Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Функциональная морфология печени и 12-перстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом

На правах рукописи

АВДЕЕВ Виталий Васильевич

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ ПЕЧЕНИ И 12-ПЕРСТНОЙ КИШКИ У ПОРОСЯТ ПРИ ИММУНОДЕФИЦИТНОМ СОСТОЯНИИ И ЕГО КОРРЕКЦИИ ЛИГФОЛОМ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2007

4

— -I г ЬЧ81

003176481

Работа выполнена во Всероссийском НИВИ патологии, фармакологии и терапии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ СУЛЕЙМАНОВ Сулейман Мухитдинович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

БЕСПАЛОВА Надежда Сергеевна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Донской государственный

аграрный университет»

Защита диссертации состоится 15 ноября 2007 г в 15~ часов на заседании диссертационного совета Д 220 010 05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки» (394087, г Воронеж, ул Мичурина 1, тел (4732)53-86-51)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им КД Глинки»

кандидат медицинских наук ДЕ ЖОРЖ Инна Георгиевна

Автореферат разослан « //>> ох <£ 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета .

Л.Г. Хромова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В конце прошлого века стало очевидным, что существующими путями, методами и средствами трудно, а порой и просто невозможно обеспечивать продуктивное здоровье животных Со всей остротой встал вопрос о новой стратегической политике в этом направлении. В ряде последних разработок выкристаллизовалась основная сущность новой стратегии Она заключается во введении в технологию получения, выращивания и использования животных комплекса средств и способов постоянного поддержания продуктивного здоровья (В С Бузлама, 2000, Л Е Бояринцев, 2003, А М Беркович с соавт, 2003, Н П Мещеряков, 2004)

В связи с этим известны некоторые перспективные препараты -адаптогены стресс-корректоры, в частности лигфол (А М Беркович с соавт, 2003, Л Е Бояринцев, 2003, Н П Мещеряков, 2004), который по мнению авторов как при моделировании стрессовых ситуаций у лабораторных животных, так и при проведении производственных испытаний, протестирует процесс снижения массы тела

По отношению к надпочечникам препарат (лигфол) протестирует стрессорную гипертрофию По отношению к иммунокомпетентным органам, таким как селезёнка, тимус, лимфоузлы оказывает коррегирующее и иммуностимулирующее действие, предотвращая стрессорн>ю инволюцию при экстремальных воздействиях В противоположность другим адаптогенам, лигфол значительно потенцирует инволюцию тимуса, протестирует стрессорный ульцерогенез (А М Беркович с соавт, 2003, ЛЕ Бояринцев, 2003, НП Мещеряков, 2004)

Имеются данные о выраженным ростстимулирующем действии при пероральном применении гуминовых препаратов увеличении среднесуточного прироста на 2,5 г/гол в бройлерном птицеводстве при применении "Гумадапт" (Соколов М Ю , 2002).

У бычков при использовании препарата «Гумат» (суточная доза -10 мг/кг живой массы) за 3 месяца при откорме увеличивался привес на 17% (Полномочное А , Бурмакина Л 2001), в опытах на поросятах также получены положительные результаты

Имеются сообщения о положительном влиянии парентерального применения гумииового препарата л да фол» на среднесуточный прирост живой массы поросят с момента отъема до передачи на доращивание среднесуточный прирост поросят по сравнению с контрольной группой был выше на 2,6% (Ряднов А А , Петухова Е В , Саломатин В В , 2006)

Однако до настоящего времени недостаточно изучены морфофункциональные изменения и ультраструктура печени и тонкого кишечника поросят при применении иммунокоррегирующих препаратов у поросят. При этом желательно учитывать чувствительность к неблагоприятным воздействиям гепатоцитов молодых животных, так как в первые два месяца жизни идет процесс ультраструктурной организации

гепатоцитов, становление их эндоплазматической сети - увеличение объемов гранулярной и уменьшение агранулярной эндоплазматической сети (Сулейманова С М с соавт., 2001).

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения функциональной морфологии органов пищеварения в процессе применения лигфола в целях определения сущности механизмов действия его и научного обоснования его применения

1.2. Цель и задачи исследований.

Целью настоящей работы являлось изучение функциональной морфологии печени и двенадцатиперстной кишки у поросят при иммунодефицитом состоянии и его коррекции лигфолом

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи :

1 Изучение клинических и гематологических показателей у поросят при иммунодефицитном состоянии,

2 Изучение структурной организации печени и 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии,

3 Изучение структурной организации печени и 12-типерстной кишки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом

1.3. Научная новнзна Изучена клинико-морфологическая характеристика иммунодефицитного состояния у поросят, структурная организация печени и 12-типерстной кишки на субклеточном, клеточном и тканевом уровнях при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом Установлено, что клиническая картина иммунодефицитного состояния у поросят проявлялась в виде гипотрофии, снижения интенсивности роста, сопротивляемости организма и активности иммунной системы При этом в структурной организации печени и 12-типерстной кишки наблюдались дистрофические процессы с соответствующей ультраструктурной организацией гепатоцитов и энтероцитов При коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом в структурной организации печени и 12-типерстной кишки наблюдались позитивные изменения в ультрастр^ктурной организации их клеток, а также улучшалось клиническое состояние поросят

1.4. Научно-практическая значимость и внедрение Полученные данные на уровне световой и электронной микроскопии, гистохимии, морфометрии позволяют расшифровать патогенетические аспекты развития иммунодефицитного состояния у поросят в печени и 12-типерстной кишки и на этой основе предложить производству научно-обоснованное применение лигфола для коррекции иммунодефицитного состояния

Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03 05.2006, пр № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007)

(Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30 03 2000)

1.5. Апробация результатов исследования. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (2004-2007 гг ), первой международной научно-практической конференции молодых ученых "Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных" (ВНИВИПФиТ, Воронеж, 2006), международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А А Авророва (Воронеж, 2006), на 16-ой Всероссийской научно-методической конференции "Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных "(Ставрополь,2007)

1 6. Публикация По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, одна из которых опубликована в журнале "Ветеринарная патология" № 3 в 2005 году Получены 3 патента (№№ - 2275964,2269387, 2267356) РФ

1.7. Основные положения, выносимые на защиту

1 Клинические и гематологические показатели у поросят при иммунодефицитном состоянии,

2 Структурная организация печени и 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии,

3 Структурная организация печени и 12-типерстной кишки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом

1.8. Объем и структура диссертации. Материал диссертации изложен на 173 страницах текста в компьютерном исполнении, включает обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их анализ, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 106 источников, в том числе 24 зарубежных авторов Диссертация иллюстрирована 66 цветными микрофотографиями, 32 электронограммами, 22 микрофотографиями полутонких срезов и 7 таблицами

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в отделе патологической морфологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 2005-2007 гг в соответствии с планом НИР ВНИВИПФиТ по заданию 04 02 «Изучить системные иммунодефициты в возникновении массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных и разработать средства и способы их коррекции для профилактики и терапии» (№ гос регистрации 01 200 117019) В качестве иммуномодулирующего средства использован препарат лигфол

Научно-производственные опыты проведены в МХП «Николаевское» Аннинского района, ООО «Вишневское» ВерхнеХавского района Воронежской области и в свинокомплексе «Паритет»

Урюпинского района Волгоградской области

Лигфол применялся на 85 и 95 дни супоросным свиноматкам в дозе 3 мл на голову один раз и 20-22 дневным поросятам в дозе 1 мл на голову дважды с интервалом 10 дней.

Подвергались убою поросята в возрасте 3-5 дней после рождения и 45 дней. Подопытные поросята подвергались клиническому наблюдению, взвешивались в начале опыта (22 дневные поросята), при повторном введении препарата (32 дневные поросята) и при убое (45 дневные поросята)

Мазки крови окрашивали по методу Павловского, затем изучали морфологический состав периферической крови и выводили лейкоцитарные индексы Определяли лейкоцитарные индексы по формулам

1) ИСЛС - индекс соотношение лимфоцитов и сегментоядерных

нейтрофилов определяется по формуле ПСЛС = где, Л- лимфоциты,

Не

С- сегментоядерные нейтрофилы 2) Индекс сдвига лейкоцитов (ИСЛ)

ИСЛ -- э+Б + с + п+ м где, Э - эозинофилы, Б - базофилы, С -

Л + \1

сегментоядерные нейтрофилы, П- палочкоядерные лимфоциты, Л-лимфоциты, М- моноциты, Ммц - метамиелоциты 3) Лимфоцитарно-

гранулоцитарный индекс (ИЛГ) ^ ¡^ __Л х 10_ где Э-

\1ц + \1щ + п + с + Э + Б эозинофилы, Б- базофилы, С- сегментоядерные нейтрофилы, П-палочкоядерные лимфоциты, Л- лимфоциты, Мц -миелоциты, Ммц-метамиелоциты 4) Индекс соотношение нейтрофилов и лимфоцитов

(ИСНЛ) ЦСНЛ = П + С где> П- палочкоядерный нейтрофил, СЛ

сегментоядерный нейтрофил, Л- лимфоцит

5) Индекс соотношение нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ) ИСИК4 _ " + с

м

где, П- палочкоядерные нейтрофилы, С-сегментоядерные нейтрофилы, М-моноциты 7) Индекс соотношение лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ)

ИСЛМ = — гДе> Л-лимфоциты, М-моноциты. 8) Индекс соотношение М

лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ) ИСЛЭ = — где' Л-лимфоциты, Э-

Э

эозинофилы

Материалом для морфологических исследований служили образцы печени и слизистой оболочки тонкого кишечника (12-перстной кишки) Материал отбирали в утренние часы • 10 - 11 часов Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, обезвоживали и заливали в парафин по общепринятой методике. Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивались классическими методами гистологии. Из фиксированного материала готовили срезы

толщиной 10 мкм на криотоме

Липиды выявляли Суданом черным «Б», ШИК-позитивные вещества -Шифф-йодной кислотой по Шабадашу, ДНК - по реакции Фёльгена -Шиффа (Э Пирс, 1962.), суммарные белки - раствором амидочерного 10В (Кононский А И , 1976) и РНК - метиловым зеленым -пиронином по Браше (Э Пирс, 1962) В качестве контроля на РНК служили препараты инкубированные в РНК-азе (1мг/мл при +37° С) Учет реакций производился с помощью цитофотометра в единицах оптической плотности

Измерение диаметра ядер, высоту и ширину клеток тонкого кишечника проводили с помощью морфологической программы MetaVision 1 2 Было измерено более 100 ядер, ширина и высота энтероцитов вершины ворсинок, боковых поверхностей ворсинок, энтероцитов крипт, бокаловидных клеток крипт На основании этих показателей вычисляли площадь ядра (S„) и энтероцита (S3H), цитоплазменно-ядерное отношение (ЦЯО) по формулам S, = 7t х А/2 х в/2, Sm, = А х В, ЦЯО =(S,„ - S,) / S„, где Sj-площадь ядра, S„, - площадь клетки, А - длинный диаметр ядра или высота клетки, В - короткий диаметр ядра или ширина клетки, ЦЯО - цитоплазменно-ядерное отношение, к - 3,14 Подсчет МЭЛ в слизистой оболочке кишечника проводили в 10 полях зрения микроскопа (окуляр 10, объектив 40) в расчете на 1000 эпителиоцитов Измерение диаметра ядер гепатоцитов и плотность гепатоцитов (п/104 мкм2) проводили с помощью морфологической программы MetaVision 1 2 Вычисление объема ядер проводили по формуле для шаровидной формы ядра V=TiD3/6, где D- диаметр ядра (Хесин Я Е, 1967, Автандилов Г Г , 1990) Было измерено около 500 ядер гепатоцитов в каждой из групп животных Соотношение ядра к цитоплазме гепатоцита, проводили с помощью окулярной измерительной сетки для цито-гистостереометрических исследований (Г Г Автандилов, 1980) и выражали в процентах

Материал для электронной микроскопии фиксировали при температуре +4° С в 2,5 % растворе глютарового альдегида на 0,2 M S-коллидиновом буфере (рН 7,3), с последующей дофиксацией раствором тетраокиси осмия наведенном на том же буфере и с добавлением раствора Рингера и красной кровяной соли Обезвоживание материала производили ацетоном восходящей концентрации Заливали в эпон 812 Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в сочетании с фуксином основным и просматривались в микроскопе «Leica» Ультратонкие срезы готовились на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips)

Статистическую обработку цифрового материала проводили методами математической статистики с использованием пакета программ Microsoft Excel

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клинические и гематологические показатели у поросят при иммунодефицитном состоянии Клиническими исследованиями было установлено, что многие поросята были недостаточно развиты, гипотрофичными, слабыми и худыми. При этом у них наряду со снижением упитанности наблюдалась взъерошенность шерстного покрова, видимые слизистые оболочки выглядели бледно-розовыми

Как правило, слабые поросята отличались сонливостью или слабой реакцией на раздражители окружающей среды При термометрии у некоторых поросят наблюдалось незначительное снижение температуры тела, а в большинстве случаев температура тела у поросят находилась в пределах нормы

Поросята, которые отставали в развитии нередко неохотно принимали пищу, иногда из-за отсутствия у них аппетита лежали в сторонке во время приема пищи

У слабых поросят нередко наблюдалось расстройство желудочно-кишечного тракта, которое проявлялось в виде поносов Иногда поносы чередовались запорами

Приведенные клинические признаки преимущественно наблюдались у поросят, которые, по нашему мнению, находились в иммунодефицитном состоянии, что в последующем было подтверждено морфологическими исследованиями лимфоидных органов у этих поросят сотрудниками нашего отдела (Асоян Г Л , 2007)

Изучение возрастной динамики у поросят с иммунодефицитным состоянием показало, что поросята действительно отставали в развитии. Среднесуточные привесы у таких поросят в месячном возрасте составляли 271,538±17,461 г против нормы 323,074± 18,691 г, а через две недели -261,304 ±11,209 г, что подтверждало снижения темпов роста у них

Анализ качественного и количественного состава лейкоцитов периферической крови показал, что показатели лейкоцитов крови и особенно показатели её лейкоцитарной формулы у поросят с иммунодефицитным состоянием значительно изменялись и свидетельствовали о понижении сопротивляемости организма и активности иммунной системы.

В частности, показатели лейкоцитарных индексов составляли ИСЛС равнялся 4,7±1,01, ИСЛМ - 7,96±1,29, ИСЛЭ - 46,4±12,94, ИСНЛ -0,43±0,05, ИСНМ - 4,05±3,09, ИСЛ - 0,4±0,05 и ИЛГ - 21,92±2,89 Эти показатели значительно уступали показателям у клинически здоровых поросят

Следовательно, гематологические показатели у поросят с иммунодефицитным состоянием также указывали на снижение неспецифической резистентности организма

3.2. Структурная организация печени и 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии

3.2.1. Печень

3-5 - дневном возрасте. В печени выявлялась ячеистая структура, т. е. гелатоциты выглядели опустошенными, ядра их, как бы, плавали посредине цитоплазмы и были сморщенными. Опустошенность цитоплазмы при окраске на липиды заполнялись жировыми включениями. Здесь же встречались диффузные очаги экстрамедуллярного кроветворения, местами выявлялось расширение пространства Диссе. Границы печеночных долек едва были различимы. Нарушалось микроциркуляторное русло, центральные вены заполнялись форменными элементами крови (Рис. 1).

Рис.1. Структурная организация печени у 3-5-дневного поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Вакуолизация гепатоцитов; б) Следы гликогена в печени; в) Жировая инфильтрация в периваскулярной зоне; г) Снижение оптической плотности РНК в печени.

При этом средний диаметр ядер гепатоцитов составлял 6,06±0,05 мкм, а объем - 121,90±3,11 мкм3. Ядро занимало 31,37±0,57 % цитоплазмы клетки, а плотность гепатоцитов находилась в пределах 47,09±0,90 п/104 мкм2.

Гликоген выявлялся в небольших количествах (18,3±0,41 е. о. п. х 10"), в периваскулярной зоне значительно снижалась оптическая плотность нуклеиновых кислот, в частности РНК - 38,59±0,37 е. о. п. х 102. Распределение липидного материала в печеночной дольке было неравномерно.

45-дневном возрасте. В печени у иммунодефицитных поросят сохранялись незначительные дистрофические процессы. При этом была обнаружена диффузная жировая дистрофия. Причем липиды в печеночной балке располагались избирательно. Оптическая плотность липидов увеличивалось от периферии к центру балки и около центральной вены наблюдалось наибольшая их плотность и составила 43,08 ± 0,38 е. о. п. х Ю2.

Плотность гепатоцитов составляла 37,88±0,62 пУЮ4 мкм2. Средний объем ядра составил 88,91±1,28 мкм3. -Ядро занимало 23,61±0,55 % цитоплазмы гепатоцита. Встречались гепатоциты, содержавшие вакуоли, которые нередко охватывали большие участки. Ядра таких гепатоцитов были смещены к периферии клетки.

У 45-дневных поросят при иммунодефицитом состоянии содержание гликогена в цитоплазме гепатоцитов составило 17,5 ± 0,5 е. о. п. х 102. Причем плотность ШИК - позитивной субстанции была несколько выше по периферии долек печени. Оптическая плотность нуклеиновых кислот была невысокой, т.е. РНК составляла 32,77±0,58 е. о. п. х 102, а ДНК - 48,89±0,43 е. о. п. х 102. Снижалось и количество суммарных белков в печени (49,63±0,54 е. о. п. х 102).

В полутонких срезах заметно было расширение пространств Диссе и наличие лимфоидных клеток в строме печени. Значительное расширение стромы печени наблюдалось с обновлением ее стромальными и лимфоидными клетками.

При электронно-микроскопических исследованиях печени отмечалось мутное набухание цитоплазмы и ее органоидов у гепатоцитов. Органоиды в цитоплазме гепатоцита были умеренно развиты, в частности эндоплазматическая сеть и митохондрии. Утолщалась базальная мембрана гепатоцитов и увеличивалось количество электронно-светлых митохондрий (Рис. 2).

Рис. 2. Структурная организация печени у 45 - дневного поросенка

при иммунодефиците: а) Диффузная вакуолизация клеток печени; б) Жировая инфильтрация в гепатоцитах; в) Умеренная ультраструктурная организация гепатоцита и уменьшение количества гликогена; г) Уплощение пластинок комплекса Гольджи в гепатоците.

3.2.2. Двенадцатиперстная кишка

В слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии имелась тенденция к десквамации эпителиоцитов с боковых поверхностей ворсинки. Площадь ядер энтероцитов апикальной части ворсинки составила 18,38±0,88 мкм2, а площадь самой клетки - 124,29±5,72 мкм2. Соотношение Цитоплазмы и

ядра равнялось к 5,76. Площадь ядер энтероцитов боковых поверхностей ворсинки составила 26,9310,85 мкм2, а самой клетки - 156,09+7,54 мкм2. Уменьшалось соотношение цитоплазмы и ядра до 4,79. Площадь ядер эпителиоцитов крипт составляла 16,4311,06 мкм2. А площадь эпителиоцитов 154,6416,52 мкм2 при соотношении цитоплазмы и ядра -8,41.

В слизистой оболочке тонкой кишки выявлялись мигрирующие клетки. Из мигрантов чаще всего выявлялись лимфоциты и эозинофилы. При этом количество МЭЛ составляло 201,0±14 (Рис. 3).

V-

V. V,

• ; х< "3* \ ... ¿г*,, - -«г ,

I: г*. ;;; . г" — - '-".V- ■_-

V. . V ■ «? - у -

а) б) 11 В) -

Рис. 3. Структурная организация слизистой оболочки 12-ти перстной кишки у 45-ти дневного поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Снижение количества МЭЛ; б) Снижение оптической плотности ДНК в криптах; в) Превалирование криптально-ворсинчатого градиента в РНК; г) Вакуолизация бокаловидных клеток крипт.

Содержание ДНК в ядрах эпителиоцитов крипт составило 22.81^0,23 е.о.п. х 10:. Интенсивность РНК цитоплазмы в энтероцитах апикальной части ворсинок составила 15,28±0,31; в энтероцитах боковых поверхностей ворсинок - 23.17i0.53 и эпителиоцитах крипт - 28,55±0,98. По содержанию РНК в энтероцитах двенадцатиперстной кишки выявлялся «криптально-ворсиночный» градиент (Рис. 3), т.е. в криптах содержалось значительно больше РНК, чем в энтероцитах боковых поверхностей и на апикальной части ворсинок.

Интенсивность реакции суммарных белков в цитоплазме энтероцитов апикальной части ворсинки составляла 18,63±0,46; боковых поверхностях ворсинки - 26,87±0,39; эпителиоцитов крипт - 35,76±0,62 е.о.п. х 10:.

В полутонких срезах выявлялся невысокий однослойный цилиндрический эпителий. При электронно-микроскопическом исследовании выявлены в энтероцитах округлые электронно-светлые митохондрии. Экзокриноциты крипт содержали небольшое количество секреторных гранул в апикальной части клетки, ядра были слабо дифференцированы. Нередко встречались дистрофические во всей толще слизистой оболочки, а в подслизистом слое наблюдали расширение

кровеносных капилляров и гиперемию (Рис. 4).

Рис. 4. Ультрструктурная организация клеток слизистой оболочки 12-

ти перстной кишки у 45-ти дневного поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Эозинофилия в собственном слое слизистой оболочки; б) Дистрофия энтероцитов с низкими микроворсинками; в) Дистрофические энтероциты в криптах слизистой оболочки; г) Расширение микроциркуляторного русла.

3.3. Коррекция иммунодефицитного состояния у поросят лш фолом

3.3.1. Клиническое состояние и динамика роста

При коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом заметно у животных улучшалось клиническое состояние, которое проявлялось в виде повышения их подвижности, аппетита, упитанности и тургора мышц. Видимые слизистые оболочки становились розовыми, шерстный покров был чистым и гладким, отсутствовала сонливость.

У 32 дневных поросят среднесуточный прирост массы составил 323,074 ± 18,691 г, а у 45-дневных - 286,026± 10,251 г. При этом увеличивалась относительная масса самой печени и составила 2,9565 % к массе тела против 2,4352 % у поросят с иммунодефицитным состоянием. Подобная закономерность наблюдалась по относительной массе поджелудочной железы и тимуса.

Анализ качественного и количественного состава лейкоцитов периферической крови показал, что коррекция иммунодефицитного состояния у поросят значительно улучшала гомеостаз и соответственно лейкоцитарные индексы крови (Рис. 5).

При этом у поросят индекс ИСЛС снизился на 45% , ИСЛМ и ИСНМ - на 303% и 270% увеличивались, а также значительно улучшались показатели и других индексов, которые во многом зависели от воздействия нейрогуморальных факторов, ответственных за адаптацию организма и иммунной системы.

■ иммунодефицитное состояние ■ лигфол □ норма

Рис. 5. Лейкоцитарные индексы периферической крови у 45 дневных

поросят

3.3.2. Структурная организация печени

3-5 - дневном возрасте. В паренхиме печени незначительно происходило увеличение количества клеток лимфоидного ряда. Центральные вены были кровенаполнены. Нередко встречались скопления клеток эритробластического ряда. Гепатоциты прилегали друг к другу достаточно плотно, особенно на периферии долек.

Средний диаметр ядра гепатоцитов составлял 6,31±0,05 мкм, а объем ялра - 137,36±2,98 мкм'. Плотность гепатоцитов увеличивалась до 54,93=10,43 п/104 мкм2. Содержание гликогена увеличивалось на 75,6% (Рис. 6).

В печени иногда выявлялось небольшое содержание липидов и оно составляло 17,49±0,73 е. о. п. х 102. Однако в печени значительно улучшалась оптическая плотность ДНК (56,97±0,33 е. о. п. х 102) и РНК (40,2И0,29 е. о. п. * 102).

Рис. 6. Структурная организация печени у поросенка при коррекции

иммунодефицитного состояния: а) Увеличение клеток лимфоидного ряда в паренхиме; б) Увеличение количества гликогена; в) Следовая реакция на липиды; г) Повышение оптической плотности РНК.

45 - дневном возрасте. В печени наблюдалась гиперплазия двух ядерных гепатоцитов и купферовских клеток, которая встречалась повсеместно. Средний объем ядра достигал 110,75±1,19 мкм3, что на 24,56% выше аналогичных показателей при иммунодефиците. Ядро занимало 30,14±0,72 % цитоплазмы гепатоцита. Плотность гепатоцитов составляла 41,30±0,84 п/104 мкм2. Встречались дольки с ярко выраженной лимфоидной инфильтрацией. По локализации и характеру клеточные инфильтраты не всегда были одинаковыми. Так в большинстве случаев клеточный инфильтрат локализовался преимущественно в области междольковой соединительной ткани (перлпортальный инфильтрат), и внутри долек (лобулярный инфильтрат), а в меньшей степени в области Глиссоновых триад (портальный инфильтрат).

Содержание гликогена значительно улучшалось (46,5 ± 1,5 е. о. п. х 102) в паренхиме печени, что было выше на 165,7% аналогичных показателей у поросят при иммунодефиците.

Наименьшее количество лнпидных включений выявлено у 45-дневных поросят группы лигфол по сравнению с контролем и составило 25,98 ± 0,43 е. о. п. х 102, что на 60,3% меньше показателей при иммунодефиците. Липиды в печеночной балке располагались избирательно. Оптическая плотность липидов увеличивалось от периферии к центру балки и около центральной вены наблюдалось наибольшая их плотность (Рис. 7).

Количество ДНК в ядрах гепатоцитах печени 45-дневных поросят, получавших лигфол составляло 50,74±0,49 е. о. п. х 102, а количество РНК в цитоплазме гепатоцитов составило 37,35^0,31 е. о. п. * 102.

Количество суммарных белков в гепатоцитах печени 45-дневных поросят получавших лигфол составляло 54,88^0,72 е. о. п. х 10".

Рис. 7. Структурная организация печени у 45-ти дневного поросенка при коррекции иммунодефицита: а, б) Увеличение лимфоидных и купферовских клеток в межбалочном пространстве; в) Повышение оптической плотности гликогена; г) Следы липидов.

При электронной микроскопии также встречались двуядерные гепатоциты. В гепатоцитах гликоген распологался диффузно, цитоплазма гипертрофировалась и была электронно-плотная. Отчетливо видны

желчные капилляры между гепатоцитами. Цитоплазма гепатоцитов была функционально активна, с развитой гранулярной эндоплазматической сетью и множественными электронно-плотными митохондриями. Встречались и полиморфно-светлые митохондрии, находящиеся в тесном контакте с ярко выраженной гранулярной эндоплазматической сетью (Рис. 8).

Рис. 8. Структурная организация печени и ее клеток у 45-ти дневного поросенка при коррекции иммунодефицитного состояния: а) Увеличение суммарных белков; б) Повышение РНК в цитоплазме гепатоцитов; в) Гиперфункциональный гепатоцит; г) Множество электронно-плотных митохондрий на фоне развитой гранулярной эндоплазматической сети.

3.3.3. Структурная организация слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки

В структурной организации слизистой оболочки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния отсутствовали дистрофические процессы, увеличивалось количество МЭЛ (255,0±19), которые в основном располагались в области базальной мембраны, но также встречались и в апикальной части ворсинки (Рис. 9).

Ядра однослойного цилиндрического эпителия, занимали центральное положение в клетке или были немного сдвинуты к базальной мембране, хорошо была выражена всасывающая каемка, а также секреция бокаловидных клеток.

Средняя площадь ядра энтероцитов, находящихся на апикальной части ворсинки равнялась 19,76±0,92 мкм2, а средняя площадь самой клетки - 132,40±4,94 мкм2. Соотношение цитоплазмы и ядра составляло 5,70.

Средняя площадь ядра энтероцитов боковых поверхностей ворсинки была 30,49±0,68 мкм2, а площадь самой клетки - 174,55 ±7,05 мкм2. ЦЯО равнялось 4,72.

Средняя площадь эпителиоцита крипт составляла 19,194±2,13 мкм2, а средняя площадь эпителиоцита - 174,89±8,48 мкм2 при ЦЯО 7,77.

Содержание ДНК в ядрах эпителиоцитов крипт составляло

34,05±0,45 е.о.п. х102. При исследовании РНК в цитоплазме эпителиальных клеток двенадцатиперстной кишки выявлен криптально -ворсинчатый градиент (Рис. 9).

Интенсивность реакции на РНК в энтероцитах апикальной части ворсинок составила 28,23±0,68 е.о.п. х102 и увеличивалась на 84,75%, в энтероцитах боковых поверхностей ворсинок - 38,36±0,58 е.о.п. х102 и 65,59%; а в эпителиоцитах крипт - 49,87±0,94 е.о.п. х 102 и 74,68% соответственно при коррекции у поросят иммунодефицитного состояния.

Наблюдалось повышение суммарных белков в ядре и цитоплазме энтероцитов. В цитоплазме суммарный белок выявлялся в виде гранул, распределенных по всей клетке и образующих сеть. Количество их в энтероцитах апикальной части ворсинки составляло 21,11 ±0,51 е.о.п. х102, боковых поверхностей - 28,38±0,44 е.о.п. х102, в клетках крипт -39,17±0,58 е.о.п. х102.

Рис.9. Структурная организация слизистой оболочки

двенадцатиперстной кишки у 45-ти дневного поросенка при коррекции иммунодефицитного состояния: а) Увеличение количества МЭЛ в области базальной мембраны; б) Усиление оптической плотности ДНК; в) Криптально - ворсинчатый градиент содержания РНК; г) Повышение содержания суммарных белков.

В полутонких срезах двенадцатиперстной кишки наблюдалась пролиферация лимфоидных клеток в собственной пластинке слизистой оболочки (Рис. 10). Энтероциты боковых поверхностей и оснований ворсинок отличались своей высотой. За базальной мембраной эпители&чьного пласта были выявлены скопления лимфоидных клеток.

Крипты имели характерное строение, у основания которых было обилие бокаловидных клеток. При электронной микроскопии энтероциты имели высокие микроворсинки, в цитоплазме была развита эндоплазматическая сеть, полиморфные митохондрии располагались группами (Рис. 10).

Рис. 10. Структурная организация слизистой оболочки и

ультраструктура ее клеток у 45-ти дневного поросенка при коррекции иммунодефицитного состояния: а) Скопление лимфоидных клеток на базальной мембране эпителиального пласта; б) Увеличение высоты микроворсинок энтероцитов; в) Увеличение количества полиморфных митохондрий; г) Активизация эндоплазматической сети в энтероците.

В слизистой оболочке находились хорошо развитые секреторные клетки - экзокриноциты. Здесь же хорошо были развиты лимфоидные узелки, а в собственной пластинке ворсинки обнаруживались лимфоидные клетки с развитой эндоплазматической сетью, у основания слизистой наблюдались моноцитарные скопления с соответствующей ультраструктурой (Рис. 11).

Рис. 11. Ультраструктурная организация клеток слизистой оболочки

12-ти перстной кишки у 45-ти дневного поросенка при коррекции иммунодефицитного состояния: а) Секреторные клетки - экзокриноциты; б) Активизация ультраструктуры лимфоидных клеток; в) Ультраструктура лимфоидной клетки с развитой эндоплазматической сетью; г) Моноцитарные и эпителиоидные клетки у основания слизистой оболочки.

4. ВЫВОДЫ

1 Клиническая картина при иммунодефицитном состоянии у поросят проявлялась в виде гипотрофии, которая характеризовалась снижением упитанности, взъерошенностью шерстного покрова, бледностью слизистых оболочек, сонливостью или слабой реакцией на раздражители окружающей среды, гипотермией, снижением аппетита и расстройством функции желудочно-кишечного тракта.

2 У поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдался выраженный лейкоцитоз (ИСЛС- 4,7±1,01), низкая сопротивляемость организма (ИСЛМ- 7,96±1,29), эозинофилия (ИСЛЭ- 46,4± 12,94) и слабая активность иммунной системы (ИСНЛ- 0,43±0,05)

3 Динамика интенсивности роста поросят при иммунодефицитном состоянии была невысокая Среднесуточный привес в возрасте 32 дней составил 271,53±17,46 г, а 45 дней - 261,3±11,2 г Относительная масса печени в 45-ти дневном возрасте составила 2,43% к массе тела

4 В печени у 3-5 дневных поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдались дистрофические процессы в виде жировой дистрофии, имелись диффузные очаги экстрамедуллярного кроветворения, расширялось пространство Диссе Средний диаметр гепатоцитов составлял 6,06±0,05 мкм с объемом ядер 121,9±3,1 мкм3, ядро в цитоплазме занимало 31,37±0,57% площади, а плотность гепатоцитов составляла 47,09±0,90 п/104мкм2 В 45-дневном возрасте на фоне формирования балочной структуры незначительно уменьшалась плотность гепатоцитов (37,88±0,62 п/104мкм2), уменьшался объем ядер (88,91±1,28 мкм3) и их процентная доля в цитоплазме (23,61±0,55%) Жировая дистрофия принимала диффузный характер В ультраструктуре печени сохранялось расширение пространств Диссе, в гепатоцитах наблюдалось уплощение пластинчатых комплексов, слабо развивалась гранулярная эндоплазматическая сеть, набухала базальная мембрана клеток и матрикс митохондрий

5 В слизистой оболочке 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдались незначительные десквамативные процессы Площадь энтероцитов апикальной части ворсинок составляла 124,29±5,72 мкм2, боковых поверхностей 156,09±7,54 мкм2, а количество МЭЛ 201,0 ±14,0 В ультраструктурной организации энтероцитов преимущественно выявлялась агранулярная эндоплазматическая сеть, а микроворсинки были низкими и электронно-светлыми

6 У поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом устранился лейкоцитоз (ИСЛС- 2,6±0,38), значительно повышалась сопротивляемость организма (ИСЛМ- 32,1±12,98) и улучшалась функциональная активность иммунной системы (ИСНЛ-0,58±0,09).

7. Динамика интенсивности роста у поросят при коррекции

иммунодефицита лигфолом значительно улучшалась Среднесуточный привес у поросят в возрасте 32 дней составил 323,074±18,69 г, а 45 дней -286,026±10,25 г Относительная масса печени значительно увеличивалась до 2,9565% к массе тела

8 В печени у 45-дневных поросят при коррекции иммунодефицитного состояния улучшалась ультраструктурная организация гепатоцитов за счет увеличения объема гранулярной эндоплазматической сети, цистерн комплекса Гольджи и электронно-плотных митохондрий, а также увеличении оптической плотности гликогена на 165% по сравнению с иммунодефицитным состоянием Плотность гепатоцитов составила 41,3±0,84 п/104мкм2, объем ядер достигал 110,75± 1,19 мкм3 и занимал 30,14±0,72% площади клетки, увеличивалось количество двух ядерных гепатоцитов

9 В слизистой оболочке 12-типерстной кишки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния увеличивалось количество МЭЛ (255±19,0), площадь энтероцитов апикальных (132,4±4,94 мкм2) и боковых (174,55±7,05 мкм2) поверхностей, оптическая плотность РНК в энтероцитах увеличивалась на 84,75% и 65,59% по сравнению с иммунодефицитным состоянием соответственно Улучшалась ультраструктурная организация энтероцитов гранулярная эндоплазматическая сеть умножалась, митохондрии становились электронно-плотными, увеличивалось количество секреторных включений, а микроворсинки на апикальной поверхности энтероцитов были высокими и электронно-плотными

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Для улучшения клинико-морфологического состояния и структурной организации печени и 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии рекомендуется применять лигфол свиноматкам дважды в дозе 3 мл на голову и 20-ти дневным поросятам в дозе 1 мл дважды с интервалом 10-12 дней

2 Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03 05 2006, пр № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30 03 2000)

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Сулейманов С.М Морфология органов лимфоидной и пищеварительной систем у молодняка животных при коррекции иммунного статуса / СМ. Сулейманов . В.В. Авдеев и др // Ветеринарная патология Выпуск№3 (14), 2005 -с 75-80

2 Авдеев В.В. Влияние лигфола и лигавирина на размеры ядер гепатоцитов / В.В. Авдеев, Г JI. Асоян и др // Материалы первой международной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных» Воронеж, 2006 -с 7-10

3 Авдеев В.В. Морфометрия и количественное содержание ДНК (в е о п ) в ядрах энтероцитов боковых поверхностей ворсинок слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки поросят при применении лигфола и лигавирина / В.В. Авдеев, С М Сулейманов, А В Гребенщиков // Материалы международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А А 22-23 июня 2006 г Воронеж, 2006 -с 72-75

4 Авдеев В В. Оптическая плотность РНК цитоплазмы энтероцитов слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки поросят при применении лигфола и лигавирина / В.В. Авдеев, С М Сулейманов, А В. Гребенщиков // Материалы международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А А 22-23 июня 2006 г Воронеж, 2006 -с 75-77

5 Авдеев В В. Оптическая плотность липидов в печени поросят при применении лигфола и лигавирина / В.В. Авдеев // Материалы международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А А 22-23 июня 2006 г Воронеж, 2006 -с 77-78

6 Авдеев В В. Влияние лигфола на печень 45-дневных поросят / В.В. Авдеев // Материалы 16-й Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» 20-22 сентября 2007 г Ставрополь, 2007 -с 120-122

7. Сулейманов С М Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантатеневой кислоты и карнитина /СМ Сулейманов, В С Слободяник В.В. Авдеев //Методические рекомендации Воронеж, 2006, -с 15

8 Сулейманов С М. Методы морфологических

исследований /СМ Сулейманов . В.В. Авдеев //Методическое пособие, 2-е издание Воронеж, 2007, -с.86

9 Пат 2267356 Российская Федерация, B01L 9/00 Лабораторный Т-образный зажим для манипуляции парафиновыми срезами / В.В. Авдеев; А В Гребенщиков, С М Сулейманов, заявитель и патентообладатель- ГУ ВНИВИПФиТ, заявл 20 10 2004, опубл 10 012006, Бюл №01 -4с

10 Пат 2275964 Российская Федерация, B01L 7/00 Пат 2269387 Российская Федерация, B01L 9/00 Лабораторный зажим для манипуляции микротомными срезами / В.В. Авдеев, А В Гребенщиков, С М Сулейманов, заявитель и патентообладатель ГУ ВНИВИПФиТ, заявл 11 01 2005, опубл 10 02 2006, Бюл №4 -4с

11 Пат 2275964 Российская Федерация, МПК B01L 7/00 Морфологический шпатель / В.В. Авдеев, А В Гребенщиков, С М Сулейманов, заявитель и патентообладатель ГУ ВНИВИПФиТ, заявл 09 11 2004, опубл 1005 2006, Бюл №13 -4с

На правах рукописи

АВДЕЕВ Виталий Васильевич

Функциональная морфология печени и 12-перстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом

16 00 02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Формат 60х84'/аб

Гарнитура Тайме Печать офсетная П л. 1,0. Тираж 100 экз Заказ № 2115

отпечатано в типографии ООО «Формат», г Воронеж, Московский пр-т, 36-а

1.1. Актуальность темы. В конце прошлого века стало очевидным, что существующими путями, методами и средствами трудно, а порой и просто невозможно обеспечивать продуктивное здоровье животных. Со всей остротой встал вопрос о новой стратегической политике в этом направлении. В ряде последних разработок выкристаллизовалась основная сущность новой стратегии. Она заключается во введении в технологию получения, выращивания и использования животных комплекса средств и способов постоянного поддержания продуктивного здоровья (B.C. Бузлама, 2000; JI.E. Бояринцев, 2003; A.M. Беркович с соавт., 2003; Н.П. Мещеряков, 2004).

В связи с этим известны некоторые перспективные препараты -адаптогены стресс-корректоры, в частности лигфол (A.M. Беркович с соавт., 2003; J1.E. Бояринцев, 2003; Н.П. Мещеряков, 2004), который по мнению авторов как при моделировании стрессовых ситуаций у лабораторных животных, так и при проведении производственных испытаний, протектирует процесс снижения массы тела.

По отношению к надпочечникам препарат (лигфол) протектирует стрессорную гипертрофию. По отношению к иммунокомпетентным органам, таким как селезёнка, тимус, лимфоузлы оказывает коррегирующее и иммуностимулирующее действие, предотвращая стрессорную инволюцию при экстремальных воздействиях. В противоположность другим адаптогенам, лигфол значительно потенцирует инволюцию тимуса, протектирует стрессорный ульцерогенез (A.M. Беркович с соавт., 2003; J1.E. Бояринцев, 2003; Н.П. Мещеряков, 2004).

Имеются данные о выраженным ростстимулирующем действии при пероральном применении гуминовых препаратов: увеличении среднесуточного прироста на 2,5 г/гол в бройлерном птицеводстве при применении "Гумадапт" (Соколов М.Ю.; 2002).

У бычков при использовании препарата «Гумат» (суточная доза - 10 мг/кг живой массы) за 3 месяца при откорме увеличивался привес на 17%

Полномочное А., Бурмакина JI. 2001), в опытах на поросятах также получены положительные результаты.

Имеются сообщения о положительном влиянии парентерального применения гуминового препарата лигфола на среднесуточный прирост живой массы поросят с момента отъема до передачи на доращивание: среднесуточный прирост поросят по сравнению с контрольной группой был выше на 2,6% (Ряднов А.А., Петухова Е.В., Саломатин В.В., 2006).

Однако до настоящего времени недостаточно изучены морфофункциональные изменения и ультраструктура печени и тонкого кишечника поросят при применении иммунокоррегирующих препаратов у поросят. При этом желательно учитывать чувствительность к неблагоприятным воздействиям гепатоцитов молодых животных, так как в первые два месяца жизни идет процесс ультраструктурной организации гепатоцитов, становление их эндоплазматической сети - увеличение объемов гранулярной и уменьшение агранулярной эндоплазматической сети (Сулейманова С.М. с соавт., 2001).

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения функциональной морфологии органов пищеварения в процессе применения лигфола в целях определения сущности механизмов действия его и научного обоснования его применения.

6. ВЫВОДЫ

1. Клиническая картина при иммунодефицитном состоянии у поросят проявлялась в виде гипотрофии, которая характеризовалась снижением упитанности, взъерошенностью шерстного покрова, бледностью слизистых оболочек, сонливостью или слабой реакцией на раздражители окружающей среды, гипотермией, снижением аппетита и расстройством функции желудочно-кишечного тракта.

2. У поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдался выраженный лейкоцитоз (ИСЛС- 4,7±1,01), низкая сопротивляемость организма (ИСЛМ- 7,96±1,29), эозинофилия (ИСЛЭ- 46,4±12,94) и слабая активность иммунной системы (ИСНЛ- 0,43±0,05).

3. Динамика интенсивности роста поросят при иммунодефицитном состоянии была невысокая. Среднесуточный привес в возрасте 32 дней составил 271,53±17,46 г, а 45 дней - 261,3±11,2 г. Относительная масса печени в 45-ти дневном возрасте составила 2,43% к массе тела.

4. В печени у 3-5 дневных поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдались дистрофические процессы в виде жировой дистрофии, имелись диффузные очаги экстрамедуллярного кроветворения, расширялось пространство Диссе. Средний диаметр гепатоцитов составлял 6,06±0,05 мкм с объемом ядер 121,9±3,1 мкм3, ядро в цитоплазме занимало 31,37±0,57% площади, а плотность гепатоцитов составляла 47,09±0,90 п/104мкм2. В 45-дневном возрасте на фоне формирования балочной структуры незначительно уменьшалась плотность гепатоцитов (37,88±0,62 п/104мкм2), уменьшался объем ядер (88,91±1,28 мкм3) и их процентная доля в цитоплазме (23,61±0,55%). Жировая дистрофия принимала диффузный характер. В ультраструктуре печени сохранялось расширение пространств Диссе, в гепатоцитах наблюдалось уплощение пластинчатых комплексов, слабо развивалась гранулярная эндоплазматическая сеть, набухала базальная мембрана клеток и матрикс митохондрий.

5. В слизистой оболочке 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии наблюдались незначительные десквамативные процессы. Площадь энтероцитов апикальной части ворсинок

2 2 составляла 124,29±5,72 мкм, боковых поверхностей 156,09±7,54 мкм, а количество МЭЛ 201,0 ±14,0. В ультраструктурной организации энтероцитов преимущественно выявлялась агранулярная эндоплазматическая сеть, а микроворсинки были низкими и электронно-светлыми.

6. У поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом устранился лейкоцитоз (ИСЛС- 2,6±0,38), значительно повышалась сопротивляемость организма (ИСЛМ- 32,1± 12,98) и улучшалась функциональная активность иммунной системы (ИСНЛ- 0,58±0,09).

7. Динамика интенсивности роста у поросят при коррекции иммунодефицита лигфолом значительно улучшалась. Среднесуточный привес у поросят в возрасте 32 дней составил 323,074±18,69 г, а 45 дней -286,026±10,25 г. Относительная масса печени значительно увеличивалась до 2,9565% к массе тела.

8. В печени у 45-дневных поросят при коррекции иммунодефицитного состояния улучшалась ультраструктурная организация гепатоцитов за счет увеличения объема гранулярной эндоплазматической сети, цистерн комплекса Гольджи и электронно-плотных митохондрий, а также увеличении оптической плотности гликогена на 165% по сравнению с иммунодефицитным состоянием. Плотность гепатоцитов составила 41,3±0,84 п/104мкм2, объем ядер достигал 110,75±1,19 мкм3 и занимал 30,14±0,72% площади клетки, увеличивалось количество двух ядерных гепатоцитов.

9. В слизистой оболочке 12-типерстной кишки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния увеличивалось количество МЭЛ (255±19,0), площадь энтероцитов апикальных (132,4±4,94 мкм2) и боковых (174,55±7,05 мкм2) поверхностей, оптическая плотность РНК в энтероцитах увеличивалась на 84,75% и 65,59% по сравнению с иммунодефицитным состоянием соответственно. Улучшалась ультраструктурная организация энтероцитов: гранулярная эндоплазматическая сеть умножалась, митохондрии становились электронно-плотными, увеличивалось количество секреторных включений, а микроворсинки на апикальной поверхности энтероцитов были высокими и электронно-плотными.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для улучшения клинико-морфологического состояния и структурной организации печени и 12-типерстной кишки у поросят при иммунодефицитном состоянии рекомендуется применять лигфол свиноматкам дважды в дозе 3 мл на голову и 20-ти дневным поросятам в дозе 1 мл дважды с интервалом 10-12 дней.

2. Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006, пр. № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2000).