Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологии лекарственных средств с продуктами пчеловодства

На правах рукописи

Епифанова Алина Валерьяновна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ С ПРОДУКТАМИ ПЧЕЛОВОДСТВА

14.04.01 - Технология получения лекарств

1 5 Ш 2015

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

005570520

Уфа - 2015

005570520

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: Шикова Юлия Витальевна

Официальные оппоненты: Пантюхнн Андрей Валерьевич

доктор доцент

фармацевтических наук.

доктор фармацевтических наук, ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский

университет имени

В.И.Разумовского» Минздрава

России, заведующий кафедрой фармацевтической технологии и биотехнологии

кандидат фармацевтических наук, ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт

лекарственных и ароматических растений», заведующая отделом фармацевтической технологии

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Джавахян Марина Аркадьевна

Зашита состоится «22» сентября 2015 года в 16.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.088.01, созданного на базе ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России (197376, г. Санкт-Петербург, \\л. проф. Попова, д.14, лит.

А).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России (197227, г. Санкт-Петербург, пр. Испытателей, д.14) и на сайте организации (https://sites.google.eom/a/pharrninnotech.com/dissovct). Автореферат разослан « » 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.088.01. кандидат фармацевтических наук, доцент

Орлов А.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В соответствии с Федеральной целевой программой «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» приоритетным является разработка новых лекарственных препаратов, обладающих эффективностью, высоким профилем безопасности, доступностью для населения и конкурентоспособностью на фармацевтическом рынке [Стратегия развития фармацевтической промышленности Российской Федерации на период до 2020 года: утв. Приказом Минпромторга России от 23.10.2009 №965].

Продукты пчеловодства имеют высокие терапевтические показатели. Они применяются в различных областях медицины: в отоларингологи в виде спрея «Пропосол» (Россия), в дерматологии мази «Пропоцеум» (Россия), в гинекологии суппозиториев «Мипропол» и «Мипросепт» (Румыния) для лечения воспалительных процессов. Экстракт мелонеллы (ЭМ) обладает противовирусным, противовоспалительным и тонизирующим эффектами. Особый интерес представляют различные комбинации продуктов пчеловодства в одной лекарственной форме.

Потребность в новых средствах, имеющих иммуномодулирующие, репаративные и противовоспалительные эффекты, удовлетворяется не полностью. В связи с этим поиск новых отечественных лекарственных препаратов, произведенных на российском сырье, обладающих аптиоксидантной активностью является актуальным.

Обоснованным является применение биологически активных антиоксидантов - ЭМ и экстракта прополиса (ЭП) - в комплексном лечении воспалительных процессов в гинекологии, профилактике и лечении острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) и гриппа, т.к. так как их противовоспалительный эффект заключается во влиянии на транспорт АТФазы, фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов, в иигибировании гиалуронидазы, фосфолипазы А2, циклооксигеназы, гипоксигеназы, гистидиндекарбоксигеназы и других ферментов, вследствие которых замедляется и уменьшается выделение медиаторов воспаления [Лудянский Э.А., 1994]. Применение указанных экстрактов оказалось весьма эффективным в лечении ряда заболеваний, а имеющиеся экспериментальные данные свидетельствуют о широких перспективах расширения показаний для их применения.

Следовательно, разработка мягких лекарственных форм с ЭМ и ЭП в виде суппозиториев для комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологии и

назальной мази, применяемой с целью профилактики и лечения ОРВИ и гриппа, представляет значительный интерес.

Степень разработанности темы. Рынок мягких лекарственных средств представлен в основном синтетическими препаратами и препаратами, содержащими экстракты растений. Технологические схемы получения мазей и суппозиториев достаточно разработаны, однако отсутствуют сведения о совместном применении различных вспомогательных веществ в сочетании с продуктами пчеловодства. Кроме того, нет данных о совместном применении таких сложных по химическому составу компонентов, как ЭМ и ЭП в одной лекарственной форме.

Цель и задачи работы. Разработка новой технологии мягких лекарственных форм, предназначенных для профилактики, комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологии, профилактики и комплексного лечения ОРВИ и гриппа.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать и обосновать состав и технологию приготовления, методы анализа суппозиториев и мази, содержащих ЭМ и ЭП;

2. Изучить влияние вспомогательных веществ на показатели качества суппозиториев и мази, содержащих ЭМ и ЭП;

3. Изучить структурно-механические и реологические свойства суппозиториев и мази, содержащих ЭМ и ЭП;

4. Определить противовирусную биологическую активность мази с ЭМ и ЭП in vivo; изучить антибактериальную и антиоксидантную биологическую активность суппозиториев и мази с ЭМ и ЭП in vitro;

5. Определить стабильность и сроки годности разработанных лекарственных форм, содержащих ЭМ и ЭП;

6. Составить проекты нормативной документации в виде фармакопейной статьи предприятия на ЭМ спиртовой, суппозитории «Проложен» и мазь «Антивир».

Научная новизна. На основании технологических и биофармацевтических исследований впервые предложены составы и технология получения мягких лекарственных форм в виде суппозиториев и мази, содержащих ЭМ и ЭП. Разработаны методы анализа и обоснованы показатели норм качества лекарственных форм, установлен их срок годности. Определена биологическая активность суппозиториев и мази: антиоксидантная, антимикробная (суппозитории), противовирусная (мазь).

Научная новизна полученных результатов подтверждена 3 патентами РФ на изобретения: «Способ комплексного лечения неспецифических воспалительных

заболеваний женской половой сферы» № 2481102, «Суппозитории с экстрактом личинок большой восковой моли и экстрактом прополиса для лечения гинекологических заболеваний» № 2429867, «Мазь с экстрактом личинок большой восковой моли и экстрактом прополиса для профилактики и лечения вирусной инфекции» № 2477141.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные экспериментальные данные послужили материалом для создания суппозитория «Проложен» для комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологии и назальной мази «Антивир» для профилактики и комплексного лечения ОРВИ и гриппа.

По результатам проведенных исследований составлены проекты:

- фармакопейной статьи предприятия «Экстракт мелонеллы спиртовой»;

- фармакопейных статей предприятия на лекарственные формы: «Суппозитории «Проложен» с ЭМ и ЭП», «Назальная мазь «Антивир» с ЭМ и ЭП»;

- лабораторных регламентов на лекарственные формы «Суппозитории «Проложен» с ЭМ и ЭП», «Назальная мазь «Антивир» с ЭМ и ЭП».

Полученные данные диссертационной работы включены в учебный процесс кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии БГМУ (акт внедрения от 25.12.14 г), кафедры акушерства и гинекологии № 3 БГМУ (акт внедрения от 25.12.14 г), кафедры фармации медицинского факультета Бурятского медицинского университета (акт внедрения от 17.12.14 г), кафедры фармации Южно-уральского государственного медицинского университета (акт внедрения от 30.08.14 г). Дальнейшие исследования по теме диссертационной работы включены в стратегическое планирование развития перспективных научных изысканий Академии наук Республики Башкортостан (справка-подтверждение от 19.01.15 г) и ГАНУ «Центр аграрных исследований» Республики Башкортостан (справка-подтверждение от 19.01.15 г).

Методология и методы исследования. Методология исследования включала оценку различных составов: суппозиториев, мазей на основе современных вспомогательных веществ. Для оценки качества мазей и суппозиториев использовались тесты, характеризующие структурно-механические и реологические свойства: вязкость, текучесть (пластичность), твердость суппозиториев, намазываемость мази. Стабильность лекарственных форм оценивали по показателям качества в условиях естественного хранения в течение 27 месяцев при комнатной температуре (мазь) и в условиях холодильной камеры (суппозитории).

Основные показатели качества разрабатываемых лекарственных форм определяли в соответствии с ГФ XI, XII изданий; содержание ЭМ и ЭП определяли

спектрофотометрически, ТСХ-методом, хемилюминесцентным анализом и биологическим методом.

Качество мягких лекарственных форм оценивали по таким показателям, как внешний вид, средняя масса, растворимость и намазываемость мази. Установление сроков годности препаратов проводили при их хранении в естественных условиях.

Положения, выносимые на защиту

1. Составы и технология получения суппозиториев «Проложен», содержащих ЭМ и ЭП (патент РФ № 2429867, патент РФ 2481102), назальной мази «Антивир» с ЭМ и ЭП (патент РФ №2477141).

2 Результаты сравнительного исследования влияния вспомогательных веществ на структурно-механические и реологические свойства суппозиториев и мази.

3. Методы анализа разработанных лекарственных форм в виде суппозиториев и мази.

4. Результаты изучения стабильности разработанных лекарственных форм.

5. Результаты изучения фармацевтических и биофармацевтических свойств мягких лекарственных форм с ЭМ и ЭП.

6. Проекты ФСП на экстракт мелонеллы спиртовой, лекарственные средства в форме суппозиториев и мази с ЭМ и ЭП.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов обеспечивалась воспроизводимостью данных, с использованием современных физико-химических, математических методов исследования, большим объемом исследуемой информации.

Основные положения работы апробированы и доложены на: Всероссийской научно-практической интернет-конференции с международным участием «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (Курск, 2011), Всероссийской конференции «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты» (Самара, 2011), XVI Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2011), Международной научно-практической конференции «Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и дальнего зарубежья» (Ярославль, 2011), Международной заочной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы науки и образования в 21 веке» (Тамбов, 2012), XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2012), XVI Международной научной конференции (Венгрия, 2012), 77-й республиканской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической

медицины» (Уфа, 2012), Proceedings of the 1st international academic conference Applied and Fundamental Studies hosted by the Publishing House «Science and Innovation Center»,and the International Journal of Advanced Studies (St. Louis, Missouri, USA, 2012); II международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье; традиции и инновации» (Москва, 2012); I съезде терапевтов Забайкальского края (Чита, 2013); Международной научно-практической конференции «Образование и наука: современное состояние и перспективы развития» (Тамбов, 2013); Международной научной конференции "Повышение качества жизни пациентов - тренд современной медицины" (Стерлитамак, 2013); V Всероссийском научно-практическом семинаре с международным участием «Геномные и протеомные технологии при создании новых лекарственных средств» (Волгоград, 2013); VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье - основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2013); X международна научна практична конференция, «Найновите научни постижения» (София, 2014); IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Проблемы фармацевтической науки и практики» (Владикавказ, 2014); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, «Инновационные технологии в фармации» (Иркутск, 2014); II Всероссийской научной интернет-конференции с международным участием «Спектрофотометрические методы анализа» (Казань, 2014).

Публикации материалов исследования. По теме диссертации опубликованы 44 научные работы, из них 12 научных статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 3 патента на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно -исследовательских работ БГМУ по проблеме «Фармакология и фармация» (Номер госрегистрацин 01200507996), направлением проблемной комиссии по фармации и фармакологии, а также в рамках программы Академии наук Республики Башкортостан, отделения медицинских наук «Изыскание и изучение новых лекарственных средств» по теме «Разработка составов и технологии лекарственных средств с продуктами пчеловодства».

Личный вклад автора в проведенное исследование и получение научных результатов. Автор диссертационной работы самостоятельно определил план исследования, сформулировал цель и задачи, проанализировал литературу, провел лабораторные исследования и статистическую обработку полученных данных. Научные

положения и выводы диссертации базируются на результатах исследований автора. Доля участия автора в накоплении информации более 85%, в обобщении и анализе - 100%.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 14.04.01 - Технология получения лекарств, а именно пункту 3 - разработка технологий получения субстанции и готовых лекарственных форм, пункту 4 - исследования по изучению особенностей технологии получения готовых лекарственных форм из различных видов субстанций, сырья и вспомогательных веществ, пункту 6 - исследования биофармацевтических аспектов в технологии получения лекарственных средств, их дизайн и изучение факторов, влияющих на биодоступность.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 189 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальных данных и их обсуждения, выводов, списка цитированной литературы, а также приложений. Работа содержит 41 таблицу и 40 рисунков. Библиографический указатель включает 159 источников, из них 34 на иностранных языках.

Приложение включает патенты РФ на изобретения, фармакопейные статьи предприятия (проекты) на ЭМ, суппозитории «Проложен», мазь «Антивир», лабораторные регламенты (проекты) на производство разработанных лекарственных форм, акты внедрения в учебный процесс, данные по валидационной оценке методик количественного определения аминокислот и флавоноидов в ЭМ, ЭП и разработанных лекарственных формах, результаты определения оптимальных суппозиторных и мазевых композиций с использованием методов математического планирования.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение.

Во введении освещены актуальность, цель и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы.

Глава 1. Обзор литературы

Обзор литературы посвящен рассмотрению рынка современных вспомогательных веществ, применяемых в производстве мягких лекарственных форм. Обсуждены современные аспекты применения продуктов пчеловодства, а именно ЭМ и ЭП в терапии различных заболеваний. Описаны фармакологические свойства указанных экстрактов. Представлен обзор по этиологии и патогенезу воспалительных заболеваний органов малого таза в гинекологии и ОРВИ, гриппа. Проанализированы современные методы

терапии данных патологий. Показана перспективность применения ЭМ, ЭП в составе суппозиториев и мази для профилактики, комплексного лечения указанных заболеваний.

Глава 2. Материалы и методы исследований

В качестве объектов исследования использовали сырье и вспомогательные вещества, по показателям качества соответствующие требованиям ГФ XII, ФС или НД (ГОСТ, ТУ).

Биологически активными компонентами в составе разработанных лекарственных форм в виде суппозиториев и мази служили спиртовые ЭМ и ЭП.

Аналитическое оборудование включало: весы аналитические BJIA-200-M; фотоэлектроколориметр КФК 2 УХЛ.4.2; спектрофотометры СФ-56 и «HEWLETT PACKARD 8452А», ротационная качалка.

Для идентификации, разделения и количественного определения основных БАВ использовали спектрофотомерию, тонкослойную хроматографию и хроматографию на бумаге. Реологические свойства препаратов изучали с помощью ротационных вискозиметров «Реотест-2» (Германия) и РВ-8М. Антиоксидантную активность ЭМ и ЭП в составе препаратов определяли на приборе «Хемилюминомер - ХЛМ - 003».

Определение сроков годности препаратов проводили, используя термостат «ТЧ-80М-2». рН растворов проб препаратов измеряли на рН-метре рН-150МИ.

Статистическую обработку результатов осуществляли согласно требованиям ГФ XI.

Глава 3. Разработка состава, технологии приготовления и биофармацевтичсские исследования суппозиториев с ЭМ и ЭП

Анализ литературы и рынка мягких лекарственных форм показал, что обоснованным является разработка препарата в виде суппозиториев, содержащих комплекс природных антиоксидантов - флавоноидов. В состав лекарственного препарата входят продукты пчеловодства в виде спиртовых ЭМ и ЭП в количестве 5% каждого, обладающих высокой степенью антиокислителыюй активности. При включении разрабатываемого препарата в виде суппозиториев в основную схему лечения прогнозируется уменьшение длительности терапии и повышение качества оказанной фармацевтической помощи.

При разработке состава суппозиториев со спиртовыми ЭМ и ЭП были выбраны гидрофильные и липофильные основы, в состав которых входили различные по своей природе вспомогательные вещества. Суппозитории массой около 3,0 г готовили методом выливания. Для создания оптимального состава и технологии приготовления суппозиториев исследовали показатели качества полученных лекарственных форм: внешний вид, отклонение от средней массы, время растворения и время полной деформации. Дополнительно проводили изучение степени высвобождения действующих

веществ из суппозиториев методом тонкослойной хроматографии. Время выдерживания пластинок с образцами суппозиториев было одинаковым для всех составов - 30 минут.

На основании проведенных исследований и двухфакторного дисперсионного анализа с последующим использованием множественного рангового критерия Дункана установлено, что лучшими суппозиторными основами являются композиции № 14, содержащая желатин, глицерин и воду и № 35, состоящая из полиэтиленгликоля (ПЭГ) 4000, лутрола Б-68 и кремофора 1Ш-40. При выборе оптимальных основ в качестве изучаемых факторов, влияющих на скорость пробега пятна и время растворения, полной деформации суппозиториев, определены две системы: уплотнители и пластификаторы.

Количественное соотношение вспомогательных веществ определяли по оценке относительной твердости, температуры плавления, степени высвобождения БАВ из основы и осмотической активности суппозиториев. Установлено, что удаление из состава суппозиторной композиции кремофора 1Ш-40 способствует уменьшению высвобождения активных компонентов на 30%. Полная замена пластификатора лутрола Я-68 на ПЭГ 4000 приводит к уменьшению степени высвобождения действующих веществ на 9,6% по отношению к первоначальному составу. Минимальная осмотическая активность наблюдается у суппозиториев, содержащих наименьшие количества лутрола Р-68 и ПЭГ 4000. При обработке экспериментальных данных установили оптимальные составы суппозиторных основ: желатин (12,7%), глицерин (62,6%), вода очищенная (24,7%); ПЭГ 4000 (44%), лутрол Р-68 (14%), кремофор ЯН-40 (42%).

Для оценки биофармацевтических свойств разработанной лекарственной формы проводили определение фармацевтической доступности суппозиториев методом равновесного диализа в модельную среду, в качестве которой использовали воду очищенную, подкисленную 0,1н соляной кислотой до значения рН 4,5 - 5,0. Интенсивность высвобождения указанных экстрактов из суппозиторных композиций отмечали по величине оптической плотности светопоглощения (спектрофотометрический способ) при длине волны 270±2 нм, соответствующей поглощению действующих веществ, в том числе аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую по реакции с нингидрином (табл. 1).

Таблица 1 - Фармацевтическая доступность суппозиториев in vitro с ЭМ и ЭП

Состав основы, № Оптическая плотность растворов ЭМи ЭП в воде (О), соответствующая количественная пропорция (%), время

15 мин 30 мин 45 мин 60 мин

D % D % D % D %

14 0,10±0,02 5,8 0,14±0,03 8,1 0,16±0,03 9,3 0,18±0,03 10,5

35 0,12±0,02 6,9 0,38±0,08 22,0 1,67±0,05 97,1 1,72±0,04 100,0

Установлено, что наиболее полное высвобождение ЭМ и ЭП, отмечено из суппозиторной основы № 35, содержащей ПЭГ 4000, лутрол Р-68 и кремофор К11-40. Максимально интенсивный процесс диализа действующих веществ из основы отмечается в интервале от 30 до 45 минут. Повышенная скорость высвобождения БАВ из суппозиториев характеризуется как критерий выбора оптимального состава носителя для суппозиториев, содержащих спиртовые ЭМ и ЭП.

Реологические свойства систем определяли при температурах в интервале от 50°С до 55°С для желатинно-глицериновой основы, при которых суппозиторная масса находится в жидком состоянии, и от 18°С до 37НС для суппозиторной основы, содержащей лутрол Р-68, кремофор 1Ш-40, ПЭГ 4000, что соответствуют предлагаемой температуре хранения суппозиториев и температуре человеческого тела (рис. 1).

Рисунок 1 «Петли гистерезиса» суппозиториев на желатинно-глицериновой основе и основе, содержащей лутрол К - 68, кремофор КП - 40, ПЭГ 4000

соответственно

формы являются

структурированными, тиксотропными системами и обладают псевдопластическими свойствами, а исследование консистентных свойств суппозиториев на указанных основах позволяет совершенствовать технологический процесс их производства (оптимальная температура дозирования суппозиториев на желатинно-глицериновой основе составила 55°С), прогнозировать оптимальные условия хранения — не выше 18±2°С. На основании полученных данных разработана технологическая схема получения суппозиториев с ЭМ и ЭП (рис.2).

100

90

80

о 70

ш

X 60

э 50

к

о 40

о

и 30

20

10

0

-50 С

-55 С

(

V

\

0 200 400

Напряжение сдвига, т

100

90

80

о 70

¡60

®50 Б

§.40 о

Ззо 20 10 0

50 100 150 Напряжение сдвига, т

Установлено, что разработанные лекарственные

BP-1.1. Санитарная обработка _производственного помещения

ВР-1.2. Санитарная обработка оборудования

ВР-1.3.

Санитарная подготовка технологической одежды

ВР-2.1. Мойка форм

I ВР-2.2. Сушка форм

ВР-3.1. Отмеривание ингредиентов

ТП-4.1. Приготовление основы

ТП-4.2. Введение ингредиентов в основу

ТП-4.3. Гомогенизация суппозиторной массы

ВР-1.КТ Санитарная подготовка производства

Отходы

ВР-2. К, Подготовка форм

ВР-3. Подготовка сырья КГ,К„

\

ч Механические потери

ТП-4. Приготовление суппозиторной КТ,К, массы

К

ТП-4.4. Вакуумирование суппозиторной »

массы

ТП-5.1. Выливание суппозиторной массы

Механические потери_

1 ТП-5.2. Охлаждение суппозиториев ч

Механические потери

I УМО-6.1. Фасовка готовой продукции

> УМО-6. Фасовка и упаковка готовой К„К, продукции

I УМО-6.2. Упаковка, этикетирование

Рисунок 2 - Технологическая схема производства суппозиториев

Согласно литературным данным [Немцова Е.Р., 2008, Varadhachary А, 2004, Hayes TG, 2005, Овсепян A.A., 2009] аминокислоты, содержащиеся в количестве до 50% в сухом веществе ЭМ, обеспечивают антиоксиднтный и антимикробный эффекты экстракта. При этом следует отметить кислоту глутаминовую — препарат, который наравне со стимуляцией окислительно-восстановительных и энергопродуцирующих процессов обладает значительным антиоксидантным влиянием, что также определяет его антигипоксантные свойства [Немцова Е.Р., 2008, Галимская Е.В., 2009]. Поэтому в

качестве параметров подлинности ЭМ выбраны: наличие пиков с максимумами светопоглощення при длине волны 270 им, наличие на ТСХ пластине на уровне PCO кислоты глутаминовой пятна с Rf 0,58. Количественное определение ЭМ предложено нормировать по содержанию суммы аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую спектрофотометрическим методом.

По данным научных исследований ряда авторов [Кузьмина К.А., 1986, Соколов И.В., 1990, Хисматулина Н.З., 2005, Браславский Н.В., 1991, 2006, 2009, 2013] в препаратах прополиса антимикробную и антиоксидантную активности обуславливают флавоноиды и фенилпропаноиды. В существующей нормативной документации на прополис и настойку (Р № 90/111/3, ФС 42-3736-99) реакция подлинности не является специфичной (простые фенолы), а количественное определение проводится без использования ГСО. Поэтому авторами предложен метод определения подлинности ЭП с помощью ТСХ-анализа, а также количественного содержания действующих веществ (суммы флавоноидов) спектрофотометрически в УФ-области по реакции с алюминия хлоридом. Поэтому для стандартизации разработанных суппозиториев с ЭМ и ЭП выбраны показатели: внешний вид, однородность, средняя масса, подлинность (по наличию на ТСХ пластине пятен на уровне кислоты глутаминовой Rf 0,58, рутина Rf 0,62, лейцина Rf 0,76, коричной кислоты Rf 0,89), время растворения, микробиологическая чистота, кислотное и йодное числа. Количественное содержание ЭМ в лекарственной форме предложено определять спектрофотометрически по сумме аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую, а ЭП - по сумме флавоноидов в пересчете на рутин методом спектрофотометрии при длине волны 420 ±2 им.

По результатам исследований установлено, что суппозитории с ЭМ и ЭП на желатинно-глицериновой и полиэтиленоксидной основах проявляют антибактериальную активность, как против грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов.

При изучении стабильности лекарственного препарата в условиях естественного хранения показана стабильность в течение не менее двух лет (табл. 2).

С использованием метода хемилюминесценции установлена способность ЭМ и ЭП к снижению окислительной активности свободных радикалов в модельной среде на 68,73% и 90% соответственно относительно контроля. Суппозитории на желатинно-глицериновой основе сохраняют антиоксидантные свойства входящих, в их состав экстрактов, снижая светосумму свечения на 39,20%.

Таблица 2 - Стабильность суппозиториев, содержащих ЭМ и ЭП на желатинно-глицериновой основе и основе, содержащей лутрол Р-68, кремофор КН-40 и ПЭГ 4000,

в процессе хранения при 18±2°С в герметичной упаковке

Срок хранения, мес., дата, № анализа Показатели качества

однородность подлинность время растворения сек. содержание аминокислот % содержание флавоноидов % кислотное число Йодное число

Суппозитории на желатшшо-глицериновой основе

0, 5.09.11г. 50911 Однородны Соответствуют 600±2 0,026±0,005 0,141±0,004 0,841 10,85

3, 5.12.11г, 51211 » » 596±2 0,026±0,002 0,141±0,005 0,897 11,54

6, 5.03.12г., 50312 » » 596±2 0,026±0,003 0,140±0,003 0,970 11,29

9, 5.06.12г., 50612 » » 598±3 0,026±0,004 0,140±0,003 0,982 11,29

12, 5.09.12г„ 50912 » » 597±1 0,026±0,001 0,140±0,002 0,982 11,30

18, 5.12.12г., 51212 » » 597±1 0,026±0,002 0, НОН),003 0,981 11,25

21,5.03.13г., 50313 » » 595±3 0,025±0,002 0,140±0,004 0,981 11,27

24,5.06.13г., 50613 » » 595±2 0,025±0,004 0,140±0,005 0,980 11,30

27,5.09.13г., 50913 » » 587±1 0,020±0,005 0,137±0,003 0,978 11,26

Суппозитории на основе, содержащей лутрол К-68, кремофор КН-40 и ПЭГ 4000

0, 5.09.11г. 50911 Однородны Соответствуют 900±2 0,026±0,002 0,141±0,004 0,789 10,50

3, 5.12.11г, 51211 » » 896±1 0,026±0,005 0,141±0,005 0,814 10,65

6, 5.03.12г., 50312 » » 897±3 0,025±0,002 0,140±0,003 0,817 10,68

9,5.06.12г., 50612 » » 896±2 0,025±0,004 0,140±0,003 0,825 10,78

12,5.09.12г., 50912 » » 898±1 0,025±0,003 0,140±0,002 0,829 10,83

18, 5.12.12г., 51212 » » 898±2 0,025±0,001 0,140±0,003 0,365 11,13

21,5.03.13г., 50313 » » 896±3 0,025±0,003 0,140±0,004 0,371 11,23

24, 5.06.13г., 50613 » » 896±3 0,025±0,002 0,140±0,005 0,371 11,30

27,5.09.13г., 50913 » » 879±5 0,019±0,003 0,140±0,004 0,374 11,25

Суппозитории на полиэтиленоксидной основе увеличивают светосумму свечения на

9,53%, полностью подавляя антиокислительную активность экстрактов, что недопустимо. Полученные результаты позволяют рекомендовать суппозитории с ЭМ и ЭП на желатинно-глицериновой основе для профилактики и комплексного лечения воспалительных заболеваний женской половой сферы.

Глава 4. Разработка состава, технологии приготовления и биофармацевтические исследования мази «Антивир» с ЭМ и ЭП

Анализ литературных данных и рынка лекарственных средств, применяемых местно при терапии вирусных инфекций, показал, что недостаточное внимание уделено препаратам с противовирусным действием, работающим на «входных воротах» инфекции. Кроме того, при лечении риновирусных инфекций немаловажным является и антиоксидантный эффект препаратов, уменьшающих течение воспалительного процесса и как следствие устраняющих симптоматические проявления болезни.

При выборе составов мазевых основ учитывались специфические особенности применения мази, а именно то, что она предназначалась для нанесения на слизистую носовой полости с целью профилактики гриппа и ОРВИ. Важными условиями являются ее хорошая намазываемость и распределение, консистенция, обеспечивающая необходимый газообмен. Ключевыми критериями выбора состава основы также являются ее способность к высвобождению активных компонентов, сохранение противовирусной и адсорбционной активности. Для создания оптимального состава изучали влияние вспомогательных веществ (пластификаторов, эмульгаторов, ПАВ) на осмотическую активность и фармацевтическую доступность мази с помощью метода двухуровневого полнофакторного планирования эксперимента 24. При обработке полученных данных установили оптимальный состав: количество ПАВ - 3%, количество сополимера стирола с малеиновым ангидридом (ССМА) - 2%, соотношение лутрола F-68 и вазелина 1:2,5, соотношение эмульгатора Т-2 и кремофора RH-40 1:1. В результате проведенных лабораторных исследований с учетом методов математического планирования разработана назальная мазь «Антивир», содержащая спиртовые ЭМ и ЭП в количестве 5% каждого, лутрол F-68 2%, кремофор RH-40 1,6%, эмульгатор Т-2 1,6%, вазелин 4,8%, ССМА 2%, воду очищенную до 100%. Разработана технологическая схема получения мази (рис. 3).

Для оценки биофармацевтических свойств мази с ЭМ и ЭП проводили определение биодоступности методом диффузии в агаровый гель. В качестве индикатора использовали 2% раствор хлорида железа (III), а препаратом сравнения служила мазевая основа без добавления ЭМ и ЭП. Результаты анализа представлены в таблице 3.

В Р-1.1. Санитарная обработка

производственного помещения

ВР-1.2. Санитарная обработка оборудования

ВР-1.3. Санитарная подготовка технологической одежды

ВР-1.4. Подготовка воздуха

ВР-2.1. Мойка посуды

ВР-2.2. Сушка посуды

ВР-3.1. Отмеривание ингредиентов

ТП-4.1. Приготовление основы ТП-4.2. Введение ингредиентов в основу ТП-4.3. Гомогенизация мази

УМО-6.1. Фасовка готовой продукции

УМО-6.2. Упаковка, этикетирование

ВР-1.К, Санитарная подготовка производства

Отходы

| ВР-2. Кт Подготовка посуды

| ВР-3. КТ,КХ Подготовка сырья |

Механические потери

ТП-4. К,.К, Приготовление мази |

Механические потери

УМО-6. Фасовка и упаковка готовой КТ,КХ продукции

Готовая продукция. Хранение.

Рисунок 3 - Технологическая схема производства мази назальной Таблица 3 - Диффузия активных компонентов назальной мази в агаровый гель

Объект исследования Время наблюдений

15 мин 30 мин 45 мин 24 часа

Мазь Окрашивание краев мази по периметру лунки в темно-зеленый цвет Без изменений Без изменений Средний диаметр окрашенного пятна 1,33±0,1 см

Основа Без изменений Без изменений Без изменений Без изменений

Установлено, что исследуемая мазь обладает местным действием при нанесении на

слизистую носа.

С целью определения степени намазываемости мази при ее назальной аппликации были изучены реологические параметры лекарственной формы - эффективная вязкость и

скорость сдвига. Определение проводили на ротационном вискозиметре РВ-8М при температуре 34°С. В соответствие с полученными результатами, установлено, что мазь с ЭМ и ЭП относится к неньютоновским жидкостям с псевдопластическим типом течения (рис. 4). Изучаемая система обладает свойством тиксотропности, то есть способна полностью восстановиться после полного ее разрушения под действием сдвигающих сил до первоначальных реологических параметров. Данное свойство мази обеспечивает стабильное восстановление системы без ее расслоения и седиментации.

Рисунок 4 -Зависимость эффективной вязкости мази с ЭМ и ЭП от скорости сдвига при возрастании его предельного

80 100 120 140 160

Скорость сдвига, О )[аIIряЖСНИЯ

Установлено, что лекарственная форма обладает значением предела текучести, равным 15 Па. Это позволяет препарату за счет необходимой вязкости фиксироваться на поверхности слизистой, предположительно обеспечивая необходимое взаимодействие активных компонентов, адсорбционный эффект и пролонгацию.

В результате ряда проведенных исследований установлено, что мазь «Антивир» обладает адсорбционной активностью, предположительно обеспечивающей способность лекарственной формы к прикреплению на своей поверхности вирусных и бактериальных агентов.

Для стандартизации назальной мази, содержащей ЭМ и ЭП, разработали и валидировали методики количественного определения сумм аминокислот и флавоноидов. Согласно методике содержание аминокислот определяли методом спектрофотометрии по реакции с нингидрином при длине волны 270±2 нм. Содержание аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую в назальной мази составило 1,31±0,023мг на 5 г мази. Для определения суммы флавоноидов использовали метод спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом при длине волны 420±2 нм. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в мази составило 7,138±0,113 мг на 5 г мази.

Другими параметрами стандартизации назальной мази с ЭМ и ЭП были выбраны внешний вид, однородность, рН водного извлечения, подлинность, микробиологическая чистота. На основании результатов исследования стабильности установили, что при хранении в течение двух лет (в естественных условиях) мазь «Антивир» с ЭМ и ЭП не изменяла своих свойств и по всем показателям удовлетворяла требованиям НД.

На основании серии проведенных экспериментов установлено, что разработанная лекарственная форма, содержащая ЭМ и ЭП, обладает противовирусной активностью. Исследования проводили на развивающихся куриных эмбрионах 12-дневного возраста с использованием метода постановки реакции торможения гемагглютинации с вирусом гриппа. Полученные результаты дают предпосылки к изучению экстрактов и мази на других штаммах вирусов и рекомендации лекарственной формы назально в качестве профилактики и комплексного лечения вирусных инфекций.

Дополнительно оценивали способность назальной мази «Антивир» с ЭМ и ЭП к торможению хемилюминесценции модельных систем, в которых вызывали генерацию активных форм кислорода и перекисного окисления липидов (ПОЛ). Регистрацию сверхслабого свечения проводили на приборе ХЛМ - 003. В качестве раствора сравнения использовали известный антиоксидант - мексидол. Установлено, что разработанная лекарственная форма в дозировках, сопоставимых с терапевтической, снижает светосумму свечения активных форм кислорода на 75 %, ПОЛ на 70,59% относительно контроля, сохраняя высокую антиоксидантную активность экстрактов (рис 5).

Рисунок 5 - Запись хемилюминисценции в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода, после добавления препаратов: 1 - контроль; 2 - мазь «Антивир»; 3 - мексидол

Таким образом, показана преимущественная способность ЭМ и ЭП в составе мази «Антивир» взаимодействовать с различными типами радикалов и тушить хемилюминесценцию модельных систем, связанных с ПОЛ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Итоги диссертационной работы сводятся к следующим основным положениям:

1. В ходе анализа рынка лекарственных препаратов по Республике Башкортостан обоснована актуальность разработки лекарственных препаратов в форме суппозиториев для профилактики и комплексного лечения воспалительных заболеваний органов малого таза в гинекологии и назальной мази для профилактики, комплексного лечения ОРВИ, гриппа.

2. Методами спектрофотометрии разработаны методики качественного и количественного анализов ЭМ, суппозиториев и мази по сумме аминокислот (в пересчете на кислоту глутаминовую) и по сумме флавоноидов (в пересчете на рутин).

3. С использованием метода математического планирования эксперимента разработаны составы и оптимальная технологическая схема производства суппозиториев «Проложен» и мази «Антивир», содержащих ЭМ и ЭП.

4. Методами равновесного диализа in vitro и диффузии в агаровый гель изучена фармацевтическая доступность суппозиторных основ: № 14, содержащей желатин, глицерин, воду; № 35 - лутрол F-68, кремофор RH-40, ПЭГ 4000; мазевой основы, состоящей из вазелина, лутрола F-68, кремофора RH-40, эмульгатора Т-2, ССМА, воды очищенной и лекарственные формы с ЭМ и ЭП.

5. Определены структурно-механические свойства суппозиториев и мази. Установлено, что в суппозиториях преобладают коагуляционные связи, восстанавливаемые после разрушения структуры, а мазь обладает псевдопластическим типом течения.

6. Изучена противовирусная активность ЭМ и ЭП in vivo. Установлена противовирусная активность мази методом торможения реакции гемагглютинации, антимикробной активности суппозиториев. Определена способность лекарственных форм снижать хемилюминесценцию модельных систем, связанных с образованием активных форм кислорода.

7. Установлена стабильность и качество суппозиториев и мази в процессе хранения. Определены условия и сроки хранения лекарственных форм - 2 года в условиях холодильной камеры (суппозитории) и при комнатной температуре (мазь).

8. Составлены проекты нормативной документации в виде фармакопейных статей предприятия на экстракт мелонеллы спиртовой, суппозиториев «Проложен» и мази «Антивир».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК:

1. Шикова, Ю.В. О возможности использования математического планирования при разработке гинекологических суппозиториев с продуктами пчеловодства для комплексного лечения воспалительных заболеваний / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, А.В.Епифанова, С.Б.Бахтиярова, З.Р.Кадырова, Ю.Л.Баймурзина // Медицинский альманах. - 2010. - № 2(11). - С.329-332.

2. Шикова, Ю.В. Математическое планирование - этап разработки суппозиториев / Ю.В.Шикова,

B.А.Лиходед, А.В.Епифанова, С.Б.Бахтиярова, З.Р.Кадырова, Ю.Л.Баймурзина, Р.А.Зарипов // Фармация. - 2010. - № 7. - С. 33-36.

3. Шикова, Ю.В. Антиоксидантные свойства экстракта личинок большой восковой моли / Ю.В.Шикова, Ю.Л.Баймурзина, В.А.Лиходед, Р.Р.Фархугдинов, А.В.Епифанова, З.Р.Кадырова,

C.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Медицинский альманах,-2011. - №2 (15).- С. 151-152.

4. Шикова, Ю.В. Современные вспомогательные вещества в изготовлении лекарств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, З.Р.Кадырова, А.В.Епифанова, Е.В.Елова, А.В.Лиходед, Т.А.Хасанов, С.Б.Бахтиярова // Фармация. - 2011. - № 6. - С. 33-36.

5. Шикова, Ю.В. Совершенствование лекарственной помощи гинекологическим больным / Ю.В.Шикова, С.Н.Ивакина, Т.А.Лиходед, А.В.Епифанова, Г.В.Аюпова, Н.А.Шиков, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Фармация. - 2011. - № 8. - С. 24-27.

6. Шикова, Ю.В. Обоснование применения продуктов пчеловодства в гинекологической практике / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, В.Н.Радутный, А.В.Епифанова, В.В.Петрова, Н.А.Шиков // Мать и дитя в Кузбассе. - 2012. - № 4(51).- С.52-54.

7. Шикова, Ю.В. Анализ современного состояния рынка лекарственных препаратов, применяемых в гинекологии / Ю.В.Шикова, С.Н.Ивакина, В.А.Лиходед, А.В.Епифанова, В.В.Петрова, Н.А.Шиков // Традиционная медицина. - № 2. - 2012. - С. 14-15.

8. Шикова, Ю.В. Сравнительное изучение реологических свойств мази на эмульсионной и гелевой основе / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, А.И.Булгакова, А.В.Лиходед, А.В.Епифанова, В.В.Петрова, Е.Ф.Юничева // Медицинский альманах. - 2013. - №2 (26). - С. 194-196.

9. Епифанова A.B. Определение оптимальной мазевой композиции с продуктами пчеловодства с помощью математического планирования / А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова, Е.В.Симонян, В.В.Петрова // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: химия, биология, фармация. - 2013. - № 2. - С. 181-185.

10. Шикова, Ю.В. Влияние продуктов пчеловодства на процесс образования активных форм кислорода. Возможность их применения в составе лекарственных средств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Р.Р.Фархутдинов, Е.В.Симонян, Ю.Л.Баймурзина, А.В.Епифанова, А.Г.Нэвес да Силва, В.В.Петрова, Е.В.Елова // Медицинский вестник Башкортостана. - 2013. - № 6. - С. 151153.

11. Епифанова, A.B. Технология совершенствования лекарственной помощи гинекологическим больным / А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова, С.Н.Ивакина, Е.В.Симонян, Е.В.Елова // Вестник Волгоградского медицинского университета. - 2013. - № 6. - С. 154-157.

12. Шнкова, Ю.В. Изучение аминокислотного состава экстракта личинок большой восковой моли и гомогената трутневого расплода / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Е.В.Симонян, А.В.Епифанова,

B.В.Петрова, Е.А.Евсельева, О.Н.Меренкова // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия, биология, фармация. - 2014. - № 3. - С. 133-136.

Патенты:

13. Пат. 2429867 Российская Федерация, МПК А61К 35/64; А61К 9/02; А61Р 15/00. Суппозитории с экстрактом личинок большой восковой моли и экстрактом прополиса для лечения гинекологических заболеваний / Ю.В.Шикова, Т.А.Лиходед, В.А.Лиходед, А.Н.Шиков,

C.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов, А.В.Епифанова; заявитель и патентообладатель государственное автономное научное учреждение Республики Башкортостан «Центр аграрных исследований» (РФ).

- № 2010120158/15; заявл.19.05.2010; опубл. 27.09.2011, Бюл. № 27 - 5с.

14. Пат. 2477141 Российская Федерация, МПК А61К 35/64; А61К 31/765; А61К 9/06; А61Р 31/04. Мазь с экстрактом личинок большой восковой моли и экстрактом прополиса для профилактики и лечения вирусной инфекции / Ю.В.Шикова, Т.А.Лиходед, В.А.Лиходед, А.Н.Шиков, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов, А.В.Епнфанова; заявитель патентообладатель государственное автономное научное учреждение Республики Башкортостан «Центр аграрных исследований» (РФ).

- № 2011124647/15; заявл. 16.06.2011; опубл. 10.03.2013, Бюл. № 7 - 11с.

15. Пат. 2481102 Российская Федерация, МПК А61К 31/041; А61К 31/43; А61К 35/64; А61Р 15/00. Способ комплексного лечения неспецифических воспалительных заболеваний женской половой сферы / Ю.В.Шикова, Т.А.Лиходед, В.А.Лиходед, А.Н.Шиков, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов, А.В.Епифанова; заявители и патентообладатели государственное автономное научное учреждение Республики Башкортостан «Центр аграрных исследований» (РФ), государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (РФ) - №2011151410/15; заявл.15.12.2011; опубл. 10.05.2013, Бюл. № 13 - 5с. Материалы научно-практических конференций:

16. Шикова, Ю.В. Разработка лекарственных средств с продуктами пчеловодства для комплексного лечения воспалительных заболеваний / Ю.В.Шикова, А.В.Епнфанова, С.Б.Бахтиярова // Сборник трудов межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации». - Уфа, 2009. - С. 365-366.

17. Епифанова, A.B. Обоснование выбора состава основ гинекологических суппозиториев для комплексного лечения воспалительных заболеваний органов малого таза // Материалы 75-й республиканской научной конференции «Вопросы теоретической и практической медицины». -Уфа, 2010.-С.169-171.

18. Шикова, Ю.В. Реологические свойства суппозиториев с экстрактами личинок большой восковой моли и прополиса / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Т.А.Лиходед, А.В.Епифанова, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы международной конференции «Пчеловодство - XXI век. Пчеловодство, апитерапия и качество жизни». - М., 2010. - С. 251-252.

19. Шикова, Ю.В. Выбор оптимальной гидрофильной основы для вагинальных суппозиториев с продуктами пчеловодства / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Р.А.Зарипов, А.В.Епифанова, С.Б.Бахтиарова, З.Р.Кадырова // Сборник материалов XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2010. - С. 746.

20. Шикова, Ю.В. Определение микробиологической чистоты суппозиториев с экстрактом прополиса и экстрактом личинок большой восковой моли / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Т.А.Лиходед, А.В.Епифанова, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы международной научно-практической конференции «Современное пчеловодство. Проблемы, опыт, новые технологии». -Ярославль, 2010.-С.166- 168.

21. Шикова, Ю.В. Использование продуктов пчеловодства в разработке составов лекарственных средств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов, Ю.Л.Баймурзина,

A.В.Епифанова, М.В.Мельников // Материалы всероссийской научно-практической конференции «Роль науки в инновационном развитии сельского хозяйства. Инновационные технологии. Основа конкурентоспособности сельского хозяйства». - Уфа, 2010. - С. 255-258.

22. Шикова, Ю.В. Определение структурно-механических свойств вагинальных суппозиториев, содержащих экстракт личинок большой восковой моли и экстракт прополиса / Ю.В.Шикова,

B.А.Лиходед, Р.А.Зарипов, С.Б.Бахтиярова, А.В.Епифанова // Сборник научных трудов конференции с международным участием «Научный прорыв - 2010». - Уфа, 2010. - С. 64-66.

23. Шикова, Ю.В. Лекарственные средства с высокомолекулярными соединениями / Ю.В.Шикова,

A.В.Епифанова, В.А.Лиходед, С.Б.Бахтиярова P.A., Зарипов // Материалы Всероссийской научно-практической интернет-конференции с международным участием «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм». - Курск, 2011. - С. 221-223.

24. Шикова, Ю.В. Изучение антиоксидантных свойств продуктов пчеловодства / Ю.В.Шикова,

B.А.Лиходед, Р.Р.Фархутдинов, Ю.Л.Баймурзина, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов, А.В.Епифанова // Материалы Всероссийской конференции «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты». - Самара, 2011. - С. 182 - 184.

25. Епифанова, A.B. Современные вспомогательные вещества в технологии мазей / А.В.Епифанова, Т.А.Хасанов, А.В.Лиходед, С.Б.Бахтиярова, Н.А.Шиков // Материалы XVI Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине». - Казань, 2011. - С. 56.

26. Шикова, Ю.В. Определение антибактериальной активности мази, содержащей продукты пчеловодства / Ю.В.Шикова, Т.А.Лиходед, А.В.Епифанова, А.Г.Нэвес да Силва, В.В.Петрова,

C.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы международной научно-практической конференции

«Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и дальнего зарубежья». - Ярославль, 2011. - С. 178-179.

27. Шикова, Ю.В. Продукты пчеловодства в разработке лекарственных средств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, А.В.Епифанова, А.Г.Нэвес да Силва, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы X юбилейной республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2011 ». - Уфа, 2011. - С. 252-253.

28. Шикова, Ю.В. Ситуационный анализ потребительского рынка лекарственных средств, применяемых в гинекологии / Ю.В.Шикова, С.Н.Ивакина, А.В.Епифапова, В.В.Петрова, Н.А.Шиков, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Международный конгресс: «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» // Традиционная медицина. - 2011. - № 5. - С. 417-420.

29. Епифанова, А.В. Влияние кремофора на высвобождение активных веществ в интраназальной мази / А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед // Сборник научных трудов по материалам международной заочной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы науки и образования в 21 веке». - Ч. 6. - Тамбов, 2012 - С. 47-48.

30. Епифанова, А.В. Определение антиоксидантной активности продуктов пчеловодства в составе мягких лекарственных форм / А.В.Епифанова, А.Г.Нэвес да Силва, В.В.Петрова, Ю.Л.Баймурзина // Материалы 77-й республиканской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины». - Уфа, 2012 - С. 222-223.

31. Шикова, Ю.В. Выбор состава основы мази для акушерской практики / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, В.Н.Радутный, А.В.Епифанова, В.В.Петрова, Н.А.Шиков, А.В.Браженко, З.Р.Кадырова, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы XVI Международной научной конференции, Венгрия: в 2 частях / под ред. А. Я. Перевалова; Перм. гос. мед. академия; Урал, регион, центр питания. - Ч. 11. - Пермь: ИПК «ОТ и ДО», 2012. — С. 166-168.

32. Епифанова, А.В. К вопросу профилактики сезонных вспышек заболеваемости гриппа и других ОРВИ / А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова // Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2012. - С. 373-374.

33. Шикова, Ю.В. Разработка состава и технологии мази для назального применения / Ю.В.Шикова, А.В.Епифанова // Материалы Всероссийской молодёжной конференции «Фармакологическая коррекция процессов жизнедеятельности. Доклинические и клинические исследования новых лекарственных препаратов». 8-10 июля 2012 г. - Уфа: Изд-во ООО «Соми +», 2012. - С.174-177.

34. Епифанова, А.В. Профилактика сезонных вспышек гриппа и ОРВИ / А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Сборник научных трудов Всероссийской научно-практической конференции к 75-летию санатория «Янган-Тау» «Санаторно-курортное лечение и медицинская реабилитация». - Янган-Тау, 2012.- С. 101-102.

35. Shikova, Y.V. Development of structure complex suppositories for intestinal inflammatory diseases / Y.V.Shikova, V.A.Likhoded, V.V.Petrova, A.V.Epifanova, A.G.Neves da Silva, N.A.Shikov, S.B.Bakhtiyarova, R.A.Zarypov // Proceedings of the 1st international academic conference Applied and

Fundamental Studies hosted by the Publishing House «Science and Innovation Center», and the International Journal of Advanced Studies. - St. Louis, Missouri, USA. - 2012. - P.66 - 72.

36. Радутный, В.H. Способ неоперативного лечения миомы матки с учетом нового взгляда на ее этиопатогенез / В.Н.Радутный, Ю.В.Шикова, А.В.Епифанова // Материалы I съезда терапевтов Забайкальского края. - Чита: РИЦ ЧГМА, 2013.- С.57-60.

37. Шикова, Ю.В. Роль современных вспомогательных веществ в производстве мягких лекарственных форм / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, А.В.Епифанова, В.В.Петрова, А.Г.Нэвес да Силва, Е.Ф.Юничева // Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции «Образование и наука: современное состояние и перспективы развития». - Тамбов, 2013. - С. 150-151.

38. Шикова, Ю.В. Влияние высокомолекулярных соединений на адсорбционную активность мази / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Е.В.Симонян, А.В.Епифанова // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2013. - №3. - С. 44-45.

39. Шикова, Ю.В. Применение вспомогательных веществ в технологии мягких лекарственных средств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Е.В.Елова, А.В.Епифапова // Труды VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье - основа человеческого потенциала. Проблемы и пути решения». - СПб., 2013. - С. 655-656.

40. Шикова, Ю.В. Разработка состава и технологии гинекологических лекарственный средств / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, В.В.Петрова, А.В.Епифанова, Н.А.Шиков, С.Б.Бахтиярова, Р.А.Зарипов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновационные технологии в фармации». - Иркутск, 2014. - С. 172-173.

41. Шикова, Ю.В. Стандартизация вагинальных суппозиториев, содержащих природные биологически активные компоненты, по сумме флавоноидов / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Е.В.Симонян, А.В.Епифапова // Материалы X международна научна практична конференция, «Найновите научни постижения». - София, 2014. - С. 14-17.

42. Чегурова, А.К. Количественное определение белка в лиофилизированном маточном молочке / А.К.Чегурова, А.С.Заяц, Е.В.Симонян, Ю.В.Шикова, А.В.Епифапова, В.В.Петрова // Материалы IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Проблемы фармацевтической науки и практики». - Владикавказ, 2014. - С. 19-21.

43. Симонян, Е.В. Исследование фармакологических свойств разработанных суппозиториев с кислотой янтарной и экстрактом прополиса / Е.В.Симонян, Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, Г.П.Григорьева, А.Д.Ермолаев, А.В.Чернов, А.Т.Юмагужина, А.В.Епифанова // Вестник ЮУрГУ. Серия: образование, здравоохранение, физическая культура. - 2014. - № 3. - С. 61-65.

44. Епифанова, A.B. Количественный анализ мягких лекарственных форм, содержащих экстракт прополиса и личинок большой восковой моли, по сумме флавоноидов спектрофотомегрическим методом i А.В.Епифанова, Ю.В.Шикова, Е.В.Симонян, В.А.Лиходед, Н.А.Васильева // Материалы II Всероссийской научной интернет-конференции с международным участием «Спектрофотометрические методы анализа». - Казань, 2014. - С. 45-46.

Подписано в печать 26.06.2015г. Авт. Л. 1,0. Усл. печ. л. 1,5. Формат 60*84 1 /16. Тираж 100 экз. Заказ. №1500463 450077, Уфа, улица Ленина, д. 24. Отпечатано в типографии ГУП РБ «Белая река»