Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные изменения органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе и при воздействии лекарственных ксенобиотиков

На правах рукописи

ДОНКОВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ОРГАНОВ ГОМЕОСТАТИЧЕСКОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ У КУР В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ И ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ КСЕНОБИОТИКОВ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Барнаул 2004

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии сельскохозяйственных животных ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет».

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор Чумаков Виктор Юрьевич

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Малофеев Юрий Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор Панфилов Алексей Борисович

доктор ветеринарных наук, профессор Дроздова Людмила Ивановна

Ведущая организация - Бурятская сельскохозяйственная академия

Защита состоится 20 октября 2004 г в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 в Алтайском государственном аграрном университете по адресу: 656922 г. Барнаул, ул. Попова, 276, т/факс (3852) 31-30-48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета

Автореферат

Ученый секретарь диссертационного с доктор ветеринарных наук, профессор

Барышников П.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Многообразие факторов окружающей среды, воздействующих на сельскохозяйственных птиц, определяет широкий диапазон морфофункциональных изменений в их организме. Специфическое воздействие на органы, ткани, клетки и субклеточные структуры, наряду с разнообразными биотическими факторами оказывают и лекарственные препараты, большинство из которых для организма являются чужеродными, то есть ксенобиотиками, способными нарушать морфофункциональный гомеостаз.

В физиологических условиях постоянство гомеостаза поддерживается системами экскреции и детоксикации: почками и печенью, а жизненно важные функции реализуются по определенным схемам биохимических взаимоотношений под контролем центральной нервной системы. При попадании в организм лекарственных ксенобиотиков, когда органы гомеостатического обеспечения не справляются с детоксикацией и элиминацией лекарств, развиваются цитотоксические явления и органопа-тии (Тимофеев Б.А. 1989; Байматов В.Н., 1997; Соколов В .Д. и др., 2002; Андреева Н.Л., 2002); кроме того, существует вероятность загрязнения продовольственного сырья и пищевых продуктов лекарственными кон-таминантами (Жиганова Л.П., 2000; Позняковский В.М., 2002; Donoghue D.J., Hairston H., 1999; Anadon A. et al., 2001). Поэтому так важна стру-турно-функциональная оценка общетоксического и специфического воздействия лекарственных препаратов на органы и ткани, отвечающие за адаптационно-приспособительные реакции, обеспечивающие гомеостаз.

Ведущим звеном в механизме поддержания гомеостаза у птиц (из-за отсутствия потовых желез) являются почки. Однако морфофункцио-нальные особенности и динамика становления почек кур в постнаталь-ном онтогенезе изучены недостаточно, нет единого представления о сроках их морфологического созревания (Макрушин, П.В., Демкин Г.П., 1976, Шнейберг Я.И., 1988). Кроме того, отсутствуют сравнительные данные о морфофункциональном развитии органов гомеостатического обеспечения у кур различных кроссов.

Широкое применение лекарственных средств в промышленном птицеводстве требует знания механизмов выведения их из организма птицы. Известно, что почечная экскреция включает в себя фильтрацию в сосудистых клубочках и канальцевый транспорт. Фундаментальные исследования Варшавского, Берхина, Наточина, Вейнара позволили составить общее представление о механизме канальцевого транспорта в почках. Однако остается недостаточно освещенным вопрос о морфологическом субстрате и цитохимической природе этого процесса, а имеющиеся данные носят противоречивый и фрагментарный характер.

Весьма актуальным является поиск методов, способных осуществлять общую детоксикацию организма птиц при лекарственных воздействиях с тем, чтобы с одной стороны нормализовать гомеостатические

Г?ОС. UAUV0«ЛЛИДУ ! SMWMOTE4A

функции, а с другой - организовать разрыв порочной цепи перехода и кумуляции лекарственных контаминантов в системе "птица - продукция птицеводства - человек". Одним из доступных в ветеринарной практике способов освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков, является энтеросорбция (Кузнецов А.Ф. др., 1998; Салитринник Л.И., 2001; Соколов М.Ю. и др., 2002; Рабинович М.И. и др., 2003), однако нам не известны сведения о влиянии энтеросорбции на показатели морфо-функционального гомеостаза кур и уровень лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции при лекарственных воздействиях.

Таким образом, изучение становления органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе, исследование параметров морфофункционального гомеостаза при воздействии лекарственных ксенобиотиков, изучение механизма их элиминации, а также разработка способа коррекции цитотоксического действия и снижения уровня лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции представляется весьма актуальным.

Цель и задачи исследований. Основная цель представленной работы заключалась в изучении становления органов гомеостатического обеспечения и параметров морфофункционального гомеостаза у кур в постнатальном онтогенезе и при воздействии лекарственных ксенобиотиков, исследовании цитофункциональной природы транспорта лекарств в почках и обосновании способа получения экологически чистой птицеводческой продукции.

Были поставлены следующие задачи:

1. Изучить общие закономерности и последовательные этапы развития почек у кур в постнатальном периоде онтогенеза на основе морфо-метрического, цитохимического и ультраструктурного анализа; а так же установить последовательность цитодифференцировки нефронов с учетом их гетерогенности;

2. Выявить ультраструктурные механизмы и цитохимическую природу трансцеллюлярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефро-цитах половозрелых кур;

3. Провести сравнительный анализ развития органов гомеостатического обеспечения, с учетом возрастной динамики морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов;

4. Установить основные изменения параметров морфофункциональ-ного гомеостаза у кур в условиях экспериментального лекарственного воздействия и исследовать уровень остаточных количеств лекарственных контаминантов в пищевых продуктах птицеводства: мясе, субпродуктах и яйцах птиц;

5. Изучить влияние энтеросорбента (полифепана) на показатели морфофункционального гомеостаза кур и уровень лекарственных конта-минантов в птицеводческой продукции в условиях экспериментального лекарственного воздействия.

Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное морфофункциональное исследование органов гомеостатического обеспечения у кур в возрастном аспекте и при воздействии лекарственных ксенобиотиков. Получены новые данные о морфологическом субстрате и цитохимической природе канальцевого транспорта лекарственных веществ в нефроцитах кур. Уточнены сроки морфофункционального созревания органов, обеспечивающих гомеостаз (почек, печени, головного мозга) у кур различных кроссов. Установлено, что чрезмерное лекарственное воздействие в период морфологической и функциональной незрелости органов гомеостатического обеспечения у кур, приводит к каскаду цитотоксических проявлений, развитию органопатий и контаминации птицеводческой продукции лекарственными препаратами. Впервые предложен способ снижения цитотоксического действия и уровня лекарственных контаминантов в продукции птицеводства при применении эн-теросорбента - полифепана (Заявка на изобретение №200312721/13, приоритет от 14.07.03).

Практическая значимость. Материалы дисссертационной работы легли в основу методических рекомендаций: «Методы оценки морфо-функционального статуса сельскохозяйственной птицы при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004), одобренных и принятых к внедрению НТС КрасГАУ, НТС при Министерстве сельского хозяйства республики Хакасия, на заседании отделения ветеринарной медицины ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН, и используются для оценки морфо-функционального статуса сельскохозяйственных птиц при воздействии биотических факторов, в частности лекарственных ксенобиотиков, на птицефабриках Красноярского края («Березовская», ОАО племзавода «Таежный») и республики Хакасия, а так же в работе ГУ Красноярской краевой ветеринарной лаборатории, ГУ Управления ветеринарии ЕМО г. Норильска Красноярского края и ГНУ НИИ сельского хозяйства Крайнего Севера.

Основные материалы работы используются в учебном процессе на 20 кафедрах аграрных ВУЗов России: Казанской и Санкт-Петербургской государственных академий; Мордовского и Хакасского государственных университетов; Алтайского, Дальневосточного, Красноярского, Новосибирского, Омского, Ставропольского государственных аграрных университетов; Бурятской, Вятской, Дагестанской, Кабардино-Балкарской, Приморской, Самарской, Ярославской государственных сельскохозяйственных академий, Красноярском институте переподготовки кадров.

Основные итоги исследований отражены в монографии «Цито-функциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004); практикумах: по морфологии «Общая гистология» (Красноярск, 2001) и по цитологии, гистологии и эмбриологии «Частная гистология» (Красноярск, 1999, 2002).

Основные положения, выносимые на защиту:

основные этапы развития почек и закономерности цитодифферен-цировки нефронов с учетом их гетерогенности у кур в постнаталь-ном онтогенезе;

ультраструктурная и цитохимическая характеристика трансцеллю-лярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур;

особенности развития органов гомеостатического обеспечения (почек, печени и головного мозга) и возрастная динамика морфобиохи-мических показателей крови у кур различных кроссов в условиях птицефабрик;

параметры морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных контаминантов в организме кур при экспериментальном лекарственном воздействии;

энтеросорбция полифепаном на фоне экспериментального лекарственного воздействия нормализует параметры морфофункциональ-ного гомеостаза кур и снижает уровень лекарственных контаминан-тов в мясе, субпродуктах и яйцах птиц. Апробация работы. Основные материалы исследований доложены, обсуждены и одобрены на: научно-практических конференциях Ленинградского ветеринарного института (Ленинград, 1984-1987) и Красноярского государственного аграрного университета (Красноярск, 19882003), Всесоюзном симпозиуме «Клеточные механизмы адаптации» (Крым, Карадаг, 1985), XXIV конференции студентов и аспирантов морфологических кафедр и лабораторий Ленинградских ВУЗов и НИИ, (Ленинград, 1985); заседании Ленинградского отделения Всесоюзного общества АГЭ (Ленинград, 1987); Всесоюзном совещании «Теории параллелизма А.А. Заварзина и современная биология» (Ленинград, 1986); II Всероссийском съезде АГЭ (Ленинград, 1988); III зональной научно-производственной конференции «Пути повышения эффективности сельскохозяйственного производства Восточной Сибири» (Красноярск, 1989); Всероссийской научно-производственной конференции «Гигиена, ветса-нитария и экология животноводства» (Чебоксары, 1994); научно-практической конференции «Достижения науки и техники - развитию г. Красноярска» (Красноярск, 1997); IX Международном симпозиуме «Реконструкция гомеостаза» (Красноярск, 1998); Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Достижения науки и техники - развитию сибирских регионов) (Красноярск, 1999, 2001, 2003); X Международном симпозиуме «Гомеостаз организма: медико-биологические аспекты» (Красноярск, 2000); межрегиональной конференции морфологов «Теоретические и практические аспекты ветеринарии и медицины» (Улан-Удэ, 2001); заседании Красноярского отделения Всероссийского общества физиологов им. И.П. Павлова (Красноярск, 2001); региональной научной конференции «Красноярский край - освоение, развитие, перспективы» (Красноярск, 2003); Международной

научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2003); XI Международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004).

Публикации. Основные научные положения, выводы и разработки диссертации изложены в 39 работах, в том числе в монографии «Цито-функциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков», двух практикумах, методических рекомендациях и научных изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 332 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 457 наименований, из них 165 зарубежных источника. Материалы диссертации иллюстрированы 35 таблицами, 80 микрофотографиями, 36 диаграммами и схемой.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования и обработка экспериментального материала проводились в течение 1983-2003 гг. на базе экспериментального хозяйства ВНИИ института генетики и разведения животных госплемптицесовхоза «Нагорный» Ленинградской области; в птицеводческих хозяйствах Красноярского края («Березовская», «Сибирская губерния» и ОАО племза-вода «Таежный»); на кафедрах: гистологии и общей биологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, анатомии и физиологии с.-х животных КрасГАУ, оперативной хирургии КрасГМА; на базе института Цитологии РАН (г. Санкт-Петербург); в биохимической лаборатории Красноярской краевой больницы и в испытательном центре КрасГАУ по контролю качества сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов.

Объектом исследования являлись цыплята-бройлеры и куры-несушки разновозрастных групп. Общая структура исследований представлена на схеме 1.

Материалом для цитоморфологического анализа послужили внутренние органы кур: почки, печень и головной мозг (изучено более 1500 гистологических препаратов и электроннограмм); материалом для мор-фобиохимического анализа являлись: цельная кровь, стабилизированная трилоном Б, сыворотка крови и мазки крови (исследовано 755 проб крови); для определения остаточных количеств антибиотиков в пищевых

продуктах исследовались образцы мышечной ткани (белое и красное мясо), субпродукты (почки, печень, головы, кожа с подкожной клетчаткой), бульон и яйца кур (исследовано 53 образца).

1. Особенности становления почек кур в постнатальном периоде онтогенеза изучали на 150 курах породы Белый леггорн, кросс 288 (гос-племптицесовхоз «Нагорный») различного возраста: 1-, 3-, 7-, 15-, 21-дневном и в 1-, 1,5-, 2-, 2,5-, 3-, 3,5-, 4-, 5-, 7-, 9-, 12- и 18-месячном возрасте. Для цитоморфологического анализа отбирали образцы из всех долей правой и левой почек от 7-12 птиц в каждой возрастной группе.

2. Цитофункциональную природу почечной экскреции лекарственных ксенобиотиков изучали в опытах на 60 половозрелых курах, которые содержались в индивидуальных клетках, были клинически здоровы и хорошей упитанности. В качестве лекарственного ксенобиотика использовали пенициллин, являющийся по химической природе слабой органической кислотой, и широко используемый для изучения механизма ка-нальцевого транспорта (Бреслер В.М., Никифоров А.А., 1981). Куры были разделены на четыре группы, в каждой группе по 15 птиц: первой группе вводили пенициллин внутримышечно в дозе 100 тыс. ЕД/кг живой массы, однократно; второй группе - в дозе 100 тыс. ЕД/кг массы тела четырехкратно с интервалом четыре часа; третьей группе - в дозе 50 тыс. ЕД/кг массы тела два раза в день с интервалом 12 часов, в течение семи дней подряд; четвертой группе - физиологический раствор внутримышечно в соответствующих объемах. Убой птицы и отбор образцов почек для цитоморфологического анализа производили через 0,5 ч, один, два, четыре и 24 часа после последнего введения препарата.

3. Особенности развития органов гомеостатического обеспечения (почек, печени и головного мозга) и возрастную динамику морфобиохи-мических показателей крови изучали на курах мясных и яичных кроссов. У цыплят-бройлеров кросса «ISA» (птицефабрика «Сибирская губерния») и кросса «Сибиряк» (птицефабрика «Березовская») исследования проводили каждые пять дней с момента вылупления до убоя птицы на мясо, всего исследовано 10 возрастных групп по 7-12 цыплят в каждой группе. У яичных кур кросса «Родонит» (птицефабрика ОАО племза-вода «Таежный»), кроме того, проводили морфобиохимический анализ крови в 120-дневном возрасте (период подготовки к яйцекладке) и в 190-дневном возрасте (разгар яйцекладки) от 10-12 птиц в каждой возрастной группе.

4. Изменения параметров морфофункционального гомеостаза кур при воздействии лекарственных ксенобиотиков и их коррекции изучали в экспериментах на цыплятах-бройлерах (кросс «Сибиряк») и курах-несушках (кросс «Родонит»). В качестве лекарственных ксенобиотиков использовали препараты алициклической структуры - тетрациклины, как наиболее часто применяемые на птицефабриках и являющиеся, из-за их минимального метаболизма, приемлемыми соединениями-маркерами

ИССЛЕДОВАНИЕ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ОРГАНОВ ГОМЕОСТАТИЧЕСКОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ У КУР В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ И ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ КСЕНОБИОТИКОВ

Становление почек кур в постнатальном онтогенезе

X

Цито-функциональная характеристика

транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах кур

г

Развитие органов гомеостатического

обеспечения и возрастная динамика морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов

-гистологические исследования; -ультраструктурный анализ; -цитохимический анализ; -морфометрия

г

Параметры морфо-функциопального гомеостаза у кур при экспериментальном лекарственном воздействии

-анализ применения лекарственных препаратов на птицефабриках; -динамика роста живой массы, печени, почек и головного мозга

Коррекция морфо-функциональных изменений у кур при лекарственном воздействии

-морфобиохимические исследования крови;

-цитоморфологаческий анализ почек, печени и головного мозга; -оценка остаточных количеств лекарственных коптаминантов

Рекомендации к использованию научных положений Схема 1. Общая структура исследований

для определения остаточных количеств в пищевых продуктах (45-й доклад ВОЗ, 1997; СанПиН 2.3.2.1078-01).

С целью коррекции морфофункциональных изменений при лекарственных воздействиях применяли полифепан (ПФ) - природный знте-росорбент, состоящий на 90% из гидролизного лигнина (Р №001047/022002). В первой серии опытов цыплята-бройлеры двухнедельного возраста были разделены на три группы, в каждой по 35 голов: 1 группа -контроль; 2 группа - окситетрациклина гидрохлорид (ОТЦ) в дозе 50 мг/кг живой массы перорально ежедневно в течение двух недель; 3 группа - ОТЦ (как во второй группе) + ПФ в дозе 0,5 г/кг живой массы перорально в течение семи дней подряд после окончания применения ОТЦ. Во второй серии опытов цыплята-бройлеры четырехнедельного возраста и куры-несушки 190-дневного возраста были разделены на три группы, в каждой по 35 голов: 1 группа - контроль; 2 группа - пролонгированная форма окситетрациклина - нитокс-200 (НТ) внутримышечно в дозе 200 мг/кг живой массы однократно; 3 группа - НТ (как во второй группе) + ПФ в дозе 0,5 г/кг живой массы перорально в течение семи дней подряд после применения НТ. Птицы контрольных групп получали в эквиобъемных количествах физиологический раствор. В ходе эксперимента у цыплят-бройлеров исследовались морфобиохимические показатели крови, а при убое птицы на мясо дополнительно проводился ци-томорфологический анализ почек, печени и головного мозга. Анализ остаточных количеств тетрациклина проводили в мясе цыплят-бройлеров на 14-е (в возрасте 42 дней) и 20-е сутки (в возрасте 48 дней); в мясе и яйцах кур-несушек - на 7-е и 30-е сутки после применения нитокса.

Основными методами цитоморфологического анализа были гистологические, гистохимические, электронная микроскопия, электронная цитохимия и морфометрия. Для гистологических исследований кусочки органов, размерами 0,5 см х 0,5 см, фиксировали в смеси Карнуа, Буэна, в 12 % нейтральном формалине и абсолютном ацетоне. Материал по общепринятой методике заливали в парафин и на санном микротоме изготавливали срезы, толщиной 5-6 мкм.

Гистологические и гистохимические исследования. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином Гарриса и эозином, железным гематоксилином по Гейденгайну, по методу ван-Гизона, по методу Мал-лори в модификации Гейденгайна.

Рибонуклеопротеиды (РНП) выявляли метиловым зеленым - пи-ронином по Браше. В качестве контроля использовали препараты, предварительно обработанные рибонуклеазой поджелудочной железы. Материал, который после контрольных тестов переставал воспринимать окраску пиронином и окрашивался слабее, принимали за РНП. Дезокси-рибонуклеопротеиды (ДНП) выявляли по Фельгену, с последующей до-краской срезов прочным зеленым. Общий белок определяли по методу Даниели в модификации Шубича.

Для дифференциальной характеристики углеводов использовали следующие методы: окрашивание срезов реактивом Шиффа при предварительном окислении препаратов периодатом калия по Мак-Манусу, в сочетании с энзиматическим контролем (инкубация срезов в растворе амилазы слюны при t +37^ в течение одного часа), реакцию с альциа-новым синим при рН=1,0 и при рН=2,7 при этом контрольные срезы подвергали мягкому и жесткому метилированию. Идентификацию компонентов углеводсодержащих биополимеров проводилась по схеме М.Г. Шу-бича и Г.М. Могильной. За гликоген принимали ШИК-позитивные субстраты, ферментирующиеся амилазой слюны. ШИК-позитивный материал, устойчивый к амилазе слюны относили к нейтральным гликопротеи-дам (ГП). Углеводсодержащие биополимеры, не окрашивающиеся аль-циановым синим, при рН=1,0 после мягкого метилирования, считали сульфатированными гликозаминогликанами (ГАГ), причем дающие голубую окраску при рН буфера 2,5 принимали за слабокислые сульфатиро-ванные ГАГ и гиалуроновую кислоту; дающие темносинюю окраску - за сиалогликопротеины; слабо окрашивающиеся - за сильнокислые суль-фатированные ГАГ. Кроме того, кислые ГАГ выявляли коллоидальным железом по Хейлу.

Цитоферментативный анализ. Для исследования фосфатаз, неспецифической эстеразы кусочки почки фиксировали холодным абсолютным ацетоном, с последующей заливкой в парафин, или нейтральным 12 % формалином при температуре 4°С не менее 24 часов, с последующим изготовлением срезов (15 мкм) на замораживающем микротоме типа ТОС-П. Каталическую активность щелочной фосфатазы определяли методом азосочетания с прочным синим В. В качестве субстрата использовали нафтол-А8-В1-фосфат. Активность кислой фосфатазы определяли с нитратом свинца по Гомори. Неспецифическую эстеразу выявляли по методу Берстона, в качестве субстрата использовали наф-тол-АЗ-13-ацетат. Активность сукцинатдегидрогеназы определяли на срезах свежезамороженной ткани по методу Нахласа.

Электронная микроскопия. Для электронномикроскопического исследования кусочки почки фиксировали в смеси, состоящей из двух частей 2,5 % раствора глутарового альдегида, разведенного на какодилат-ном буфере, с тоничностью 320 Мосм, и одной части 2% раствора четы-рехокиси осмия, той же тоничности. Через 30 минут кусочки промывали в какодилатном буфере дважды по 5 минут и дофиксировали 1% раствором четерехокиси осмия в течение 30 минут. Фиксацию проводили при t +4°^ После дегидратации в спиртах и абсолютном ацетоне материал заливали в аралдит. На ультрамикротоме типа LKB-Ш получали полутонкие и ультратонкие срезы. Полутонкие срезы (1 мкм) окрашивали 1% раствором толуидинового синего. Ультратонкие срезы (40-60 нм) контрастировали в уксуснокислом ураниле и цитрате свинца по Рей-нольдсу и просматривали в электронном микроскопе JEM-100, при ускоряющем напряжении 75, 80 кВ.

Электронная цитохимия. Для электронноцитохимического выявления мембран эндоплазматического ретикулума проводили фиксацию кусочков почки по методу G. Thiery и A. Ramburg (1976), с длительной импрегнацией в 1% растворе четырехокиси осмия при температуре 37°С. Материал заливали в аралдит и, не контрастируя, просматривали под электронным микроскопом JEM-100, при ускоряющем напряжении 75, 80 кВ.

Морфометрия. Живую массу кур определяли взвешиванием с точностью до 0,1 г; абсолютную массу почек, печени и головного мозга - с точностью до 0,001 г. О скорости роста живой массы и внутренних органов птиц судили по абсолютной и относительной величине прироста. Относительный прирост, показывающий энергию роста, его напряженность, рассчитывали по формуле Броди.

Морфометрические исследования почек, печени, головного мозга проведены на срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, и электронных микрофотографиях. Измерение и подсчет тканевых структур производили на микроскопах МБИ-6 и МБИ-15. С помощью окуляр-микрометра МОВ-1-15х (ГОСТ 15150-69) измеряли наружный и внутренний диаметр различных отделов нефронов, диаметр почечных телец, высоту и ширину клеток, диаметр их ядер. Количество нефронов подсчитывали по числу почечных телец в одном поле зрения микроскопа МБИ-6 (ок. 7, об. 40). На каждый случай использовали для подсчетов 810 произвольно отобранных срезов с различных стекол. Подсчет общего числа нефронов производили по методике Г.Г. Автандилова и З.Б. Зука-ковой (1975). На гистологических препаратах подсчитывали количество нормальных (НК) и дистрофически измененных (ДК) клеток, в число которых включали клетки с дегенерирующими ядрами, без ядер, и с разрушенной внешней клеточной мембраной/ Определяли коэффициент нормализации паренхимы - соотношение нормальных и дистрофический измененных клеток НК/ДК.

Морфометрические исследования на электронных микрофотографиях проведены при увеличении 30000.

Морфобиохимический анализ крови. Анализ процессов перекисно-го окисления липидов (ПОЛ) проводили путем измерения концентрации в сыворотке крови малонового диальдегида (МДА) в реакции с тиобар-битуровой кислотой (ТБК) по стандартной методике, включающей в себя инкубацию с ТБК исследуемой пробы, экстракцию продуктов реакции бу-танолом и спектрофотометрическое измерение их содержания на фото-электроколориметре КФК-2-УХЛ4.2 при длине волны 535 нм по методу Л.И. Андреевой с соавт. (1988). Определение уровня аланин- и аспарта-таминотрансфераз, холестерина, глюкозы, общего белка, проведены на биохимическом анализаторе «VERNO» с программным обеспечением фирмы «ПРОМИКС». Уровень билирубина определяли по методу Енд-рашика и соавтор. Уровень белковых фракций определяли нефеломет-рическим методом с использованием фотоэлектроколориметра КФК-2-

УХЛ4.2 (красный светофильтр). Гемоглобин определяли гемиглобинциа-нидным методом с использованием фотоэлектроколориметра КФК-2-УХЛ4.2 при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в счетных камерах Горяева. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определяли микрометодом Пан-ченкова. Лейкоцитарную формулу выводили на мазках, окрашенных по Паппенгейму (комбинированный метод, сочетающий окрашивание краской Май-Грюнвапьда, с последующим докрашиванием краской Романов-ского-Гимза, без предварительной фиксации) при объективе 90х, окуляре 15х.

Оценка остаточных количеств лекарственных контаминантов в

пищевых продуктах. В мясе, субпродуктах (почках, печени, головах, коже с подкожной клетчаткой) и яйцах кур, а так же в бульоне, приготовленном из тушек цыплят-бройлеров (при условии: разведение - 1:1, кипячение - 10 мин, экстракция - 2 часа) определяли остаточное количество антибиотика (тетрациклина).

Исследования проведены экспресс-методом (микробиологическим) определения антибиотиков в пищевых продуктах в Испытательном центре КрасГАУ по контролю качества сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов, согласно МУК 4.2026-95.

Единицы измерения приведены в соответствии с международной системой единиц (СИ).

Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента на персональном компьютере PENTIUM-III с помощью пакета программ Statgraf.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Развитие почек кур в постнатальном онтогенезе. Почки суточных цыплят характеризуются несформированностью и незрелостью своих структурно-функциональных компонентов, наличием под капсулой недифференцированной нефрогенной ткани и нефронов, находящихся на различных стадиях своего развития. Нефрогенная ткань содержит клетки двух типов - нефрогенные и мезенхимные. Нефрогенные клетки характеризуются полигональной формой, круглым гиперхромным ядром и базофильной цитоплазмой. Объем ядра преобладает над объемом цитоплазмы, что свидетельствует о малой дифференцированности нефрогенных клеток. Среди нефрогенных клеток встречаются митотиче-ски делящиеся.

Интенсивный нефрогенез в раннем периоде постнатального онтогенеза сопровождается уменьшением нефрогенной зоны. Первым этапом нефрогенеза является образование нефрогенных пузырьков и S-образных тел из малодифференцированных нефрогенных клеток с относительно крупным ядром и узким ободком цитоплазмы. В цитоплазме нефрогенных клеток имеется незначительное число митохондрий и эле-

ментов эндоплазматического ретикулума, а обилие рибосом и полисом обуславливает базофильный оттенок цитоплазмы. Эти клетки содержат небольшое количество ШИК-позитивного материала. Дифференцировка проксимального отдела нефрона начинается с формирования на апикальной поверхности клеток микроворсинок, где накапливаются ШИК-позитивные вещества и нарастает активность щелочной фосфатазы. Базальная плазматическая мембрана нефроцитов кур формирует незначительные по величине инвагинации, не вдающиеся далеко в тело клетки, что отличает их от аналогичных клеток млекопитающих, которым присуща базальная исчерченность. В нефроцитах дистальных отделов формируются значительные по величине инвагинации базальной плазматической мембраны, а апикальная плазматическая мембрана образует короткие и широкие выросты.

Основным источником нарастания абсолютной массы почек кур является рост числа нефронов и увеличение размеров нефроцитов. В почках кур всех возрастов выявлено два типа нефронов: корковые, не имеющие петли нефрона, что сближает их с нефронами рептилий; и мозговые - имеющие петлю нефрона, которая опускается в мозговое вещесто почки, что сближает их с нефронами млекопитающих. Соответственно гетерогенности нефронов в функции почек птиц тоже отражен их переходный характер (Braun E.J.,1982). В различных типах нефронов процесс цитохимического созревания протекает во времени неравнозначно. Соответственно более зрелому развитию ультраструктур клеток мозговых нефронов в них отмечается более высокая ферментативная активность. В процессе цитодифференцировки нефроцитов в их ядрах увеличивается концентрация ДНК, а в цитоплазме - активность щелочной и кислой фосфатазы, неспецифической эстеразы и сукцинатдегид-рогеназы. В корковом веществе почки повышается концентрация глико-протеидов, а в связующих канальцах и собирательных трубках - концентрация кислых гликозаминогликанов.

Идет дальнейшее усложнение ультраструктуры клетки, увеличиваются размеры митохондрий, осуществляется их ориентация вдоль латеральных клеточных границ, формируются элементы пластинчатого комплекса и профили гладкого эндоплазматического ретикулума, ядер-но-цитоплазматическое отношение становиться меньше единицы, что характерно для зрелых нефроцитов.

Процесс нефрогенеза завершается к 1,5-месячному возрасту, при этом становится максимальным число нефронов. Общее количество нефронов у кур с суточного возраста до 1,5-годовалого возрастает в 2,55 раза, в основном, за счет неогенеза корковых нефронов, число которых увеличивается более чем втрое; число мозговых нефронов за этот же период времени увеличивается в 1,4 раза (рис. 1).

Рис. 1. Количество корковых и мозговых нефронов у кур различного возраста

800000 700000 600000

500000 '' 400000 300000 1 200000 " 100000 '

■ корковы нефроны

□ мозговые нефроны

0

1 7 21 45 75 105 150 270

Дн.

Последующий период постнатальной жизни кур от 1,5-месячного до 4-месячного возраста характеризуется снижением митотической активности нефроцитов, прекращением новообразования нефронов и ростом размеров почечных клеток.

Установленная нами в раннем постнатальном периоде развития птиц незавершенность процессов морфогенеза почек совпадает с несовершенством почечных функций. С нашей точки зрения, низкий уровень гломерулярной фильтрации, выявляемый у цыплят в раннем постна-тальном онтогенезе, связан с количественными и качественными преобразованиями, которые претерпевает фильтрующий аппарат почки. Дифференцировка фильтрующей поверхности в почечных тельцах заключается в уплощении эндотелия капилляров, формировании единой гломерулярной мембраны с накоплением в ней углеводных компонентов гликокаликса и дифференцировки подоцитов. Незавершенность формирования почечных структур является одним из основных факторов, лежащих в основе низких показателей уровня реабсорбции и канальцевой секреции.

С 4-го по 9-й месяц постнатальной жизни кур имеет место гистологическая стабилизация почечных структур, в это время можно отметить лишь незначительное увеличение размеров почечных телец и нефроци-тов, появление в перитубулярных капиллярах единичных лимфоидных элементов. Почки взрослых кур в период наивысшей яичной продуктивности характеризуются значительным содержанием гликопротеидов и кислых гликозаминогликанов, белков, высокой ферментативной активностью щелочной, кислой фосфатаз и неспецифической эстеразы, а также морфофункциональной полноценностью фильтрационного барьера почки.

Гистологическая стабилизация почек начинает нарушаться с девятимесячного возраста. С этого времени в почках появляются первые признаки структурно-функциональных изменений. К 15-месячному воз-

расту почки кур характеризуются целым рядом инволютивных признаков, охватывающих почечные тельца и канальцы.

В клетках проксимального канальца отмечаются редукция щеточной каймы, просветление цитоплазмы и появление многочисленных гранул. Усиливается активность кислой фосфатазы и неспецифической эс-теразы, что пропорционально увеличению числа лизосом в нефроцитах полуторогодовалых кур.

3.2. Цитофункциональная характеристика канальцевого транспорта в нефроцитах половозрелых кур. Морфологическая картина при канальцевом транспорте пенициллина в почках кур характеризуется рядом ультраструктурных и цитохимических особенностей.

После однократного введения пенициллина в эпителии проксимального отдела нефрона происходило расширение элементов эндо-плазматического ретикулума. Нами установлено, что данный органоид в клетках контрольных кур подразделяется на несколько структурно различающихся зон: а) околоядерную область цитоплазмы пронизывают каналы и цистерны ретикулума с диаметром поперечного сечения 60,0±0,1 нм; б) вдоль латеральных клеточных границ расположены каналы гладкого эндоплазматического ретикулума; в) в области базолате-ральных клеточных границ встречаются комплексы гладкого эндо-плазматического ретикулума, в виде узкопетлистой сети переплетающихся трубочек, диаметром 35,0±0,2 нм.

После введения пенициллина через 30 минут отмечалось расширение элементов ретикулума во всех вышеуказанных зонах. Внутри расширенных элементов ретикулума появляется тонкофибриллярное вещество, заключенное в электронноплотный матрикс. Повышалась ос-миофильность мембран канальцев ретикулума. Отмечалось некоторое набухание митохондрий и просветление их матрикса, наружная мембрана утрачивала ровный контур и приобретала фестончатый характер. При этом форма крист, а также электронная плотность содержимого оказывались неизмененными. Вместе с тем происходило увеличение размеров пероксисом и цистерн пластинчатого комплекса, без повышения активности окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов. Ультраструктурные изменения наиболее ярко выражены через 30 минут после инъекции пенициллина, а через один час они практически не обнаруживались.

Изучение морфологической картины при субстратной стимуляции транспорта пенициллина в клетках проксимального отдела нефрона кур, позволило установить зависимость уровня адаптационной перестройки от кратности введения препарата и времени, прошедшего после последней инъекции, а также выявить цитохимическую природу данного процесса. Субстратную стимуляцию канальцевого транспорта пенициллина вызывали четырехкратным и многократным введением пенициллина (Берхин Е.Б. с соавт., 1977). Как и при однократном введении пени-

циллина, основные изменения касались расширения канальцев и цистерн эндоплазматического ретикулума. Наиболее существенные изменения отмечались в комплексах узкопетлистой сети эндоплазматического ретикулума. Наиболее хорошо эти комплексы выявляются при обработке срезов по методу Тиери и Рамбург. В клетках контрольных кур обычно обнаруживается не более одного такого комплекса на клетку.

При субстратно стимулируемом транспорте увеличивается число и размеры комплексов узкопетлистой сети ретикулярных каналов. В результате чего они занимают более обширную область вдоль базолате-ральных клеточных границ. Отмечалось набухание митохондрий, пространства между кристами увеличивались, а наружная мембрана становилась извилистой; что согласовывалось с повышением уровня сукци-натдегидрогеназы. Характерным морфологическим признаком при субстратной стимуляции канальцевого транспорта пенициллина явилось значительное увеличение размеров и числа пероксисом, в их матриксе появлялся кристаллоид. Активное функциональное состояние пероксисом свидетельствует о том, что активный трансцеллюлярный перенос ксенобиотика обеспечивается не только энергией митохондрий, но и ферментативными системами аэробного окисления. Кроме того, отмечалось повышение активности щелочной фосфатазы в щеточной кайме нефроцитов проксимального отдела, что может быть связано с дефос--форилированием вещества при выходе его через апикальную биомембрану.

При введении курам пенициллина в течении семи дней подряд в нефроцитах проксимального отдела наряду с вышеописанными изменениями отмечалось увеличение размеров пластинчатого комплекса и, как следствие этого, отмечалось повышение активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы. На светооптическом уровне в проксимальных отделах отмечалось некоторое набухание нефроцитов и сужение просвета канальцев, а также просветление кариоплазмы, что может быть связано с деспирализацией хромосом. В межканальцевой соединительной ткани отмечалась незначительная лимфоидно-гистиоцитарная реакция.

Все вышеуказанные изменения отмечаются уже через 0,5 часа после последней инъекции. Через два часа эти изменения были также отчетливо выражены, однако через сутки структура почек возвращалась в исходное состояние, что свидетельствует об адаптивной природе произошедших в клетке изменениях.

Таким образом, при введении половозрелым курам пенициллина клетки проксимального отдела нефрона способны к адаптационной перестройке, заключающейся в мобилизации внутриклеточных структур на быстрейшее выведение ксенобиотика из организма. Степень адаптационной перестройки зависит от кратности введения препарата и времени, прошедшего после последней инъекции.

3.3. Развитие органов гомеостатического обеспечения и возрастная динамика морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов в условиях птицефабрик. На птицефабриках при выращивании кур мясных и яичных кроссов широко используются разнообразные лекарственные средства, в том числе и антибиотики. Максимальное их применение приходится на ранний период постнатального развития, который характеризуются незавершенностью процессов морфогенеза и интенсивным ростом органов, отвечающих за освобождение организма от ксенобиотиков.

* * Наибольшая ско-

рость роста живой массы и органов гомеостатиче-ского обеспечения в по-стнатальном онтогенезе отмечается у кур скороспелых мясных кроссов. У цыплят-бройлеров кросса «Сибиряк» за 48 дней развития абсолютная масса почек увеличивается в 17,8 раза (Р<0,001), масса печени - в 16,1 раза (Р<0,001), масса головного мозга -в 3,5 раза (Р<0.001), а у цыплят-бройлеров кросса «ISA» за 42 дня развития масса почек увеличивается в 16,8 раза (Р<0,001), масса.печени Рис. 2. Динамика относительного прироста живой - в 16,6 раза (Р<0,001), массы и внутренних органов цыплят-бройлеров: масса головного мозга -кросс «Сибиряк»-А; кросс «ISA» - Б в 2 8 раза (Р<0 001)

Почки наиболее интенсивно растут в течение второй недели постна-тальной жизни цыплят, их прирост составляет 60% («Сибиряк») и 64% («ISA»); на третьей неделе скорость роста почек снижается и составляет 46% и 41% соответственно. Печень наиболее интенсивно растет в течение третьей недели, ее прирост составляет 61% («Сибиряк») и 63% («ISA»), при этом темпы роста печени опережают темпы роста живой массы, почек и головного мозга цыплят.

На четвертой неделе скорость роста печени снижается до 34% и 46% соответственно. На протяжении всего периода выращивания цыплят темпы роста головного мозга остаются невысокими и значительно отстают от роста живой массы, печени и почек. Наиболее интенсивно

головной мозг растет в течение второй недели, прирост составляет 2 1 % («Сибиряк») и 29% («ISA»).

Наряду с интенсивным ростом живой массы и органов гомеостати-ческого обеспечения, постнатальный период развития цыплят характеризовался изменениями морфобиохимического состава крови: увеличением уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, сменой гранулоци-тарного профиля крови на лимфоцитарный, повышением уровня общего белка, сменой р-глобулинемии на у-глобулинемию, что в целом свойственно для раннего постнатапьного развития птиц. Вместе с тем, некоторые морфобиохимические показатели крови не соответствовали норме и свидетельствовали о развитии у цыплят анемии, гранулоцитоза, лим-фоцитоза, плазмоцитоза, у-глобулинемии и повышении уровня цитоли-тических ферментов: аланин- и аспартатаминтрансфераз (АЛТ, ACT) (табл. 1).

Таблица 1. Морфобиохимические показатели крови цыплят-бройлеров в предубойном периоде, (М±т)

Показатель «Березовская», кросс Сибиряк (возраст 48 дней) «Сибирская губерния», кросс ISA (возраст 42 дня)

Гемоглобин, г/л 102,00±5,80 83,00±3,70

Эритроциты, 10'^/л 2,95±0,15 2,76±0,17

Лейкоциты, 10а/л 26,81 ±1,59 34,30±2,08

га Базофилы, % 2,0±0,50 4,0±0,35

2 5 Эозинофилы, % 5,0+0,71 8,4±1,35

£ Псевдоэозинофилы,% 20,4±1,96 35,2±2,22

Лимфоциты, % 66,4±1,82 49,2±3,61

с; Моноциты, % 6,2+1,29 3,2±0,89

Общий белок, г/л 49,60±1,30 48,60±1,57

Альбумины 34,8±1,56 38,6±1,30

3 1 о а- глобулины 19,2±1,56 19,0±2,18

I (2 Р- глобулины 15,4±2,14 6,8±2,22

V- глобулины 30,6±1,52 35,6±2,14

Холестерин, ммоль/л 3,5±0,10 3,5±0,16

Билирубин, мкмоль/л 4,6±0,05 4,6±0,14

Глюкоза, ммоль/л 7,47±0,40 7,78+0,10

АЛТ, нмоль/(с л) 20,20±1,49 28,80±1,34

ACT, нмоль/(с-л) 267,6±11,69 297,3±8,12

Коэффициент де Ритиса (АСТ/АЛТ) 13,91±1,27 10,55±0,64

Изменения морфобиохимических параметров крови свидетельствовали о нарушении гомеостатических функций у птиц и подтверждались цитоморфологическим анализом органов гомеостатического обеспечения. При этом выявлялись разнообразные формы дистрофических, воспалительных и дегенеративных изменений, чаще обнаруживаемых в печени и почках, реже в головном мозге цыплят.

У кур яичных кроссов (Родонит, Белый леггорн) постнатальный период развития характеризуется менее интенсивными и более продолжительным ростом живой массы и органов гомеостатического обеспечения. За 12 месяцев развития абсолютная масса почек увеличивается в 28,6 раза («Белый леггорн») и в 32 раза («Родонит»), масса печени - в 27 и 27,4 раза, масса головного мозга - в 3,7 и 3,5 раза. Наибольшая скорость роста живой массы и внутренних органов отмечается в первые две недели постнатапьной жизни птицы. Быстрее всех в этом периоде растут почки, прирост составляет 112,12% («Белый леггорн») и 111,54% (Родонит), они опережают по скорости роста живую массу птицы. Несколько медленнее интенсивность роста в этот период у печени -85,68% и 76,63%, и значительно отстает по темпам роста головной мозг - 39,64% и 33,25% соответственно.

В дальнейшем темпы роста почек, печени и головного мозга постепенно снижаются и к четырех-пятимесячному возрасту (период подготовки к яйцекладке) рост этих органов прекращается. К этому периоду отмечаются изменения морфобиохимического состава крови, свидетельствующие о нарушении гомеостатических функций у кур (табл. 2).

Таблица 2. Морфобиохимические показатели крови кур-несушек на птицефабрике ОАО племзавода «Таежный»

Показатели Возраст

115 дней (подготовка к яйцекладке) 190 дней (разгар яйцекладки)

Гемоглобин, г/л 77,78±3,34 81,33±4,30

Эритроциты, 101;г/я 2,72±0,16 3,06±0,10

Цветной показатель 1,01 ±0,07 0,94±0,07

Лейкоциты, 10а/л 30,78±2,22 35,00+1,89

Базофилы, % 1,17±0,52 2,17±0,59

X S Эозинофилы, % 5,17±0,77 11,33*1,15"

1 >х Псевдоэозинофилы, % 25,33±2,07 36,67±1,67"

Лимфоциты, % 62,33±1,69 45,00±1,81***

с; Моноциты, % 6,0+0,63 4,83±0,66

Общий белок сыворотки, г/л 40,50±1,20 59,20±0,00 ***

Резервная щелочность, об.%СО 22,53±3,05 27,95+2,70

Кальций, мг% 14,70±0,12 10,75±0,10"*

Фосфор, мг%; 6,90±0,42 8,25±0,34*

Соотношение СаР 2:1 1,3:1

Примечание: достоверность различий по сравнению

со 115-дневным возрастом: *Р<0,05; "Р<0,01; *"Р<0,001

При этом отмечается пониженное содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, гипопротеинемия, гиперфосфоронемия, низкий уровень резервной щелочности. В шести-семимесячном возрасте (период максимальной яйцекладки), отмечается незначительная гиперпро-теинемия, выраженная гипокальциенемия, ацидоз. При этом выявляют-

ся яркие цитоморфологические изменения в органах гомеостатического обеспечения у кур, особенно в печени, в виде острой и хронической токсической дистрофии, интерстициального гепатита и жировой дегенерации.

3.4. Параметры морфофункционального гомеостаза у кур при экспериментальном лекарственном воздействии. В условиях экспериментального лекарственного воздействия препаратами тетрациклина в организме цыплят развивались процессы дезинтеграции цитоплазмы гепато- и нефроцитов, повышалось образование продуктов свободнора-дикального окисления фосфолипидов биомембран, что приводило к угнетению активности процессов метаболизма ксенобиотиков и развитию цитотоксических эффектов.

У цыплят, получавших перорально окситетрациклин в дозе 50 мг/кг, на пятые сутки видимых изменений микроструктуры печени по сравнению с контролем выявлено не было. Лишь в отдельных гепатоцитах обнаруживалась мелкокапельная жировая дегенерация. На 10-е сутки в печени цыплят опытной группы выявлялись изменения в группе гепато-цитов, расположенных центролобулярно. Эти изменения были очаговыми и выражались в виде накопления мелко- и среднекапельных жировых включений в цитоплазме гепатоцитов. На 15-е сутки опыта отмечали умеренно выраженное диффузное мелко-, средне- и крупнокапельное ожирение печеночных клеток. В состоянии жировой дегенерации находилось большинство гепатоцитов центральной зоны печеночной дольки.

При подсчете нормальных и дистрофически измененных гепатоци-тов установлено, что на 10-е сутки применения окситетрацикна происходило снижение количества нормальных гепатоцитов на 33%; на 15-е сутки - на 51%; после отмены препарата к концу периода наблюдения количество нормальных гепатоцитов восстанавливалось, но все же было ниже нормы на 17%. Коэффициент нормализации паренхимы у цыплят на 15-е сутки опыта был самым низким за весь период наблюдения - 1,33±0,06, что ниже, чем в контроле на 66%; после отмены препарата этот коэффициент несколько нормализовался, оставаясь ниже контрольных значений на 41 % (табл. 3).

Высокая биологическая активность клеточных элементов почки обуславливает их довольно значительную ранимость лекарственными средствами. В почках цыплят, длительно получавших окситетрациклин, выявляли инфильтраты, локализирующиеся, главным образом, вокруг кровеносных сосудов в корковом и мозговом веществе и представленные лимфоцитами, плазматическими клетками, единичными макрофагами и небольшим количеством эозинофилов. При исследовании неф-роцитов проксимальных канальцев установлено, что зона микроворсинок практически не изменяется, в апикальной части клеток видны мелкие вакуолеподобные образования. Ядра нефроцитов с умеренной мар-

гинацией хроматина. Межклеточные пространства неравномерно расширены.

Таблица 3. Цитоморфологические показатели паренхимы печени цыплят-бройлеров при длительном применении окситетрациклина

Показатель Возраст/ время опыта, сут.

25/10 30/15 35/20 43/33

Нормальные гепатоциты (НГ) 15,3±0.47 16,1 ±0,43 15.60+0,42 10,50+0,45"* 15.10+0,61 7,4±0,39"* 14,80±0,49 12,30±0,45"

.Дистрофически "измененные гепатоциты (ДГ) 3.4±0.34 3,7±0,31 4.20+0.21 5,50±0,31** 4.20±0.41 5,6±0,28* 4.70±0.22 6,50+0,19*"

Коэффицент нормализации паренхимы (НГ/ДГ) 5.03+0.73 4,25±0,24 3.79±0,20 1,95±0,13"* 3.86±0,37 1,33±0,06"* 3.19±0.15 1,90±0,06*"

Примечание: в числителе - контроль; в знаменателе - опыт. Достоверность отличий по сравнению с контролем: * Р < 0,05; " Р < 0,01; *** Р < 0,001

С целью изучения дегенеративных явлений в головном мозге цыплят при длительном применении окситетрациклина исследовались различные зоны коры больших полушарий и мозжечка. Изучение гистологических срезов головного мозга цыплят позволило установить, что длительное применение окситетрациклина не вызывает выраженных деструктивных изменений в нейронах коры больших полушарий и мозжечке. Отмечены лишь небольшие изменения неспецифического характера, сводившиеся к хроматолизу и гиперхромности отдельных нейронов.

Развитие дистрофических и воспалительных реакций в печени и почках цыплят, длительно получавших окситетрациклин, сопровождалось активацией перекисного окисления липидов биомембран, ростом активности мембраносвязанных ферментов: аланин- и аспартатами-нотрансфераз, развитием диспротениемии, гипербилирубинемии, гипер-холестеринемии, гипогликемии, повышением СОЭ и изменением лейкоцитарного профиля крови.

Известно, что активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) представляет собой универсальное следствие воздействия на организм экстремальных агентов и в основном затрагивает свойства мембран клеток, значительно нарушая трансмембранный транспорт. Длительное перооральное применение цыплятам окситетрациклина приводило к активации процессов свободнорадикального окисления липидов биомембран, о чем свидетельствует увеличение содержания малонового ди-альдегида (МДА) - конечного продукта ПОЛ в сыворотке крови и сопровождалось развитием гипербилирубинемии, гиперхолестеринемии и гипогликемии (табл. 4).

Таблица 4. Биохимические показатели сыворотки крови цыплят-бройлеров при длительном пероральном применении окситетрациклина

Возраст/ время опыта, сут. МДА, мкмоль/л Холестерин, ммоль/л Билирубин, мкмоль/л Глюкоза, ммоль/л

Период воздействия

15/1 2.89540±0.15 2,97435+0,16 3.5±0.05 3,5±0,05 5.10±0.19 5,00±0,17 6.89±0.05 6,47±0,12*

20/5 2.93445±0.13 3,26450±0,20 3.0±0.10 3,0±0,20 5.05+0.34 5,50±0,42 7.40±0,13 6,14±0,05***

25/10 3.02564±0.14 3,59735±0,15* 3.0+0.12 3,0+0,21 5.00±0.24 6,07±1,04 7.37±0.17 4,52±0,11***

30/15 2,97435±0.16 4,11965±0,27" 3.5Ю.05 4,0±0,55 4.80±0.12 10,67±2,20* 6.165+0.24 4,68±0,20"

Период после воздействия

35/20 3.03703*0.14 3,908827±0,26* 3.5±0.11 4,5±1,05 4.60±0.34 10,00±1,56** 6.71±0.12 4,71 ±0,34***

42/27 2.93445±0.13 3,66972±0,23* 3.5±0.05 5,0±0,12*** 4.80+0.18 9,50+1,09** 6,515+0.28 4,68±0,20***

48/33 2.90539+0.04 3,21966±0,09* 3,5±0,16 4,5+0,22" 4.60±0,14 7,33±0,23*** 7.78+0.10 5,15±0,25***

Примечание: в числителе - контроль; в знаменателе - опыт. Достоверность отличий по сравнению с контролем: * Р < 0,05, ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

У цыплят, длительно получавших окситетрациклин, развивапась-ется гипопротеинемия, главным образом за счет снижения уровня альбуминов. При этом увеличение концентрации глобулинов свидетельствовало о нарушении белоксинтезирующей функции печени, липидного обмена и развитии воспалительных реакций в почечной и печеночной ткани.

Одним из основных механизмов цитотоксического действия лекарственных ксенобиотиков является повреждение плазматической мембраны и нарушение цитоскелета (blebbing). Этот процесс сопровождается выходом в кровь ферментов цитозоля: аланин- и аспартатами-нотрансфераз (АЛТ, ACT). В сыворотке крови цыплят активность ACT значительно преобладает над активностью АЛТ, о чем свидетельствует коэффициент де Ритиса (АСТ/АЛТ), который колеблется в пределах от 20 до 24, что в целом характерно для класса птиц.

Длительное пероральное применение окситетрациклина приводит к увеличению активности мембраносвязанных ферметов АЛТ и ACT. Преимущественное повышение активности АЛТ - маркера цитолиза ге-патоцитов, свидетельствовало о значительном поражении печени у цыплят (табл. 5).

Таблица 5. Уровень АЛТ и ACT в сыворотке крови цыплят-бройлеров при длительном пероральном применении окситетрациклина

Возраст/ АЛТ, ACT, АСТ/АЛТ

время нмоль/(с л) нмоль/(с-л) (коэффициент де Ритиса)

опыта, сут.

Период воздействия

20/5 10.8+1.43 232.0±17.24 22,22±1.95

14,011,22 283,2,0+25,29 20,97±2,98

25/10 9.4±1.44 219.4122.22 24.28+2.73

18,212,25* 317,6121,58* 18,1612,11

30/15 11,4±1.72 225.6119.85 20.84±2.57

23,412,20" 347,0122,69" 15,20±1,38

Период после воздействия

35/20 11.4+1.40 232.0+27.38 20,63±1,51

24,212,30" 295,0±22,72 12,29+0,53*"

42/27 10,6±1.15 221.8±22.64 21.07±1.06

21,0±3,22* 293,6±22,51 14,91 ±2,26*

48/33 9.811.67 224.4l34.92 24.03±3.38

18,4±2,86* 277,8+22,75 16,54±3,50

Примечание- в числителе - контроль; в знаменателе - опыт. Достоверность отличий по сравнению с контролем: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

Динамика изменений морфологического состава крови цыплят, длительно получавших окситетрациклин, свидетельствовала о развитии анемии, лейкоцитоза и значительном повышении скорости оседания эритроцитов (СОЭ) (табл. 6).

Таблица 6. Морфологические показатели крови у цыплят-бройлеров при длительном пероральном применении окситетрациклина

Возраст/ время опыта, сут. Гемоглобин, г/л Эритроциты, 1012/л Лейкоциты, 109/л СОЭ, мм/ч

Период воздействия

5/20 105.0±5,0 98,40±6,20 3,71±0.18 3,37±0,16 30.36±2.03 30,62±1,47 2.80Ю.20 3,4010,60

25/10 115.0±2.89 94,0±3,79" 3,72±0.09 3,ЗОЮ,19 29.2111.67 40,87±2,89" 3.20±0.53 8,2010,80***

30/15 107.4±4.95 68,40±3,37*" 3.71±0,135 2,99±0,13" 30.64±1.108 46,27±1,68*" 2.8010.28 14,20±0,66*"

Период после воздействия

35/20/ 109.0±4.12 104,60±4,27" 3.29±0.18 3,0±0,09 31.67211.30 42,7911,80" 3.20+0.20 4,0010,55

27/42 114.60±6.62 92,015,80* 3.24±0.11 3,17±0,137 29.6811.43 39,0011,89" 2.6010.25 3,8010,37*

48/33 116.2+5.38 90,40±5,19" 3.25+0.13 3,03±0,18 29.2811.24 42,5512,9" 3.00Ю.31 3,6010,25

Примечание, в числителе - контроль; в знаменателе - опыт. Достоверность отличий по сравнению с контролем * Р < 0,05, " Р < 0,01; *** Р < 0,001

Таким образом, длительное применение цыплятам окситетрацик-лина приводит к развитию дегенеративных изменений в печени, интер-стициальной воспалительной реакции в почках, сопровождается активацией ПОЛ, цитолизом гепатоцитов, явлениями холестаза, нарушением глюконеогенеза, диспротеинемией и изменениями морфологического состава крови.

Введение цыплятам пролонгированной формы окситетрациклина -нитокса-200, в дозе 200 мг/кг живой массы вызывало повышение уровня МДА, активности аминотрансфераз, особенно АЛТ, развитие признаков холестаза и гипогликемии (табл. 7), а так же диспротеинемию, грануло-цитоз и повышение СОЭ.

Таблица 7. Биохимические показатели сыворотки крови цыплят-бройлеров при применении нитокса

Показатель Возраст/время опыта, сут.

30/1 35/7 42/14 48/20

МДА, мкмоль/л 2.87628Ю.05 3,5897410,17" 2.82048±0.07 4,3248610,19'" 2.87747Ю.07 4,0221510,14"* 2.9794610.11 3,8519410,11'"

Холестерин, м моль/л 3,540.16 4,010,18 3.5+0.18 6,510,12"* 3.5+0.24 6,010,05"* 3.510.16 5,010,16"*

Билирубин, мкмоль/л 5.0Ю.26 7,3310,54" 5.1+0.61 10,6710,86"* 4.8+0.19 12,0+0,32"* 4.6 +0.05 9,5±1,09"

Глюкоза, ммоль/л 6.165+0.18 5,0±0,28" 6.71+0.24 4,5310,14"* 6.515+0,31 3,2010,10" 7.470+0.40 3,03Ю,28"

АЛТ, нмоль/(с-л) 11.40+1.72 18,60±1,20" 11.4011.40 24,0011,77"* 10,611.15 28,212,53"" 9.8+1.67 21,811,92"

ACT, нмоль/(с л) 225.60t19.85 270,40+14,77 232.0127.38 320,6116,19* 221.8122.64 362,4115,28"* 224.4134.92 322,6112,50'

Коэффициент де Ритиса (АСТ/АЛТ) 20.84±2.57 14,57±0,37' 20.63+1.51 13,6611,58* 21.0711.06 12,0610,58"* 24.03+3.38 15,1211,30'

Примечание: в числителе - контроль; в знаменателе - опыт. Достоверность отличий по сравнению с контролем: * Р < 0,05;" Р < 0,01; *** Р < 0,001

Вышеуказанные морфобиохимические изменения, вызванные применением нитокса, сопровождались развитием дегенеративных, некро-биотических и воспалительных процессов в органах гомеостатического обеспечения у цыплят. В печени цыплят в ранние сроки (первые и пятые сутки) после применения нитокса наблюдали изменения паренхимы деструктивного характера, проявляющиеся в виде жировой дистрофии ге-патоцитов разной степени выраженности и некробиоза центральной части печеночных долек. В более поздние сроки (10-е и 18-е сутки) отмечалась периваскулярная инфильтрация гранулоцитами, плазмоцита-ми и лимфоидно-гистиоцитарными элементами по ходу портальных трактов. В почках выявляли инфильтраты, локализующиеся вокруг сосудов в корковом и мозговом веществе, представленных лимфоцитами, плазмоцитами и небольшим количеством гранулоцитов. В разных обра-

зованиях мозга контрольных и опытных цыплят, обнаруживали отдельные нейроны, у которых ядра находились не в центре клетки, а были смещены несколько в сторону. Встречались пикнотические клетки, ядра которых представлялись интенсивно и диффузно базофильными, ядрышки были не различимы. Следует подчеркнуть, что указанные изменения установлены в крупных нейронах. Достоверных различий в содержании регрессивных форм нейронов в образованиях коры головного мозга у опытных и контрольных цыплят не выявлено. В молекулярном и зернистом слоях коры мозжечка птиц каких-либо существенных изменений выявлено не было. Среди крупных ганглионарных клеток Пуркинье встречались единичные нейроны с признаками хроматолиза. Количественный подсчет клеток с различными морфологическими отклонениями в мозжечке контрольных и опытных цыплят, не позволил выявить достоверной разницы.

3.5. Влияние энтеросорбции (полифепана) на показатели морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных кон-таминантов у кур при экспериментальном лекарственном воздействии. Применение полифепана на фоне лекарственного воздействия приводило к уменьшению выраженности основных синдромов эндогенной интоксикации организма птиц - активации процессов перекисного окисления липидов, цитолиза, диспротеинемии и холестаза; способствовало нормализации паренхимы печени и почек, а так же приводило к снижению остаточных количеств антибиотика в мясе, субпродуктах и яйцах кур.

Уровень малонового диальдегида (МДА) - конечного продукта ПОЛ в сыворотке крови цыплят, получавших полифепан после длительного перорального применения окситетрациклина, достоверно снижался и приближался к значениям интактных птиц (рис. 3).

Рис 3 Влияние полифепана (ПФ) на уровень МДА в сыворотке крови цыплят после длительного применения окситетрациклина (ОТЦ), мкмоль/л

П1 группа (контроль) 02 группа (ОТЦ) ИЗ группа (ОТЦ+ПФ)

При этом уменьшалось количество деструктивных гепатоцитов, что подтверждается достоверным увеличением коэффициента нормализации печеночной паренхимы (рис. 4).

В почках цыплят, получавших полифепан, лимфоидно-гистиоцитарная реакции в межканальцевой соединительной ткани ослабевала. Выраженных дегенеративных изменений в нефроцитах у этой группы цыплят не выявлено.

Исследуя активность маркеров синдрома цитолиза гепатоцитов (АЛТ и ACT), у цыплят, получавших энтеросорбент на фоне длительного лекарственного воздействия, установлено снижение активности этих ферментов во все исследуемые периоды. Коэффициент де Ритиса (АСТ/АЛТ), характеризующий морфофункциональное состояние гепато-цитов, отчетливо продемонстрировал нормализацию печеночной паренхимы у цыплят при применении полифепана (рис. 5).

Результаты исследования уровня белка и белковых фракций при использовании энтеросорбента, после длительного лекарственного воздействия, указывали на достоверное снижение диспротеинемии. Увеличение количества белка в сыворотке крови осуществлялось, в основном за счет увеличения концентрации альбуминов, синтез которых, как известно, происходит в гепатоцитах (рис. 6).

Рис 6. Влияние полифепана на уровень белка и белковых фракций у цыплят после длительного применения окситетрациклина

□ 1 группа (контроль) В2 группа (ОТЦ) □3 фуппа (ОТЦ+ПФ)

сут

□ 3 группа (ОТЦ+ПФ □2 фуппа (ОТЦ) □1 группа (контроль)

50 %

Применение цыплятам полифепана после длительного лекарственного воздействия окситетрациклина приводило к отчетливому снижению явлений холестаза, восстановлению функции глюконеогенеза, позитивно влияло на морфологический состав крови и нормализацию СОЭ (табл. 8). В лейкоцитарной формуле значительно снижалось количество гранулоцитов и соответственно увеличивалось количество агра-нулоцитов, приближаясь к контрольным значениям (табл. 9).

При исследовании остаточных количеств лекарственных контами-натов в мясе, субпродуктах и яйцах кур на фоне длительного перо-рального применения окситетрациклина и его пролонгированной формы - нитокса, обнаруживались высокие уровни антибиотика в различные сроки последействия препаратов.

На 14-е сутки (в возрасте 42 дней) после длительного перорально-го применения окситетрациклина наибольшее количество антибиотика определялось в почках, затем в печени, головах, мышечной ткани и в бульоне, приготовленном из тушки цыпленка. На 20-е сутки (в возрасте 48 дней), уровень остаточных количеств тетрациклина снижался по сравнению с предыдущим исследованием: в почках в четыре раза, в печени в 2,3 раза, в тканях головы, мышечной ткани и бульоне вдвое. Применение энтеросорбента - полифепана после длительного воздействия окситетрациклина приводило к снижению уровня антибиотика во всех исследуемых органах (табл. 10).

Таблица 8. Влияние лолифепана на морфобиохимические показатели крови цыплят-бройлеров после длительного применения окситетрациклина

Возраст/время опыта, сут. I группа (контроль) II фуппа (ОТЦ) III фуппа (ОТЦ+ПФ)

Холестерин, ммоль/л

35/7 3,4±0,27 4,8±0,42* 3,2±0,22*

42/14 3,510,25 5,0±0,12*** 4,0+0,25**

48/20 3,5±0,18 4,5±0,22** 3,0±0,18***

Били рубин, мкмоль/л

35/7 5,0±0,35 10,0±0,79*** 6,28±0,74**

42/14 5,80±0,42 9,40±0,91** 6,6±0,45*

48/20 5,6±0,27 8,4±0,57** 6,2+0,22**

Глюкоза, ммоль/л

35/7 6,71+0,64 4,71 ±0,27* 6,17±0,34*

42/14 6,515±0,48 4,68±0,52* 6,29±0,45*

48/20 7,78±0,10 5,15±0,25*** 7,53±0,52**

СОЭ, мм/ч

35/7 3,2±0,2 6,0±0,55** 3,4±0,42**

42/14 2,60±0,25 3,80±0,37* 3,4±0,60

48/20 3,00+0,31 3,60±0,25 3,0+0,31

Гемоглобин, г/л

35/7 109,0±4,12 84,6±4,27" 99,8±3,7*

42/14 114,60+6,62 92,0+5,80* 100,6±4,46

48/20 116,2±5,38 90,40±5,19** 109,7±3,52*

Эритроциты, 10и/л

35/7 3,29±0,18 3,0±0,09 3,54±0,23

42/14 3,24±0,11 3,17±0,137 3,26±0,23

48/20 3,25+0,13 3,03±0,18 3,39+0,12

Лейкоциты, 10а/л

35/7 31,67±1,30 42,79±1,80** 33,37±2,77*

42/14 29,68±1,43 39,00±1,89** 37,13±1,6

48/20 29,28±1,24 42,55±2,9** 32,83±1,82*

Примечание: достоверность отличий второй группы по сравнению с первой, третьей - по сравнению со второй: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

При внутримышечном введении пролонгированной формы тетрациклина - нитокса курам-несушкамв дозе 200 мг/кг, через семь и 30 дней после инъекции, в тканях, органах и яйцах обнаруживались остаточные количества антибиотика. Наибольшее количество антибиотика обнаруживали в яйцах, далее в красном и белом мясе, а менее всего в коже с подкожной клетчаткой. Во все исследуемые периоды, остаточное количество антибиотика в красном мясе всегда было больше, чем в белом. Через 30 дней после введения нитокса, остаточное количество препарата достоверно снижалось во всех исследуемых органах и тканях: в яйце - в 7,5 раза; в красном мясе - в 3,6 раза; в белом мясе - в 2,9 раза; а в коже с подкожной клетчаткой - в 2,9 раза.

Таблица 9. Влияние лолифепана на лейкоцитарный профиль крови цыплят-бройлеров после длительного применения окситетрациклина

Возраст/время 1 фуппа II группа III группа

опыта, сут. (контроль) (ОТЦ) (ОТЦ+ПФ)

Базофилы, %

35/7 3,6±0,45 5,4±0,45* 2,4±0,45"

42/14 4,0+0,71 5,4±1,64 5,0±1,54

48/20 4,0+0,61 2,4±0,76 3,6±1,04

Эозинофилы, %

35/7 13,0+0,71** 6,4±0,45"*

42/14 ' 3,4±0,84 4,4±1,10 4,6±1,6

48/20 5,6±1,25 1,2±0,65* 3,6±0,76*

Псевдоэозинофилы, %

35/7 29,4±1,20 42,0±1,41*" 31,8±1,24"*

42/14 33,2±2,07 44,4±4,09* 31,8±2,22*

48/20 25,6±1,64 27,8±1,29 28,6±1,35

Лимфоциты, %

35/7 55,0+2,15 33,6±0,45*** 52,4+2,25"*

42/14 53,4+1,82 35,4+3,25" 48,6±1,92"

48 /20 55,6±1,64 64,2±2,43* 54,4±1,86"

Моноциты, %

35/7 5,4+0,67 5,6±0,27 7,0±1,0

42/14 4,6±0,91 2,0±0,00* 10,0±2,09"

48/20 9,2±0,65 4,4±1,04" 9,8±1,98*

Примечание: достоверность отличий второй группы по сравнению с первой,

третьей - по сравнению со второй: * Р < 0,05; " Р < 0,01; *** Р < 0,001

Таблица 10. Влияние лолифепана (ПФ) на уровень остаточных количеств тетрациклина в мясе и субпродуктах цыплят-бройлеров после длительного перорапьного применения окситетрациклина (ОТЦ)

Возраст/время опыта, сут. ОТЦ ОТЦ+ПФ

Уровень тетрациклина в мясе, мг/кг

42/14 0,098±0,02 0,049±0,01

48/20 0,049±0,01 не обнаружено

Уровень тетрациклина в печени, мг/кг

42/14 0,196+0,03 0,14±0,03

48/20 0,084±0,02* не обнаружено

Уровень тетрациклина в почках, мг/кг

42/14 0,56±0,13 ' 0,28±0,06

48/20 0,14±0,03* не обнаружено

Уровень тетрациклина в тканях головы, мг/кг

42/14 0,12±0,00 0,06±0,00

48/20 0,06±0,00*" менее 0,007

Уровень тетрациклина в бульоне, мг/кг

42/14 0,06±0,00 0,03±0,00

48/20 0,03±0,00"* менее 0,007

Примечание: достоверность отличий 20-ых суток опыта по сравнению с 14-ми сутками: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

В мясе цыплят-бройлеров после введения нитокса остатки тетрациклина обнаруживались как на 14-е, так и на 20-е сутки, причем его количество в зоне инъекции было всегда значительно выше, чем в интакт-ной зоне. Так, на 14-е сутки (в 42-дневном возрасте) в месте инъекции (левое бедро) уровень тетрациклина был в 8 раз больше, чем в интакт-ной зоне (правое бедро). На 20-е сутки отмечалось снижение уровня тетрациклина в исследуемых зонах почти вдвое.

В группах цыплят-бройлеров и кур-несушек, получавших полифе-пан, после инъекции нитокса уровень остаточных количеств антибиотика снижался во всех исследуемых органах, тканях и яйцах птиц.

Так, в мясе (белом и красном), коже с подкожной клетчаткой и яйцах кур-несушек на седьмые сутки уровень тетрациклина несколько уменьшался, но достоверным это снижение было отмечено лишь к 30 суткам эксперимента (табл. 11).

В мышечной ткани у цыплят-бройлеров, получавших полифепан в течение семи дней после инъекции нитокса уровень тетрациклина достоверно снижался как в месте инъекции, так и в интактной зоне во все исследуемые периоды (табл. 12).

Таблица 11. Влияние полифелана (ПФ) на уровень остаточных количеств тетрациклина в мясе, коже и яйцах кур-несушек после инъекции нитокса (НТ), мг/кг

Группа Белое мясо Красное мясо Кожа с подкожной клетчаткой Яйцо

На седьмые сутки

НТ 0,560±0,13 1,343±0,30 1,19410,36 4,1810,37

НТ+ПФ 0,373±0,09 1,194±0,36 3,88+0,37 0,40310,05

На тридцатые сутки

НТ 0,196+0,03 0,37310,09 0,1410,03 0,56+0,13

НТ+ПФ Менее 0,007*** 0,07510,02* 0,056+0,00* 0,14910,05*

Примечание: достоверность отличий группы НТ+ПФ по сравнению с группой НТ: *Р < 0,05;** Р < 0,01; *** Р < 0,001

Таблица 12. Влияние полифелана (ПФ) на уровень остаточных количеств тетрациклина в мясе цыплят-бройлеров после инъекции нитокса (НТ), мг/кг

Группа Мышечная ткань (зона инъекции) Мышечная ткань (интактная зона)

Возраст: 42 дня

НТ 7,16810,00 0,89610,10

НТ+ПФ 5,01810,60** 0,358+0,06**

Возраст: 48 дней

НТ 4,12±0,25 0,40310,05

НТ+ПФ 0,78310,46*** 0,075+0,02***

Примечание: достоверность отличий группы НТ+ПФ по сравнению с группой НТ: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

ВЫВОДЫ

1. В постнатальном периоде онтогенеза почек кур можно выделить четыре основных периода: первый период (1-45 дней) характеризуется образованием новых нефронов из недифференцированной нефроген-ной ткани, лежащей под капсулой органа; а также усиленным ростом и дифференцировкой уже сформированных нефронов; второй период (45120 дней) - дальнейшим ростом массы почки за счет увеличения размеров клеток и их пролиферации; третий период (120-270 дней) - относительной стабилизацией структурно-функциональных единиц почки; четвертый период (270 дней и старше) - комплексом структурных изменений, приводящих к нарушению функциональной активности почек.

2. Основным источником неогенеза почек кур является рост числа нефронов и увеличение размеров нефроцитов. Образование нефронов осуществляется из недифференцированной нефрогенной ткани в направлении от центра органа к его периферии и включает в себя следующие стадии: а) образование нефрогенного пузырька; б) образование S-образного тела; в) появление первых гломеруллярных капилляров; г) образование непрерывного канальцевого эпителия со щеточной каймой; д) формирование зрелого канальца.

3. К моменту вылупления почки кур являются морфологически незрелыми; цитодифференцировка их морфофункциональных единиц продолжается вплоть до полуторамесячного возраста. Дифференцировка фильтрующей поверхности почечных телец заключается в уплощении эндотелия капилляров, формировании единой гломеруллярной мембраны, с накоплением в ней углеводных компонентов гликокаликса, и формировании подоцитов. Дифференцировка эпителия проксимального отдела нефрона заключается в образовании микроворсинок с накоплением в них гликопротеидов, белка, щелочной фосфатазы и формировании базальных инвагинаций.

4. В почках кур всех возрастов имеются нефроны двух типов: корковые, не имеющие петли, чем напоминают нефроны амфибий и рептилий, и мозговые, имеющие петлю, что сближает их с нефронами млекопитающих. В процессе нефрогенеза наблюдается корково-мозговой понижающий градиент темпов роста почечных телец и канальцев и противоположно направленный градиент их размеров.

5. Нефроны половозрелых кур характеризуются значительным содержанием гликопротеидов, кислых гликозаминогликанов, белков, высокой ферментативной активностью фосфатаз, неспецифической эстера-зы и сукцинатдегидрогеназы, а также морфологической зрелостью фильтрационного барьера почки. К концу первого года жизни кур в их почках начинают обнаруживаться дегенеративные явления, заключающиеся в увеличении доли соединительнотканных компонентов и накоп-

лении в них ШИК-позитивного материала, редукции щеточной каймы, накоплении в цитоплазме нефроцитов кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы, а также увеличении числа лизосом.

6. При введении половозрелым курам пенициллина клетки проксимального отдела нефрона способны к адаптационной перестройке, заключающейся в мобилизации внутриклеточных структур на быстрейшую элиминацию ксенобиотика. Степень адаптационной перестройки зависит от кратности введения препарата и времени, прошедшего после последней инъекции. Адаптационные возможности системы секреторного транспорта органических веществ ограничены, при повышенных лекарственных нагрузках происходит дезинтеграция внутриклеточных структур, что приводит к снижению уровня секреции ксенобиотика.

7. Транспорт органического вещества от базальной к апикальной плазматической мембране связан с определенными субклеточными структурами и не является результатом простой диффузии. Основными элементами, участвующими в переносе вещества по цитоплазме, являются: эндоплазматический ретикулум с комплексом узкопетлистой сети, пластинчатый комплекс и пероксисомы. Активному функциональному состоянию органоидов при транспорте пенициллина соответствует повышенная активность сукцинатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы и увеличенное содержание рибонуклеопротеидов.

8. На птицефабриках при выращивании кур широко используются разнообразные лекарственные средства, в том числе и антибиотики. Максимальное их применение приходится на ранний период постна-тального развития, который характеризуются незавершенностью процессов морфогенеза и интенсивным ростом органов, отвечающих за освобождение организма от ксенобиотиков.

9. Ранний период развития у кур мясных кроссов («Сибиряк», «ISA») характеризуются высокими темпами роста органов гомеостатического обеспечения: почки наиболее интенсивно растут в течение второй недели постнатальной жизни, их прирост составляет 60% («Сибиряк») и 64% («ISA»); печень - в течение третьей недели, прирост - 61% и 63%; головной мозг - в течение второй недели, прирост - 21% и 29% соответственно. У яичных кур («Родонит», «Белый леггорн») постнатальный период развития характеризуется менее интенсивными и более продолжительным ростом органов гомеостатического обеспечения. Наибольшая скорость роста отмечается в первые две недели развития. В дальнейшем темпы роста постепенно снижаются и к четырех-пятимесячному возрасту масса органов стабилизируется.

10. У цыплят, выращиваемых на птицефабриках, с возрастом изменяется морофобиохимический состав крови: увеличивается уровень гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, гранулоцитарный профиль крови сменяется на лимфоцитарный, повышается уровень общего белка, р-глобулинемия сменяется на у-глобулинемию, что в целом свойственно для раннего постнатального развития птиц. Эти возрастные изменения

часто не соответствуют физиологическим нормам и свидетельствуют о нарушении гомеостатических функций у птиц, что подтверждается многообразием форм дистрофических, воспалительных и некробиотических процессов, чаще обнаруживаемых в печени и почках, реже в головном мозге кур.

11. Применение цыплятам в ранние сроки постнатального онтогенеза лекарственных ксенобиотиков (тетрациклинов обычного и пролонгированного действия) приводит к нарушению параметров морфофункцио-нального гомеостаза, развитию дегенеративных и воспалительных процессов в органах гомеостатического обеспечения и накоплению лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции.

12. Морфобиохимические изменения крови у цыплят при воздействии тетрациклинами проявляются в виде активации ПОЛ, увеличении активности мембраносвязанных ферментов (АЛТ и ACT), диспротеинемии, гипербилирубинемии, гиперхолестеринемии, гипогликемии, гранулоци-тозе и повышении СОЭ.

13. Цитоморфологические изменения органов гомеостатического обеспечения у цыплят при воздействии тетрациклинами характеризуются: в печени - постепенным увеличением числа дегенеративных гепа-тоцитов, снижением коэффициента нормализации паренхимы и развитием диффузной жировой дегенерации; в почках - развитием интерсти-циальной воспалительной реакции; в головном мозге (коре больших полушарий и мозжечке) - выраженных деструктивных изменений не установлено.

14. Остаточные количества лекарственных контаминантов в организме кур при применении тетрациклинов обнаруживаются в различные сроки последействия препаратов. При длительном пероральном применении цыплятам-бройлерам окситетрациклина наибольшее количество антибиотика определяется на 14-е и 20-е сутки в почках, затем в печени, головах, мышечной ткани и бульоне. При внутримышечном введения цыплятам-бройлерам нитокса максимальный уровень тетрациклина выявляется в зоне инъекции. После введения нитокса курам-несушкам наибольшее количество антибиотика обнаруживается на седьмые и 30-е сутки в яйцах, далее в красном и белом мясе, и менее всего в коже с подкожной клетчаткой.

15. Энтеросорбция полифепаном приводит к уменьшению цитоток-сичности лекарственных ксенобиотиков (активации ПОЛ, цитолиза, хо-лестаза, диспротеинемии, гранулоцитоза), нормализации паренхимы органов гомеостатического обеспечения (печени и почек) и снижению уровня лекарственных контаминантов в мясе, субпродуктах и яйцах кур.

Практические предложения и рекомендации

1. Установленные закономерности роста, развития и дифференци-ровки органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе, характер адаптационной перестройки внутриклеточных структур при транспорте лекарственных веществ, а так же выявленные нарушения морфофункционального гомеостаза у кур при воздействии лекарственных ксенобиотиков рекомендуем к использованию: в учебном процессе на ветеринарных, биологических и зооинженерных факультетах; при написании учебных пособий, монографий по биологии с.-х птиц, возрастной и экспериментальной морфологии, экологии; при проведении научно-исследовательских работ по изучению фармакоки-нетики лекарственных препаратов у птиц.

2. Для оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственных птиц при воздействии биотических факторов, в частности лекарственных ксенобиотиков, ветеринарным специалистам птицефабрик и лабораторий рекомендуем проводить цитоморфологический анализ органов го-меостатического обеспечения, в комплексе с морфобиохимическими исследованиями крови и оценкой уровня загрязнения лекарственными контаминатами птицеводческой продукции.

3. Птицеводческим хозяйствам, где широко используются разнообразные лекарственные препараты целесообразно, на заключительных этапах выращивания птицы применять природный энтеросорбент - по-лифепан с целью получения продовольственного сырья и пищевых продуктов свободных от лекарственных контаминантов.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Винниченко Л.Н., Донкова Н.В. Электронномикроскопическое исследование эпителия почки крысы секретирующего органические основания // Морфология сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. Ленинградского ветеринарного ин-та. - Л ., 1985. - Вып. 81. - С. 31-34.

2. Винниченко Л.Н.. Донкова Н.В., Москалева Т.В. Электронномикроскопическое исследование эпителия проксимальных канальцев почки крысы при секреции прозерина // Фармакология почек: Материалы обл. науч. конф. - Куйбышев, 1985. - С. 11 -12.

3. Винниченко Л.Н., Гамбарян С.П., Донкова Н.В. Сравнительный анализ ультраструктуры эпителиальных клеток нефронов некоторых позвоночных животных при транспорте слабых органических кислот // Теория параллелизма А.А. Заварзина и современная биология: Тезисы докл. и со-общ. Всесоюзн. совещ. - Цитология. -1986. - Т.28. - №10. - С.1127-1128.

4. Донкова Н.В. Гистохимические и электронномикроскопические особенности строения эпителия почки курицы // Морфология сельскохозяй-

ственных животных: Сб. науч. тр. Ленинградского ветеринарного ин-та. -Л.,1986.-Вып. 87.-С.16-19.

5. Донкова Н.В. Закономерности возрастной дифференцировки нефро-нов у кур в постнатальном периоде онтогенеза//Морфология сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. Ленинградского ветеринарного ин-та.-Л., 1987.-Вып. 93.-С. 21-26.

6. Донкова Н.В. Цитофункциональные и ультраструктурные особенности почек кур породы белый леггорн // 392, ВС-87, Деп., Животноводство (Биологические основы), 1987.-№ 11.-С. 11-18.

7. Подгорный В.И., Чукаловская Р.Н., Соколов В.И., Антонова В.А., Донкова Н.В., Москалева Т.В. Цитологические, цитохимические, и ультраструктурные исследования эпителиальных клеток некоторых органов кур в онтогенезе // Материалы II Всерос. съезда АГЭ. - М.,1988. - С. 97.

8. Донкова Н.В. Морфофункциональные аспекты экскреции в почках птиц // Пути повышения эффективности сельскохозяйственного производства Восточной Сибири: Материалы III зональн. науч.-произв. конф. молодых ученых и специалистов. - Красноярск, 1989. - С. 52-53.

9. Донкова Н.В. Пути элиминации некоторых ксенобиотиков у млекопитающих и птиц // Наука - сельскохозяйственному производству: Материалы науч. конф. - Красноярск, 1993. - С. 21-22.

10. Донкова Н.В., Донков С. А. Морфофункциональная характеристика сосудистых сплетений мозга и их роль в транспорте органических веществ // Гигиена, ветсанитария и экология животноводства: Материалы Всерос. науч.-произв. конф. - Чебоксары, 1994. - С. 120-121.

11. Пашкевич И.А., Донкова Н.В. Морфофункциональная характеристика транспортных систем в почках и хориоидных сплетениях мозга /"Технологии неистощенного землепользования: Материалы науч. конф. - Красноярск, 1997. - С. 43-44.

12. Донкова Н.В. Проблема лекарственной болезни в животноводстве// Достижения науки и техники - развитию г. Красноярска: Материалы науч.- практич. конф. - Красноярск, 1997. - С.520.

13. Донкова Н.В. Роль почек в элиминации лекарственных средств// Реконструкция гомеостаза: Материалы IX Международн. Симпозиума. -Красноярск, 1998. -Т. 4. - С. 18-21.

14. Донкова Н.В. Организация нефроцитов при элиминации лекарственных средств, относящихся к группе органических оснований // Вестник КрасГАУ. - 2000. - Вып. 6. - С 81-83.

15. Изготовление анатомических препаратов: Метод, указания / Крас-нояр. гос. аграр. ун-т; Составители: Е.И. Втюрина, Г.П. Витовская, Н.В. Донкова, Ю.М. Маховых, Е.Г. Турицына. - Красноярск, 2001. - 9 с.

16. Донкова Н.В. Структурно- функциональные особенности экскреции ксенобиотиков в почках и сосудистых сплетениях мозга // Теоретические и практические аспекты ветеринарии и медицины: Материалы межрегион, конф. морфологов. - Улан-Удэ, 2001. - С. 33-34.

17. Донкова Н.В. Арсенал ветеринарных препаратов, используемых в животноводстве // Достижения науки и техники - развитию сибирских регионов: Материалы III Bcepoc. науч.- практич. конф. с международным участием. - Часть. 2. - Красноярск: ИПЦ КГТУ, 2001.- С. 162-163.

18. Донкова Н.В. Экологическая безопасность продуктов животноводства при ятрогенном воздействии // Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири (СИБРЕСУРС-7-2001): Материалы VII Международн. науч.-практ. конф. - Барнаул-Томск, 2001. -С. 112-115.

19. Донкова Н.В. Диапазон лекарственных средств, применяемых в животноводстве и их кумулятивный эффект // Вестник КрасГАУ. - 2001. - Вып. 7. - С. 75-78.

20. Донкова Н.В. Оптимизация применения лекарственных средств в ветеринарии // Ветеринария Сибири. - 2001. - №6. - С. 11-14.

21. Общая гистология: Лабораторный практикум по морфологии / Краснояр. гос. аграр. ун-т; Составители: Е.Г. Турицына, Н.В. Донкова.-Красноярск, 2001. - 32 с.

22. Частная гистология: Лабораторный практикум по цитологии, гистологии и эмбриологии / Краснояр. гос. аграр. ун-т; Составители: Н.В. Донкова, Е.Г. Турицына. - Красноярск, 2002. - 52 с.

23. Чумакова Е.Ю., Донкова Н.В. Морфофункциональный статус кур на птицефабрике ОАО племзавода «Таежный» // Красноярский край -освоение, развитие, перспективы: Материалы регион, науч. конф. -Часть 2. - Красноярск, 2003. - С. 198-199.

24. Донкова Н.В., Прусс С.А. Экологическая безопасность ветеринарных мероприятия при выращивании кур-бройлеров на птицефабриках «Березовская» и «Сибирская губерния» // Вестник КрасГАУ. - 2003. -Вып. 2. - С. 140-143.

25. Донкова Н.В. Морфофункциональный статус цыплят-бройлеров в условиях хронического действия лекарственных ксенобиотиков // Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных: Материалы международной науч. конф. Часть II. - Улан-удэ: Издательство ГСХА, 2003. - С. 109-110.

26. Донкова Н.В. Проблема загрязнения пищевых продуктов остаточными количествами ветеринарных препаратов // Гомеостаз и экстремальные состояния организма: Материалы XI Международного симпозиума - Красноярск, 2003. - С. 45-46.

27. Донкова Н.В. Снижение цитотоксического действия и уровня остаточных количеств антибиотиков в мясе и яйцах птиц // Аграрная наука на рубеже веков: Материалы Всерос. науч.-практич. конф. - Красноярск, 2003.-С.141 -142.

28. Донкова Н.В. Энтеросорбция и детоксикация как методы очищения организма птицы от лекарственных ксенобиотиков // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии: Материалы международной науч.-практич. конф. - Оренбург, 2003. - С. 371-372.

29. Донкова Н.В. Ветеринарные препараты, применяемые в животноводстве, их кумулятивный эффект и экологическая безопасность // Го-меостаз организма: медико-биологические аспекты: Материалы X Меж-дународн. Симпозиума «Концепция гомеостаза: теоретические, экспериментальные и прикладные аспекты. - Новосибирск, «Наука», 2003. -С. 56-59

30. Донкова Н.В., Донков С.А., Чумаков В.Ю. Способ снижения цито-токсического действия и остаточного количества антибиотиков в мясе цыплят-бройлеров. Приоритетная справка Патентного ведомства № 200312721 от 14.07.2003.

31. Донкова Н.В. Цитотоксические эффекты и биохимический статус цыплят-бройлеров при действии лекарственных ксенобиотиков // Вестник КрасГАУ. - 2003. - Вып. 3. - С. 142-145.

32. Донкова Н.В. Методы оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственной птицы при воздействии лекарственнных ксенобиотиков: Метод, рекомендации / Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2004. - 25 с.

33. Донкова Н.В. Оценка воздействия лекарственных ксенобиотиков на цитоморфологические показатели внутренних органов цыплят-бройлеров // Вестник КрасГАУ. - 2004. - Вып. 4. - С. 134-137.

34. Донкова Н.В. Цитофункциональная эндоэкология сельскохозяйственной птицы при воздействии лекарственных ксенобиотиков / Красно-яр, гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2004. - 268 с. (научная монография)

35. Донкова Н.В. Влияние энтеросорбции на цитоморфологические показатели внутренних органов цыплят-бройлеров при лекарственном воздействии // Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии: Материалы международной науч.-практич. конф. - Улан-Удэ, 2004. - С. 70-72.

36. Донкова Н.В. Развитие головного мозга, печени и почек у цыплят // Ветеринария, 2004. - № 9. - С. 45-46.

37. Донкова Н.В., Чумакова Е.Ю., Сидилева Е.В., Емельянов Е.П. Кли-нико-биохимический и цитоморфологический статус сельскохозяйственных птиц на птицефабриках Красноярского края // Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии: Материалы международной науч.-практич. конф. - Улан-Удэ, 2004. - С. 68-70.

38. Донкова Н.В. Динамика развития органов гомеостатического обеспечения у цыплят-бройлеров // Вестник КрасГАУ. - 2004. - Вып. 5. -С. 132-134.

39. Донкова Н.В. Морфометрическая оценка органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе // Вестник КрасГАУ. -2004.-Вып. 5. - С. 134-137.

Санитарно-эпидемиологическое заключение № 24.49.04.953.П. 000381.09.03 от 25.09.2003 г. Подписано в печать 30.08.2004 г. Формат 60x84/16. Бумага тип. № 1. Офсетная печать. Объем 2,0 п.л. Тираж 110 экз. Заказ № 1810

Издательство Красноярского государственного аграрного университета

660017, Красноярск, ул. Ленина, 117

»16493

Актуальность темы. Многообразие факторов окружающей среды воздействующих на сельскохозяйственных птиц определяет широкий диапазон морфофункциональных изменений в их организме. Специфическое воздействие на органы, ткани, клетки и субклеточные структуры, наряду с разнообразными биотическими факторами оказывают и лекарственные препараты, большинство из которых для организма являются чужеродными, то есть ксенобиотиками, способными нарушать морфофункциональный гомеостаз.

В физиологических условиях постоянство гомеостаза поддерживается системами детоксикации и экскреции: почками и печенью, а жизненно важные функции реализуются по определенным схемам биохимических взаимоотношений под контролем центральной нервной системы. При попадании в организм лекарственных ксенобиотиков, когда органы гомеостатического обеспечения не справляются с детоксикацией и элиминацией лекарств, развиваются цитотоксические явления и органопатии [261, 23, 247, 249, 10]; кроме того, существует вероятность загрязнения продовольственного сырья и пищевых продуктов лекарственными контаминантами [114, 214, 331, 296, 297]. Поэтому так важна структурно-функциональная оценка общетоксического и специфического воздействия лекарственных препаратов на органы и ткани, отвечающие за адаптационно-приспособительные реакции, обеспечивающие гомеостаз.

Ведущим звеном в механизме стабилизации гомеостаза у птиц (из-за отсутствия потовых желез) являются почки. Однако морфофункциональные особенности и динамика становления почек кур в постнатальном онтогенезе изучены недостаточно, нет единого представления о сроках их морфологического созревания [283, 171, 289]. Кроме того, отсутствуют сравнительные данные о морфофункциональном развитии органов гомеостатического обеспечения у кур различных кроссов.

Широкое применение лекарственных средств в промышленном птицеводстве требует знания механизмов выведения их из организма птицы. Известно, что главными путями освобождения организма от чужеродных веществ является печеночный метаболизм и почечная экскреция, последняя включает в себя фильтрацию в сосудистых клубочках и канальцевый транспорт. Исследования Варшавского, Берхина, Наточина, Вейнара [63, 41, 190, 452] позволили составить общее представление о механизме канальцевого транспорта в почках. Однако до настоящего времени остается недостаточно освещенным вопрос о морфологическом субстрате и цитохимической природе этого процесса, а имеющиеся данные носят противоречивый и фрагментарный характер.

Весьма актуальным является поиск методов, способных осуществлять общую детоксикацию организма птиц при лекарственных воздействиях с тем, чтобы с одной стороны нормализовать гомеостатические функции, а с другой — организовать разрыв порочной цепи перехода и кумуляции лекарственных контаминантов в системе "птица - продукция птицеводства - человек". Одним из доступных в ветеринарной практике способов освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков, является энтеросорбция [155, 234, 250, 218], однако нам не известны сведения о влиянии энтеросорбции на показатели морфофункционального гомеостаза кур и уровень лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции при лекарственных воздействиях.

Таким образом, изучение становления органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе, исследование морфофункционального гомеостаза при воздействии лекарственных ксенобиотиков, изучение механизма их элиминации, а также разработка способа коррекции цитотоксического действия и снижения уровня лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции представляется весьма актуальным.

Цель и задачи исследований. Основная цель представленной работы заключалась в изучении становления органов гомеостатического обеспечения и параметров морфофункционального гомеостаза у кур в постнатальном онтогенезе и при воздействии лекарственных ксенобиотиков, исследовании цитофункциональной природы транспорта лекарств в почках и обосновании способа получения экологически чистой птицеводческой продукции.

Были поставлены следующие задачи:

1. Изучить общие закономерности и последовательные этапы развития почек у кур в постнатальном периоде онтогенеза на основе морфометрического, цитохимического и ультраструктурного анализа; а так же установить последовательность цитодифференцировки нефронов с учетом их гетерогенности;

2. Выявить ультраструктурные механизмы и цитохимическую природу трансцеллюлярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур;

3. Провести сравнительный анализ развития органов гомеостатического обеспечения, с учетом возрастной динамики морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов;

4. Установить основные изменения параметров морфофункционального гомеостаза у кур в условиях экспериментального лекарственного воздействия и исследовать уровень остаточных количеств лекарственных контаминантов в пищевых продуктах птицеводства: мясе, субпродуктах и яйцах птиц;

5. Изучить влияние энтеросорбента (полифепана) на показатели морфофункционального гомеостаза кур и уровень лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции в условиях экспериментального лекарственного воздействия.

Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное морфофункциональное исследование органов гомеостатического обеспечения у кур в возрастном аспекте и при воздействии лекарственных ксенобиотиков.

Получены новые данные о морфологическом субстрате и цитохимической природе канальцевого транспорта лекарственных веществ в нефроцитах кур. Уточнены сроки морфофункционального созревания органов, обеспечивающих гомеостаз (почек, печени, головного мозга) у кур различных кроссов. Установлено, что чрезмерное лекарственное воздействие в период морфологической и функциональной незрелости органов гомеостатического обеспечения у кур, приводит к каскаду цитотоксических проявлений, развитию органопатий и контаминации птицеводческой продукции лекарственными препаратами. Впервые предложен способ снижения цитотоксического действия и уровня лекарственных контаминантов в продукции птицеводства при применении энтеросорбента - полифепана (Заявка на изобретение №200312721/13, приоритет от 14.07.03).

Практическая значимость. Материалы дисссертационной работы легли в основу методических рекомендаций: «Методы оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственной птицы при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004), одобренных и принятых к внедрению НТС КрасГАУ (протокол № 5 от 23 декабря 2003), HTG при Министерстве сельского хозяйства республики Хакасия (протокол № 1 от 15 января 2004), на заседании отделения ветеринарной медицины ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 16 от 17 июня 2004), и используются для оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственных птиц при воздействии биотических факторов, в частности лекарственных ксенобиотиков, на птицефабриках Красноярского края («Березовская», ОАО племзавода «Таежный») и республики Хакасия (2002-2004), а так же в работе ГУ Красноярской краевой ветеринарной лаборатории (2002, 2003), ГУ Управления ветеринарии ЕМО г. Норильска Красноярского края и ГНУ НИИ сельского хозяйства Крайнего Севера.

Основные материалы работы используются в учебном процессе на 20 кафедрах аграрных ВУЗов России: Казанской и Санкт-Петербургской государственных академий; Мордовского и Хакасского государственных университетов; Алтайского, Дальневосточного, Красноярского, Новосибирского, Омского, Ставропольского государственных аграрных университетов; Бурятской, Вятской, Дагестанской, Кабардино-Балкарской, Приморской, Самарской, Ярославской государственных сельскохозяйственных академиях, Красноярском институте переподготовки кадров.

Основные итоги исследований отражены в монографии «Цитофункциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004); практикумах: по морфологии «Общая гистология» (Красноярск, 2001) и по цитологии, гистологии и эмбриологии «Частная гистология» (Красноярск, 1999, 2002).

Основные положения, выносимые на защиту:

- основные этапы развития почек и закономерности цитодифференцировки нефронов с учетом их гетерогенности у кур в постнатальном онтогенезе; ультраструктурная и цитохимическая характеристика трансцеллюлярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур;

- особенности развития органов гомеостатического обеспечения (почек, печени и головного мозга) и возрастная динамика морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов в условиях птицефабрик;

- параметры морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных контаминантов в организме кур при экспериментальном лекарственном воздействии;

- энтеросорбция полифепаном на фоне экспериментального лекарственного воздействия нормализует параметры морфофункционального гомеостаза кур и снижает уровень лекарственных контаминантов в мясе, субпродуктах и яйцах птиц.

Апробация работы. Основные материалы исследований доложены, обсуждены и одобрены на: научно-практических конференциях Ленинградского ветеринарного института (Ленинград, 1984-1987) и Красноярского государственного аграрного университета (Красноярск, 19882003), Всесоюзном симпозиуме «Клеточные механизмы адаптации» (Крым, Карадаг, 1985), XXIV конференции студентов и аспирантов морфологических кафедр и лабораторий Ленинградских ВУЗов и научно-исследовательских институтов, (Ленинград, 1985); заседании Ленинградского отделения Всесоюзного общества АГЭ (Ленинград, 1987); Всесоюзном совещании «Теории параллелизма A.A. Заварзина и современная биология» (Ленинград, 1986); II Всероссийском съезде АГЭ (Ленинград, 1988); III зональной научно-производственной конференции «Пути повышения эффективности сельскохозяйственного производства Восточной Сибири» (Красноярск, 1989); Всероссийской научно-производственной конференции «Гигиена, ветсанитария и экология животноводства» (Чебоксары, 1994); научно-практической конференции «Достижения науки и техники - развитию г. Красноярска» (Красноярск, 1997); IX Международном симпозиуме «Реконструкция гомеостаза» (Красноярск, 1998); Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Достижения науки и техники — развитию сибирских регионов) (Красноярск, 1999, 2001, 2003); X Международном симпозиуме «Гомеостаз организма: медико-биологические аспекты» (Красноярск, 2000); межрегиональной конференции морфологов «Теоретические и практические аспекты ветеринарии и медицины» (Улан-Удэ, 2001); заседании Красноярского отделения Всероссийского общества физиологов им. И.П. Павлова (Красноярск, 2001); региональной научной конференции «Красноярский край - освоение, развитие, перспективы» (Красноярск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2003); XI Международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004).

Публикации. Основные научные положения, выводы и разработки диссертации изложены в 39 работах, в том числе в монографии «Цитофункциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков», двух практикумах, методических рекомендациях и научных изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 332 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 457 наименований, из них 165 зарубежных источника. Материалы диссертации иллюстрированы 35 таблицами, 80 микрофотографиями, 36 диаграммами и схемой.

ВЫВОДЫ

1. В постнатальном периоде онтогенеза почек кур можно выделить четыре основных периода: первый период (1-45 дней) характеризуется образованием новых нефронов из недифференцированной нефрогенной ткани, лежащей под капсулой органа, а также усиленным ростом и дифференцировкой уже сформированных нефронов; второй период (45-120 дней) - дальнейшим ростом массы почки за счет увеличения размеров клеток и их пролиферации; третий период (120-270 дней) - относительной стабилизацией структурно-функциональных единиц почки; четвертый период (270 дней и старше) — комплексом структурных изменений, приводящих к нарушению функциональной активности почек.

2. Основным источником неогенеза почек кур является рост числа нефронов и увеличение размеров нефроцитов. Образование нефронов осуществляется из недифференцированной нефрогенной ткани в направлении от центра органа к его периферии и включает в себя следующие стадии: а) образование нефрогенного пузырька; б) образование Б-образного тела; в) появление первых гломеруллярных капилляров; г) образование непрерывного канальцевого эпителия со щеточной каймой; д) формирование зрелого канальца.

3. К моменту вылупления почки кур являются морфологически незрелыми; цитодифференцировка их морфофункциональных единиц продолжается вплоть до полуторамесячного возраста. Дифференцировка фильтрующей поверхности почечных телец заключается в уплощении эндотелия капилляров, формировании единой гломеруллярной мембраны, с накоплением в ней углеводных компонентов гликокаликса, и формировании подоцитов. Дифференцировка эпителия проксимального отдела нефрона заключается в образовании микроворсинок с накоплением в них гликопротеидов, белка, щелочной фосфатазы и формировании базальных инвагинаций.

4. В почках кур всех возрастов имеются нефроны двух типов: корковые, не имеющие петли, чем напоминают нефроны амфибий и рептилий, и мозговые, имеющие петлю, что сближает их с нефронами млекопитающих. В процессе иефрогенеза наблюдается корково-мозговой понижающий градиент темпов роста почечных телец и канальцев и противоположно направленный градиент их размеров.

5. Нефроны половозрелых кур характеризуются значительным содержанием гликопротеидов, кислых гликозаминогликанов, белков, высокой ферментативной активностью фосфатаз, неспецифической эстеразы и сукцинатдегидрогеназы, а также морфологической зрелостью фильтрационного барьера почки. К концу первого года жизни кур в их почках начинают обнаруживаться дегенеративные явления, заключающиеся в увеличении доли соединительнотканных компонентов и накоплении в них ШИК-позитивного материала, редукции щеточной каймы, накоплении в цитоплазме нефроцитов кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы, а также увеличении числа лизосом.

6. При введении половозрелым курам пенициллина клетки проксимального отдела нефрона способны к адаптационной перестройке, заключающейся в мобилизации внутриклеточных структур на быстрейшую элиминацию ксенобиотика. Степень адаптационной перестройки зависит от кратности введения препарата и времени, прошедшего после последней инъекции. Адаптационные возможности системы секреторного транспорта органических веществ ограничены, при повышенных лекарственных нагрузках происходит дезинтеграция внутриклеточных структур, что приводит к снижению уровня секреции ксенобиотика.

7. Транспорт органического вещества от базальной к апикальной плазматической мембране связан с определенными субклеточными структурами и не является результатом простой диффузии. Основными элементами, участвующими в переносе вещества по цитоплазме, являются: эндоплазматический ретикулум с комплексом узкопетлистой сети, пластинчатый комплекс и пероксисомы. Активному функциональному состоянию органоидов при транспорте пенициллина соответствует повышенная активность сукцинатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы и увеличенное содержание рибонуклеопротеидов.

8. На птицефабриках при выращивании кур широко используются разнообразные лекарственные средства, в том числе и антибиотики. Максимальное их применение приходится на ранний период постнатального развития, который характеризуются незавершенностью процессов морфогенеза и интенсивным ростом органов, отвечающих за освобождение организма от ксенобиотиков.

9. Ранний период развития у кур мясных кроссов («Сибиряк», «ISA») характеризуются высокими темпами роста органов гомеостатического обеспечения: почки наиболее интенсивно растут в течение второй недели постнатальной жизни, их прирост составляет 60% («Сибиряк») и 64% («ISA»); печень — в течение третьей недели, прирост — 61% и 63%; головной мозг — в течение второй недели, прирост - 21% и 29% соответственно. У яичных кур («Родонит», «Белый леггорн») постнатальный период развития характеризуется менее интенсивными и более продолжительным ростом органов гомеостатического обеспечения. Наибольшая скорость роста отмечается в первые две недели развития. В дальнейшем темпы роста постепенно снижаются и к четырех-пятимесячному возрасту масса органов стабилизируется.

10. У цыплят, выращиваемых на птицефабриках, с возрастом изменяется морофобиохимический состав крови: увеличивается уровень гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, гранулоцитарный профиль крови сменяется на лимфоцитарный, повышается уровень общего белка, р-глобулинемия сменяется на у-глобулинемию, что в целом свойственно для раннего постнатального развития птиц. Эти возрастные изменения часто не соответствуют физиологическим нормам и свидетельствуют о нарушении гомеостатических функций у птиц, что подтверждается многообразием форм дистрофических, воспалительных и некробиотических процессов, чаще обнаруживаемых в печени и почках, реже в головном мозге кур.

11. Применение цыплятам в ранние сроки постнатального онтогенеза лекарственных ксенобиотиков (тетрациклинов обычного и пролонгированного действия) приводит к нарушению параметров морфофункционального гомеостаза, развитию дегенеративных и воспалительных процессов в органах гомеостатического обеспечения и накоплению лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции.

12. Морфобиохимические изменения крови у цыплят при воздействии тетрациклинами проявляются в виде активации ПОЛ, увеличении активности мембраносвязанных ферментов (АЛТ и ACT), диспротеинемии, гипербилирубинемии, гиперхолестеринемии, гипогликемии, гранулоцитозе и повышении СОЭ.

13. Цитоморфологические изменения органов гомеостатического обеспечения у цыплят при воздействии тетрациклинами характеризуются: в печени — постепенным увеличением числа дегенеративных гепатоцитов, снижением коэффициента нормализации паренхимы и развитием диффузной жировой дегенерации; в почках — развитием интерстициальной воспалительной реакции; в головном мозге (коре больших полушарий и мозжечке) — выраженных деструктивных изменений не установлено.

14. Остаточные количества лекарственных контаминантов в организме кур при применении тетрациклинов обнаруживаются в различные сроки последействия препаратов. При длительном пероральном применении цыплятам-бройлерам окситетрациклина наибольшее количество антибиотика определяется на 14-е и 20-е сутки в почках, затем в печени, головах, мышечной ткани и бульоне. При внутримышечном введения цыплятам-бройлерам нитокса максимальный уровень тетрациклина выявляется в зоне инъекции. После введения нитокса курам-несушкам наибольшее количество антибиотика обнаруживается на седьмые и 30-е сутки в яйцах, далее в красном и белом мясе, и менее всего в коже с подкожной клетчаткой.

15. Энтеросорбция полифепаном приводит к уменьшению цитотоксичности лекарственных ксенобиотиков (активации ПОЛ, цитолиза, холестаза, диспротеинемии, гранулоцитоза), нормализации паренхимы органов гомеостатического обеспечения (печени и почек) и снижению уровня лекарственных контаминантов в мясе, субпродуктах и яйцах кур.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Установленные закономерности роста, развития и дифференцировки органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе, характер адаптационной перестройки внутриклеточных структур при транспорте лекарственных веществ, а так же выявленные нарушения морфофункционального гомеостаза у кур при воздействии лекарственных ксенобиотиков рекомендуем к использованию: в учебном процессе на ветеринарных, биологических и зооинженерных факультетах; при написании учебных пособий, монографий по биологии с.-х птиц, возрастной и экспериментальной морфологии, экологии; при проведении научно-исследовательских работ по изучению фармакокинетики лекарственных препаратов у птиц.

2. Для оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственных птиц при воздействии биотических факторов, в частности лекарственных ксенобиотиков, ветеринарным специалистам птицефабрик и лабораторий рекомендуем проводить цитоморфологический анализ органов гомеостатического обеспечения, в комплексе с морфобиохимическими исследованиями крови и оценкой уровня загрязнения лекарственными контаминатами птицеводческой продукции.

3. Птицеводческим хозяйствам, где широко используются разнообразные лекарственные препараты целесообразно, на заключительных этапах выращивания птицы применять природный энтеросорбент - полифепан с целью получения продовольственного сырья и пищевых продуктов свободных от лекарственных контаминантов.