Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред

Лащ, Андрей Петрович

Диссертации по ветеринарии → Патология, онкология и морфология животных

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред

ДИССЕРТАЦИЯ

Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред - диссертация, тема по ветеринарии

АВТОРЕФЕРАТ

Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред - тема автореферата по ветеринарии

Лащ, Андрей Петрович Саранск 2003 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.02

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред

На правах рукописи

ЛАЩ АНДРЕЙ ПЕТРОВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА КАК КОМПОНЕНТА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Специальность 16.00.02- патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Саранск -2003

Работа выполнена на кафедре незаразных болезней и радиологии Аграрного института Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Зенкин Александр Сергеевич доктор биологических наук Юрков Сергей Григорьевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Столяров Владимир Алексеевич

кандидат ветеринарных наук, заслуженный ветеринарный врач Российской Федерации Денисов Василий Георгиевич

Ведущая организация: Нижегородская государственная

сельскохозяйственная академия

«*<»

Защита диссертации состоится 2003 года в /г часов

на заседании диссертационного совета К 212.117.05 в Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева

Адрес г 430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева

Автореферат разослан «¿»^С ¿^Р 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических нау^ ^^^^^^¿^¿^Т.А. Романова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы

Известно, что сыворотка крови млекопитающих, обогащая ростовыми, адгезивными и протективными факторами питательные среды, используемыми для культивирования большинства клеточных культур, нестандартна и ее применение связано с постоянным риском контаминации клеток микоплазмами, вирусами и прионами. Получение сублиний перевиваемых клеток, способных к росту в бессывороточных средах или средах с минимальным ее содержанием, является актуальной проблемой биотехнологии.

Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота, имея в своем составе небольшое количество белка, особенно высокомолекулярных фракций, содержит большой набор биологически активных веществ. К ним относятся гормоны, вырабатываемые структурными образованиями головного мозга, а также синтезируемые периферическими эндокринными железами и другими субстанциями. Кроме гормонов центральной нервной системы в цереброспинальной жидкости обнаруживаются метаболиты мозга (эндорфины, энкефали-ны, либерины, простагландины, медиаторы), микро-, макроэлементы, глюкоза и другие вещества (Атанова, 1953,1955; Кассиль, 1963; Фридман, 1967,1971; Ткач с соавт., 1978;1986; Зенкин с соавт., 1995; Пильгаев, 1999; Леткин, 2000; Лабинов, 2000; Калягина, 2002; Сегесо, 1970). Цереброспинальная жидкость, в отличие от сыворотки крови животных более стабильна и консервативна по биохимическому составу. В связи с этим открываются определенные перспективы по снижению содержания сыворотки крови в ростовой среде и заменой ее цереброспинальной жидкостью в качестве ростостимулирующего компонента.

В доступной литературе встречаются лишь единичные работы (Ткач с соавт., 1985; Бес1ого1¥, 1960) по исследованию цереброспинальной жидкости как компонента питательных сред для перевиваемых культур клеток, что в основном и предопределило наш научный и практический интерес.

1.2. Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы явилось изучение возможности применения цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред, используемых в биотехнологии для культивирования клеток. Для достижения поставленной цели решались следующие конкретные задачи:

• проведение сравнительной оценки состава сыворотки крови и цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота;

• получение перевиваемой линии клеток, адаптированной к росту в питательной среде с цереброспинальной жидкостью крупного рогатого скота;

• проведение биохимической оценки ростовой питательной среды с цереброспинальной жидкостью;

• изучение биологических характеристик перевиваемой линии клеток, адаптированн'к росту в питательной среде с церебрееяияазтмтой жилу

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

крупного рогатого скота;

костью

БИБЛИОТЕКА С-ПетервурГ^л 0Э

• оценка влияния цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота на клонообразование перевиваемой линии клеток.

1.3. Научная новизна

Впервые изучено влияние цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота на биологические свойства сублинии перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ). Новыми являются данные о биохимических параметрах ростовой питательной среды ИГЛА MEM, содержащей цереброспинальную жидкость и сыворотку крови крупного рогатого скота. Показана эффективность клонообразования перевиваемой линии клеток РК-15/В5 при добавлении в ростовую питательную среду цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота.

1.4. Практическая значимость работы

Материалы настоящих исследований могут быть использованы в учебном процессе на биологическом, ветеринарном и медицинском факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий.

1.5. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Сравнительные данные состава цереброспинальной жидкости и сыворотки крови крупного рогатого скота.

2. Трофовариант сублинии перевиваемых клеток почки африканской зеленой мартышки, адаптированный к росту в питательной среде с цереброспинальной жидкостью крупного рогатого скота.

3. Биохимические показатели ростовой питательной среды с цереброспинальной жидкостью крупного рогатого скота.

4. Биологические характеристики трофоварианта сублинии перевиваемых клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л.

5. Эффективность клонообразования перевиваемой линии клеток РК-15/В5 при добавлении в ростовую питательную среду цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота.

1.6. Реализация результатов исследований

Основные научные подходы и положения диссертации достаточно полно отражены в 10 опубликованных научных работах.

1.7. Апробация работы

Основные материалы диссертационной работы изложены, обсуждены и доложены на Международной научной конференции (Покров, 2002), научных конференциях (Огаревские чтения) Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева (Саранск 2001,2002,2003).

1.8. Структура и объем работы

Диссертационная работа изложена на 153 страницах машинописного текста. Состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка использованной литературы и приложений. Экспериментальный цифровой материал представлен в 15 таблицах и иллюстрирован 19 рисунками. Список литературы включает 305 источников, в том числе на иностранных языках.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследования

Исследования проводились на базе Всероссийского научно-исследовательского институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (ВНИИВВиМ, г. Покров, Владимирская область), межкафедральной научно-исследовательской лаборатории «Гистофизиология» и учебно-научной лаборатории кафедры незаразных болезней и радиологии Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева в период с 2000 по 2003 гг. Общая схема исследований представлена в таблице 1. Всего проведено 6 серий опытов.

В первой серии опытов в сравнительном аспекте проведена оценка биохимических показателей цереброспинальной жидкости и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Определение белка в сыворотке крови проводили с использованием биу-ретовой реакции, Определение белка в ликворе проводили по методу Лоури. Активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови и ЦСЖ определяли с использованием наборов химических реактивов фирмы "ЛАХЕМА" (БРНО, Словакия). Определение содержания тироксина, трийодтиронина, кортизола, инсулина, эстриола и эстрадиола проводили методом радиоиммунологического анализа (РИА). Определение содержания АКТГ проводили иммунорадиометрическим методом с использованием наборов ELSA-ACTH (France).

Во 2 - б-й сериях опытов изучали различные варианты применения цереброспинальной жидкости как компонента питагельных сред, проводили оценку биологических свойств перевиваемых линий клеток, т. е оценивали возможность применения ликвора крупного рогатого скота в качестве компонента ростовых питательных сред. Использовались культуры клеток, которые применяются во ВНИИВВиМ при производстве вакцин и в научных исследованиях:

• сублиния перевиваемых клеток почки зеленой африканской мартышки CV-1 (ВНИИВВиМ) из музея клеточных культур ВНИИВВиМ, католожный номер 43.3;

• клон перевиваемой линии клеток РК-15/В5, католожный номер 2.10.

При работе с культурами клеток использовались следующие растворы и

Таблица 1

Общая схема исследований_

Серия Вид Группа Количе-

опы- объекта ство Наименование исследований

тов объектов

Быки 1 25

I Коровы Сравнительная оценка состава

неберем. 2 67 ликвора и сыворотки крупного

Коровы рогатого скота

берем. 3 28

П ПЛК Контроль 2 Получение трофоварианта суб-

1 2 линии перевиваемых клеток

2 2 ^-1(ВНИИВВиМ)-Л при до-

3 2 бавление в питательную среду

4 5 2 2 ЦСЖ крупного рогатого скота

Ш ПЛК Контроль 3 Изучение биохимических пока-

1 3 зателей питательных ростовых

сред

IV ПЛК Контроль 3 Изучение морфологических и

1 3 кариологических показателей

сублинии СУ-1(ВНИИВВиМ)

V ПЛК Контроль 4 Исследование чувствительно-

1 4 сти ПЖ ^-1(ВНИИВВиМ)-Л

к вирусу чумы плотоядных

VI ПЛК Контроль 4 Изучение влияния ЦСЖ КРС

1 4 на клонообразование ПЖ РК-

15/В5

реагенты: дистиллированная вода; этиловый спирт; метиловый спирт; 0,02% раствор версена; 0,25% раствор трипсина; диметилсульфоксид (DMSO); водный раствор гематоксилин-эозина; эозин; колхицин; уксусная кислота; три-хлоруксусная кислота; муравьиная кислота; ксилол; антибиотики (гентамицин сульфат, бензилпенициллин натривая соль); жидкость Боуэна; 2% раствор Гимза; 0,5% раствор трипансини, полиэтиленгликоль (ПЭГ - м.м. 6000) и жидкий азот.

Для культивирования ПЛК применялась среда Игла MEM на солевом растворе Эрла с добавлением антибиотиков (гентамицина сульфат-100 мкг/мл, бензилпенициллина натривая соль 100 ед/мл).

Для заражения перевиваемых линий клеток использовался вирус чумы плотоядных штамм «ВНИИВВиМ-88» с инфекционной активностью 4,51g ТЦД50/мл, 8 пассаж в культуре CV-1 .

В исследованиях использовались следующие методы:

Культивирование клеток.

Сублинию перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ) поддерживали методом последовательных пересевов (Юрков, Шевченко, Аверина, Курносов, 1985)

Морфологическое исследование культур клеток.

Для морфологического изучения культуры выращивали на покровных стеклах, на 2-3-е сутки культивирования фиксировали в растворе Буэна и окрашивали гематоксилином-эозином.

Кариологические.

Хромосомные препараты получали стандартным колхициновым методом, с последующей окраской 2% раствором красителя Гимза. Проводили подсчет t числа хромосом в метафазных пластинках в 50-100 клетках каждой линии.

(Ford, 1956; Мамаева, 1988).

Вирусологические.

Титрование вируса ЧП проводили на односуточной сублинии перевивае-► мых клеток СУ-1(ВНИИВВиМ), сформировавшей монослой без атипичных

морфологических признаков и неспецифических изменений пласта, выращенной на плоскодонных микрополичашках для культур клеток (Ашмарин, 1962).

Биохимические.

Определение активности аспартаттрансаминазы, лактатдегидрогеназы, а также процент утилизации глюкозы клетками и количество молочной кислоты в питательных средах проводили на биохимическом анализаторе (АА П) .фирмы "Техникон" (Асатиани, 1969; Brown, 1963).

Бактериологические.

Стерильность расплодов клеток, питательных сред, сывороток крови, рас) творов и других компонентов определяли путем высева в жидкие и твердые питательные среды: МПА, МПБ, тиогликолевую среду, с помощью методов принятых во ВНИИВВиМ.

Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили на компьютере с помощью программы STAT (Торопов, 1993). Элементарную статистику выборок проводили по Стьюденту с вычислением средней арифметической, ее ошибки и вычислению коэффициента парной корреляции.

2.2. Результаты собственных исследований и их обсуждение

2.2.1. Сравнительная оценка состава цереброспинальной жидкости и сыворотки крови крупного рогатого скота

В результате сравнительного анализа состава сыворотки крови у крупного рогатого скота различного пола и возраста установлено, что у быков, по сравнению с коровами, отмечаются более высокие значения уровня тироксина, индекса свободного тироксина. В то же время у быков установлена пониженная активность ACT, AJIT, значение коэффициента де Ритиса, уровня эстра-диола, концентрации белка и инсулина.

Изменения показателей цереброспинальной жидкости у всех обследован-

ных животных не носили такой выраженный характер как в сыворотке крови, за исключением повышенной активности AJIT и пониженного уровня коэффициента де Ритиса, уровня инсулина у быков.

В цереброспинальной жидкости коров активность ферментов ACT и AJIT ниже по сравнению с быками, не смотря на это у коров коэффициент де Ритиса выше, чем у быков. Интересным представляется тот факт, что в сыворотке крови активность эгих же ферментов выше у коров. Кроме того, можно утверждать, что физиологическое состояние коров не сказывается на активности AJIT как в сыворотке крови, так и в цереброспинальной жидкости.

В сыворотки крови у коров содержание кортизола, ЕЗ, инсулина, АКТГ, трийодтиронина выше, чем у быков.

В целом установлено, что у всех групп животных изменения показателей цереброспинальной жидкости не носят выраженного характера в зависимости от пола и физиологического состояния. В то же время в сыворотке крови изменения биохимических показателей носят более выраженный характер.

Сравнительный анализ биохимических показателей сыворотки крови и ЦСЖ свидетельствует о существенных отличиях (рис.1)

Инсулин

АКТГ, пг/мл Показатели

Т4

Рис. 1 Содержание гормонов в сыворотке крови и ЦСЖ КРС

Полученные сравнительные данные указывают на то, что цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота более стабильна по биохимическому составу, хотя и уступает по количественным показателям сыворотке крови. Эти результаты согласуются с многочисленными исследованиями различных ученых

проведенными ранее.

Общеизвестно, что гормоны играют важную роль в стимуляции клеточного деления в культуре. Доказано, что инсулин, тироксин, АКТГ и стероидные гормоны, при добавлении их в питательные среды усиливают пролиферацию клеток in vitro (Епифанова, 1965; Романов, Ивченко 1973; Комолов, Федотов 1974; Higuchi, Robinson 1973).

Поскольку в экспериментах, связанных с культивированием перевиваемых линий клеток, применяли цереброспинальную жидкость, полученную от небеременных коров, для наших исследований важно, что в ней в больших количествах содержится таких гормонов как инсулин, кортизол, тироксин и индекс свободного тироксина также выше, чем в других группах животных. В связи с

• этим, считаем, что использование в экспериментах цереброспинальной жидкости небеременных коров является обоснованным.

2.2.2. Получение перевиваемой линии клеток

• В предварительном опыте изучили возможность выращивания сублинии перевиваемых клеток CV-1 в ростовой среде ИГЛА MEM, содержащей 10% ликвора крупного рогатого скота (полная замена сыворотки). Установлено, что полное замещение сыворотки крови на ликвор в ростовой среде ИГЛА MEM, при культивировании сублинии перевиваемых клеток CV-1 невозможно, так как в ликворе нет достаточного количества веществ, способных обеспечивать реализацию адгезивных свойств клеток.

Далее провели исследования по изучению возможности культивирования сублинии перевиваемых клеток CV-1 в ростовой среде ИГЛА MEM с пониженной концентрацией сыворотки и с содержанием ликвора 5%, 2,5%, 1,5%,

> 1%, 0,5%.

В результате проведенных экспериментов получены популяции клеток CV-I, способных к росту в среде ИГЛА MEM с содержанием 2,5% сыворотки крови крупного рогатого скота и 2,5; 1,5; 1; 0,5% цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота. Все популяции клеток были представлены эпителио-образными клетками, полигональной формы с выраженной зернистостью цитоплазмы.

При сравнительном изучении некоторых биологических свойств популяций клеток при выращивании в ростовой среде с 2,5% сыворотки крови и 1; 0,5% цереброспинальной жидкости на протяжении 28 пассажей. Установлено следующее: пролиферативная активность клеток сохранилась, монослой формировался через 48-60 часов, при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток в 1 мл., индекс пролиферации составил 1,8-2,0. Культуры клеток были представлены эпителиоподобными полигональной формы клетками средних размеров с выраженной зернистостью цитоплазмы.

В результате этих серий опытов была получена популяция клеток CV-1 (ВНИИВВиМ), адаптированная к росту в ростовой питательной среде с пони-

женным содержанием сыворотки крови и добавлением ЦСЖ крупного рогатого скота.

Таким образом биологические активные вещества ЦСЖ при пониженной концентрации сыворотки положительно влияют на ростовые и цитоморфоло-гические показатели ПЛК С\М;

2.2.3 Оценка питательных сред

На следующем этапе работы проведены исследования по оценке биотехнологических свойств питательной среды с добавлением цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота. Физиологичность питательной среды определяли по показателям процента утилизированной глюкозы клетками CV-1 (ВНИИВВиМ) из питательной среды, количеству молочной кислоты, активности ЛДГ и ACT в питательной среде.

Известно, что глюкоза, молочная кислота, лактатдегидрогеназа являются участниками гликолитических процессов (Афонский, 1970; Плакунов, 2001).

Исследованиями установлено, что утилизация глюкозы, на протяжении трех суток культивирования, в питательной среде с 10 % сыворотки крови крупного рогатого скота и в среде с 0,5 % цереброспинальной жидкостью, 2,5% сыворотки крови, практически на всех временных промежутках одинакова. Небольшое увеличение потребления глюкозы клетками в опытной среде через 24 часа культивирования, а в контрольной среде через 48 часов культивирования, связано, вероятнее всего с различным количеством клеток в монослое, образовавшихся при культивировании на различных питательных средах (рис.2).

100-j

0 часов 24 часа 48 72 часа часов

Время культивирования Рис.2. Утилизация глюкозы клетками

В процессе жизнедеятельности клеток in vitro, в синтетических и полусинтетических средах, как и в естественной среде (организм) в результате гликолиза образуется молочная кислота.

В связи с этим представлялась интересной оценка накопления молочной кислоты в питательных средах.

■ контроль

■ опыт

140012001000-

4002000-

Время культивирования

Рис. 3. Накопление молочной кислоты в питательных средах

Из рисунка 3 видно, что на начальном этапе культйвиров^""я клеток СУ-1 в контрольной среде количество лактата увеличивается, а затем на протяжении двух последних суток культивирования держится примерно на одном уровне. В то же время в питательной среде с цереброспинальной жидкостью концентрация молочной кислоты сначала увеличивается незначительно, а затем на протяжении трех суток культивирования идет резкое увеличение. Можно говорить о том, что молочная кислота, накапливаемая в контрольной среде как промежуточный продукт гликолиза, включается в дальнейшие биохимические процессы, чего в питательной среде с цереброспинальной жидкостью не наблюдается.

0 часов 24 часа 48 часов 72 часа

■ контроль О опыт

300-1 щ

250' П Г II 200- I

^ 150- II

Ш111II

0 часов 24 часа 48 часов 72 часа Время культивирования

Рис.4. Активность ЛДГ в питательныхсредах

Образование молочной кислоты, как промежуточного продукта гликолиза, напрямую связано с активностью лактатдегидрогеназы в питательных средах. Известно, что лактатдегидрогеназа - фермент, катализирующий образование

■ контроль М опыт

молочной кислоты. Относится к классу оксиредуктаз, систематическое название Ь-лактат: КАЕ)+ оксиредуктаза. Основное место нахождение в клетке -цитоплазма.

Из рисунка 4 хорошо видно, что на протяжении трех суток культивирования клеток С\М в контрольной среде, активность ЛДГ находится на одном уровне. В питательной среде с цереброспинальной жидкостью видны небольшие колебания активности ЛДГ.

Увеличение активности ЛДГ в питательных средах связано с тем, что идет накопление молочной кислоты в обеих питательных средах по сравнению с первоначальным значением (рис. 3).

Интересные данные получены по корреляционной зависимости глюкозы, молочной кислоты и лактатдегидрогеназы (табл.2).

Так в питательной среде с цереброспинальной жидкостью зависимость между утилизацией глюкозы клетками и накоплением молочной кислоты более выражена, чем в контрольной среде. В то же время в питательной среде с цереброспинальной жидкостью менее выражена зависимость между образованием молочной кислоты и активностью ЛДГ, а также утилизацией глюкозы и активностью ЛДГ, чем в питательной среде без цереброспинальной жидкости.

Таблица 2

Корреляционная зависимость изменений показателей углеводного обмена _ в питательных ростовых средах_

Питательная среда Показатели

Глюкоза и молочная кислота Молочная кислота и ЛДГ Глюкоза и ЛДГ

Игла MEM на солевом растворе Эрла (контроль) -0,85 0,95 -0,82

Игла MEM на солевом растворе Эрла и ЦСЖ (опыт). -0,93 0,67 -0,62

Аспартатаминотрансфераза - фермент, относящийся к классу ами-нотрансфераз, участвующих в процессах трансаминирования.

Несмотря на это, активность ACT в контрольной и опытной питательных средах, скорее всего, не связана с процессами переаминирования. В данном случае можно говорить о том, что ACT является участником энергетических процессов, особенно в питательной среде с добавлением цереброспинальной жидкости. В тоже время резкое увеличение активности ACT в опытной питательной среде может быть связано с активизированием биологически активными веществами ЦСЖ КРС белковых веществ сыворотки крови (рис.5).

Время культивирования

Рис. 5. Активность ACT в питательных средах

Таким образом, добавление в питательную среду ЦСЖ КРС и понижение концентрации сыворотки крови в 4 раза привело к увеличению активности ферментов ACT и ЛДГ, накоплению молочной кислоты. Однако утилизация глюкозы осталась на том же уровне. Это позволяет сделать вывод о физиологичное™ опытной питательной среды

2.2.4. Биологическая характеристика полученной популяции клеток

СУ-1(ВНИИВВиМ)

При изучении биологических характеристик было установлено, что клетки, формировавшие монослой, были эпителиоподобными полигональной формы с четкими границами. По сравнению с контролем клетки увеличились в размерах.

Изучение ростовых показателей полученной популяции сублинии перевиваемых клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л показало, что при посевной концентрации 100 тыс. кл./мл в литровом матрасе РУ накапливается 20-25 млн. клеток, индекс пролиферации колеблется в пределах 1,7-2,2, формирование монослоя наблюдалось через 48-60 часов, срок переживания без смены среды составляет 13 дней. Жизнеспособность, показатель, характеризующий количество живых клеток после размораживания при хранения в жидком азоте при температуре -196°С. У сублинии перевиваемых клеток СУ-1(ВНИИВВиМ) этот показатель равен 85-90%, а в популяции СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л - 78-85%.

При изучении кариотипических показателей установлено следующее: модальный класс (22%) составляют клетки, содержащие 60 хромосом при размахе варьирования их числа от 50 до 67 (рис. 6)

12т 10

8 6 4 2 0

50 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 67

Рис. 6. Гистограмма распределения числа хромосом в клетках трофоварианта С\М(ВНИИВВиМ)-Л

по оси абсцисс - число хромосом, по оси ординат - число клеток

В контрольной линии клеток величина модального класса также составляет 22%, при интервале варьирования их числа от 55 до 73.

2.2.5. Исследование чувствительности полученной популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ) к вирусу чумы плотоядных

Предварительно культуры клеток выращивали на чашках Карреля. Заражение опытной и исходной культур клеток СУ-1 вирусом чумы плотоядных в дозе 0,001-0,002 ТЦЦ50 на клетку проводили после смены среды культивирования на среду поддержки. Инфицированные культуры клеток выдерживали в термостате при Т=37°С до появления ЦПД. В контроле и в опыте цитопатиче-ское действие наступило спустя 60 часов после заражения, проявлялось образованием симпластов, отторжением клеток от стекла.

Титрование проводили в стандартной культуре клеток СУ-1 микрометодом. Для титрования культуру клеток сублинии СУ-1 выращивали на 96-луночных микропанелях с плоским дном для культур клеток, в которую вносили по 0,15 см3 клеточной суспензии с посевной концентрацией 100-120 тысяч клеток в миллилитре.

Учет результатов титрования производили на 5-6 сутки по специфическому ЦПД вируса, которое характеризуется образованием синцитиапьных скоплений веретенообразных, стержневидных и звездчатых многоядерных клеток.

Накопление вируса в популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л и сублинии перевиваемых клеток СУ-1(ВНИИВВиМ) составило 4,1 ±0,063^ТЦД50/МЛ и 4,6±0,072 ^ ТЦДзо/мл соответственно.

2.2.6. Изучение влияния цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота на клонообразование ПЛК РК-15 (ВНИИВВиМ).

Клонирование предусматривает разбавление клеточной суспензии до такой степени, чтобы одна выросшая клетка образовывала дискретную колонию дочерних клеток (клон), которую можно распознать и затем культивировать изолированно от всех клеток.

Эффективность клонообразования проводили методом предельных разведений по Puck (1957). После образования сплошного монослоя клетки верси-низировали. Провели подсчет клеток в камере Горяева. Затем произвели разведение и получили посевную концентрацию от 20000 до 10 клеток на 1 мл среды. Произвели посев в 96 луночную панель по 200 мкл в каждую лунку. Подсчет колоний вели в течение 4-14 дней микроскопированием с помощью инвертированного микроскопа.

1,41,210,80,60,40,2010000 5000 2500 1250 625 312

Рис. 7. Эффективность клонообразования

по оси абсцисс - количество клеток по оси ординат - коэф. клонообразования

Анализируя данные рис.7 можно утверждать, что во втором разведении (1:10000) и шестом (1:625) произошло наименьшее увеличение образований колоний в опыте по сравнению с контролем, соответственно на 48 и 71 %. В тоже время наибольшее увеличение образований колоний в опыте по сравнению с контролем наблюдалось в четвертом и седьмом разведениях, соответственно в 4,1 и 3,1 раза.

По итогам проведенного эксперимента можно сделать следующие выводы: добавление ликвора в среду увеличивает образование колоний в 1,5-2, а в некоторых случаях 3-4 раза.

I контроль 3 опыт

Выводы

1. Сравнительный анализ состава цереброспинальной жидкости у крупного рогатого скота различного пола и возраста свидетельствует, что у не беременных коров в цереброспинальной жидкости концентрация инсулина, корти-зола, тироксина, а также показатель ИСТ4 выше, чем у беременных коров и быков. В свою очередь у беременных коров такие гормоны как трийодтиронин и ЕЗ содержатся в ЦСЖ в больших количествах, чем у небеременных коров и быков. В цереброспинальной жидкости коров активность ферментов ACT и AJIT ниже по сравнению с быками, несмотря на это у коров коэффициент де Ритиса выше, чем у быков.

В цереброспинальной жидкости существенно (более чем в 100 раз) ниже концентрация белка. По концентрации инсулина и АКТГ жидкости сопоставимы, а по уровню свободного тироксина ЦСЖ превышает сыворотку крови.

2. Установлено, что при конструировании питательной среды полное замещение в ней сыворотки крови на цереброспинальную жидкость невозможно, так как в этом случае не происходит адгезии и пролиферации клеток. В то же время не отмечено гибели перевиваемых клеток CV-1

3. Получены 4 популяции клеток CV-1 (ВНИИВВиМ), способные к росту в питательной ростовой среде ИГЛА MEM, содержащей пониженное количество сыворотки крови (2,5%) и цереброспинальную жидкость крупного рогатого скота (2,5; 1,5; 1 и 0,5 %). Пролиферативная активность полученных популяций клеток сохранялась, монослой формировался через 48-60 часов, при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток в 1 мл., индекс пролиферации составлял 2,0-2,2. Популяции клеток представлены эпителиоподобными, клетками средних размеров с выраженной зернистостью цитоплазмы.

4. Показано, что добавление цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в питательную ростовую среду и уменьшение в ней количества сыворотки крови существенно не влияло на процесс утилизации глюкозы при культивировании перевиваемой культуры клеток CV-1. В то же время изменение состава питательной среды привело к увеличению активности ЛДГ и ACT, а также накоплению молочной кислоты.

5. Установлено, что у полученной популяции клеток СУ-1(ВНИИВЗи^»4)-Л модальное число хромосом уменьшилось по сравнению с исходной сублинией на 11,8 %, а величина модального класса оставалась без изменения - 22 %. Индекс пролиферации у популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л сопоставим с CV-1 (ВНИИВВиМ), а по сроку переживания превосходит ее. Не смотря на то что накопление вируса в популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л меньше, чем в сублинии перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ), оно соответствует требованиям, предъявляемым к вакцине.

6. Добавление цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в ростовую питательную среду увеличивает образование колоний ПЛК РК-15/В5 в 1,5-4,0 раза.

7. В целом проведенные исследования свидетельствуют о перспективно-

сти использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента ростовой питательной среды в тех или иных сочетаниях с сывороткой крови. На полученную популяцию клеток оформлен паспорт.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы исследований могут быть полезны исследователям, занимающимся вопросами использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в качестве компонента ростовых питательных сред при выращивании культур клеток, паспорт

2. Исследования показателей цереброспинальной жидкости и сыворотки крови коров и быков могут быть использованы:

— при оценке, половых и индивидуальных особенностей становления центральной нервной системы крупного рогатого скота;

- в учебном процессе на биологическом, ветеринарном и зоотехническом факультетах высших учебных заведений при чтении лекций и проведении практических занятий;

— при написании соответствующих разделов по сравнительной физиологии;

- в практической ветеринарии в качестве «нормы» и как сравнительные данные при болезнях животных различной этиологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Калягина Н.Ю., Зенкин A.C., Лащ А.П. Особенности костномозгового кроветворения кроликов в зависимости от возраста. // Современные проблемы животноводства / Материалы Международной научной конференции, посвященной 70-ю образования зооинженерного факультета. - Казань, 2000. -С.223-234.

2. Лащ А.П., Зенкин A.C. Перспективы применения цереброспинальной жидкости как компонента питательных сред/ Матер, научн. конф. «XXX Ога-ревские чтения». - Саранск, 2001. - С. 169 -171.

3. Лащ А.П., Зенкин A.C., Юрков С.Г., Кушнир С.Д. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота как компонент питательной ростовой среды для культур клеток. // Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей./ Материалы междун. науч.-практ. конф. ВНИИВВиМ. - Покров, 2002. -С. 296-297.

4. Лащ А.П., Зенкин A.C., Юрков С.Г, Смыслова Н.Ю., Ставничий Е.В., Гусева Г.Е., Куриннов В.В. Получение и некоторые биологические свойства сублинии клеток CV-1, адаптированной к росту в среде с ликвором крупного рогатого скота. // Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей./

Материалы междун. науч.-практ. конф. ВНИИВВиМ. - Покров, 2002. - С. 293296.

5. Лабинов В.П., Зенкин A.C., Лабинов C.B., Лащ А.П. Сравнительная оценка ликвора и сыворотки крови крупного рогатого скота// Естественно-науч. исслед: теория, методы, практика./ Межвуз. сборник науч. трудов. - Саранск, 2003.-С. 59-61.

6. Лащ А.П. Биологические свойства трофоварианта сублинии перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ)-Л//Естественно-науч. исслед.:теория, методы, практика./ Межвуз. сборник науч. трудов. - Саранск, 2003. - С. 58-59.

7. Лащ А.П., Зенкин A.C., Костюньков A.B. Изучение вирусрепродуци-рующих свойств трофоварианта сублинии перевиваемых клеток почки африканской зеленой мартышки СV-1 (ВНИИВВиМ)-Л/ XXXI Огаревские чтения. Матер, науч. конф. - Саранск, 2003. - С.110-112.

8. Лащ А.П., Зенкин A.C., Макаров A.B., Сравнительная характеристика питательных сред при культивировании сублинии перевиваемых клеток почки африканской зеленой мартышки CV-1// Естественно-науч. исслед. :теория, методы, практика. /Межвуз. сборник науч. трудов. - Саранск, 2003. - С. 55-58.

9. Лащ А.П., Колбасова О.Л., Зенкин A.C. Эффективность клонообразова-ния перевиваемой линии клеток РК-15(ВНИИВВиМ), при добавлении в питательную среду ликвора крупного рогатого скота / XXXI Огаревские чтения. Матер, науч. конф. - Саранск, 2003. - С. 109-110.

10. Лащ А.П., Юрков С.Г., Макаров. Исследование кариологических показателей перевиваемых линий клеток почки африканской зеленой мартышки СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л/ XXXI Огаревские чтения. Матер, науч. конф. - Саранск, 2003. - С. 108-109.

Подписано в печать 19.09.03. Объем 1,00 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1483.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, Саранск, ул. Советская, 24

! 4 8Jg #14 8 7 8

Оглавление диссертации Лащ, Андрей Петрович :: 2003 :: Саранск

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1. Цереброспинальная жидкость как биологически активное средство

2.2 Питательные среды для культивирования перевиваемых линий клеток животных

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.2.1. Сравнительная оценка состава цереброспинальной жидкости и 58 сыворотки крови крупного рогатого скота

3.2.2. Получение и оценка биотехнологических свойств сублинии пе- 72 ревиваемой линии клеток почки африканской зеленой мартышки при добавление в питательную среду ликвора крупного рогатого скота

3.2.2.1. Получение сублинии перевиваемой линии клеток почки афри- 72 канской зеленой мартышки при добавление в питательную среду ликвора крупного рогатого скота

3.2.2.2. Биохимические показатели питательных сред используемых для 78 выращивания клеток почки африканской зеленой мартышки СУ-1(ВНИИВВиМ)

3.2.2.2.1. Изучение утилизации глюкозы клетками почки африканской зе- 78 леной мартышки СУ-1(ВНИИВВиМ) при выращивании в различных питательных средах

3.2.2.2.2. Изучение активности лактатдегидрогеназы в различных пита- 80 тельных средах

3.2.2.2.3. Оценка накопления молочной кислоты в питательных средах, используемых для культивирования сублинии перевиваемых 82 клеток почки африканской зеленой мартышки CV-1(ВНИИВВиМ)

3.2.2.2.4. Изучение активности аспартатаминотрансферазы в различных 84 питательных средах

3.2.2.3. Цитоморфологическая и кариологическая характеристика полу- 87 ченной сублинии перевиваемой линии клеток почки африканской зеленой мартышки при добавлении в питательную среду цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота

3.2.2.4. Исследование чувствительности полученного трофоварианта 93 сублинии перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ)-Л к вирусу чумы плотоядных по сравнению с исходной линией клеток почки африканской зеленой мартышки CV-1 (ВНИИВВиМ)

3.2.3. Изучение влияния цереброспинальной жидкости крупного ро- 95 гатого скота на клонообразование ПЛК РК-15/В

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации по теме "Патология, онкология и морфология животных", Лащ, Андрей Петрович, автореферат

1.1 Актуальность темы.

Известно, что сыворотка крови млекопитающих, обогащая ростовыми, адгезивными и протективными факторами питательные среды, используемыми для культивирования большинства клеточных культур, нестандартна и ее применение связано с постоянным риском контаминации клеток микоплазмами, вирусами и прионами. Получение сублиний клеток, способных к росту в бессывороточных средах или средах с минимальным ее содержанием, является актуальной проблемой биотехнологии.

Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота, имея в своем составе небольшое количество белка, особенно высокомолекулярных фракций, содержит большой набор биологически активных веществ. К ним относятся гормоны, вырабатываемые структурными образованиями головного мозга, а также синтезируемые периферическими эндокринными железами и другими субстанциями. Кроме гормонов центральной нервной системы в цереброспинальной жидкости обнаруживаются метаболиты мозга (эндорфины, энкефали-ны, либерины, простагландины, медиаторы), микро-, макроэлементы, глюкоза и другие вещества (Атанова, 1953,1955; Кассиль, 1963; Фридман, 1967,1971; Ткач с соавт., 1978;1986; Зенкин с соавт., 1995; Пильгаев, 1999; Леткин, 2000; Лаби-нов, 2000; Калязина, 2002; Сегесо, 1970). Цереброспинальная жидкость, в отличие от сыворотки крови животных более стабильна и консервативна по биохимическому составу. В связи с этим открываются определенные перспективы по снижению содержания сыворотки крови в ростовой среде и заменой ее цереброспинальной жидкостью в качестве ростостимулирующего компонента.

В доступной литературе встречаются лишь единичные работы (Ткач с соавт., 1985; Fedoroff, 1960) по исследованию цереброспинальной жидкости как компонента питательных сред для перевиваемых культур клеток, что в основном и предопределило наш научный и практический интерес.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение возможности применения ЦСЖ крупного рогатого скота как компонента питательных сред, используемых в биотехнологии, для культивирования клеток. Для достижения поставленной цели решались следующие конкретные задачи:

• проведение сравнительной оценки состава сыворотки крови и цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота; >

• проведение биохимической оценки ростовой питательной среды с цереброспинальной жидкостью;

• изучение биологических характеристик перевиваемой линии клеток, адаптированной к росту в питательной среде с цереброспинальной жидкостью крупного рогатого скота;

1.3. Научная новизна.

Впервые изучено влияние цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота на биологические свойства сублинии перевиваемых клеток CV-1(ВНИИВВиМ). Новыми являются данные о биохимических параметрах ростовой питательной среды ИГЛА MEM, содержащей цереброспинальную жидкость и сыворотку крупного рогатого скота. Показана эффективность клонооб-разования перевиваемой линии клеток РК-15/В5 при добавлении в ростовую питательную среду цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота.

1.4. Практическая значимость работы.

Полученные в результате настоящих исследований данные показывают перспективность использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в биотехнологии перевиваемых линий клеток. Результаты исследований представляют интерес для специалистов, занимающихся конструированием ростовых питательных сред для культур клеток, а также разработкой ди~ агностикумов и вакцинных препаратов. Материалы настоящих исследований могут быть использованы в учебном процессе на биологическом, ветеринарном и медицинском факультетах, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий

1.5. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Сравнительные данные состава цереброспинальной жидкости и сыворотки крови крупного рогатого скота.

2. Трофовариант сублинии перевиваемых клеток почки африканской зеленой мартышки, адаптированной к росту в питательной среде с цереброспинальной жидкостью крупно рогатого скота.

4. Биологические характеристики трофоварианта сублинии перевиваемых клеток CV - 1 (ВНИИВВиМ)-Л.

1.6. Реализация результатов исследований.

Основные научные подходы и положения диссертационной работы достаточно полно отражены в 10 опубликованных научных работах.

1.7. Апробация работы.

Основные материалы диссертационной работы изложены, обсуждены и доложены на Международной научной конференции (Покров, 2002), научных I конференциях (Огаревские чтения) Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева (Саранск 2001, 2002,2003).

1.8. Объем и структура работы.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертационного исследования на тему "Экспериментальное обоснование использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента питательных сред"

Выводы

1. Сравнительный анализ состава цереброспинальной жидкости у крупного рогатого скота различного пола и возраста свидетельствует, что у небеременных коров в цереброспинальной жидкости концентрация инсулина, корти-зола, тироксина, а также показатель ИСТ4 выше, чем у беременных коров и у быков. В свою очередь, у беременных коров такие гормоны как трийодтиронин и ЕЗ содержатся в ЦСЖ в больших количествах, чем у небеременных коров и быков. В цереброспинальной жидкости коров активность ферментов ACT и АЛТ ниже по сравнению с быками, несмотря на это у коров коэффициент де Ритиса выше, чем у быков.

В цереброспинальной жидкости существенно (более чем в 100 раз) ниже концентрация белка, по сравнению с сывороткой крови. По концентрации инсулина и АКТГ жидкости сопоставимы, а по уровню свободного тироксина ЦСЖ превышает сыворотку крови.

3. Получены 4 популяции клеток CV-1 (ВНИИВВиМ), способных к росту в питательной ростовой среде ИГЛА MEM, содержащей пониженное количество сыворотки крови (2,5%) и цереброспинальную жидкость крупного рогатого скота (2,5; 1,5; 1 и 0,5 %). Пролиферативная активность полученных популяций клеток сохранялась, монослой формировался через 48-60 часов, при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток в 1 мл, индекс пролиферации составлял 2,02,2. Популяции клеток представлены эпителиоподобными, клетками средних размеров с выраженной зернистостью цитоплазмы.

4. Показано, что добавление цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в питательную ростовую среду и уменьшение в ней количества сыворотки крови, существенно не влияло на процесс утилизации глюкозы при культивировании перевиваемой культуры клеток CV-1. В тоже время изменение состава питательной среды привело к увеличению активности ЛДГ и ACT, а также накоплению молочной кислоты.

5. Установлено, что у полученной популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л модальное число хромосом уменьшилось, по сравнению с исходной сублинией, на 11,8 %, а величина модального класса оставалась без изменения - 22 %. Индекс пролиферации у популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л сопоставим с CV-1 (ВНИИВВиМ), а по сроку переживания превосходит ее. Не смотря на то что накопление вируса в популяции клеток СУ-1(ВНИИВВиМ)-Л меньше, чем в сублинии перевиваемых клеток CV-1 (ВНИИВВиМ), оно соответствует требованиям предъявляемым к вакцине

7. В целом проведенные исследования свидетельствуют о перспективности использования цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота как компонента ростовой питательной среды в тех или иных сочетаниях с сывороткой крови. На полученную популяцию клеток оформлен паспорт.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

2. Исследования показателей цереброспинальной жидкости и сыворотки крови коров и быков могут быть использованы: при оценке половых и индивидуальных особенностей становления центральной нервной системы крупного рогатого скота; в учебном процессе на биологическом, ветеринарном и зоотехническом факультетах высших учебных заведений при чтении лекций и проведении практических занятий; при написании соответствующих разделов по сравнительной физиологии; в практической ветеринарии в качестве «нормы» и как сравнительные данные при болезнях животных различной этиологии.

Считаю своим долгом выразить особую благодарность научным руководителям доктору биологических наук, профессору Зенкину Александру Сергеевичу и доктору биологических наук Юркову Сергею Григорьевичу за повседневное руководство и внимание при выполнении и оформлении научной работы.

Искренне благодарю научных сотрудников и лаборантов лаборатории №13 Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии, а также сотрудникам кафедры незаразных болезней и радиологии Аграрного института за деловые советы, консультации и дружескую помощь при оформлении моего скромного труда.

Выражаю признательность кандидату биологических наук Сергею Витальевичу Лабинову за совместные исследования по оценке состава цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота в зависимости от пола и физиологического состояния.

Моя искренняя признательность администрации Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева в лице ректора университета Николая Петровича Макаркина и директора Аграрного института Шамиля Исмятулло-вича Ахметова за создание условий для выполнения настоящей работы и оказанную материальную помощь.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2003 года, Лащ, Андрей Петрович

1. Ажипа Я.И., Роль желез внутренней секреции и медиаторов в регуляции эндокринных функций.- М.: Наука, 1981.- 439с.

2. Ажипа Я.И. Трофическая функция нервной системы. М.: Наука, 1990.- 672 с.

3. Ажгихин И.С. Простагландины новый класс биологически активных веществ/Простагландины.- М., 1978. - С.6-83.

4. Акаевский А.И. Анатомия домашних животных.- М.: Колос, 1975.-С. 452-453.

5. Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Михайлов Н.В., ХрусталеваИ.В. Анатомия домашних животных.- М.: Колос, 1984. С.410-414.

6. Алиев А.А. Экспериментальная хирургия: Учеб. пособие. М.: НИЦ, 1998.- 180 с.

7. Анджапаридзе О.Г., Гаврилов В.И., Семенов Б.Ф., Степанова Л.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях. М.: "Медгиз", 1962. — 305 с.

8. Анисимова Л.И., Прилепская Е.П., Юрков С.Г. и др. Модифицированная питательная среда для выращивания клеток и вирусов // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: Матер, научно-практ. научно-практ. конф. -Покров, 1995.-С. 191 192.

9. Асатиани B.C. Ферментативные методы анализа.- М.: Наука, 1969.558 с.

10. Атанова Е.М. Применение гетероликвора в акушерской практике: Автореф. . докт. мед. наук. Куйбышев, 1954. - 37 с.

11. Атанова Е.М. Гетероликвор как средство, ускоряющее родовую деятельность: Тезисы научной работы «Акушерство и гинекология за период с 1951-54 г.». Куйбышев, 1955. - С. 17-22.

12. Ашмарин И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.- Л.: Медгиз, 1962. 179 с.

13. Ашмарин И.П. Малые пептиды в норме и при патологии // Пат.физиол. и экспер. тер. 1982. - №4. -С.13-27.

14. Бабичев В.Н. Нейроэндокринология пола. М.: Мир, 1981 .-С.69-80.

15. Балышева В.И., Чурбанова Г.Н., Вишняков И.Ф., Жестерев В.И. и др. Клеточные культуры в биотехнологии // Науч. основы технологии пром. производства вет. биолог. Препаратов: Тез. докл. Всеросс. конф. Щелково, 1996. - С.28-31.

16. Белова О.В., Арион В.Я., Орлова В.Ф., Дворцова В.В. и др. Влияние фракции компонентов кожи на пролиферацию эпидермальных клеток в культуре // Цитология. 1996. - Т.38. - №2. - С. 179-180

17. Беляков И.М. Диагностика внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных.- М.:Колос,1975.- 315 с.

18. Блинова Т.Н., Валякина Т.И., Несмеянов В.А. Влияние инкубации иммунокомпетентных клеток в бессывороточной питательной среде на их свойства // IV Всесоюз. конф. по биологии клетки: Тез. докл. Тбилиси, 1985. -С.81-83.

19. Бородина В.М., Федорова Л.И., Зеленин А.В. Способ культивирования клеток человека и животных // Бюллютень 34. 1989 - № 1507790.

20. Бордюгова Г.Г. Замещение стекловидного тела в хирургии глаза.-М., 1973.-С.112-115.

21. Бондаренко В.И. Действие ксеногенной спинномозговой жидкости на некоторые показатели сперматогенеза у свиней в условиях хронического эксперимента // Тр. Крымского мед. ин-та. 1988. - Т. 120. - С. 71-75.

22. Бредбери М. Концепция гемато-энцефалического барьера.1. М.Медицина, 1983.- 480 с.

23. Буеверова Э.И., Брагина Е.В., Резникова М.М., Ямскова В.П., Хру-щов Н.Г. Стимулирующее влияние адгезивного фактора сыворотки крови КРС на пролиферацию культивируемых клеток млекопитающих // Цитология. -1983. Т.25. - №9. - С. 1079-1081.

24. Букяльскене В., Домку с В. Ростстимулирующее и индуцирующее дифференцировку влияние фетальной сыворотки телят на культивируемые клетки // Цитология. 1996. - Т.38. - №2. - С. 184-185.

25. Бюллютень. ВОЗ, сер. техн. докл. -1988. №747.

26. Валишина Т.В. Совершенствование средств и методов лабораторной диагностике бешенства: Автореф. канд. вет. наук. Покров, 1992. - 24 с.

27. Вартанян Г.А. Проблемы нейрохимического уровня организации высшей нервной деятельности //Вестн. АМН СССР. 1987. - №9. - С.35-41.

28. Велева Е., Текерлеков П. Нови хидролизатни хранителни среди българско производство // Ветер. Сб. 1989. - Г.87. - бр.2. - С. 31-32.

29. Витакер А. Среды для культивирования клеток млекопитающих // Новые методы культуры животных тканей / Под. ред. А. Витакера. М.: Мир, 1976. С. 7-34.

30. Витина С.А. Изучение культур диплоидных клеток, полученных из тканей животных: Автореф. канд. биол. наук. Покров, 1972. - 20 с.

31. Вишняков И.Ф., Митин Н.И., Курносов А.Н., Колосов В.М. и др. Диагностика африканской чумы свиней. 1 Реакция гемадсорбции и задержки гемадсормции при АЧС // Вопр. ветер, вирус., микробиол. и эпизоот: Мат. науч. конф. ВНИИВВиМ. Покров, 1992. - С. 57-62.

32. Владимир, 1997. С. 179 - 180.

33. Гаврилова JI.H. Роль шейных симпатических нервов в секреторной деятельности задней доли гипофиза// Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 1952.- Т.38. - №4. - С. 463-470.

34. Гаврилова JI.H. Исследования по нейрогуморальной регуляции задней доли гипофиза // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова.- 1953. -Т.39. №3. - С.352-356.

35. Гаврилова JI.H. Данные к вопросу о раздельности гормонов задней доли гипофиза // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 1954. - Т.П. -№1. - С.60-64.

36. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных. -М.: Агропромиздат, 1990.-С. 123-126.

37. Герасимов В.Н., Куляшбекова Ш.К., Гусев А.А., Герасимова Н.И. и др. Морфологические и кариологические характеристики постоянных линий при длительном пассировании //Цитология. 1999. - Т.41. - №3. - С. 266-270.

38. Глинских Н.П., Зусман Ф.Я., Курумчина С.Г., Устьянцев В.П. Штамм перевиваемых клеток HeLa-КД, используемый для вирусологических исследований // А.С. № 1122692 от 7.11.84.

39. Глинских Н.П., Зусман Ф.Я., Устьянцев В.П., Закирова С.Ф. и др. Штамм перевиваемых клеток Нер-2-КД, используемый для вирусологических исследований // А.С. № 1122693 от 7.11.84

40. Глинских Н.П., Колесникова Т.Г. Клеточные культуры в вирусологии и биотехнологии // Вопр. эпидем., иммунолог., диагност, вирусных инфекций: Тез. докл.-М., 1991. С. 157-162.

41. Голиков А.Н., Бузанова Н.У., Кожебеков З.К. Физиология сельскохозяйственных животных. -М.: Агропромиздат, 1991. С. 36-39

42. Грачев В.П., Петриччиани Д. Оценка перевиваемых клеточных линий как субстрата для производства биологически активных веществ // ЖМЭИ. 1987. - №2.-С. 46-51

43. Грачев В.П. Современные аспекты крупномасштабного культивирования клеточных субстратов и вирусов // Культивирование клеток животных и человека: Тез. докл. науч. конф. Пущино, 1985. - С.61-64.

44. Грачев В.П., Дзагуров С.Г., Шалунова Н.В., Миронова JI.JI. Проблема использования культур клеток в производстве вирусных вакцин и вопросы контроля их безвредности // Руководство по вакцинному и сывороточному делу: Тез. докл. М., 1978. - С. 176-184.

45. Грачев В.П., Завальный М.А., Попова В.Д., Ханина М.К., Миронова JT.JT. Сравнение методов крупномасштабного культивирования клеток и вирусов // Вопр. вирусол. 1983. - №4. - С.44-49

46. Гриффите Дж.Б. Культивирование культур клеток // Биотехнология клеток животных / Под. ред. Р.Е Спиера. М.: Агропромиздат, 1989. - С.34 -39.

47. Голубев Д.Б., Соминина А.Л., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. Л.: Медицина, 1976. - 224 с.

48. Гомозков О.В. Физиологически активные вещества и гомеостаз // Гомеостаз.- М., 1981. С. 161-185.

49. Дмитриева Л.П., Букин А.Л., Шажко Ж.А., Перевозчикова Н.А. Ростовые свойства сыворотки КРС, обработанной сульфатом аммония // Акт. проб. вет. вирус.: Сб. стат. Владимир, 1978. - С. 35-36

50. Долгушин Е.М., Ткач В.В., Зяблов В.И., Шульгин Г.Т. Влияние ксе-ногенной спинномозговой жидкости на динамику прироста живой массы птиц// Тр. Крымского мед. ин-та.- 1982.- Т. 91.- С. 6-11.

51. Дурыманов А.Г., Шестопалов A.M. Новая перевиваемая культура клеток почки кошки (ПК-91), перспективная для репродукции парвовирусов плотоядных // Биотехнология. 1999. - №6. - С. 42-45.

52. Дьяков В.М. Биостимуляторы нового поколения// Земля и люди.-1980. N6.-С. 2-3.

53. Дьяконов Л.П. Гибридные и генетически трансформированные клетки сельскохозяйственных животных в биотехнологии // Цитология. 1992. - Т.34. - №9. - С.67-69.

54. Дьяконов Л.П. Культуры клеток и тканей как модель для изучения инфекционной патологии животных // Бюллютень ВИЭВ. 1978. - Вып. XXXIII. - С.3-8.

55. Дьяконов Л.П., Поздняков А.А., Панков Г.Е. Методические указания по криоконсервированию культур клеток животного происхождения в жидком азоте. М., 1978.-9 с.

56. Епифанова О.И. Гормоны и размножение клеток. М.: «Медицина», 1965.-465 с.

57. Жестерев В.И., Мищанин В.А., Юрков С.Г. и др. Оценка некоторых биологических свойств штаммов вируса болезни Ауески // Актуальные вопр. вет. вирусологии: Матер, научно-практ. конф. ВНИИВВиМ. Покров, 1995. - С.147-150.

58. Закутский Н.И., Жестерев В.И., Канакова Л.Д. Выращивание вируса ИРТ в перевиваемых культурах клеток. // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. Всерос. научн.-практ. конф. Владимир, 1995. - С. 90-92.

59. Зенин В.В., Никольский Н.Н., Скопичева В.И., Сорокин А.Б. Зависимость пролиферации клеток ЗТ6 от концентрации сыворотки в среде// Цитология. 1982. - Т.24. - №8. - С. 947-953

60. Зенкин А.С., Лабинов В.П., Пильгаев Ф.П., Гарбуз В.И. К оценке биологической активности ксеногенной спинномозговой жидкости //Материалы научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства.- Казань, 1995.- С.180-182.

61. Зенкин А.С., Пильгаев Ф.П., Лабинов В.П., Родина В.П., Гарбуз

62. B.И., Леткин А.И. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота как биологически активное вещество // Вестник ветеринарии. 1997. - N3. - С. 2830.

63. Зенкин А.С., Пильгаев Ф.П., Леткин А.И., Белкин С.В., Лабинов

64. Зенкин А.С., Пильгаев Ф.П., Лабинов В.П., Гарбуз В.И., Родина9

65. В.П. Применение цереброспинальной жидкости в качестве биологически активного средства //XXIV Огаревские чтения: Тез. докл. Саранск, 1995.- С.36 -39.

66. Зенкин А.С., Пильгаев Ф.П., Леткин А.И., Лабинов С.В. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота оригинальное биологически активное средство. // Вет. врач. - 2000. - №3. - С. 60-65

67. Зуев В.В., Юрков С.Г., Курносов А.Н. Коллекция культур клеток // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. М.: РАСХН, 1997. - Вып.2. - С.69-70.

68. Исаенко А.А., Немцов Ю.В., Царева А.А. Исследование кариотипа клеток почки африканской зеленой мартышки линии 4647, длительно культивируемых в средах с различными сыворотками // Цитология. 1990. - Т. 32. -№7. - С. 736-740.

69. Каган Г.Я., Раковская И.В. Микоплазма инфекция в культурах ткани.- М.: Медгиз, 1968 - 45с.

70. Калязина Н.Ю. Изменения в миелограмме кроликов при воздействии ультрафиолетого излучения на БАТ в зависимости от пола и возраста. // XXX Огаревские чтения: Матер, науч. конф. Саранск, 2001. - С. 171-173

71. Карпов Г.М., Вишняков И.Ф., Куриннов В.В. и др. Аттенуирован-ный штамм вируса чумы плотоядных Virus pestis car nivorum. // Патент РФ №2108385, приоритет от 18.06.1996., зарегистрирован в Госреестре изобр.1004.1998г.

72. Карпук В.А., Поздняков А.А., Крюков Н.Н. Культивирование перевиваемой линии клеток почки теленка на средах с низким содержанием сыворотки // II Всесоюз. сов. "Культивирование клеток животных и человека": Тез. докл. Пущино, 1985. - С.29-30.

73. Карпук В.А., Поздняков А.А., Крюков Н.Н. Культивирование перевиваемой линии клеток почки теленка ПТ-80 на среде с низким содержанием сыворотки // III Всесоюз. сов. «Культивирование клеток животных и человека»: Тез. докл. Пущино, 1989. - С. 29-31

74. Карпуть И.М. Кроветворение и иммунологическая реакция у свиней //Ветеринария.- 1975. N2. - С.34-37.

75. Карпуть И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных.- Минск.: Ураджай,1986.- 183 с.

76. Карышева А.Н., Карышев С.В., Доценко В.В. Эффективная основа питательных сред для культивирования клеток //Ветеринария. 1995 -№9. -С.34-37

77. Кассиль Г.Н. Гемато-энцефалический барьер.- М.: Издат. АН СССР, 1963.- 408 с.

78. Кассиль Г.Н. Внутренняя среда организма.- М.:Наука, 1983.-227 с.

79. Кацнельсон А.Б., Каплунович П.С. Лечение гемофтальма путем введения в стекловидное тело спинномозговой жидкости //Вестник офтальмологии.- 1959. N5.- С. 19-21

80. Климов А.Ф., Акаевский А.И. Анатомия домашних животных.-М., 1955.-413 с.

81. Климов А.Ф., Анатомия домашних животных. М., 1975.-413 с.

82. Клушина Т.Н. Получение L-форм бактерий в культуре ткани и на искусственной питательной среде и сравнительное изучение их биологических свойств с микоплазмами (плевропневмоние-подобными организмами): Автореф. канд.вет. наук. М., 1967.-18 с.

83. Ковалева И.А., Худяков Г.А., Кудрявцева Г.А., Манин Б.Л. Исследование кариотипа перевиваемых культур клеток для определения их стабильности. // Актуал. пробл. вет. вирусол.: Тез. докл. научно-практ. конф. Владимир, 1983. - С.17-18

84. Козырев Ю.И. Иммунофоретические исследования иммуноглобулинов //Реферативный журнал 82. Ветеринария. 1985. - Т.34.-№3.- С. 11131115

85. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии.-Минск, 1982. -366 с.

86. Колбасова О.Л., Юрков С.Г., Куриннов В.В., Середа С.Д., Кушнир С.Д., Смыслова Н.Ю., Чермашенцева Н.А. Клональная характеристика перевиваемой линии клеток почки поросенка (РК-15) // Доклады РАСХН.- 2000. -Вып.З. С.39-41.

87. Комолов И.С., Федотов В.П. Действие инсулина на пролиферацию и кинетику митотического цикла мышиных фибробластов (L) in vitro. //Проблемы эндокринологии.-1974. Т.VI. - №6 - С.52-55.

88. Кононский А.И. Биохимия животных.- М.: Колос, 1992 .- 526 с.

89. Конопелько Т.Е. Спинномозговая жидкость: оброзавание, циркуляция, отток. -Минск: МГМИ, 2000.- 18с.

90. Коренева А.И. Разработка питательной среды для культур клеток млекопитающих на основе ферментативного гидролизата казеина: Автореф. канд. биол. наук. М., 1995, 18 с.

91. Королев В. А., Прохорова Н. С., Бондаренко В. И ., Ивахненко В.Н. Ксеногенная спинномозговая жидкость и динамика морфологических критериев в онтогенезе белых крыс //Тр. Крымского мед. ин-та. 1988.- Т. 120. - С. 67

92. Кривопуск М.Е. Аминокислотный состав спинномозговой жидкости при эпилептическом синдроме //Неврология и психиатрия. 1980. - №6. -С.856-857.

93. Круман И.И. Сыворотка и размножение клеток in vitro / Институт биотехнологии. Пущино, 1981. - 15с. Деп. в ВИНИТИ 23.04.81, №3362-81.

94. Кузнецов А.К., Донков С.А. Минеральный состав ликвора у крупного рогатого скота и собак // Тр. Ленингр. Вет. ин-та. — 1990. Т. 111. - С.74-78

95. Куприянов С.И., Геринг-Галактионова И.В. Лечебное применениеспинномозговой жидкости при аллергозах //Профилактика и терапия аллерги0ческих заболеваний: Тез. докл. Киев,1976. - С.116-117.

96. Лабинов С.В. Сравнительная характеристика цереброспинальной жидкости и крови коров и быков в зависимоти от возраста: Автореф. . к.б.н. -Саранск, 2000.-16 с.

97. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 150с.

98. Ламберт К.Дж., Берг Дж.Р. Среды для выращивания клеток // Биотехнология клеток животных: Сб. стат. М., 1989. - С.98-138.

99. Лашкевич В.А. Пригодность перевиваемых клеточных линий для производства препаратов вводимых людям // Культивирование клеток животных и человека: Тез. докл. научн. конф. Пущино, 1992. - С.88-89.

100. Лащ А.П., Зенкин А.С. Перспективы применения цереброспинальной жидкости как компонента питательных сред // XXX Огаревские чтения: Матер, научн. конф. Саранск, 2001. - С. 169-171.

101. Леткин А.И. Морфофункциональные изменения в семенниках хряков при применении цереброспинальной жидкости: Автореф. . к.в.н.-Саранск, 2000.-18с.

102. Лисяный Н.И. Местная иммунная система головного мозга (обзор)// Физиологич.журн. 1988. - N2. - С. 112-117.

103. Литвинчук Л.Ф., Мамаева С.Е., Ковтунович И.Г., Пинаев Г.П. Ка-риотип постоянных клеточных линий. 1 изменчивость кариотипа клеток М-HeLa при статическом и роллерном способах культивирования // Цитология. — 1986. Т. 28.-№1. - С. 56-61

104. Лымарь В.Т., Прохор В.Ф., Ялышев М.Р. и др. Характеристика постоянной линии клеток ВНК-21 после 20 лет непрерывного хранения при температуре минус 196°С. // Биотехнология. 1992. - №5. - С.75-77.

105. Макаров А.Ю. Роль ликвора в нейрогуморальной регуляции физиологических функций живого организма // Успехи физиол. наук. 1974. - № 4. — С. 82-102.

106. Макаров А.Ю. Клиническая ликворология. Л.: Медицина, 1984.216 с.

107. Макаров А.Ю. Концепция интегративной функции ликвора в деятельности центральной нервной системы //Успехи физиол наук. 1992. -№4.-С.40-48.

108. Малахова И.В., Зорин Е.В., Новохатский А.С. Криоконсервация гибридом // II Всесоюзная конференция по теоретическим и прикладным вопросам криобиологии: Тез. докл. Харьков, 1984. - С. 171-173.

109. Малашхия Ю.А., Ланджария Л.Д., Микеладзе Н.А., Лачкобиани Г.Д. Некоторые данные о составе и физиологических функциях ликвора //Журн. невропат, и психиатрии. 1982. - Вып. 12. - С. 1777-1780.

110. Манин Б.Л., Худяков Г.А. Криоконсервирование перевиваемых клеток ВНК -21 под защитой этиленгликоля // II Всесоюзная конференция по теоретическим и прикладным вопросам криобиологии: Тез. докл. Харьков, 1984.-С.173-175.

111. Мамаева С.Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре // Цитология. 1996. - Т.38. - №8. - С. 787-814.

112. Мамаева С.Е., Михельсон В.М., Фридлянская И.И. Пролиферация клеток в культуре // Биология клетки в культуре / Под ред. С.Е. Мамаевой. Л.: Наука, 1984. - С. 10-49

113. Мамаева С.Е. Хромосомный анализ культивируемых клеток. // Методы культивирования клеток / Под ред. С.Е. Мамаевой. Л.: Наука, 1988. -С.78-81.

114. Миронова И.И. Клиническое значение исследования спинномозговой жидкости.- М.: Наука, 1987.- 28 с.

115. Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Козлов В.Г. Тест-система для определения ростовых свойств сыворотки и контроля их на спонтанную вирусную контаминацию // Цитология. 1994. - Т.36. - №6 — С.572-573.

116. Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Шитикова Г.С., Белоусова Р.В. и др. Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка субстрат для биотехнологии // Биотехнология. - 1998. - №5. - С.25-31.

117. Миронова Л.Л., Хапчаев Ю.Х. Культивирование клеток животных для медицинской биотехнологии. М.: Медицина, 1995. - 148 с.

118. Миронова Л.Л., Хапчеев Ю.Х., Попова В.Д., Лашкевич В.А. и др. Применение линии 4647 для крупномасштабного производства ВАКЧУМ // Цитология. 1994. - Т.36. №6. - С.573-575.

119. Мирошников В.М., Вишневский Р.Ф. Способ стимуляции роста культивируемых клеток млекопитающих // А.С. №1433976 от 30.10.1988.

120. Нариманов А.А. Бессывороточная среда для культивирования лим-фоидных клеток человека и миелоидных клеток мышей // Биотехнология. — 1991. №1. - С.41-51.

121. Недосеков В.В. Разработка и совершенствование средств и методов оценки эффективности вакцины против бешенства: Автореф. канд. вет. наук. Покров, 1998. - 17с.

122. Немсадзе М.В. Методика исследования коагуляционной активности спинномозговой жидкости // Тр. ин-та эксперим. и клинич. хирургии. 1973. -Т. 13. -С.293-298

123. Неустроева В.В. Контаминация культур клеток микоплазмами. Принципы и методы деконтаминации: Автореф. канд. вет. наук. М., 1969.-20с.

124. Николаева А.П. Нервногуморальные факторы в регуляции родовой деятельности (клинико-экспериментальные исследования).- Сталин-Донбасс, 1940.- 196 с.

125. Новохатский А.С. Клеточные культуры в вирусологии // Общая и частная вирусология / Под. ред. А.С. Новохатского М.: Медицина, 1982. -С.463-493.

126. Новохатский А.С. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии имолекулярной биологии // Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Вирусология.- М.: ВИНИТИ, 1979. Т.8. - С.3-135.

127. Новохатский А.С., Михайлова Г.Р., Хижнякова Т.М., Каталог перевиваемых линий. М.: АМН, 1985.-86с.

128. Ночевный В.Т. Биологический контроль ростовой активности питательных сред и сыворотки крови животных. // Питательные среды и сыворотки для культивирования клеток: Тез. докл. конф. Кольцово, 1991. - С. 46-49.

129. Осидзе Д.Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии. М.: Колос, 1975. — 41с.

130. Панкова Г.Е. Гидролизат мышечных белков как источник питания при культивировании клеток in vitro // Ветеринария. 1976. - №1. - С.98-100.

131. Панкова Г.Е., Сергеев В.А., Дьяконов Л.П., Осидзе Д.Ф. и др. Питательная среда для выращивания культур клеток животных // А.С. № 1025722, СССР, 1983.

132. Пападато Л.Л., Сапкова В.Н. Инкраниальный нервный аппарат и гормоны спинно-мозговой жидкости // Сов. Психоневрология. 1935. - N3. -С. 81-88.

133. Пападато Л.Л. Спинно-мозговая жидкость, ее роль в регуляции деятельности центральной нервной системы и лечебное значение // Уч. зап. Одесского психоневрологического ин-та.- Одесса: ОПИ, 1949. Вып. 1. - С. 143-158.

134. Пильгаев Ф.П. Изучение токсичности, пирогенности и переносимости цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота // XXVII Огаревские чтения: Матер, научн. конф. Мордовского госуниверситета им. Н.П.Огарева. Саранск, 1998. - С. 121-122.

135. Пильгаев Ф.П. Морфофункциональные изменения крови и щитовидной железы свиней при применении цереброспинальной жидкости: Дис.канд. вет. наук.- Саранск., 1999. -151 с.

136. Плакунов В.К. Основы энзимологии. М.: Логос, 2001. - 127 с.

137. Подчерняева Р.Я., Мельниченко Е.И., Конду Э.И. Использование ростстимулирующих белков для стандартизации условий культивирования клеток млекопитающих // Цитология.- 1996. Т.38. - №2. - С.240-241.

138. Полянская Г.Г. Влияние условий культивирования на кариотипиче-скую структуру двух клеточных линий фибробластов кожи индейского мун-тжака. // Цитология. 1989. - Т.31. - № 7. - С.807-817.

139. Полякова Э.Г., Георгиевская Т.Р. Влияние прижизненно взятой спинномозговой жидкости крупного рогатого скота на морфофункциональные особенности надпочечников свиней // Тр. Крымского мед. ин-та. 1989. — Т. 125. - С.57-60.

140. Полянская Г.Г., Дьяконова М.Ю. Влияние условий культивирование на кариотипическую структуру клеточной сублинии почки кенгуровой крысы. //Цитология. 1988. - Т. 30. - №11. - С. 1355-1363.

141. Полянская Г.Г., Ефремова Т.Н. Влияние микоплазменной контаминации на кариотипическую структуру клеточной линии фибробластов кожи индейского мунтжака // Цитология. 1992. - Т.34. - №3. - С. 82-88.

142. Полянская Г.Г., Ефремова Т.Н., Лизова Л.С. Влияние микоплазменной контаминации на кариотипическую изменчивость в клеточных линиях с разной структурой кариотипа // Цитология. 1996. - Т. 38. - № 2. - С.243-244.

143. Пригода А.А. Конструирование бессывороточных питательныхсред для культивирования клеток млекопитающих // Биотехнология.- 1991. -№5. С. 55-59.

144. Пригода А.А. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих // Биотехнология.- 1993. -№7. — С.21-25.

145. Прохорова Н.С., Бондаренко В.И. Динамика оксиредуктаз в некоторых органах крысы при введении ксеногенной спинномозговой жидкости // Тр. Крымского мед. ин-та.- 1986. Т.112.- С. 21-24.

146. Пулатов А.П., Никифоров А.С. Неврология.- Душанбе.: Маориф, 1990. С. 27-30.

147. Радолицкая J1.C., Бужиевская Т.И. Цитологическая характеристика однослойных тканевых культур в зависимости от условий культивирования // Цитология и генетика. 1973. - T.VII - №2. - С. 154-157.

148. Родин А.Ю. О некоторых гистохимических особенностях белкового обмена кожи крыс при введении ксеногенной спинномозговой жидкости // Тр. Крымского мед. ин-та.- 1988. Т. 120. - С. 15-25.

149. Розен В.Б. Основы эндокринологии.-М.: Мир, 1984. 210 с.

150. Любвей Ю.А., Ивченко Т.Н. Действие тироксина на размножение клеток в культуре Не1а//Проблемы эндокринологии.-1973. Т. XIX. - №5. - С. 90-94.

151. Саркисов С.А. Структурные основы деятельности мозга. М.: Медицина, 1980. - 114 с.

152. Слободенюк А.В., Колесникова Г.Г. Питательная среда для выращивания первичных и перевиваемых культур клеток // Патент 2036233. Россия, МКИ С 12 №5/00, опуб. 1995, бюл. №15

153. Смирнов A.M., Беляков И.М., Дугин Г.Л., Кондратьев И.М., Ленец И.А. Практикум по диагностике внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных.- М.: Агропромиздат, 1985.- С. 366-367.

154. Смирнова Т.Д., Литвинчук Л.Ф., Сизова Л.С. Новый способ контроля свойств сыворотки крови КРС // Цитология. 1996. - Т.38. - №2. - С.240-250.

155. Смирнов Ю.К., Подгорная Г.В., Шишов А.С., Алешина Б.Г. Цито-морфология спинномозговой жидкости при нейроинфекции, изученная по методу осаждения клеток на предметном стекле // Лаб. Дело. 1983. - №11-С.53-56.

156. Способ стимуляции роста культивируемых клеток млекопитающих /Мирошников В.М., Вишневский Р.Ф.//Авторское свид. №1433976 от 30.10.88

157. Семенова Е.Г., Хоменко А.В., Мамаева С.Е. Изменение клеточного цикла и кариотипа клеток L мыши при смене способа культивирования // Цитология. 1984. - Т.26.- №10 - С. 1156-1160.

158. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев: "Урожай", 1993. - 368 с.

159. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных. М.: Колос, 1976.-303 с.

160. Сергеева С.П. Потребности культур клеток в пластических веществах и некоторые вопросы конструирования питательных сред // Бюллетень ВИЭВ.- 1978.-Вып. 83.-С. 63-68

161. Сокова В.А. Цитологическое изучение различных клеточных культур в норме и после инфицирования их микоплазмами: Автореф. канд. биол. наук. Покров, 1973.

162. Сокова В.А., Трапезникова Т.М., Яснова Л.С. Кариологическая характеристика и ростовые свойства в однослойных культурах некоторых сублиний клеток ВНК-21 // Акт. вопр. вет. вирусол.: Тез докл. Владимир, 1976. - С. 67-69.

163. Сокова В.А., Курносов А.Н. Изменчивость перевиваемых клеток почки поросенка в процессе их непрерывного пассирования // Вопр. вет. виру-сол., микробиол. и эпизоотол.: Тез. докл. науч. конф. Покров, 1978. - С.23-24.

164. Сокова В.В., Рожнова О.В., Николаев А.К., Алеева JI.A. и др. Получение и использование клонов клеток ВНК-21 для промышленного выращивания вируса ящура // К новой стратегии борьбы с ящуром: Тез. докл. междун. конф. Владимир, 1991. - С. 107-108.

165. Сокова В.А., Трапезникова Т.М., Яснова JI.C. Кариологическая характеристика и ростовые свойства в однослойных культурах некоторых сублиний клеток ВНК-21 // Акт. вопр. вет. вирусол.: Тез докл. Владимир, 1976. - С. 67-69.

166. Сорокина Е.А., Новикова И.Ю., Гринчук Т.М., Сальников К.В. Анализ кариотипа мышиных фибробластов клона L 929 с применением дифференциальной окраски хромосом // Цитология. 1988. - Т. 30. - №2. - С. 197-204.

167. Спиер Р.Е., Гриффите Дж Б. Биотехнология клеток животных. -М.: Агропромиздат, 1989. 243 с.

168. Спыну К.И., Киптя П.К., Грушко Т.П. Питательная среда для выращивания культур клеток человека и животных // Патент 2057176. Россия, МКИ С 12 №5/00, 1996, бюл. №1.

169. Тараканов И.И., Родина А.Ю. Влияние прижизненно взятой спинномозговой жидкости крупного рогатого скота на содержание оксиредуктаз в коже крыс // Тр. Крымского мед. ин-та.-1987.-Т.1 С. 19-21.

170. Тараненко А.А., Федосимов В.А., Исследование уровня пролактина в крови и спинномозговой жидкости у коров. Тез. Докл. Всесоюз. науч.-техн. Конф. «Использование гормональных препаратов в животноводстве», М., 1991, С. 61-62

171. Тарасов В.Н. Культуры клеток в вирусологии // Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Вирусология, М., 1990, 19, 167с.

172. Тарасов В.Н. Культуры клеток в производстве биопрепаратов //

173. Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Вирусология, М., 1991, 21, 172 с.

174. Тартаковский А.Д. Питательные среды для культивирования клеток млекопитающих // Биология клетки в культуре. Д.: Наука, 1984.-С.44-47

175. Трапезникова Т.М. Изучение биологических свойств микоплазм клеточных культур и разработка методов их деконтаминации // Автореф. канд. дисс., М., 1972.

176. Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов. // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов (серия технических докладов ВОЗ №745), М., 1988.-С. 85-98

177. Ткач В.В., Бекетов А.И., Фомочкин И.П., Сивуха Н.И., Гусев Г.Ф., Громова Т.М., Свистов В.В. Влияние цереброспинальной жидкости на некоторые показатели кровотока и поглошение кислорода мозгом // Тр.Крымского мед. ин-та.- 1976. -Т.72- С. 7-10.

178. Ткач В.В., Михайлов А.В., Сивухин Н.Н., Королев В.А. Биологический эффект цереброспинальной жидкости при парантеральном введении в раннем постнатальном периоде // Тр. Крымского мед. ин-та.- 1978. -Т. 75. -С.18-21.

179. Топало В.Г., Мельников В.И., Макаров А.Ю., Ткач В.В., Сивуха Н.Н. Определение мелатонина в спинномозговой жидкости крупного рогатого скота // Химия природных соединений.- 1979. №2. - С.240-241.

180. Фаустов B.C., Чугасова В.А., Амбросова С.М., Шепель Л.И. Пути и способы создания бессывороточных сред для культивирования клеток млекопитающих. М.: Наука, 1985. - 45с.

181. Федоткина Л.К. Диагностическое значение клинико-лабораторных показателей при внутренних заболеваниях. Саранск, 1996.- 44с.

182. Федотов А.И. Ветеринарная ликворология. М.: Колос, 1951. 179с.

183. Федотова А.В., Снежко А.Г., Федотов А.В., Белавкина Н.С., Гальн-бек Т.В. Выращивание клеток щитовидной железы при пониженных концентрациях сыворотки крови // Цитология. 1994. - Т.36. - №6. - С.538-539.

184. Фридман А.П. Основы ликворологии. Л.: Биомедгиз, 1936.- 472 с.

185. Фридман А.П; О возможности переливания ликвора при травматических кровопотерях // Современное врачебный журнал. 1940. - N5. - С.369-370.

186. Фридман А.П. Основы ликворологии. Л.: Медгиз, 1957.-359 с.

187. Фридман А.П. Основы ликворологии. Л.: Медицина, 1967.-647с.

188. Фридман А.П. Основы ликворологии. Л.: Медицина, 1971.-647с.

189. Хаертынов С.Х., Мамлеева Н.К. Взятие крови с целью получения сыворотки для культивирования клеток // Ветеринария. 1982. - №11. - С.66-67

190. Хмельницкий O.K., Ступина А.С. Функциональная морфология эндокринной системы при атеросклерозе и старении.- Л.: Наука, 1989.-247 с.

191. Хрусталева И.В., Михайлов Н.В., Шнейберг Я.И. Анатомия домашних животных.- М.: Колос, 1994.- С. 313-353.

192. Хьюбел Д., Стивене Ч., Кандел Э. Мозг.- М.: Мир, 1984.- 347 с.

193. Царева А.А., Исаенко А.А., Урманова М.А., Юрченко Н.Д. и др. Исследование кариотипа клеток линии VERO длительно культивируемых в монослое статическим и роллерными способами // Цитология. — 1990. Т. 32. -№7.-С. 741-743.

194. Цветанова Е.М. Ликворология. Киев.: Здоровье, 1980.- 240 с.

195. Цветанова Е.М. Ликворология. Киев.: Здоровье, 1986.-185 с.

196. Цуцаева А.А., Петренко Т.Ф. Методические рекомендации на технологический процесс криоконсервации перевиваемых клеточных линий. — Харьков, 1985. -16 с.

197. Чалисова Н.И., Мелькишев В.Ф., Акоев Г.Н., Лиудино М.И. Стимулирующее влияние пролактина на рост нейритов чувствительных нейронов в органотипической культуре // Цитология. 1991. — Т.ЗЗ - №5 - С. 29-31

198. Чермашенцева Н.А., Чермашенцев В.И. Деконтаминация культуры клеток ППК-666 от персистирующего вируса классической чумы свиней //

199. Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол: Тез. докл. научн. конф. ВНИИВ-ВиМ. Покров, 1992. - С. 126-128.

200. Чепурнов С.А., Чепурнова Н.Е. Нейропептиды и миндалина.-М.: МГУ, 1985. -С.5-21.

201. Шамбуров Д.А. Спинно-мозговая жидкость.- М.: Сельхозгиз, 1954. -280 с.

202. Шалунова Н.В. Принципы стандартизации клеточных линий, применяемых в биотехнологии // Биотехнология культур клеток: Тез. докл. конф. -М., 1985.-С. 223-224

203. Шафеева Р.С., Лютов А.Т., Круталина Д.В., Загитова А.Г. Культивирование клеток в бессывороточной среде с ростовыми белками из сыворотки крупного рогатого скота // Акту ал. вопр. биохимии и биотехнологии: Тез. докл. конф. Уфа, 1998. - С. 261-263.

204. Штарк М.Б. Мозго-специфические белки (антигены) и функции нейрона.- М.:Медицина, 1985. -319 с.

205. Шульгин Г.Т. Влияние ксеногенной спинномозговой жидкости на течение воспалительного периода после острой кровопотери: Автореф. канд. мед. наук.- М., 1983. -21 с.

206. Щербаков А.В., Пильгаев Ф.П. Возрастная динамика весовых показателей крыс при парентеральном введении цереброспинальной жидкости // Сб. науч. тр. Саранск, 2000. - С.82-83

207. Эйнштейн Э.Р. Белки мозга и спинномозговой жидкости в норме и патологии. -М.: Мир, 1988. 278 с.

208. Юрищев Е.П. Нейроэндокринная система, водно-солевой обмен ипроницаемость гемато-энцефалического барьера в этиопатогенезе отека- набухания головного мозга при черепно-мозговой травме.- М.: Медицина, 1982. -346 с.

209. Юрищев Е.П., Добровольский Г.Ф., Илшценецкая В.Ф., Щербакова Е.Я. Цереброспинальная жидкость. -М.: БСЭД986. изд. 3. Т.27. С.513-535.

210. Яхно Н.Н., Штульман Д.Р., Мельничук П.В. Болезни нервной системы. М.: Медицина, 1995. -С. 19-49.

211. Barile M.F., Kern J. Isolation of mycoplasma arginini from commercial bovine sera its implication in contaminated cultures // Pros. Soc. Exp. Biol, a Med. — 1971.-Vol. 138,2.-P. 432-437.

212. Brown M.E. Diabetes X. Amer. Jour. Clin. Path. 1963.- XI, - 423p.

213. Brown M. Hypothalamic peptides central nervous sistem control of visceral functions.- Fed. Proc. 1981.- Vol.40. -N 1. - P. 2565-2569.

214. Bowers M. /Handbook of Neurochemistry, Vol. 1. ed. A. Lajtha, Ple-nium Press, New York. -1968. P 75-92.

215. Buchner A; Baumgartner W; Schlerka G. Klinisch-chemische Unter-suchung ausgewahlter Laborparameter im Жидкость cerebrospinalis und im Blut ge-sunder Rinder. Dtsch Tierarztl Wochenschr. -1995 -Vol.102, 8. P. 326-330

216. Cereco A.V., Chirlanda G.,fedeli G. et al. Insulin in the cerebrospinal fluid of man.-Eur.Neurol.(Basel). -1970. Vol.3, 5. - P.303-307.

217. Clarke G.B., Spier R.E. Variation in the susceptibility of BHK population and cloned cell lines to three strains of Foot-and-mouth disease virus.// Arch. Virol.- 1980. -, Vol.63 P. 1-9

218. Chen Z., Chen Y., Shi Y., Yie X., Yang G. Microcarrier culture of fishcell and viruses cell culture bioreactor // Can. J. Microbiol.- 1992.- №3. P. 222-225.

219. Chandler J. Cultivation of mamalian cells in serum free medium // Amer. Biotechnol. Lab. 1990. -Vol.8, 1. - P. 18-28.

220. Cserr T.F., Relationship between cerebrospinal fluid and interstitial fluid of brain // Fed. Proc. -1974. Vol. 33. - N9. - P.2075-2078.

221. Deng Quan-sheng, Johanson Conrad E. Stibenes inhibit exchange of chloride between blood, chorid plexus and cerebrospinal fluid //Brain. Res.-1989.-Vol.501.- Nl.-P.183-187.

222. Dixon W.E. Pituitari secretion // J.Phisiol. -1923.- Vol.57- №3 -P.129-138.

223. Dodo Т., Toda S. Vitreous replacement as a treatment of severe vitreous opacity // Acta soc. Ophthal. jap. -1985- №62. -P.129-131.

224. Dulbecco R., Freeman G. Plaque production by the polyomavirus // Vir-jlogy. 1959.- Vol.8. -P. 396-397

225. Eagle H. Amino acid metabolism in mammalian cell cultures // Science. -1959-Vol.130-P. 432-437

226. Eagle H. Media for animal cell culture // Tissue Cult. Assoc. Manual. -1977.-Vol.3.-P. 517-520.

227. Esber H.J. et al. J. Nat. Cancer Inst.- 1973,50.- 559p.

228. Fedoroff S. Comparison of cerebrospinal fluid and blood serum on tissue cultures // J. Lab. and Clin. Med. I960.- Vol.56.- №3.-P.431-437.

229. Felgenhauer K., Ackermann R., Schliep G. The process dinamics of vival and bacterial diseases of the central nervous system // J.Neurol.Sci. 1980. — Vol.47. -N1.-P.21-34.

230. Ford C.E., Hamerton J.L. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes // Stain Technol. 1956. -31-P. 247-251.

231. Fritz M. The sulstitution of cerebrospinal fluid for witrous clouded with opacities // Am. J. Ophthalm. -1947.- Vol.30, 8.- P.979-982.

232. Gullemin R. The brain as an endocrine organ-update // Endocrinol, exp.- 1982.- Vol.16. N3-4- P.151-162.

233. Garteya O.A. Serum-free cell culture media // Пат. СШАб пл. 435/2 (A OIN 1\02) №4201266 заяв. 14.12.78, № 969590, опуб. 27.05.80.

234. Gary L., Bradshaw and George R. Dubes supplementary factors required for serum-free culture of rat kidney cells of line NRK-49F // In vitro. 1983.-Vol. 19, 10.-P. 735-742.

235. Gaillard D., Negrel R., Serrero-Dave G., Cermolasse C., Ailhau D. Growth of preadipocyte cell linea and cell strains from rodents in serum-free hormone-supplemented medium // In vitro.- 1984.- Vol 20, 2. P.79-88.

236. Gospodarowicz D., Moran I.C. Optimal conditions for the study of growth control in BALB/c 3T3 fibroblasts // Exp. Cell Res. 1975.- Vol 90, 2. - P. 279-284.

237. Gospodarowicz D., Moran I.C. Growth factors in mammalian cell culture // Ann. Rev. Biochem. 1976. - N 45 - P. 531-538.

238. Griffiths B. Closing the culture gap // Biofutur. -1992 N 1 - P. 30-32.

239. Haumann H. Postmorten Chemistry of the vitreous in man arch//Oph-thalm. 1959. - Vol 62.-P.356-360.

240. Hayflick L., Moorpead P.S. The serial cultivation of human diploid cell strains .// Exp. Cell Res. 1961. -Vol. -N25- P. 585-621.

241. Hayflick L. Tissue cultures and mycoplasma // Texas Rep. Biol. a. Med.- 1965. Vol 1.23. - P. 285-303.

242. Heidermann R., Zhang C., et. al. The use of peptones as medium additives for high-density perfusion cultures of animal cell // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products., Switzerland, 25-29 April, 1999, p. 220.

243. Hegner C. Uber Jlaskorperersatz // Der dtsch Ophthal. Ves. -1928. N43 -P 391-393.

244. Higuchi K., Robinson R. Studies on the cultivation of mammalian cell lines in a serum-free, chemically defined medium // "In vitro". 1973. - Vol 9, 2.- P. 114-121.

245. Holley R.W. Control of growth of mammalian cells in cell culture //

246. Nature". 1975.- Vol.258, 55.- P. 487-490.

247. Iscove N.N., Melchers F. Complete replacement of serum by albumin, transferrin and soybean lipid in cultures of Cipopolysaccharide reactive B-lymphocytes // Exp. Med.- 1978.- N147.- P. 923-933.

248. Jrjima K., Morimoto K., Koizumi A., Higurashi M., Hirayama M. Bleo-mycin-induced chromosomal abberrations and sister chromatid exchanges in on Down's lymphocutes in culture. // Hem. Geneet. 1984.- Vol. 66.- P. 57-61.

249. Junker В., Wu F., Wang S., Waterbury J., et al. Evaluation of a microc-carier process for large-scale cultivation of attenuated hepatitis A // Cytotechnology. -1992.-N1-3.-P. 173-187.

250. Kafka U. Die zerebrospinalflussigkeit. Leipzig, 1930.-C.69-80.

251. Kaji Kazuhiko. Serum-free media for human diploid fibroblasts supplemented with plateletderived growth factor (PDGF) // Proc. Int. Symp. Growth and Differ Cells Difined Environ. Fukuoka, September 2-6, 1984.

252. Kniazeff AJ, Wopschall LJ, Hopps H.E., Morris CS: Detection of bovine virus in fetal bovine serum used in cell culture // In Vitro.- 1975.- Vol. 11.-P. 400403.

253. Klagsbrun M. Bovine colostrums supports the serum-free proliferation of epithelial cells but not of fibroblasts in long-term culture // J. Cell Biol. -1980- 88.- P. 294-300.

254. Kromer E., Scheirer W., Katinger H. Hormone supplemented cell growth media requiring only 2% foetal calf serum for reduced cost of routine cell culture// Dev. Biol. Stand -1982.- 50, P. 355-359.

255. Lehmann J. Aspects of medium recycling. // Cytotechnology, Suppl., 1989, 2.-P. 11-13.

256. Merrill C.R., Friedman T.B., Attaloah H.F., Geier M.R., Kreil K., Yarkin R. Isolation of bacteriophages from commercial sera // In vitro. -1987.- 8- P. 91-93.

257. Steimer K.S., Klagsbrun M. Serum-free growth of normal and transformed fibroblasts in milk: Differential requirements for fibronectin // J. Cell Biol. -1981.- 88- P.294-300

258. Mendonca R., Ioshimoto L., Mendonca R.M., De-Franco M., et al. Preparation of human rabies vaccins in Vero cell culture using a microcarrier system //Braz. J. Med. and Biol. Res. 1993 -N12 - P. 1305-1317.

259. Mohamed S.N.W., Holms R., Hartzell R. A serum-free, chemically defined medium for function and growth of primary neonatal rat heart cell cultures // In vitro.- 1983.- Vol 19, 6.- P. 471-478.

260. Puck T.T., Marcus P.I., Cieciura S.J. Clonal growth of mammalian cells in vitro. Growth characteristics of colonies from single HeLa cells with and without a feeder layer. // Exp. Mtd. 1956 - Vol. 103.- P. 273-284

261. Paul P.W., Buul van Goudzwaard I.H. Bleomycin-induced structural chromosomal abberrations in spermatogonia and lonemarrow cells of mice. // Mut. Res. 1980, Vol.69, P. 319-324

262. Paul D., Lipton A., Klinger I. Serum factor requirements of normal and simian virus 40 transformed 3T3 mouse fibroblasts // Proc. Nat. Acad. Sci. US.-1977, 68.-P. 645-648.

263. Petricciani J. Regulatory consideratins for products derived from the new biotechnology // Pharmaceutical Manufactura. -1985.- Vol 5- P. 31-34.

264. Rudland P.S., Limenez de Asua L. Action of growth factors in the cell cycle// Biohem. Biophys. Acta. 1979, 560. - P. 91-133.

265. Rusin A. Przeszczepienie pluny mozgwordzcniowe go do galki od-warstwienin satrowki klii oczna. -1965, 35- P.l- 43.

266. Saha S.N. Replacement of amino acids and tryptose phosphate broth with protein hydrolysates for the growth of FMD virus BHK-21 cells // Indian Vet. J. 1988.-N65.-P. 757-760.

267. Salk J. The spectre of malignancy and criteria for cell lines as substratesfor vaccines // Adv. Exp. Med. Biol. 1979. - №118. - P. 107-113.

268. Sato Gordon H. Divining the role of serum cell culture // Horm. Defined Media, Toll cell Biol. Berlin. 1982. - P. 2-3.

269. Serrero G.R., Mc Clure D.B., Sato G.H. Growth of mouse 3T3 fibroblasts in serum-free, hormone-supplemented media // In. Hormones and cell culture. Cold Spring Harbor, Book B. 1979, P. 523-530.

270. Sobky M. Guerison du decollement inoperabla apresla sclerotique. // Ophtalmologica ( Basel). -1957. Vol 134. - №2. -P. 112-113.

271. Spier R.E., Crarke J. Variation in the susceptibility of BHK populations and cloned cell lines to three strains of foot-and-mouth disease virus // Arch. Virol.-1980.- Vol. 63.-P. 1-9.

272. Schmidt R. M. Der liguor cerebrospinalis. Berlin, 1968.- 880 P.

273. Tackzono Т., Sakato K. Agent for stimulating growth of animal cells and serum-free medium containing same // Патент 5318906 США, МКИ С 12№5/00, А61К 35/14 Опуб. 1994, НКИ 435/2402.

274. Taub Mary, Sato Gordon. Growth of functional primary cultures of kidney epithelial cells in defined medium // Cell. Physiol.- 1980.- Vol.105, 2.- P. 369378.

275. Turner W E., Naess A., Nyland H. Multiple sclerosis, T-limphocytes in cerebrospinal fluid and blood//Eur. Neurol. -1959. -V.17. 61 p.

276. Yoshida H.,Kadokura Т., Migoshi S. Findings of cerebrospinal fluid and their clinical significance in dairi cattle // J. Japan Veter. Med. Assn. 1987. - Vol. 40.-N9.-P. 635-639

277. Zandegger P. Clinical expperieces with vitreous replacement // Am. J. Ophthalm.- I950.-Vol. 33,6.- P.915-920.

Оглавление диссертации Лащ, Андрей Петрович :: 2003 :: Саранск

Введение диссертации по теме "Патология, онкология и морфология животных", Лащ, Андрей Петрович, автореферат

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2003 года, Лащ, Андрей Петрович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций