посвящ. 40-летию BHV ветеринарной вирусологии и микробиологии.- Покров,1998. -С.419-42С

8. Зенкин A.C., Бударков В.А., Боченков В.Ф., Денисов B.I Пильгаев Ф.П., Леткин А.И., Белкин C.B., Лабинов В.П. Эксперимег тальное и клиническое изучение ликвора крупного рогатого скота качестве биологически активного средства в животноводстве //Метода ческие указания. -Саранск, 1999.-15 с.

9. Леткин А.И., Пильгаев Ф.П., Лабинов C.B., Белкин C.B., Щеп баков A.B. Оценка состава цереброспинальной жидкости у крупного рс гатого скота/ Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии. Мс тер. Республ. научно- производст. конф.- Казань, 1999. - С 127-126

10. Леткин А.И. Сравнительная оценка морфологического состоят семенников у хряков при применении цереброспинальной жидкости бесг лодных й беременных коров/ XXVIII Огаревские чтения. Матер. науч[ конф. Мордовского госуниверситета им. Н.П.Огарева.- Саранск, 199? -С. 136-137.

И. Система.для отбора цереброспинальной жидкости: Патент ; изобретение №2125470, приоритет от 12.03.97 г./Зенкин A.C., Пильгс ев Ф.П., Гришин А.И., Леткин А.И., Денисов В.Г., 4 е.: ил.

Цереброспинальная жидкость имеет также важное значение интегрирующего тракта для нейрогуморзльных гормонов, причем биологически активные нейропептиды, высвобождающиеся в лик-вор , достигают почти всех участков мозга, оказывая тем самым свое регулирующее влияние (Кассиль Г.Н.1963; Бредбери М.,1983; Чепурнов С.А.,1985; Макаров А,Ю,,1992; Cserr T.F.,1974).

Широкий спектр биологически активных веществ ЦСЖ позволяет успешно использовать ее для модификации определенных Функций в организме, в том числе для коррекции некоторых Физиологических и патологических состояний (Атанова Е.М.,1953, 1954; Фридман А.П.,1971; Ткач В.В. и др.,1978,1986; Зенкин А.С. и др.,1995,1997; Пильгаев Ф.П.,1999),

Вместе с тем литературные данные убедительно свидетельствуют о том, что не проводится целенаправленная работа по изучению морфофункционального состава ЦСЖ крупного рогатого скота при различных физиологических состояниях. Отсутствуют данные о влиянии цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров на репродуктивные органы хряков, что и предопределило основу наших исследований.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась оценка состава цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров и изучение ее влияния на морфофункцио-нальные изменения крови и семенники хряков при парентеральном введении*

Для достижения поставленной цели решались следующие конкретные задачи:

- разработать эффективный способ получения ЦС1 от коров;

- оценить морфофункциональный состав цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров;

- изучить влияние разных доз ЦСЖ бесплодных коров на клинико-гематологические показатели и морфофункциональ ное состояние семенников у хряков;

- изучить влияние разных доз ЦСЖ беременных коров на клинико-гематологические показатели и морфофункциональное состояние семенников у хряков;

- разработать методические указания по экспериментальному и клиническому изучению цереброспинальной жидкости в качестве биологически активного средства в животноводстве,

1.3 Научная новизна, Впервые в сравнительном аспекте изучен морфофункциональный состав ЦСЖ бесплодных и беременных коров, Получены новые данные о влиянии ЦСЖ коров, в зависимости от Физиологического состояния, на клинико-гематологические показатели хряков при ее парентеральном применении, Изучено влияние ЦСЖ бесплодных и беременных коров, в зависимости от дозы и кратности ее введения, на семенники хряков. Получен патент на изобретение:"Система для отбора цереброспинальной жидкости".

1.4. Практическая значимость работа. Полученные данные о влиянии ЦСЖ бесплодных и беременных коров на семенники хряков позволяют использовать ее для коррекции репродуктивной функции у самцов в животноводческой практике. Разработана система для отбора ЦСЖ у животных, которую можно использовать для практических целей в ветеринарных учреждениях. Разработаны методические указания: "Экспериментальное и клиническое изучение ликвора крупного рогатого скота в качестве биологически активного средства в животноводстве". Материалы исследований могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарном, биологическом и медицинском факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий,

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Результаты сравнительной оценки состава цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров,

2. Клинике-гематологические показатели хряков при применении цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных косое- ,

3. Морфофункциональные изменения в семенниках хряков при применении цереброспинальной жидкости бесплодных и беременных коров,

1.5, Реализация результатов исследований. Основные научные подходы и положения диссертационной работы достаточно полно отражены в 11 опубликованных научных работах, в т.ч. 8 научных статьях, научном отчете, методическом указании и патенте на изобретение.

1.8. Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы изложены, обсуждены и доложены на научных конференциях (Огаревские чтения, конференция молодых ученых) Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева (Саранск, 1997, 1998, 1999), научном отчете НИИ "Агрокомп-лекс" по теме "Разработка способов получения, консервации и применения в животноводстве ликвора крупного рогатого скота как биологически активного средства" за 1997 год, научно-практической конференции, посвященной 40-летию ВНИИВВиМ (Покров, 1998)3 научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства (Казань, 1999),

1,7, Объем и структура работы, Диссертационная работа изложена на 184 страницах машинописного текста, Состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материала и методов исследования;, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка использованной литературы и приложений. Экспериментальный цифровой материал представлен в 18 таблицах и иллюстрирован 22 рисунками. Список использованной литературы включает всего 225 источников, в том числе 42 на иностранных языках,

1. Результаты исследования ЦСЖ могут быть использованы в ветеринарной практике для регуляции половой функции самцов животных. Разработанная система рекомендуется для использования при отборе ЦСЖ в научных и практических целях.

2. Материалы научных исследований могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных, биологических и медицинских факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий.