Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инфекция бактериями рода Helicobacter у собак: диагностические, микробиологические и патогенетические аспекты

Болезни органов пищеварения являются одной из наиболее распространенных групп заболеваний как у человека, так и у животных. По статистическим данным гуманной медицины воспалительные заболевания желудка у человека приобрели всемирное распространение.

Использование новых передовых технологий в диагностике, а именно, эндоскопического метода прижизненного визуального осмотра внутренних полых органов, лабораторных методов диагностики на молекулярно-клеточном уровне (полимеразная цепная реакция, анализ 16S гРНК, анализ ДНК, профиля жирных кислот, белков и др.) позволило получить информацию, которая коренным образом изменила общепринятые представления ученых и врачей об этиологии и патогенезе болезней органов пищеварения (3,7,17,91). Эти методы диагностики разрабатывались для применения в гуманной медицине, и их адаптация к использованию в ветеринарии только начинается.

По современным представлениям многие болезни являются следствием нарушения взаимоотношений в системе макроорганизм-микроорганизмы (7,17,107). Изучение взаимного влияния бактерии и организма-хозяина, регуляции их взаимодействия является в настоящее время одним из интенсивно развивающихся разделов медицинской науки.

Открытие бактерии Helicobacter pylori, подтверждение того, что присутствие этих бактерий на слизистой оболочке желудка ведет к возникновению гастрита и язвы желудка у людей, привело к фундаментальным изменениям в понимании природы гастритов.

Исследования микрофлоры пищеварительного тракта систематически начали проводиться со второй половины XIX века, однако только в 80-х годах XX века была строго установлена взаимосвязь между воспалительными изменениями слизистой оболочки желудка и определенным типом колонизирующих ее бактерий (3,7,15,32,85,35).

Особенно широко эти исследования стали развиваться благодаря разработке и внедрению в клиническую практику эндоскопических методов исследования пищеварительного тракта. Основным условием прижизненного обследования слизистой оболочки желудка и получения биопсийного материала является проведение эндоскопического исследования желудка, так как только в этом случае возможно получение биоптата из определенного места под контролем зрения.

Хеликобактерии, обитающие в желудке, описаны у самых разных видов животных, как домашних, так и диких. После открытия роли бактерии Helicobacter pylori в возникновении гастритов, интерес к ним значительно возрос, и в настоящее время проводятся широкие исследования рода Helicobacter, населяющего пищеварительный тракт животных (44,82,84,105,106).

В современном обществе домашние животные и, в частности, собаки играют немаловажную роль в самых разных сферах человеческой деятельности. В связи с этим изучение их морфологии, физиологии и патологии является важной задачей ветеринарии.

Определенные трудности во внедрении новейших методов диагностики создает огромная разница в размерах собак различных пород. Осложняют процесс адаптации этих методов высокая стоимость необходимого оборудования и комплектующих материалов.

Обнаружение у мелких домашних животных высокого уровня инфицированности бактериями рода Helicobacter и, в частности, болезнетворными для человека хеликобактериями, поднимает вопрос о возможно антропозоонозном характере инфекции.

Актуальность темы

Изучение распространения рода Helicobacter среди собак, а также выявление возможной связи этих бактерий с патологическими изменениями слизистой оболочки желудка имеет большое значение для научной и практической ветеринарной медицины.

Широкое распространение у кошек и собак инфекции видами Helicobacter ставит вопрос о том, не могут ли мелкие домашние животные служить резервуаром для видов Helicobacter, и возможно ли отнесение данной инфекции к антропозоонозам.

Огромное значение как для научных исследований так и для клинической ветеринарной практики имеет разработка методов прижизненного исследования желудка и установления критериев показателей нормы и патологии слизистой оболочки желудка собак .

Цель исследования

Основной целью настоящей работы является выявление и идентификация видов Helicobacter у собак, поиск взаимосвязи между наличием бактерий рода Helicobacter у собак и обнаружением у них патологических изменений слизистой оболочки желудка.

Разработанная для человека схема взаимодействия хеликобактерии с организмом-хозяином, ее превалирующая роль в возникновении патологии желудка пока не адаптирована для животных и требует уточнения значения инфекционного начала в природе патологических изменений слизистой желудка собак. Необходимо отметить, что прижизненное строение слизистой оболочки желудка собак в отечественной литературе не описывается, поэтому в цели нашей работы входило изучение и сравнение строения слизистой оболочки в норме и при патологии.

В связи с отсутствием в ветеринарии методики исследования слизистой оболочки желудка, целью работы является также адаптация и внедрение эндоскопического метода диагностики заболеваний верхнего пищеварительного тракта у собак.

Научная новизна

Новизна планируемой работы состоит в том, что исследования слизистой оболочки желудка собак и ее микрофлоры в нашей стране еще не проводились, а, исходя из имеющихся зарубежных публикаций по этому вопросу, этой проблеме придается важное значение, и она широко разрабатывается. Отсутствие информации относительно распределения видов Helicobacter у домашних животных и корреляции их наличия со степенью воспалительных изменений верхнего пищеварительного тракта придает работе особую актуальность и новизну.

В результате проведенной работы впервые разработана методика эндоскопии верхних отделов пищеварительного тракта мелких домашних животных. В связи с поставленными задачами впервые произведено прижизненное морфологическое изучение слизистой оболочки желудка собак, и впервые в нашей стране выделены и изучены желудочные хеликобактерии собак.

Теоретическая значимость данной работы заключается в открытии новых возможностей для дальнейшего изучения инфекции бактериями рода Helicobacter у мелких домашних животных и ее влияния на слизистую оболочку желудка собак.

В нашей работе проведены прижизненные эндоскопические и гистологические исследования строения слизистой оболочки желудка собак в норме и при патологии и установлена взаимосвязь между наличием инфекции бактериями рода Helicobacter и степенью патологических изменений слизистой оболочки желудка.

Практическое значение работы состоит в разработке и внедрении в клиническую практику современных инструментальных методов обследования слизистой пищевода и желудка у собак, разработке и апробации методов диагностики Helicobacter у собак, в исследовании гистоморфологического строения слизистой оболочки желудка собак и в определении взаимосвязи между присутствием хеликобактерий и патологическими изменениями ее. Анализ подобных данных увеличит степень распознавания заболеваний слизистой оболочки желудка у мелких домашних животных и поможет более эффективно проводить лечение воспалительных заболеваний желудка.

Благодарности.

За практическую и консультативную помощь в выполнении диссертационной работы приношу глубокую благодарность научному руководителю, заведующему Кафедрой ветеринарной патологии, академику РАЕН, доктору биологических наук, профессору В.В. Макарову.

За практическую и консультативную помощь в проведении исследований, сборе материалов и выполнении различных разделов диссертации приношу искреннюю признательность и благодарность Генеральному директору Ветеринарного центра «Группа СМАВЗ», кандидату медицинских наук O.A. Суриковой.

За практическую помощь в проведении микробиологических и морфологических исследований и консультативную помощь приношу благодарность старшему научному сотруднику Лаборатории эндоскопии в педиатрии ММА им И.М. Сеченова, кандидату медицинских наук А.Е. Сахаровой и старшему научному сотруднику Лаборатории эндоскопии в педиатрии ММА им И.М. Сеченова, доктору медицинских наук A.B. Новиковой.

Также приношу свою благодарность и признательность всем сотрудниками Ветеринарного центра «Группа СМАВЗ» за поддержку и помощь во время проведения работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1- Адаптированный метод фиброгастроскопии желудка собак является удобным, быстрым, высокоэффективным для диагностических исследований в условиях ветеринарной клиники; он позволяет проводить прижизненное получение образцов тканей верхних отделов пищеварительного тракта для дальнейшей морфологической верификации диагноза, а также выполнять ряд лечебных манипуляций.

2- Разработаны критерии эндоскопической картины слизистой оболочки желудка в норме и при воспалительной патологии. Нормальная эндоскопическая картина слизистой желудка отмечена у 22 собак (26 %) из 86 обследованных животных. В группе собак с первичными гастроэнтерологическими заболеваниями эндоскопическая картина воспалительных изменений слизистой оболочки желудка диагностирована у 80 % животных, а в группе собак без симптомов заболеваний пищеварительного тракта - у 67 %.

3-Разработаны критерии гистологического строения слизистой оболочки желудка в норме и при воспалительной патологии. Гистологически нормальная картина слизистой оболочки желудка отмечена у 6 (18 %) из 33 обследованных собак. Хронический поверхностный гастрит выявлен в 30% случаев (10 собак), а хронический диффузный гастрит в -49 % случаев (16 собак). Во всех 26 случаях хронического гастрита выявлено обострение процесса (активный гастрит), а в 1-ом случае (3%) отмечен острый фундальный гастрит.

4- Впервые выделены и охарактеризованы представители рода Helicobacter в биоптатах слизистой оболочки желудка собак г. Москвы. По своим культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам изоляты отнесены к виду Н. pylori. По данным морфологического исследования уровень инфекции хеликобактериями составил 91 %. Микробиологическим методом Н. pylori была выделена от 57 % обследованных собак.

5- Установлена четкая зависимость между степенью обсеменения хели-кобактериями и выраженностью воспалительной реакции слизистой желудка (р < 0,001).

6- Выделение нами из биоптатов слизистой оболочки желудка собак бактерии Н. pylori, болезнетворной для людей, является важным результатом нашего исследования. Наличие Н. pylori у собак, учитывая роль, которую эта бактерия играет в патогенезе желудочных патологий человека, свидетельствует о возможном зоонотическом потенциале инфекции хеликобактериями.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 - На основании проделанной работы адаптирован и внедрен в клиническую практику метод фиброгастроскопии с прицельной биопсией. Фиброгастроскопию рекомендовано проводить в следующих случаях: при рецидивирующей рвоте, при подозрении на инородное тело пищеварительного тракта, при извращении аппетита в совокупности с диспептиче-скими явлениями, при признаках хронических болей в животе, при анорексии, при желудочно-кишечных кровотечениях, при травме глотки.

2- На основании проведенных нами исследований издано методическое пособие «Эндоскопические исследования желудочно-кишечного тракта мелких домашних животных» В нем подробно изложены данные по истории развития эндоскопии, приведены основные принципы устройства эндоскопов и аппаратуры, применяемой при эндоскопии, описаны хранение, обработка, дезинфекция и стерилизация эндоскопов, рассказано о подготовке к проведению исследования, дана схема обезболивания животного, его положения при обследовании и размещения при этом персонала, разобраны показания и противопоказания метода, приведены методики различных видов эндоскопии, описана нормальная эндоскопическая картина слизистой оболочки желудка, отмечены возможные осложнения при проведении исследования.

3- Использованные в работе методы гуманной медицины по определению хеликобактерий и морфометрическому исследованию био-птатов слизистой оболочки желудка могут широко использоваться в клинической ветеринарной практике.

4- Использование полученных данных о частоте встречаемости воспалительных изменений слизистой оболочки желудка у собак в ветеринарной клинической практике может улучшить диагностику и облегчить терапию случаев с диспептическими явлениями неясной этиологии.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для дальнейшего изучения и подробной характеристики бактерий рода Helicobacter необходимо: проводить посевы биоптатов слизистой оболочки желудка собак, содержащихся в различных условиях проводить подробное изучение чистых культур хелико-бактерий с использованием ультраструктурных методов, таких как электронная микроскопия и полимеразная цепная реакция

2. Для изучения взаимодействия и взаимного влияния хеликобактерий и организма-хозяина необходимо: проведение исследований в лабораторных условиях, с возможностью многократных исследований одного и того же животного и с наличием контрольной группы животных исследование моторной и секреторной функции желудка с использованием адаптированного метода фиброгаст-роскопии как у инфицированных так и у контрольных животных одновременное с вышеперечисленными исследованиями гистологическое изучение строения и патологических изменений слизистой оболочки различных отделов желудка проведение мониторинга состояния слизистой оболочки желудка животных до и после эрадикации хеликобактерий

3. Для изучения возможного зоонотического потенциала инфекции животных хеликобактериями необходимо проведение сравнительных исследований, возможно базирующихся на иммунологических методах, заболеваемости владельцев и их животных, определяя видовую принадлежность обнаруживаемых хеликобактерий.

Рекомендации по использованию научных выводов

2.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В отечественной медицинской литературе и в зарубежных источниках собран большой материал, посвященный человеческому желудочному патогену - Н. pylori. Описана история его открытия и выделения в отдельный род Helicobacter. Дана классификация рода Helicobacter. Подробно рассмотрены морфологические и биохимические свойства Н. pylori, большое внимание уделено его взаимодействию с организмом хозяина. Детально изучены факторы патогенности, позволяющие Н. pylori колонизировать слизистую оболочку желудка и длительно перси-стировать на ней, такие как уреаза, подвижность, факторы адгезии. Описывается механизм повреждения Н. pylori слизистой оболочки желудка человека. Дана классификация патологии, вызываемой этой хеликобак-терией, ее распространение в мировой популяции человека. Дан большой материал по различным методам обнаружения хеликобактерий, как инвазивным (микробиологический, морфологический, уреазный) так и неинвазивным (иммунологический, радионуклидный).

Также, в зарубежной ветеринарной литературе, имеется много работ, посвященных изучению бактерий рода Helicobacter у животных. Имеются обширные данные по экологии и распространению хеликобактерий среди различных видов животных. Описана патология, вызываемая хеликобактериями у различных видов хозяев. Поднят вопрос о возможном зоонотичном потенциале.

В отечественной медицинской литературе есть много работ, посвященных методу визуальной оценки слизистой оболочки желудка -фиброэндоскопии, дающего возможность прижизненного, быстрого и нетравматичного получения образцов слизистой оболочки желудка для детального изучения. В зарубежной ветеринарной литературе также имеется несколько работ по адаптации данного метода в ветеринарии.

Однако нами не было обнаружено в отечественной ветеринарной литературе никаких данных по обнаружению бактерий рода Helicobacter в желудках собак, также отсутствуют сведения о морфологическом строении слизистой оболочки желудка собак и данные по применению метода эндоскопии у мелких домашних животных.

Таким образом, исходя из вышеизложенного, в задачи настоящего исследования входило:

1. Адаптировать методику фиброэндоскопии верхних отделов желудочно-кишечного тракта.

2. Дать характеристику эндоскопической картины в норме и при патологии слизистой оболочки желудка собаки

3. Дать описание гистологическое строение слизистой оболочки желудка собаки в норме и при патологии.

4. Провести исследования по выявлению бактерий рода Helicobacter среди популяции собак, находящихся в частном секторе г. Москвы.

5. Оценить связь между присутствием хеликобактерий в желудке и патологическими изменениями его слизистой оболочки.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная часть работы выполнена на базе Ветеринарного центра "Группа СМАВЗ" города Москвы.

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Исследования проводились в условиях амбулаторного приема в ветеринарной клинике г. Москвы.

Были обследованы прижизненно 86 собак, принадлежавшие частным владельцам г. Москвы, из них 53 кобеля и 33 суки различных пород и метисов (таблица 10). Возраст животных колебался от 3 месяцев до 13 лет (Диаграмма 1).

Для учета данных по адаптации метода фиброгастроскопии, определению эндоскопических критериев нормального состояния слизистой оболочки желудка и ее патологических изменений все обследованные собаки были разбиты на две группы. В I группу вошли 49 животных с признаками желудочно-кишечной патологии (рвота, диарея, изменение аппетита, потеря веса), во II группу - 37 собак без симптомов заболеваний пищеварительного тракта.

Анамнез, протоколы эндоскопических исследований, результаты морфологических и микробиологических исследований по каждому животному регистрировались в специально разработанной карте гастроэнтерологического обследования животного (Приложение 1)

Для учета данных по выявлению бактерий рода Helicobacter обследованные 86 собак были разделены на две другие группы.

В группу А (53 собаки) вошли животные, обследовавшиеся в период с января 1999 г. по декабрь 1999 г. Полученные от них биоптаты слизистой оболочки желудка исследовались микробиологическим методом для выделения из них бактерий рода Helicobacter. При этом определяли взаимосвязь между выраженностью роста характерных колоний хеликобактерий из полученных биоптатов и наблюдаемой эндоскопической картиной слизистой желудка собак. Из 53 собак 31 собака имела симптомы желудочно-кишечного заболевания (подгруппа А1), а у 22 собак отсутствовали признаки патологии пищеварительного тракта (подгруппа А2).

В группу В (33 собаки) вошли животные, биоптаты слизистой оболочки желудка которых исследовали морфологическим методом выявления хеликобактерий, одновременно при этом изучали гистологическое строение слизистой оболочки желудка и устанавливали возможную связь между степенью обсеменения хеликобактериями слизистой оболочки желудка и выраженностью в ней воспалительных изменений. У 18 собак из группы В имелись симптомы желудочно