Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Микробиологический мониторинг почв скотомогильников Республики Бурятия

На правах рукописи

БАДМАЖАПОВА РАИСА НИКОЛАЕВНА

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ почв СКОТОМОГИЛЬНИКОВ РЕСПУБЛИКИ БУРЯТИЯ

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с мнкотоксикологнен и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2008

□□3168426

003168426

Работа выполнена в ФГОУ ВПО Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им В.Р. Филиппова на кафедре микробиологии, вирусологии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

Научный руководитель

заслуженный работник высшей школы РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Цыдыпов Виктор Цыбанович

Официальные оппоненты.

доктор ветеринарных наук, профессор Луницын Василий Герасимович кандидат ветеринарных наук Бокова Татьяна Владимировна

Ведущая организация-

ФГОУ ВПО Иркутская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится » 2008 года в-^часов на заседании дис-

сертационного совета Д 220 002 02 при Алтайском государственном аграрном университете по адресу 656922, г Барнаул, ул Попова,276 тел /факс 8-3852-31-06-36

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ АГАУ

Автореферат разослан «/£_у>2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Барышников П И.

1.0БЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. На сегодняшний день весьма актуальным является изучение мест резервации и путей циркуляции возбудителей инфекции. Исследование природных очагов болезней, выявление их активации, видового состава источников возбудителя и путей его передачи имеют большое значение в общих и специфических мероприятиях, основанных на научном прогнозе эпизоотической ситуации В ранее проведенных исследованиях по изучению микробного фона скотомогильников с сибиреязвенными захоронениями однозначно подчеркивалось, чго скотомогильники являются опасными источниками распространения инфекционных заболеваний, если не проводить профилактические мероприятия (Ипатенко Н Г, 1999)

Следует отметить, что в Бурятии учет почвенных очагов, источников инфекций ведется неудовлетворительно и проведенный анализ литературы показывает на отсутствие данных по микробному ценозу скотомогильников в исследуемом регионе Поэтому в настоящее время создалась наиболее острая необходимость в экологической и ветеринарно-санитарной паспортизации всех захоронений животных с целью их более четкого обозначения и ограничения доступа к ним животных и людей Особую озабоченность вызывают скотомогильники на водосборных территориях, которые в течение длительного времени создают угрозу попадания возбудителей инфекционных болезней в бассейны водоемов и озер, особенно на водосборной территории оз Байкал Поэтому актуальным и своевременным являются работы по выявлению, учету и регистрации мест захоронения животных и изучению микробного статуса почв на их территории, а также путей циркуляции возбудителей инфекции, а именно скотомогильников с сибиреязвенными захоронениями, которые, несмотря на свою давность представляют определенную угрозу, как потенциальный источник заражения животных людей при определенных условиях

1.2. Цель исследований. Оценить эколого-микробиологическое состояние, провести эпизоотологическую паспортизацию и инвентаризацию скотомогильников в районах Бурятии

1.3. Задачи исследования

1 Изучить экологические условия функционирования скотомогильников в различных районах Бурятии,

2 Установить микробный пейзаж почв территорий скотомогильников,

3 Определить биохимические и экологические свойства выделенных микробных культур,

4 Провести инвентаризацию и паспортизацию действующих и не дейс гвующих скотомогильников,

5 Изучить эффективность дезинфектанта «Вироцид» в санации почв скотомогильников.

1.4. Научная новизна Изучена эколого-географическая специфика функционирования микробиологического ценоза скотомогильников в криоаридных условиях Республики Бурятия Впервые выявлены особенности ассоциаций патогенных и непатогенных почвенных микроорганизмов скотомогильников в изучаемом регионе

1.5. Практическое значение работы. Проведены работы по выявлению и паспортизации; учету и регистрации скотомогильников, их экологическое и ветеринарно-санитарное состояние Рекомендовано применение дезинфектанта «Вироцид» при проведении работ по дезинфекции на территории скотомогильников

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных» (посвященной 90-летию В Р Филиппова Улан-Удэ,2003), на международной научной конференции, посвященной 100-летию В Я Суетина (Улан-Удэ, 2004),на Российской научно-практической конференции «Проблемы устойчивости биоресурсов теория и практика», посвященной 50-летию освоению целинных земель (Оренбург, 2004 г), на международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ 19-20 мая 2005г Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных (Троицк, 2005 г) Перспективные направления научных исследований молодых ученых материалы IX научно-практической конференции посвященной 75-летию УГАВМ ( Троицк 2005 г) , МГУПБ г Москва Материалы V международной научно-практической конференции «Живые системы и биологическая безопасность продуктов» (Москва, 2006 г), Сельскохозяйственные животные Российский ветеринарный журнал №3 (Москва, 2007г)

1.7. Публикация результатов исследований по материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в которых отражены основные результаты исследований,! работа в рецензируемом журнале

1.8. Структура и объем работы Диссертация изложена на 156 страницах- введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. Работа иллюстрирована 22 таблицами^ рисунками,4 фотографиями. Список литературы содержит 101 источников из них зарубежных авторов 16

1.9. Основные положения ,выносимые на защит}1.

1 Установлены эколого-географические условия распространения инфекционных заболеваний животных в Бурятии

2 Дана санитарно-бактериологическая характеристика почв скотомогильников, определены биологические, персистентные и экологические свойства выделенных микробных изолятов патогенных потенциально-патогенных микроорганизмов

3 Установлена эффективность дезинфектанта «Вироцид» в обеззараживании почв скотомогильников

4 Проведена инвентаризация и паспортизация скотомогильников в исследуемых районах Республики Бурятия

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Материалы и методы

Исследования проводили с 2002 по 2006 год на кафедре микробиологии вирусологии и ВСЭ БГСХА им В Р Филиппова

С целью отбора материала приняли участие в четырех научных экспедициях Во время экспедиционных работ отработали методику взятия почвенных образцов Для бактериологического исследования были взяты 250 проб из различных участков и разных районов Республики Бурятии (Хоринский, Еравнинский, Джидинский, Кяхтинский районы)

Еравнинский район поселок Сосновоозерск 45 проб, Хоринский район поселок Хоринск 50 проб, Кяхтинский район г Кяхта 30 проб, село Усть-Кяхта 15 проб, Джидинский район село Петропавловка 40 проб, село Нижний Ичетуй 40 проб, село Цагатуй 30 проб На питательные среды, приготовленные заранее, производили посевы почв методом разведения 1 1000 000

Изучение культуральных, морфологических, тинкториальных, биохимических, гемолитических, и патогенных свойств выделенных микроорганизмов проводили методами общей микробиологии (Биргер М О., 1986, Герхард Ф , 1983; Антонов Б И , 1986) ГОСТ - 10444 8-88, ГОСТ

Р.500474 -93, ГОСТ -7702.2.5.-93

Морфологические свойства выделенных бактерий изучали методом световой микроскопии

Для изучения тинкториальных свойств микроорганизмов мазки окрашивали по Граму, Романовского-Гимза, Козловскому, Пешкова, Трухи-льо, 2% раствором фуксина и с использованием 3% -ого раствора КОН по методу С И Кондратьева (1983)

Культуральные свойства изучали на следующих средах МПА, МППБ, МПЖ, глюкозно-глицериновый и кровяной МПА, среды Гисса, Эндо, Левина, Плоскирева, Клиглера, Олькеницкого, Висмут-сульфит агаре и молоке

Протеолитические свойства микроорганизмов определяли путем установления способности разжижать желатин на МПЖ и свертывать молоко

При определении каталазной активности микроорганизмов на предметное стекло наносили каплю 3%-ного раствора перекиси водорода и в нее вносили петлю испытуемой суточной агаровой культуры Образование пузырьков газа свидетельствовало о наличии у микроорганизмов фермента каталазы

При изучении биохимических свойств микроорганизмов на дифференциально - диагностических средах использовали в качестве дополнительного теста идентификации экспертную систему «Биохимия микроорганизмов 2 О» ГНУ СибФГИ ГНУ ИЭВСиДВ.

Цифровой материал работы обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики. Номер государственной регистрации темы 01200-407177

З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Как и все регионы в России Бурятия также характеризуется вспышками инфекционных заболеваний в отдельные годы, которые требуют квалифицированной диагностики, терапии и профилактики, особенно, касается проявления управляемых инфекций На сегодня в профилактике инфекционных заболеваний в Бурятии требуют особого внимания, следующие нозооформы у крупного рогатого скота сибирская язва, эм-кар, бруцеллез, лептоспироз, пастереллез, туберкулез как наиболее опасные и часто проявляемые болезни

Таблица 1

Сводные данные по инвентаризации скотомогильников в районах Республики Бурятия на 01.01.2007г.

№ п\п Районы Республики Бурятии Всего захоронений с/х животных В том числе захоро- не-ний в установленном порядке Всего сибиреязвенных захоронений Населен пункт / Небла-гопол пунктов В том числе с установленными местонахождениями

1 Баргузинский 5 5 14/23 Нет данных

2 Баунтовский 2 2 2/3 Нет данных

3 Бичурскии 21 21 10/12 5

4 Дж ИДИ НС кий 27 Нет данных 18/40 Нет данных

5 Еравнинский - - 10/11 Сжигают

б Заиграевский 1 1 30/50 Нет данных

7 Закаменскии 4 4 - Нет данных

8 Иволгинский 1 1 7/12 Нет данных

9 Кабанский 3 3 28/56 4

10 Кижингинский 9 9 - -

11 Курумканский 3 3 20/30 -

12 Кяхтинский 25 25 21/35 Нет данных

13 Мухоршибирский 13 13 6/14 Нет данных

14 Окинский 2 - - -

15 Прибайкальский 2 2 - -

16 СевероБайкальский 5 5 1/1 Нет данных

17 Селенгинскии 13 13 20/22 Нет данных

18 Тарбагатайский 1 1 7 Нет данных

19 Тункинский 20 20 25/28 Нет данных

20 Хоринский 16 16 6/12 Нет данных

21 Муйский 1 1 - -

22 г Улан-Удэ 1 I 6/16 Нет данных

ИТОГО 175 144 231/372 9

Микробиологический мониторинг проводили по схеме, отработанной нами по выделению чистых культур микроорганизмов с последующей иденгификацией патогенных микробов, обнаруженных в почве

Микробиологический мониторинг

Проб почв из скотомогильников

Изоляция бактерии, идентификация ;

Разработка рекомендации

Морфологические свойства Культураль-ные свойства Биохимические свойства Персистент-ные свойства Гемолитические свойства

Размер бакте- Рост на Образование ДНК-азная Посевы на

рий, питательных индола, активность среды с

Форма микро- Средах: Цитрата АИА-ная эритроци-

организмов; МПА натрия, активность тами

Подвижность; МПБ, МПЖ, Сероводорода; АЛА-антилизо- барана

Отношение к Среда Эндо, Ферментативная цимная

анилиновым Наличие в- и Активность, активность

красителям И- колоний, Реакция Фогес-

(окраска по пигментооб- Проскауэра;

Грачу, Тру- разованис Утилизация

хильо) мочевины. Молоко Желатина

3.1. Культурально-морфологическая характеристика выделенных культур из почв

Таблица 2

Сводные данные морфологических свойств выделенных культур

Морфология культур Количество Процент

1 2 3

Гр +, кокковидные 25 12,9

Гр -, палочковидные 20 11,9

Гр +, спорообразающие 71 42,5

Гр +, неспорообразующие 51 32,7

Итого 167 100

Подвижность 109 60,5

Таблица 3

Сводные данные культуральных свойств выделенных культур

Культуральные свойства Количество Процент

1 2 3

Б - формы 116 63,8

Я-формы 65 36,2

Таким образом, спектр морфологических характеристик выделенных из почв скотомогильников микробных культур (бактерий) представлял следующим образом, преобладали палочковидные формы грамположи-тельные неспорообразующие 32,7% и спорообразующио (бациллы) 42,5% и грамотрицательные 11,9% При этом шаровидных форм бактерий было выявлено всего 12,9%

3.2.Бнохимическая характеристика выделенных культур.

Изучение диапазона биохимической активности представителей микробного пейзажа почв скотомогильников, имеет немаловажное значение в определении их адаптивности во внешней среде и в це лях идентификации.

По результатам постановки биохимических тестов провели анализ ферментативных свойств выделенных культур из почв

Сводные данные биохимических свойств выделенных культур

Таблица 4

Тесты Количество положительных культ)р Процент положительных культур Количество отрицательных культур Процент отрицательных культур

Глюкоза 80 44,1 101 55,8

Лизин 118 65,1 63 34,8

Уреаза 22 12,1 159 87,8

Лактоза 28 15,4 153 84,5

Сероводород 18 9,94 163 90,0

Цитрат натрия 131 72,3 50 27,6

Сорбит 38 20,9 143 79,0

Инозит 14 7,7 167 92,2

Фогес-Проскау >ра 21 11,6 160 88,3

В-галактозидаза 43 23,7 138 76,2

Фенилаланин 24 13,2 157 86,7

Магюнат натрия 131 72,3 50 27,6

Сахароза 100 55,2 81 44,7

Индол 30 16,5 151 83,4

Катал аза 99 54,6 82 45,3

Желатин 57 31,4 124 68,5

Молоко 85 46,9 96 53,0

Гемочиз 92 50,8 89 49,1

Всего исследовано 181

Таким образом, микробные обитатели почв скотомогильников обладают широким спектром ферментных механизмов обеспечивающих, жизнедеятельность при низких температурах и в то же время обладают, ферментами, реализующими факторы вирулентности патогенных микробов

З.З.Чувствителышсть выделенных культур к некоторым антибиотикам

Определение чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам приобретает важное теоретическое и практическое значение, в вопросах изучения устойчивости возбудителей к действию факторов внешней среды, выборе препаратов химиотерапии и в создании питательных селективных сред на основе одного или ряда антибиоти-

ков, которые бы подавляли рост одних, а на другие бы не действовали.

Все исследованные культуры, выделенные из почв скотомогильников, проявляли различную степень чувствительности и устойчивости к антибиотикам

Сводные данные чувствительности выделенных культур к антибиотикам

Таблица 5

Виды антибиотиков Количество Процент

1 2 3

Бегаилпенициллин 73 культуры 40,5%

Тетрациклин 145 культуры 80,5 %

Левомицстин 156 культуры 86,6 %

Неомицин 24 культуры 13,3 %

Эритромицин 123 культуры 68,3 %

Отеандомицин 68 культуры 37,7 %

Полнмиксин 110 культуры 61,1 %

Таким образом, различная зона задержки роста микроорганизмов свидетельствует о различной чувствительности и устойчивости к определенным видам антибиотиков Определение чувствительности условно-патогенных микробов к антибиотикам обуславливает выбор эффективных препаратов из числа рекомендуемых при инфекциях, вызываемых вышеуказанными бактериями

3.3.1. Перснстентпая характеристика выделенных микробных культур.

По результатам проведенных опытов видно, что не все исследованные культуры обладали персистентными свойствами (факторами потенциальной патогенности)

По данным таблицы можно сделать вывод, что наиболее выраженными адаптационными свойствами к защитно-регуляторным системам иммунитета макроорганизма обладали грамположительные палочковидные бактерии, и они оказались в основном потенциально-патогенными микроорганизмами

СВОДНЫЕ ДАННЫЕ ПЕРСИСТЕНТНЫХ И ПАТОГЕННЫХ ФАКТОРОВ ИССЛЕДОВАННЫХ КУЛЬТУР

Таблица 6

АЛА АИА ДНК-азная активность Гемолитическая активность

к/к % к/к % к/к % к/к %

1 Грамотрицательные палочковидные Обладающие Не обладающие Сомнительные 10 43 4 8 34 7 5 21,7 12 52,1

Количество исследованных культур 20

2 Грамположительные палочковидные 1

Обладающие 28 19 5 31 21,6 29 20,2 40 27,9

Не обладающие Сомнительные - - - - - - 12 8 39

Количество исследованных культур 136

3 Грамположительные кокковидные

Обладающие 3 15 5 25 3 15 5 25

Не обладающие - - - - - - - -

Сомнительные - - - - - - - -

Количество исследованных культур

Всего исследовано кучьтур 25

3.3.2.Экологическая характеристика выделенных культур.

Изучение экологических характеристик микробов имеет, несомненно, большой интерес в определении условий культивирования в искусственных питательных средах, взаимоотношений микроорганизмов в популяции и со средой обитания.

Поэтому нами представлена в графическом виде средние оптические показатели динамики роста 20 микробных изолятов, взятых для дальнейшего изучения при различных показателях рН среды, температуры инкубирования, и концентрации хлорида натрия.

Рост почвенных микроорганизмов при И9-20 рН 4,2-4,4

6 12 18 24 интервал времени

таг^а ЫаС1 0,05% №С1 0,85% ] №С1 8,5%

Полиномиальный (№С1 0,05%) Полиномиальный (№С1 0,85%) Полиномиальный (№С1 8,5%)

Рис.

Рост почвенных микроорганизмов при I -ре 1920 С рН 7,2-7,4

2 3 4 Интервал времени

N3 С1 0,05 % № С1 0,85 %

□ N3 С! 8,5 %

-Полиномиальный

(№ С1 0,05 %) -Полиномиальный (№ С1 0,85 %) - Полиномиальный (№ С1 8,5 %)

Рис.2

Рост почвенных микроорганизмов при 136-37 С, pH 8,2-8,4

uNaCi 0,05%

В NaCi 0,85% nNaCi 8,5%

Полиномиальный

(NaCi 0,05%) Полиномиальный (NaCi 0,85%)

Полиномиальный (NaCi 8,5%)

12 3 4 интервал времени

Рис.3

Исходя из результатов экологических исследований по динамике роста и размножения клеток, можно, отметить, что оптимальным условием для микробных культур является pH 7,2-7,4, с концентрацией NaCi 0,85% и при инкубации 37-38°С, наблюдается осмофильность выделенных микробных культур.

Незначительное смещение pH среды в кислую и щелочную сторону губительного действия на размножение бактерий не оказывало.

Рост бактерий прекращался при понижении температуры до 19-20° и при увеличении содержания хлорида натрия в бульоне до 8,5%.

Культирование в МПБ с различными показателями pH среды показало, что данные бактерии хорошо росли при всех трех градиентах pH бульона, но более интенсивное развитие наблюдали при pH бульона 7,2-7,4.

Концентрации соли 0,85% и 0,05% в среде оказались более благоприятными для роста и размножения данных микроорганизмов, а при повышении содержания NaCi до 8,5% отмечали незначительный рост микробных клеток. Повышение содержания натрия хлорида в МПБ подавляет рост культуры, а снижение содержания концентрации натрия хлорида от 0,05% до 0,85% благоприятствует росту почвенных микроорганизмов.

В ходе эксперимента установлено, что большая часть почвенных микроорганизмов наилучшим образом развивается при концентрации ионов водорода, близких pH 7,2-7,4, что характерно для природных сред (Каш-нер Д., 1981). Также отмечали рост почвенных термофильных культур при температуре 41-42°С, эта способность развития также встречается у типичных мезофильных бактерий различных видов Bacillus (Кашнер

Д, 1981, Кирьянов Е А , 1990, Сомов ГП, 1997) Но в данном опыте можно предполагать, что рост исследуемых культур при температуре 41 -42°С характерен и в условиях пребывания микроорганизмов в почве Высокая концентрация натрия хлорида почвенных микробов задерживает развитие, отмечается толерантность, что подтверждается данными литературы (Акатов А К, Зуева В С , 1983) Более благоприятно действовало на рост почвенных микроорганизмов низкое содержание хлорида натрия

3.4.Эффективность дезинфектанта « Вироцид » в санации почв скотомогильников.

Поиск средств эффективных доступных и безвредных для организма животных привело нас к испытанию дезинфицирующего препарата «Вироцид» в лабораторных условиях, так как широко применяемые в практике дезинфектанты не безопасны для организма животных и человека, при их доступе на территорию скотомогильников Разработанный и рекомендованный препарат «Вироцид» обладал свойствами приемлемыми его использования при дезинфекции территорий скотомогильников Дезинфицирующее средство «Вироцид» был испытан в следующих концентрациях 0,25 % раствор, рекомендованный для гладких поверхностей, 0,5 % раствор - для гладких и шероховатых поверхностей, 1 % раствор - предложенный нами

Таким образом, 0,25% раствор «Вироцида» рекомендованный для гладких поверхностей оказался неэффективным для шероховатых поверхностей даже при удлинении экспозиции до 1 часа Из испытанных растворов, 1% раствор Вироцида в течение 1 часа оказал достаточно эффективное действие на вегетативные формы микроорганизмов, при испытании ею в условиях производства, что соответствует требованиям п 6 методики бактериологического контроля качества дезинфекции животноводческих помещений (Вет законодательство т 2 стр.437) Испытанный данный препарат может быть использован в дезинфекции в 2% концентрации, территорий вокруг скотомогильников как, безопасный для животных и человека И требует дальнейшего его изучения в целях применения в практике дезинфекций скотомогильников.

Производственное испытание дезинфектанта «Вироцид» проводили в очаге сибиреязвенной инфекции ( август-сентябрь 2007 года ) в селе Кырен Тункинского района Республики Бурятии с положительным эффектом (место прирезки вынужденного убоя заболевшей сибирской язвы телки и при обработке транспорта гарантийной зоне

ВЫВОДЫ:

1 Инвентаризацией захоронений сельскохозяйственных животных и скотомогильников в Бурятии на 01 01 07г установлено 175 захоронений сельскохозяйственных животных и лишь 144 из них соответствует ве-теринарно-санитарным требованиям, проведено картографирование дислокаций ранее неблагополучных пунктов по сибирской язве

2. В настоящее время 15 обследованных районов Бурятии не имеют скотомогильников, отвечающим ветеринарно-санитарным требованиям

3 Проведенные исследования по морфологической и культуральной характеристике микробного пейзажа почв скотомогильников выявил, что(12,9%) имели кокковидную форму,(32,7 %) имели палочковидные грамотрицательные формы, (42,5 %) спорообразующие палочковидной формы,(40 %) обладали подвижностью. S-формы составили (63,8 % ), R- формы (36,2 %) Всего было выделена 181 микробная культура

4 Спектр ферментативной активности по результатам постановки биохимических тестов определили у выделенных микробных культур на образование индола 16,5 %, уреазы 12,1 %, малоната натрия 72,3 %,глюкозы 44,1 %, лизина 65,1 %, лактозы 15,4 %, сероводорода 9,94 %, сорбита 20,9 %, инозита 7,7 %, Фогес- Проскауэра 11,6 %, фенилалани-на 13,2 %, каталазы 54,6 %, свертывания молока 46,9 %, разжижения желатины 31,4 %, гемолиза 50,8 %

5.Изучение биологического свойства антибиотико-резистентности и чувствительности проявляли различную степень чувствительности и устойчивости к антибиотикам Бензилпенициллин 40,5 %, тетрациклин 80,5 %, левомицетин 86,6 %, неомицин 13,3 %, эритромицин 68,3 %, олеандомицин 37,7 %,полимиксин 61,1 %

6 Микробные изоляты обладали свойствами потенциальной патоген-ности проявляя (AJIA) антилизоцимную активность 19,5 %, (АИА) ан-тиинтерфероновую активность 21,6 %, ДНК-азную активность 20,2 %, гемолитическая активность 27,9 %

7.Выявлено эффективность дезинфектанта «Вироцид» в обеззараживании почв скотомогильников и в сибиреязвенном очаге с Кырен Тун-кинского района республики Бурятия

8 Оптимальными экологическими параметрами для роста микроорганизмов являлись рН 7,2-7,4, Na CL 0,85 ,температуры 36-37С

9 Бактериальный фон почв скотомогильников в спектре выявляемо^-ти патогенных и условно-патогенных микроорганизмов был разнообразен Вас anthracis, Listeria monocytogenes, Е Coli, Salmonella, S aureus,

Proteus, Acromices, Oerskavia, В megaterium, В mesentericus, В Subtilhs, В azotoforinus, В macerans, B.brevis, В badices, В Mannus, S albus, S Intemedius, и других видов бактерий, имеющих факторы вирулентности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В целях защиты окружающей среды региона озера Байкал мы рекомендуем

1 Исходя из элементарных принципов ветеринарной санитарии и анализа проведенных исследований, считаем своевременно обязательным, чтобы в каждом населенном пункте имелось оборудованное место для утилизации трупов животных

2 Наличие и состояние скотомогильников считать одним из основных критериев оценки работы сельских и районных администраций республики, при аттестации руководителей и специалистов данных подразделений

3 Ветеринарным службам районов совместно с муниципальными образованиями завести карточки на каждый скотомогильник, расположенный на подведомственной им территории

4 Уничтожение трупов целесообразно проводить, там, где позволяют почвенно-гидрологические условия необходимо строить биотермические ямы с железобетонной облицовкой стен

5 Трупы животных павших от особоопасных, для человека и животных болезней, таких как сибирская язва, бешенство, ящур, чума в обязательном порядке сжигать

Список опубликованных работ по теме диссертации

1 Очирова Л А Микробный пейзаж мяса и мясопродуктов в ТЦ «Сагаан-Морин» // Бадмажапова Р Н, Цыдыпов ВЦ/ Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных, посвященная 90-летию В Р Филиппова -материалы международной конференции - Улан-Удэ,2003 -С 127-128

2 Бадмажапова Р Н Биологическая характеристика Bacillus Pseudoanthracis, выделенного из скотомогильника // Цыдыпов В Ц, Галсанова Г Д /Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возврастной и экспериментальной морфологии - Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию В Я Суетина -Улан-Удэ,2004 - С 230

3 Бадмажапова Р Н Экологический мониторинг скотомогильников в Бурятии // Проблемы устойчивости биоресурсов теория и практика -Материалы Российской научно-практической конференции - Оренбург,2004 - С 137

4 Бадмажапова Р Н Экологическая паспортизация скотомогильников в Рес-

публике Бурятия //Цыдыпов В Ц, Галсанова Г Д./ Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных - Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию УГАВМ - Троицк,2005 С 195-198

5 Бадмажапова Р Н Экологическая характеристика скотомогильников в Кях-тинском районе / /Цыдыпов В Ц, Бохоев В А / Перспективные направления научных исследований молодых ученых - Материалы IX научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ - Троицк,2005 С 51-52.

6 Бадмажапова РН Микробиологический мониторинг скотомогильников в Бурятской Республике // Живые системы и биологическая безопасность населения - Материалы V международной научной конференции студентов и молодых ученых - Москва,2006 С 236-237

7 Бадмажапова Р Н Ветеринарно-экологическая паспортизация мест захоронения животных // Цыдыпов В Ц, Третьяков А М / Сельскохозяйственные животные - Российский Ветеринарный Журнал - №3 -Москва,2007 С 46-47

Подписано в печать 14 01 2008 Бум тип №1 формат 60x841/16 Уел печ л 1,3 Тираж 100 Заказ № 520

Отпечатано в типографии ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им В Р Филиппова» 670024, г Улан-Удэ, ул Пушкина, 8

Актуальность темы. На сегодняшний день весьма актуальным является изучение мест резервации и путей циркуляции возбудителей инфекции. Исследование природных очагов болезней, выявление их активации, видового состава источников возбудителя и путей его передачи имеют большое значение в общих и специфических мероприятиях, основанных на научном прогнозе эпизоотической ситуации. В ранее проведенных исследованиях по изучению микробного фона скотомогильников с сибиреязвенными захоронениями однозначно подчеркивалось, что скотомогильники являются опасными источниками распространения инфекционных заболеваний, если не проводить профилактические мероприятия. (Ипатенко Н.Г.,1999)

Следует отметить, что в Бурятии учет почвенных очагов, источников инфекций ведется неудовлетворительно и проведенный анализ литературы показывает на отсутствие данных по микробному ценозу скотомогильников в исследуемом регионе. Поэтому в настоящее время создалась наиболее острая необходимость экологической и ветеринарно-сапитарной паспортизации всех захоронений животных с целью их более четкого обозначения и ограничения доступа к ним животных и людей. Особую озабоченность вызывают скотомогильники на водосборных территориях, которые в течение длительного времени создают угрозу попадания возбудителей инфекционных болезней в бассейны водоемов и озер, особенно на водосборной территории озера Байкал. Поэтому актуальным и своевременным являются работы по выявлению, учету и регистрации мест захоронения животных и изучению микробного статуса почв на их территории, а также путей циркуляции возбудителей инфекции, а именно скотомогильников с сибиреязвенными захоронениями которые, несмотря на свою давность, представляют определенную угрозу, как потенциальный источник заражения животных, людей при определенных условиях.

Цель исследований. Оценить эколого-микробиологическое состояние, провести эпизоотологическую паспортизацию и инвентаризацию скотомогильников в районах Бурятии.

Задачи исследований:

1. Изучить экологические условия функционирования скотомогильников в различных районах Бурятии;

2. Установить микробный пейзаж почв территорий скотомогильников;

3. Определить биохимические и экологические свойства выделенных микробных культур;

4. Провести инвентаризацию и паспортизацию действующих и не действующих скотомогильников; \

5. Изучить эффективность дезинфектанта «Вироцид» в санации почв скотомогильников.

Научная новизна. Изучена эколого-географическая специфика

I' функционирования микробиологического ценоза скотомогильников в криоаридных условиях Республики Бурятия. Впервые выявлены особенности ассоциаций паюгенных и непатогенных почвенных микроорганизмов скотомогильников в изучаемом регионе.

Теоретическая значимость работы. Результаты диссертационной работы имеют теоретическую значимость, требующую в дальнейшем более углубленного изучения микробного ценоза почв скотомогильников, как биологического объекта, в котором микроорганизмы проходят все циклы своего развития, в одном случае теряя, в другом приобретая патогенные свойства и являясь местом резервации.

Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах микробиологии, вирусологии и ВСЭ.

Практическая значимость работы. Проведены работы по выявлению и паспортизации: учету и регистрации скотомогильников, их экологическое и ветеринарно-санитарное состояние. Рекомендовано применение дезинфектанта «Вироцид» при проведении работ по дезинфекции на территории скотомогильников.

Основные положения, выносимые на защиту: 1 .Установлены эколого-географические условия распространения инфекционных заболеваний животных в Бурятии.

2. Дана санитарно-бактериологическая характеристика почв скотомогильников, определены биологические, персистентные и экологические свойства выделенных микробных изолятов патогенных потенциально-патогенных микроорганизмов.

3. Установлена эффективность дезинфектанта «Вироцид» в обеззараживании почв скотомогильников.

4 Проведена инвентаризация и паспортизация скотомогильников в исследуемых районах Республики Бурятия.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных» посвященной 90-летию В.Р.Филиппова. (Улан-Удэ,2003); на международной научной конференции, посвященной 100-летию В.Я. Суетина (Улан-Удэ, 2004); на Российской научно-практической конференции «Проблемы устойчивости биоресурсов: теория и практика», посвященной 50-летию освоению целинных земель (Оренбург, 2004 г.); на международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ 19-20 мая 2005г. // Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных. (Троицк, 2005г.). Перспективные направления научных исследований молодых ученых // материалы IX научно-практической конференции посвященной 75-летию УГАВМ // (Троицк, 2005 г.). МГУПБ г. Москва Материалы V международной научно-практической конференции «Живые системы и биологическая безопасность продуктов» М, 2006 г. Сельскохозяйственные животные Российский ветеринарный журнал №3 м., 2007 г.

Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в 7 печатных работах, 1 работа в рецензируемом журнале.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 155 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы включает 101 источников, в т.ч. 16 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 9 рисунками, 4 фотографиями.

135 ВЫВОДЫ:

1.Инвентаризацией захоронений сельскохозяйственных животных и скотомогильников в Бурятии на 01.01.07г установлено 175 захоронений сельскохозяйственных животных и лишь 144 из них соответствует ветеринарно-санитарным требованиям, проведено картографирование дислокаций ранее неблагополучных пунктов.

2. В настоящее время 15 обследованных районов Бурятии не имеют скотомогильников, отвечающим ветеринарно-санитарным нормативам

3. Проведенные исследования по морфологической и культуральной характеристике микробного пейзажа почв скотомогильников выявил, что(12,9%) имели кокковидную форму,(32,7 %) имели палочковидные грамотрицательные формы, (42,5 %) спорообразуюшие палочковидной формы,(40 %) обладали подвижностью. S-формы составили (63,8 % ), R-формы (36,2 %). Всего было выделена 181 микробная культура.

4. Спектр ферментативной активности по результатам постановки биохимических тестов был у выделенных микробных культур: на образование индола 16,5 %, уреазы 12,1 %, малоната натрия 72,3 %,глюкозы 44,1 %, лизина 65,1 %, лактозы 15,4 %, сероводорода 9,94 %, сорбита 20,9 %, инозита 7,7 %, Фогес- Проскауэра 11,6 %, фенилаланина 13,2 %, каталазы 54,6 %, свертывания молока 46,9 %, разжижения желатины 31,4 %, гемолиза 50,8 %.

5.Изучение биологического свойства антибиотико-резистентности и чувствительности их показал различную степень чувствительности и устойчивости к антибиотикам. Бензилпенициллин 40,5 %, тетрациклин 80,5 %, левомицетин 86,6 %, неомицин 13,3 %, эритромицин 68,3 %, олеандомицин 37,7 %,полимиксин 61,1 %.

6.Микробные изоляты обладали свойствами потенциальной патогенности, проявляя антилизоцимную активность (АЛА) 19,5 %, антиинтерфероновую активность (АИА) 21,6 %, ДНК-азную активность 20,2 %, гемолитическую активность 27,9 %.

7.Выявлена эффективность дезинфектанта «Вироцид» в обеззараживании почв скотомогильников и в сибиреязвенном очаге с.Кырен Тункинского района республика Бурятия.

8. Оптимальными экологическими параметрами для роста выделенных микроорганизмов являлись рН 7,2-7,4, Na С1 0,85 %,температура 36-37 С.

9.Бактериальный фон почв скотомогильников в спектре выявляемости патогенных и условно-патогенных микроорганизмов был разнообразен: Bac.anthracis, Listeria monocytogenes, E.Coli, Salmonella S.aureus, Proteus, Acromices, Oerskavia, B.megaterium,B.mesentericus, B.Subtillis, B.azotoformus, B.macerans, B.brevis, B.badices,B. Marinus, S.albus, S. Intemedius, и других видов бактерий, имеющих факторы вирулентности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В целях защиты окружающей среды региона озера Байкал мы рекомендуем:

1.Исходя из элементарных принципов ветеринарной санитарии и анализа проведенных исследований, считаем своевременно обязательным, чтобы в каждом населенном пункте имелось оборудованное место для утилизации трупов животных.

2. Наличие и состояние скотомогильников считать одним из основных критериев оценки работы сельских и районных администраций республики, при аттестации руководителей и специалистов данных подразделений.

3. Ветеринарным службам районов совместно с муниципальными образованиями завести карточки на каждый скотомогильник, расположенный на подведомственной им территории.

4. Уничтожение трупов целесообразно проводить, гам, где позволяют почвенно-гидрологические условия необходимо строить биотермические ямы с железобетонной облицовкой стен.

5. Трупы животных павших от особоопасных, для человека и животных болезней, таких как сибирская язва, бешенство, ящур, в обязательном порядке сжигать.