Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.01) на тему:Клинико-морфологическая характеристика иммунодефицита у телят и его коррекция лигфолом

На правах рукописи

ШАПОШНИКОВА Юлия Владимировна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОДЕФИЦИТА У ТЕЛЯТ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ЛИГФОЛОМ

16.00.01 - диагностика болезней и терапия животных 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

- 3 ДЕК 2009

п. Персиаковский-2009

003486423

Работа выполнена в лаборатории патологической морфологии Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН (ГНУ ВНИВИПФиТ) г. Воронеж

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ СУЛЕЙМАНОВ Сулейман Мухитдинович доктор ветеринарных наук, доцент ДЕРЕЗИНА Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Карташов Сергей Николаевич доктор ветеринарных наук, профессор Салаутин Владимир Васильевич

Ведущая организация: Российский университет дружбы

народов

Защита диссертации состоится 21 декабря 2009 г. в ... часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.028.03 при ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» по адресу: 346493, Ростовская область, Октябрьский (с) район, п. Персиановский.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» 346493, Ростовская область, Октябрьский (с) район, п. Персиановский и на сайте www.dongau.ru

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.Н. Дерезина

J

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность. Иммунная система — одна из важнейших гомеостатических систем организма, которая во многом определяет степень здоровья животных и их адаптивные возможности (Федоров Ю.Н., 2006). Она, выполняя иммунные и кроветворные функции, постоянно испытывает неблагоприятные воздействия внешней среды, в результате чего развиваются иммунодефицитные состояния и иммунопатологические процессы в форме аллергии немедленного и замедленного типов, аутоиммунных реакций и др. (Жаков М.С. с соавт., 1998 и др.).

Среди различных видов иммунопатологии у животных значительное место занимают иммунодефицита, которые бывают первичными, возрастными и вторичными (приобретенными), распространены чрезвычайно широко (Карпугь И.М., 2004; Федоров Ю.Н., 2006 и др.).

У молодняка крупного рогатого скота преимущественно встречаются иммунные дефициты, обусловленные недостаточным и несвоевременным поступлением колостральных и трансовариальных факторов защиты и незрелостью иммунной системы (Карпуть И.М. с соавт., 2006). При различных патогенных воздействиях окружающей среды у молодняка крупного рогатого скота развивается комплекс изменений, приводящих к развитию экологически обусловленного вторичного иммунодефицитного состояния организма животного (Дроздова Л.И. с соавт., 2007).

Иммунодефицитное состояние организма сопряжено, со структурной организацией лимфоидных органов (Бут В.И., 1990; Жаков М.С. с соавт., 1998; Буянов A.A., 2000; Дроздова Л.И. с соавт., 2007 и др.). Поэтому следует диагностику иммунодефицитов желательно проводить

иммуноморфологическими методами, которые позволяют определить состояние иммунокомпетентной системы, судить о степени выраженности иммунодефицитов по морфофункционапьным изменениям (Апатенко В.М. с соавт., 2006 и др.).

В доступной литературе немало данных по структурной организации лимфоидных органов у поросят и других животных при иммунодефицитах (Бут В.И., 1990; Буянов A.A., 2000; Клейменов И.С., 2007; Михайлов Е.В., 2007; Асоян Г.Л, 2008; Авдеев В.В., 2008 и др.), тогда как у телят недостаточно изучена клинико-морфологическая характеристика иммунодефицитов.

Кроме того, проблема восстановления, иммунологических нарушений с использованием иммунокоррегирующих препаратов в настоящее время является актуальной, поскольку большинство факторных и инфекционных болезней у животных сопровождается вторичной иммунологической недостаточностью (Федоров Ю.Н., 2006).

Одним из таких препаратов является лигфол, в основе действия которого (Бузлама B.C., 2002) лежит антиоксидантное его действие и активизация иммунокомпитентных органов.

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения клинико-морфологической характеристики иммунодефицита у телят и его коррекции лигфолом.

1.2. Цель и задачи. Целью настоящей работы являлось изучение клинико-морфологической характеристики иммунодефицита у телят и его коррекции лигфолом.

В связи с этим на разрешение ставились следующие задачи:

1. Изучение клинической картины иммунодефицита у телят;

2. Изучение структурной организации лимфоидных органов при иммунодефиците;

3. Изучение влияния лигфола на клиническое состояние телят при иммунодефиците;

4. Изучение влияния лигфола на структурную организацию лимфоидных органов у телят при иммунодефиците.

1.3. Научная новизна. Изучены клинические, гематологические и биохимические изменения у телят при иммунодефиците. Установлено, что клинические признаки иммунодефицита у телят проявляются в виде слабости, бледности видимых слизистых оболочек, взъерошенности шерстного покрова, гипотрофии и отставания в росте. В крови достоверно снижалось содержание общего белка, альбуминов и гаммаглобулинов. Впервые в структурной организации лимфоидных органов стабильно выявлена гипоплазия лимфоидной ткани с низкой функциональной активностью ультраструктуры клеток лимфоидного ряда. Определены структурные особенности иммунодефицитного состояния организма у телят. Применение лигфола предупреждало гипоплазию в структурной организации лимфоидных органов у телят, а также болезни органов пищеварения и дыхания в 30-35 дней у 61,2% голов, а в возрасте 50-55 дней -у 68,7% голов.

1.4. Практическая значимость и внедрение. Знание морфофункциональных особенностей лимфоидных органов у телят в норме и при иммунодефиците позволяет создать научно - обоснованные меры борьбы с ним. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Методы морфологических исследований», 2-е издание, переработанное и дополненное (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2007).

Материалы исследований используются в учебном процессе и в работе НИР НИУ.

1.5. Апробация. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на: отчетных сессиях Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (2003 - 2009 годы); международной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); международной конференции молодых ученых (Воронеж, 2006); международной конференции,

посвященной 100-летию со дня рождения профессора А.А. Авророва (Воронеж, 2006).

1.6. Публикация. Основные материалы диссертации опубликованы в 4 научных работах, в том числе одна статья «Морфология органов лимфоидной и пищеварительной систем у молодняка животных при коррекции иммунного статуса» - в журнале «Ветеринарная патология», №3, 2005, с. 75-80.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клинические, гематологические и биохимические изменения у телят при иммунодефиците и его коррекции лигфолом;

2. Функциональная морфология органов лимфоидной системы у телят при иммунодефиците и его коррекции лигфолом.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Список литературы включает 197 наименований, в том числе 38 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 3 таблицами и 85 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в 2003-2009 годы в лаборатории патологической морфологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ВНИВИПФиТ РАСХН) в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ «Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии» РАСХН по заданию 04 Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному развитию АПК РФ (№ госрегистрации: 01.9.90001257; 01.200.117018).

Опыты проводились на комплексе по откорму крупного рогатого скота ОАО «Засосенская Нива» Красногвардейского района Белгородской области.

Для проведения опытов телят подбирали по принципу парных аналогов по возрасту, массе тела и интенсивности роста. Предварительными клиническими и лабораторными исследованиями были выявлены телята (п = 30) с признаками иммунодефицита. Из них было сформировано две группы (по 15 голов в каждой) телят. Телятам опытной группы лигфол вводили один раз в месяц внутримышечно по схеме: в первый раз - 1,0 мл, а затем каждый последующий месяц дозу увеличивали на 0,2 мл, доводили к шестому месяцу жизни до 2,0 мл. Телятам контрольной группы препарат не вводился. При оценке адаптивных возможностей и состояния здоровья молодняка крупного

рогатого скота учитывали среднесуточный привес, морфологические и биохимические показатели крови.

В период опыта за телятами велось ежемесячное клиническое наблюдение. В 1-10, 30-35 и 50-55 дневном возрасте от каждой группы по 3 теленка подвергали убою. При проведении клинических исследований брали кровь до и после применения препарата для лабораторных исследований. В крови и ее сыворотке определяли: содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, гематокрига, лейкограмму крови общепринятыми методами, общий белок рефрактометрически, белковые фракции по Оллу и Маккорду в модификации С.А. Карпюка (1976), циркулирующие иммунные комплексы (Д.В. Белокриницкий, 1987), уровень общих иммуноглобулинов с помощью наборов фирмы «Лахема».

Образцы лимфатических узлов (подчелюстные, брыжеечные), тимуса, селезенки и костного мозга фиксировались в 10-12% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, заливались по общепринятой методике в парафин. Из парафиновых блоков готовились серийные срезы толщиной 79 мкм. Для изучения общей морфологической структуры органов и тканей парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином и по Ван Гизон. На ДНК окрашивали для подсчета суммарной митотической активности лимфоидных клеток с реактивом Шиффа по методу Фельгена и окрашивали метиловым зелёным-пиронина по Унна - Паппенгейму (выявление ДНК и РНК - метод Браше).

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 2,5 % -ном глютаровом альдегиде на 0,114 М коллидиновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 % -ном растворе тетраокси осмия на том же буфере. Осмомолярность 360 моем достигали введением во второй фиксатор 0,05 М железосинеродистого калия и раствора Рингера. Материал заключали в эпон-812. Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в сочетании с фуксином основным и просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips).

При гисто-цитологическом анализе материала на уровне светового микроскопа в каждой из зон тимуса, лимфоузлов и селезенки подсчитывали клетки в 20-40 полях зрения. При этом учитывали количество клеток лимфоидного ряда. Для подсчета количества клеток на единицу площади и их процентного соотношения использовали окулярную измерительную сетку с известной площадью (0,0114 мм2) при увеличении объектива 90 под иммерсией. Количество морфометрических измерений, необходимых для объективного определения исходной величины было установлено по формуле: Х=400*(100-м)/М (Г. Г. Автандилов и др., 1981). Оптическая плотность гистохимических реакций на срезах измеряли на цитофотометре «Люмам И-3».

С помощью окуляра-микрометра в дольках тимуса измеряли ширину и учитывали соотношение коркового и мозгового слоев, а также количество эпителиальных телец (Гассаля). В лимфатических узлах и селезенке учитывали размеры лимфоидных фолликулов. Данные по морфометрии обрабатывали с помощью морфологической программы Meta Vision 1.2.

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере IBM (программа Микрософт Эксель 2003).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клинические, гематологические и биохимические показатели у телят при иммунодефиците

При иммунодефиците у телят в возрасте 1-10 дней наблюдались: ниже средняя упитанность, слабость, недостаточная развитость и низкая масса тела. При этом у них наряду со снижением упитанности наблюдалась взъерошенность шерстного покрова, а видимые слизистые оболочки глаз и ротовой полости выглядели бледно-розовыми. Телята, отстающие в развитии, нередко неохотно принимали пищу, иногда из-за отсутствия у них аппетита лежали в сторонке во время приема пищи.

Как правило, слабые телята отличались сонливостью или слабой реакцией на раздражители окружающей среды. При термометрии у некоторых телят наблюдалось незначительное снижение температуры тела, а в большинстве случаев температура тела у телят находилась в пределах нормы. У слабых телят нередко наблюдалось расстройство желудочно-кишечного тракта, которое проявлялось в виде поносов. Иногда поносы чередовались с запорами.

Нарушение пищеварения проявлялось загрязнением шерстного покрова вокруг анального отверстия. Испражнения в начале были не зловонными, но довольно жидкими. В последующие дни телята худели, становились вялыми, сонливыми, предпочитали лежать, неохотно пили воду и принимали молоко. Появлялись признаки обезвоживания организма телят в виде западания глаз в глазную орбиту, сухости носовых зеркальц, увеличением вязкости крови и гемоглобина в ней. Увеличилось содержание гемоглобина в крови телят до 112 г/л при гематокрите 50,8%, отмечался слабовыраженный лейкоцитоз с преобладанием сегментоядерных нейтрофилов, уменьшалось содержание общего белка до 52,8 г/л в сыворотке крови, хотя белковые фракции не выходили за пределы нормы (табл. 1).

Таблица ]

Клинические, гематологические и биохимические показатели у телят при иммунодефицитном состоянии

№ п/п Показатели Возрастные периоды (в днях)

1-10 (п = 30) 30-35 (п- 15)

I. Температура тела, ОС 38,6 ±0,2 39,02 ±0,3

2. Пульс (количество ударов) 127,6 ±8,2 77,6 ± 8,2

3. Дыхание (частота) 45,9 ±2,8 25,7 ± 2,8

4. Гематокрит, % 50,8 ±3,5 -

5. Гемоглобин, г/л 112,6 ±4,7 115,33 ±8,52

6. Эритроциты, 1012/л 8,12 ±0,48 8,78 ±0,13

7. Лейкоциты, 109/л 8,27 ± 1,78 11,6 ± 1,06

8. Лейкоформула, % Нейтрофилы: - юные 0,71 ±0,06 0

- палочкоядерные 7,65 ±1,31 6,01 ± 0,88

- сегментоядерные 36,22 ±7,65 38,45 ±5,13

- лимфоциты 51,29 ±4,5 50,66 ±4,80

- моноциты 2,67 ±0,55 2,88 ±0,88

-эозинофилы 1,46 ±0,41 2,00 ±0,60

- базофилы 0 0

9. Общий белок, г/л 52,8 ±0,64 52,02 ±2,01

10. альбумины, % 54,63 ±4,66 55,13 ±2,16

11. альфа - глобулины, % 16,69 ±1,54 20,08 ± 1,10

12. бета - глобулины, % 15,93 ±2,71 14,61 ±2,10

13. гамма - глобулины, % 12,75 ±2,54 9,71 ± 1,75*

* Р < 0,05

В последующие периоды развития у недоразвитых телят наблюдалась легочная недостаточность. При этом у них наблюдался кашель с носовым истечением слизистого характера, но не наблюдалось повышение температуры тела.

3.2. Структурная организация лимфоидных органов у телят при иммунодефиците

Лимфатические узлы. Наблюдалось диффузное проявление гипоплазии лимфоидной ткани на границе коркового и мозгового слоев. В корковом слое отмечалась однородность и гипоплазия лимфоидной ткани. Гипоплазия лимфоидной ткани преобладала как на границе слоев, так и в

корковом слое (Рис. 1 а). В перифолликулярных зонах лимфатического узла преобладали бластные формы лимфоцитов на фоне полиморфности лимфоидных клеток. Здесь же наблюдалось рыхлое содержание клеток ретикулоэндотелия на фоне гипоплазии лимфоидной ткани в мякотных шнурах (Рис. I б). В лимфатических узлах у телят при иммунодефиците фоликулы преимущественно представлялись из пролимфоцитов и лимфобластов, реактивные центры фолликулов едва были заметны, а местами отсутствовали (Рис. 1 в). Мякотные шнуры выглядели в виде узких полосок, состоящих преимущественно из незрелых лимфоцитов. В краевых, промежуточных и мозговых синусах лимфатических узлов рыхло I содержались клетки ретикуло-эндотелия, единичные лимфоциты и гранулоциты крови (Рис. 1 г). В ультраструктуре лимфоидных клеток ядра становились светлыми (Рис. 1 д), полиморфными (Рис. 1 е) и вакуолизированными (Рис. 1 ж). Происходило просветление пролимфоцитов (Рис. 1 з).

Г; „ Г -> ¡и

ш К НЕ Ё§

Рис.1. Структурная организация лимфатических узлов у телят при иммунодефиците: а) Гипоплазия лимфоидной ткани; б) Рыхлое содержание клеток ретикулоэндотелия; в) Отсутствие в фолликуле центра размножения г) Бластные формы лимфоидных клеток в мякотных шнурах; д) Просветление ядер лимфоцитов; е) Полиморфность ядер лимфоидных клеток; ж) Вакуолизация клеток; з) Просветление пролимфоцитов.

Селезенка. При иммунодефицитном состоянии у телят в селезенке наблюдалась выраженная гипоплазия лимфоидной ткани (Рис. 2 а). Белая пульпа была представлена из мелких скоплений лимфоидных клеток (Рис. 2 в), а в периваскулярных зонах в виде муфт (Рис. 2 б). В ультраструктуре селезенки наблюдалась полиморфность ядер и различная электронная плотность клеток (Рис. 2 г), отмечалось просветление ядер мегакариоцитов (Рис. 2 д), а также наблюдалась пикнотичность ядер клеток лимфоидного

ряда (Рис. 2 е). При этом отмечалась низкая функциональная активность клеток лимфоидного ряда.

Рис. 2. Структурная организация селезенки у телят при иммунодефиците: а) Гипоплазия лимфоидных клеток ' в перитрабекулярной зоне; б) Слабовыраженные лимфоидные муфты в зоне кисточковой артерии; в) Разряжение клеток лимфоидной ткани; г) Полиморфность и различная электронная плотность клеток лимфоидного ряда; д) Просветление мегакариоцита; е) Пикнотичность ядер.

Тимус. При иммунодефиците у телят в тимусе наблюдалась слабовыраженная дольчатая структура. Иногда дольки имели продолговатую форму с гипертрофией междольковой соединительной ткани (Рис. 3 а). Гипоплазия лимфоидной ткани сопровождалась ее разреженностью. Здесь же наблюдалось формирование телец Гассаля, которые были единичными (Рис. 3 б). Гипоплазия в тимусе носила диффузный бластклеточный характер (Рис. 3 в). Наблюдались периваскулярные эпителиоидные формирования слоистых телец (Рис. 3 г). В ультраструктуре тиммоциты имели округло-овальные ядра со средней электронной плотностью (Рис. 3 д). Наблюдались бластные тиммоциты с полиморфными митохондриями (Рис. 3 е).

Рис. 3. Структурная организация тимуса у телят при иммунодефиците: а) Гипертрофия междольковой соединительной ткани; б) Гипоплазия тиммоцитов и наличие единичных мелких телец Гассаля; в) Диффузная бластклеточная гипоплазия; г) Периваскулярные эпителиоидные формирования слоистых телец; д) Ультраструктура клеток лимфоидной ткани; е) Властные тимоциты с полиморфными митохондриями

Костный мозг. При иммунодефиците у новорожденных телят в ретикулярной сети красного костного мозга было умеренно выражено миелоидное кроветворение (Рис. 4 а). Очаги кроветворения были представлены преимущественно из эритробластов, эритроцитов и единичных мега- и поликариоцитов заполнявших периферическую часть ретикулярной сети, а по направлению к центру органу занимаемая ими площадь резко уменьшалась за счет наличия здесь обильной жировой ткани (Рис. 4 а). Очаги кроветворения значительно были богаты форменными элементами крови, мега- и поликариоцитами, хотя здесь наблюдалось снижение гемопоэтической активности костного мозга (Рис. 4 б). При этом очаги кроветворения выглядели в виде полосок и островков различных размеров. Здесь же заметно было угнетение гемопоэза с преобладанием клеток гранулопоэза (Рис. 4 в). В ультраструктуре клеток костного мозга наблюдалась соответствующая картина у телят при иммунодефиците (Рис. 4 г, Д, е).

Рис. 4. Структурная организация костного мозга у телят при иммунодефиците: а) Умеренное кроветворение; б) Угнетение клеток миелоидного ряда; в) Преобладание клеток гранулопоэза; г) Преобладание полиморфных электронноплотных гранулоцитов; д) Угнетение созревания полиморфных лимфоцитов; е) Ретикулярные клетки с эритробластами.

3.3. Клиническое состояние телят при применении лигфола

У телят опытной группы отсутствовали клинические признаки иммунодефицита, связанные с гипотермией, гипотрофией, взъерошенностью шерстного покрова, бледностью видимых слизистых оболочек глаз и ротовой полости, сонливостью, слабой реакцией на раздражители окружающей среды, отставанием в росте и снижением аппетита. Кроме того, у телят улучшались гематологические и биохимические показатели крови (табл. 2).

Таблица 2

Гематологические и биохимические показатели у телят при применении

лигфола (п=15)

№ п/п Показатели Возрастные периоды (в днях)

30-35 50-55

1. Общий белок, г/л 59,4±2,02 62,5± 1,42

2. Альбумины, % 58,4±2,18 59,2±4,65

3. Альфа - глобулины, % 9,9±1,01 9,3±2,04

4. Бета - глобулины, % 14Д±1,05 14,0±1,40

5. Гамма - глобулины, % 17,6±1,25 17,5±1,65

6. Эритроциты, 10|2/л 8,4±0,15 8,3±1,02

7. Лейкоциты, 109/л 8,2±1,02 8,7±1,24

8. Гемоглобин, г/л 118±4,52 122±5,12

9. Лимфоциты, % 56,7±4,6 65,6±6,04

10. Моноциты,% 4,0±0,98 3,1±0,99

И. Базофилы, % 0 0

12. Эозинофилы, % 0,2±0,40 0,25±0,31

13. Нейтрофилы, %

- юные 0 0

- палочкоядерные 2,2±0,86 2,0±1,52

- сегментоядерные 36,9±3,88 29,1±4,86

* Р < 0,05

Применение лигфола при иммунодефицитах телят в возрасте 5-7 дней предупредило болезни органов пищеварения и дыхания в 30-35 дней у 61,2% голов, а в возрасте 50-55 дней - у 68,7% голов.

3.4. Структурная организация лимфоидных органов у телят при применении лигфола

Лимфатические узлы. Величина лимфатических узлов варьировала в пределах 2 - 5 см в длину, они мели плотную консистенцию. Поверхность разреза лимфатических узлов была слегка влажная, бледно-серого цвета, гладкая. В структуре узлов выделялось корковое и мозговое вещество Соотношение коркового и мозгового слоев находилось в пределах 1:2. В корковом слое имелись сформированные фолликулы с реактивными центрами (Рис. 5 а). Мозговые тяжи выступали в виде шнуров, а иногда в

J

виде островков. Синусы, особенно мозговые, были хорошо выражены во всех лимфатических узлах (Рис. 5 б, в).

Основная масса клеток лимфатических узлов относилась к лимфоцитам, пролимфоцитам и лимфобластам (Рис. 5 г), которые преобладали в фолликулах. Другие виды клеток лимфатического узла в виде фибробластов, гистиоцитов, макрофагов, полибластов, клеток плазматического ряда и гранулоцитов составляли незначительную часть из общего количества клеток лимфоидной ткани и насчитывались единицами. Они, в основном, легко дифференцировались электронной микроскопией и имели различную электронную плотность (Рис. 5 д, е).

Рис. 5. Структурная организация лимфатических узлов у телят при применении лигфола: а) Гиперплазия лимфоидной ткани в корковом слое с герминативным центром; б) Гиперплазия лимфоидной ткани в мозговых тяжах; в) Гиперплазия лимфоидной ткани в мозговом синусе; г) Различная электронная плотность в стадии созревания клеток лимфоидного ряда; д) Гипертрофия клеток лимфоидного ряда; е) Ультраструктура проплазмацита.

Селезенка. В структуре селезенки красная и белая пульпы были легко различимы. В периваскулярных зонах наблюдались лимфоидные муфты, состоящие из клеток лимфоидного ряда. Присходила гиперплазия лимфоидной ткани, а соотношение белой и красной пульпы составляло 1:5. В паренхиме селезенки наряду с гиперплазией лимфоидной ткани наблюдались клетки макрофагальной системы и плазматического ряда. Лимфоидная ткань наблюдалась в перитрабекулярных зонах (Рис. 6 а), увеличивалось

количество клеток лимфоидного и ретикулоэндотелиального ряда. При этом происходила гиперплазия лимфоидной ткани в белой пульпе (Рис. 6 б), а также клеток ретикулоэндотелия (Рис. 6 в). При электронной микроскопии в белой пульпе активизировалась дифференциация клеток лимфоидного (Рис. 6 г) и плазматического (Рис. 6 е) ряда. Наблюдались клетки мегакариоцитов (Рис. 6 д) с электронноплотной цитоплазмой и ядром.

Рис. 6. Структурная организация селезенки у телят при применении лигфола: а) Перитрабекулярные лимфоидные скопления; б) Преобладание клеток лимфоидного ряда в белой пульпе; в) Гиперплазия клеток ретикулоэндотелия; г) Ультраструктура клеток лимфоидного ряда в белой пульпе; д) Формирование мегакариоцита; е) Плазматическая клетка с активизацией гранулярной эндоплазматической сети.

Тимус. Значительно увеличивалось соотношение коркового и мозгового слоев в пользу коркового вещества. Корковый слой плотно был упакован многочисленными клетками - тиммоцитами (Рис. 7 а). В мозговом слое количество телец Гассаля заметно увеличивалось. Размеры телец Гассапя находились в пределах 51,2±3,2 мкм. Происходила гиперплазия лимфоидной ткани в корковом и мозговом слоях долек тимуса (Рис. 7 б). Гиперплазия носила диффузный характер (Рис. 7 в). Здесь же наблюдалось формирование телец Гассаля (Рис. 7 г). Диффузная гиперплазия лимфоидной ткани в тимусе носила преимущественно крупноклеточный характер (Рис. 7 в). Электронномикроскопически тимоциты имели ядра электронноплотные ядра (Рис. 7 д), а клетки выглядели гипертрофированными (Рис. 7 е).

РисГ 7. Структурная организация тимуса у телят при применении лигфола: а) Плотная упаковка коркового слоя тиммоцитами; б) Гиперплазия клеток тиммоидного ряда в мозговом слое; в) Крупноклеточная гиперплазия тиммоцитов в корковом слое; г) Тельце Гассаля на фоне гиперплазии тиммоцитов; д) Ультраструктурная гиперплазия тиммоцитов; е)

Гипертрофированный тимоцит с функционально активной цитоплазмой.

Костный мозг. Активизировалось миелоидное кроветворение в ретикулярной строме костного мозга. При этом гиперпластические процессы затрагивали клетки как гемопоэтического, так и клетки лимфоидного ряда. Появлялись множества клеток миелоидного ряда, находящихся в стадии дифференциации. Наблюдалось равномерное кроветворение в костном мозге (Рис. 8 а). Форменные элементы диффузно заполняли костный мозг (Рис. 8 б). Местами преобладали эозинофильные гранулоциты и клетки лимфоидного ряда (Рис. 8 в). Наблюдались характерные ультраструктуры грануло- и нормобластов (Рис. 8 г), пролимфоцитов (Рис. 8 д), сегментоядерного нейтрофила (Рис. 8 е) и др.

Рис. 8. Структурная организация костного мозга у телят при применении лигфола: а) Очаги равномерного расположения форменных элементов крови; б) Преобладание клеток лимфоидного ряда; в) Преобладание эозинофильных гранулоцитов; г) Ультраструктурное становление грануло- и нормобластов; д) Пролимфоцит в стадии в стадии дифференциации; е) Дифференциация сегментоядерного нейтрофила.

4. ВЫВОДЫ

1. Клинические признаки иммунодефицита у телят характеризовались наличием гипотермии, гипотрофии, взъерошенности шерстного покрова, бледности видимых слизистых оболочек глаз и ротовой полости, сонливости, слабой реакции на раздражители окружающей среды, отставанием в росте и развитии, снижения аппетита.

2. На фоне иммунодефицитного состояния у телят в период новорожденное™ в большинстве случаев развивалась патология пищеварительной системы, а в более поздние сроки - патология респираторного тракта.

3. У телят с клиническими признаками иммунодефицита в крови увеличивалось содержание гемоглобина до 1 ¡2, б ± 4,7 г/л при гематокрите 50,8 ± 3,5 %, уменьшалось содержание общего белка до 52,8 ± 0,64 % с низким содержанием альбуминов (54,63 ±4,66 %) и гамма глобулинов (12,75 ± 2,54%). В 1-1,5 месячном возрасте у телят содержание в крови общего

белка, альбуминов и гамма глобулинов (9,71 %) оставались на низком уровне.

4. Светооптическая структурная организация лимфоидных органов у телят при иммунодефиците характеризовалась наличием гипоплазии:

в лимфатических узлах значительного уменьшения плотности лимфоидных клеток в фолликулах, отсутствия герминативных центров, отечности и расширения краевых, промежуточных и мозговых синусов;

в селезенке уменьшения объема клеток белой пульпы в 2-3

раза;

в тимусе отсутствия дольчатого строения, значительного разряжения тимоцитов в корковом слое, наличия мелких и единичных телец Гассаля в мозговом слое, расстройства гемодинамики;

в костном мозге угнетения миелоидного кроветворения в виде уменьшения количества клеток гемобластического ряда и их производных.

5. Ультраструктурная организация лимфоидных клеток у телят при иммунодефиците характеризовалась наличием низкой функциональной активности:

органоидов цитоплазмы и ядер пролимфоцитов и лимфобластов в лимфатическом узле;

низкой электронной плотности клеток лимфоидного ряда и мегакариоцитов в селезенке;

фрагментацией гранулярной эндоплазматической сети и митохондрий тимоцитов и телец Гассаля в тимусе;

просветления кариоплазмы ядер клеток миелоидного ряда в

костном мозге.

6. Применение лигфола при иммунодефицитах телят в возрасте 5-7 дней предупреждало болезни органов пищеварения и дыхания в 30-35 дней у 61,2% голов, а в возрасте 50-55 дней - у 68,7% голов.

7. При применении лигфола улучшалась структурная организация лимфатических узлов, селезенки, тимуса и костного мозга у телят. Наблюдалась гиперплазия в структуре лимфоидных органов, улучшалась дифференциация лимфоидных клеток. Увеличивалось количество клеток плазматического ряда.

8. В ультраструктурной организации лимфоидных клеток при применении лигфола увеличивалось содержание гранулярной эндоплазматической сети, полиморфных митохондрий и пластинчатых комплексов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Наставление по применению лигфола в качестве адаптогена и стресс-корректора в ветеринарии (Утверждено департаментом ветеринарии РФ от 03.05.2001 г. за Ks 134-03/0063) следует дополнить: лигфол для коррекции

иммунодефицита применять новорожденным телятам с первого дня жизни по одному разу в месяц внутримышечно по схеме: первый раз - 1,0 мл, а затем каждый последующий месяц дозу увеличивать на 0,2 мл, доведя к шестому месяцу жизни до 2,0 мл. При дальнейшем продолжении применения лигфола учитывая массу тела животного препарат применять в дозе 0,01 мл/кг.

2. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Метода морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2000).

6. Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сулейманов С.М. Роль антиоксидантного статуса в структурной организации лимфоидной ткани молодняка животных / С.М. Сулейманов, Е.В. Михайлов, Ю.В. Шапошникова, A.B. Гребенщиков // Материалы международной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных». - Воронеж: ВГУ, 2004. - С. 313-315.

2. Сулейманов С.М. Морфология органов лимфоидной и пищеварительной систем у молодняка животных при коррекции иммунного статуса / С.М. Сулейманов, Ю.В. Шапошникова и др. // Журнал «Ветеринарная патология», №3 (14), 2005. - С. 75-80.

3. Михайлов Е.В. Интегральные показатели лейкограммы периферической крови коров в оценке неспецифической иммунологической реактивности при введении препарата лигфол / Е.В. Михайлов, Ю.В. Шапошникова и др. // Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных. Первая международная конференция молодых ученых. - Воронеж, 2006. - С. 96-98.

4. Методы морфологических исследований (методическое пособие) /С.М. Сулейманов, B.C. Слободяник, Ю.В. Шапошникова и др.- Воронеж: ФГУ Воронежский ЦНТИ, 2007.- 87с.

Подписано в печать 17.11.2009 г. Формат 60 х 84/16 . Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ № 2942

Отпечатано в типографии Воронежский ЦНТИ - филиал ФГУ «Объединение «Росинформресурс» Минэнерго России 394730, г. Воронеж, пр. Революции, 30

1.1. Актуальность темы. Иммунная система — одна из важнейших гомеостатических систем организма, которая во многом определяет степень здоровья животных и их адаптивные возможности (Федоров Ю.Н., 2006).

Иммунная система, выполняющая иммунные и кроветворные функции, постоянно испытывает неблагоприятные воздействия внешней среды, в результате чего развиваются иммунодефицитные состояния и иммунопатологические процессы в форме аллергии немедленного и замедленного типов, аутоиммунных реакций и др. (Жаков М.С. с соавт., 1998 и др.).

Нарушения функции иммунной системы или иммунного статуса организма являются одним из патогенетических механизмов любого патологического процесса (Галяс B.JI. с соавт., 1980; Жаков И.С. с соавт., 1980, 2000; Карпуть И.М. с соавт., 1996, 1997, 1999, 2000, 2004, 2006; Петров Ю.Ф. с соавт., 1997; Севрюк И.З., 1997; Сулейманов С.М. с соавт., 1997; Буянов А.А., 2000; Деменко J1.B. с соавт., 2000; Иванов В.И. с соавт., 2000; Макаров Ю.А. с соавт. 2000; Юлдашев Р.Ю., 2000; Алешкевич В.А. с соавт., 2002; Золотарева Н.А., 2002; Ковалев М.М., 2002; Ануфриев А.И. с соавт., 2006; Апатенко с соавт., 2006; Топурия Г.М. с соавт., 2006; Федоров Ю.Н., 2006, 2007; Блохин А.А. с соавт., 2007; Вавина О.В., 2007; Дроздова Л.И. с соавт., 2007; Клейменов И.С., 2007 и др.).

Среди различных видов иммунопатологии у животных значительное место занимают иммунодефициты, которые бывают первичными, возрастными и вторичными (приобретенными). Последние распространены чрезвычайно широко (Карпуть И.М., 2004; Федоров Ю.Н., 2006 и др.).

У молодняка крупного рогатого скота часто встречаются возрастные и приобретенные иммунные дефициты, обусловленные недостаточным и несвоевременным поступлением колостральных и трансовариальных факторов защиты, в 2-3 — недельном возрасте с расходованием пассивно перенесенных материнских факторов защиты, незрелостью иммуннойсистемы, нарушением местной защиты пищеварительного тракта при резком переходе на новый корм и воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды, метаболическими нарушениями, токсикозами и различными болезнями (Карпуть И.М. с соавт., 2006). При различных патогенных воздействиях окружающей среды у молодняка крупного рогатого скота развивается комплекс изменений, приводящих к развитию экологически обусловленного вторичного иммунодефицитного состояния организма животного (Дроздова Л.И. с соавт., 2007).

Иммунодефицитное состояние организма сопряжено, со структурной организацией лимфоидных органов (Бут В.И., 1990; Жаков М.С. с соавт., 1998; Буянов А.А., 2000; Дроздова Л.И. с соавт., 2007 и др.). Поэтому, диагностику иммунодефицитов желательно проводитьиммуноморфологическими методами, которые позволяют определить -состояние иммунокомпетентной системы, судить о степени выраженности иммунодефицитов по морфофункциональным изменениям (Апатенко В.М. с соавт., 2006 и др.).

В этой связи достаточно большое внимание уделено изучению структурной организации лимфоидных органов при иммунодефицитах у молодняка свиней, птиц и других животных (Бут В.И., 1990; Буянов А.А., 2000; Клейменов И.С., 2007; Михайлов Е.В., 2007; Асоян Г.Л, 2008; Авдеев В.В., 2008 и др.). Однако до настоящего времени крайне недостаточно изучено морфофункциональное состояние лимфоидных органов у молодняка крупного рогатого скота при иммунодефицитах.

Кроме того, проблема восстановления, иммунологических нарушений с использованием иммунокорегирующих препаратов в настоящее время является актуальной, поскольку большинство факторных и инфекционных болезней у животных сопровождается вторичной иммунологической недостаточностью (Федоров Ю.Н., 2006).

В настоящее время возникновению болезней способствует, как обмен патогенной микрофлоры и несоответствие иммунологического статусамолодняка животных к новой микрофлоре, так и снижение общей неспецифической и специфической резистентности организма под воздействием стрессов различной формы (Плященко С.И. с соавт., 1980; Сулейманов С.М., 1986; Бузлами B.C. с соавт., 2000; Прудников С.И. с соавт., 2002 и др.).

Рецкий М.И. с соавт. (2002) считают, что одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологической резистентности организма, является накопление в организме высокоактивных продуктов свободно-радикального окисления липидов, практически всегда сопровождающее развитие стрессового состояния, проявляющиеся в угнетении как клеточного, так и гуморального иммунитета.

Одним из главных моментов иммунологической защиты телят является создание раннего напряженного иммунитета против этиологически значимых микроорганизмов и формирование групп доращивания и откорма только из равных по иммунному и физиологическому статусу животных, а так же организация лечебных мероприятий с учетом этиологической структуры заболевания (Терехов В.И., 2002).

Однако до настоящего времени недостаточно изучены структурно-функциональное состояние органов иммунной системы у молодняка крупного рогатого скота как при иммунодефицитах, так и при применении препаратов, повышающих иммунологическую резистентность организма.

Одним из таких препаратов, повышающих иммунологическую резистентность организма, является лигфол. В основе действия препарата лигфола (Бузлама B.C., 2002) лежит антиоксидантное действие и активизация иммунокомпитентных органов.

Самотин A.M. (2002) сообщает, что применение препарата лигфола бычкам на доращивании при нарушенной функции печени в дозе 0,026 мл/кг массы тела парентерально (не более 3-5 мл) один раз в месяц оказало выраженное гепатотропное действие, проявляющееся в усилении белково-синтезирующей функции печени, увеличением синтезагамма-глобулинов, снижением диспротеинемии, показателей шунтирования печени, повышением среднесуточного прироста массы тела на 7,6 %.

Применение лигфола глубоко стельным коровам оказало существенное влияние на состояние их гормонально — метаболического гомеостаза (Лобадин К.А. с соавт., 2006). При этом, нормализация метаболического статуса сухостойных коров, иммунизированных в сочетании с лигфолом, способствовала созданию у новорожденных оптимального метаболического состояния, на фоне которого происходило формирование более высокого иммунного статуса (Рецкий с соавт., 2007). Лигфол положительно влиял на организм коров при осеменении и оплодотворении (Андреев Г.М. с соавт., 2007). Положительное влияние лигфола установлено на естественную резистентность организма и у овец (Гнездилова Л.А. с соавт., 2007) и поросят-отъемышей (Ряднов А.А. с соавт., 2007). Однако до настоящего времени, недостаточно изучено влияние лигфола на клинико-морфологическую характеристику иммунодефицита у молодняка крупного рогатого скота.

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения клинико-морфологической характеристики иммунодефицита у телят и его коррекции лигфолом.

1.2. Цели и задачи. Целью настоящей работы являлось изучение клинико-морфологической характеристики иммунодефицита у телят и его коррекции лигфолом.

В связи с этим на разрешение ставились следующие задачи:1. Изучение клинической картины иммунодефицита у телят;2. Изучение структурной организации лимфоидных органов при иммунодефиците;3. Изучение влияния лигфола на клиническое состояние телят при иммунодефиците;4. Изучение влияния лигфола на структурную организацию лимфоидных органов у телят при иммунодефиците.

5. ВЫВОДЫ

1. Клинические признаки иммунодефицита у телят характеризовались наличием гипотермии, гипотрофии, взъерошенности шерстного покрова, бледности видимых слизистых оболочек глаз и ротовой полости, сонливости, слабой реакции на раздражители окружающей среды, отставанием в росте и развитии, снижения аппетита.

2. На фоне иммунодефицитного состояния у телят в период новорожденности в большинстве случаев развивалась патология пищеварительной системы, а в более поздние сроки — патология респираторного тракта.

3. У телят с клиническими признаками иммунодефицита в крови увеличивалось содержание гемоглобина до 112, 6 ± 4,7 г/л при гематокрите 50,8 ± 3,5 %, уменьшалось содержание общего белка до 52,8 ± 0,64 % с низким содержанием альбуминов (54,63 ± 4,66 %) и гамма глобулинов (12,75 ± 2,54%). В 1-1,5 месячном возрасте у телят содержание в крови общего белка, альбуминов и гамма глобулинов (9,71 %) оставались на низком уровне.

4. Светооптическая структурная организация лимфоидных органов у телят при иммунодефиците характеризовалась наличием гипоплазии: в лимфатических узлах значительного уменьшения плотности лимфоидных клеток в фолликулах, отсутствия герминативных центров, отечности и расширения краевых, промежуточных и мозговых синусов; в селезенке уменьшения объема клеток белой пульпы в 2-3 раза; в тимусе отсутствия дольчатого строения, значительного разряжения тимоцитов в корковом слое, наличия мелких и единичных телец Гассаля в мозговом слое, расстройства гемодинамики; в костном мозге угнетения миелоидного кроветворения в виде уменьшения количества клеток гемобластического ряда и их производных.

5. Ультраструктурная организация лимфоидных клеток у телят при иммунодефиците характеризовалась наличием низкой функциональной активности: органоидов цитоплазмы и ядер пролимфоцитов и лимфобластов в лимфатическом узле; низкой электронной плотности клеток лимфоидного ряда и мегакариоцитов в селезенке; фрагментацией гранулярной эндоплазматической сети и митохондрий тимоцитов и телец Гассаля в тимусе; просветления кариоплазмы ядер клеток миелоидного ряда в костном мозге.

6. Применение лигфола при иммунодефицитах телят в возрасте 5-7 дней предупреждало болезни органов пищеварения и дыхания в 30-35 дней у 61,2% голов, а в возрасте 50-55 дней - у 68,7% голов.

7. При применении лигфола улучшалась структурная организация лимфатических узлов, селезенки, тимуса и костного мозга у телят. Наблюдалась гиперплазия в структуре лимфоидных органов, улучшалась дифференциация лимфоидных клеток. Увеличивалось количество клеток плазматического ряда.

8. В ультраструктурной организации лимфоидных клеток при применении лигфола увеличивалось содержание гранулярной эндоплазматической сети, полиморфных митохондрий и пластинчатых комплексов.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Наставление по применению лигфола в качестве адаптогена и стресс-корректора в ветеринарии (Утверждено департаментом ветеринарии РФ от 03.05.2001 г. за № 13-4-03/0063) следует дополнить: лигфол для коррекции иммунодефицита применять новорожденным телятам с первого дня жизни по одному разу в месяц внутримышечно по схеме: первый раз — 1,0 мл, а затем каждый последующий месяц дозу увеличивать на 0,2 мл, доведя к шестому месяцу жизни до 2,0 мл. При дальнейшем продолжении применения лигфола учитывая массу тела животного препарат применять в дозе 0,01 мл/кг.

2. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2000).