Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональная оценка заживления ран при применении гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей

На правах рукописи

Кулешов Роман Сергеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ГИСТОЛИЗАТОВ ИЗ ПАНТОВ СЕВЕРНОГО И ПЯТНИСТОГО ОЛЕНЕЙ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Благовещенск, 2004

Работа выполнена в Приморской государственной сельскохозяйственной

академии

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Ярцев Владимир Геннадьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Рябуха Валерий Андреевич; кандидат ветеринарных наук, доцент Булдыгин Дмитрий Владимирович

Ведущая организация:

Иркутская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита состоится «10» ноября 2004 года в 14(ю часов на заседании

Межрегионального диссертационного совета КМ 220.027.01 при

Дальневосточном государственном аграрном университете (675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Дальневосточного государственного аграрного университета

Автореферат разослан « »

2004 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

Н.М. Мандро

.¿Pf&V-

/я^у

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. В настоящее время, в России, с изменением формы собственности, всё больше возрастает значение ветеринарного обеспечения, в основе которого лежит комплекс профилактических мероприятий взаимосвязанных с лечебной работой и составляющих с ней единое целое.

В ветеринарной медицине проблема травматизма и лечение занимают одно из ведущих мест в патологии животных, что ведет к значительным экономическим затратам.

Раны и травмы различной этиологии регистрируются до 80% всех пациентов с хирургической патологией (Бурденюк А.Ф., Власенко В.М., 1985). .

Предназначенные для лечения ран препараты должны защищать их от заноса патогенной микрофлоры, обладать противовоспалительным эффектом, а в период грануляции и эпителизации, стимулировать эти процессы и ускорять заполнение тканевых дефектов эпителиальной тканью, сокращая тем самым сроки заживления ран (Вялов С.Л., Куиндоз П.К., 1999; Hans Lippcrl, I999; Кравчик А.Н., Спирин СВ., 2000; Христо СА, Родионов П.П., 2(КК); Хилова Ю.К., Графова Г.Я., 2000).

В настоящее время для стимуляции иммунобиологической активности и в качестве составной части комплексной терапии в лечении ран широко используются АСД-2, сок и мазь каланхоэ, препараты алоэ, элеутерококка, гумизоль, ранозоль, раносан, экстракт и взвесь плаценты, керакол, облепихопое масло и другие препараты (Машковский М.Д., 2002). Они активизируют и стим)лируют обменные процессы в повреждённых тканях и в организме в целом. Тем не менее, изыскание новых препаратов для стимуляции процессов регенерации остаётся актуальным, что и определило задачи наших исследований.

РОС НАЦИОНАЛЬНА* «ММКОТСКА

тЯ№гЗ

Морфологические исследования по нашему мнению позволяют более качественно оценить эффективность лечебных мероприятий, особенно в хирургической практике.

Настоящая работа выполнена самостоятельно и является составной частью комплексной программы исследований кафедры незаразных болезней, хирургии и акушерства Института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Приморской государственной сельскохозяйственной академии по изучению "Влияния биологически активных веществ на морфологию рубцующейся ткани у животных" (номер государственной регистрации 01.20.0308.406).

Цель исследования:

Выявить особенности влияния гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей на морфофункциональное состояние рубцовой ткани.

Задачи исследования:

1) Установить влияние гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей на заживление ран у различных видов животных;

2) Гистологическими и гистохимическими исследованиями установить морфологические изменения, происходящие в раневых рубцах под воздействием применяемого лечения;

3) Определить влияние гистолизатов из пантов оленей на динамику сокращения раневых площадей у лабораторных животных;

4) Изучить возможность использования гистолизатов из пантов оленей на гелевой основе в производственных условиях с целью ускорения регенерационных процессов при травматизме у животных.

Основные положения, выносимые на защиту. Действие гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей на морфологическое состояние рубцовой ткани и активизацию регенеративных процессов при лечении жепериментальных и случайных ран у животных.

Научная новизна. Изучено действие гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей при репаративных процессах кожных ран у различных видов животных. Применение препаратов было изучено в разных формах, наиболее обладающие стимулирующим действием на заживление ран были использованы в комплексе с метилцеллюлоюй. Это позволило биоактивным веществам лучше проникать в повреждённые ткани и защищать их о1 загрязнения. Важно, что подбор ингредиентов препаратов и выбранные их количественные соотношения позволили создать эффективное и в удобной лекарственной форме ранозаживляющее средство. Применение его сокращает сроки заживления экспериментальных и случайных ран у животных. Результативность воздействия гистолизатов на гелевой основе подтверждена при гистоморфологическом изучении рубцующейся ткани, в которой более активно происходят восстановительные процессы. Материалы исследований, под названием «Способ , приготовления "Пантогеля"», находя 1ся на рассмотрении патентного отдела ФГОУ ВПО Дальневосточлого государственного аграрного университета (приоритетная справка 2003113507 (014317) от 7 мая 2003 года).

Теоретическая и практическая значимость . работы. Изучены основные этапы раневого процесса у животных, в динамике изучены изменения количественных соотношений фибробластов, жировых клеток и сосудов при формировании регенерата в процессе заживления ран.

Проведён анализ физиологической активности ингредиентов гистолизатов из пантов оленей и их влияние на репаративные процессы. Результаты использования гистолизатов из пантов оленей на основе метилцеллюлозы для ускорения регенерации раневого дефекта позволяют рационально использовать их в ветеринарной медицине для лечения ран у, животных различной этиологии.

Учитывая высокоэффективные ранозаживляющие свойства гистолизатов из пантов оленей на гелевой основе и простоту их приготовления, можно рекомендовать производство препаратов для ветеринарной медицины.

Полученные результаты дают основания для внедрения технологии производства гистолизатов из пантов оленей на гелевой основе в фармацевтическую промышленность с целью производства препарата в промышленных масштабах. Это расширяет ассортимент препаратов изготовляемых из пантов, обеспечивает их безотходную переработку и даёт дополнительную прибыль химфармзаводам.

Данные проведенных исследований могут быть использованы в научно-исследовательской работе, в учебном процессе, при написании учебников, справочных пособий.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и опубликованы в материалах: международной научно-практической конференции «Аграрная политика и технология производства сельскохозяйственной продукции в странах Азиатско-Тихоокеанского региона» (г. Уссурийск, 2001); научно-практической конференции аспирантов и молодых учёных Приморской государственной сельскохозяйственной академии «Проблемы сельскохозяйственного производства Приморского края» (г. Уссурийск, 2002); юбилейной международной научно-практической конференции «Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве» (г. Барнаул, 2003); международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных» (г. Улан-Удэ, 2003).

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований используются в учебной и научной работе на кафедрах хирургии, незаразных болезней и акушерства Института животноводства и ветеринарной медицины Приморской ГСХА, в Институте ветеринарной медицины и зоотехнии

ДальГАУ, Уссурийском аграрном техникуме, в лечебной работе ветеринарных клиник и хозяйств Приморского края.

Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в 6 печатных работах.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. В работе представлено 8 таблиц, 8 графиков, 43 рисунка. Список литературы включает 273 источника, из них 57 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные, лабораторно-клинические и на\чно-производственные исследования были проведены в период с 2001 по 2004 год. Схема проведения исследований показана на рисунке 1.

Животные. С целью изучения действия гистолизатов на репаративные процессы у животных, объектом исследования служили 108 интактных белых мышей, 20 кроликов породы шиншилла, 86 свиней породы ландрас и крупная белая.

Клинические испытания препарата на мышах и кроликах производились в лабораторных условиях на базе вивария Института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Приморская государственная сельскохозяйственная академия». Научно-производственные исследования выполняли на свиньях, на свинотоварной ферме учебного хозяйства Приморской государственной сельскохозяйственной академии и хозяйства «Ариран-Н».

Рис. 1. Схема проведения исследований

Экспериментальную часть работы проводили на клинически здоровых животных, подобранных по принципу аналогов с учётом возраста, пола и живой массы. Все животные находились в равноценных условиях кормления и содержания. Животные содержались в виварии, согласно санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментальных биологических клиник (Приказ МЗ СССР №78 от 6.04.73). Кормление осуществлялось в соответствии с нормами, утверждёнными приказом МЗ СССР №163 от 10.03.66 и согласно условиям, необходимым для выбранной экспериментальной модели.

Показателями по определению эффективности применения гистолизатов из пантов оленей для стимуляции процессов регенерации при экспериментальных ранах у животных служили сроки образования рубца после отторжения струпа и наличие эпителия на месте нанесения дефекта, определение зрелости рубцовой ткани, а также скорость сокращения площади раневого дефекта, характер воспалительной реакции и клиническая картина заживления.

Динамику скорости сокращения и заживления экспериментального раневого дефекта определяли по методу Л. Н. Поповой (1942). На рану ежедневно накладывалась стерильная целлофановая пластинка, и на неё обрисовывались контуры раневого дефекта. Затем рисунок переносился на миллиметровую бумагу, и подсчитывалась площадь раны.

Белым мышам кожные дефекты наносились квадратной формы площадью 100 мм2 в области спины. У кроликов одновременно наносились два кожных дефекта прямоугольной формы, площадью 300 мм2: первый - в области подвздоха, второй - на наружной поверхности ушной раковины. У свиней экспериментальные дефекты наносились трепаном размером 20 мм в диаметре и 15 мм в глубину в области наружной поверхности бедра, отступя 15 см от позвоночника.

Для проведения первой серии производственного опыта поросятам пятидневного возраста, в количестве 44 голов, с живой массой I - 1,5 кг, с целью профилактики каннибализма, купировали хвосты на 1/2 длины, согласно методике И.И. Магда (1979). Культи хвостов ежедневно обрабатывали опытными препаратами.

Эффективность лечения кусаных ран изучали во второй серии производственного опыта на свиньях породы ландрас и крупная белая, в условиях производства. Свиньи наносили укусы и царапины друг другу во время взвешивания. Животные в количестве 24 голов из группы откорма имели среднюю массу 60 кг. В опыт набирались животные сразу после взвешивания с относительно аналогичными ранами, размером от 2 до 5 см в диаметре. Раны обрабатывались опытными препаратами ежедневно. Препараты наносились тонким слоем, однократно, во время кормления. Взвешивание животных производили до и после проведения опытов.

Способы применения. Приготовление лекарственных форм гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей для воздействия ими на животных с экспериментальными и случайными ранами производили несколькими способами. Доза и схема введения препаратов были выбраны согласно методике запатентованной В.Г. Ярцевым (1990).

/. Растворы для орошения. Для приготовления водных растворов гистолизатов различной концентрации использовали дистиллированную воду. Чтобы установить лучшие сроки заживления, в зависимости от концентрации раствора, делали три варианта разведения. Для этого мерной Пипеткой отмеряли 25 мл гистолизата, вносили его в 75 мл дистиллированной воды и получали 25% раствор, который использовали для орошения ран. Соответственно готовили и другие концентрации опытных препаратов.

2. Растворы для инъекций использовали 25; 50; 100% концентрации. Инъекции производились подкожно по 0,1 мл.

3.Для пероралыюго применения мышам, кроликам и свиньям препарат использовали однократно один раз в день, ежедневно (Ярцев В.Г., 1990). Перед кормлением препарат смешивали с кормом.

4. Гель для наружного применения на метилцеллюпотои основе. По

результатам первой серии опытов на белых мышах выбирали оптимальную водную концентрацию гистолизатов из пантов, улучшающую заживление ран и разводили их метилцеллюлозой для получения гистолизата пантов в форме геля. На 100 мл готового раствора гистолизата добавляли метилцеллюлозу в количестве 3 грамм, размешивали ее на электромагнитной мешалке до полного растворения и образования однородной гелевой консистенции.

Гематологические показатели (количество эритроцитов и лейкоцитов; содержание гемоглобина; резервную щелочность; в сыворотке крови - уровень общего белка, неорганического фосфора, общего кальция) устанавливали по общепринятым методикам (Вичев Е.П., Каракашев Л.В., 1971; Кудрявцев Л.Л., Кудрявцева Л.А., 1974; Кондрахин И.П., Шульман И.Д., 1983).

Материалом для гистоморфологических исследований служили биоптаты, взятые на 16 и 22 сутки у свиней с места нанесения экспериментальных ран. Биоптаты фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. Гистосрезы толщиной 5-7 мкм получали на санном микротоме с последующей их окраской гематоксилин-эозином. Для выявления коллагеновых волокон срезы окрашивали по Ван-Гизон, для определения наличия жировых клеток срезы красили суданом-3 по общепринятым прописям (Меркулов ГА, 1961; Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982).

При гистоморфологическом исследовании обращали внимание на строение эпителия, сосочкового слоя, дермы, подкожной клетчатки, характер формирования сосудов и волосяных фолликулов. Используя окулярную сетку, подсчитывали количество клеточных элементов в рубцующейся ткани. Микрофотографии изготавливали с помощью микрофотонасадки МФН-12,

фотоаппарата «Зенит 312М». Клеточный состав грануляционной ткани, подсчет количества фибробластов, сравнение препаратов по состоянию микроанатомических зон проводили по методике С. Б. Стефанова, Н.С. Кухаренко (1988). Для вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин пользовались таблицей Р.Б. Стрелкова (1966). Статистическую обработку цифрового материала проводили по О.И. Ойвину (1960).

При гистохимическом исследовании использовали выявление гликогена поА.Л.Шабадашу(1947).

Экономическую эффективность ветеринарных мероприятий рассчитывали по методике, утвержденной ГУВ МСХ СССР 4.05.1982 г.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1 МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЗАЖИВЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ РАН У БЕЛЫХ МЫШЕЙ И КРОЛИКОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ГИСТОЛИЗАТОВ ИЗ ПАНТОВ

Исследования, проведённые на 18 группах белых мышей, показали, что при наружном орошении экспериментальных, поверхностных, заживающих под струпом ран, при пероральном применении и подкожном введении в область лопатки гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей, лучшее ранозаживляющее действие проявляли: 100% гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе, наружно. Срок заживления кожных дефектов сокращался на 43,4%. При применении 100% гистолизата из пантов пятнистого оленя, перорально, заживление ран ускорилось на 39,4%.

Следующая серия экспериментов по изучению влияния гистолизатов из пантов оленей на стимуляцию заживления ран была проведена на кроликах породы шиншилла. Применение гистолизатов из пантов способствовало более быстрому сокращению площади раневых дефектов как с подвижной кожей - в области подвздоха, так и с неподвижной кожей - в области наружной

поверхности ушной раковины. Действие гистолизатов из пантов испытывали исходя из лучших результатов, полученных на мышах. Ранозаживляющую активность препаратов из пантов определяли по срокам заживления экспериментальных ран и динамике сокращения их площадей.

Результаты исследований показали (таблица 1), что заживление дефектов в области подвздоха произошло быстрее в третьей группе, где наружно применяли гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе. Сроки заживления экспериментальных дефектов у кроликов сократились на 7,4 суток, по сравнению с контролем, без лечения, что ускорило заживление на 39,4%. В четвёртой группе, где перорально применяли гистолизат из пантов пятнистого оленя, срок заживления ран в области подвздоха сократился на 7 суток, по сравнению с контрольной группой, без лечения, что ускорило процесс регенерации на 37,2%.

I аблица I

Влияние гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей на сроки заживления экспериментальных ран у кроликов при наружном и пероральном применении

Группы животных (п = 5) Способ применения Исследуемые препараты Сроки заживления ран,сутки (М±ш) Заживление ран по отношению к контролю. ± суток Ускорение заживления ран 1ю отношению К К01ГГр0Л№. %

1 .контроль без лечения - Ухо 21.0±0,45 Подвздох 18,8 ±0,36 - - -

2.контроль наружно чистый гель Ухо 163 ±0,58*" Подвздох 15,8 ±0,37*** -4,8 -3j(J 22,9 16,0

3. опытная наружно гистолизат пантов северного оленя на гелевой основе Ухо ,. 12,6*0,51*" Подвздох II,4 ±0,51*** -8,4 -7,4 40.0 39,4

4. опьпная перорально гистолизат пантов пятнистого оленя Ухо 13,6 ±0,68*** Подвздох 11,8 ±0,86*" -7,4 -7,0 ! 35,3 У12

Примечание: Перорально вводили из расчета 1 мл на животное, ежедневно. Полученные результаты обработаны статистически с использованием (-критерия Стьюдента. Уровень достоверности (Р) значений выведен при сравнении с контролем, без лечения: ***Р<0.001; п - количество животных в группе.

Заживление ран в области наружной поверхности ушной раковины произошло быстрее в третьей группе, где наружно применяли гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе. Сроки заживления экспериментальных дефектов у кроликов сократились на 8,4 суток, по сравнению с контролем, без лечения, что ускорило заживление на 40,0%. В четвертой группе, где перорально применяли гистолизат из пантов пятнистого оленя, раневые дефекты зажили на 7,4 суток быстрее, чем в контроле, без лечения, это ускорило заживление на 35,3%.

Анализ полученных данных свидетельствует, что во всех группах, раны в области подвздоха заживали быстрее, чем в области наружной поверхности ушной раковины. Наиболее эффективное ранозаживляющее действие на заживление экспериментальных ран, нанесенных в области подвздоха и ушной раковины, оказывает гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе при наружном применении. Образование и отпадение струпа при его применении происходило быстрее, чем в группах с пероральным назначением гистолизата из пантов пятнистого оленя. При этом характерно, что после заживления образуется малозаметный, нежный светло-розовый рубец.

В опытных группах, в отличие от контрольной группы, без лечения, на месте кожной раны образуется рубец, меньших размеров и большей эластичностью, как в области ушной раковины, так и в области подвздоха и возникали участки с наличием роста нового волоса.

2.2.2 МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЗАЖИВЛЕНИЯ . ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ РАН У СВИНЕЙ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ГИСТОЛИЗАТОВ ИЗ ПАНТОВ

Ежедневное применение гистолизатов из пантов для заживления ран у свиней породы ландрас, показало, что во всех опытных группах они стим) пируют регенеративные процессы, и ускоряют сроки заживления

экспериментальных ран.

В результате проведённых исследований установлено (таблица 2), что добавка в рацион свиней гистолизата из пантов пятнистого оленя оказывает активное стимулирующее действие при заживлении экспериментальных ран у свиней. При наружном воздействии наибольшим ранозаживляющим действием отличался гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе. Его применение позволило сократить заживление ран на 6,3 суток, что ускорило процесс заживления на 31,8% по'отношению к контрольной группе, без лечения. Это значительно более эффективно, чем применение гистолизата из пантов пятнистого оленя, где сокращение сроков заживления активизировалось только на 3,8 суток, что ускорило процесс заживления на 19,2% по отношению к контролю. <

'1 аб.мша 2

Влияние гистолизатов из пантов северного и пятнистою оленей на сроки заживления экспериментальных ран у свиней при наружном и пероральном применении

Группы ЖИВ0П1ЫХ (п = 6) . Способ применения Исследуемые препараты Сроки заживления ран,сутки (М±гп) Разница сроков заживления к котгтролю. ±суток Ускорение заживления ран по отношению к контролю. %

1.контроль без лечения - 19,8 ±0,«) - -

2. опьпная наружно гистолизат пантов северного оленя на гелевой основе Ш±0,5()*** -63 31,8

3. опыпыя перорально гистолизат пактов пятнистого оленя 160*036*" , .-3,8 19,2

Примечание: Перорально вводили из расчёта 10 мл на животное, ежедневно. Полученные результаты обработаны статистически с использованием (-критерия Стьюдснта Уровень достоверности (Р) значений выведен при сравнении с контролем, бе> лечения' ♦**Р<0.001; л - количество животных в группе.

Оценку ранозаживляющей активности препаратов из пантов определяли по срокам заживления экспериментальных ран, образованию рубца, а также по

микроанатомической структуре рубцующейся ткани у свиней. В процессе исследования у животных отмечали сроки заживления ран; клиническую картину; гематологические изменения, происходящие под влиянием лечения ран у животных гистолизатами из пантов.

Раны в 3-й опытной группе, обработанные гистолизатом из пантов северного оленя на гелевой основе, заживали с менее выраженной воспалительной реакцией, струп был тоньше, чем во 2-й опытной группе и в 1-й контрольной группе, без лечения. Кроме того, и струп и рана были покрыты тонкой непрозрачной плёнкой высохшего геля, который защищал рану от загрязнения.

Анализ данных морфологических и биохимических показателей крови, взятой от свиней опытных и контрольных групп перед опытом и на 22 сутки лечения показывает, что гематологические показатели в период исследований у животных были в пределах границ физиологической нормы.

2.2.3 СТРУКТУРА И ГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РУБЦУЮЩЕЙСЯ ТКАНИ У СВИНЕЙ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ГИСТОЛИЗАТОМ ИЗ ПАНТОВ СЕВЕРНОГО ОЛЕНЯ НА ГЕЛЕВОЙ ОСНОВЕ

В результате гистологического изучения тканей из биопсированных на 16 сутки после операции рубцов у свиней опытной группы установлено, что картина строения тканей заполняющих дефект выглядит следующим образом. Эпителий покрывающий дефект состоит из пяти - шести слоев клеток, его толщина в три раза больше чем в интактной коже. Волоконца эпителия имеют менее плотную некомпактную структуру. Эпидермис имеет сосочки более крупные и часто прямоугольные или не правильной формы, в отличие от конусовидной имеющейся в коже без повреждений. По контурам сосочкового слоя расположены базальные клетки, состоящие из четырёх -*пяти слоев.

Основа кожи - дерма занимает основной объём регенерата, отграничена от эпидермиса базальной мембраной и без резкой границы переходит в

подкожную жировую клетчатку. Она построена из формирующихся коллагеновых волокон и аморфного вещества. В ней имеются кровеносные сосуды. В регенератах опытных групп закономерно возникают новые волосяные фолликулы и сальные железы. В контрольной же группе, без лечения, развитие волосяных фолликулов не наблюдался.

Среди клеточных элементов основную массу составляют фибробласты и фиброциты. Видны участки формирования сетчатого слоя. Фиброблааы имеют типичное строение и представляют собой крупные клетки с неровными контурами часто вытянутой формы. Фиброциты имеют более округлую форму. Жировые клетки расположены одиночно, островками, пластами ив нижней части дефекта переходят в почти однородную жировую ткань. Сформированные пучки коллагена лежат параллельно и косо направлено к поверхности, переплетаясь друг с другом, главным образом в горизонтальной плоскости

В контрольной группе гистологическое изучение тканей раневого дефекта показало, что эпителий закрывающий раневой дефект состоит из пяти - шести слоев, имеет утолщённые участки. Эпидермис не имеет выраженного деления на слои характерные для интактной кожи. Сосочки базального слоя не правильной формы. Дерма состоит из формирующихся коллагеновых волокон уже имеющих участки переплетения в виде вязей. Наиболее выражено их формирование в средней части дефекта, ближе к краю. Дерма содержит большое количество элементов аморфного вещества, артериол округлой формы, венул овальной формы. Без резкой границы переходит в жировую клетчатку. Видимых различий между строением рубцующейся ткани в гистопрепаратах опытной и контрольной групп не обнаружено.

При проведении подсчёта клеточных элементов: сосудов, жировых клеток (таблица 3) выявлено, что разница в количестве фибробластов и фиброцитов в препаратах опытной и контрольной групп не значительна.

А жировых клеток в препаратах контрольной группы в два раза меньше. Количество венул относительно одинаково, а артериол в контрольной группе в два раза меньше.

Таблица 3

Гистоморфологичсские показатели рубцующейся ткани при лечении ран шетолизатом из пантов северного оленя на гелсвой основе (п = 6)

Признаки Бездефектная тхань Биоптат. 16 сутки Биоптат. 22 сутки

гистолизэт из пантов северного оленя на гелевой основе, наружно контроль, без лечения

Кол-во Количество Количество

Фибробласты 16,0 + 0,95 48,8 + 0.86*" 37,2+1,11***

Фиброциты 51,4 +(1,90 112,3 ±0,65*" 110,0+ 1,11***

Жировые клетки 79,3 ± 1,(10 51,2 + 0.43*" 23 Л ±0,68"*

Вснулы 31,1 ±0,54 43,4 ± 0.32*" 46,0 + 0,63"*

Артсриолы 69,2 ±0,71 42,7 + 0.54"* 23,3+ 1,Ш***

Примечание: Полученные результаты обработаны статистически с использованием 1 критерия Стьюлснта. Уровень достоверности (Р) значений выведен при сравнении с контролем, без лечения: ***Р<0.001. п - количество животных в группе.

Гистологическая картина биоптатов, взятых на 22 сутки у свиней контрольной группы, без лечения, значительно не отличалась от той, что наблюдали в биоптатах, взятых на 16 сутки у свиней опытной группы. Это подтверждается не только при визуальном просмотре препаратов, но и при проведении количественного подсчёта клеточных элементов и сосудов (таблица 3).

Таким образом, в результате анализа гистологической структуры рубцующейся ткани у свиней мы установили, что применение наружно гистолизата из пантов северного оленя на гелевой основе для лечения экспериментальных ран у свиней вызывает образование рубца уже на 16 сутки. По своей структуре и зрелости сформировавшийся рубец не уступает регенерату, формирующемуся только на 22 сутки в контрольной группе.

Гистохимическое исследование показало, что в регенератах опытных групп на 16 сутки после операции в области около сосудистого пространства наблюдается значительное скопление зёрен гликогена, а в контроле без лечения зёрен гликогена меньше, что свидетельствует о более интенсивных энергетически обменных процессах в регенератах у животных в опытных группах. В контроле с амилазой на препаратах отмечается розовое окрашивание.

3. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ГИСТОЛИЗАТОВ ИЗ ПАНТОВ ОЛЕНЕЙ В ВЕТЕРИНАРНОЙ ПРАКТИКЕ И ИХ ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

В опытах проведенных в производственных условиях, мы выяснили эффективность лечения резанных и случайных ран у свиней в зависимости от применяемого лечения.

Первую серию опыта проводили на поросятах породы ландрас на свинотоварной ферме учебно-опытного хозяйства Приморской государственной сельскохозяйственной академии, имевших аналогичные резаные раны хвостов. Купирование хвостов на 1/2 длины применяют в хозяйстве для профилактики каннибализма. Раны обрабатывали ежедневно, однократно, во время кормления. Тестом, указывающим на выздоровление животных, служило заживление культи с выраженной эпителизацией.

Результаты исследований показали, что раны, для лечения которых применяли гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе ускорило заживление культей хвоста на 48,5%. В группе, где перорально задавали гистолизат из пантов пятнистого оленя, раны зажили быстрее, чем в контроле без лечения на 40,1%. Линимент синтомицина ускорил заживление ран только на 11,4%.

Вторую серию производственных опытов проводили на свиньях породы ландрас имеющих кусаные раны в различных участках тела, полученные чаще всего во время взвешивания. Раны обрабатывались ежедневно, препараты

наносились тонким слоем, однократно, во время кормления. Отмечалась клиническая картина и сроки заживления ран в сравнении с лечением линиментом синтомицина.

Результаты показали, что лечение гистолизатами из пантов северного оленя на гелевой основе, позволило ускорить заживление ран на 4,9 суток быстрее, чем при лечении линиментом синтомицина.

При лечении ран у животных с применением гистолизата из пантов северного оленя на гелевой основе беспокойство у поросят снижалось, и явления воспалительного отека не наблюдалось уже на вторые сутки. Раны их не беспокоили, аппетит восстанавливался. На поверхности ран образовывались пленки высохшего геля светло-коричневого цвета. Начиная со вторых суток, края ран постепенно стягивались к центру. Раневая поверхность покрывалась светло-розовой грануляционной тканью.

При анализе показателей продуктивности установлено, что свиньи, для лечения ран которых использовали гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе, имеют среднесуточный прирост живой массы 192 грамм, в то время как свиньи, для лечения ран которых использовали линимент синтомицина, имеют среднесуточный прирост живой массы 183 грамм.

В результате применения гистолизата из пантов северного оленя на гелевой основе, экономическая эффективность в расчете на рубль затрат составила 42,8 рублей, а при лечении ран линиментом синтомицина экономическая эффективность составила 83,1 рубль на рубль затрат. Общий экономический эффект по группе, полученный в результате применения гистолизата из пантов северного оленя на гелевой основе составлял 3855 рублей, а при использовании линимента синтомицина экономический эффект составил 3741 рубль. Таким образом, не смотря на то, что гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе дороже по сравнению с линиментом

синтомицина в 2 раза, полученные данные свидетельствуют, что он является более экономически выгодным лечебным средством для лечения ран у свиней.

4. ВЫВОДЫ

1. Гистолизаты из пантов северного и пятнистого оленей оказывают стимулирующее действие при заживлении экспериментальных и случайных рай у мышей, кроликов и свиней при наружном, пероральном, парентеральном применении.

2. Лучшие результаты при лечении экспериментальных и случайных ран получены при наружном применении гистолизатов из пантов северного оленя в форме геля на метилцеллюлозной основе. Раны у мышей заживали на 43,4%, у кроликов на 40%, а у свиней на 31,8% быстрее.

3. Под действием гистолизатов из пантов морфофункциональное восстановление раневого дефекта и более активное формирование рубцующейся ткани осуществляется за счёт более интенсивного роста и увеличения количества венул, артериол, возрастания в два раза по сравнению с бездефектной тканью количества фибробластов, и накопления жировых клеток.

4. Применение гистолизата из пантов северного оленя на гелевой основе способствовало смягчению струпа, ускорению прохождения воспалительной реакции, более быстрому )меньшению площади ран, заполнению раневого дефекта и отторжению струпа.

5. При обработке гистолизатом из пантов северного оленя на гелевой основе культи хвостов при каудотомии и случайных поверхностных ран у свиней в производственных условиях, установлено ускорение их заживления на 8,1 и 4,9 суток в сравнении с лечением, при котором применяли линимент синтомицина. Экономическая эффективность данной обработки на рубль затрат составила 42,8 рублей.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

На основании результатов проведения клинических испытаний и проверки биологической активности препаратов есть все основания для скорейшего внедрения в ветеринарную клиническую практику и в животноводство гистолизатов из пантов для лечения ран рагличной этиологии.

Результаты исследований по сокращению сроков заживления ран у животных с применением гистолизатов из пантов северного и пятнистого оленей учтены при разработке нормативных материалов отделом ветеринарии Департамента сельского хозяйства Администрации Приморского края и планируются к внедрению в ветеринарную практику районных филиалов КГУ «Приморская государственная ветеринарная служба».

Мы рекомендуем использовать гистолизат из пантов северного оленя на гелевой основе наружно при травматических повреждениях кожи различной этиологии и локализации у разных видов животных.

Разработанная технология изготовления гистолизатов из пантов на гелевой основе может быть рекомендована для дальнейшего внедрения в фармацевтическую промышленность.

Полученные данные можно использовать в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий по ветеринарной хирургии, фармакологии и патофизиологии на факультетах ветеринарной медицины, слушателям ФПК и других форм обучения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кулешов Р.С. Панты оленя - стимулятор заживления экспериментальных ран у животных / Р.С. Кулешов, СМ. Кулешов // Проблемы сельскохозяйственного производства Приморского края: Материалы конференции аспирантов и молодых учёных. - Выпуск 2. - Уссурийск: ПГСХА, 2003.- С. 110-113.

2. Кулешов Р. С. Применение гистолизатов из пантов оленей для стимуляции заживления ран / Р.С. Кулешов, СМ. Кулешов, В.Г. Ярцев // Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных: Материалы международной научной конференции. - Часть 2. - Улан-Удэ: Изд-во БГСХА, 2003. - С. 40 - 42.

3. Кулешов Р.С. Применение пантов оленя в животноводстве и ветеринарии / Р.С. Кулешов, СМ. Кулешов // Аграрная политика и технология производства сельскохозяйственной продукции в странах • Азиатско-тихоокеанского региона: Материалы международной научно-практической конференции. - Том 3. Лесное хозяйство, ветеринария, животноводство, механизация, филология.-Уссурийск: ПГСХА, 2002.-С. 190-191.

4. Кулешов Р.С Регенерация экспериментальных ран у мышей, кроликов и свиней / Р.С Кулешов, В.Г. Ярцев, СМ. Кулешов // Зоотехнические, ветеринарные и биологические аспекты животноводства Дальнего Востока: Сб. научн. тр. ДальГАУ. - Благовещенск, 2003. - С. 69 - 73.

5. Кулешов Р.С. Стимуляция заживления экспериментальных ран у животных гистолизатом из пантов оленя на гелевой основе / Р.С. Кулешов, В.Г. Ярцев, СМ. Кулешов // Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве: Материалы юбилейной международной научно-практической конференции: Сборник статей. - Часть 3. - Барнаул: Изд-воАГАУ,2003.-С.68-72.

6. Ярцев В.Г. Применение тканевых препаратов из пантов оленей для стимуляции заживления ран / В.Г. Ярцев, СМ. Кулешов, Р.С. Кулешов // Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве: Материалы юбилейной международной научно-практической конференции: Сборник статей. - Часть 3. - Барнаул: Изд-во АГАУ, 2003. - С 203-207.

Кулешов Роман Сергеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ГИСТОЛИЗАТОВ ИЗ ПАНТОВ СЕВЕРНОГО И ПЯТНИСТОГО ОЛЕНЕЙ

Специальность 16 00.02 - патология, онкология и морфология жипошых

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Лицензия 020572 от 16 сентября 1997 г. Подписано к печати 23.09.04г. формат 60x90 1/16 Бшага кссроксная. Печать ШСКЖАРН 3910 ЕЯ. Уч. - изд. Л. 1,0. тираж 100 экз. Заказ Ш

Участок оперативной полиграфии Приморской гос>дарственной сельскохозяйственной академии. 692500, г. Уссурийск, ул. Раздольная. 8.

»18965

í

РНБ Русский фонд

2005-4 15794