Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Коррекция иммунитета, микробиоценоза и повышение качества молока при ассоциативной инвазии кобыл породы владимирский тяжеловоз

ГАЛИН Зайтун Рифович

КОРРЕКЦИЯ ИММУНИТЕТА, МИКРОБИОЦЕНОЗА И ПОВЫШЕНИЕ КАЧЕСТВА МОЛОКА ПРИ АССОЦИАТИВНОЙ ИНВАЗИИ КОБЫЛ ПОРОДЫ ВЛАДИМИРСКИЙ ТЯЖЕЛОВОЗ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

003489163

ГАЛИН Зайтун Рифович

КОРРЕКЦИЯ ИММУНИТЕТА, МИКРОБИОЦЕНОЗА И ПОВЫШЕНИЕ КАЧЕСТВА МОЛОКА ПРИ АССОЦИАТИВНОЙ ИНВАЗИИ КОБЫЛ ПОРОДЫ ВЛАДИМИРСКИЙ ТЯЖЕЛОВОЗ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А.Тимирязева» и ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет »

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Маннапова Рамзия Тимергалеевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Иванов Александр Ильич

кандидат биологических наук, доцент Хазипов Руетем Барисович

Ведущая организация - Федеральное Государственное Учреждение «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ», г. Москва)

Защита состоится « 26 » декабря 2009 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д220.003.03 при ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» по адресу 450001, г. Уфа, ул. 50 лет Октября, 34 (ауд. 325/2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет», а с авторефератом - на сайте ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» www.bsau.ru

Автореферат разослан «26» ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор сельскохозяйственных наук, професс . Г. Гиниятуллин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия в результате паритета цен и других негативных явлений, коневодству нанесен значительный урон -уменьшилось поголовье лошадей, резко сократилось производство конины и кумыса.

Внимание коневодству в стране снизилось в целом, ухудшилось применение и содержание лошадей, снизилась их продуктивность.

Коневодство недостаточно охвачено научным обеспечением. Не внедряются интенсивные методы и новые формы его введения с учетом перехода на многоукладную экономику. Практически отсутствуют специализированные фермерские крестьянские хозяйства с отработанными экономическими параметрами и технологией применительно к новым условиям. Не ведется поиск организационных форм ведения продуктивных конеферм, отличающихся высоким уровнем продуктивности, качеством продукции и конкурентоспособностью (Е. В. Кожевников, 1990; В. В. Шведов, 1996; К. 3. Махмутов, 1995, 1999; М. Г. Миролюбов, 1997; В. В. Калашников с соавт., 2000; Б. Х.Сатыев, 2007).

При этом значительный урон коневодству наносится болезнями инвазионной этиологии. Среди них особое место занимают гельминтозы желудочно-кишечного тракта лошадей, на долю зараженности которыми приходится до 80-100% поголовья (Н. Т. Кадырова, 1990; Н. М. Понамарев, 1999).

В литературе в основном встречаются работы посвященные эпизоотологии гельминтов, разработке мер профилактики и лечения, изучению эффективности антгельминтиков при гельминтозах лошадей (Н. М. Понамарев, 1999; И. А. Архипов, 1999; В. М. Золотов, 1999; М. В. Якубовский, 2000, 2002; В. И. Длубаковский, 2003; В. И. Михайлов, 2003, 2004; Ф. Ю. Петров, Д. А. Смирнов, 2004; О. О. Муромцева, 2004; Д. Ф Клочков с соавт., 2005).

На сегодня слабо изученными остаются вопросы влияния гельминтозов (а они протекают более чем в 75-80% случаях ассоциативно) на состояние иммунитета (О. О. Муромцева, 2004), иммунной системы, показатели минерального обмена, микробиоценоза кишечника на молочную продуктивность и качество молока кобыл.

В связи с вышеизложенным целью работы явилось - изучить возможности коррекции иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, молочной продуктивности и качества молока кобыл при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и разных методах терапии.

В задачи исследований входило:

1. Изучить морфологические показатели крови (динамику эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, эозинофилов) при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, комплексной аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом.

2. Определить особенности иммунной реактивности и возможности ее коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной

инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, комплексной аминокислотно-минералъно-витаминной подкормки Микровитамом и имму-нопробиотикотерапии Бактонеотимом со сравнительной оценкой:

а) состояния естественной резистентности (динамики бактерицидной, лизоцимной, комплементарной активности сыворотки крови) и фагоцитарной активности лейкоцитов;

б) динамики изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови;

3. Установить характер иммуноцитологических реакций в центральных и периферических органах иммуногенеза при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом с учетом динамики изменения содержания клеток в миелограмме, аденограмме и спленограмме лошадей.

4. Оценить влияние дегельминтизации, аминокислотно-минерально-вита-минной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии кобыл на биохимические показатели молока (воды, сухого вещества, жира, белка, лактозы, золы)

5. Определить влияние дегельминтизации, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки и иммунопробиотикотерапии при ассоциативной инвазии на содержание водорастворимых и жирорастворимых витаминов в молоке кобыл.

6. Провести сравнительную характеристику микробно-микологической экологии кишечника и установить пути ее коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом с учетом:

а) динамики изменения содержания в кишечнике нормофлоры из родов Bifidobacterium, Lactobacillus;

б) динамики изменения содержания в кишечнике условно-патогенных микроорганизмов из родов Staphylococcus, Escherichiae, Clostridiae;

в) динамики изменения содержания в кишечнике лошадей микроскопических грибов из родов Candida, Aspergillus и Pénicillium.

Научная новизна. Впервые проведены научные исследования по изучению морфологических показателей крови, иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, биохимического состава и уровня витаминов в молоке при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей, определены эффективные методы их коррекции, возможности повышения молочной продуктивности, восстановления химического состава и содержания жиро- и водорастворимых витаминов в молоке кобыл при комплексной терапии с применением на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом. Установлена возможность коррекции вторичных иммунодефицитов, дисбактериозов при ассоциативной инвазии кобыл.

Предложена эффективная схема профилактики и лечения ассоциативного стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозного заболевания лошадей.

Практическая значимость работы. Полученные результаты влияния дегельминтизации Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-вита-минной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонео-тимом при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей на восстановление в организме животных гемопоэза, лейкопоэза, реакции эозинофилов, естественной резистентности, показателей Т- и В- систем иммунитета, на иммуноцитологические перестройки в миелограмме, аденограмме, спленограмме, нормализацию баланса микробиоценоза кишечника, восстановление химического состава и повышение в молоке содержания водо- и жирорастворимых витаминов, способствующие освобождению животных от гельминтов, оздоровлению их и повышению молочной продуктивности позволяют рекомендовать эти методы комплексной терапии производству, как эффективные экономически оправданные средства лечения при данной патологии.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научно-практических конференциях Башкирского ГАУ(2007-2009), на Всероссийских научно-практических конференциях: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2007; 2008); «Современные проблемы интенсификации производства в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Москва, 2007), «Инте-грация аграрной науки и производствахостояние, проблемы и пути решения» (Уфа, 2008); научно-практической конференции «Ветеринарная медицина домашних животных» (Казань, 2008).

Публикации , результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 7 научных статьях, в том числе 1 в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Реализация результатов исследования. Результаты исследований внедрены в СПК «Бишинды» Туймазинского района республики Башкортостан.

Основные положения диссертации выносимые на защиту:

1. Морфологические показатели крови и их коррекция при ассоциативной инвазии лошадей.

2. Особенности иммунной реактивности и возможности ее коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и разных методах лечения.

3. Иммуноцитологические реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-пара-скариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом.

4. Влияние дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минераль-но-витаминной подкормки Микровитамом и пробиотикотерапии Бактонеотимом при микстинвазиях кобыл на динамику содержания водо- и жирорастворимых витаминов в молоке.

6. Биохимический состав молока и его восстановление при ассоциативной инвазии кобыл.

7. Микробно-микологическая экология кишечника (нормофлора, условно-патогенные микроорганизмы и микроскопические грибы) и возможности их коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 228 наименований, в том числе 48 иностранных авторов. Диссертация написана на 192 страницах, иллюстрирована 23 таблицами, 48 рисунками в виде графиков.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материал и методы исследования

Исследования проводились на лошадях пяти групп: 1 группа - здоровые. Животные 2-5 групп - больные стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозным заболеванием. Лошадей 3-5 групп подвергали дегельминтизации Дектомаксом. При этом животным 4 группы вводили в рацион препарат Микровитам (аминокислотно-витаминно-минеральный комплекс), 5 группы - Микровитам + Бактонеотим (пробиотик и иммуностимулятор). Дектомакс применяли в дозе 0,2 мг/кг из расчета 1 мл 1%-го раствора на 50 кг массы животного однократно, подкожно. Препарат Микровитам применятли в дозе 0,3 мл на 10 кг массы животного внутримышечно, 1 раз в день, в течение месяца. Бактонеотим назначали за 30-40 минут до кормления из расчета 10 таблеток на животное, 1 раз в день, в течение 7 дней. Курс лечения повторяли 2 раза с интервалом 7 дней. До начала опыта (фон), а затем через 15,30, 45 и 60 дней от начала опыта проводили взятие крови для иммунологических и биохимических исследований, молока для биохимических анализов и фекалий из прямой кишки в стерильную посуду для микробиологических исследований. Всего в опытах использовали 40 голов лошадей - кобыл 3-7 лактации.

Бактерицидную активность сыворотки крови лошадей определяли фото-электроколориметрическим методом по П. А. Емельяненко (1980), лизоцимную по А. Г. Дорофейчуку, 1983.

Лимфоциты из крови и лимфоидных выделяли разделением в градиенте плотности фиколл - верографин. Выделение В-лимфоцитов проводили с эритроцитами быка. Определение популяции Т-лимфоцитов в крови лошадей проводили методом спонтанного розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана. Оценку субпопуляций Т-лимфоцитов проводили в реакции розеткообразования с теофиллином (Г. Фримель, 1987). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали гепаринизированную кровь. Объектом фагоцитоза служили суточные культуры Staphylococcus aureus, выращенные на агаре Хотгингера.

Получение пунктата костного мозга, поверхностного пахового лим-фа-тического узла и селезенки проводили иглами Боброва или Симоняна-Пет-ровского с подогнанными мандренами и 10-граммовым шприцем, согласно методики, описанной Г. А.Симоняном и Ф. Ф.Хисамутдиновым (1995).

Выделение анаэробных бифидобактерий проводили посевом больших разведений фекалий в среду Блаурокка. Лактобактерии выращивали на среде MPC (Мозера-Рогоза-Шарпа). Клостридии культивировали на мясо-пептонном-печеночном бульоне (МППБ) Кита-Тароцци, плотной среде Вильсона-Блера, глюкозо-кровяном агаре Цейслера. Для выделения стафилококков использовали элективные среды - солевой кровяной МП А (с 8-10% NaCl, 5% дефибринированной крови), кровяной МПА. Из чистой культуры, выращенной на МПА, ставили реакции на плазмокоагуляцию, фибринолизин, лецитиназу, ДНК-азу и скрытую гемолитическую активность. Из биохимических свойств определяли разжижение желатины, коагуляцию молока, ставили реакции на маннит, лактозу, сахарозу, аммиак, сероводород.

Для выделения бактерий семейства кишечных материалы засевали на среду Эндо, Левина, МПА, МПБ проводили на питательных средах при 40°С с манн-нитолой, гераниолой, азелатом, а- аргинином и а- гистидином. Микрогрибы выделяли на средах Сабуро и Чапека.

Определение уровня витаминов и химический состав молока определяли общепринятыми биохимическими методами.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием пакета статистического анализа для Microsoft Excel. Достоверность различий между группами по количественным признакам оценивались при помощи t-кретерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при Р<0,05 (Г. Ф. Лакин, 1973).

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1 Показатели крови и их коррекция при ассоциативной стронгнлоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей

Фоновое содержание эритроцитов в крови животных 2-5 групп, больных стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозным заболеванием было снижено в 1,66-1,95 раза (на 4,16-5,1 млн/мкл). Показатель уровня эритроцитов в крови лошадей 2 группы в процессе опыта имел тенденцию к дальнейшему снижению, параллельно с прогрессированием заболевания. К концу опыта (60 дней) значение описываемого показателя было ниже фонового уровня и контрольной цифры в 2,06 и 2,97 раза (на 3,23 и 6,05 млн/мкл).

Дегельминтизация лошадей (3 группа) Дектомаксом способствовала затормаживанию в организме процесса дальнейшего гемолиза эритроцитов и их уровень незначительно повысился, по сравнению с фоновым показателем.

Значительной активизации эритропоэза в организме лошадей способствовала дегельминтизация Дектомаксом на фоне аминокислотно-мине-рально-витаминной подкормки и пробиотикотерапии Бактонеотимом (5 группа).

Уровень эритроцитов в крови этих животных этой группы на 15 день опыта превышал показатели лошадей 2, 3 и 4 групп в 1,34, в 1,14 и 1,15 раза (на 1,78, на 0,85 и 0,93 млн/мкл), на 30 день - в 2,68, в 1,88 и 1,26 раза (на 7,47, на 5,6 и 2,48 млн/мкл), на 45 день - в 2,77, 1 "" и 1,1 раза (на 6,87, на 3,48 и 0,99 млн/мкл), на 60 день-в 3,45, в 1,71 и ^ аза (на 7,5, на 4,42 и 1,6 млн/мкл).

Данные по исследованию динамики изменения уровня гемоглобина и лейкоцитов крови лошадей приведены на рисисунке 1

—«— Контроль - здоровые —я— Контроль - больные - - л- - - Дектомакс - - а— - Дектомакс + Микро в итам —о—Дектомакс + Миквовитам+ Бактонеотим

Рисунок 1. Динамика изменения содержания гемоглобина (а) и лейкоцитов (б) в крови лошадей, %

У больных животных 2-5 групп, к началу опытов, содержание эозинофилов в крови было повышено в 1,21-1,27 раза (на 101,5-127,0 ед/мкл).Уровень эозинофилов в крови лошадей 2 группы прогрессивно увеличивался, по срокам исследований, и превысил контрольное значение к концу опыта в 2,75 раза (на 809,6 ед/мкл). Эозинофилы в крови лошадей 3, 4 и 5 групп имели тенденцию к снижению и полное их восстановления отмечалось у животных 5 группы.

2.2.2 Коррекция иммунного статуса при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей

2.2.2.1 Состояние естественной резистентности и ее коррекция при ассоциативной инвазии лошадей

Результаты исследования динамики изменения показателей лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови представлены на рисунке 2

Показатель комплементарной активности сыворотки крови животных 2-5 групп, к началу опытов, был понижен в 1,55-1,65 раза (на 4,6-5,1ед.). В сыворотке крови кобыл 2 группы, не подвергнутых лечению, ее значение уменьшилось, по сравнению с контрольным показателем, к 15, 30, 45 и 60-ым дням в 1,52; 2,14; 2,34 и 2,9 раза (на 4,0; 7,3; 7,0 и 7,8 ед.). Комплементарная активность сыворотки крови лошадей опытных групп имела тенденцию

75 -65 ■ 55 -45 ■ 35 -

Фон I 15 | 30 I 45 I 60 Сроки исследования в днях от начала дегельминтизации

Фон | 15 | 30 | 45 1 60

Сроки исследования в днях от начала дегельминтизации

30 25 20 -15 -10 -5 0

а

к повышению. Самого высокого уровня активность комплемента достигла у лошадей 5 группы. Ее максимальное значение, регистрируемое к 45 дню, превышало кон-

60 50 Н 40 30 -20 -10 0

Фон 15

30 Дни

45

60

Фон 15

30 Дни

45

□ Контроль -у. а Контроль - больные

□ Дектомакс а Дектомакс + Микровитам

н Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим

J

60

Рисунок 2. Динамика изменения лизоцимной (а) и бактерицидной (б) активности сыворотки крови лошадей, %

трольную цифру в 3,47 раза (на 30,2 ед.), показатели кобыл 2, 3 и 4 групп в 8,15; 2,71 и 1,39 раза (на 37,2; 26,8 и 11,9 ед.). До конца опыта комплементарная активность сыворотки крови лошадей 5 группы оставалась на высоком уровне. При этом она была выше контрольной цифры в 3,33 раза (на 27,9 ед.), данных лошадей 2, 3 и 4 групп в 9,68; 2,81 и 1,5 раза (на 35,6; 25,6 и 13,3 ед.).).

Показатели, полученные при исследовании фагоцитарной активности лейкоцитов крови лошадей представлены в таблице 1.

2.2.2.2 Показатели.Т-и-В - систем иммунитета и их коррекция при ассоциативной инвазии лошадей

Уровень Т-Е-РОК - лимфоцитов, к началу опытов, в крови больных животных 2, 3,4 и 5 групп был понижен в 1,32 - 1,37 раза (на 12,2-13,6%).

Показатель Т-Е-РОК - лимфоцитов в крови лошадей 2 группы, не подвергнутых лечению, имел тенденцию к дальнейшему снижению: на 15, 30, 45 и 60-ые дни - в 1,12; 1,23; 1,35 и 1,5 раза (на 3,9; 6,8; 9,5 и 12,3%).

Содержание Т-Е-РОК - лимфоцитов в крови лошадей 3, 4 и 5 опытных групп, по срокам опыта, напротив, имело тенденцию к повышению.

Максимальное повышение уровня Т-Е-РОК - лимфоцитов отмечалось в крови лошадей 5 группы. К 30 дню показатель Т-Е-РОК - лимфоцитов в крови лошадей 5 группы был выше значений их у животных 1 контрольной и 2, 3 и 4-ой опытных групп в 1,06; 1,89; 1,33 и 1,2 раза (на 3,3; 26,2; 13,9 и 9,5%), к 45-му дню-в 1,1; 2,1; 1,27 и 1,16 раза (на 5,4; 29,6; 12,0 и 8,1%), к 60-му дню-в 1,05; 2,27; 1,21 и 1,14 раза (на 2,7; 30,5; 98 и 6,9%).

Данные по изменению динамики Т-хелперов и Т-супрессоров в крови лошадей представлены на рисунке 3.

Фоновое значение В-ЕАС - лимфоцитов в крови животных 2, 3 и 4 групп было снижено в 1,36-1,41 раза (на 4,5-4,9%).Содержание В-ЕАС-клеток

Таблица 1 Динамика изменения фагоцитарной активности лейкоцитов крови лошадей, %

Группа животных и использованные препараты Статистический показатель Сроки исследования в днях от начала Дегельминтизации

Фон 15 30 45 60

1. Контрольная (здоровые) М 62,60 61,40 60,90 61,90 62,30

±т 0,82 1,61 0,84 1,16 1,07

С\',% 2,92 5,85 3,10 4,19 3,84

2. Контрольная (больные) М 49,60 46,40 40,30 38,70 30,20

±т 0,93 0,81 0,66 0,49 0,58

о,% 4,18 3,92 3,68 2,83 4,32

Р *** *** *** ***

3. Дектомакс М 51,40 54,40 56,40 58,70 57,40

±т 0,68 0,93 0,51 0,89 0,93

СУ,% 2,95 3,81 2,02 3,39 3,61

Р - ** *** *** ***

4. Дектомакс + Микровитам М 50,90 57,60 59,70 60,60 58,90

±т 0,78 0,93 0,97 1,08 1,03

С\',% 3,43 3,60 3,63 3,97 3,91

Р *** *** *** ***

5. Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим М 51,20 62,90 67,60 68,60 66,90

±т 0,58 0,68 0,81 0,93 1,21

Су,% 2,55 2,41 2,69 3,02 4,04

Р *** ***

в крови лошадей 2 группы, не подвергнутых лечению, интенсивно снижалось дальше по срокам исследований и уступало контролю на 15, 30, 45 и 60-ые дни опыта в 1,45; 1,91; 2,4 и 3,05 раза (на 5,0; 7,7; 9,7 и 10,9%).

Дегельминтизация лошадей 3 группы способствовала некоторому повышению содержания В - лимфоцитов в крови. Значительное увеличение уровня В-клеток регистрировалось у животных 4 группы. Максимального значения В-ЕАС - лимфоциты достигли в крови животных 5 группы. К15 дню опыта их уровень превышал показатели животных 2,3 и 4 -ой групп в 1,42; 1,2 и 1,07 раза (на 4,6; 2,7 и 1,1%), к 30 дню - 2,05; 1,3 и 1,14 раза (на 9,2; 4,2 и 2,3%), к 45-му дню - в 2,71; 1,19 и 1,14 раза (на 11,8;,3,1 и 2,4%). До конца опытов показатель В- лимфоцитов в крови кобыл 5группы оставался на самом высоком физиологическом уровне.

Дни Дни

□ Контроль - здоровые в Контроль - больные

□ Дектомакс п Дектомакс + Микровитам

□ Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим

Рисунок 3. Динамика изменения Т-хелперов (а) и Т-супрессоров (б) в крови лошадей, %

2.2.2.3 Иммуноцитологические реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза и их коррекция при ассоциативной инвазии лошадей

Изучение миелограммы показало глубокие цитологические изменения при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей (рисунок 4-5).

1?;' ЧМ фон 60 Н ' ТЗ ООН 1лЗ 60 60 60 60

день день день день день

1 группа - 2 группа - 3 4 5

в миелоциты В метамиелоциты

0 палочкоядерные а сегментоядерные

Рисунок 4. Изменение содержания нейтрофильных клеток в костном мозге при ассоциативном стронгилоидозно-оксиурозно-параска-ридозном заболевании и разных методах лечения лошадей,%

и

40 35 30 25 20 15 10 5 О

фон | 60 день 1 группа --здоровые

фон [60 день 2 группа -больные

60 день 3 группа

60 день 4 группа

/

60 день 5 группа

И Эозинофильные клетки а Лимфоциты и Плазматические клетки

□ Клетки эритроидного ростка В Моноциты

Рисунок 5. Изменение содержания эозинофильных клеток, клеток эритроидного ростка, лимфоцитов, моноцитов и плазматических клеток в костном мозге при ассоциативном стронгилоидозно-оксиурозно-параскалидозном заболевании и разных методах лечения лошадей, %

Результаты исследования аденограммы и спленограммы при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей представлены на рисунке 6 и 7.

10

6 -

2 -

Плазматические клетки Макрофаги

А

- а-

--А--- Нейтрофилы

- Д- -Эозинофилы —*—Моноциты

\

\

♦ "" 1—♦— —

фон 60 фон 60 60 60 60

день 1 день день день день

1 группа- 2 группа - 3 4 5

Рисунок 6. Содержание плазматических клеток, макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов в лимфатических узлах при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии и разных методах лечения лошадей, %

Е Плазматические клетки 0 Макрофаги нНейтрофилы пЭозииофилы

н Моноциты

Рисунок 7. Содержание плазматических клеток макрофагов, нейрофилов.

Эозинофилов и моноцитов в селезенке при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии и разных методах лечения лошадей, %

2.2.3 Содержание витаминов в молоке и их восстановление при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии кобыл

Фоновый уровень витамина С в молоке инвазированных лошадей (2-5 группа) был снижен в 1,53-1,61 раза (на 45,1-49,2 мкг/л). В молоке кобыл 2 группы отмечалось дальнейшее прогрессивное снижение содержания витамина С: к 15, 30, 45 и 60-ым дням в 1,72; 1,96; 2,62 и 3,21 раза (на 55,4; 62,0; 85,6 и 91, 4 мкг/л). Показатель витамина С в молоке кобыл 3-5 групп, в процессе опыта, повышался. Самый высокий уровень витамина С регистрировался в молоке кобыл 5 группы. Здесь описываемый показатель превысил фоновое значение на 15, 30, 45 и 60-ые дни опыта в 1,56; 1,7; 2,08 и 2,03 раза (на 46,6; 58,5; 90,3 и 85,6 мкг/л). С 30 дня опыта содержание витамина С в молоке кобыл 5 группы было выше контрольного уровня.

Содержание витамина В 1 в молоке кобыл 2-5 групп, к началу опытов, было понижено в 2,38-2,52 раза (на 199,9-207,8 мкг/л). Уровень тиамина в молоке животных 2 группы в процессе опыта имел тенденцию к интенсивному

снижению и уступал контрольному показателю к 15, 30, 45 и 60-ым дням 2,75; 3,32; 4,06 и 6,52 раза (на 216,7; 235,3; 264,1 и 289,8 мкг/л). Показатель тиамина в молоке кобыл 3, 4 и 5 групп по срокам опыта повышался. При этом по 3 и 4 группам он не достигал контрольного значения. Максимальный уровень витамина В! регистрировался в молоке кобыл 5 группы. К15дню исследований его содержание было выше, чем у животных 2, 3 и 4 групп в 1,51; 1,22; 1,03 раза (на 63,0; 33,9; 7,1 мкг/л), к 30 дню- в 2,72; 1,58 и 1,2 раза (на 175,1 101,7 и 46,8 мкг/л), к 45 дню - в 4,26; 1,6 и 1,2 раза (на 283,1; 139,9 и 62,9 мкг/л). На 45 и 60 дни исследований содержание витамина В 1 в молоке кобыл 5 группы соответствовало физиологическим нормам.

Данные по изучению в молоке кобыл динамики изменения содержания витамина В2 (рибофлавина) и В|2 представлены на рисунке 8.

мкг/л

450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

а

Фон | 15 30 | 45 | 60

Сроки исследования в днях от

начала дегельминтизации

мкг/л

2,6 2,4 2,2 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1

■л

-О—

3

Фон | 15 I 30 I 45 I 60 | 90 Сроки исследования в днях от начала дегельминтизации

—♦— Контроль - здоровые —□— Контроль - больные

— А— ■ Дектомакс —©—Дектомакс + Микровитам

— о- - Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим

Рисунок 8. Динамика изменения содержания витамина В2 (а) и В12 в молоке

кобыл, (мкг/л)

Содержание в молоке животных 1 контрольной группы уровня биотина колебалось незначительно в пределах от 11,3 до 12,0 мкг/л. Его значение в молоке больных лошадей 2-5 групп, к началу опытов было понижено, в 1,31,36 раза (на 2,7-3,1 мкг/л). Исследуемый показатель в молоке кобыл 2 группы продолжал снижаться по срокам исследований и к 15, 30, 45 и 60-ым дням опыта уступал контрольным параметрам в 1,43; 1,57; 1,73 и 2,07 раза (3,2; 4,0; 4,8 и 5,6 мкг/л). Показатель содержания биотина в молоке животных 3 и 4 групп имел тенденцию к умеренному повышению, но был ниже, чем в контроле. Более интенсивный процесс повышения содержания витамина Н регистрировался в молоке кобыл 5 группы.

Содержание пантотеновой кислоты в молоке животных 2-5 групп, к началу опыта, было снижено в 1,77-1,95 раза (на 655,8-736,3 мкг/л). Показатель уровня пантотеновой кислоты в молоке кобыл 2 группы продолжал, по ходу

14

опыта, понижаться и уступал контролю на 15, 30, 45 и 60-ые дни - в 1,94; 2,47; 2,84 и 3,58 раза (на 720,7; 905,9; 948,0 и 1089,5 мкг/л). В молоке опытных животных описываемый показатель имел тенденцию к повышению и достиг максимума у кобыл 5 группы, превысив фоновый уровень к 15, 30, 45 и 60-ым дням опыта в 1,18; 1,73; 1,82 и 183 раза (на 153,9; 615,8; 685,6 и 694,1 мкг/л). При этом на 15 и 30 дни опыта показатель содержания пантотеновой кислоты в молоке кобыл 5 группы был ниже контрольных цифр, а на 45 и 60 дни превышал их в 1,03 и 1,01 раза (на 57,4 и 16,5 мкг/л).

Содержание жирорастворимого витамина А в молоке кобыл контрольной группы выявлялось в пределах от 263,9 до 284,7 мкг/л. Ассоциативная инвазия сопровождалась выраженным снижением данного показателя и к 60-му дню опыта его значение у животных 2-ой группы составило 96,5 мкг/л. Дегельминтизация и несколько выше дегельминтизация на фоне витаминно-минерального комплекса, в составе основного рациона, способствовали активизации выработки организмом кобыл витамина А и соответственным увеличением его уровня в их молоке. Максимальное содержание витамина А в молоке кобыл регистрировалось у животных 5-ой группы, в которой на фоне дегельминтизации и витаминно-минерального комплеса Микровитам в рацион вносили пробиотик Бактонеотим - 342,7 кг/ л. Подобным образом изменялась в молоке динамикасодержания витамина Е.

2.2.4 Химический состав молока и его восстановление при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной

инвазии кобыл

Результаты исследования динамики изменения содержания в молоке кобыл воды и сухого вещества представлены на рисунке 9.

Содержание жира в молоке кобыл, больных ассоциативным стронгило-идозно-оксиурозно-параскариозным заболеванием, к началу опытов было ниже, чем в молоке животных 1 контрольной группы в 1,58-1,68 раза (на 0,65-0,7%). С прогрессированием заболевания наблюдалось снижение уровня жира в молоке (2 группа): к 15, 30, 45 и 60-ым дням опыта в 1,78; 1,95; 1,92 и 2,02 раза (на 0,8; 0,83; 0,85 и 0,99%). Показатель жира в молоке кобыл 3,4 и 5 групп, подвергнутых разным методам терапии, имел тенденцию к повышению. При этом следует отметить, что уровень жира до физиологического значения восстановился только в молоке кобыл 5 группы.

Содержание белка в молоке от больных ассоциативной инвазией кобыл вначале наших исследований было снижен в 1,32-1,38 раза (на 0,57-0, 65%). С прогрессированием заболевания понижалось и содержание белка в мо-локе кобыл 2 группы. Его значение уступало контрольному уровню к 15,30, 45 и 60-ым дням опыта в 1,69; 2,05; 2,1 и 2,79 раза (на 1,055; 1,33; 1,32 и 1,54%).

15

%

Фон 115 I 30 I 45 I 60 I 90 Сроки исследования в днях от

начала дегельминтизации

Фон! 15 I 30 I 45 I 60 I 90 Сроки исследования в днях от

начала дегельминтизации

—♦— Контроль - здоровые —■— Контроль - больные ---д--- Дектомакс _Дектомакс + Микровитам

—о— Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим

Рисунок 9. Динамика изменения содержания в молоке кобыл воды (а) и сухого вещества (б), в %

Дегельминтизация кобыл Дектомаксом (3 группа) приостанавливала дальней-шее снижение содержания белка в молоке животных и даже способствовала некоторому его повышению. Более выраженное повышение белка регистрировалось в молоке кобыл 4 группы Максимальное увеличение уровня белка отмечалось в молоке кобыл 5 группы. Здесь описываемый показатель увели-чился, по сравнению с первоначальным фоновым значением, к 15; 30, 45, 60 и 90-ым дням в 1,16; 1,45; 1,5; 1,47 и 1,49 раза (на 0,28; 0,77; 0,79; 0,81 и 0,83%).

Содержание лактозы в молоке животных, больных стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозным заболеванием, к началу исследований было ниже, чем в контроле в 1,32-1,43 раза (на 1,7-2,1%). Уровень молочного сахара в молоке кобыл 2 группы в процессе опыта понижался и был ниже контрольного показателя к 15, 30, 45, 60 и 90-ым дням исследований в 1,46; 1,52; 1,75; 1,83 и 2,03 раза (на 2,1; 2,2; 3,0; 3,1 и 3,4%). Содержание лактозы в молоке кобыл 3, 4 и 5 опытных групп увеличилось, по сравнению с первоначальным значением.

Самое высокое повышение уровня лактозы регистрировалось в молоке кобыл 5 группы. К этим же срокам исследований описываемый показатель превысил контрольный уровень в 1,24; 1,4; 1,44; 1,46 и 1,42 раза (на 1,2; 2,0; 2,2; 2,3 и 2,1%). С 30 дня исследований уровень лактозы в молоке кобыл 5 группы соответствовал физиологическим значениям.

Уровень золы в молоке кобыл, больных ассоциативной инвазией, уступал к началу опытов его значению в молоке здоровых животных в 1,2-1,28 раза (на 0,07-0,09%).

Содержание золы в молоке животных 2 группы продолжало снижаться по срокам исследований и уступало контрольному показателю к 15 дню опыта

в 1,23 раза (на 0,07%), к 30 дню в 1,42 раза (на 0,12%), к 45 дню в 1,61 раза (на 0,16%), к 60 дню в 1,58 раза (на 0,14%), к 90 дню в 1,86 раза (на 0,19%).

Содержание золы в молоке кобыл 3, 4 и 5 групп постепенно повышалось по срокам исследований. Однако по 3 и 4 группам оно продолжало уступать показателю животных контрольной группы, а по 5 группе - с 45 дня превышало его.

2.2.5 Состояние естественного микробиоценоза кишечника и его коррекция при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей

Показатели исследования в кишечнике лошадей динамики бифидобактерий представлены в таблице 4. Подобным образом изменялась в кишечнике кобыл динамика лактобацилл. Параллельно с активицацией в кишечнике животных опытных групп нормофлоры регистрировалось постепенное снижение в сторону физиологических норм условно-патогенных форм микроорганизмов: стафилококков, эшерихий и клостридий.

Таблица 4 Динамика изменения содержания в кишечнике кобыл бифидобактерий, КОЕ/г

Группа животных и использованные препараты Статистический показатель Сроки исследования в днях от начала дегельминтизации

Фон 15 30 45 60

1. Контрольная (здоровые) М 9,90 10,60 9,40 10,20 10,00

±т 0,38 0,58 0,26 0,29 0,56

СУ,% 8,63 12,18 6,14 6,33 12,58

2. Контрольная (больные) М 6,10 5,30 3,70 2,30 1,80

±т 0,33 0,30 0,10 0,13 0,07

Су,% 12,16 12,66 6,34 12,30 8,78

Р *** *** **» ***

3. Дектомакс М 5,80 5,90 7,40 6,90 7,80

±т 0,37 0,33 0,29 0,33 0,37

СУ,% 14,43 12,57 8,81 10,75 10,73

Р **♦ ** *** *

4. Дектомакс + Микровитам М 6,20 6,70 10,00 9,70 9,40

±т 0,37 0,30 0,45 0,30 0,51

о,% 13,49 10,01 10,00 6,92 12,13

Р * *** *** ***

5. Дектомакс + Микровитам+ Бактонеотим м 6,00 9,90 16,60 15,60 15,90

±т 0,45 0,33 0,62 0,51 0,87

С\,% 16,67 7,49 8,36 7,31 12,26

Р *** *** *** ***

Фоновый уровень микрогрибов Candida в кишечнике больных ассоциативной инвазией лошадей был повышен в 2,04-2,4 раза (на 2,3-3,1 lg КОЕ/г). Данный показатель в кишечнике животных 2 группы по ходу опыта имел тенденцию к дальнейшему активному повышению. К 15, 30, 45 и 60-ым дням опыта их уровень превысил контрольное значениев 3,15; 3,08; 4,3 и 5,11 раза (на 4,1; 5,08; 6,6 и 74 lg КОЕ/г). Данный процесс в кишечнике кобыл 3 группы был выражен незначительно, у животных 4-ой группы - имел умеренную степень проявления и максимальное снижение активности микрогрибов Candida отмечалось в кишечнике лошадей 5-ой группы.

Уровень микрогрибов из рода Candida в кишечнике лошадей 5 группы понизился, по сравнению с фоновым значением, на 15 день опыта в 1,51 раза (на 1,6 lg КОЕ/г), на 30 день - в 1,8 раза (на 2,1 lg КОЕ/г), на 45 день - в 2,47 раза (на 2,8 lg КОЕ/г), на 60 день - в 2,76 раза (на 3,0 lg КОЕ/г). К 45 и 60 дням исследований содержание микрогрибов Candida в кишечнике животных данной группы соответствовало физиологическим нормам, составив 1,9 и 1,7 lg КОЕ/г.

В кишечнике здоровых кобыл 1 контрольной группы микрогрибы из рода Pénicillium и Aspergillus не выделись. У больных кобыл 2-5 групп к началу исследований были обнаружены, не свойственные для кишечника, указанные виды микроскопических грибов. Причем в кишечнике кобыл 2-ой группы по ходу опыта они имели тенденцию к повышению. Проведенный курс текрапии способствовал полному выведению из кишечника животных микрогрибов из родов Pénicillium и Aspergillus.

выводы

1. Ассоциативное стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозное заболевание лошадей сопровождается изменениями гемопоэза, развитием в организме животных вторичных иммунодефицитов, характеризующихся:

а) затормаживанием гемо- и эритропоэза, развитием лейкоцитоза, эозинофилии;

б) снижением факторов естественной резистентности: лизоцимной, бактерицидной, комплементарной актиности сыворотки и фагоцитарной активности лейкоцитов крови;

в) нарушением баланса иммунокомпетентных клеток Т- и В-систем иммунитета в виде уменьшения в крови содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов при увеличении уровня Т-супрессоров;

д). иммуноцитологическим истощением костного мозга, лимфатических узлов и селезенки проявляющимся:

- в миелограмме активизацией нейтрофилов, эозинофилов, лимфоцитов, моноцитов, при затормаживании пролиферации и дифференциации клеток эритроидного ростка и плазматических клеток;

- в аденограмме повышением реакции макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, на фоне лимфопении и плазмоцитопении;

- в спленограмме усилением активности макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, на фоне снижения содержания лимфоцитов и плазматических клеток.

2. Ассоциативная стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозная инвазия лошадей приводит к глубоким дисбактериозам, сопровождающимся дисбалансом между нормофлорой, условно-патогенными микроорганизмами и микроскопическими грибами, проявляющимися в кишечнике:

- снижением содержания бифидобактерий и лактобацилл;

- повышением уровня стафилококков, эшерихий и клостридий;

- активизацией микрогрибов из рода Candida, появлением и активным размножением микрогрибов из родов Aspergillus и Pénicillium.

3. Молоко, полученное от кобыл, больных ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазией характеризуется:

а) пониженным уровнем водо- и жирорастворимых витаминов (С, BJ, В2, Н, В5;В12, А, Д, Е);

б) изменениями показателей биохимического состава молока в виде снижения содержания сухого вещества, жира, белка, лактозы, золы и повышения уровня воды.

4. Дегельминтизация лошадей, больных ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазией Дектомаксом не восстанавливает иммунную реактивность организма, колонизационную резистентность кишечника, биохимический состав и уровень витаминов в молоке кобыл и не является достаточной.

5. Положительное влияние на морфологические показатели крови, состояние естественной резистентности, параметры Т- и B-систем иммунитета в крови, иммуноцитологические перестройки в костном мозге, лимфатических

узлах и селезенке, микробиоценоз кишечника, биохимические показатели молока и уровень витаминов в нем при ассоциативной стронгилаидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии кобыл оказывает дегельминтизация Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом. При этом перечисленные параметры достигают уровня, соответствующего нижней границе физиологических норм.

6. Полному восстановлению иммунного статуса лошадей, больных ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазией, способствует дегельминтизация Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бакто-неотимом. При этом по сравнению с данными больных животных:

а) нормализуется гемо- и эритропоэз, лейкопоэз (уровень гемоглобина и эритроцитов в крови повышается на 47,3% и 7,44 млн/мкл, содержание лейкоцитов снижается на 5,17 тыс/мкл, эозинофилов - на 826,1 ед/мкл;

б) повышаются естественные защитные реакции организма: лизоцимная активность сыворотки крови на 20,1%, бактерицидная - на 41,5%, комплементарная - на 35,6 ед., усиливается фагоцитоз - на 36,7%;

в) активизируются в крови Т-Е-РОК-лимфоциты на 30,5%, Т-хелперы -на 18,6%, В-ЕАС- лимфоциты -на 11,8% и снижается уровень Т-супрессоров до физиологических норм - на 15,4%,

7. Дегельминтизация лошадей Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей способствует восстановлению иммуноклеточных реакций в миело-грамме, аденограмме и сгшенограмме. При этом:

а) в костном мозге снижается уровень нейтрофилов в 1,67 раза (на 28,3%), в том числе миелоцитов в 6,64 раза (на 0,79%), метамиелоцитов • в 1,49 раза (на 9,8%), палочкоядерных в 1,6 раза (на 5,8%), сегментоядерных в 1,39 раза (на 2,6%); уменьшается число эозинофилов в 6,59 раза (на 33,0%), лимфоцитов в 1,53 раза (на 4,2%), моноцитов в 6,0 раз (на 4,5%), повышается содержание клеток эритроидного ростка в 1,7 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 4,66 раза (на 1,1%);

б) в лимфатическом узле повышается уровень лимфоцитов в 1,19 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 6,0 раз (на 0,25%), при снижении активности макрофагов в 6,2 раза (на 2,6%), нейтрофилов в 5,33 раза (на 1,95%), эозинофилов в 10,6 раза (на 10,6%), моноцитов в 9,23 раза (на 4,28%);

в) в селезенке активизируются лимфоциты в 1,4 раза (на 24,4%), плазматические клетки в 2,16 раза (на 0,49%), затормаживается реакция макрофагов - в 3,77 раза (на 2,91%), нейтрофилов в 2,37 раза (на 1,33%), эозинофилов в 12,2 раза (на 27,0%), моноцитов в 3,75 раза (на 2,2%).

8. Дегельминтизация лошадей Дектомаксом на фоне аминокислотно-ми-нерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотико-терапии Бактонеотимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей способствует восстановлению среднесуточного удоя, химического состава и уровня витаминов в молоке кобыл:

а) среднесуточный удой молока увеличивается в 2,86 раза;

б) повышается содержание водорастворимых витаминов: аскорбиновой кислоты в 3,26 раза (на 120,6 мкг/л), тиамина в 6,6 раза (на 296,8 мкг/л), рибофлавина в 6,91 раза (на 322,1 мкг/л), биотина в 2,03 раза (на 6,1 мкг/л), пантотеновой кислоты в 3,56 раза (на 1106,0 мкг/л), цианкобаламина в 2,46 раза (на 1,49 мкг/л), жирорастворимых витаминов: ретинола в 3,46 раза (на 255,6 мкг/л), токоферола в 2,56 раза (на 548,0 мкг/л));

в) снижается уровень воды в 1,06 раза (на 5,8%), при повышении сухого вещества в 2,11 раза (на 5,8%), жира в 2,41 раза (на 1,025), белка в 2,93 раза (на 1,66%), лактозы в 2,12 раза (на 3,7%), золы в 2,0 раз (на 0,22%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики и лечения ассоциативного стронгилоидозно-оксиу-розно-параскариозного заболевания лошадей, с целью восстановления иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, молочной продуктивности, витаминов и химического состава молока кобыл целесообразно проводить дегельминтизацию животных Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-вита-минной подкормки Микровитамом, иммунопробиотикотера-пии Бактонео-тимом.

2. Дектомакс применять в дозе 0,2 мг/кг из расчета 1 мл 1%-го раствора на 50 кг массы животного вводить однократно, подкожно.

Препарат Микровитам применять в дозе 0,3 мл на 10 кг массы животного, внутримышечно 1 раз в день, в течение месяца.

Бактонеотим назначать за 30-40 минут до кормления из расчета 10 таблеток на животное, 1 раз в день, в течение 7 дней. Курс лечения повторять 2 раза с интервалом 7 дней.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Маннапова Р. Т. Цитологические реакции при ассоциативной инвазии лошадей /Р. Т. Маннапова, С. В. Ларионов, 3. Р. Галин //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями.-Выпуск 8,-Москва, 2007- С.200-203.

2. Ларионов С. В. Коррекция минерального обмена при ассоциативной инвазии лошадей /С. В. Ларионов С. В., 3. Р.Галин // Современные проблемы интенсификации производства в реализации национального проекта «Развитие АПК».- Москва, 2007 - С. 163-167.

3. Ларионов С. В. Биохимические показатели молока при гельминтозах кобыл /С. В. Ларионов, 3. Р. Галин //Современные проблемы интенсификации производства в реализации национального проекта «Развитие АПК»,- Москва, 2007.-С. 167-170.

4. Галин 3. Р. Коррекция иммунодефицита при ассоциативной инвазии лошадей /3. Р. Галин //Интеграция аграрной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения. Материалы Всероссийской научно-практической конференции - ЧастьЗ.- Уфа, 2008 - С. 34-37.

5. Маннапова Р. Т. Восстановление уровня витаминов в молоке прополисом и пробиотиком при микстинвазии лошадей /Р. Т. Маннапова. 3. Р. Галин //Ветеринарная медицина домашних животных. Сборник статей-Выпуск 5.- Казань, 2008 - С.129-131.

6. Маннапова Р. Т. Коррекция иммунитетапри ассоциативной инвазии лошадей /Р. Т. Маннапова, 3. Р. Галин //Ветеринария № 7 - 2008,- С. 33-36.

7. Маннапова Р. Т. Микровитам, бактонеотим для восстановления минерального баланса при гельминтозах лошадей /Р. Т. Маннапова, 3. Р. Галин //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями- Москва, 2008.— С. 283-286.

ГАЛИН Зайтун Рифович

КОРРЕКЦИЯ ИММУНИТЕТА, МИКРОБИОЦЕНОЗА И ПОВЫШЕНИЕ КАЧЕСТВА МОЛОКА ПРИ А ССОЦИАТИВНОЙ ИНВАЗИИ КОБЫЛ ПОРОДЫ ВЛАДИМИРСКИЙ ТЯЖЕЛОВОЗ

16.00.03- ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Сдано в набор 26.11.2009 г. Подписано в печать 26.11.2009 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печ. листов 1,5. Усл. печ. л. 1,39. Заказ К» 259. Тираж 100

Отпечатано в типографии ПЛ № 1 450001, г. Уфа, бульвар X. Давлетшиной, 3

Актуальность темы. В последние десятилетия в результате паритета цен и других негативных явлений, коневодству нанесен значительный урон -уменьшилось поголовье лошадей, резко сократилось производство конины и кумыса.

Внимание коневодству в стране снизилось в целом, ухудшилось применение и содержание лошадей, снизилась их продуктивность.

Коневодство недостаточно охвачено научным обеспечением. Не внедряются интенсивные методы и новые формы его введения с учетом перехода на многоукладную экономику. Практически отсутствуют специализированные фермерские крестьянские хозяйства с отработанными экономическими параметрами и технологией применительно к новым условиям. Не ведется поиск организационных форм ведения продуктивных конеферм, отличающихся высоким уровнем продуктивности, качеством продукции и конкурентоспособностью (Е. В. Кожевников, 1990; В. В. Шведов, 1996; К. 3. Махмутов, 1995, 1999; М. Г. Миролюбов, 1997; В. В. Калашников с соавт., 2000).

При этом значительный урон коневодству наносится болезнями инвазионной этиологии. Среди них особое место занимают гельминтозы желудочно-кишечного тракта лошадей, на долю зараженности которым и приходится до 80 - 100% поголовья (Н. Т. Кадырова, 1990; Г. М. Двойносор, 1993; Н. М. Понама-рев, 1999).

В литературе в основном встречаются работы посвященные эпизоотологии гельминтов, разработке мер профилактики и лечения, изучению эффективности антгельминтиков при гельминтозах лошадей (Н. М. Понамарев, 1999; И. А. Архипов, 1999; В. М. Золотев, 1999; М. В. Якубовский, 2000, 2002; В. И. Длубаковский, 2003; В. И. Михайлов, 2003, 2004; Ф. Ю. Петров, Д. А. Смирнов, 2004; О. О. Муромцева, 2004; Д. Ф. Клочков с соавт., 2005).

На сегодня слабо изученными остаются вопросы влияния гельминтозов (а они протекают более чем в 75-80% случаях ассоциативно) на состояние иммунитета (О. О. Муромцева, 2004), иммунной системы, показатели минерального обмена, микробиоценоза кишечника на молочную продуктивность и качество молока кобыл.

В связи с вышеизложенным целью нашей работы явилось — изучить возможности коррекции иммунного статуса, биохимической реактивности организма и микробиоценоза кишечника при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и разных методах лечения.

В задачи исследований входило:

1. Изучить морфологические показатели крови (динамику эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, эозинофилов) при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дек-томаксом, комплексной аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом.

2. Определить особенности иммунной реактивности и возможности ее коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, комплексной амино-кислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом со сравнительной оценкой: а) состояния естественной резистентности (динамики бактерицидной, ли-зоцимной, комплементарной активности сыворотки крови) и активности реакций фагоцитоза; б) динамики изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови;

3. Установить характер иммуноцитологических реакций в центральных и периферических органах иммуногенеза при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом с учетом: а) динамики изменения содержания клеток в миелограмме лошадей; б) динамики изменения содержания клеток в аденограмме лошадей; в) динамики изменения содержания клеток в спленограмме лошадей.

4. Оценить влияние дегельминтизации, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонео-тимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии кобыл на биохимические показатели молока (воды, сухого вещества, жира, белка, лактозы, золы).

5. Определить влияние дегельминтизации, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки и иммунопробиотикотерапии при ассоциативной инвазии лошадей на содержание витаминов в молоке кобыл с учетом: а) динамики изменения содержания водорастворимых витаминов; б) динамики изменения содержания жирорастворимых витаминов.

6. Провести сравнительную характеристику микробно-микологической экологии кишечника и установить пути ее коррекции при ассоциативной строн-гилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом с учетом: а) динамики изменения содержания в кишечнике нормофлоры из родов Bifidobacterium, Lactobacillus; б) динамики изменения содержания в кишечнике условно-патогенных микроорганизмов из родов Staphylococcus, Escherichia, Clostridia; в) динамики изменения содержания в кишечнике лошадей микроскопических грибов из родов Candida, Aspergillus и Penicillium.

Научная новизна. Впервые проведены научные исследования по изучению морфологических показателей крови, иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, биохимического состава и уровня витаминов в молоке при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей, определены эффективные методы их коррекции, возможности повышения молочной продуктивности, восстановления химического состава и содержания жиро- и водорастворимых витаминов в молоке кобыл при комплексной терапии с применением на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минеральновитаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонео-тимом. Установлена возможность коррекции вторичных иммунодефицитов, дисбактериозов при ассоциативной инвазии кобыл. Предложена эффективная схема профилактики и лечения ассоциативного стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозного заболевания лошадей.

Практическая значимость работы. Полученные результаты влияния дегельминтизации Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей на восстановление в организме животных гемопоэза, лейкопоэза, реакции эозино-филов, естественной резистентности, показателей Т- и В- систем иммунитета, на иммуноцитологические перестройки в миелограмме, аденограмме, спленограм-ме, нормализации баланса микробиоценоза кишечника, восстановление химического состава и повышение в молоке содержания водо- и жирорастворимых витаминов, способствующие освобождению животных от гельминтов, оздоровлению их и повышению молочной продуктивности позволяют рекомендовать эти методы комплексной терапии производству, как эффективные экономически оправданные средства лечения при данной патологии.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научно-практических конференциях Башкирского ГАУ(2007-2009), на Всероссийских научно-практических конференциях: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2007; 2008); «Современные проблемы интенсификации производства в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Москва, 2007), «Интеграция аграрной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения» (Уфа, 2008); научно-практической конференции «Ветеринарная медицина домашних животных» (Казань, 2008).

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 7 научных статьях, в том числе 1в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Реализация результатов исследования. Результаты исследований внедрены в СПК «Бишинды» Туймазинского района республики Башкортостан.

Основные положения диссертации выносимые на защиту:

1. Морфологические показатели крови и их коррекция при ассоциативной инвазии лошадей.

2. Особенности иммунной реактивности и возможности ее коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и разных методах лечения.

3. Иммунопатологические реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и на фоне дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммуно-пробиотикотерапии Бактонеотимом.

4. Влияние дегельминтизации Дектомаксом, аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и пробиотикотерапии Бактонеотимом при микстинвазиях кобыл на динамику содержания водо- и жирорастворимых витаминов в молоке.

6. Биохимический состав молока и его восстановление при ассоциативной инвазии кобыл.

7. Микробно-микологическая экология кишечника (нормофлора, условно-патогенные микроорганизмы и микроскопические грибы) и возможности их коррекции при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 228 наименований, в том числе 48 иностранных. Диссертация написана на 192 страницах, иллюстрирована 23 таблицами, 31 рисунками в виде графиков.

ВЫВОДЫ

1. Ассоциативное стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозное заболевание лошадей сопровождается изменениями гемопоэза, развитием в организме животных вторичных иммунодефицитов, характеризующихся: а) затормаживанием гемо- и эритропоэза, развитием лейкоцитоза, i эозинофилии; б) снижением факторов естественной резистентности: лизоцимной, бактерицидной, комплементарной актиности сыворотки и фагоцитарной активности лейкоцитов крови; в) нарушением баланса иммунокомпетентных клеток Т- и В-систем иммунитета в виде уменьшения в крови содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов при увеличении уровня Т-супрессоров; д) иммуноцитологическим истощением костного мозга, лимфатических убтов и селезенки проявляющимся:

- в миелограмме активизацией нейтрофилов, эозинофилов, лимфоцитов, моноцитов, при затормаживании пролиферации и дифференциации клеток эритроидного ростка и плазматических клеток;

-в аденограмме повышением реакции макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, на фоне лимфопении и плазмоцитопении;

- в спленограмме усилением активности макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, на фоне снижения содержания лимфоцитов и плазматических клеток.

2. Ассоциативная стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозная инвазия I лошадей приводит к глубоким дисбактериозам, сопровождающимся дисбалансом между нормофлорой, условно-патогенными микроорганизмами и микроскопическими грибами, проявляющимися в кишечнике:

-снижением содержания бифидобактерий и лактобацилл; -повышением уровня стафилококков, эшерихий и клостридий; -активизацией микрогрибов из рода Candida, появлением и активным размножением микрогрибов из родов Aspergillus и Penicillium.

3. Молоко, полученное от кобыл, больных ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазией кобыл характеризуется: а) пониженным уровнем водо- и жирорастворимых витаминов (С, В] ,<В2, Н, В5В12,А,Д,Е); б) изменениями показателей биохимического состава молока в виде снижения содержания сухого вещества, жира, белка, лактозы, золы и повышения уровня воды.

4. Дегельминтизация лошадей, больных ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазией Дектомаксом не восстанавливает иммунную реактивность организма, колонизационную резистентность кишечника, биохимический состав и уровень витаминов в молоке кобыл и не является достаточной. уменьшается число эозинофилов в 6,59 раза (на 33,0%), лимфоцитов в 1,53 раза (на 4,2%), моноцитов в 6,0 раз (на 4,5%), повышается содержание клеток эритроидного ростка в 1,7 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 4,66 раза (на 1,1 %); £> б) в лимфатическом узле повышается уровень лимфоцитов в 1,19 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 6,0 раз (на 0,25%), при снижении активности макрофагов в 6,2 раза (на 2,6%), нейтрофилов в 5,33 раза (на 1,95%), эозинофилов в 10,6 раза (на 10,6%), моноцитов в 9,23 раза (на 4,28%); в) в селезенке активизируются лимфоциты в 1,4 раза (на 24,4%), плазматические клетки в 2,16 раза (на 0,49%), затормаживается реакция макрофагов — в 3,77 раза (на 2,91%), нейтрофилов в 2,37 раза (на 1,33%), эозинофилов в 12,2 раза (на 27,0%), моноцитов в 3,75 раза (на 2,2%).

8. Дегельминтизация лошадей Дектомаксом на фоне аминокислотно0 минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей способствует восстановлению среднесуточного удоя, химического состава и уровня витаминов в молоке кобыл: а) среднесуточный удой молока увеличивается в 2,86 раза (на 9,5 л); б) повышается содержание водорастворимых витаминов: аскорбиновой кислоты в 3,26 раза (на 120,6 мкг/л), тиамина в 6,6 раза (на 296,8 мкг/л), рибофлавина в 6,91 раза (на 322,1 мкг/л), биотина в 2,03 раза (на 6,1 мкг/л), пантотеновой кислоты в 3,56 раза (на 1106,0 мкг/л), цианкобаламина в 2,46 раза (на 1,49 мкг/л), жирорастворимых витаминов: ретинола в 3,46 раза (на 255,6 мкг/л), токоферола в 2,5,6 раза (на 548,0 мкг/л)); в) снижается уровень воды в 1,06 раза (на 5,8%), при повышении сухого вещества в 2,11 раза (на 5,8%), жира в 2,41 раза (на 1,025), белка в 2,93 раза (на 1,66%), лактозы в 2,12 раза (на 3,7%), золы в 2,0 раз (на 0,22%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики и лечения ассоциативного стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозного заболевания лошадей, с целью восстановления иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, молочной продуктивности, витами уменьшается число эозинофилов в 6,59 раза (на 33,0%), лимфоцитов в 1,53 раза (на 4,2%), моноцитов в 6,0 раз (на 4,5%), повышается содержание клеток эритроидного ростка в 1,7 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 4,66 раза (на 1,1 %); б) в лимфатическом узле повышается уровень лимфоцитов в 1,19 раза (на 15,2%), плазматических клеток в 6,0 раз (на 0,25%), при снижении активности макрофагов в 6,2 раза (на 2,6%), нейтрофилов в 5,33 раза (на 1,95%), эозинофилов в 10,6 раза (на 10,6%), моноцитов в 9,23 раза (на 4,28%); в) в селезенке активизируются лимфоциты в 1,4 раза (на 24,4%), плазматические клетки в 2,16 раза (на 0,49%), затормаживается реакция макрофагов — в 3,77 раза (на 2,91%), нейтрофилов в 2,37 раза (на 1,33%), эозинофилов в 12,2 раза (на 27,0%), моноцитов в 3,75 раза (на 2,2%).

8. Дегельминтизация лошадей Декгомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом и иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом при стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей способствует восстановлению среднесуточного удоя, химического состава и уровня витаминов в молоке кобыл: а) среднесуточный удой молока увеличивается в 2,86 раза (на 9,5 л); б) повышается содержание водорастворимых витаминов: аскорбиновой кислоты в 3,26 раза (на 120,6 мкг/л), тиамина в 6,6 раза (на 296,8 мкг/л), рибофлавина в 6,91 раза (на 322,1 мкг/л), биотина в 2,03 раза (на 6,1 мкг/л), пантотеновой кислоты в 3,56 раза (па 1106,0 мкг/л), цианкобаламина в 2,46 раза (на 1,49 мкг/л), жирорастворимых витаминов: ретинола в 3,46 раза (на 255,6 мкг/л), токоферола в 2,56 раза (на 548,0 мкг/л)); в) снижается уровень воды в 1,06 раза (на 5,8%), при повышении сухого вещества в 2,11 раза (на 5,8%), жира в 2,41 раза (на 1,025), белка в 2,93 раза (на 1,66%), лактозы в 2,12 раза (на 3,7%), золы в 2,0 раз (на 0,22%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики и лечения ассоциативного стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозного заболевания лошадей, с целью восстановления иммунного статуса, микробиоценоза кишечника, молочной продуктивности, витаминов и химического состава молока кобыл целесообразно проводить дегельминтизацию животных Дектомаксом на фоне аминокислотно-минерально-витаминной подкормки Микровитамом, иммунопробиотикотерапии Бактонеотимом.

2. Дектомакс в дозе 0,2 мг/кг из расчета 1 мл 1%-го раствора на 50 кг массы животного вводить однократно, подкожно.

Препарат Микровитам применять в дозе 0,3 мл на 10 кг массы животного внутримышечно 1 раз в день в течение месяца.

Бактонеотим назначать за 30-40 минут до кормления из расчета 10 таблеток на животное, 1 раз в день, в течение 7 дней. Курс лечения повторять 2 раза с интервалом 7 дней.

3.Диссертационный материал рекомендуется использовать при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами ветеринарных и зооинженерных Вузов по дисциплинам «Микробиология и иммунология», «Паразитология и гельминтология», «Коневодство», «Кормление», при написании монографий, научной и учебно-методической литературы. I 4