Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональная оценка заживления ран у животных при применении "Биоэффект ДВ-1"

2ооЗ - Д

На правах рукописи

Любченко Елена Николаевна

»

Морфофункциональная оценка заживления ран у животных при применении «Биоэффект ДВ-1»

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Благовещенск, 2003

Работа выполнена в Приморской государственной сельскохозяйственной академии и Дальневосточном государственном аграрном университете

Научные руководители:

доктор ветеринарных наук, профессор Кухаренко Наталья Степановна кандидат ветеринарных наук, доцент Кулешов Сергей Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Рябуха Валерий Андреевич кандидат ветеринарных наук, доцент Булдыгин Дмитрий Владимирович

Ведущая организация - Уральская государственная сельскохозяйственная академия, г. Екатеринбург.

Защита состоится ^¿¿^^е-г^ръ/ 2003 г. в /У*

часов на заседа-

нии диссертационного совета КМ 220.027.01 при Дальневосточном государственном аграрном университете (675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Дальневосточного государственного аграрного университета

2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

С.Петербург 4 I

оэ тод?

Мандро Н.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Перевод экономики Российской Федерации на рыночные отношения требует коренного пересмотра вопроса использования материальных ценностей и средств сельскохозяйственного производства для осуществления комплекса профилактических и лечебных мероприятий. Отсюда следует, что ветеринарное обслуживание животноводства должно быть экономически эффективным, целесообразным для хозяйств всех форм собственности. Поэтому перед ветеринарной наукой ставятся актуальные задачи по поиску и внедрению в производство доступных, дешевых и эффективных лекарственных средств. Поисками путей активного влияния на процессы восстановления, т.е. создание оптимальных условий регенерации поврежденных тканей, уделялось большое внимание исследователями во все времена.

Среди незаразных болезней, наблюдаемых в животноводстве, хирургические составляют более 40%, а раны и травмы различной этиологии регистрируются до 80% пациентов с хирургической патологией (Шакалов И.В.,1981; Райи М.И., 2001; Ватников Ю.А., 2003;). Такое положение в значительной степени объясняется тем, что в хозяйствах промышленного типа имеет место ряд специфических этиологических факторов, например, особенности технологического процесса, гиподинамия, стрессовые воздействия. Содержание большого количества животных на ограниченной площади, нарушение технологических режимов, ветер и-нарно-санитарных правил ведет к частому травмированию животных. Не теряет своей актуальности в настоящее время и проблема лечения ран в ветеринарной медицине, несмотря на большое количество предложенных методов, что объясняется высокой частотой встречаемости раневых повреждений у сельскохозяйственных животных. По статистическим данным, в среднем у 2-4% убойных свиней имеются травмы. Мясо от таких животных в 20 % случаев оказывается непригодным в пищу (Кюне О.,1976). По данным В. Совановича с соавторами (1975) гибель поросят от травм может достигать 8,3% от общих потерь вследствие их болезней.

В настоящее время уделяется особое внимание разработке и внедрению новых лекарственных средств, природного происхождения, ускоряющих восстановительные процессы в поврежденных органах и тканях. Препараты, предназначенные для лечения повреждений кожи должны защищать рану от заноса патогенной микрофлоры, обладать противовоспалительным эффектом, а в период грануляции и элителизации ран стимулировать эти процессы и ускорять заполнение тканевых дефектов эпителиальной тканью, сокращая тем самым сроки заживление ран.

В настоящее время для стимуляции иммунобиологической активности и в качестве составной части комплексной терапии в лечении ран широко используются АСД-2, ФИБС, сок и мазь каланхоэ, препараты алоэ, элеутерококка, гумизоль, экстракт и взвесь плаценты, облепиховое масло и другие (Машковский М.Д., 2002). Они активизируют и стимулируют обменные процессы в поврежденных тканях и в целом организме. Тем не менее, изыскание новых лекарственных средств, для стимуляции репаративных процессов остается актуальным.

Раневые процессы у животных вызывают расстройство обмена веществ, в результате чего снижается продуктивность. Ослабление резистентности организма животного, активизация условно патогенной микрофлоры является основным фактором в патогенезе ран. Поэтому одной из задач ветеринарной науки считается поиск эффективных и недорогих лекарственных препаратов из местного сырья, оказывающих комплексное воздействие на организм животных, вызывающих быстрое заживление ран, что должно положительно отражаться на общем состоянии организма животных и их продуктивности.

Цель и задачи. Цель исследования состоит в изучении действия препарата «Биоэффект Дальневосточный-1» (Биоэффект ДВ-1) на морфологическое состояние рубцовой ткани и активизацию регенеративных процессов при лечении экспериментальных и случайных ран у животных.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Провести поиск оптимальных концентраций и способов применения препарата, оказывающего стимулирующее действие при заживлении ран на визуаль-

ном и гистоморфологическом уровнях.

2. Отработать оптимальные концентрации применения препарата на экспе-, риментальных ранах с подвижной и неподвижной кожей у разных видов лабора-. торных ЖИВОТНЫХ. 1

3. Изучить оптимальные концентрации препарата с гелеобразоватеяем для заживления ран у свиней в производственных условиях.

4. Определить экономическую эффективность применения препарата «Био-, эффект ДВ-1» для лечения ран у животных.

Настоящая работа является составной частью комплексной программы исследований кафедры незаразных болезней, хирургии и акушерства Института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Приморской государственной сельскохозяйственной академии и патоморфофизиологии, терапии, акушерства и хирургии Дальневосточного государственного аграрного университета по изучению биологически активных веществ из местных ресурсов (номер государственной регистрации 0186.0060.944.) и выполнена самостоятельно.

Научная новизна. Впервые апробирован препарат «БиоэффекгДВ-1», содержащий гумивит, экстракт элеутерококка, используемый с целью ранозажив-ляющего действия у различных видов животных. Применение препарата было изучено в разных формах. Наиболее оптимальные использованы в комплексе с ме-тилцеллюлозой для получения консистенции геля, что позволило биоактивным веществам лучше проникгль в поврежденные ткани и защищать их. Важно, что подбор ингредиентов препарата и выбранные их количественные соотношения позволили создать эффективное и в удобной лекарственной форме ранозажввляю-щее средство, применение которого сокращает сроки заживления эксперимент тапьных и случайных ран у животных. Результативность воздействия «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе доказана на гистоморфологическом строении рубцовой ткани. На основании материалов исследований Материалы исследований находятся на рассмотрении патентного отдела ТИБОХа ДВО РАН (приоритетная справка № 2003113570(014403) от Я мая 2003 года)

Теоретичегс<сая и практическая значимость работы. Описана теория раневого процесса у животных, рассмотрена роль фибробластов в процессе заживления ран. Проведен анализ физиологической активности ингредиентов «Биоэф-фектаДВ-1» и их вЛйяНие на репаративные процессы. Полученные результаты по использованию «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе для ускорения регенерации раневого дефекта'позволили рационально использовать его в ветеринарной медицине для лечения ран у животных. Предложенные соотношения ингредиентов препарата наиболее 'экономичны, сами ингредиенты недороги и доступны. Эти свойства и простота приготовления могут быть использованы в фармацевтической промышленности для дальнейшего изготовления вышеуказанного препарата в широком масштабе. Полученные результаты позволяют проводить дальнейшие исследования по внедрению «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе в ветеринарной практике для лечения ран различной этиологии. Полученные данные могут быть использованы и учтены в научно-исследовательской работе, в учебном процессе, при написании учебников, справочных пособий.

Основные положения, выносимые на защиту. Действие препарата «Биоэффект ДВ-1» на морфологическое состояние рубцовой ткани и активизацию регенеративных процессов при лечении экспериментальных и случайных ран у животных.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Аграрная политика и технология производства сельскохозяйственной продукции в странах Азиатско-Тихоокеанского региона» (г. Уссурийск, 2001); научно-практической конференции аспирантов Приморской государственной сельскохозяйственной академии «Проблемы сельскохозяйственного производства Приморского края» (г. Уссурийск, 2002); ярмарке научно-технических идей (Владивосток, 2003); на международной научно-практической конференции " Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве" (г. Барнаул, 2003); на международной научной конференции "Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных" (г. Улан-Удэ, 2003).

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований исполь-

зуются в учебной и научной работе на кафедрах хирургии и патологической анатомии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Казанской государственной академии ветеринарной медицины, Алтайского государственного агроуниверситета, Красноярского агроуниверситета, Витебской ордена "Знак Почета" государственной академии ветеринарной медицины, Бурятского государственного университета, Уральской государственной сельскохозяйственной академии, институте ветеринарной медицины ОмГАУ, института ветеринарной медицины и зоотехнии ДальГАУ, ПГСХА, в лечебной работе ряда ветеринарных клиник и хозяйств Приморского края.

Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в 5 печатных работах.

Структура и объём диссертации. Диссертационная работа изложена на 125 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, приложения и список использованной литературы. В работе представлено 10 таблиц, 5 графиков, 27 рисунков. Список литературы включает 258 источников, из них 38 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в Приморской государственной сельскохозяйственной академии и Дальневосточном государственном аграрном университете в период с 2001 по 2003 годы.

Для изучения действия «Биоэффекта ДВ - 1» на репаративные процессы у животных было использовано 60 интактных белых мышей, 20 кроликов, 68 свиней породы ландрас и крупная белая (рис. 1).

Опыты на мышах и кроликах проводились в лабораторных условиях, на базе вивариев ветеринарного отделения Уссурийского аграрного техникума и института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Приморской государственной сельскохозяйственной академии, а на свиньях - в условиях производства, на свинотоварной ферме учхоза ПГСХА и хозяйства «Ариран-Н».

Для опытов животных подбирали по принципу налогов, они находились в

равноценных условиях кормления и содержания.

Показателями по определению эффективности «Биоэффекта ДВ-1» для стимуляции процессов регенерации при экспериментальных ранах у животных служили сроки образования рубца после отпадения струпа и наличие эпителия на месте нанесения дефекта, определение зрелости рубцовой ткани, а также скорость сокращения площади раневого дефекта.

Динамику скорости сокращения и заживления раневого дефекта определяли по методу J1.H. Поповой (1942). На рану ежедневно накладывалась стерильная пластинка целлофана, и на нее наносились контуры раны, затем рисунок переносился на миллиметровую бумагу, и подсчитывалась площадь ран.

Для гематологических исследований производили взятие крови в утренние часы у кроликов из периферических сосудов ушной раковины, а у свиней из венозного синуса глаза по методу И.П. Кондрахина и И.Д. Шульмана (1983).

Гематологические показатели определяли по общепринятым методикам (Кудрявцев A.A., Кудрявцева JI.A., 1974; Кондрахин И.П., Шульман И.Д., 1983). Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов производился в счетной камере Горяева, содержание гемоглобина проводили с использованием гемометра ГС-3, определение белка в сыворотке крови поводили с помощью рефрактометра марки ИРФ-454. Общий кальций сыворотки крови определяли комплексометрическим методом по Е.П. Вичеву, JI.B. Каракашеву (1971), а неорганический фосфор сыворотки крови -по В.Ф. Коромыслову, JI.A. Кудрявцевой (1972), резервную щелочность в цельной крови - по A.B. Неводову (1971).

Материалом для гистоморфологических исследований служили рубцы, био-псированные на 16 и 22 сутки у свиней из ран. Биоптаты фиксировали в 10% водном растворе формалина, с последующим заключением в парафин. Гистосрезы толщиной 10-15 мкм получали на санном микротоме с последующей их окраской гематоксилин-эозином, для выявления коллагеновых волокон срезы окрашивали по Ван-Гизон, для определения наличия жировых клеток срезы окрашивали суданом-3 по общепринятым прописям (Меркулов Г.А., 1961; Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982).

Суждение о влиянии гелевого «Биоэффекта ДВ-1», применяемого для стиму-

ляции регенерационных процессов, на морфологическую зрелость рубца в..зависну мости от сроков заживления производили на основании гистоморфологического формирования рубцовой ткани. Обращали внимание на наличие эпидермиса, его строение. Используя окулярную сетку, подсчитывали количество клеточных элементов в рубцовой ткани. Доверительный интервал вычисляли по способу Р.Б. Сгрелко-

....... г,

ва (1966, 1980). Микрофотографии изготавливали с помощью микрофотонасадки МФН-12, фотоаппарата «Зенит Е». Клеточный состав грануляционной ткани, подсчет количества фибробластов, сравнение препаратов по состоянию микроанатомических зон проводили по методике Н.С. Кухаренко, С.Б. Стефанова (1988, 1989). Для вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин пользовались таблицей Р.Б. Стрелкова (1966). Экономическую эффективность ветеринарных мероприятий рассчитывали по методике, утвержденной ГУВ МСХ СССР от 4.05.1982 г.

Приготовление лекарственных форм «Биоэффекта ДВ-1» для воздействия ими на животных с экспериментальными ранами производили несколькими способами. Для определения оптимальной концентрации раствора испытуемого препарата, используя дистиллированную воду, делали следующие концентрации: 0,1; 0,5; 1,5; 5; 10; 50 и применяли их для орошения ран. Для перорального применения мышам препарат использовали из расчета 10 мг на 1 кг живой массы (Анисимов М.М., 2000), подопытным белым мышам (средний вес 20г) ежедневно выпаивали по 0,5мл препарата "Биоэффекта ДВ-1".

По результатам первых опытов выбирали оптимальную водную концентрацию препарата «Биоэффект ДВ-1», улучшающую заживление ран и разводили его с метилцеллюлозой для получения гелевой формы «Биоэффект ДВ-1». Ме-тилцеллюлозу (ТУ 6-05-1857-78) для получения геля заказывали в г. Краснообске, Новосибирской области в ЗАО «Росветфарм». На 100 мл готового 0,5% раствора «Биоэффект ДВ-1» брали, взвешенную на торзионных весах ВЛКТ-500 г - М 4 класса, метилцеллюлозу в количестве 5 грамм, размешивали ее на электромагнитной мешалке, типа ММ5, до полного растворения и получения геля.

Рис.1 Схема проведения опыта

Таким же образом готовили и 1,5% гелевый «Биоэффект ДВ-1». Чистый гель готовили путем добавления к 100 мл стерильной дистиллированной воды 5 г ме-тилцеллюлозы.

Белым мышам кожные, дефекты наносились в области спины. Перед их нанесением готовили операционное поле: выстригали шерстный покров и обрабатывали место операции 70% спиртовым раствором. Для нанесения одинаковых по размеру дефектов использовали трафарет 10x10 мм, сделанный из пластмассовой пластинки. Трафарет прикладывали к операционному полю и гелевой ручкой по краям квадрата наносили контуры, по которым в дальнейшем скальпелем производили насечки кожи. При помощи глазных хирургических ножниц и пинцета выкраивались полнослойные кожные лоскуты указанного размера и формы.

У кроликов одновременно наносились два кожных дефекта: в области подвздоха и на наружной поверхности ушной раковины. Для нанесения дефекта использовался трафарет из пластмассовой пластинки размером Зсм х 1см. После удаления шерсти и обработки операционного поля, по намеченным ориентирам производились насечки кожи П-образной формы. При помощи хирургических ножниц и пинцета кожные лоскуты отпрепаровывались в области подвздоха до поверхностной фасции, иа наружной поверхности ушной раковины до надхрящницы.

У свиней дефекты наносились в области наружной поверхности бедра, отступя иа 15 см от позвоночника. На операционном поле выстригали щетину, обрабатывали его 5% спиртовым раствором йода, после чего трепаном цилиндрической формы удаляли кожу и участок сально-мышечной клетчатки глубиной 1,5см и диаметром 2см.

Для проведения производственного опыта поросятам пятидневного возраста, с целью профилактики каннибализма купировали хвосты на 1/2 длины, согласно методике И.И. Магда (1979).

Эффективность лечения укушенных ран изучали на свиньях породы ланд-рас и крупная белая, в условиях производства, которые наносили укусы и царапины друг другу во время перевески. В опыт набирались животные сразу после пе-

ревески с относительно аналогичными ранами, размером от 2 до 5 см в диаметре.

' '' '^ЕЗУЛЬ^А+Ы ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования, проведенные на мышах, показали, что наружное ежедневное нанесение водных растворов «Биоэффекта ДВ-1» на поверхность ран, способствует сокращению сроков заживления.

^ Использование белым мышам препарата «Биэффект ДВ-1» внутрь из расчета 10 мг/кг живой массы (0,5 мл) ежедневно, показало, что такое воздействие препаратом сокращает сроки заживления экспериментальных ран на 1,6 суток по отношению к контролю (Р<0,001). При наружном применении «Биоэффекта ДВ-1» в форме водных растворов различных концентраций в интервале от 0,1 до 50% для орошения ран, лучшую биологическую активность проявляли растворы 0,5% и 1,5% концентрации (Р<0,001). Время заживления ран сокращалось соответственно на 6,8 суток и на 5,3 суток в сравнении с контролем, что вызвало ускорение заживления ран на 38,2 и 29,8% (Р<0,001). При этом сокращение площади раневых дефектов происходило на 3-4 сутки, а к 8-10 дню площадь рубцов уменьшалась по сравнению с контролем (Р<0,001).

Наружное применение «Биоэффекта ДВ-1» в 0,5% и 1,5% концентрации в форме геля с интервалом нанесения 24 часа, способствовало сокращению времени заживления ран у белых мышей соответственно на 8 и на 7,8 суток по отношению к контролю (Р<0,001). Это ускоряло заживление ран на 45-44%. Особенно активное сокращение площади раневых дефектов при данном способе применения происходило уже на третьи сутки, что, вероятно, связано со способностью геле-вой формы, стягивать края ран к центру (Христо С.А., Родионов П.П., 2002). Лучшие результаты опыта, проведенного на мышах, представлены в таблице 1.

Полученные положительные результаты опытов на мышах послужили основанием для проведения серии опытов на кроликах. Обработку ран у животных «Биоэффектом ДВ-1» производили через 24 часа в течение всего опыта. Применение «Биоэффекта ДВ-1» в форме геля способствовало более быстрому сокращению площади раневых дефектов, как на подвижной, в области

Таблица 1

Сроки заживления ран у белых мышей при лечении «Биоэффектом ДВ-1», М±т

Группы животных Форма, концентрация и способ применения препарата Сроки заживления ран, дни Разница к контролю, ±дней Достоверность, Р

Группа № 1 Внутрь, 10 мг/ кг массы 16,2 ±0,91 -1,6 <0,001

Наружно, водные растворы:

Группа № 2 50% 18,6 ±0,62 + 0,8 <0,001

Группа № 3 10% 16,2 ±0,38 -1,6 <0,001

Группа № 4 5% 15,2 ±0,41 -2,6 <0,001

Группа № 5 1,5% 12,5 ±0,24 -5,3 <0,001

Группа № 6 0,5% 11,0 ±0,31 -6,8 <0,001

Группа № 7 0,1% 13,2 ± 0,32 -4,6 <0,001

Наружно в форме геля

Группа № 8 0,5% 9,8 ±0,46 -8 <0,001

Группа № 9 1,5% 10,0 ±0,55 -7,8 <0,001

Группа № 10 чистый гель 17,0 ± 0,22 -0,8 <0,001

Контроль

Группа № 11 без лечения 17,8 ± 0,64 - -

Группа № 12 Наружно, дистиллиров. вода 18,0 ±0,31 + 1,8 <0,001

подвздоха, так и на неподвижной коже, в области наружной поверхности ушной раковины. Сокращение площади раневых дефектов на участке с неподвижной кожей происходило на 11 сутки, в то время как на участках с подвижной кожей площадь сокращалась уже на 3 сутки (Рис. 2; Рис. 3). Наиболее активное сокращение раневых дефектов вызвало применение 0,5% «Биоэффекта ДВ-1» в форме геля.

Дни

......0,5% Биоэффект ДВ-1 ----1,5% Биоэффект ДВ-1

-без лечения ---чистый гель

Рис.2 Динамика сокращения площади кожных дефектов в области ушной раковины у кроликов при применении «Биоэффекта ДВ-1» в форме геля.

Дни

......0,5 % Биоэффект ДВ-1----1,5% Биэффект ДВ-1 I

■---чистый гель __без печения__|

Рис.3 Динамика сокращения площади экспериментальных ран в области подвздоха у кррликов при применении «Биоэффекта ДВ-1» в форме геля.

Заживление экспериментальных ран в области наружной поверхности ушной раковины у кроликов, при применении 0,5% «Биоэффекта ДВ-1» ускорялось на 3,2 суток, это составило 14,5% (Р<0,001). А обработка 1,5% «Биоэффектом ДВ-1» позволила ускорить заживление ран на двое суток, что составило 9,1% (Р<0,001). При обработке ран в области подвздоха у кроликов 0,5% «Биоэффектом ДВ-1» в форме геля, срок заживления сократился на 5,8 суток, это составило 31,2% (Р<0,001). Обработка 1,5% «Биоэффектом ДВ-1» в форме геля позволила сократить сроки заживления на 4,4 суток, что составило 23,7% (Р<0,001).

Ежедневное наружное применение «Биоэффекта ДВ-1» в концентрациях 0,5% и 1,5% в форме геля при изучении его действия на заживление экспериментальных ран у свиней показало, что наиболее эффективно стимулирует регенера-ционные процессы «Биоэффект ДВ-1» 0,5% в форме геля, ускоряя заживление на 5,2 суток, что составило 26% (Р<0,001) по отношению к контролю (таблица,2)..

Таблица 2

Сроки заживления ран у свиней при лечении «Биоэффектом ДВ-1» на основе геля

Группа Форма и способ применения Сроки заживления, дни; М±т Разница сроков заживления к контролю, ±дня Ускорение заживления ран по отношению к контролю, % Р<

1 «Биоэффект ДВ-1» 0,5% в форме геля, наружно 14,6 ± 0,34 -5,2 26,3 0,001 • {(

2 «Биоэффект ДВ-1» 1,5% в форме геля, наружно 15,1 ±0,45 -4,7 23,8 0,001

3 Контроль, без лечения 19,8 ±0,66 - -

Раны у всех видов животных, с нанесением на них 0,5% «Биоэффекта ДВ-1» в форме геля, заживали с менее выраженной воспалительной реакцией, с образо-

ванием более тонкого и нежного струпа, в них хорошо была выражена краевая эпителизация. Все они были покрыты плёночкой высохшего геля, что защищало раневой дефект от загрязнения.

Анализ данных морфологических и биохимических показателей крови, взя-

г.

той от свиней опытных и контрольных групп до начала и на 22-е сутки лечения, показывает, что они были в пределах физиологической нормы.

Биоптаты с раневых дефектов брали по мере заживления в опытной и контрольной группах. Гистоморфологическое исследование биоптатов рубцующейся ткани у свиней с дефектов, нанесенных в области бедра, подтверждали сроки заживления и показали, что морфологическая структура биоптата, взятого на 16 сутки в опытной группе и на 22 сутки в контрольной группе аналогичны. Это подтверждает, что в раневых дефектах при лечении «Биоэффект ДВ-1» в 0,5% в форме геля в среднем на 14-е сутки (Р<0,001) сформировалась рубцовая ткань, свидетельствующая о заживлении раневого дефекта. В контрольной же группе заживление произошло в среднем на 19-е сутки (Р<0,001), что и подтвердилось при гистологическом исследовании биоптата, взятого на 22 сутки.

Общим для гистопрепаратов, сделанных из биоптатов, взятых на 16 и 22 дни является то, что формирующийся рубец толще бездефектной кожи примерно в два раза и по всей его толщине происходят активные пролиферативные процессы. Эпидермис, покрывающий дефект, имеет на всем протяжении сосочки, направленные вглубь формирующейся соединительнотканной основы рубца. Нижний базальный или зачатковый слой эпидермиса неровный и имеет вид сосочков, конусов разнообразной формы и конфигурации. В некоторых случаях сосочки соединены между собой перемычками. В нижней части сосочков отмечается наиболее компактное скопление эпителиальных клеток. Они овальной формы, их ядра расположены вертикально относительно базальной мембраны. В верхней части эпидермиса также отмечается многослойное скопление клеток. Сверху эпидермис покрыт чешуйчатым роговым слоем, он имеет разрыхленную некомпактную структуру волокон, чешуйки которых слоистые, неровного строения. Толщина его в 3-4 раза меньше эпидермального слоя. Блестящий слой не выражен.

Формирующаяся дерма представлена большей частью соединительнотканными элементами и по объемному соотношению в 5-6 раз толще эпидермиса. В составе дермы в большом количестве содержатся клетки фибробластического ряда. Фибробласты вытянутой формы, фиброциты более округлые или неправильной формы. Они имеют по одному или несколько ядер. Количество фиброб-ластов в грануляционной ткани на 16 сутки при лечении «Биоэффектом ДВ-1» больше, чем в бездефектной ткани на 11% (Р<0,001), а к 22 суткам больше всего на 0,3%. Количество фиброцитов на 16 сутки больше на 50% (Р<0,001), а к 22 суткам их больше на 3,7%. Также в дерму включено большое количество сосудистых вплетений, имеющих у венул щелевидную форму, а у артериол - округлую. Количество венул в грануляционной ткани на 16 сутки больше, чем в норме на 3,8%, а артериол меньше на 18% (таблица 3).

Таблица 3

Гистоморфологические показатели рубцующейся ткани у свиней при

лечении «Биоэффектом ДВ-1» 0,5% в форме геля

Признаки Бездефектная ткань Биолтат, 16 сутки Биоптат, 22 сутки

«Биоэффект ДВ-1» контроль «Биоэффект ДВ-1» контроль

кол-во, структур % кол-во, структур % кол-во, структур % кол-во, структур % КОЛ-ВО,, структур

Фибробласты 16,0±0,95 6,5 44,6±1г22**" 17,6 137,0±0,15 50,9 17,4±0,81 6,8 37Д±1,11 15,4

Фиброциты 51,4±0,90 20,7 102,0*1,00"" 40,9 83,0±1,11 30,8 61,0±0,77 24,4 110,04:1,11 46,0

Жировые клетки 79,3±1,00 32,1 39,0±0,81 15,6 7,7±0,50 2,6 66,0*0,54 26,0 23,3±0,68 9,6

Вену-лы 31,1±0,54 12,6 41,3±0,36 16,4 21,1±0,68 7,8 41,0*0,54 16,4 46,0±0,63 19,2

Артери олы 69,2±0,71 28,0 23,1 ±0,81 9,2 21,2±0,85 7,8 65,3±0,95 26,4 23,3±1,00 9,6

Формирующаяся соединительнотканная основа рубца во всех случаях (кроме нормы) еще окончательно не сформирована. Коллагеновые волокна в основном выражены в дермальном слое, собираются в тонкие пучки, ориен-

тированные параллельно поверхности кожи. В подэпидермальной зоне волокна ориентированы преимущественно косо, в норме же они образуют вязь. В регенерате жировые клетки рассеяны по формирующейся дерме, как одиночные, так и группами, в форме прослоек, большее их количество в донной части дермы. Количество жировых клеток в грануляционной ткани к 16 суткам меньше, чем в норме на 16,5%, а к 22 суткам меньше на 6,1%. Вероятно, их формирование идет из подкожной клетчатки, за счет них происходит уменьшение объема дефекта подкожной клетчатки. Формирующиеся волосяные фолликулы, в отличие от нормы, встречаются редкоИз полученных результатов видно, что гистоморфологические исследования рубцующейся ткани служат доказательством заживления ран и эффективности их лечения препаратом "Биоэффект ДВ- Iя.

В опытах, проведенных в производственных условиях на свинотоварной ферме учебно-опытного хозяйства Приморской государственной сельскохозяйственной академии, использовали поросят из группы 0-2, породы ландрас в количестве 27 голов с живой массой по 1-1,5 кг, имевших аналогичные резаные раны хвостов в результате их купирования. Животным первой группы для обработки культи хвоста применяли «Биоэффект ДВ-1» в 0,5% в форме геля, а второй группы - 5% линимент синтомицина. Животным контрольной группы (5голов) лечение лекарственными препаратами не проводили. Тестом, указывающим на выздоровление животных, служило заживление культи с выраженным заполнением дефекта грануляционной тканью.

Анализ полученных данных (таблица 4) при лечении ран культи хвостов у поросят, показывает, что раны, где для обработки применяли 0,5% «Биоэффект ДВ-1» в форме геля, заживали в среднем на 8 сутки, что ускорило заживление на 4 суток, или 31,5% (Р<0,001). В группе, где применяли линимент синтомицина, раны заживали в среднем за 10 суток, а это ускоряет процесс заживления на 2,7 суток, или 21,3% (Р<0,001) по отношению к контролю. Быстрое заживление объясняется незначительной площадью ран, поросята при лечении «Биоэффектом ДВ-1» не беспокоятся, к третьим

росята при лечении «Биоэффектом ДВ-1» не беспокоятся, к третьим суткам культя хвоста покрываются грануляционной тканью.

Таблица 4

Морфофункциональная характеристика ран хвоста в зависимости от применяемого лечения

Группа Применяемый препарат Срок заживления, дни; М±ш Ускорило заживление по отношению к контролю Р<

± дней %

1 «Биоэффект ДВ-1», 0,5%, на геле-вой основе 8,7 ±0,25 4,0 31,5 0,001

2 Линимент синтомицина 10,0 ±0,71 2,7 21,3 0,001

3 Контроль (без лечения) 12,7 ±0,82 - - -

В производственных условиях свиноводческого хозяйства «Ариран-Н» для лечения поверхностных кусаных ран у свиней из группы откорма применяли «Биоэффект ДВ-1» в 0,5% в форме геля и 5% линимент синтомицина наружно с интервалом 24 часа.

Полученные результаты (таблица 5), свидетельствуют, что применение «Биоэффекта ДВ-1» в 0,5% в форме геля ускоряет заживление ран на 3-е суток в сравнении с линиментом синтомицина (Р<0,05). При этом заметно снижались признаки воспаления на дне, краях и стенках ран; на поверхности ран образовывалась светло-коричневая пленочка геля, края раны постепенно стягивались к центру.

При анализе показателей продуктивности было установлено, что свиньи, раны которых лечили с применением «Биоэффектом ДВ-1» в 0,5% в форме геля, имели среднесуточный прирост живой массы 191 грамм, в то время как свиньи, для лечения ран у которых использовали линимент синтомицина, имели среднесуточный прирост живой массы 183 грамм (Р<0,05). Контролем изменения продуктивности служили клинически здоровые животные, они имели среднесуточный прирост живой массы 195 грамм.

Таблица 5

Морфофункциональная характеристика случайных ран в зависимости от применяемого лечения

Группа Количество, голов Применяемый препарат Срок заживления, дни; М±ш Р<

1-я опытная 12 свиней «Биоэффект ДВ-1» 0,5%, в форме геля 11,0 ±0,25 0,05

2-я опытная 11 свиней Линимент синтомицина 14,0 ±1,32 0,05

При применении «Биоэффекта ДВ-1» в 0,5% в форме геля эффективность лечебных мероприятий составила 301 рубль на рубль затрат, а при лечении линиментом синтомицина экономическая эффективность составила 86,8 рублей на рубль затрат.

21

ВЫВОДЫ

1. Из применяемых препаратов «Биоэффест ДВ-1» оказывал стимулирующее воздействие на организм в целом и поврежденную кожу, как при внутреннем, так и при наружном применении в виде водных и гелевых форм. Срок заживления ран был короче при использовании «Биоэффекта ДВ-!» 0,5-1,5-процен|^ой концентрации на гелевой основе и 0,5-1,5-5-процентного водного раствора соответственно на 8; 7,8; 6,8; 5,3; 2,6 дней по сравнению с контролем.

2. При испытании препарата «Биоэффект ДВ-1» на грызунах и всеядных животных в лабораторных условиях и производстве в концентрации действующего вещества от 0,1 до 50 мг, самой высокой терапевтической активностью этого препарата является его 0,5-процентная концентрация в форме геля на метилцел-люлозной основе.

3. При длительном испытании «Биоэффекта ДВ-1» и линимента синтомицина лучший эффект показал «Биоэффект ДВ-1», способствующий быстрейшему угасанию воспалительной реакции, заживлению раневого дефекта и отделению струпа. Экономическая эффективность от его применения на 214 руб. больше, чем линимента синтомицина.

4. Применение препарата «Биоэффект ДВ-1» одинаково эффективно как при наличии спонтанно вызванных травм, так и экспериментальных, но срок выздоровления зависит от места нахождения раны. Заживление на участках с подвиж- г ной кожей происходит на 6 дней раньше, чем на участках с неподвижной кожей.

5. Под воздействием «Биоэффекта ДВ-1» морфофункциональное восстановление раневого дефекта осуществляется за счет увеличения количества артериол на 1 б и 22 сутки, возрастания в 2 раза по сравнению с бездефектной тканью количества фиброцитов и интенсивного накопления жировых клеток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований по морфофункциональной оценке заживления ран у животных при применении «Биоэффект ДВ-1» учтены при разработке нормативных документов, планируемых отделом ветеринарии краевого управления сельского хозяйства к внедрению в ветеринарную практику при решении вопросов заживления ран > животных в производственных условиях хозяйств разного уровня и в учебный процесс:

1. Для лечения кожных ран различной локализации у разных видов животных использовать препарат «Биоэффект ДВ-1» в 0,5% концентрации в форме геля, наружно.

2. Препарат рекомендовать для дальнейшего внедрения в фармацевтическую промышленность.

3. Результаты исследований использовать в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий по патомор-фологии, ветеринарной хирургии, фармакологии на факультетах ветеринарной медицины, слушателям ФПК и другим формам обучения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Любченко E.H. Применение гуматов в ветеринарии и животноводстве // Аграрная политика и технология производства сельскохозяйственной продукции в странах Азиатско-Тихоокеанского региона. - Международная научно-практическая конференция. - Уссурийск, 2001.- Т.З.-С. 191-195.

2. Любченко E.H., Кулешов С.М. Заживление экспериментальных ран под влиянием препарата «БК» в зависимости от его концентрации и способа применения // Проблемы сельскохозяйственного производства Приморского края. - Научно-практическая конференция. - Уссурийск, 2003.- Выпуск 2. - С. 88-90.

3. Любченко E.H., Кулешов С.М., Кухаренко Н.С. Применение комплекса «Биоэффект ДВ-1» для стимуляции заживления ран у животных //Современные

проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве. -Юбилейная международная научно-практическая конференция. - Барнаул, 2003.-Ч.З.-С.ЮЗ-106.

4. Любченко E.H., Кухаренко Н.С., Кулешов С.М. Применение комплекса биоактивных веществ для стимуляции заживления ран у животных II Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных. - Международная научная конференция. -Улан-Удэ, 2003.-4.3.- С.49-50.

5. Любченко E.H. Стимуляция заживления ран у животных // Ветеринарная газета.- 2003.- № 4. - С. 3.

Любченко Елена Николаевна

Морфофункциональная оценка заживления ран у животных при применении «Биоэффект ДВ-1»

Специальность 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Лицензия 020572 от 16 сентября 1997г. Подписано к печати 15.08.03г. формат 60x90 1/16 Бумага ксероисиа*. Печать 1№СКЖАРН РЯ 3910 ЕИ Уч. - изд. Л. 1,4. тираж 100 экз. Заказ

Участок оперативной полиграфии Приморской государственной сельскохозяйственной академии. 692500.Г. Уссурийск, ул. Раздольная.8.

»13066

Актуальность исследований. Перевод экономики Российской Федерации на рыночные отношения требует коренного пересмотра вопроса использования материальных ценностей и средств сельскохозяйственного производства для осуществления комплекса профилактических и лечебных мероприятий. Отсюда следует, что ветеринарное обслуживание животноводства должно быть экономически эффективным, целесообразным, финансово выгодным для хозяйств всех форм собственности. Поэтому перед ветеринарной наукой ставятся актуальные задачи по поиску и внедрению в производство доступных, дешевых и эффективных лекарственных средств.

Среди незаразных болезней, наблюдаемых в животноводстве, хирургические составляют более 40%, а раны и травмы различной этиологии регистрируются до 80% всех пациентов с хирургической патологией (Кузнецов Г.С., 1980; Бурденюк А.Ф., Власенко В.М., 1985). Такое положение в значительной степени объясняется тем, что в хозяйствах промышленного типа имеет место ряд специфических этиологических факторов, например, особенности технологического процесса, гиподинамия, стрессовые воздействия. Содержание большого количества животных на ограниченной площади, нарушение технологических режимов, ветеринарно-санитарных правил ведет к частому травмированию животных. В целом хирургические болезни наносят немалый экономический ущерб. По статистическим данным, в среднем у 2-4 % убойных свиней имеются травмы. Мясо от таких животных в 20 % случаев оказывается непригодным в пищу (Кулешов С.М., 1987). По данным Г.С. Кузнецова (1980) гибель поросят от травм может достигать 8,3% от общих потерь вследствие их болезней.

Применение новейших методов исследования репарации расширило возможности изучения процесса заживления ран, однако, проблема эта не утратила своего значения и остается одним из актуальных вопросов современной хирургии.

Препараты, предназначенные для лечения повреждений кожи должны защищать рану от заноса патогенной микрофлоры, обладать противовоспалительным эффектом, а в период грануляции и эпителизации ран стимулировать эти процессы и ускорять заполнение тканевых дефектов эпителиальной тканью, сокращая тем самым сроки заживление ран.

В настоящее время для стимуляции иммунобиологичесой активности и в качестве составной части комплексной терапии в лечении ран широко используются АСД-2, ФИБС, сок и мазь каланхоэ, препараты алоэ, элеутерококка, гумизоль, экстракт и взвесь плаценты, облепиховое масло и другие препараты (Машковский М.Д., 2002). Они активизируют и стимулируют обменные процессы в поврежденных тканях и в целом организме. Тем не менее, изыскание новых препаратов для стимуляции процессов регенерации остается актуальным.

Раневые процессы у животных вызывают расстройство обмена веществ, в результате чего снижается продуктивность. Ослабление резистентности организма животного, активизация условно патогенной микрофлоры является основным фактором в патогенезе ран. Поэтому одной из задач ветеринарной науки считается поиск эффективных и недорогих лекарственных препаратов из местного сырья, оказывающих комплексное воздействие на организм животных, вызывающих быстрое заживление ран, что должно положительно отражаться на общем состоянии организма животных и их продуктивности.

Цель и задачи. Цель исследования состоит в изучении действия препарата «Биоэффект дальневосточный-1 »(Биоэффект ДВ-1)на морфологическое состояние рубцовой ткани и активизацию регенеративных процессов при лечении экспериментальных и случайных ран у животных.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Провести поиск оптимальных концентраций и способов применения препарата, оказывающего стимулирующее действие при заживлении ран на визуальном и гистоморфологическом уровнях.

2. Отработать оптимальные концентрации применения препарата на экспериментальных ранах с подвижной и неподвижной кожей, у разных видов лабораторных животных.

3. Изучить оптимальные концентрации препарата с гелеобразователем для заживления ран у свиней в производственных условиях.

4. Определить экономическую эффективность применения препарата «Биоэффект ДВ-1» для лечения ран у животных.

Настоящая работа является составной частью комплексной программы исследований кафедры незаразных болезней, хирургии и акушерства Института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Приморской государственной сельскохозяйственной академии и патоморфофизиологии, терапии, акушерства и хирургии Дальневосточного государственного аграрного университета по изучению биологически активных веществ из местных ресурсов (номер государственной регистрации 0186.0060.944.) и выполнена самостоятельно.

Научная новизна. Впервые апробирован препарат «БиоэффектДВ-1», содержащий гумивит, экстракт элеутерококка, используемый с целью ранозаживляющего действия у различных видов животных. Применение препарата было изучено в разных формах, наиболее оптимальные были использованы в комплексе с метилцеллюлозой для получения консистенции геля, что позволило биоактивным веществам лучше проникать в поврежденные ткани и защищать их. Важно, что подбор ингредиентов препарата и выбранные их количественные соотношения позволили создать эффективное и в удобной лекарственной форме ранозаживляющее средство, применение которого сокращает сроки заживления экспериментальных и случайных ран у животных. Результативность воздействия «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе доказана на гистоморфологическом строении рубцовой

1» на гелевой основе доказана на гистоморфологическом строении рубцовой ткани. Материалы исследований находятся на рассмотрении патентного отдела ТИБОХа ДВО РАН (приоритетная справка 2003113570 (014403) от 8 мая 2003 года).

Теоретическая и практическая значимость работы. Описана теория раневого процесса у животных, рассмотрена роль фибробластов в процессе заживления ран. Проведен анализ физиологической активности ингредиентов «БиоэффектаДВ-1» и их влияние на репаративные процессы. Полученные результаты по использованию «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе для ускорения регенерации раневого дефекта позволили рационально использовать его в ветеринарной медицине для лечения ран у животных. Предложенные соотношения ингредиентов препарата наиболее экономичны, сами ингредиенты недороги и доступны. Эти свойства и простота приготовления могут быть использованы в фармацевтической промышленности для дальнейшего изготовления вышеуказанного препарата в широком масштабе. Полученные результаты позволяют проводить дальнейшие исследования по внедрению «Биоэффекта ДВ-1» на гелевой основе в ветеринарной практике для лечения ран различной этиологии. Полученные данные могут быть использованы и учтены в научно-исследовательской работе, в учебном процессе, при написании учебников, справочных пособий.

Основные положения, выносимые на защиту. Действие препарата «Биоэффект ДВ-1» на морфологическое состояние рубцовой ткани и активизацию регенеративных процессов при лечении экспериментальных и случайных ран у животных.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Аграрная политика и технология производства сельскохозяйственной продукции в странах Азиатско-Тихоокеанского региона» (г. Уссурийск, 2001); научнопрактической конференции аспирантов Приморской государственной сельскохозяйственной академии «Проблемы сельскохозяйственного производства Приморского края» (г. Уссурийск, 2002); ярмарке научно-технических идей (Владивосток, 2003); международной научно-практической конференции " Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве" (г. Барнаул, 2003); международной научной конференции "Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных" (г. Улан-Удэ, 2003).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в учебной и научной работе на кафедрах хирургии и патологической анатомии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Казанской государственной академии ветеринарной медицины, Алтайского государственного агроуниверситета, Красноярского агроуниверситета, Витебской ордена "Знак Почета" государственной академии ветеринарной медицины, Бурятского государственного университета, Уральской государственной сельскохозяйственной академии, институте ветеринарной медицины ОмГАУ, института ветеринарной медицины и зоотехнии ДальГАУ, Приморской ГСХА, Уссурийского аграрного техникума, в лечебной работе ряда ветеринарных клиник и хозяйств Приморского края.

Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в 5 печатных работах.

Структура и объём и диссертации. Диссертационная работа изложена на 126 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, приложения и список использованной литературы. В работе представлено 10 таблиц, 27 рисунков. Список литературы включает 258 источников, из них 38 иностранных авторов.

6. выводы

1. Из применяемых препаратов «Биоэффект ДВ-1» оказывал стимулирующее воздействие на организм в целом и поврежденную кожу, как при внутреннем, так и при наружном применении в виде водных и гелевых форм. Срок заживления ран был короче при использовании «Биоэффекта ДВ-1» 0,5-1,5-процентной гелевой основе и 0,5-1,5-5-процентного водного раствора соответственно на 8, 7,8; 6,8; 5,3; 2,6 дней по сравнению с контролем.

2. При испытании препарата «Биоэффект ДВ-1» на грызунах и всеядных животных в лабораторных условиях и производстве в концентрации действующего вещества от 0,1 до 50 мг, самой высокой терапевтической активностью этого препарата является его 0,5-процентная концентрация в форме геля на метилцеллюлозной основе.

3. При длительном испытании «Биоэффекта ДВ-1» и линимента синтомицина лучший эффект показал «Биоэффект ДВ-1», способствующий быстрейшему угасанию воспалительной реакции, заживлению раневого дефекта и отделению струпа. Экономическая эффективность от его применения на 214 руб. больше, чем линимента синтомицина.

4. Применение препарата «Биоэффект ДВ-1» одинаково эффективно как при наличии спонтанно вызванных травм, так и экспериментальных, но срок выздоровления зависит от места нахождения раны. Заживление на участках с подвижной кожей происходит на 6 дней раньше, чем на участках с неподвижной кожей.

5. Под воздействием «Биоэффекта ДВ-1» морфофункциональное восстановление раневого дефекта осуществляется за счет увеличения количества артериол, возрастания в два раза по сравнению с бездефектной тканью количества фиброцитов и интенсивного накопления жировых клеток.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований по морфофункциональной оценке заживления ран у животных при применении «Биоэффект ДВ-1» учтены при разработке нормативных документов, планируемых отделом ветеринарии краевого управления сельского хозяйства к внедрению в ветеринарную практику при решении вопросов заживления ран у животных в производственных условиях хозяйств разного уровня и в учебный процесс:

1. Для лечения кожных ран различной локализации у разных видов животных использовать препарат «Биоэффект ДВ-1» в 0,5% концентрации в форме геля, наружно.

2. Препарат рекомендовать для дальнейшего внедрения в фармацевтическую промышленность.

3. Результаты исследований использовать в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий по патоморфологии, ветеринарной хирургии, фармакологии на факультетах ветеринарной медицины, слушателям ФПК и другим формам обучения.