Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Количественный метод контроля активности сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней

• « V» V/«

9 К А П Г)

' и .МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ВСЕРОССИЙСКИЙ ПХЙ'ДДРСТБЕШгЙ 1ШГЧЮчКХЗЛадиВА1ЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ КОШТОИ, СШЙАРТИЗАЦМЛ И СЕРТИШЙЦМИ ВШЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

МАЗУР Татьяна Васильевна УД< 619:616.981.459:615.373

КОЛИЧЕСТВЕ! ЗШЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ АКТИВ ЮСТЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ПАСТЕРКЛЛЕЗА КРУПШП) РОГАТОГО СКОТА, БУЙВОЛОВ, ОБЩ И СВЛЕЙ

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1993

Работа выполнена з лаборатории контроле и стандарт^заци!*. препаратов против гш стерший за, рожи и гемофилеэа Всероссийского государственного кйучно-иссдедеэательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарнш препаратов Российской йоде рации.

Науиный руководитель - доктор ветеринаргьк наук, профессор Р.В.Дущук

Офкциальныэ оппоненты - доктор ветеринарных паук ,

Татаршшев Н.Т. /&ПКЛ/ кандидат ветеринарных наук Рубчзнков И. 11. /ЫШСГЭ/ Ведущая организация - Московская ветеринарная академия имени К.И.Скрябина

Защита состоится " /У^/»^/_ 1993г, в /У *~час„ на

заседании специализированного совета Д. 120.85.ОХ. при Всероссийском научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и соргификации ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяЯст ~ва Р0СС1ЩС1Ю1; Федерации по адресу; 12302.?, х1.Москва, Звенигородское шоссе. 5, ВПЕЙ.

С диссертационной работой можно ознакомиться з библиотеке Воз-российского даучно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препьратоэ Министерства Сельского хозяйства Российской Федерации.

Автореферат разослан Ученый секретарь

Специализированного совета Козырев ¡0. А.

. I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ведущее этиологическое значение при пасте-реллезе млекопитающих и птиц принадлежит наиболее распространенным видам Пастерелла мультопида и Пастерелла гемолитика. Экономический ущерб от болезни, вызываемой этими возбудителями, обусловлен снижением эффективности животноводческой отрасли на 20 - ЗС$ / Jericho К.И. , 1982, Конопаткин A.A., 1984/. Значимость экономического ущерба увеличиваются, если заболевание протекает эпизоотически / Shewen Г. , 19®; BslscheJr И.Р.г 193?/.

В бывшем СССР для предупреждения пастереллеза изготавливали 14 биопрепаратов. При этом ежегодная вакцинация поголовья в хозяйствах составила свыше Х5 млн.голов крупного рогатого скота, 20 млн. свиней, 1,5 млн. голов мелкого рогатого скота.

Однако,использование противопастереллезннх вакцин становится ■ малоэффективным, если в организме животных необходимо создать иммунный фон в течение нескольких часов или суток. Такие ситуации обычно возникают при непосредственной угрозе инфекции, во время транспортировки, при карантинировании животных или в случае иммунизации молодняка с еще не сформировавшийся иммунной системэй. Незаменимым средством в этих условиях является гипериммунная сыворотка - источник специфических антител и стимулятор общей резистентности организма;

Коммерческую сыворотку против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней готовят путем гипериммунизации волов антигеном, полученным из клеточной массы культур 13 штаммов П.мультоцида серовара В. Готовую сыворотку подвергают контролю качества, по результатам которого решается вопрос о пригодности серии препарата для применения. Такой метод не предусматривает оцен-

ку сыворотки по степени ее эффективности. А это, в свою очередь, обусловливает применение препарата с разной активностью в одинаковых дозах. В результате животные оказываются или "недопривиты-ми" необходимом количеством сыворотки или же используется превышающее ее оптимальную дозу количество.

3 связи с изложенным вьше, является актуальной разработка количественного метода контроля.

Цель работы: разработать количественны!'] метод контроля специфической активности сыворотки протиз пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней и усовершенствовать ее применение для сельскохозяйственных животных.

В задачи исследований входило:

1. Приготовить сухую заранакэдую культуру.вирулентного штамка пастерелл и сухой сывороточный стандарт и;.а^нности противопасте-реллезной сыворотки.

2. Выявить степень разброса показателе?; превентивно" активности серий коммерческой противопастереллсзной сыворотки.

3. Определить корреляционную зависимость между активностью производственной противопастереллезкой сьшоротки для лабораторных и сельскохозяйственных животнкх.

4. Изучить спсктр профилактической и терапевтической эффективности сыворотки против пастереллеза крупного'рогатого скота, буйволов, овец и свиней.

' 5. Подготовить проект изменений и дополнений-в НТД.

Научная новизна. Изготовлены, изучены свойства сухой заражающей культуры пастерелл и сухого сывороточного, стандарта иммунности противопастереллезной сыворотки.

Установлена количественная зависимость ыеуду величиной профилактической и лечебной доз коммерческой противопастереллезной сыворотки для свиней и ее активностью для лабораторных животных.

Определена корреляция между степенью активности сыворотки и содержанием в ней IgG и IsM.

Практическая значимость. Разработан метод количественной оценки сыворотки против пастереллеэа крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней. Подготовлен для утверждения проект дополнения и изменений к ТУ по изготовлению и контролю, а также Наставлению по применению противопастереллезной сыворотки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:

- заседаниях научно-проблемной методической комиссии по контролю и стандартизации препаратов против бактериальных и грибковых инфекций ВГШИ ВП /1990- 1992гг./.

- на межлабораторном научно-производственном совещании сотрудников ВГШЛ Ш /1993г./.

На базе Института ветеринарной медицины ААН Украины проведена комиссионная проверка профилактической и терапевтической эффективности гипериммуиной сыворотки против пастереллеэа крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней в зависимости от количественного содержания в ней единиц активности /икт от 12.10.1992т/. Публикации. По результатам исследований опубликовано 2 работы, одна сдана в печать.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 17 таблицами, I рисунком. Список использованной

литературы включает 209 источников, из них 70 - иностранных авторов .

2. СОБСТВШЫЕ ЖСЙ:ДОВАИЛЯ 2.I. Материалы и методы

В работе представлены результаты исследований, проведенных в 1990-1992гг. в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против пастереллеза, рожи и геюфклеэа Всероссийского научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства Российской Федерации, на экспериментальной базе 01ЦХ "Мангасино" ВГНКй и Орской биофабрике, Исследование иммуиного статуса организма опытных поросят проведено в Институте ветеринарной медицины ААН Украины. Подтитровкз. лечебно-профилактической дозы сыворотки выполнена б хозяйстве, подведомственном Филиалу 1 {невского электровагонного ремонтного завода.

В работе использовали:

а/. 16 штаммов пастереял /П.мудьтоцида сероваров А, В и Д и П.гемолктика серовара А-1/, полученных из коллекции лаборатории контроля и стандартизации препаратов против пастереллеза, рожи и гемофилеза.

Штаммы хранили в лиофклизировакном состоянии при температуре +4°С.

б/. Сыворотки. 2? серий гилеримыунной сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней производи ва 4-х биопредприятий /Алма-Атинского, Грузинского, Азербайджанского биокомбикмов и Орской биофабршш/; нормальную сипоротку крови крупного рогатого скота и лошади неконсервированную; анти-жС

п ¡в 1.1 крупного рогатого скота не специфические.

в/. Опытнив животные: 12000 белых мышей массой 1б-18г; 20 морских сбинок массой 350-400г; 32 поросенка 3-х месячного возраста массой 25-25 кг, полученных от свиноматок крупной белой породы.

Изучение биологических свойств. Культуральные, морфологически':;, ферментативные свойства вирулентных культур изучали по обще-прш.ятым методикам.

шрулентность пастерелл выявляли на белых мышах массой 1613г. При этом исследуецую культуру выращивали на сывороточном МПА а течение 16-18 часов при температуре 37°С, смывали физиологическим раствором и доводили концентрацию смыва до I млрд/мл микробных тел по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича для

бруцелл, уыю.тая полученный результат на коэффициент 1.-31. «ивот-

I 9

н.« заражали подкожно взвесью из разведений от 10 до 10 , которую в объеме о,о мл вводили подкожно животным /по 6 мышей на каждое/С Пярчллельно концентрацию пастерелл определяли высевом на чашки Петри с кровяным агаром.

Сухую культуру штамма №556 П.мультоцида, разведенную физиологическим раствором, высевали на сывороточный агар, инкубировали 13 часов, мелкие прозрачные колонии, флюоресцирующие в косопроходящем свете 3 - формы снимали бактериологической петлей, вносили в бульон Хотхннгера, интенсивно встряхивали до получения однородной взвеси, засевали 10 матровых колб с сывороточным агаром Хот-тннгера, культивировали 13-20 часов при температуре 37°С.

Полученную агаровую культуру смызали бульоном Хоттингера и

о

доводили концентрацию микробных клеток до I млрд./см по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича для бруцелл, аналогично вышеуказанному.

К сусленэии добавляли сахарозо-аелатиновую среду в соотноше-

3

нии 1:1, расфасовывали по I см в стерильные еллулы» лсофилизпровали и запаивали под вакуумом.

В свежбизготовланнь'х образцах проверяли наличие вакуума, уровень остаточной влажности, точность расфасовки, растворимость.

Коэффициент вариации сухого вещества в 1С произвольно отобран»« ампулах с препаратом расчотызади по форадлз У «= • Юи'Й, где б" - квадратичное отклонение, X - средняя арифметическая веса в ампуле.

Дня определения вирулентности сухое вещество ампул разводили в I мл физиологического раствора /рИ •= 7,2/, Затем готовили десятикратные последовательные разведения сухой заражающей культуры из

3

расчета, что в I см исходного материала должно содержаться 0,5

15

млрд. микробная клеток паегерелл, от 10 до 10" , которые вводили в объема 0,5 да белый шлам массой 16-18г. На дозу использовали 5 животных.

Получению сухого сывороточного стандарта иммунности предшествовал выбор серии коммерческой проишопастереллезной сыворотки с усредненным значением К^у для белых мылай. Степень разороса показателей превентивной активности определяли в результате выявления ^60 ^ оеР11й противопастереллезной сыворотки производства 4-х био-предприя'ГИИ. При этом подобранным по принципу аналогов группам белых мышей /по 6 животных в каждой/, вводили вкутрибршинпо сыворотку в дозах: 0,5; 0,25; 0,125; 0,0625; 0,03125; 0,0156; 0,0078 мл. Объем дозы с физиологическим раствором составил 0,5 мл. Контролем служили животные, получившие 0,5 мл нормальной сыворотки крупного рогатого скота или кепривитые. Через 24 часа иммунным и контрольным мышам вводили сухув заражающую культуру штамма Ж56 П.мул^то-цада, разведенную физиологическим раствором в дозе 5ДДт0 , в

объома 0,5 мл подкожно.

ЛД^д и расчитывали по методу Кербера в модификации Аш-марина. Результаты обрабатывали статистически /Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962/.

Для получения сухого стандарта иммунности коммерческой про-тивопастереллезной сыворотки была отобрана сыворотка серии №12, изготовленная в январе 1990 года на Орской биофабрике. Препарат проверяли на стерильность и безвредность по методике, описанной в НТД.

Агглютинирующую активность сыворотки определяли в РИГА.

Превентивную активность препарата исследовали на белых мшах массой 16-13г, как указано выше.

Количественное определение IgG и IgM в сыворотках производили в гйА - "методом двойных антител".

Проверенную сыворотку расфасовывали в стерильные ампулы по I *

мл и после лиофилкзапии запаивали под вакуумом, закладывали на хранение при температуре -20°С. В свежеприготовленных образцах проверяли наличие вакуума, остаточную влажность, точность разлива, стерильность, безвредность, агглютинирующую и превентивную активность, содержание leG и IsM, уровень общего белка. В этих же тестах сухой сывороточный стандарт иммунности был проверен через 3, 6 и 12 месяцев хранения /срок наблюдения/.

Кроме того, исходя из полученных данных по проверке ахвив-ности 27 серий коммерческой сыворотки, была составлена таблица корреляционной зависимости sj^ для белых мышей от количества ЕА в I мп препарата /EJÜ^q/.

Статистическую обработку результатов опытов проводили с вычислением средней арифметической по группе /М/ и средней ошибки средней арифметической /м/, среднеЯ геометрической, коэффициента

парной корреляции и его средней ошибки, критерия достоверности для коэффициента парной корреляции.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Свойства сухой заражающей культуры штамма КС56 П.мультоцида серовара В

Приготовленная нами сухая заражающая культура штамма Коб 3-х фасовочных серий при наличии вакуума в свежеизготовленпих и хранившихся в течение I года образцах имела показатель остаточной влажности соответственно 2,63*2,28$ и 3,41±0,23',£ при уровне вероятности 93,7$. Это указывает на герметичность запаянных аг.ззул и возможность сохранности свойств культуры при относительно низкой /<Ь%/ влажности для биологических объектов.

Обработка результатов выявления точности расфасовки позволила установить незначительную ошибку метода, средняя величина которой равна 0,00181. Коэффициент вариации сухого вещества в ампулах с препаратом значимо не превысил 3,4$.

Установлено, что в .свежеприготовленных образцах концентрация жизнеспособных микробных клеток сухой заражающей культуры в разных ампулах находится в пределах 503-517 бактерий при уровне вероятности 95$, а вирулентность культуры составляет 20-22 микробные клетки. Через б месяцев хранения выживаемость снизилось па

а вирулентность - ь 1,4 раза. По истечению же годичного срока хранения уровета вирулентности сухой заражающей культуры умегь-шился в 1,5 раза по сравнению с исходными величинами.

Оптимальная доза для заражения мышей сухой культурой соот -ветствует что равно 110-120 микробным клеткам.

Целесообразность применения сухой заражающей культуры для контроля специфической активности противопастереллезной сыворот-

ки подтверждена зо время проверки 27 серий коммерческого препарата. Результаты 3-х кратной повторности опыта по каждой серии указывали на отсутствие достоверных различий между наеденными показателями L^q для белых мшей.

2.2.2. Лревентнвная активность коммерческой про-тивопастереллезной сыворотки для белых

мышей

При использовании в проверка превентивной активности сыворотки иммунных доз препарата от 0,5 до 0,0078 мл с шагом разведения 2 выявлена достаточная зависимость эффективности вводимого препарата от дозы. При этом установлен достаточно высокий уровень корреляции с одноименным коэффициентом, равным 0,95 и более.

По такой схеме было проконтролировано 27 серий коммерческой протквопастереллезно" сыворотки. Оценка данных эксперимента показала, что степень варьирования результатов при 3-х кратной повторности опыта по каздог, отдельно взятой серии незначительна /? >95Й/. jto еще раз указало на то, что при выбранном методе контроля :-.?.Bticnv.ocTb доза-зффект - достаточная.

Кро>о того, удалось выявить, что наиболее иммунными были сыворотки Грузинского и Алма-Атинского биокомбинатов, активность которых д.'!я белых кипе;! составила соответственно 0,01205-0,002мл или 87,0-0,02 Y.k я 0,00877±0,0007 »«л или I58,8±0,55 ЕА.

активность сыворотки, производимой Орской биофабрикоЯ /0,03193-0,UOo или 39,5^2,5 ЕА/ в 3,9 рода оказалась ниже по сравнению с препаратом Алма-Атинского биояомбината, в 2,2 раза менее активной по сравнению с сывороткой Грузинского биокомбината и в 2,2 раза выше, чем у серий Азербайджанского биокомбината.

Минимальная активность /0,0555^0,012 мл или 18,0^1,23 ЕЛ/

отмечена у серий Азербайджанского биококбнната.

Таким образом, данные опытов позволяют заключить, что воспроизводимость оценки активности сыворотки в тесте сероэавдты мышей с применением сухой культуры достаточно высока. Причем в каждом случае уровень достоверности полученных результатов находился в пределах, характерных для биологических исследований.

2.2.3. Определение содержания иммуноглобулинов С и

М в сыворотке против пастереллеза крупного ро-; гатого -скота, буйволов, овец и свиней

С целью еыявлсния степени влияния сьшороточных иммуноглобулинов »разных классов на невосприимчивость животных к пастерелле-зу била изучена зависимость содержания IgG и Ig!.', от величины аг-глитинируяцей и превентивной активности в разных сериях противо-пастереллезной коммерческой сыворотки.

В пяти сериях сыворотки, изготовленной Орской биофабрикой и прошедшей государственный контроль, ш определили ЕД^д для белых мыжй и содержание Ig С и Ig'.! /мг/мл/ в трехкратной повторнос-ти с помощью ЛЗА.

Было выявлено, что противопастереллезная коммерческая сыворотка содержит в среднем 30,8-0,064 мг/мл IgG и 3,43^0,12 мг/мл Ig", что превышает их содержание в нормальной сыворотке крупного рогатого скота соответственно на 41,2$ и 37%.

Полученный в результате обработки цифрового материала по превентивной активности сыворотки и содержанием в ней иммуноглобулинов коэффициент корреляции значимо составил -0,51*0,17 для серий коммерческого препарата и IgG; -0,15±0,009 для тех же серий к IgM. ¿то свидетельствует о достаточно тесной и достоверной зависимости в первом случае /Р4 0,1/ и отсутствии таковой во втором.

2.2.4. Сухой сывороточный стандарт иммунности г.ротиЕО-пастереллезкой сыворотки

.Для изготовления сухого стандарта иммунности из 27 проверенных била отобрана серия №12 сыворотки Орской биофабрнки, изготовленная в январе 1990 рода, имеющая средняя уровень превентивной активности для белкх мышей.

Сыворотка была стерильна и безвредна, содержание в кэй фенола составило 0,концентрация £ оде род'икс ионов находилась в пределах 7,3-7,4. Значение для белых милей равнялось 0,03958 мл или 25,5 ЕЛ в I мл. Количество общего белка, определенного методом Лоури, состарило ?, 16 мгд.. Содержание IgC л ]дМ равнялось соответственно 27,9 и 3,34 кг/мл.

Коэффициент вариация сухого вещества в а;,пулах со стандартом имцунноети протиеопастерэллсэпоА сыворотки составил в уровень остаточной плати не превысил 1,84*0,05$ в хранившихся в течение годе образцах. Препарат осгавался стерилышм и безвредном в течение срока хранения. Стабильным ¡¡а протяжении этого периода было содерг.р.ние общего белка.

После годичного хранения прзвентивная активность сухого сывороточного стандарта иммунности снизилась на 5,7$, что составило 0,04003*0,D0U4 мл /24,9*0,25 £А/ по сравнении с активностью сее-жепригоиАланных образцов / 0,03979*0,00058 мл или 23,6*0,26 ЕА/. Содержание Igfi и Igü изменилось при хранении незначительно. В све-жеизготозленных образцах оно составило 29,9*0,08 мг/ил для IgG и 3,34*0,14 мг/мл Ig.M, после годичного хранения - 27,8*0,07 мг/мл и 3,1*0,7 мг/мл соответственно.

Таким образом, применение в качестве контрольного сухого сывороточного стандарта иьа.!унности уменьшает величину ошибки метода в связи с незначительним изменением его свойств при хранении в

течекио I года /срок наблюдения/.

2.2.5. Разработка метода контроля активности сыворотки против пастереллеза крупного рогатого ' скота, буйволов, овец и свиней

Большое значение уделяется корреляции показателей активности препарата для лабораторных и сельскохозяйственных животных. В связи с этим необходимо было определить лечебную и профилактическую дозу сыворотки /в ЕА на I кг живой массы/ для сельскохозяйственных животных и сраэнять es с аналогичной, дозой для белых (.шшей.

Лзучая превентивную активность сыворотки при экспериментальном пастереллезе, мы использовали поросят, не подвергавшихся вакцинации и подобранных в группы по принципу аналогов. Для внутримышечного заражения использовали подтитрованную дозу 18-часовой бульонной культуры /500 млн. микр. тел/ штамма .V655, воспроизводящую клиническую и патвлогоанатомическую картину пастереллеза.

Схема опыта, предусматривающего выявление профилактической и терапевтической дозы сыворотки в ЕА на I кг массы, отражена в таблице I.

Для иммунизации поросят использовали сыворотку серии £12 производства Орской биофабрики со средним уровнем превентивной активности для лабораторных животных. Одна группа /контроль/ оставалась неприЕИтой До/.

Подопытных животных для определения профилактической дозы прививали сывороткой в разных количествах, а затем через сутки заражали подтитрованной летальной дозой культуры пастерелл. При выявлении лечебной дозы подопытных животных заражали той же дозой культуры и через б часов /при повышении температуры тела до 40,2°С/ лечили сывороткой.

Таблица I.

Определение профилактической и терапевтической эффективности сыворотки в зависимости от содержания ЕЛ

1 гр. [0- :во ¡ливая ;Доза сы- I масса |воротки, : : мл Количество ЕЛ в I мл : Коли: пество : ЕА на I ; кг массы 1 Рбзультатн

10-:ят :живот-:ных ;Заболело : Пало

Подтитровка профилактической дозы

I. 4 25 5 25,6 5,1 4 3

2. 4 26 10 25,6 9; 8 3 I

3. 4 25 20 25,6 20,4 Г 0

4. 4 26 40 25,6 40 0 0

Подтитровка терапезтиче ской дозы

о. 4 25 40 25,6 40 2 2

7. 4 25 80 25.6 80,9 I 0

Контроль

5. 4 25 - 4

Установлено, что для предохранения животных от заболевания пастереллезом, профилактическую дозу сыворотки ну.жнс брать из расчета не ненье 40 ЕА на I кг живой массы. Терапевтическое действие оказывает противопастереллезная сыворотка, которую применяют ие позднее появления первых клинических признаков заболевания. Лечебную дозу сыворотки необходимо брать из расчета не менее 00 ЕА на I кг массы животного.

Сравнение величины профилактической дозы для лабораторных животных и поросят показало, что доза сыворотки из расчета на I кг масш поросенка в 1,6 раза больше, чем имцуннап доза для белей мши.

;грО!ле того, проанализировав результаты опытов по выявлению

зависимости между н и для белых мышей и со дерганием в исследуемой сыворотке единиц активности, установив значение количества ЕА в профилактической и терапевтической дозе сыворотки для поросят, мы составили таблицу для количественного контроля активности сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней. /Габлица включена в изменения и дополнения к НГД/.

2.£.6. Эффективность противопастереллезнои коммерческой сыворотки относительно сероваров А и Д П.мультоцида и серовара А-1 П.гемолитика

Определенный научный и практический интерес представляют данные об эффективности коммерческой противопастереллезной сыворотки в отношении пастерелл сероваров А и Д П.мультоцида и А-1 П.гемолитика, не использующихся для получения коммерческой сыворотки, но имеющих большое этиологическое значение в развитии пастереллезной инфекции.

В опьггах по перекрестному заражению белых мышей выявлено, что коммерческая противопастереллезнад сыворотка не активна по отношению к культурам П.гемолитика. Коэффициент иммунологической эффективности относительно пастерелл сероваров А и Д составил соответственно 2055 и 30/», что свидетельствует о незначительном уровне защиты.

ВЫВОД!

I. Разработана сухая заражающая культура штамма К56 П.мультоцида серовара В, обеспечивающая получение стабильных результатов по экспериментальному воспроизведению заболевания пасте-реллезом белых мышей.

-172. Разработан стандарт иммунности сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней, обеспечивающий получение достоверных результатов при контроле активности препарата в течение I года /срок наблюдения/.

3. Определена зависимость между а ц для белых мышей и ЕД^ сыворотки /количеством ЕА в I мл/, на основе чего составлена таблица для контроля активности сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней, позволяющая рассчитывать дозы.

4. В опыте по экспериментально^ заражении поросят установлена минимальная профилактическая и терапевтическая дозы сыворотки /в ЕА/ из расчета на I кг живой массы, составляющая соответственно 40 и 80 ЕА.

5. Установлена тесная коррелятивная связь мзкду содержанием в ком-. мерческой сыворотке 1дС и ЕДзд /ЕА в I мл/ для белых мьазей. С активностью сыворотки и наличием в ней взаимосвязи определить не удалось. Ото дает возможность использовать выявление количества ¡56 в препарате в качестве дополнительного теста оценки эффективности сыворотки.

6. выявлена незначительная эффективность коммерческой противопас-тереллезной сыворотки относительно сероваров А и Д И.мультоци-да и серсвара А-1 П.геколитика.

ПРАКГИЧПХЖЖ ПРЕДЛоЛЕНйЯ

I. Методические указания по проведению количественного контроля специфической активности скворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней /Предприятия, выпускающие данную сыворотку с повышенной в сравнении со стандартом активностью, имеют возможность соответственно увеличить

es выпуск без дополнительных затрат и расширения производственных мощностей/. 2- Нг.стаэланиз по применению сыворотки против пастереллеза свиней, активность которой вырадена в ЕА/мл, а не в объемных величинах. Полученные данные на поросятах могут быть экстраполированы на другие виды квотных, исходя из их кивой массы.

СПИСОК

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Мазур Г.В. Характеристика производственных штаммов пастерелл. // Совершенствование мэтодов государственного контроля ветеринарных препаратов. - Тезисы докладов Всесоюзной научно-ггр&кт( ческой конференции. - М.-1991.-е.197-193.

2. Мазур Т.В. Оценка сыворотки против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней в единицах активности. // Тезисы докладов II Всесоюзной конференции по эпизоотологии. -Новосибирск. - I991.-с.337-333.

Подписано в печать 23.02.93

Формат 60/84 - I/I6 Усл. печ.листов 1,0

Тирак 100 экз. Заказ Л 170

Ротапринт Институт землеустройства УААН