Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Функциональная морфология иммунодефицитного состояния у поросят и его коррекция лигфолом

На правах руюэп!

АСОЯН Гарри Лаврентьевич

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У ПОРОСЯТ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ЛИГФОЛОМ

16 00 02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

003176473

Воронеж - 2007

003176473

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии

Научный руководитель заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов Сулейман Мухитдинович

Официальные оппоненты

доктор ветеринарных наук, профессор Алтухов Николай Михайлович

ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки»

кандидат ветеринарных наук Моргунова Валентина Ивановна

ГНУ ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии

Ведущая организация ГНУ «Северокавказский зональный

НИВИ»

Защита состоится « 8 » ноября 2007 года в 15 00 часов на заседании диссертационного совета Д 220 010 05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки» (394087, г Воронеж, ул Мичурина, 1, тел (4732)53-86-51)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки»

Автореферат разослан ОкТЛ 0 ¡^-Ж 2007 года

Учёный секретарь диссертационного ¿¡/ésCt^^-*

совета JI Г Хромова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Процесс адаптации новорожденных, в том числе и поросят, к новым условиям существования во многом определяется их биологической полноценностью Наличие дефектов в системе иммунобиологической защиты часто приводит к возникновению тяжело протекающих заболеваний, при этом характерна высокая летальность в постнатальном периоде (Буянов А А с соавт, 2000)

Промышленные свиноводческие комплексы и крупные специализированные фермы с законченным циклом воспроизводства характеризуются высокой концентрацией свиней на ограниченных площадях, на их организм постоянно оказывают влияние большое количество разнообразных стресс-факторов, обуславливающих снижение естественной резистентности и проявление вторичных иммунодефицитов Все это приводит к массовой заболеваемости желудочно-кишечными и респираторными болезнями поросят-сосунов и отъемышей, вызываемых условно-патогенной микрофлорой (Ануфриев А И с соавт , 2006 и др )

На фоне иммунных дефицитов у животных, особенно молодняка, возникают заболевания различного происхождения По данным ряда авторов, заболевания, развивающиеся на фоне иммунных дефицитов, проявляются наиболее часто желудочно-кишечным, респираторным, кожным и септическим синдромами Для коррекции иммунодефицитов используют различные стимуляторы (Карпуть И М с соавт , 1997)

Большое значение имеет дальнейшее повышение продуктивности животноводства, что неразрывно связано с получением жизнеспособного, устойчивого к заболеваниям молодняка, обладающего интенсивным ростом и развитием (Гевкан И И , 1985)

По данным А М Берковича с соавт (2003) адаптогены в современной ветеринарии и животноводстве находят все более широкое применение Этому имеется ряд объективных причин Среди них наиболее значимой является необходимость введения адаптогенов в сам технологический процесс получения, выращивания и использования животных, которые в силу сложившихся обстоятельств просто не в состоянии самостоятельно одерживать необходимый потенциал продуктивного здоровья

По мнению Бузламы В С с соавт (2006) одним из перспективных адаптогенов является лигфол, который в меньшей степени на интанктном уровне и в большей степени на уровне организма, в состоянии стресса обеспечивает мобилизацию клеточного звена иммунной системы Действия препарата на лимфоидные органы проявляется активизацией процессов образования и дифференцировки лимфоцитов Однако иммунологическая реакция на фоне действия лигфола реализуется в большей степени за счет клеток - фагоцитов нейтрофильного и моноцитарного ряда

Препараты, содержащие гуминовые вещества, используются в

интенсивном животноводстве с 1980-х годов и доказали свой высокий потенциал биологической активности (Лукьянов ИА, 1996, Соколов М Ю , Бокова Т И , 2002)

Однако до настоящего времени недостаточно изучены морфофункциональные особенности органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците и его коррекции лигфолом

1.2. Цели и задачи. Целью настоящей работы являлось изучение морфофункционального состояния органов иммунной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи

1 Изучение структурной организации лимфоидных органов у поросят при иммунодефицитном состоянии,

2 Изучение морфофункционального состояния лимфоидных органов у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом только через организм свиноматок,

3 Изучение морфофункционального состояния лимфоидных органов у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через организм свиноматок и поросят,

4 Разработка морфологических критериев оценки структурной организации органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом

1.3. Научная новизна Впервые изучена структурная организация лимфоидных органов (тимус, лимфатические узлы, селезенка) у поросят на субклеточном, клеточном и тканевом уровнях при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом Установлено, что субклиническая стадия иммунодефицита у поросят в структурной организации лимфоидных органов морфологически проявлялась в виде гипоплазии лимфоидной ткани, значительного уменьшения плотности клеток в корковом слое тимуса и лимфатических узлов, уменьшения оптической плотности ДНК и РНК в лимфоидных клетках и отсутствия клеток плазматического ряда Впервые проведена коррекция иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом, которая проявлялась в структурной организации лимфоидных органов в виде гиперплазии лимфоидной ткани, значительного увеличения плотности лимфоидных клеток и в них оптической плотности ДНК и РНК, улучшения ультраструктурной организации дентритных клеток — клеток плазматического ряда и проявления иммунологического феномена в ультраструктуре лимфоидных клеток

1.4. Научно-практическая значимость и внедрение Полученные данные с помощью методов исследований, используемых в морфологии (иммуноморфологические, гистохимические и ультрамикроскопические), позволяют расшифровать субклиническую стадию иммунодефицитного состояния у поросят с точки зрения структурной организации лимфоидных органов и на этой основе предложить производству научно-обоснованное применение лигфола для коррекции иммунодефицитного состояния

Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03 05 2006, пр № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований (второе издание - 2007)» (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30 03 2000) Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут быть использованы для написания учебных руководств

1.5. Апробация работы и публикация Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (2004-2007 гг), первой международной научно-практической конференции молодых ученых "Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных" (ВНИВИПФиТ, Воронеж, 2006), международной конференции, посвященной 75-летию Белоцерковского ГАУ (Белая Церковь, 2006), международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А А Авророва (Воронеж, 2006), на 16-ой Всероссийской научно-методической конференции "Современные проблемы патологической анатомии, и диагностики болезней животных "(Ставрополь,2007)

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, одна из которых опубликована в журнале "Ветеринарная патология" № 3 в 2005 году

1.6. Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 122 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы Список включает 215 источников, в тч47 зарубежных Работа иллюстрирована 20 таблицами и 52 рисунками

1.7. Основные положения, выносимые на защиту

1 Структурная организация органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии,

2 Влияние лигфола на морфофункциональное состояние органов иммунной системы у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена с октября 2004 года по октябрь 2007 года в отделе патологической морфологии (заведующий - профессор С М Сулейманов) Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии, в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ "Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии" РАСХН по

заданию 04 Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ (№ госрегистрации 01 9 90001257, 01 200 117018)

Производственные опыты проводились в МПХ "Николаевское" Аннинского района и в ООО "Вишневское" Верхнехавского района Воронежской области в два этапа

Первый этап В опыте использовали две группы свиноматок, подобранные по принципу аналогов, со сроком супоросности 65-70 дней Первая группа свиноматок служила контролем, а свиноматкам второй группы вводили лигфол по 5 мл на голову На 55-60 день после опороса поросят от свиноматок опытной и контрольной группы подвергали убою для морфологических исследований

Второй этап В опыте использовали также две группы свиноматок, подобранные по принципу аналогов, со сроком супоросности 65-70 дней Первая группа свиноматок служила контролем, а свиноматкам второй группы вводили лигфол по 5 мл на голову

Поросятам, полученным от свиноматок второй группы, также вводили лигфол в дозе 1 мл на голову на 21 и 31 дни после рождения Среди поросят опытной и контрольной групп падеж отсутствовал В возрасте 55-60 дней поросята подвергались убою для проведения морфологических исследований Материал отбирался в соответствии с поставленной целью и задачами исследований

При аутопсии проводили макроскопическую оценку органов иммунной системы внешний вид, масса, удельная масса, метрические показатели У поросят обеих групп измеряли температуру тела, частоту пульса и дыхания по общепринятым методикам По ряду показателей брали средние величины В основу расчетов брали среднюю арифметическую (х) и ошибку арифметической (ш)

Образцы лимфоидных органов для гистоисследований (тимус, селезенка, брыжеечные, подчелюстные и средостенные лимфатические узлы) иссекали и фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и в жидкости Карнуа

Материал, предназначенный для заливки в парафин, подвергался обезвоживанию в спиртах возрастающей концентрации, затем заливали в парафин Из парафиновых блоков на микротоме МПС-2 изготавливали серийные срезы толщиной 5-7 мкм, которые для общей оценки структуры окрашивали гематоксилин - эозином и по Ван - Гизону Из замороженных кусочков органов лимфоидной системы на замораживающем столике ТОС-2 с помощью санного микротома МС-2 приготавливали срезы толщиной 10 мкм Приготовленные срезы использовали для гистохимического исследования

Для подсчета суммарной митотической активности лимфоидных клеток использовали реактив Шиффа по методу Фельгена Для выявления рибонуклеиновой кислоты (РНК) ядрышка и кариоплазмы, использовали метод Браше (окраска метиловым зеленым-пиронином по Унна-Паппенгейма) При выявлении полисахаридов, мукополисахаридов и

мукопротеидов использовали реакцию Шиффа - йодная кислота Для подсчета количества клеток лимфоидного ряда на единицу площади (мм2) использовали окулярную измерительную сетку с известной площадью ячеек Количество клеток лимфоидного ряда считали с помощью морфометрической сетки в 100 полях зрения (объектив х40, окуляр х70)

Подсчет клеточных элементов проводили в 50 полях зрения микроскопа (объектив хЮО, окуляр хЮ, бинокуляр xl,25)

Дифференциацию Т- и B-лимфоцитов проводили с учетом размера клеток, величины ядра, цитоплазмы, интенсивности их окраски (Voisin G , 1975, Мушенко П M, 1986) На гистологических срезах тимуса при 50-кратном наложении морфологической линейки определяли абсолютные размеры коркового и мозгового вещества, долек тимуса (объектив х8, окуляр х10, бинокуляр xl,25) Затем вычисляли отношение этих величин

Площадь элементов стромы и паренхимы в тимусе определяли, используя методику точечного счета с наложением окулярной сетки Г Г Автандилова Сущность методики заключается в случайном 50-кратном наложении сетки на гистологический срез и в подсчете количества узловых точек, падающих на структурные элементы органа Количество точек, приходящихся на элементы стромы или паренхимы, по отношению к общему количеству точек, падающих на срез в целом, и представляет относительную площадь (в процентах) Количество лимфоцитов, приходящихся на условную единицу площади сетки Г Г Автандилова подсчитывали при 50-кратном наложении ее на корковую и мозговую зону, долек тимуса (объектив х40, окуляр хЮ, бинокуляр xl,25)

Оптическая плотность гистохимических препаратов определяли на цитофотометре "Люмам ИЗ"

Фиксацию материала для электронно-микроскопических исследований проводили в 2,5 %-м растворе глютарового альдегида на 0,114 м S-коллидиновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 %-м растворе тетраокиси осмия на том же буфере Материал обезвоживали в спиртах и заключали в Эпон-812 Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом, просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips)

Все цифровые данные подвергнуты математической обработке с оценкой достоверности отличий при Р < 0,05 Для этого использовали методы математической статистики, принятые в биологии и медицине (Лакин ГФ, 1990) и прикладную программу Statistika и 5,0 Microsoft Excel 2003

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Структурная организация органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии

В структурной организации тимуса (вилочковой железы) нечетко выявлялся корковый и мозговой слои

Корковый слой состоял из сплошной массы плотно расположенных Т-лимфоцитов, среди которых встречались одиночные крупные макрофаги. По периферии коркового слоя, на границе с междольковой соединительной тканью имелись отдельные бласты.

Мозговой слой более светлый, состоял из средних лимфоцитов, макрофагов, а главным образом ретикуло-эпителиальных клеток! образующих тельца Гассаля. Каждое тельце в плоскости среза состоял из 10-20 клеток. Между дольками имелись тонкие прослойки рыхлой волокнистой соединительной ткани. Здесь кроме фибробластов, имелись тучные клетки, немного эозинофилов, малых лимфоцитов и бластов.

Компактный корковый слой был заполнен малыми (величиной примерно до 6 мкм), средними (до 8 мкм) и крупными (до 10 мкм) лимфоцитами. В отдельных полях зрения и в единичном числе обнаруживали митозы, разной величины и формы (рис. 1).

гие.1. структурная организация тимуса у поросенка при иммунодефицитном состоянии: а)Гипоплазия лимфоидной ткани коркового слоя; б) Гипоплазия лимфоидной ткани мозгового слоя и дистрофия телец Гассаля; в) Снижение оптической плотности ДНК в клетках коркового слоя; г)Умеренное содержание РНК в клетках коркового слоя.

При гистохимическом исследовании коркового вещества тимуса у поросят при иммунодефицитном состоянии показатель оптической плотности ДНК в ядрах клеток лимфоидного ряда составлял 0,503±0,010 ед. опт. пл. В мозговом веществе тимуса этот показатель' равнялся 0,385±0,0058 ед. опт. пл. При гистохимическом выявлении РНК ядра (ядрышковой формы и кариоплазматической формы) показатель коркового вещества составил 0,784±0,011 ед. опт. пл., а мозгового вещества-0,777±0,014 ед. опт. пл.

У иммунодефицитных поросят тимус содержал дольки малого размера с нечетко выраженной границей коркового и мозгового вещества. Так у поросят контрольной группы процентная доля коркового вещества составляла 28,7+0,9 %, а процентная доля мозгового вещества - 26,4±0,8 %.

Рис. 2. Цитологические и ультраструктурные изменения клеток тимуса у поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Дистрофические процессы в клетках лимфоидного ряда; б) Неравномерное созревание клеток лимфоидного ряда; в) Преобладание эухраматина в кариоплазме тимоцитов; г) Полиморфность ядер тимоцитов.

Тельца Гассаля часто были деформированы. Истощение коркового слоя приобретало более распространенный характер, плотность распределения клеток лимфоидного ряда в среднем составляла 15220±235 п/мм2 (Рис.2.). В мозговом слое наблюдались деструктивные процессы, проявляющиеся распадом тимоцитов, плотность клеток в мозговом слое равнялась 13850±853 п/мм2. Максимальное количество телец Гассаля не превышало 2-3. Размеры тимических телец составили в среднем 49,58+2,1 мкм (табл. 1).

Таблица 1. Морфометрические и гистохимические показатели лимфоидных органов у поросят при иммунодефицитном состоянии_

Органы Показатели Тимус Лимфатический узел Селезенка

корковое в-во мозговое в-во корковое в-во мозговое в-во белая пульпа красная пульпа

Оптическая плотность ДНК (ед. опт. пл.) 0,503±0,015 0,385±0,0058 0,466±0,011 0,406±0,011 0,487±0,0091 -

Оптическая плотность РНК (ед. опт. пл.) 0,784±0,011 0,777±0,014 0,551±0,0073 0,563±0,005| 0,560±0,0067

Процентная доля коркового вещества (селезенка - красная пульпа) 28,7±0,9 - 39,83±2,81 - 87.0±1,53

Процентная доля мозгового вещества (селезенка - белая пульпа) 26,4±0,8 - 21,98±5,17 9,2±0,98

Плотность клеток лимфоидного ряда, п/мм2 15220±235 13850*853 14396±358 |3845±795 11450±382 -

Диаметр телец Гассаля, мкм 49,58±2,1 - -

Содержание белковых веществ (ед опт. пл.) - - 0,8!5±0,008 0,720±0,03 -

Подчелюстные лимфатические узлы у иммунодефицитных поросят парные, серого цвета, овальной формы.

При гистологическом исследовании лимфатических узлов у поросят было установлено, что соединительнотканная капсула без резкой

границы переходила в окружающую рыхлую соединительную ткань. От капсулы лимфатического узла отходили трабекулы, образующие опорный каркас узла. В трабекулах были обнаружены пучки ретикулярных, коллагеновых и нервных волокон, а также гладкомышечные волокна и кровеносные сосуды.

В корковом веществе, в центре фолликула находились бурсозависимые зоны со скоплением большого количества больших и средних лимфоцитов. В паракортикальной зоне находилось довольно плотное диффузное скопление лимфоцитов (рис. 3).

ЯШИ^ШШШ ИИИИИИИИМИИИ —I ; ; ■ 1 ж ш : ^ ■■■ ■ ■ ■ ■ ¿г^......

* - ь. -. ^ НИ

" . - ^^"'ж,. л-;.:.V 1!!:::;|Г ' пт

...........

я»...........штату: ц у^у шшшшшшшшшшщш». , ат^ш&ш^шшшшт^тшштк $шшшшшшшшшш§щшшшш

Рис.3.Структурная организация лимфатического узла у поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Гипоплазия лимфоидной ткани в мозговом слое; б) Угнетение лимфоидной ткани в перифолликулярной зоне; в) Уменьшение оптической плотности ДНК в паракортикальной зоне; г) Неравномерное снижение оптической плотности РНК в клетках коркового слоя.

От фолликулов и паракортикальной зоны отходили мякотные шнуры - лентовидные скопления малых лимфоцитов, образующие основу паренхимы мозгового вещества.

Между фолликулами, трабекулами и мякотными шнурами обнаруживали краевые и центральные синусы. Они были представлены петлями ретикулярной ткани, в ячейках которой обнаруживались единичные лимфоциты.

При выявлении индивидуальных метрических особенностей изучаемых лимфатических узлов были выявлены следующие данные: показатели коркового вещества составили 39,83±2,81 % от общей площади лимфатических узлов; мозгового вещества - 21,98±5,17 %. Процентная доля синусов и процентная доля стромы составляли 19,98±1,02 % и 18,21 ±2,00 % соответственно.

У поросят при иммунодефицитном состоянии в корковом веществе подчелюстных лимфатических узлов (в частности в фолликулах) оптическая плотность ДНК в ядрах клеток лимфоидного ряда составляла 0,466±0,011 ед. опт. пл., а в мозговом веществе - 0,406±0,011 ед. опт. пл.

Рис.4. Клеточные и ультраструктурные изменения в лимфатическом узле у поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Очаговая дистрофия клеток лимфоидного ряда; б) Неравномерная дифференциация клеток лимфоидного ряда; в) Некробиоз клеток лимфоидного ряда; г) Гиперхроматоз ядер клеток лимфоидного ряда.

В ядрах клеток подчелюстных лимфатических узлов количественное содержание рибонуклеиновой кислоты в корковом и мозговом веществе составляло 0,551 ±0,073 и 0,563±0,051 ед. опт. пл. соответственно.

У иммунодефицитных поросят лимфоузлы содержали незначительное количество лимфоидных элементов, местами встречались запустевшие ячейки (рис. 4). Лимфоидные фолликулы мелкие, не содержали светлых центров. Диаметр этих образований снижался, а плотность клеточных элементов в корковом веществе составляла 14396±358 п/мм2, а в мозговом веществе 13845±795 п/мм2 (табл. 1). Количество лимфоцитов в корковом веществе значительно снижалось практически до уровня мозгового вещества, что создавало эффект "звездного неба".

Селезенка у поросят при иммунодефицитном состоянии имела удлиненно-овальную форму, на поперечном разрезе - треугольная. Капсула селезенки хорошо развита. Цвет органа ярко-красный.

В селезенке число лимфоидных фолликулов в поле зрения микроскопа (х80) составляло к 2-месячному возрасту 5,67±0,41.

Концентрация лимфоцитов в лимфоидных фолликулах была наиболее высокой, в красной пульпе наблюдалось ее снижение (рис.5). Плазмоциты обнаруживались во всех зонах селезенки поросят в незначительном количестве. Макрофаги в селезенке поросят наблюдались в незначительном количестве и равномерно распределялись по всем зонам. Также выявляли во всех зонах ретикулярные клетки.

Л

При гистохимическом исследовании белой пульпы селезенки (лимфоидных фолликулов) оптическая плотность ДНК составила 0,487±0,0091 ед. опт. пл. Оптическая плотность рибонуклеиновой кислоты в белой пульпе селезенки составила 0,560±0,0067 ед. опт. пл., а среднее количество клеток лимфоидного ряда - 11450±382 п/мм2.

При микроскопическом исследовании селезенки наблюдали фиброзную капсулу, от которой внутрь органа отходили трабекулы. Трабекулярный аппарат был развит несколько слабее, чем у взрослых животных. Незначительное скопление лимфоцитов (в основном малые лимфоциты) отмечали вокруг кровеносных сосудов. В красной пульпе сохранены отдельные очаги гемопоэза, встречались нейтрофильные лейкоциты.

3.2. Структурная организация органов лимфоидной системы у поросят при применении лигфола свиноматкам

Процентная доля коркового вещества тимуса составляла 33,5±2,7 %, а мозгового - 29,7±2,83 %. Строма как коркового, так и мозгового слоев состояла из ретикуло - эпителиальных клеток с отростками, образуя сетчатую структуру. Ячеи сети были заполнены тимоцитами. Плотность распределения клеточных элементов, основную массу которых составили малые тимоциты, в корковом слое была выше, чем в мозговом, вследствие чего корковый слой на срезе выделялся своей более темной окраской (рис 6).

Рис.Ь. Структурная организация селезенки у поросенка при иммунодефицитном состоянии: а) Гипоплазия лимфоидной ткани в белой пульпе; б) Гипоплазия клеток лимфоидного и фибробластического ряда; в) Слабая дифференциация В- лимфоцитов в перикапиллярной зоне;' г) Пикноз ядра макрофагальной клетки.

Рис.6.Улучшение структурной организации тимуса у поросенка при применении лигфола свиноматке: а) Увеличение плотности клеток в корковом слое; б) Формирование телец Гассаля и увеличение плотности клеток; в) Созревание тимоцитов; г) Полиморфность ядер тимоцитов.

Плотность клеток в корковом слое равнялась 17930±720 п/мм2, плотность распределения клеточных элементов в мозговой зоне составила 16240±286 п/мм2 (табл. 2). Максимальное количество телец Гассаля в срезах мозгового слоя не превышало двух.

Таблица 2

Морфометрические и гистохимические показатели лимфоидных органов у поросят при применении лигфола свиноматкам

Органы Показатели Тимус Лимфатический узел Селезенка

корковое В-ВО мозговое в-во корковое в-во мозговое в-во Белая пульпа Красная пульпа

Оптическая плотность ДНК (ед. опт. пл.) 0,536±0,0034 0,393±0,005 0,487±0,045 0,414±0,017 0,493^0,0087 -

Оптическая плотность РНК (ед. опт. пл.) 0,857*0,017 0,795±0,005 0,627±0,01б 0,571±0,015 0,568±0,005б -

Процентная доля коркового вещества (селезенка - белая пульпа) 33,5±2,7 45,5±2,31 88,2±3,4

Процентная доля мозгового вещества (селезенка - красная пульпа) - 29,7±2,83 26,0±7,04 9,6±0,95 -

Плотность клеток лимфоидного ряда, п/мм2 I7930±720 16240±286 ]5620±548 14680±596 12090±902 -

Диаметр телец Гассаля, мкм 52,13±8,3 - - - -

Содержание белковых веществ (ед. опт. пл.) 0,824±0,013 0,761±0,007

В ядрах клеток тимуса количественное содержание РНК в корковом и мозговом веществе у поросят увеличивалось на 8,56 % и на 2,10 % соответственно.

В корковом слое тимуса у поросят, получивших лигфол, показатели оптической плотности ДНК превышали на 6,19 %, а в мозговом слое тимуса оптическая плотность ДНК в клетках увеличилась на 1,97 %.

Морфометрическими исследованиями лимфатических узлов было установлено, что у поросят, свиноматкам которым применяли лигфол, доля коркового вещества составило 45,5±2,3 1 %, а мозгового вещества - 26,01±7,04 %. Процентная доля синусов и стромы

лимфатических узлов составила 16,80±3,13 и 12,ОСЫ,01 % соответственно. Количество клеток лимфоидного ряда в корковом веществе лимфатических узлов составило 15620±548 п/мм2, что превышало показатели больных поросят на 8,5 %.

В паракортикальной зоне находилось довольно плотное диффузное скопление преимущественно малых лимфоцитов, переходящее в мякотные шнуры. Краевые синусы были едва заметны, а центральные синусы заполнялись ретикулярной тканью и небольшим количеством лимфоцитов (рис. 7).

руктурнои организации лимфатического узла у порсеика при применении лигфола свиноматкам: а) Незначительная гиперплазия лимфоидной ткани в перифолликулярной зоне; б) Различные стадии дифферинциации лимфоидных клеток; в) Активизация клеток лимфоидного ряда; г) Проплазмоцит в стадии дифферинциации.

У поросят после применения лигфола свиноматкам в лимфатических узлах оптическая плотность ДНК в ядрах клеток коркового вещества была выше на 4,39 %, а в мозговом веществе этот показатель превышал, но не значительно - на 1,78 %.

В ядрах клеток подчелюстных лимфатических узлов количественное содержание РНК в корковом и мозговом веществе у поросят превышало на 13,91 % и на 1,41 % соответственно.

В селезенке, у поросят группы лигфол выявлено, что ретикулярная строма, состоящая из соединительно-тканных клеток (фибробластов, ретикулярных клеток) и фибриллярных элементов, образовывала ячеи^ заполненные различным лимфоидными элементами и сравнительно редко встречающими плазматическими клетками (рис. 8).

Рис.9. Гиперплазия лимфоидной ткани тимуса у поросенка при применении лигфола свиноматке и поросенку: а) Увеличение плотности клеток; б) гиперплазия тимоцитов коркового слоя; в) Ультраструктурная организация тимоцитов в период их гиперплазии; г) Апоптоз тимоцита -проявление иммунологического феномена при активации иммунного процесса в тимусе.

Рис.8. Незначительная гиперплазия лимфоидной ткани селезенки у поросенка при при применении лигфола свиноматкам: а) Начало гиперплазии лимфоидной ткани в селезенке; б) Гиперплазия лимфоидной ткани в белой пульпе; в) Клеточная пролиферация в красной пульпе; г) Плазматизация клеток лимфоидного ряда.

Красная пульпа в селезенке занимала 88,2±3,4 % её площади, а белая пульпа - 9,6+0,95 %, которые были заметно дифференцированы.

Таким образом, изучение структурной организации лимфатических узлов, тимуса и селезенки у поросят 55-60-дневного возраста показало, что применение лигфола свиноматкам в последние месяцы супоросности улучшало структурную организацию органов лимфоидной системы поросят.

3.3. Структурная организация органов лимфоидной системы у поросят при применении лигфола свиноматкам и поросятам

В тимусе у поросят обнаруживалось увеличение размера тимусных долек, а также увеличение количества телец Гассаля, что указывало на усиление синтеза тимусных гормонов, участвующих в процессе иммунопоэза.

В тимусе выявлялась артериальная гиперемия с лимфоидными инфильтратами вокруг сосудов, а также хорошо выраженная граница ----------------------1 мозговым веществом.

В корковом слое тимуса показатели оптической плотности ДНК составляли 13,86 % за счет более активной пролиферации лимфобластов, мигрировавших из красного костного мозга и, по-видимому, трансформации их в Т-лимфоциты, а также за счет активного размножения и дифференцировки Т-лимфоцитов В мозговом слое тимуса оптическая плотность ДНК в клетках увеличилась на 6,73 %

В ядрах клеток тимуса количественное содержание РНК в корковом и мозговом веществе увеличивалось на 2,18 % и на 5,2 % соответственно

РНК ядра (ядрышковой формы и кариоплазматической формы) клеток тимуса составляла 0,821±0,017 в корковом и 0,802±0,0051 ед опт пл в мозговом слоях (таблица 3) Таблица 3

Морфометрические и гистохимические показатели лимфоидных органов у поросят при применении лигфола свиноматкам и поросятам

Органы Показатели Тимус Лимфатический узел Селезенка

корковое в во мозговое в-во корковое в-во мозговое в во белая пульпа красная пульпа

Оптическая плотность ДНК (ед опт пл) 0 584±0 009 0 413±0 007 0 491±0 019 0 423±0 020 0 511±0 019 -

Оптическая плотность РНК (ед опт пл) 0,802±0 0051 0 821±0 017 0 578±0 013 0 631±0 019 0 578±0 016 -

Процентная доля коркового вещества (селезенка - красная пульпа) 42 3±1 6 - 45 2±1 06 - 89 1±0 87

Процентная доля мозгового вещества (селезенка - белая пульпа) 39 6±1 9 - 27,6±2 6 9 »0 5

Плотность клеток лимфоидного ряда п/мм2 23750±532 19800±891 16980±720 15650±382 12980±675

Диаметр телец Гассаля мкм - 61 3±0 5 - - - -

Содержание белковых веществ (ед опт пл) - 0890*0009 0 811±0 006 - -

Наряду с повышением содержания РНК повышалась общая плотность клеток лимфоидного ряда, в том числе и мелких ретикуло-эпителиальных клеток, синтезирующих тимозин, обеспечивающий дифференциацию Т-лимфоцитов (рис 9)

Лимфатические узлы при внешнем осмотре имели довольно плотную консистенцию, не отечны Поверхность разреза они имели влажную, бледно-серого цвета, гладкую, без кровоизлияний и некротических фокусов При гистологическом исследовании корковое и мозговое вещество были ограничены не четко

В лимфатических узлах поросят было обнаружено значительно больше фолликулов Все фолликулы имели хорошо выраженный светлый центр

В корковом веществе подчелюстного лимфоузла имелось умеренное количество малых лимфоцитов, иногда образующих фолликулы без реактивных центров Паракортикальная зона была представлена сплошной массой зрелых лимфоцитов В паренхиме лимфоузлов выявлялось четкое деление на более темное корковое (периферическое) вещество и более светлое мозговое вещество посередине

В корковом веществе в центре фолликула находили бурсозависимые зоны со скоплением большого количества больших и средних лимфоцитов (рис.

Рис.10. Гиперплазия лимфоидной ткани лимфатического узла у поросенка при применении лигфола свиноматки и поросенку: а) Гиперплазия лимфоидной ткани в перикапсулярной зоне; б) Дифферинциация клеток лимфоидного ряда; в) Разновидности клеток плазмотического ряда; г) Зрелая плазматическая ¡слетка.

В лимфатических узлах доля коркового вещества составила 45,2±1,06 %, а мозгового вещества - 27,6+2,6 %. Процентная доля синусов и стромы лимфатических узлов была значительно меньше. Количество клеток лимфоидного ряда в корковом веществе лимфатических узлов составило 16980+720 n/мм2, т. е. увеличивалось на 15,2 %. При этом оптическая плотность ДНК в ядрах клеток коркового вещества была выше на 5,1 %, а в мозговом веществе - на 3,82 %.

В ядрах клеток подчелюстных лимфатических узлов количественное содержание РНК в корковом и мозговом веществе увеличивалось на 4.7 % и 10.6 % соответственно.

В корковом и мозговом слоях подчелюстных лимфатических узлов плотность клеток лимфоидного ряда у поросят увеличивалось в среднем на 15,2 % и 1 1,5 % соответственно.

Мозговое вещество представляло собой скопление лимфоцитов, образующих удлиненные тяжи - мякотные шнуры, плотность клеток в мозговом веществе составила 15650+382 п/мм2(табл. 3).

У поросят опытной группы в корковом веществе подчелюстных лимфатических узлов содержание белковых веществ составило 0,890+0,009 ед. опт. пл., что на 8,42 % больше контрольного показателя, а в мозговом слое разница составила 1 1,2 %.

Таким образом, применение лигфола улучшало структурную организацию лимфатических узлов у поросят, увеличивало объемную долю коркового и мозгового вещества. При этом увеличивалась плотность клеток лимфоидного ряда в паренхиме лимфатического узла.

В селезенке поросят отметили увеличение относительной массы в 1.3 раза. Кроме того, наблюдали формирование более мощных периартериальных лимфоидных муфт.

В селезенке вокруг кисточковых артерий имелись небольшие скопления лимфоцитов. В красной пульпе были видны множественные овальные или округлые образования из светлых крупных клеток. Кроме того, здесь содержалось значительное количество мегакариоцитов с крупными

Рис.11. Гиперплазия лимфоидной ткани селезенки у поросенка при применении лигфола свиноматки и поросенку: а) Формирование периартериальных лимфоидных клеточных муфт; б) Повышение оптической плотности ДНК в лимфоидных клетках; в) Пролиферация лимфобластов в перитрабекулярной зоне; г) Активизация клеток плазматического ряда.

В селезенке, в частности в белой пульпе, показатель оптической плотности ДНК в ядрах клеток лимфоидного ряда составляла 0,511 ±0,019 ед. опт. пл., а РНК - 0,578±0,016 ед. опт. пл. Повышалась и общая плотность клеток лимфоидного ряда (таблица 3).

Следовательно, в целом иммунная система у поросят под влиянием лигфола претерпевала положительные морфофункциональные изменения.

4. ВЫ ВОДЫ

1. В тимусе при иммунодефицитном состоянии у поросят 1,5-2 месяч^го возраста наблюдалась гипоплазия лимфоидной ткани, которая преимущественно выявлялась в корковом слое. Здесь же его доля уменьшалась до 28,7±0,9%. Истощение коркового слоя сопровождалась снижением плотности клеток до 15220±235 п/мм2 , а в мозговом слое -13850±853 п/мм". В мозговом слое количество телец Гассаля составляло 2,47±0,38 с диаметром 49,58±2,13 мкм.

2. При иммунодефицитном состоянии у поросят в структурной организации тимуса наблюдались дистрофические процессы как в корковом, так и в мозговом слоях в виде нарушения гемодинамики органа, наличия периваскулярных клеточных инфильтратов и дистрофии клеток паренхимы и телец Гассаля. В ультраструктурной организации тимоцитов наблюдалась полиморфность ядер с преобладанием эухроматина. В полутонких срезах преобладали ядра клеток со средним диаметром (8,1±1,2мкм), а так же наблюдалась очаговое разрушение клеток

тимоидного ряда Гистохимически уменьшалась оптическая плотность ДНК (0,503±0,015 / 0,385±0,058) и РНК (0,784±0,011 / 0,777±0,014) коркового и мозгового слоев тимуса

3 В лимфатических узлах при иммунодефицитном состоянии поросят 1,5-2 месячного возраста отмечалась гипоплазия лимфоидной ткани в корковом и мозговом слое При этом плотность клеток составляла 14396±358 и 13845±795 п/мм2 соответственно Объем коркового вещества составлял 39,83±2,81%, а мозгового - 21,98±5,17% Наблюдалось расширение краевых, промежуточных и мозговых синусов, процентная доля которых увеличивалась до 19,98±1,02% При этом увеличивалась и доля стромальных элементов (18,21 ±2,00%)

4 При иммунодефицитном состоянии в структурной организации лимфатических узлов поросят в мякотных шнурах преобладали полиморфные бластные клетки лимфоидного и ретикулоэндотелиального ряда с соответствующей ультраструктурой Гистохимически в них оптическая плотность дезокси- и рибонуклеиновой кислот была незначительной и варьировала в пределах 0,406±0,011 - 0,466±0,011 и 0,563±0,051 - 0,551±0,073 ед опт пл соответственно

5 В селезенки у поросят 1,5-2 месячного возраста при иммунодефицитном состоянии сохранялись фетальные очажки гемопоэза Объемная доля белой пульпы была незначительной (9,2±0,98%), а плотность всех клеток лимфоидного ряда здесь в среднем не превышала 11450±382 п/мм2 В перитрабекулярных зонах увеличивалось количество клеток фибробластического ряда Наблюдались электронноплотные включения в клетках плазматического ряда Отмечалось низкое содержание ДНК в ядрах клеток белой пульпы (0,487±0,0091ед опт пл )

6 Структурная организация тимуса у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей незначительно улучшалась за счет повышения плотности клеток коркового (17930±720 п/мм2) и мозгового (16240±286 п/мм2) слоев и отсутствия дистрофических процессов Наблюдалось повышение оптической плотности РНК и ДНК в клетках коркового (0,857±0,017 и 0,536±0,0034 ед опт пл ) и мозгового (0,795±0,005 и 0,393±0,005 ед опт пл) слоев соответственно Диаметр телец Гассаля варьировал в пределах 52,13±8,3мкм Улучшалась ультраструктурная организация тимоцитов

7 В тимусе у поросят при коррекции иммунодефицитного состоянии лигфолом через их матерей и самих поросят наблюдались гиперпластические процессы со значительными улучшениями показателей плотность клеток коркового (23750±532 п/мм2) и мозгового (19800±891 п/мм2) слоев, диаметра телец Гассаля (61,3±0,5мкм), оптической плотности РНК (0,802±0,0051 едоптпл) и ДНК (0,584±0,009 ед опт пл) и объемной доли коркового (42,3±1,6%) и мозгового (39,6±1,9%) слоев В ядрах тимоцитов улучшалась ультраструктура гетерохроматина и гранулярной эндоплазматической сети в В- клетках

8 Структура лимфатических узлов у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей незначительно

улучшалось за счет повышения плотности лимфоидных клеток ( 15620±548 п/мм2) преимущественно коркового слоя, увеличения количества герминативных центров и гиперплазии клеток плазматического ряда с соответствующей их ультраструктурной организацией

9 В лимфатических узлах у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей и самих поросят значительно гиперплазировалась лимфоидная ткань соответствующих зонах При этом повышалась общая плотность клеток лимфоидного ряда в корковом ( 16980±720 п/мм") и мозговом ( 15650±382 п/мм2) слоях Увеличивалась митотическая активность клеток с соответствующей ультраструктурой Значительно уменьшалось содержание стромальных элементов и синусов в лимфатическом узле Количество клеток плазматического ряда значительно увеличивалось в паракортикальной зоне узла

10 Структура селезенки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния через их матерей наблюдались незначительные гиперпластические процессы в белой пульпе с плотностью клеток в 12090±902 п/мм1 Увеличивалось количество мегакариоцитов и макрофагов

11 При коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом через их матерей и самих поросят в структурной организации селезенки наблюдались гиперпластические процессы в белой пульпе Увеличивалось количество макрофагальных клеток Здесь же плотность клеток находилась в пределах 12980±675 п/мм2 Ультраструктура лимфоидных клеток обогащалась гранулярной эндоплазматической сетью Дендритные клетки трансформировались в плазматические

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 При коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфол целесообразно применять в дозе 5 мл двукратно свиноматкам на 65-70 дни супоросности и 1 мл дважды поросятам в возрасте 20-25 дней с интервалом 10-12 дней

2 Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03 05 2006, пр № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований (второе издание - 2007)» (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30 03 2000) Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут быть использованы для написания учебных руководств

6. СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сулейманов С М Морфология органов лимфоидной и пищеварительной системы у молодняка животных при коррекции иммунного статуса / С М Сулейманов, В С Слободяник, П А Паршин, Г.Л. Асоян и др // Международный научно-практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии "Ветеринарная Патология" - М , 2005 -№3(14) -С 75-80

2 Сулейманов С М Возрастная морфология и иммунокррекция тимуса у поросят лигфолом и селедантом /СМ Сулейманов, Г.Л. Асоян, Е В Михайлов // Вестник Белоцерковского Аграрного университета -2006 -Вып 39 -С 207-212

3 Авдеев В В Влияние лигфола и лигавирина на размеры ядер гепатоцитов поросят / В В Авдеев, Г.Л. Асоян, А В Гребенщиков, Е В Михайлов и др // Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых - Воронеж, 2006 -С 7-10

4 Асоян Г Л Влияние иммуномодулятора лигфола на структурную организацию лимфатических узлов у поросят / Г.Л. Асоян, В В Авдеев, А В Гребенщиков, Е В Михайлов, и др // Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых -Воронеж, 2006 -С 15-17

5 Михайлов Е В Интегральные показатели лейкограммы периферической крови коров в оценке неспецифической иммунологической реактивности при введении препарата лигфол /ЕВ Михайлов, Ю В Шапошникова, Г.Л. Асоян, А В Гребенщиков, и др // Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых - Воронеж, 2006 - С 96-98

6 Сафонов В В Морфофункциональные изменения в печени у новорожденных поросят при применении селеданта / В В Сафонов, С М Сулейманов, В В Авдеев, Г.Л. Асоян, и др // Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых -Воронеж, 2006 - С 32-33

7 Асоян Г.Л. Определение суммарной митотической активности клеток лимфоидного ряда в органах лимфоидной системы у поросят при применении иммунокорректора / Г.Л. Асоян, С М Сулейманов, А В Гребенщиков // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных Конференция, посвященная 100-летию со дня рождения профессора Авророва А А Сб науч тр - Воронеж, 2006 - С 83-85

8 Асоян Г.Л Влияние лигфола на функциональную морфологию лимфоидной системы поросят / Г.Л. Асоян // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных Конференция,

посвященная 100-летию со дня рождения профессора Авророва А А Сб науч тр - Воронеж, 2006 - С 85-88

9 Сулейманов С М Методические рекомендации Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантатеневой кислоты и карнитина /СМ Сулейманов, В С Слободяник, , Г.Л. Асоян, и др -Воронеж, 2006 - 88 с

10 Асоян Г.Л. Содержание белковых веществ в лимфатических узлах поросят при применении иммунокорректора / Г.Л.Асоян, Ю П Балым // Современные проблемы патологической анатомии, и диагностики болезней животных Сб научтр - Ставрополь, 2007 - С 127 - 128

11 Сулейманов С М Методические рекомендации Методы морфологических исследований (второе издание) - 2007/ С М Сулейманов, В С Слободяник, , Г.Л.Асоян,, и др - Воронеж 2007 - 82с

На правах рукописи

АСОЯН Гарри Лаврентьевич

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У ПОРОСЯТ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ЛИГФОЛОМ

16 00 02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Формат 60x84

Гарнитура Тайме Печать офсетная П л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №2103

отпечатано в типографии ООО «Формат», г Воронеж, Московский пр-т, 36-а

1.1. Актуальность темы. Иммунная система является одним из центральных механизмов гомеостаза, а нарушение структурной целостности и функциональной полноценности ее может стать непосредственной предпосылкой для развития ряда других заболеваний, в частности, острых и хронических инфекций, злокачественных новообразований, аутоиммунных процессов и аллергии, а также может углубить тяжесть течения заболеваний, способствовать частым рецидивам и ослаблять эффективность специфических методов лечения и профилактики [26].

В становлении резистентности новорожденного существенное значение имеют как степень иммунологической реактивности организма, так и состояние неспецифических факторов защиты. Поэтому разработка методов активации этих механизмов защиты у новорожденных животных является весьма актуальной [92].

На фоне иммунных дефицитов у животных, особенно молодняка, возникают заболевания различного происхождения. По данным ряда авторов, заболевания, развивающиеся на фоне иммунных дефицитов, проявляются наиболее часто желудочно-кишечным, респираторным, кожным и септическим синдромами. Для коррекции иммунодефицитов используют различные стимуляторы [85].

Процесс адаптации новорожденных, в том числе и поросят, к новым условиям существования во многом определяется их биологической полноценностью. Наличие дефектов в системе иммунобиологической защиты часто приводит к возникновению тяжело протекающих заболеваний, при этом характерна высокая летальность в постнатальном периоде [40].

Промышленные свиноводческие комплексы и крупные специализированные фермы с законченным циклом воспроизводства характеризуются высокой концентрацией свиней на ограниченных площадях, на их организм постоянно оказывают влияние большое количество разнообразных стресс-факторов, обуславливающих снижение естественной резистентности и проявление вторичных иммунодефицитов. Все это приводит к массовой заболеваемости желудочно-кишечными и респираторными болезнями поросят-сосунов и отъемышей, вызываемых условно-патогенной микрофлорой [133].

Большое значение имеет дальнейшее повышение продуктивности животноводства, что неразрывно связано с получением жизнеспособного, устойчивого к заболеваниям молодняка, обладающего интенсивным ростом и развитием [49].

Определяя направление настоящей работы, мы предполагаем, что некоторые данные относительно особенностей иммунной перестройки у поросят в раннем возрасте, позволят в дальнейшем понять сущность механизмов действия препарата.

1.2. Цели и задачи. Целью настоящей работы является изучение морфофункционального состояния иммунных органов у поросят при применении иммуностимулирующего препарата лигфол.

В связи с этим на разрешение ставятся следующие задачи:

1. Изучение структурной организации лимфоидных органов у поросят при иммунодефицитном состоянии;

2. Изучение морфофункционального состояния лимфоидных органов у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом только через организм свиноматок;

3. Изучение морфофункционального состояния лимфоидных органов у поросят при коррекции иммунодефицитного состоянии лигфолом через организм свиноматок и поросят;

4. Разработка морфологических критериев оценки структурной организации органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии его коррекции лигфолом.

1.3. Научная новизна. Впервые изучена структурная организация лимфоидных органов (тимус, лимфатические узлы, селезенка) у поросят на субклеточном, клеточном и тканевом уровне при иммунодефицитном состоянии и его коррекции лигфолом. Установлено, что субклиническая стадия иммунодефицита у поросят в структурной организации лимфоидных органов морфологически проявлялась в виде гипоплазии лимфоидной ткани, значительного уменьшения плотности клеток в корковом слое тимуса и лимфатических узлов, уменьшения оптической плотности ДНК и РНК в лимфоидных клетках и отсутствия клеток плазматического ряда. Впервые проведена коррекция иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом, которая проявлялась в структурной организации лимфоидных органов в виде гиперплазии лимфоидной ткани, значительного увеличения плотности лимфоидных клеток и в них оптической плотности ДНК и РНК, улучшения ультраструктурной организации дендритных клеток — клеток плазматического ряда и проявления иммунологического феномена в ультраструктуре лимфоидных клеток.

1.4. Научно-практическая значимость. Полученные данные с помощью методов исследований, используемых в морфологии (иммуноморфологические, гистохимические и ультрамикроскопические), позволяют расшифровать субклиническую стадию иммунодефицитного состояния у поросят с точки зрения структурной организации лимфоидных органов и на этой основе предложить производству научно-обоснованное применение лигфола для коррекции иммунодефицитного состояния.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Структурная организация органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефицитном состоянии;

2. Влияние лигфола на морфофункциональное состояние органов иммунной системы у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (2004-2007 гг.); на первой международной научно-практической конференции молодых ученых: "Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней животных" (ВНИВИПФиТ, Воронеж, 2006); международной конференции, посвященной 75-летию Белоцерковского ГАУ (Белая Церковь, 2006); международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А.А. Авророва (Воронеж, 2006); на 16-ой Всероссийской научно-методической конференции "Современные проблемы патологической анатомии, и диагностики болезней животных "(Ставрополь,2007)

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, одна из которых опубликована в журнале "Ветеринарная патология" № 3 в 2005 году.

1.8. Внедрение результатов исследований. Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006, пр. № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований (второе издание - 2007)» (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2000). Ряд положений диссертации могут быть использованы для написания учебных руководств.

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 114 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения, список используемой литературы. Список включает 214 источников, в том числе 45 зарубежных. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 52 рисунками.

6. ВЫВОДЫ

1. В тимусе при иммунодефицитном состоянии у поросят 1,5-2 месячного возраста наблюдалась гипоплазия лимфоидной ткани, которая преимущественно выявлялась в корковом слое. Здесь же его доля уменьшалась до 28,7±0,9%. Истощение коркового слоя сопровождалась снижением плотности клеток до 15220±235 п/мм , а в мозговом слое -13850±853 п/мм . В мозговом слое количество телец Гассаля составляло 2,47±0,38 с диаметром 49,58±2,13 мкм.

2. При иммунодефицитном состоянии у поросят в структурной организации тимуса наблюдались дистрофические процессы как в корковом, так и в мозговом слоях в виде нарушения гемодинамики органа, наличия периваскулярных клеточных инфильтратов и дистрофии клеток паренхимы и телец Гассаля. В ультраструктурной организации тимоцитов наблюдалась полиморфность ядер с преобладанием эухроматина. В полутонких срезах преобладали ядра клеток со средним диаметром (8,1±1,2мкм), а так же наблюдалась очаговое разрушение клеток тимоидного ряда. Гистохимически уменьшалась оптическая плотность ДНК (0,503±0,015 / 0,385±0,058) и РНК (0,784±0,011 / 0,777±0,014) коркового и мозгового слоев тимуса.

3. В лимфатических узлах при иммунодефицитном состоянии у поросят 1,5-2 месячного возраста отмечалась гипоплазия лимфоидной ткани в корковом и мозговом слое. При этом плотность клеток составляла 14396±358 и 13845±795 п/мм соответственно. Объем коркового вещества составлял 39,83±2,81%, а мозгового - 21,98±5,17%. Наблюдалось расширение краевых, промежуточных и мозговых синусов, процентная доля которых увеличивалась до 19,98±1,02%. При этом увеличивалась и доля стромальных элементов (18,21±2,00%).

4. При иммунодефицитном состоянии в структурной организации лимфатических узлов поросят в мякотных шнурах преобладали полиморфные бластные клетки лимфоидного и ретикулоэндотелиального ряда с соответствующей ультраструктурой. Гистохимически в них оптическая плотность дезоксн - и рибонуклеиновой кислот была незначительной и варьировала в пределах 0,406±0,011 - 0,466±0,011 и 0,563±0,051 - 0,551±0,073 ед.опт.пл. соответственно.

5. В селезенке у поросят 1,5-2 месячного возраста при иммунодефицитном состоянии сохранялись фетальные очажки гемопоэза. Объемная доля белой пульпы была незначительной (9,2±0,98%), а плотность всех клеток лимфоидного ряда здесь в среднем не превышала 11450±382 п/мм . В перитрабекулярных зонах увеличивалось количество клеток фибробластического ряда. Наблюдались электронноплотные включения в клетках плазматического ряда. Отмечалось низкое содержание ДНК в ядрах клеток белой пульпы (0,487±0,0091 ед.опт.пл.).

6. Структурная организация тимуса у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей незначительно улучшалась за счет повышения плотности клеток коркового (17930±720 п/мм ) и мозгового (16240±286 п/мм2) слоев и отсутствия дистрофических процессов. Наблюдалось повышение оптической плотности РНК и ДНК в клетках коркового (0,857±0,017 и 0,536±0,0034 ед.опт.пл.) и мозгового (0,795±0,005 и 0,393±0,005 ед.опт.пл.) слоев соответственно. Диаметр телец Гассаля варьировал в пределах 52,13±8,3мкм. Улучшалась ультраструктурная организация тимоцитов.

7. В тимусе у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей и самих поросят наблюдались гиперпластические процессы со значительными улучшениями показателей: плотность клеток коркового (23750±532 п/мм ) и мозгового (19800±891 п/мм ) слоев, диаметра телец Гассаля (61,3±0,5мкм), оптической плотности РНК (0,802±0,0051 ед.опт.пл.) и ДНК (0,584±0,009 ед.опт.пл.) и объемной доли коркового (42,3±1,6%) и мозгового (39,6±1,9%) слоев. В ядрах тимоцитов улучшалась ультраструктура гетерохроматина и гранулярной эндоплазматической сети в В- клетках

8. Структура лимфатических узлов у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей незначительно улучшалась за счёт повышения плотности лимфоидных клеток ( 15620±548 л п/мм) преимущественно коркового слоя, увеличения количества герминативных центров и гиперплазии клеток плазматического ряда с соответствующей их ультраструктурной организацией.

9. В лимфатических узлах у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния лигфолом через их матерей и самих поросят значительно гиперплазировалась лимфоидная ткань соответствующих зонах. При этом повышалась общая плотность клеток лимфоидного ряда в корковом ( 16980±720 п/мм ) и мозговом ( 15650±382 п/мм ) слоях. Увеличивалась митотическая активность клеток с соответствующей ультраструктурой. Значительно уменьшалось содержание стромальных элементов и синусов в лимфатическом узле. Количество клеток плазматического ряда значительно увеличивалось в паракортикальной зоне узла.

10. Структура селезёнки у поросят при коррекции иммунодефицитного состояния через их матерей наблюдались незначительные гиперпластические процессы в белой пульпе с плотностью клеток в 12090±902 п/мм. Увеличивалось количество мегакариоцитов и макрофагов.

11. При коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфолом через их матерей и самих поросят в структурной организации селезёнки наблюдались гиперпластические процессы в белой пульпе. Увеличивалось количество макрофагальных клеток. Здесь же плотность клеток находилась в пределах 12980±675 п/мм . Ультраструктура лимфоидных клеток обогащалась гранулярной эндоплазматической сетью.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для коррекции иммунодефицитного состояния у поросят лигфол целесообразно применять в дозе 5 мл двукратно свиноматкам на 65-70 дни супоросности и 1 мл дважды поросятам в возрасте 20-25 дней с интервалом 10-12 дней.

2. Полученные данные использованы в методических рекомендациях «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006, пр. № 1) и в методическом пособии «Методы морфологических исследований (второе издание - 2007)» (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.2000). Ряд положений диссертации могут быть использованы для написания учебных руководств.