Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли

Дзю, Елизавета Леонидовна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли

ДИССЕРТАЦИЯ

Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли - диссертация, тема по ветеринарии

АВТОРЕФЕРАТ

Дзю, Елизавета Леонидовна Новосибирск 2007 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли

□03064570

На правах рукописи

Дзю Елизавета Леонидовна

Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой гурингиензнс и влияние бактериальных метаболитов на организм лнчннок большой

восковой моли

16. 00. 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунологией 03.00.09 - энтомология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 АВГ 2007

Новосибирск - 2007

003064570

Работа выполнена в ФГОУ ВПО Новосибирский государственный аграрный университет

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор, заслуженный работник сельского хозяйства РФ Незавитин Анатолий Григорьевич (ФГОУ ВПО НГАУ),

кандидат биологических наук Литвина Лидия Алексеевна (ФГОУ ВПО НГАУ),

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Аликин Юрии Серафимович (ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора),

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Бахвалов Станислав Андреевич (ИСиЭЖ СО РАН, г.Новосибирск)

Ведущая организация: ИВМ ФГОУ ВПО Алтайский

государственный аграрный университет

сс

Защита состоится /О 2007 г. в «Д¡"часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Рос-сельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, СО Россельхозакадемии, ИЭВСиДВ.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Россельхозакадемии Автореферат разослан « Ц» О^ 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного•

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. За последние 30-40 лет в нашей стране и за рубежом проведено много исследований, направленных на борьбу с вредителями, болезнями растений и животных. Для этого используют специальные химические и биологические средства.

Применение инсектицидов и фунгицидов довольно часто оказывает отрицательное влияние на качество продукции и экологическое благополучие. Отдельные химические вещества, содержащиеся в инсектицидах, могут накапливаться в сельскохозяйственной продукции и оказывать отрицательное воздействие на здоровье человека [Столбов, 1996; Огурцов, 2003].

Личинки большой восковой моли в отдельные годы причиняют пчеловодству в Западной Сибири большой вред, который выражается в массовой гибели пчелиных семей [Столбов, 1996; Огурцов, 2003; Риб, 2006].

Наиболее перспективным методом в борьбе с личинками большой восковой моли является использование биологических препаратов, обеспечивающих повышение эффективности ведения пчеловодства. Применение биопрепаратов основано на использовании продуктов жизнедеятельности отдельных живых организмов (грибы, микроорганизмы и др.), обладающих антибиотической и бактерицидной способностью.

Отмечено, что многие бактерии обладают высокой патогенностыо по отношению к насекомым, а при определенных условиях вызывают острые бактериозы [Штейнхауз, 1952; Бурцева и др., 2001]. Патогенными для насекомых могут быть как грамотрицательные, так и грамположительные бактерии. Почти все патогенные для насекомых бактерии относятся к родам Bacillales, Clostridiales, Eubacteriales и Pseudomonodales [Штейнхауз, 1952].

Начиная с 50-х годов XX века, бациллы турингиензис (Bacillus tlmringiensis) используют для регуляции численности насекомых. Высокой эффективностью при борьбе с личинками большой восковой моли обладает биопрепарат энтобактерин на основе спорово-кристаллического комплекса бациллы турингиензис, созданный во Всесоюзном научно-исследовательском институте защиты растений [Федоринчик, 1974]. Смертность личинок при опрыскивании пчелиных сот 3%-ной свежеприготовленной суспензией этого препарата достигает 90% [Федоринчик, 1974; Столбов, 1996]. Однако, механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием бациллы турингиензис, а также влияние бактериальных метаболитов на организм личинок до проведения наших исследований не были изучены. Поэтому изучение данной проблемы весьма актуально и может способствовать созданию новых относительно дешевых, экономически выгодных биопрепаратов на основе бациллы турингиензис, а также комплексных препара-

тов, в состав которых могут входить бактериальные метаболиты, против личинок большой восковой моли.

Цель н задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение механизма развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияния бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1 .Изучить механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием спорокристаллической смеси бациллы турингиензис (штамм Р-2);

2.Выявить влияние бактериальных метаболитов бациллы турингиензис на организм личинок большой восковой моли;

3.Показать механизм действия детоксицирующих и антиоксидантных ферментов, содержащихся в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли на их выживаемость.

Научная новизна. Получены новые данные об изменении детоксицирующих ферментов (неспецифических эстераз), активности антиоксидантов — супероксиддисмутазы, каталазы, глутатион-Б-трансферазы и концентрации тиолсодержащих веществ при развитии бактериальной инфекции в организме личинок большой восковой моли. Показан механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли, вызываемой бациллой турингиензис. Впервые изучена характеристика метаболитов бациллы турингиензис (белковые фракции), а также их влияние на организм большой восковой моли. Установлено, что при развитии бактериальной инфекции, вызванной бациллой турингиензис, происходит изменение баланса "оксиданты-антиоксиданты" в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли, что сопровождается их высокой смертностью. Показано, что ферментативные и неферментативные компоненты антиоксидантной системы предотвращают разрушение высокореакционных радикалов в гемолимфе, кишечнике личинок большой восковой моли и способствуют их выживаемости.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты, полученные в ходе исследований, расширяют научные знания, касающиеся механизма развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием бациллы турингиензис. Результаты исследований могут служить основой для совершенствования инсектицидных препаратов с использованием новых бактериальных метаболитов, нарушающих баланс "оксиданты-антиоксиданты" у насекомых.

практическое использование" (Иркутск, октябрь 2004), на 38lh Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology (Аляска, август 2005), на II Межрегиональной научной конференции паразитологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, сентябрь 2005).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 7 печатных работ в сборниках научных трудов, в том числе в журнале «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки» и других изданиях.

Внедрите результатов исследования. Материалы диссертации используются при обучении студентов на факультете ветеринарной медицины ФГО ВПО НГАУ.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием спорокристаллической смеси бациллы турингиензис (штамм Р-2);

2.Влияние бактериальных метаболитов бациллы турингиензис на организм личинок большой восковой моли;

3.Механизм действия детоксицирующих и антиоксидантных ферментов, содержащихся в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли на их выживаемость.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, результаты собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 1 таблицей. Список литературы включает 297 источников, из них 207 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Материалом для исследований служили личинки большой восковой моли 2-6-го возрастов из лабораторной популяции. Пероральное заражение большой восковой моли проводили спорокристаллической суспензией бациллы турингиензис в дозе 1x108 спор/мл на 3,5 грамма среды, которая содержалась в питательной среде.

Метаболиты (белковые фракции) бациллы турингиензис из куль-туралыюй жидкости получали после насыщения 70% сульфатом аммония с дальнейшим диализом в ЮмМ фосфатном буфере рН 8 с ЮмМ NaCl (1 мл суспензии смешивали с 3,5 г среды). Личинки большой восковой моли полу-

чапи корм, содержащий метаболиты (белковые фракции) бациллы турингиен-зис (штамм Р-2).

Определение рН стабильности метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензнс осуществляли по модифицированному методу Cherif A. [Cherif et al. 2003]. Для измерения рН белковой фракции использовали следующие буферы: 10 мМ цитратный буфер, рН 3; 10 мМ фосфатный буфер, рН 7; ЮмМ Трис-HCl буфер, рН 9. Образцы находились сутки в холодильнике, затем их закапывали в Micrococcus lysodeikticus по 100 мкл, результат смотрели через 48 часов по зоне лизиса.

Гемолимфу у личинок большой восковой моли отбирали капилляром через надрезанную ложноножку и помещали в охлаждённые до 6-8 °С пробирки Эппендорф. Для осаждения гемоцитов образцы центрифугировали в течение 5 минут при 1,200 g, после чего супернатант использовали для исследований.

Для приготовления гомогенатов кишечника насекомых препарировали в 10 мМ фосфатном буфере рН 7,2 с 150 мМ NaCI (ФБ). Извлеченные органы растирали в стеклянном гомогенизаторе с холодным ФБ в соотношении 0,1 г на 1 мл буфера. Затем гомогенаты центрифугировали при 4 °С в течение 15 минут при 10000 g. Полученный супернатант использовали для спектрофотометр ического определения активности ферментов, концентрации тиолов.

Активность суперокспддисмутазы определяли при 560 нм по подавлению скорости восстановления нитросинего тетразолия супероксид-анионом, образующимся в процессе окисления ксантина ксантиноксидазой [McCord, Fridovich, 1969]. Активность каталазы определяли при 240 нм по скорости разложения Н202 [Wang et al., 2001]. Активность глутатион-S-трансферазы (ГТ) определяли при 340 нм по скорости увеличения концентрации 5-(2,4-динитрофенил)-глутатиона, продукта реакции 1-хлор-2,4-динитробензола и восстановленного глутатиона, катализируемой ГТ [Habig et al., 1974]. Определение активности эстераз в гемолимфе и гомогенатах кишечника проводили по К. Асперену [Asperen, 1962] с незначительными изменениями. Удельную активность ферментов выражали в единицах изменения оптической плотности инкубационной смеси при используемой для измерения длине волны в ходе реакции в расчете на 1 минуту и 1 мг белка при температуре 28°С. Для определения концентрации восстановленных (RSH) и окисленных (RSSR) тиолов использовали спектрофотометрический метод, основанный на окислении RSH 2-нитро 5-тиобензойной кислотой [Khranitsovet al., 1997; Khramtsov et al., 1989]. RSSR предварительно разрушали до RSH IN соляной кислотой. Концентрацию RSH и RSSR определяли согласно калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой ис-

пользовали восстановленный глутатион. Концентрацию белка в гомогенатах кишечника определяли по методу Бредфорда [Bradford, 1986]. Для построения калибровочной кривой использовали бычий сывороточный альбумин.

Полученные данные обрабатывали статистически, рассчитывая среднее арифметическое и его ошибку. Для проверки нормальности распределения данных использовали W критерий Шапиро-Уилка. Статистическую значимость различий определяли по t-критериго Стыодента [Доспехов, 1985].

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиепзис (штамм Р-2), в организме личинок большой восковой моли

При заражении личинок большой восковой моли 2-го возраста кормом, содержащим спорокристаллическую смесь бациллы турингиензис (штамм Р-2), отмечена 100%-я смертность личинок. Наши данные согласуются с результатами ранее проведенных исследований [Obukowitz et al., 1986; Lampel et al., 1994]. У личинок большой восковой моли 4-6-го возрастов, после заражения бациллой турингиензис, в течение 9 дней наблюдалось снижение живой массы в 1,6-16,3 раза по сравнению с контрольными. Зараженные личинки, начиная с 4-го возраста, были малоподвижны и плохо потребляли кормовую массу. Максимальная смертность личинок 4-6-го возрастов отмечалась в первые сутки и составляла 30,0±2,0% (р<0,01). В последующие дни смертность снижалась до 16,1±2,3 (р<0,01) и 0,5±0,5% (р<0,01) соответственно. В контрольных вариантах личинки развивались нормально. Их выживаемость составила 100%.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что бациллы турингиензис (штамм Р-2) обладали ярко выраженной энтомопатогенной активностью к личинкам большой восковой моли 2-го возраста. Наиболее острый период развития бактериальной инфекции проявлялся в первые сутки и сопровождался следующими признаками: вялость, малоподвижность, отказ от корма, изменение окраски, уменьшение живой массы и 100%-я смертность (р<0,01). Высокая смертность личинок обусловлена, по нашему мнению, действием кристаллического белкового 5-эндотоксина и нарушением целостности и функциональной активности клеточных мембран эпителия кишечника. Учитывая, что до настоящего времени нет работ о роли эстераз при бактериозе насекомых, нами изучено изменение спектра и активности неспецифических эстераз при бактериозе большой восковой моли.

Неспецифические эстеразы в организме у насекомых разрушают образовавшиеся токсические молекулы и способствуют их выведению. Поэтому

нами были изучены активность и спектр неспецифических эстераз в гемолимфе и среднем кишечнике у личинок большой восковой моли, зараженных бациллой турингиензис. Оценивая удельную эстеразную активность гемолимфы, обнаружены достоверные различия между интактными и зараженными личинками большой восковой моли только на 5-е сутки (рис. 1) после заражения насекомых бациллой турингиензис (штамм Р-2). Через 5 суток после заражения личинок бациллой турингиензис эстеразная активность гемолимфы снижалась в 1,5 раза (р<0,05) по сравнению с контролем. При этом в гемолимфе личинок происходило уменьшение таких изоформ ферментов, как Е3 и Е5 (рис.2). Через 24 часа после заражения личинок большой восковой моли спорокристаллической суспензией бациллы турингиензис (штамм Р-2) было выявлено снижение эстеразной активности среднего кишечника в 1,4 раза (р<0,01) (рис.3). В среднем кишечнике у контрольных личинок большой восковой моли было зарегистрировано 7 изоформ в первые сутки (рис. 4А), а у инфицированных особей отмечена исчезновение I -й изоформы (Е5) на первые сутки (см. рис. 4А). На 5-е сутки активность неспецифических эстераз снижалась в кишечнике личинок в 1,7 раза (р<0,05) (см. рис.3). У интактных личинок в среднем кишечнике на 5-е сутки нами зарегистрированы 10 изоформ эстераз, а в опытном варианте - только 7, так как происходила редукция изоформ Е) Е^ Е6 (см. рис. 4Б). Редукция изоформ и снижение активности неспецифических эстераз в среднем кишечнике личинок большой восковой моли связаны в острой фазе бактериоза насекомых со снижением общего метаболизма и их выживаемостью.

£| Л

* Р^мл [4Л1

Ьк I 'АМк'|Ш1ю* ЛОЫиккМк 41 |игшч|ьл (]) п П1р1ЖР1Ю1+П

ГчЮсрНтЩ ЛипЕш ОТДОМ Р-2 п.1'Л,'г*и|7|г(*|< ил"|)

I Чки <111 ти|т.1С|

/—*—\ ■ Л1.ц|ц»| й (Чиросы. II мрмей «I

14(1 ¡и|1 )Ц №1|||р1ЛМ|И|| (к). О 4111НЖН11Н1ПЫПЯН1 ||Щ|П (и|

-ДЩ. из

2. СЕКхфэсгерэагсмолмыфк^ тсМшИвЛ НЕ^НВИ ПрК&ККр^СВЙА

Т^КЛС 14 ЙасИ'нх у 1'Л и • шгамм к - киигри'л

(ЛЕЗфЯИВДДО ЛЗТ'РИМШ). 6 ЗП^ЯЖННЫаЛРЭДЬ!

Б В.3.4

в Ё Б

Ем

Гш.| '^щи пи ■ и рлж^тич ГиКТьрНЛ'ЛН .......... , /у

<-*-1 ■ >]И13]| ■ Iии1: 11 .■ П

. »ГЛ » »ПШИКИ Ы1 И 11МН1 ■ ЩМГ (.1

Ш'МПЮ! (Г чкНткРи II IМРИ4114 I I) Н

ii.nn

[ЧфННн «К'М 1*144141

,1 цу : т.К'1:11:г,ги1;г.: I:I1 -. 1141:ви11<теЛавгпдаг ■ |.i■: 1 •» а- чезтез! <ум вдавдде&нффдеёй . ш г; •>•• - шга\мР-2. Б - ИГ ; % .ум ;IV.г '.<}<;<: сбшЦ-]

ВшШник тицннт шйшОД

к- I-".::ГУ:1Н;Ч11' .ггиго! п .!1'.-1:мл' пмма

Результаты исследований свидетельствуют о том, что вследствие бактериальном инфекции наибольшие изменения в спектре и активности эстераз были отмечены в гемолимфе личинок большой восковой моли на 5-е сутки. В этот период в гемолимфе инфицированных личинок выявлена индуцибелькая изоформа эстераз, которая, вероятно, участвует в нейтрализации токсинов. Одновременно было обнаружено снижение общей эстераз ной активности (р<0,05) гемолимфы личинок, зараженных бациллой турингнензис (штамм Р-2). Таким образом, нами установлено, чти заражение личинок большой восковой моли бациллой турингнензис в острой стадии токсикоза не приводило к изменению активности и спектра эстераз я гемолимфе и среднем кишечнике зараженных насекомых, а на 5-е сутки отмечено снижение активности эстераз в гемолимфе, и появление индуцибельиой изоформы эстераз, а также деградация ферментов и Е5 В среднем кишечнике инфицированных личинок

эстеразная. активность снижалась на 5-е сутки. Из полученных данных можно сделать вывод, что при заражении личинок 4-го возраста большой восковой моли бациллой турингиензис, они, в отличие от личинок 2-го возраста, способны противостоять токсикозу за счет снижения активности и деградации эстераз в кишечнике, а также появления в гемолимфе индуцибельной изо-формы эстераз.

2.2.2. Механизм действия метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис (штамм Р-2) на живую массу личинок большой восковой моли

Нами из культуральной жидкости бациллы турингиензис (штамм Р-2) были выделены белковые фракции (бактериальные метаболиты) без белкового 8-эндотоксина. Белковые фракции представляли собой смесь нескольких белков, обладающих эстеразной и бактериостатической активностью.

Они сохраняли свою активность при температуре 80°С, а при нагревании до 90°С полностью ее теряли. Белковые фракции устойчивы к замораживанию. Антибактериальные белки наиболее активны при рН 3,0-9,0. Молекулярная масса белковых фракций колебалась от 45,0 до 67,0 кДа.

При скармливании белковых фракций личинкам большой восковой моли смертность их не отмечена. Происходило лишь снижение живой массы и задержка развития по сравнению с контролем, начиная с первых суток и до окукливания (рис.5).

Снижение массы личинок при питании кормом, содержащим белковые фракции бациллы турингиензис, по нашему мнению, связано с нарушением процессов пищеварения, и изменением состава микрофлоры и фосфолипидного обмена. Действие белковых фракций бациллы турингиензис на насекомых нами выявлено впервые.

время (tyiKH)

Рис.5. Изменение живой массы личинок G. mellomlla нативиых {1} и получавших корм с белковыми фракциями бактерии Bacillus thuringiensis штамм Р-2 (2) (*р<0.05)

( \ - диапазон определенного возраста. В

верхней части графика указан возраст личинок контрольной (к), а в нижней опытной групп (о)

2.2.2,1. Активность интиоксидантМ ч среднем кишечнике большой в основой мола при скармливании метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиетис

Активность супероксндаиещтазы и каталазы

Суперокснддиемутаза (СОД) (КФ 1.15.1 Л) - это металло протеин, который принимает участие в регуляции уровня супероксиданяона (О Супероксидднсмутаза ускоряет реакцию дисмутации О," в перекись водорода (П202):

ОГ+ОГ + 2Н' сол 02 -^ г

Катал аза (1,1 1.1.6) - расщепляет I ]202 до молекулы воды а молекулярного кислорода:

2Н>0, КАТ'чплт ^2H,Q + Ü2 (Зепков и др., 2001).

В наших исследованиях у личинок большой восковой моли 4-го возраста на 4-е сутки, после скармливания белковых фракций активность суперок-сиддисмутазы в средней кишке полностью ингибировалась (рис.6). На 8-е

сутки происходило увеличение (р<0,05) активности су перо кс и дд и ему таз ы и опытной группе личинок в 5,5 раза, на 12-е сутки - п 2 раза по сравнению с контролем (р- 0,05). На 16-е сутки наблюдали снижение (р<0,СП) активности фермента в 2,25 раза (см. рис.6). Отмеченное нами увеличение активности супероксиддисмутазы может свидетельствовать о накоплении О2", который является индуктором большинства радикальных окислительных процессов. Супероксиддисмутаза и каталаза преимущественно проявляют свою активность комплексно, специализируясь на поэтапном восстановлении кислорода [Мшн1ау, \УпИег1х>ите, 1989; 81ез, 1991]. По нашему мнению, увеличение активности супероксиддисмутазы приводит к увеличению выработки перекиси водорода, что приводило к повышению активности каталазы ¡¡а 8-е сутки.

0,1)1

1101 к

П.(1]{,

ним

«и 12

Я ИДИ

р <1<Ш

1 шик» (ИНН

11 №2

*[Чмя кутни

Г не.Л. Лкшмнк» йперомнлджътш » исдоммщ чпчшмк (г мгЛ'члгйп НИЛ 11) к 1Ы.Т1 'ИНИ1 к 'рч I [к.ипишЦ ^яишвдн Гки>гч.|Ч111 ¡'мини /¡1уг ндогаде

ка (1 ь^кщ <¿11 грк{пи 1ь~л.ш

II сии ГНОк 4ру||11

1'П1.? Амнзм;.". п. ШлГиШ * ЫЛКЛЫИ*- ГСИШШК ГЗ ШгЯмЯгВв МШЛГЛА 111 И Гчмшгинм ^ф&ииичш Ьпктприм Вис г.'1п г ¡ппт^и ми пмпчи 1'-2 (21

г»=1а. *(1 «1Н:**р 11.1)1)

¡~ • лииит *иц1слгчйВ1ЦП1» »отрои а II жр\||?и чг-лч |рафия! «айн

юрил мнчяпикминрччшп помытой |рпн

Повышение супероксиддисмутазы и каталазы в кишечнике большой восковой моли способствовало выведению бактериальных метаболитов и выживанию большой восковой моли.

Активность каталазы у личинок большой восковой моли 4-го возраста

на

4-е сутки, после скармливания им белковых фракции, не изменялась как в опытных, так и в контрольных вариантах. На 8-е сутки активность фермента у опытных личинок возрастала в 2 раза (р<0,01) по сравнению с пнтакгными личинками (рис.7). На 12-е сутки отмечалось снижение активности фермента в 1,3 раза и на 16-е сутки - в 2,7 раза (р<(),05; р<0.01) (см. рис.7).

Однако в наших экспериментах активность каталазы была ниже (р<0,05; р<0,01), чем в контрольной группе на 12-е и 16-е сутки (см рис.7). Данный факт, вероятно, связан с увеличением количества разрушенных клеток в среднем кишечнике личинок при развитии патологического процесса.

что согласуется с данными Зенкова и др. (2001), Kono, Fridovich (1982), Pritsos et al. (1988), Peric-Mataruga et al. (1996). Соотношение между различными компонентами в системе антиоксидантов характеризуется взаимокомпенсаторными механизмами. Как правило, снижение концентрации или активности одних антиоксидантов приводит к соответствующему изменению других.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что супероксиддисмутаза и каталаза играют важную роль в инактивации активированных кислородных метаболитов, образующихся в клетках и тканях зараженных насекомых, способствуют выживаемости личинок. Концентрация тнолсодержащих соединении в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли

Тиолсодержащие соединения способны нейтрализовать активированные кислородные метаболиты. Они поддерживают окислительно-восстановительный гомеостаз в клетках и тканях различных насекомых. Наширезультаты согласуются с данными Зенкова и др. (2001), Wendel (1988), Udupi, Rice-Evans (1992). Глутатиону принадлежит ведущая роль в защите клеток от ОН-радикалов, образующихся при взаимодействии с металлами переменной валентности (реакция Фентона). В организме насекомых глутатион присутствует как в окисленной (GSSG), так и в восстановленной (GSH) формах [Зенков и др., 2001; Rahman, Маспее, 2000; Wang et al., 2001]. Для оценки активности радикальных окислительных процессов в организме насекомых определяли соотношение окисленных тиолов к восстановленным. Использование данного показателя можно объяснить тем, что в радикальные окислительные процессы в первую очередь вовлекаются ненасыщенные липиды и SH-содержащие соединения.

Поэтому мы изучили изменения показателя окисленных тиолов к восстановленным (RSSR/RSH) в кишечнике личинок большой восковой моли, после содержания их на питательной среде с белковыми фракциями бациллы турингиензис.

У личинок большой восковой моли 4-го возраста после скармливания им белковых фракций произошло увеличение отношения RSSR/RSH на 4-е сутки в 1,5 раза (р<0,05), на 8-е сутки - в 10 раз. На 12-е сутки отмечено снижение отношения RSSR/RSH в 1,9 (р<0,01), а на 16-е - в 2,2 раза (р<0,05) (рис.8).

1>11С.1 Соотношение кщмнтрвшш ОКИСЛСИИЙЧ ЧЮ.ЮЯ К ЙОСйПнОиКНКЫН (А^ЯИ 1| В ШИИ'ШИкг П:|ЧНМ)к И ЙкИткИя ШПЛИНТ (!) и млучлшм гиря с. йсЛкмшт |||^11Ч1>ич| кштсрш Виайм Лйм^яша птаич Р-2 (2] {|рзи *р |>0у"'[] 0.0С1

,—^—^ - Акт»» огредигкмгч В51[чс1а [1 мрглгй част |[)ы$ша ушам еоэрясг

........... И1НТрП.ИИОА ШМИТИОП Ч ' I

Установлено, что на 4-е сутки под действием белковых фракций в средней кишке личинок большой восковой моли происходило смещение баланса в старо ну образования окисленных тиоло п (увеличение отношения окисленных тиолов к восстановленным (1155К/К$Н)) в 1.5 раза. Это свидетельствует о повышенной активности радикальных окислительных процессов.

Эти изменения характерны при остром токсикозе, вызванном действием 8-эндотоксина бациллы турингиензис [Дубовскии и др., 2004]. Увеличение окислительной модификации тиолов на фоне увеличений активности суперохсиддиемутазы и каталазы на 4-е и 8-е сутки, после скармливания личинкам большой восковой моли белковых фракций, свидетельствует о повышении синтеза активированных кислородных метаболитов вследствие деструктивных процессов в кишечнике личинок ггод действием белковых фракций бациллы турингиензис. При различных стрессовых воздействиях и патологических состояниях наблюдалась обратимая окислительная модификация 5Н-групп, приводящая к увеличению количества окисленных тиолов (1?8$Я). Этот процесс является неспецифнческой реакцией организма на различные экстремальные воздействия, что согласуется с данными Соколовского (1988), Инауата С1 а! (1989), 1^еШег, КIнт^ог (1992). Па 12-е и (6-е сутки, после содержания личинок иа среде с белковыми фракциями бациллы турингиензис, активность антноксидантных ферментов снижалась, и количество окисленных тиолов достигало контрольных уровнен. Этот процесс протекал как хронический и способствовал выживанию личинок, а также изменению их живой массы.

Нами проведена оценка изменения концентрации тиол со держащих соединений в гемолимфе личинок большой восковой моли 4-7 возрастов, после

содержания их на питательной среде с белковыми фракциями бациллы турии-гиензис. При этом было зафиксировано увеличение концентрации тиолсодер-жащих соединений у опытных личинок на 4-е сутки в 1,5 раза (р<0,01). На 8-е и 12-е сутки никаких изменений мы не отметили (рис,9). На 16-е сутки отметили снижение концентрации т иол со держащих соединений у опытных личинок в 2,8 раза (р<0,01) по сравнению с контрольными (см. рис.9).

W^ii

ЗДЩШ

«К* 111

% ТШН1 at

axhw ИКЮ»

•I S 12 10 *1>счя fejrnf)

Put.1), [Сшшентраппя пюловдсрлашич со&ШЫВпиП d гемолимфе личинок {>

m<ttfm'tlti натниных 11) и unn'rafcunit кори с боковыми ^акциями бактерия it он II» а

(кпгтщатщ ЦГГДММ P-2(2){fi=l(J. f"p--0 (jl)

- липгюн определенного влчраета 8 част« графика указа« noapjer

МГ'НИЮК контро-ьпоп 1) ОПЫТЦСЖ ф\ 1)0

Увеличение концентрации тнолсодержащих соединений на 4-е сутки у личинок, питавшихся белковыми фракциями, происходило за счет того, что восстановленная (RSJ[) форма нейтрализует активированные кислородные метаболиты. Наши исследования частично согласуются с данными ряда авторов [Зенков и др.. 2001; Wendef, 1988: Udupi, Rice-Evans, ¡992]. На !6-е сутки в гемолимфе опытных личинок концентрация тиол содержащих соединений снижалась за счег стресса, вызванного белковыми фракциями бациллы турингиензис. Это приводит к увеличению количества дисульфилных связей в гемолимфе личинок в ответ на белковые фракции, что способствует выживаемости личинок. Соотношение восстановленных и окисленных SH-групц и их способность к окислительной модификации являются важными критериями неспецифического ответа организма.

2.2.2.2. Активность детоксицирую Щих ферментов и глутатион-S-трансфераз в среднем кишечнике и гемолимфе личинок большой восковой моли при скармливании метаболитов (белковые фракции) бациллы щурингиензис

Детоксицирующие ферменты в организме насекомых направлены ira разрушение токсических молекул и их элиминацию. Глу тати о и-S-трансфераз а в их организме играет ведущую роль в устранении органических гидроперекисей из клеток и их защите от потенциального повреждения продуктами пере к йен о го окисления липидов [Колесииченко, Кулинский, 1989; Баканова и др., 1992; Янковский, 2000].

Определение активности глутатион-5-трансферазы в средней кишке личинок большой восковой моли 4-5 возрастов, после скармливания им белковых фракций показало, что активность глутатиои-S-трансферазы на 4-е и 8-е сутки не изменялась как у опытных, так и у контрольных личинок (рис.10). На /2-е сутки, теле содержания личинок б-го возраста на питательной среде с белковыми фракциями активность фермента снижалась в 1,3 раза (р<0,05) по сравнению с нативными, а на 16-е сутки увеличивалась в 3 раза (р<0,05) (рис.10). Наряду с этим нами изучена активность глутатиоп-S-трансферазы в гемолимфе личинок большой восковой моли при скармливании им белковых фракций бациллы турингиензис. Установлено, что только на 12-е сутки у опытных личинок 5-го возраста активность данного фермента снижалась в 2,6 раза (р<0,01) по сравнению с контрольными (рис.М), На 4-е, 8-е и 16-е сутки разности между йнтактными и опытными насекомыми мы не отметили (см. рис.11).

А л 5 А'

I.. пЪ Г ,7....., я

i, 1 "

L il

4 ' 12 1f> Rpnnifri-Tip)

(I Hi lMt'IVi»*H\ M>fW i: {КЛВЛШЖН •|»j,î:hll.H!4>lji |ЧМ.-рМ1| Л.тсн'Гщ |ii JjUll Г-?

<Ж"Р п.<111 "

/—*-—^ - днэвимы пцршдеЩшш H всраи*» lutiи VMUIII вирт»

Результаты исследований показали, что удельная активность глутатион-S-трансферазы в кишечнике и гемолимфе личинок большой восковой моли на 12-е сутки снижалась (р<0,05; р<0,01) при скармливании им белковых фракций бациллы турингиензис. Глутатион-S-транефераза, являясь детоксици-рующим ферментом, возможно, участвует в деградации токсических молекул, которые образуются при попадании белковых фракций бациллы турингиензис а организм насекомого. Снижение активности глу га тиои-З-трансферазы я гемолимфе и кишечнике у опытных личинок может быть связано с ингибиро-ваннем фермента метаболитами бактерий. Снижение уровня глутатион-S-

J'ci II». AbUnUuciblm»IHiiii-Vциик+'ф*1«'' r книсчшгм г+чвшщ; nrJiwrMs ■ajaeHiK il) и iii'.i'i'tMiiunfv 4 rv.»4'.fUiiû I|I{idkiliihuu fcifciqiiii Н,1п!1ш (Лпгихагм'п ni п мм P-2 < 21 LU.'f iMi« )

f—A—^ • лиинпом ^редптвгёо mi|u:ri N jl-jix*« чжш цифин мщи. i

Jllliliviik Util lp.ill.hiv b nil U1 (Mil

трансферазы в гемолимфе и кишечнике личинок, вероятно, компенсируется увеличением активности данного фермента. На 16-е сутки при скармливании им белковых фракций бациллы турингиензис в средней кишке личинок большой восковой моли мы отметили увеличение г лутати о н - 8 -тр а не ф е р аз ы. Увеличение активности глутатион-8-трансферазы происходило на фоне накопления перекисного окисления липидов, что может свидетельствовать об участии глутатион-Б-трансферазы насекомых в инактивации токсичных продуктов и выживаемости личинок.

3. ВЫВОДЫ

1. При пероральном заражении личинок большой восковой моли 2-го возраста кормом, содержащем спорокристаллическую смесь бациллы турингиензис (штамм Р-2), инфекционный процесс развивался в острой форме и сопровождался вялостью, малоподвижностью, отказом от корма, изменением окраски, уменьшением живой массы. Смертность личинок в 1-е сутки составляла 100% (р<0,01). Смертность же личинок 4-6-х возрастов в 1-е сутки составляла 30,0±2,0%, а в последующие дни 16,1 ±2,3% - 0,5±0,5% (р<0,01). В контрольных вариантах сохранность личинок составила 100,0% (р<0,01).

2. Высокое патогенное действие бациллы турингиензис на личинок большой восковой моли в раннем возрасте обусловлено действием 8-эндотоксина на фоне нарушения целостности и снижения функциональной активности клеточных мембран эпителия кишечника.

3. Снижение бактериоза личинок большой восковой моли в 4-м возрасте связано с изменением спектра и активности неспецифических эстераз в среднем кишечнике и гемолимфе, появлением индуцибельной изоформы эстераз, а также деградацией изоформ Е3 и Е5.

4. При развитии инфекции, вызванной бациллой турингиензис, у личинок 4-6-го возрастов, происходило изменение баланса "оксиданты-антиоксиданты" в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли. Уровень снижения их смертности в 1-е сутки составил 30,0±2,0%, а на 2-е -16,1±2,3% и на 3-й сутки 0,5±0,5% (р<0,01).

5. Под воздействием метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис личинки большой восковой моли всех возрастов не погибали, так как в белковых фракциях не содержался 5-эндотоксин. Происходило только снижение их живой массы (р<0,05).

6. Метаболиты (белковые фракции) бациллы турингиензис вызывали повышение активности супероксиддисмутазы, каталазы и окислительную модификацию тиолов в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой вос-

ковой моли 4-6 возрастов на 4-е-12-е сутки. Выживаемость их при этом составляла 100,0%.

7. Содержание глутатион-Б-трансферазы в кишечнике большой восковой моли на 16-е сутки возрастало в 3 раза. Повышение активности глутатион-Б-трансферазы способствовало перекисному окислению липидов, инактивации и выведению из организма личинок большой восковой моли токсичных продуктов, образующихся при бактериозе насекомых, что способствовало их 100 % выживаемости.

8. Ферментативные и неферментативные компоненты антиоксидантной системы предотвращали разрушение высокореакционных радикалов в гемолимфе, кишечнике личинок большой восковой моли и способствовали их выживаемости.

9. Метаболиты (белковые фракции) бациллы турингиензис сохраняли свою активность при нагревании до 80°С. При более высокой температуре они полностью теряли ее. При -5°С и pH 3,4-9,0 активность метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис сохранялась.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований используются при обучении студентов зооинженерного факультета и факультета ветеринарной медицины. Они могут также быть использованы аспирантами при проведении исследований, связанных с биологическими способами защиты míen от вредителей и болезней.

2. Результаты исследований могут служить основой для поиска новых вторичных метаболитов, нарушающих баланс оксиданты-антиоксиданты у насекомых и использования их для совершенствования биопрепаратов на основе бациллы турингиензис, применяемых для защиты пчел от вредителей и болезней.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние белковых метаболитов Bacillus thuringiensis ssp. galleriae на антиоксиданты средней кишки личинок Galleria mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae) / Соавт.: H.B. Редькина, B.B. Глупов II Евроазиатский энтомол. -Новосибирск-М., 2004. - Т. 3, Вып. 2. - С. 88-92.

2. Изучение спектра и активности неспецифических эстераз в кишечнике личинок Galleria mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae) при заражении бактериями Bacillus thuringiensis ssp. Galleriae II Сибирская зоологическая конф. - Новосибирск, 15-22 сентября, 2004. — С. 370-371.

3. Влияние белковых метаболитов Bacillus thuringiensis ssp.galleriae на антиоксиданты средней кишки личинок Gallería mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae) // Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование. - Иркутск, 27-28 октября, 2004. - С. 24-25.

4. Литическая активность штаммов Bacillus thuringiensis I Соавт.'. Г.В. Калмыкова, Л.И. Бурцева // Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование. — Иркутск, 27-28 октября, 2004. - С. 31-33.

5. Influence of bacteriocin metabolites Bacillus thuringiensis on antioxidants of gut of Gallería mellonella larvae / Natalia V. Redkina, Viktor V. Glupov // 38lh Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology (August 7-11). -Anchorage, Alaska, U.S.A., 2005. - B-10. - P. 53.

6. Характеристика метаболитов Bacillus thuringiensis ssp.galleriae и их влияние на активность компонентов антиоксидантной системы среднего кишечника личинок Gallería mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae) / Соавт.: E.B. Гризанова, В.В. Глупов // II Межрегион, науч. конф. паразитологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 15- 20 сентября, 2005. - С. 51 -52.

7. Влияние белковой фракции бактерии Bacillus thuringiensis на антиоксиданты средней кишки личинок Gallería mellonella / Соавт.: А.Г. Незавитин // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. — 2006. -№5.-С. 90-91.

Отпечатало в типографии Новосибирского государственного технического университета 630092, г. Новосибирск, пр. К. Маркса, 20 Тел./факс (383) 346-08-56 Формат 60 х 84 1/16, Объем 1,5 п.л. Тираж 100 экз. Заказ Лг° 149. Подписано в печать 30.07.2007

Оглавление диссертации Дзю, Елизавета Леонидовна :: 2007 :: Новосибирск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика большой восковой моли (Galleria mellonella).

1.2. Особенности биологии большой восковой моли.

1.3. Поражение личинками большой восковой моли пчелиных семей.

1.4. Существующие меры борьбы с личинками большой восковой моли.

1.4.1. Биопрепараты на основе энтомопатогенных бактерий бациллы турингиензис.

1.4.1.1. Основные биопрепараты против чешуекрылых насекомых.

ГЛАВА 2. Бацилла турингиензис {Bacillus thuringiensis).

2.1. Токсины и вторичные метаболиты бациллы турингиензис.

2.2. Гидролитические ферменты.

2.2.1. ФосфолипазаС.

2.2.2. Вегетативный инсектицидный белок Vip3A.

2.2.3. Протеолитические ферменты.

2.2.4. Хитиназа.

2.3. Бактериоцины.

2.3.1. Бактериоцины грамотрицательных и грамположительных бактерий.

2.3.2. Свойства бактериоцинов.

2.4. Антиоксидантная система насекомых.

2.4.1. Ферментативные антиоксиданты.

2.4.2. Неферментативные антиоксиданты.

2.5. Детоксицирующие ферменты.

2.5.1. Микросомальные монооксигеназы.

2.5.2. Неспецифические эстеразы.

2.5.3. Глутатион-8-трансферазы.

2.5.4. Влияние инфекций на активность детоксицирующих ферментов.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Объекты исследования.

3.2. Получение метаболитов бациллы турингиензис (белковые фракции) из культуральной жидкости.

3.3. Определение рН стабильности белковых фракций.

3.4. Определение бактериостатической активности белковых фракций.

3.5. Заражение личинок большой восковой моли бациллами турингиензис.

3.6. Отбор гемолимфы из среднего кишечника личинок большой восковой моли и приготовление гомогената.

3.7. Определение активности супероксиддисмутазы в среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.8. Определение активности каталазы в среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.9. Определение активности и спектра неспецифических эстераз в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.10. Определение активности глутатион-Б-трансферазы в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.11. Определение тиолсодержащих соединений в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.12. Определение концентрации белка в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.

3.13. Статистическая обработка экспериментальных данных.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис (штамм Р-2), в организме личинок большой восковой моли.

4.2. Активность и спектр неспецифических эстераз при бактериозе личинок большой восковой моли.

ГЛАВА 5. Механизм действия метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис (штамм Р-2) на личинок большой восковой моли.

5.1. Характеристика метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис

5.2. Влияние метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис на живую массу большой восковой моли.

5.2.1. Активность антиоксидантов в среднем кишечнике большой восковой моли при скармливании метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис.

5.2.1.1. Активность супероксиддисмутазы и каталазы.

5.2.1.2. Концентрация тиолсодержащих соединений в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли.

5.2.2. Активность детоксицирующих ферментов и глутатион-Б-трансфераз в среднем кишечнике и гемолимфе личинок большой восковой моли при скармливании метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис.

5.2.2.1. Активность неспецифических эстераз.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Дзю, Елизавета Леонидовна, автореферат

Актуальность темы. За последние 30-40 лет в нашей стране и за рубежом проведено много исследований, направленных на борьбу с болезнями животных. Несмотря на это, дальнейшее изучение особенностей развития целого ряда болезней животных и мер борьбы с ними имеет большую актуальность, важное научное и практическое значение. Одной из таких патологий является поражение пчелиных семей, вызываемое личинками большой восковой моли.

Отмечено, что многие бактерии обладают высокой патогенностью по отношению к насекомым, а при определенных условиях вызывают острые бактериозы [Штейнхауз, 1952; Бурцева и др., 2001]. Патогенными для насекомых могут быть как грамотрицательные, так и грамположительные бактерии. Почти все патогенные для насекомых бактерии относятся к родам Bacillales, Clostridiales, Eubacteriales и Pseudomonodales [Штейнхауз, 1952].

Начиная с 50-х годов XX века, бациллы турингиензис {Bacillus thuringiensis) используют для регуляции численности насекомых. Высокой эффективностью при борьбе с личинками большой восковой моли обладает биопрепарат энтобактерин на основе спорово-кристаллического комплекса бациллы турингиензис, созданный во Всесоюзном научно-исследовательском институте защиты растений [Федоринчик, 1974]. Смертность личинок при опрыскивании пчелиных сот 3%-ной свежеприготовленной суспензией этого препарата достигает 90% [Федоринчик, 1974; Столбов, 1996]. Однако, механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием бациллы турингиензис, а также влияние бактериальных метаболитов на организм личинок до проведения наших исследований не были изучены. Поэтому изучение данной проблемы весьма актуально и может способствовать созданию новых относительно дешевых, экономически выгодных биопрепаратов на основе бациллы турингиензис.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение механизма развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияния бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием спорокристаллической смеси бациллы турингиензис (штамм Р-2);

2. Выявить влияние бактериальных метаболитов бациллы турингиензис на организм личинок большой восковой моли;

3. Показать механизм действия детоксицирующих и антиоксидантных ферментов, содержащихся в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли на их выживаемость.

Научная новизна. Получены новые данные об изменении детоксицирующих ферментов (неспецифических эстераз), активности антиоксидантов - супероксиддисмутазы, каталазы, глутатион-8-трансферазы и концентрации тиолсодержащих веществ при развитии бактериальной инфекции в организме личинок большой восковой моли. Показан механизм развития инфекции в организме личинок большой восковой моли, вызываемой бациллой турингиензис. Впервые изучена характеристика метаболитов бациллы турингиензис (белковые фракции), а также их влияние на организм большой восковой моли. Установлено, что при развитии бактериальной инфекции, вызванной бациллой турингиензис, происходит изменение баланса "оксиданты-антиоксиданты" в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли, что сопровождается их высокой смертностью. Показано, что ферментативные и неферментативные компоненты антиоксидантной системы предотвращают разрушение высокореакционных радикалов в гемолимфе, кишечнике личинок большой восковой моли и способствуют их выживаемости.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты, полученные в ходе исследований, расширяют научные знания, касающиеся механизма развития инфекции в организме личинок большой восковой моли под действием бациллы турингиензис и могут служить основой для совершенствования инсектицидных препаратов с использованием новых бактериальных метаболитов, нарушающих баланс "оксиданты-антиоксиданты" у насекомых.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации были представлены на Сибирской зоологической конференции (Новосибирск, сентябрь 2004), на конференции "Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование" (Иркутск, октябрь 2004), на 38th Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology (Аляска, август 2005), на II Межрегиональной научной конференции паразитологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, сентябрь 2005).

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации используются при обучении студентов на факультете ветеринарной медицины ФГО ВПО НГАУ.

Основные положения, выносимые на защиту.

2. Влияние бактериальных метаболитов бациллы турингиензис на организм личинок большой восковой моли;

3. Механизм действия детоксицирующих и антиоксидантных ферментов, содержащихся в гемолимфе и кишечнике личинок большой восковой моли на их выживаемость.

Заключение диссертационного исследования на тему "Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли"

ВЫВОДЫ

1. При пероральном заражении личинок большой восковой моли 2-го возраста кормом, содержащем спорокристаллическую смесь бациллы турингиензис (штамм Р-2), инфекционный процесс развивался в острой форме и сопровождался вялостью, малоподвижностью, отказом от корма, изменением окраски, уменьшением живой массы. Смертность личинок в 1-е сутки составляла 100% (р<0,01). Смертность же личинок 4-6-х возрастов в 1-е сутки составляла 30,0±2,0%, а в последующие дни 16,1±2,3% - 0,5±0,5% (р<0,01). В контрольных вариантах сохранность личинок составила 100,0% (1X0,01).

2. Высокое патогенное действие бациллы турингиензис на личинок большой восковой моли в раннем возрасте обусловлено действием 5-эндотоксина на фоне нарушения целостности и снижения функциональной активности клеточных мембран эпителия кишечника.

Выживаемость их при этом составляла 100,0%.

7. Содержание глутатион-8-трансферазы в кишечнике большой восковой моли на 16-е сутки возрастало в 3 раза. Повышение активности глутатион-8-трансферазы способствовало перекисному окислению липидов, инактивации и выведению из организма личинок большой восковой моли токсичных продуктов, образующихся при бактериозе насекомых, что способствовало их 100 % выживаемости.

9. Метаболиты (белковые фракции) бациллы турингиензис сохраняли свою активность при нагревании до 80°С. При более высокой температуре они полностью теряли ее. При -5°С и рН 3,4-9,0 активность метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис сохранялась.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований используются при обучении студентов зооинженерного факультета и факультета ветеринарной медицины. Они могут также быть использованы аспирантами при проведении исследований, связанных с биологическими способами защиты пчел от вредителей и болезней.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2007 года, Дзю, Елизавета Леонидовна

1. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. JL: Наука. Ленингр. Отд-ние, 1985. -115 с.

2. Азизбекян P.P. Споро- и кристаллообразование у Bacillus thuringiensis / P.P. Азизбекян, Т.А. Смирнова // Успехи микробиол. 1988. -Т. 2.-С. 82-108.

3. Амирханов Д.В. Активность ферментов детоксикации на начальной стадии формирования резистентности к инсектицидам у комнатной мухи / Д.В. Амирханов, М.П. Соколянская // Агрохимия. 1992. -№ 10.-С. 115-121.

4. Андросов Г.К. Защитные реакции гемолимфы насекомых при микотоксикозе / Г.К. Андросов, М.И. Алиева // Общая биология. 1980. - Т. 41, вып. 5.-С. 726-733.

5. Баканова Е.И. Свойства и функции глутатион-8-трансферазы членистоногих / Е.И. Баканова, О.Ю. Еремина, С.А. Рославцева // Изв. РАН. Сер. биол. 1992. - № 4. - С. 537-545.

6. Барбашова Н.М. Антагонистические свойства и продуцирование экзотоксина Bacillus thuringiensis / Н.М. Барбашова, Г.А. Владимирова // Тр. ВНИИСХМ. 1981. -Т. 51. - С. 151-158.

7. Безбородов A.M. Биохимические основы микробиологического синтеза / A.M. Безбородов. М., 1984. - 394 с.

8. Беттхер К. Значение лецитин-вителлиновой реакции для дифференциации видов споровых бактерий / К. Беттхер // Микробиология. -1961.-Т. 30.-С. 673-678.

9. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / М.В. Биленко. М.: Медицина, 1989. - 368 с.

10. Блинкова Л.П. Бактериоцины: Критерии, классификация, свойства, методы выявления / Л.П. Блинкова // Микробиология 2003. - № 3. -С. 109-113.

11. Блинкова Л.П. Перспективы использования бактериоцинов для профилактики и терапии инфекций / Л.П. Блинкова // Микробиология 1984. -Вып. 5.-С. 10-14.

12. Блинкова Л.П. Получение томицида нового бактерийного препарата и изучение его биологической активности / Л.П. Блинкова: Дис.д-ра биол. наук.-М., 1986.-214 с.

13. Бурлакова Е.Б. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов / Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашаков, Н.Г. Храпова. -Черноголовка, 1992. 56 с.

14. Бурцева Л.И. Бактериальные болезни насекомых / Л.И. Бурцева, М.В. Штерншис, Г.В. Калмыкова // Патогены насекомых: структурные и функциональные аспекты / Под ред. В.В. Глупова. М.: Круглый год, 2001. -С. 189-245.

15. Бурцева Л.И. Биологические особенности бактерий Bacillus thuringiensis / Л.И. Бурцева: Дис.канд. биол. наук. Л., 1970. - 115 с.

16. Бурцева Л.И. О выборе штаммов Вас. thuringiensis var. galleriae для производства энтобактерина / Л.И. Бурцева, М.М. Скворцова, Н.И. Шашкина // Сиб. вестн. с.-х. наук. 1973. - Т. 2. - С. 33.

17. Бурцева Л.И. Селекция Bacillus thuringiensis: изменчивость патогенных свойств / Л.И. Бурцева // Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений: Сб. науч. тр. Новосибирск, 1987. - Т. 2. - С. 22-31.

18. Вейзер Я. Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми (Болезни насекомых) / Я. Вейзер М.: Колос, 1972. - 640 с.

19. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. - С. 1-249.

20. Гробов О.Ф. Вредители пчел и меры борьбы с ними, М., 1984. -С. 18-22.

21. Гробов О.Ф., Лихотин А.К. Болезни и вредители пчел. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Мир, 2003. - С. 263-266.

22. Давыдова М.Н. Антиоксидантные ферменты сульфатредуцирующей бактерии Desulfovibrio desulfuricans: супероксиддисмутаза и пероксидазы / М.Н. Давыдова, Р.З. Сабирова // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 7. - С. 990-994.

23. Две формы р-экзотоксина Bacillus thuringiensis / А.А. Соломин, Г.П. Буров, Н.М. Онацкий и др. // Биотехнология. 1989. - № 6. - С. 792-795.

24. Диксон М. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982.1120 с.

25. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта с основами статистической обработки результатов исследований / Б.А. Доспехов. 5-е изд., доп., перераб. - М.: Агропромиздат, 1985. - 351 с.

26. Егоров Н.С. Биологически активные соединения, определяющие токсичность микробных инсектицидов на основе Bacillus thuringiensis / Н.С. Егоров, Т.Г. Юдина: Обзор / ВНИИСЭНТИ. 1989. - Вып. 6. - С. 50.

27. Егоров Н.С. О корреляции между инсектицидной и антибиотической активностями параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis / Н.С. Егоров, Т.Г. Юдина, А.Ю. Баранов // Микробиология. -1990.-Т. 59.-С. 448-452.

28. Ефименко Т.М. Биологическое обоснование применения микроспоридий против совок самостоятельно и совместно с бактериальными препаратами / Т.М. Ефименко: Автореф. . канд. биол. наук. JI., 1989. -19 с.

29. Зенков Н.К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

30. Иванов А. Фосфолипаза С Bacillus thuringiensis: субстратная специфичность, гидролиз п-нитрофенилфосфорилхолина и энтомопатогенность / А. Иванов, И. Кузманова, Е Камберов // Биотехнология. 1990. -№ 5. - С. 69-72.

31. Ивинскене В.Л. Фосфолипаза и термолабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis / В.Л. Ивинскене // Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. Сиб.отд-ние. -Новосибирск, 1987. С. 57-75.

32. Калмыкова Г.В. Биологическое разнообразие бактерий Bacillus thuringiensis из естественных экосистем / Г.В. Калмыкова: Афтореф. дис. . канд. биол. наук. / Институт систематики и экологии животных СО РАН. -Новосибирск, 2003. 20 с.

33. Каменек JT.K. Структура, свойства и механизм действия 8-эндотоксина Bacillus thuringiensis / JI.K. Каменек // Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. 1987. - С. 42-57.

34. Кандыбин Н.В. Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными насекомыми / Н.В. Кандыбин. М.: Агропромиздат, 1989. - 175 с.

35. Кандыбин Н.В. Микробиологизация альтернатива химизации при получении экологически чистой продукции / Н.В. Кандыбин, О.В. Смирнов // Производство экологически безопасной продукции растениеводства. - Пущино, 1995. - Вып. 1. - С. 66-72.

36. Кахновер Н.Б. Глутатион-Б-трансферазы, ферменты детоксикации / Н.Б. Кахновер, Ю.В. Хмелевский // Украинский биохимический. 1983.-Т. 55,№ 1.-С. 86-92.

37. Койта М. Биологическое обоснование применения биопрепаратов против листогрызущих вредителей капусты / М. Койта: Автореф. дис.канд. с.-х. наук-М., 1988.- 19 с.

38. Колесниченко Л.С. Глутатионтрансферазы / Л.С. Колесниченко, В.И. Кулинский // Успехи современной биологии 1989. - Т. 107, вып. 2. - С. 179-194.

39. Колесова Д.А. Биологическая защита капусты / Д.А. Колесова, В.П. Михальцов // Защита растений. 1995. - №7. - С. 39-40.

40. Кольчевская Е.Н. Анализ множественных форм неспецифических эстераз гусениц капустной совки, зараженных микроспоридиями Vairimorpha antheraeae / Е.Н. Кольчевская, А.Г. Кольчевский // Бюл. ВНИИЗР. 1988. -№71.-С. 18-21.

41. Король И.Т. Микробиологическая защита растений: Справочник / И.Т. Король. М.: Колос, 1993. - 79 с.

42. Корочкин Л.И. Генетика изоферментов / Л.И. Корочкин, О.Л. Серов, А.И. Пудовкин. -М: Наука, 1977. 275 с.

43. Кудлай Д.Г. Бактериоциногения / Д.Г. Кудлай, В.Г. Лиходед. -Л.: Медицина, 1966. 202 с.

44. Лаппа Н.В. Уровни численности вредных и полезных насекомых при разных методах защиты капусты / Н.В. Лаппа, В.М. Гороль, В.Ф. Дрозда // Биологический метод борьбы с вредителями овощных культур. М., 1990. -С. 103-106.

45. Ленинджер А.Л. Биохимия: молекулярные основы структуры и функции клетки / А.Л. Ленинджер. М, 1974. - 956 с.

46. Леонова И.Н. Исследование ферментных систем детоксикации инсектицидов у колорадского жука / И.Н. Леонова, С.В. Неделькина, Р.И. Салганик // Биохимия. 1986. - Т. 51, вып. 3. - С. 426-431.

47. Лескова А.Я. Действие /3-экзотоксина Bacillus thuringiensis на насекомых / А.Я. Лескова, Л.М. Рыбина, А.Я. Чумакова // Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами. 1972. - С. 52-57.

48. Лескова А.Я. Патогенные свойства Bacillus thuringiensis и условия эффективного использования их для борьбы с вредными насекомыми / А.Я. Лескова: Автореф. дис.д-ра биол. наук Л., 1975. - 45 с.

49. Лескова А.Я. Термостабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis / А.Я. Лескова, Л.М. Рыбина // Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений: Сб. науч. тр./ ВАСХНИЛ. Сиб.отд-ние. Новосибирск, 1987. - С. 31-42.

50. Лозинская Я.Л. Изменение активности детоксицирующих ферментов и антиоксидантного статуса личинок Galleria mellonella L. при микроспоридиозе / Я.Л. Лозинская: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Новосибирск, 2002. 19 с.

51. Меныцикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып. 4. - С. 442-455.

52. Метод определения активности энтомопатогенного кристаллообразующего белка Bacillus thuringiensis / A.JI. Михайлова, Ф.С. Клепикова, Г.Г. Честухина, В.М. Степанов // Прикладная биохимия и микробиология. 1984. - Вып. 5. - С. 682-687.

53. Номенклатура ферментов: Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также по единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций / ВИНИТИ. М, 1979. - 254 с.

54. Огурцов А.Ф. Болезни и лечение пчел. Диагностика и профилактика болезней. Борьба с вредителями и хищниками пчел. М.: «АКВАРИУМ ЛТД», К.: ФГУИППВ, 2003. - С. 99-101.

55. Осинцева Л.А. Природоохранная защита капусты от вредителей / Л.А. Осинцева // Аграрная наука. 1995. - № 2. - С. 46-47.

56. Полтев В.И., Нешатаева Е.В. Болезни и вредители пчел. Изд. 2-е, испр. и доп. М., «Колос», 1977. С. 139-143.

57. Попова Т.А. Совершенствование биологической защиты капусты от капустной совки / Т.А. Попова: Автореф. дис.канд. биол. наук. М., 1988.- 15 с.

58. Раушенбах И.Ю. Роль эстеразы ювенильного гормона в метаморфозе Diptera / И.Ю. Раушенбах, Н.С. Лукашина, Т.М. Хлебодарова // Генетика. 1991. - Т. 22, № 3. - С. 274-281.

59. Риб Р.Д. Пчеловоду Сибири Сибири и Казахстана. Усть-Каменогорск: «Медиа-Альянс», 2006. - С. 18-22.

60. Рогинский В.А. Фенольные антиоксиданты: Реакционная способность и эффективность / В.А. Рогинский. М.: Наука, 1988. - 231 с.

61. Рославцева С.А. Активность эстераз у различных насекомых / С.А. Рославцева// Энтом. обозр. 1971. - Т. 50, вып. 1. - С. 32-37.

62. Рославцева С.А. Исследование эстеразных систем насекомых / С.А. Рославцева, О.Ю. Еремина, И.Н. Костырко // Агрохимия. 1990. - № 10. -С. 117-123.

63. Рославцева С.А. Современные воззрения на биохимические механизмы резистентности / С.А. Рославцева // Агрохимия. 1994. - № 10. -С. 143-148.

64. Рославцева С.А. Эстеразы членистоногих и их роль в механизмах детоксикации инсектоакарицидов / С.А. Рославцева, Е.И. Баканова, О.Ю. Еремина // Изв. РАН. Сер. биол. 1993. - № 3. - С. 368-375.

65. Серебров В.В. Детоксицирующие ферменты насекомых при микозах / В.В. Серебров: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Новосибирск, 2000.- 19 с.

66. Серебров В.В. Изменение активности и спектра эстераз гемолимфы гусениц вощинной моли Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyrallidae) при микозах / В.В. Серебров, А.А. Алексеев, В.В. Глупов // Изв. АН. Сер. биол. 2001. - № 5. - С. 588-592.

67. Соколова Ю.Я. Подавление активности эстераз как особенность патогенеза микроспоридиоза сверчков Gryllus bimaculatus / Ю.Я. Соколова, О.В. Сундуков // Паразитология. 1999. - Т. 33, вып. 6. - С. 527-536.

68. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие / В.В. Соколовский // Вопр. мед. химии. 1988 - № 6. - С. 2-11.

69. Старостина Н.Г. Обнаружение и частичная характеристика бактериоцина у метанотрофных бактерий Methylobacter bovis / Н.Г. Старостина, Н.И. Пашкова, А.Б. Циоменко // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 10.-С. 1320-1324.

70. Столбов Н.М. Борьба с болезнями и вредителями // Пчеловодство. 1996. -№ 6. - С. 18-20.

71. Сундуков О.В. Некоторые биохимические механизмы резистентности / О.В. Сундуков // Резистентность вредителей сельскохозяйственных культур к пестицидам и ее преодоление: Сб. науч. тр. ВИЗР. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 59-64.

72. Тамарина Н.А. Техническая энтомология новая отрасль прикладной энтомологии / Н.А. Тамарина // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Энтомология. - 1987. - Т. 7. - С. 248-258.

73. Успенский И.И. Сравнительный анализ карбоксилэстераз в различных органах половой системы самцов Drosophila подгруппы melanogaster / И.И. Успенский, М.З. Людвиг, Л.И. Корочкин // Общ. биол. -1988.-Т. 49,№5.-С. 601-610.

74. Филиппович Ю.Б. Множественные формы ферментов насекомых и проблемы сельскохозяйственной энтомологии / Ю.Б. Филиппович, А.С. Коничев. М.: Наука, 1987. - 168 с.

75. Чернышов В.Б. Экология насекомых / В.Б. Чернышов. М.: Изд-воМГУ, 1996.-304 с.

76. Честухина Г.Г. Протеиназы, связанные с кристаллами Bacillus thuringiensis / Г.Г. Честухина, И.А. Залунин, Костина // Биохимия. 1978. - Т. 43, вып. 5. - С. 857-864.

77. Штейнхауз Э. Патология насекомых / Э. Штейнхауз М.: Изд-во иностр. лит., 1952. - 348 с.

78. Штерншис М.В. Биопрепараты в защите растений / М.В. Штерншис, Ф.С. Джалилов, И.В. Андреева, О.Г. Томилова. Новосибирск, 2000. - 128 с.

79. Штерншис М.В. Защита капусты от вредителей в Западной Сибири / М.В. Штерншис, В.П. Цветкова, О.Г. Томилова // Производство экологически безопасной продукции растениеводства. Пущино, 1995. -С.195-197.

80. Штерншис М.В. Критерии повышения эффективности энтомопатогенных бактериальных препаратов / М.В. Штерншис // Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. Новосибирск, 1987.-С. 75-91.

81. Штерншис М.В. Повышение эффективности микробиологической борьбы с вредными насекомыми: Монография / М.В. Штерншис / Новосиб. гос. аграр. ун-т. Новосибирск, 1995. - 194 с.

82. Штерншис М.В. Регуляция численности вредителей сельскохозяйственных культур с помощью энтомофагов / М.В. Штерншис. -Новосибирск, 1991. 60 с.

83. Юдина Т.Г. Действие 5-эндотоксинов четырех подвидов Bacillus thuringiensis на различных прокариот / Т.Г. Юдина, JT.H. Бурцева // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 1. - С. 25-31.

84. Юдина Т.Г. Чувствительность диссоциантов Micrococcus luteus к действию 5-эндотоксинов Bacillus thuringiensis / Т.Г. Юдина, Е.С. Милько, Н.С. Егоров// Микробиология. 1996. - Т. 65, № 3. - С. 365-369.

85. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (Эволюционные экологические и медико биологические аспекты) / О.Ю. Янковский - СПб.: Игра, 2000. - 294 с.

86. A signal peptide secretion-dependent bacteriocin from Carnobacterium divergens / R.W. Worobo, M.J. van Belkum, M. Sailer, K.L. Roy, J.C. Vederas, M.E. Stiles // Bacteriol. 1995. - V. 177. - P. 3143-3149.

87. Activity of superoxide dismutase and catalase in the bean weevil (Acanthoscelides obtectus) selected for postponed senescence / D. Seslija, D. Blagojevic, M. Spasic, N. Tucic // Exp. Gerontol. 1999. - V. 34, № 2. - P. 18595.

88. Ahern M. Isolation and characterization of a novel bacteriocin produced by Bacillus thuringiensis strain B439 / M. Ahern, S. Verschueren, D. Sinderen // FEMS Microbiology Letters. -2003. V. 220. - P. 127-131.

89. Ahmad S. Glutathione peroxidase activity in insects: a reassessement / S. Ahmad, M.A. Beilstein, R.S. Pardini // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1989. -V. 12.-P. 31-49.

90. Ahmad S. Mechanisms for regulating oxygen toxicity in phytophagous insects / S. Ahmad, R.S. Pardini // Free Radic. Biol. Med. 1990. -V. 8, №4.-P. 401-413.

91. Aldrin epoxidation, dihydroisodrin hydroxylation and p-cloro-N-methyl-aniline demethylation in six species of saturniid larvae / R.I. Krieger, C.F. Wilkinson, L.J. Hicks, E.F. Taschenberd // Econ. Entomol. 1976. - V. 69, № 1. -P. 1-5.

92. Andrews R.E. Protease activation of the entomocidal protoxin of Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki/ R.E. Andrews, M.M. Bibilos, L.A. Bulla// Appl. Environ. Microbiol. 1985. - V. 50. - P. 737-742.

93. Andrews R.E. Protease activation of the entomocidal protoxin of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki / R.E. Andrews, M.M. Bibilos, L.A. Bulla // Appl. Environ. Microbiol. 1985. - V. 50. - P. 737-742.

94. Angus Т.A. A bacterial toxin paralyzing silkwarm larvae / T.A. Angus // Nature. 1954. - V. 173. - P. 545-546.

95. Angus T.A. Comparative toxicity of the parasporal inclusions of three entomogenous bacteria / T.A. Angus // Invertebr. Pathol. 1967. - V. 9. - P. 256260.

96. Antioxidant defenses in caterpillars: role of the ascorbate-recycling system in the midgut lumen / R.V. Barbehenn, S.L. Bumgarner, E.F. Roosen, M.M. Martin // Insect Physiol. 2001. - V. 47. - P. 349-357.

97. Antioxidant status and stress resistance in long- and short-lived lines of Drosophila melanogaster / R.J. Mockett, W.C. Orr, J.J. Rahmandar, B.H. Sohal, R.S. Sohal // Exp. Gerontol. 2001. - V. 36. - P. 441-630.

98. Aptosoglou S.G. Distribution and characterization of Bacillus thuringiensis in the environment of the olive in Greece / S.G. Aptosoglou, A. Sivropoulou, S.I. Koliais // Microbiologica. 1997. - V. 20. - P. 69-76.

99. Aranda E. Interactions of Bacillus thuringiensis crystal proteins with the midgut epithelial cells of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) / S.G. Aptosoglou, A. Sivropoulou, S.I. Koliais // Invertebr. Pathol. 1996. - V. 68. -P. 203-212.

100. Aronson A. The protoxin composition of Bacillus thuringiensis insecticidal inclusions affects solubility and toxicity / A. Aronson // Appl. Environ. Microbiol. 1995. - V. 61. - P. 4057-4060.

101. Asperen K. van. A study of housefly esterase by means of a sensitive colorimetric method / K. van. Asperen // Insect Physiol. 1962. - V. 8. - P. 401416.

102. Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, strain BI 256-82: a third pathotype within the H-serotype 8a8b / A. Krieg, W. Schnetter, A.M. Huger et al. // System. Appl. Microbiol. 1987. - V. 9. - P. 138-141.

103. Barbehenn R.V. Gut-Based antioxidant enzymes in a polyphagous and a graminivorous grasshopper / R.V. Barbehenn // Chem. Ecol. 2002. - V. 28, №. 7.-P. 1329-1347.

104. ИЗ.ВееЬее Т. Differential inhibition of mammalian ribonucleic acid polymerases by an exotoxin from Bacillus thuringiensis / T. Beebee, A. Korner, R.P.M. Bond // Biochem. 1972. - V. 227. - P. 619-625.

105. Biochemical defense of pro-oxidant plant allelochemicals by herbivorous insects / S. Ahmad // Biochem. Syst. Ecol. 1992. - V. 20. - P. 269296.

106. Biosynthesis of bacteriocins in lactic acid bacteria / I.F. Nes, D.B. Diep, L.S. Havarstein, M.B. Brurberg, V. Eijsink, H. Holo // Antonie van Leeuwenhoek 1996. - V. 70. - P. 113-128.

107. Bizani D. Characterization of a bacteriocin produced by a newly isolated Bacillus sp. Strain 8 A / D. Bizani, A. Brandelli // Appl. Microbiol. -2002.-V. 93.-P. 512-519.

108. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding / M.M. Bradford // Anal. Biochem. 1976. - V. 72. - P. 248-254.

109. Bulet Ph. A novel insect defensin mediates the inducible antibacterial activity in larvae of the dragonfly Aeschna cyanea (Paleoptera, Odonata) / Ph. Bulet, S. Cociancich // Eur. Biochem. 1992. - V. 209. - P. 977-984.

110. Cabbage looper antioxidant enzymes: tissue specificity / S. Ahmad, D.L. Duval, L.C. Weinhold, R.S. Pardini // Insect. Biochem. 1991. - V. 21. - P. 563-572.

111. Caratenoids, tocopherols, and thiols as biological singlet molecular oxygen quenchers / P. Dimascio, T.P.A. Devasagayam, S. Raiser, H. Sies // Biochem. Soc. Trans. 1990. - V. 18.-P. 1054-1056.

112. Carroll J. Proteolytic processing of a coleopteran-specific 5-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. tenebrionis / J. Carroll, J. Li, D.J. Ellar // Biochem. 1989.-V. 261.-P. 99-105.

113. Characterization of a broad range antimicrobial substance from Bacillus cereus / P.A. Risoen, P. Ronning, I.K. Hegna, A.-B. Kolsto // Applied Microbiology. 2004. - V. 96. - P. 648-655.

114. Characterization of a broad range antimicrobial substance from Bacillus cereus / P.A. Risoen, P. Ronning, I.K. Hegna, A.-B. Kolsto // Applied Microbiology. 2004. -V. 96. - P. 648-655.

115. Chien C. Studies on glutathione ^-transferase in Helicoverpa (=Heliothis) zea / C. Chien, W.C. Dauterman // Insect Biochem. 1991. - V. 21. -P. 857-864.

116. Chilcott C.N. Isolation and toxicity of Bacillus thuringiensis from soil and insect habitats in New Zealand / C.N. Chilcott, P.J. Wigley // Invertebr. Pathol. 1993.-V. 61.-P. 244-247.

117. Choi G.J. Involvement of catalase and superoxide dismutase in resistance of botrytis cinerea to dicarboximide fungicide vinclozolin / G.J. Choi, H.J. Lee, K.Y. Cho // Pesticide biochem. and physiol. 1997. - V. 59. - P. 1-10.

118. Choi J. Characterization of superoxide dismutase activity in Chironomus riparius Mg. (Diptera, Chironomidae) larvae a potential biomarker / J. Choi, H. Roche, T. Caquet // Сотр. Biochem. Physiol. - 1999. - V. 124 C. - P. 73-81.

119. Crickmore N. The diversity of Bacillus thuringiensis 5-endotoxins / N. Crickmore // Entomopathogenic bacteria: from laboratory to field application. -Kluwer Academic Publishers, 2000. P. 65-78.

120. Cu-binding proteins of digestive tract of Galleria mellonella caterpillars (Lepidoptera: Pyralidae) / B. Polek, J. Godocikova, R. Batora, M. Ursinyova // Biologica. 1993. - V. 48. - P. 631 -636.

121. Dalhammar G. Characterization of inhibitor A, a protease from Bacillus thuringiensis which degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insect / G. Dalhammar, H. Steiner // Eur. Biochem. -1984.-V. 139.-P. 247-252.

122. De Lucca A.J. Bacillus thuringiensis distribution in soils of the United States / A.J. De Lucca, J.G. Simonson, A.D. Larson // Can. Microbiol. 1981. - V. 27.-P. 865-870.

123. Degradation of Bacillus thuringiensis serovar kurstaki after aeriall application to a Polish pine stand / P.H. Damgaard, H. Malinowski, B. Glowacka et al. // IOBC/WPRS Bulletin. 1996. - V.l 9. - P. 61-65.

124. Delves-Broughton J. Nisin and its uses as food preservative / J. Delves-Broughton // Food Technology. 1990. - V. 44. - P. 100-113.

125. Determination and distribution of cry-type genes of Bacillus thuringiensis isolates from Taiwan / K.-F. Chak, D.-C. Chao, M.-Y. Tseng et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1994. - V. 60. - P. 2415-2420.

126. Donovan W.P. Cloning of the nprA gene for neutral protease A of Bacillus thuringiensis and effect of in vivo deletion of nprA on insecticidal crystal protein / W.P. Donovan, Y. Tan, A.C. Slaney // Appl. Environ. Microbiol. 1997. -V. 63.-P. 2311-2317.

127. Donovan W.P. Gene knockout demonstrates that vip3A contributes to the pathogenesis of Bacillus thuriengiensis toward Agrotis ipsilon and Spodoptera exigua / W.P. Donovan, J.C. Donovan, J.T. Engleman // Inverteb. Pathology. -2001.-P. 1-7.

128. Ebersold H.R. Changes in the structure of the gut epithelium of the Pieris Brassicae in-duced by the endotoxin of Bt. / H.R. Ebersold // Bull. soc. entomol. Suisse. -1977. V. 50. - P. 269-276.

129. Edlund T. Evidence for two immune inhibitors from Bacillus thuringiensis interfering with the humoral defense system of saturniid pupae / T. Edlund, I. Siden, H.G. Boman // Infect. Immun. 1976. - V. 14. - P. 934-941.

130. Edwards D.L. Novel isolates of Bacillus thuringiensis having activity against nematodes / D.L. Edwards, J. Payne, G.G. Soares; Pat. USA 4948734. Mycogen Corp. № 84653. 12.08.87. 14.08.1990.

131. Effect of Bacillus thuringiensis toxins on the midgut of the nun moth Lymantria monacha / C. Rausell, N. De Decker, I. Garcia-Robles, B. Escrihe, E. Van Kerkhove, M. D. Real, A. C. Martinez-Ramirez // Invert. Pathol. 2000. - V. 75.-P. 288-291.

132. Effect of Bacillus thuringiensis toxins on the midgut of the nun moth Lymantria monacha I C. Rausell, N. De Decker, I. Garcia-Robles, B. Escrihe, E. Van Kerkhove, M.D. Real, A.C. Martinez-Ramirez // Invert. Pathol. 2000. - V. 75.-P. 288-291.

133. Effect of the host plant on the antioxidative defence in the midgut of Lymantria dispar L. Caterpillars of population origins / V. Peric-Mataruga, D. Blagojevic, M.B. Spasic, J. Ivanovic, M. Jankovic-Hladni // Insect Physiol. 1996. -V. 43.-P. 101-106.

134. Esterase gene amplification in Culex pipiens / T. Gullemaund, N. Makate, B. Hirst, A. Callaghan // Insect Mol. Biol. 1997. - V. 6. - P. 319-327.

135. Esterase patterns of species in the Drosophila buzzatii cluster / A.S. Lapenta, H.E.M. de Campos Bicudo, C. R. Ceron, J.A. Cordeiro // Cytobios. -1995.-V. 84.-P. 13-29.

136. Favret M.E. Thuricin: The bacteriocin produced by Bacillus thuriengiensis / M.E. Favret, A.A. Yousten // Invert. Pathol. 1989. - V. 53. - P. 206-216.

137. Feitelson J.S. Bacillus thuringiensis: insects and beyond / J.S. Feitelson, J. Payne, L. Kim // Bio Technology. 1992. - V. 10. - P. 271-275.

138. Felton G.W. Antioxidant systems in insects / G.W. Felton, C.B. Summers // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1995. - V. 2. - P. 187-197.

139. Felton G.W. Ascorbate oxidation reduction in Helicoverpa zea as a scavenging system against dietary oxidants / G.W. Felton, S.S. Duffey // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1992. - V. 19. - P. 27-37.

140. Feyereisen R. Insect P450 enzymes / R. Feyereisen // Ann. Rev. Entomol. 1999. - V. 44. - P. 507-533.

141. Fisher F.M. Nosema as a source of juvenile hormone in parasitized insects / F.M. Fisher, R.C. Sanborn // Biol. Bull. 1964. - V. 126. - P. 235-252.

142. Fisher F.M. Production of insect juvenile hormone by the microsporidian parasite Nosema / F.M. Fisher, R.C. Sanborn // Nature. 1962. -V. 194.-P. 1193.

143. Franz C.M.A.P. Simple method to identify bacteriocin induction peptides and to auto-induce bacteriocin production at low cell density / C.M.A.P. Franz, M.E. Stiles, M.J. van Belkum // FEMS Microbiol. Letters 2000. - V. 186. -P. 181-185.

144. Gill S.S. The mode of action of Bacillus thuringiensis endotoxins / S.S. Gill, E.A. Cowles, P.V. Pietrantonio // Annu. Rev. Entomol. 1992. - V. 37. -P. 661-636.

145. Golgberg L.J. A bacterial spore demonstrating rapiol larvicidal activity against Anopheles sergentii, Aedes aegypti and Culex pipiens / L.J. Golgberg, J. Margalitt // Mosq. News. 1977. - V. 37. - P. 355-358.

146. Grant D.F. Glutathione S-transferase 1 and 2 in susceptible and insecticide resistant Aedes aegypti / D.F. Grant, F. Matsumura // Pestic. Biochem. Physiol. 1989.-V. 33.-P. 132-143.

147. Griego V. M. Scanning electron microscopy of the disruption of Tobacco Hornworm, Manduca Sexta midgut by Bt endotoxin / V. Griego // Invert. Pathol. 1980.-V. 35.-P. 186-189.

148. Gu X. Developmental profiles and characteristics of haemolymph juvenile hormone esterase, general esterase and juvenile hormone binding in the cricket, Gryllus assimilis / X. Gu, A.J. Zera // Сотр. Biochem. Physiol. 1994. -V. 107.-P. 553-560.

149. Habig W.H. Glutathione-S-transferases / W.H. Habig, M.J. Pabst, W.B. Jakoby // Biol. Chem. 1974. -V. 249. - P. 7130-7139.

150. Haider M.Z. Analysis of the molecular basis of insecticidal specificity of Bacillus thuringiensis crystal 5-endotoxin / M.Z. Haider, D.J. Ellar // Biochem. 1987.-V. 248.-P. 197-201.

151. Halliwell B. The antioxidants of human extracellular fluids / B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge // Arch. Biochem. Biophys. 1990. - V. 280. - P. 1-8.

152. Heimpel A.M. Bacterial insecticides / A.M. Heimpel, T.A. Angus // Bacterial. Rev. 1960. -V. 24. - P. 266-288.

153. Heimpel A.M. The pH in the gut and blood of the larch sawfly, Pristiphora erichsonii (Htg) and other insects with reference to the pathogenicity of Bac.cereus Fr. et Fr. / A.M. Heimpel // Canad. Zool. 1955. - V. 33. - P. 99106.

154. Helinski D. Genetic engineering of microorganisms for chemicals / D. Helinski; A. Hollaender (ed.). Plenum Press. 1982. - P. 5-24.

155. Herbert D.A. Bioassay of a beta-exotoxin of Bacillus thuringiensis against Geocoris punctipes (Hemiptera: Lygaedae) / D.A. Herbert, J.D. Harper // Econ. Entomol. 1986. - V. 79. - P. 592-595.

156. Hinton A.C. Purification of juvenile hormone esterase and molecular cloning of the cDNA from Manduca sexta / A.C. Hinton, B.D. Hammock // Insect. Biochem. Mol. Biol. 2001. - V. 32. - P. 57-66.

157. Hirayama K. Effect of oxidative stress on interorgan metabolism of glutathione / K. Hirayama, A. Yasutake, M. Inoue // Med. Biochem. Chem. Asp. Free Rad. -1989. P. 559-562.

158. Hoffman M.E. Correlation between cytotoxic effect of hydrogen peroxide and the yield of DNA strand breaks in cells of different species / M.E. Hoffman, A.C. Mello-Filcho, R. Meneghini // Biochim. Biophys. Acta. 1984. -V. 781.-P. 234-238.

159. Hofte H. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis / H. Hofte, H.R. Whitely // Microbiol. Rev. 1989. - V. 53. - P. 242-258.

160. Hooper G.H.S. Esterase mediated hydrolysis of naphtyl esters,malathion, methoprene, and cecropia juvenile hormone in Culex pipiens pipiens /

161. G.H.S. Hooper // Insect Biochem. 1976. - V. 6. - P. 255-266.

162. Huang F. Comparison of midgut proteinases in Bacillus thuringiensis susceptible and - resistant Europian corn borer, Ostrinia nubilalis (Lepidoptera: Pyralidae) / F. Huang, K. Zhu, L. Buschman // Pesticide Biochem. Physiol. - 1999. -V. 65.-P. 132-139.

163. Identification of p-exotoxin and a new exotoxin in Bacillus thuringiensis by using high-performance liquid chromatography / B.L. Levinson, K.J. Kasyan, S.S. Chiu et al. // Bacterid. 1990. - V. 172. - P. 3172-3179.

164. Identity of megacin A with phospholipase A. / M. Ozaki, Y. Higashi,

165. H. Saito, T. An, T. Amano // Biken. 1966. - V. 9. - P. 63-76.

166. Insect glutathione ^-transferases. Biochemical characteristics of the major forms from houseflies susceptible and resistant to insecticides / D. Fournier, J.-M. Bride, M. Poirie, J.B. Berge, F.W. Plabb // Biol. Chem. 1992. - V. 267. -P. 1840-1845.

167. Integration of the 8-endotoxin gene of Bacillus thuringiensis into the chromosome of root-colonizing strains of Pseudomonas using Tn5 / M.G. Obukowitz, F.T. Perlak, K. Kusamo-Kretzner et al. // Gene. 1986. - V. 45. - P. 327-331.

168. Intestinal mucosal lipid peroxidation and absorptive function in Salmonella typhimurium mediated intestinal infection / A. Mehta, S. Singh, V.

169. Dhawan, K.N. Ganguly // Mol. and Cell. Biochem. 1998. - V. 178. - P. 345-352.188.1shaaya I. Insect detoxifying enzymes: their importance in pesticide synergism and resistance /1. Ishaaya // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1993. -V. 22. - P. 263-276.

170. Isolation and characterization of enterocin EJ97, a bacteriocin produced by Enterococcus faecalis EJ97 / A. Galvez, E. Valdivia, H. Abriouel, E. Camafeita, E. Mendez, M. Martinez-Bueno, M. Maqueda // Arch Microbiol. -1998.-V. 171.-P. 59-65.

171. Jack R.W. Bacteriocins of Gram-positive bacteria / R.W. Jack, J.R. Tagg, B. Ray // Microbiological Reviews. 1995. - V. 59. - P. 171-200.

172. Jetten A.M. Nature and properties of a Streptococcus epidermidis bacteriocin / A.M. Jetten, A.M. Vogels // Bacteriol. 1972. - V. 112, № 1. - P. 243-250.

173. Johnson D.E. Contribution of Bacillus thuriengiensis spores to toxicity of purified Cry proteins towards Indianmeal moth larvae / D.E. Johnson, W.H. McGaughey // Curr. Microbiol. 1996. - V. 33. - P. 54-59.

174. Kaelin P. Isolation of Bacillus thuringiensis from stored tobacco and Lasioderma serricorne (F) / P. Kaelin, P. Morel, F. Gadani // Appl. Environ. Microbiol. -1994. V. 60. - P. 19-25.

175. Keller M. Digestion of 6-endotoxin by gut proteases may explain reduced sensitivity of advanced instar larvae of Spodoptera littoralis to CrylC / M. Keller, B. Sneh, N. Strizhov // Insect Biochem. Molec. Biol. 1996. - V. 26. - P. 365-373.

176. Khodr В. Modulation of inflammation by reactive oxygen species: implications for aging and tissue repair / B. Khodr, Z. Khalil // Free Radical Biol. Med. 2001.-V. 30, № l.-P. 1-8.

177. Kim Y.T. The p-exotoxin of Bacillus thuringiensis. I. Isolation and characterization / Y.T. Kim, H.T. Huang // Invertebr. Pathol. 1970. - V. 15. - P. 100-108.

178. Klaenhammer T.R. Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria / T.R. Klaenhammer // FEMS Microbiology Review. 1993. - V. 12. - P. 39-86.

179. Klein C. Biosynthesis of the lantibiotic subtilin is regulated by a histidine-kinase; response regulator system / C. Klein, C. Kaletta, K.D. Entian // Appl. and Environ. Microbiol. 1993. - V. 59. - P. 296-303.

180. Konisky J. Bacteriocins. In: The bacteria a treatise on structure and function / J. Konisky; L.N. Ornson, J.R. Sokatch (ed.). New York, Acad. Press, 1978.-V. 6.-P. 71-136.

181. Kono Y. Superoxide radical inhibits catalase. Plants / Y. Kono, I. Fridovich//Biol. Chem.- 1982.- V. 257. -P. 5751-5753.

182. Kotze A.C. Purification and properties of glutathione-S-transferases from the larvae of the Australian sheep blowfly, Lucilia cuprina (Wiedemann) / A.C. Kotze, H.A. Rose // Insect Biochem. 1989. - V. 19. - P. 703-713.

183. Kramer K.J. Insect chitinases: molecular biology and potential use as biopesticides / K.J. Kramer, S. Muthukrishnan // Insect Biochem. Molec. Biol. -1997.-V.27.-P. 887-900.

184. Krieg A. Use of cryptograms for characterization of strains of the Bacillus thuringiensis-Bacillus cereus group/ A. Krieg // Invertebr. Pathol. 1971. -V. 17, №2.-P. 297-298.

185. Krieger R.I. Properties of the aldrin epoxidase system in the gut and fat body of a caddisfly larva / R.I. Krieger, P.W. Lee // Econ. Entomol. 1973. -V. 66,№ l.-P. 1-6.

186. Kii E. Submitochondrial localization of kynurenine 3-hydroxylase from ovaries Ephestia kUhniella, Stratakis emmanuel / E. Kii // Insect Biochem. -1981.-V. 11.-P. 735-741.

187. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. 1970. - V. 227. - P. 680685.

188. Lands W.E.M. Lipid metabolism / W.E.M. Lands // An. Rev. Biochem. 1965. - V. 34. - P. 313-339.

189. Lecadet M.M. Bt-toxin-the proteinaceous crystal. / M.M. Lecadet; In: Microbiol toxins. Ed. Montie Th. C., N.Y.: Acad. Press, 1970. V. 3. - P. 437471.

190. Lee K. Glutathione S-transferase activities in phytophagous insects: induction and inhibition by plant phototoxins and phenols / K. Lee // Insect Biochem. 1991. - V. 21. - P. 353-361.

191. Linde A. Juvenile hormone determination in healthy and microsporidia-infected larvae of lepidoptera / A. Linde, M. Henn // Proceedings of 26th Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology, Ashville, NC. -1993.-P. 99.

192. Locke M. Iron economy in insects: Transport, metabolism, and storage / M. Locke, H. Nichol // Annu. Rev. Entomol. 1992. - V. 37. - P. 195215.

193. Lord K.A. Hydrolysis of ester by extracts of insects / K.A. Lord, C. Potter//Nature. 1953.-V. 172.-P. 679-683.

194. Lovgren A. Molecular characterization of immune inhibitor A, a secreted virulence protease from Bacillus thuringiensis / A. Lovgren, M. Zhang, A. Engstrom // Mol. Microbiol. 1990. - V. 4. - P. 2137-2146.

195. Luthy P. Insecticidal toxins of Bacillus thuringiensis / P. Luthy // FEMS Microbiol. Lett. 1980. - V. 8. - P. 1-7.

196. Lysenko O. Some characteristics of Galleria mellonella hemolymph proteins / 0. Lysenko // Invertebr. Pathol. 1972. - V. 19. - P. 335-341.

197. Martin P.A.W. Worldwide abundance and distribution of Bacillus thuringiensis isolates / P.A.W. Martin, R.S. Travers // Appl. Environ. Microbiol. -1989.-V. 55.-P. 2437-2442.

198. Mattews M.S. Ascorbate peroxidase: a novel antioxidant enzyme in insects / M.S. Mattews, C.B. Summers, G.W. Felton // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1997. - V. 34. - P. 57-68.

199. McCord J.M. Superoxide dismutase: an enzymic function for erythro-cuprein (hemocuprein) / J.M. McCord, I. Fridovich // Biol. Chem. 1969. - V. 244. - P. 6049-6055.

200. Meister A. On the antioxidant effects of ascorbic acid and glutathione / A. Meister // Biochem. Pharmacol. 1992. - V. 44. - P. 1905-1915.

201. Milner R.J. Nosema whitei, a microsporidian pathogen of some species of Tribolium. I. Morphology, life cycle, and germination time / R.J. Milner // Invertebr. Pathol. 1972. - V. 19. - P. 231-238.

202. Miura T. Ingibition of hydroxyl radical-induced protein damages by trolox / T. Miura, S. Muraoka, T. Ogiso // Biochem. Mol. Biol. Int. 1993. - V. 31.-P. 125-134.

203. Moll G.N. Bacteriocins: mechanism of membrane insertion and pore formation / G.N. Moll, W.N. Konings, A.J.M. Driessen // Antonie van Leeuwenhoek 1999. - V. 76. - P. 185-198.

204. Motoyama N. Interstrain comparison of glutathione-dependent reactions in susceptible and resistant houseflies / N. Motoyama, W.C. Dauterman // Pestic. Biochem. Physiol. 1975. - V. 5. - P. 480-495.

205. Mourya D.T. Post-inoculation changes in enzyme activity of Aedes aegypti infected with Chikungunya virus / D.T. Mourya, J. Hemingway, C.J. Leake // Acta Virol. 1995. - V. 39. - P. 31-35.

206. Munday R. Reduced glutathione in combination with superoxide dismutase as an important biologicale antioxidant defense mechanism / R. Munday, C.C. Winterboume // Biochem.Pharmacol. 1989. - V. 38. - P. 43494352.

207. Paes M.C. Hydrogen peroxide detoxification in the midgut of the blood-sucking insect, Rhodnius prolixus / M.C. Paes, M.B. Oliveira, P.L. Oliveira // Arch. Insect Biochem. Physiol. 2001. - V. 48. - P. 63-71.

208. Park N.J. Comparison of esterases between life stage and sexes of resistant and susceptible strains of german cockroach (Dictioptera: Blattellidae) / N.J. Park, S.T. Kamble // Econ. Entomol. 1998. - V. 91. - P. 1051-1057.

209. Partial characterization of polyfermenticin SCD, a newly identified bacteriocin of Bacillus polyfermenticus / K.H. Lee, K.D. Jun, W.S. Kim, H.D. Paik //Letters in Appl. Microbiol. -2001. V. 32.-P. 146-151.

210. Pasteur N. Tissue localization of overproduced esterases in the mosquito Culex pipiens (Diptera: Culicidae) / N. Pasteur, E. Nance, N. Bons // Med. Entomol. 2001. - V. 38. - P. 791 -801.

211. Payne J. Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarides. / J. Payne, R.J.C. Cannon, A.L. Ralph. Pat. USA 5350576, 27.09.1994. Mycogen. C.

212. Peterson J.A. Cytocrome P-450 reductase and cytochrome b5 in cytocrome P-450 catalysis / J.A. Peterson, R.A. Prough // Cytochrome P-450, structure, mechanism and biochemistry (Ed. R. Paul). New York: Plenum Press, 1986.-P. 89-117.

213. Purification and partial characterization of bacillocin 490, a novel bacteriocin produced by thermophilic strain of Bacillus licheniformis / L. Martirani, M. Varcamonti, G. Naclerio, M. De Felice // Microbiol. Cell. Factories. -2002.- V. l.-P. 1-5.

214. Qiao C.L. New esterase enzymes involved in organophosphateresistance in Culex pipiens (Diptera: Culicidae) from Guang Zhou, China / C.L. Qiao, Z.Q. Sun, J.E. Liu // Med. Entomol. 1999. - V. 36. - P. 666-670.

215. Quantitative determination of SH groups in low and high molecular weight compounds by an EPR method / V. Khramtsov, V. Yelinova, L. Weiner, T. Berezina, V. Martin, L. Volodarsky // Analytic. Biochem. 1989. - V. 182. - P. 58-63.

216. Quorum sensing by peptide pheromones and two-component signal-transduction systems in Gram-positive bacteria / M. Kleerebezem, L.E.N. Quadri, O.P. Kuipers, W.M. de Vos // Mol. Microbiol. 1997. - V. 24. - P. 895-904.

217. Rahman I. Regulation of redox glutathione levels and gene transcription in lung inflammation: therapeutic approaches / I. Rahman, W. Macnee // Free Radical Biol. Med. 2000. - V. 28, №. 9. - P. 1405-1420.

218. Ramakrishnan N. Histological changes in Plusia orichalcea cauded by Bt / N. Ramakrishnan, L.D. Tiwari // Invert. Pathol. 1967. - V. 9. - P. 579-580.

219. Ray B. Pediocins of Pediococcus species. In Bacteriocins of Lactic Acid Bacteria / B. Ray // Microbiol., Genetics and Applic. 1994. - P. 465-495.

220. Reuter A. The influence of systemic hypoxia and reoxygenation on the glutathione redox system of brain, liver, lung and plasma in newborn rats / A. Reuter, W. Klinger // Exp. Toxicol, and Pathol. 1992. - V. 44. - P. 339-343.

221. Revision of the nomenclature for the Bacillus thuringiensis pesticidal crystal proteins / N. Crickmore, D.R. Zeigler, J. Feitelson et al. // Microbiol. Molec. Biology Rev. 1998. - V. 62. - P. 807-813.

222. Rice W.C. Specific primers for the detection of vip3A insecticidal gene within a Bacillus thuringiensis collection / W.C. Rice // Lett. Appl. Microbiol. 1999. - V. 28. - P. 378-382.

223. Riethmuller U. Untersuchungen zur Wirkssamkeit von Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionisgegen Lie larven der kartoffelkafers / U. Riethmuller, G.A. Langenbruch 1988. - № 245. - S. 274.

224. Role of reactive metabolites of oxygen and nitrogen in inflammatory bowel disease / K.P. Pavlick, F.S. Laroux, J. Fuseler, R.E. Wolf, L. Gray, J. Hoffman, M.B. Grisham // Free Radical Biol. Med. 2002. - V. 33, №. 3. - P. 311-322.

225. Rukmini V. Bacillus thuringiensis crystal-endotoxin: role of proteases in the conversion of protoxin to toxin / V. Rukmini, C.Y. Reddy, G. Venkateswerlu // Biochimia. 2000. - V. 82. - P. 109-116.

226. Sampson M.N. Involvement of chitinases of Bacillus thuringiensis during pathogenesis in insects / M.N. Sampson, G.W. Gooday // Microbiology. -1998.-V. 144.-P. 2189-2194.

227. Saucier L. Induction of bacteriocin in Carnobacterium piscicola LV17 / L. Saucier, A. Poon, M.E. Stiles // Appl. Bacteriol. 1995. -V. 78. - P. 684-690.

228. Sebesta K. Mechanism of inhibition of DNA-dependent RNA polymerase by exotoxin of Bacillus thuringiensis / K. Sebesta, K. Horska // Biochem.Biophys. Acta. 1970. - V. 209. - P. 357-376.

229. Shiotsuki T. Induction of carboxylesterase isozymes in Bombyx mori by E. coli infection / T. Shiotsuki, Y. Kato // Insect Biochem. Mol. Biol. 1999. -V. 29.-P. 731-736.

230. Sies H. Oxidative stress From basic research to clinical application / H. Sies // Amer. Med. - 1991. - V. 91. - P. 313-323.

231. Small G.J. Molecular characterization of the amplified carboxyl esterase gene associated with organophosphorus insecticide resistance in the brown planthopper, Nilaparvata lugens / G.J. Small, J. Hemingway // Insect

232. Mol. Biol. 2000. - V. 9. - P. 647-653.

233. Smirnoff W.A. Field test of the effectiveness of chitinase additive to Bacillus thuringiensis Berliner against Choristoneura fumiferana / W.A. Smirnoff, A.P. Randall, R. Martineau // Can. For. Res. 1973. - V. 3. - P. 226-236.

234. Smith R.A. The phylloplane as a source of Bacillus thuringiensis variants / R.A. Smith, G.A. Couche // Appl. Environ. Microbiol. 1991. - V. 57. -P. 311-315.

235. Snyder M.J. Glutatione ^-transferases from larval Manduca sexta midgut: sequence of two cDNAs and enzyme induction / M.J. Snyder, J.K. Walding, R. Feyereisen // Insect Biochem. Molec. Biol. 1995. - V. 25, № 4. - P. 455-465.

236. Some properties of a glutathione ^-transferase from the larvae of Galleria mellonella / C.K. Chang, A.G. Clark, A. Fieldes, S. Pound // Insect Biochem. 1981,-V. 11.-P. 179-186.

237. Summers C.B. Antioxidant role of dehydroascorbic acid reductase in insects / C.B. Summers, G.W. Felton // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - V. 1156.-P. 235-238.

238. Synergism between Bacillus thuriengiensis spores and toxins against resistant and susceptible diamondback moths {plutella xylostella) / Y. Liu, B.E. Tabashnik, W.J. Moar, R.A. Smith // Appl. Environ. Microbiol. 1998. -V. 64. -P. 1385-1389.

239. Tagg J.R. Bacteriocins of Gram-Positive Bacteria. Bacteriol. / Tagg J.R., Dajani A.S., Wannamaker L.W.; Rev. 1976. - V. 40, №. 3. - P. 722 - 756.

240. Terriere L.C. Induction of detoxication enzymes in insects / L.C. Terriere // Ann. Rev. Entomol. 1984. - V. 29. - P. 71-88.

241. Thamthiankul S. Chitinase from Bacillus thuringiensis subsp. Pakistani / S. Thamthiankul, S. Suan-Ngay, S. Tantimavanich // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. - V. 56. - P. 395-401.

242. The Bacillus thuringiensis vegetative insecticidal protein Vip3A lyses midgut epithelium cells of susceptible insects / C.-G. Yu, M.A. Mullins, G.W. Warren et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - V. 63. - P. 532-536.

243. The lantibiotic mersacidin inhibits peptidoglycan synthesis by targeting lipid 11 / H. Brotz, G. Bierbaum, K. Leopold, P.E. Reynolds, H.G. Sahl // Antimicr. Agents and Chemolher. 1998. - V. 42. - P. 154-160.

244. Thuriengiensin, the p-exotoxin of Bacillus thuringiensis / K. Sebesta, J. Farcas, K. Horska et al. I I Microbial control of pests and plant diseases 19701980. Acad.Press, New York, 1981. - P. 263-276.

245. Timothy R. Total antioxidant capacity of colon in patients with chronic ulcerative colitis / R. Timothy // Digestive diseases and sciences. 2000. -V. 45.-P. 1814-1819.

246. Udupi V. Thiol compounds as protective agents in erythrocyte under oxidative stress / V. Udupi, C. Rice-Evans // Free Radical Res. Commun. 1992. -V. 16.-P. 315-323.

247. Upreti G.C. Production and mode of action of lactocin 27: bacteriocin from a homofermentative Lactobacillus / G.C. Upreti, R.D. Hinsdill // Antimicrob. agents chemother. 1975. - V. 7. - P. 139-145.

248. Van Belkum M.J. Doubleglycine type leader peptides direct secretion of bacteriocins by ABC transporters: colicin V secretion in Lactococcus lactis / M.J. Van Belkum, R.W. Worobo, M.E. Stiles // Mol. Microbiol. 1997. - V. 23. -P. 1293-1301.

249. Van der Geest L. P. S. Mode of action of Bt on the summer fruit three leafroller Adoxop-hyes orana. / L. P. S. Van der Geest // Z. angew. Entomol. -1981.-V. 91, № l.-P. 84-86.

250. Vidaver A.K. Bacteriocins: the lure and the reality / A.K. Vidaver // Plant Dis. 1983. - V. 67, № 5. - P. 471-475.

251. Voleti R. Bacillus thuringiensis crystal 8-endotoxin: Role of proteases in the conversion of protoxin to toxin / R. Voleti, Y.R. Chandrahasa, V. Guntupalli // Biochimie. 2000. - V. 82. - P. 109-116.

252. Von Tersch M. Bacteriocin from Bacillus megaterium ATTCC 19213: Comparative studies with megacin A-216 / M. Von Tersch, B. Carlton // Bacteriol. 1983a.-V. 155.-P. 866-871.

253. Von Tersch M. Megacinogenic plasmids of Bacillus megaterium / M. Von Tersch, B. Carlton // Acteriol. 1983b. - V. 155. - P. 872-877.

254. Wang J.-Y. Molecular cloning of glutathione S-thione S-transferase overproduced in an insecticide-resistant strain of the housefly (Musca domestica) / J.-Y. Wang, S. McCommas, M. Syvanen // Mol. Gen. Genet. 1991. - V. 227. -P. 260-266.

255. Wang Y. Antioxidant defense systems of two lepidopteran insect cell lines / Y. Wang, L.W. Oberley, D.W. Murhammer // Free Radical Biol. Med. -2001a.-V. 30.-P. 1254-1262.

256. Wang Y. Evidence of oxidative stress following the viral infection of two lepidopteran insect cell lines / Y. Wang, L.W. Oberley, D.W. Murhammer // Free Radical Biol. Med. 2001b. - V. 31. - P. 1448-1455.

257. Weixiong Z. Expression of superoxide dismutases, catalase and glutathione peroxidase in glioma-cells / Z. Weixiong, Y. Tao // Free Radical Biol. Med. 1999. - V. 27. - P. 1334-1345.

258. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen / A. Wendel // Enzymes Tools and Targets. - Basel: Karger. - 1988. - P. 161-167.

259. Williams D.R. Characterization of ecdysteroid 26-hydroxylase: an enzyme involved in molting hormone inactivation / D.R. Williams, M.J. Fisher, H.H. Rees // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - V. 15. - P. 389-398.

260. Winkler B.S. In vitro oxidation of ascorbic acid and its prevention by GSH / B.S. Winkler // Biochim. Biophys. Acta. 1987. - V. 952. - P. 258-264.

261. Yamvrias C. Contribution a l'tude du mode d'actiion de Bacillus thuringiensis vis-a-vis de la teigne de la farine, Anagasta kuhniella Zell. (Lepidoptera) / C. Yamvrias // Entomophaga. 1962. - V. 7. - P. 101-159.

262. Yefimenko T.M. Effect of microsporida infection on the esterases activities in Agrotis segetum caterpillars / T.M. Yefimenko, O.V. Sundukov, I.V. Issi // Vestnik zoologii. 2001. - V. 35, № 4. - P. 45-50.

263. Yu S.J. Induction of new glutathione ^-transferase isozymes by allelochemicals in the fall armyworm / S.J. Yu // Pestic. Biochem. Physiol. 1999. -V. 63.-P. 163-171.

264. Yu S.J. Insect glutathione ^-transferases / S.J. Yu // Zool. Stud. -1996.-V. 35.-P. 9-18.

265. Zhou Y.-C. Phenolics compound and an analog as superoxide anion scavengers and antioxidants / Y.-C. Zhou, R.L. Zheng // Biochem. Pharmacol. -1991.-V. 42.-P. 1177-1179.

Оглавление диссертации Дзю, Елизавета Леонидовна :: 2007 :: Новосибирск

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Дзю, Елизавета Леонидовна, автореферат

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2007 года, Дзю, Елизавета Леонидовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций