Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инфекционный процесс туберкулеза и других микобактериозов у животных на фоне воздействия гербицидов линурона и которана

О*

На правах рукописи

УДК 619:616.98:579.873.21—097.3:636.22/28

ВЕЛЬМИСКИН Иван Егорович

ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС ТУБЕРКУЛЕЗА И ДРУГИХ МИКОБАКТЕРИОЗОВ У ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ГЕРБИЦИДОВ ЛИНУРОНА И КОТОРАНА

16.00.03— ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва 1995

Работа выполнена в лабораториях эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза, патологической анатомии, лаборатории фармакологии и химиотерапии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, на опытной базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор Н. П. Овдиенко доктор ветеринарных наук, профессор И. В. Сидоров Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук А. Н. Шаров (ВГНКИ ветпрепаратов) кандидат ветеринарных наук В. Ф. Бричко (ВНИИВСГиЭ)

Ведущее учреждение: Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (г. Новосибирск).

Защита диссертации состоится « П » 1995 года

в 14 ч на заседании диссертационного совета К.020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко. Адрес: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. Автореферат разослан с » 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

Дхт-тальнооть работы» По сравнению с туберкулезом крупного рогатого скота туберкулезу других видов животных уделяется значительно меньше внимания. Это объясняется недостаточной изученность» проблема й менее отработанными методами прижизненной диагностики»

Устойчивость животных к туберкулезу и другим микобактерво-аш» в основном» определяется условиями среды обитания. Снижение иммунологической реактивности в связи с неполноценностью Кормления й неудовлетворительными условиями содержания обусловливав1? Повышение чувствительности животных к возбудителю туберкулеза й Другим видам микобантерий. На иммунологическую реактивность животных влияют и такие фактора» как повышение уровня радиации, выбросы химических производств, наличие пестицидов и антибиотиков в используемых кормах. Длительное поступление в организм животных даже малых доз пестицидов подавляет синтез антел И Т-систему иммунитета (Николаев А.М», Каценович Д.А., Атабаев Ш.Т», 1988), В принципа ьса вредоносные факторы внешней среды ведут я нарушений гомеостаза (Горизонтов Н.Д.» 1981) а проявлениям иммунодефицита (Прйтулин П.И., Калмыкова Т.П., 1989).

Широкое применена® гербицидов в растениеводства обусловливав? НэйЗбвШ)С?& аоегшшого контакта животных с их остаточ-шт количествами в кормах и объектах внешней среды. Из большого числа гербицидов в практику сельского хозяйства прочно Вошла гербициды из группы производных мочевины ~ линурон и ко-Мран, относящиеся к хлорсодержащим («линурон) и фторсодержащим

(которая) подгруппам производных фешшгачввшш, Представляет большой научно-практический интерес изучение на примере лину-рона и которана влияния гербицидов - производных мочевины на характер развития хронических болезней, какими являются ми-кобаятериалыша инфекции. Б литературе отсутствуют данные об-т-сдершентальном изучении влияния малых доз линурона и которана на развитие инфекционного процесса туберкулеза животных.

Известно, что основным методом прижизненной диагностики туберкулеза животных является аллергическое исследование. Однако сведения о влиянии малых доз пестицидов (в частности гербицидов из группы производных мочевины) на проявление аллергических реакций и на культуральные свойства разных видов микобак-терий в доступной литературе отсутствуют. В связи с этим приобретает важное значение выяснение особенностей проявления инфекционного процесса у животных на фоне воздействия пестицидов.

Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлось изучение влияния гербицидов на проявление инфекционного процесса у морских свинок и овец, зараженных возбудителем туберкулеза и атипичными микобактериями.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи г

- изучить проявление инфекционного процесса туберкулеза, у морских свинок на фоне воздействия хлорсодержащим (линурон) и фторсодеркавдм (которая) гербицидам из подгруппы производных фвнилмочевиньг;

- изучить проявление инфекционного процесса туберкулеза у овец на фоне воздействия которана;

- изучить в эксперименте восприимчивость овец к атипичным

микобактерням и влияние когорана на точшшо развивающегося у них инфекционного процесса;

- изучить влияние которана на выраженность аллергических реакций о учетом зависимости от места введения туберкулина;

- разработать схему дифференциальной диагностики туберкулеза и сходных по патоморфологичесному проявлению других болезней овац.

Научная новизна. Впервые изучено влияние гербицидов лину-рона и которана на проявление инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок, а также влияние которана на проявление инфекционного процесса туберкулеза и микобактериоза, вызванного М.aerofulaceum у овец. Установлено, что линурон и которан, содержащиеся в корках в предельно допустимых концентрациях, сдерживают развитие патологического процесса у морских свинок, зараженных м. bovis.

Которан в предельно допустимых концентрациях угнетает развитие патологического процесса у овец, зараженных М. bovis и на оказывает влияния на инфекционный процесс при микобактерио-зе, обусловленном M. Borofuiaoeum . При этом не установлено изменений в выраженности аллергических реакций на туберкулин и комплексный аллерген из атипичных микобактерий. На установлено отрицательного влияния на синтез специфических антител.

Установлены различия в патологоанатомаческом проявлении туберкулеза и микобактериоза у овец, выражающиеся в отсутствии поражений лимфатических узлов при заражении животных M.aorofu-

laceum.

Изучена патогенность М. Kansaaü для овец.

Практическая значимость. При проведении противотуберкулезных мероприятий в неблагополучных хозяйствах при патоло-гоанатомическом вокрытии необходимо дифференцировать туберкулез ОВОЦ ОТ ШКОбаК5врйОЗа, обусловленного М. scrofulaceum.

Разработана схема дифференциальной диагностики туберкулеза, вызванного М. bovis , и сходной по патоморфологичеоксму проявлению бодезш овец, обусловленной М. sorofulaceum.

Аппобшгая работы. Материалы диссертации доложены и одобрена на»

- научной конференции молодых ученых, посвященной 85-летию Я.Р.Коваленко (М., 1991);

- заседаниях Ученого Совета БИЭВ (М., 1993,1994);

- межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ (М., 1995).

Публикация результатов исследований. Основные положения

диссертации опубликованы в двух статьях. Одна статья находится в печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и описка использованной литературы. Содержание соответствует оглавлению. Работа содержит

работ отечественных и зарубежных авторов.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту:

- материалы по изучению проявления инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок на фоне воздействия линурона и которана;

таблиц. Список использованной литературы включает.

- материалы по изучению проявления инфекционного процесса туберкулеза у овец на фоне воздействия которана;

- результаты экспериментального заражения овец М. kanaasü И М, scrofulaceumj

- результаты изучения проявлений инфекционного процесса при заражении овец М. scrofuiaceum на фона воздействия которана;

- результаты изучения влияния которана на проявление аллергических реакций на туберкулин при туберкулезе и микобакте-риозах овец;

- схема дифференциальной диагностики туберкулеза и сходных по патоморфологическому проявлению болезней овец.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛВДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований. Работа выполнена в лабораториях эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза, патологической анатомии, фармакологии и .химиотерапии ВЙЭВ, на опытной базе Вышневолоцкого отдела ШЭВ в соответствии с утвержденными планами научно-исследовательских работ в период I99I-I994 гг.

Изучение роли линурона и которана на проявление инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок провели на 120 животных, живой массой 300-350 г., которых распределили на 8 групп по 15 морских свинок в каждой; два из этих групп являлись контрольными. Первая группа животных получала линурон с кормом в дозе по 100 мг/гол, вторая - линурон в дозе по 500 мг/гол. Гротья группа животных получала которая в дозе по 160 мг/гол, • _ четвертая - которая в дозе по 600 мг/гол. Животные пятой группы получали линурон в дозе по 500 мг/гол, а морские свинки шестой группы - которая в дозе по 600 мг/гол. Препараты

животные всех групп получали ежедневно в тачание 30 аут.Морских свинок 1,2,3,4 опытных и ? контрольной групп через 30 дней после начала дачи препаратов заразили подкожно культурой М. bovis в дозе I мг/гол, Животным восьмой контрольной груши препараты на вводили, и их но заражали.

Изучение влияния которана на проявления инфекционного процесса туберкулеза у овец провели в эксперименте на 15 овцах. Овец разделили на 3 группы - две опытных и одну контрольную, по 5 животных в каждой. Животные первой опытной группы получали которая в дозе по 3 мг, второй - по 100 мг на кг корма. Препарат вводили ежедневно на протяжении 30 суток.

Через 30 суток животных опытных и контрольной групп заразили однократно интратрахеально и трехкратно с интервалом 7 дней - орально культурой М. bovis (штамм М. bovis - S) в дозе по 120 мг на животное.

Опыт по изучении патогекносм атипичных мико<5актерий провели на 15 овцах, которых разделили на 3 группы, две опытных и одну контрольную. Животных цервой группы заразили однократно интратрахеально и трехкратно о интервалом в 7 дней - орально культурой М. kansasü в дозе по 120 мг на животное. Овец второй группы заразили тем же способом культурой М,scxofuiaceaa в дозе по 120 мг на животное. Животных третьей группы не заражали.

Проявление инфекционного процесса у овец, зараженных М. scrofulaceum , на фоне воздействия которана изучали на трух группах овец, по 5 животных в каждой. Животные первой группы получали ежедневно которая в дозе до 3 мг, второй -по 100 мг на кг корма. Животные третьей группы препарат не

получала. Через 30 суток животных всех трех групп заразили культурой М. эсго!Ги1асеит в дозе по 120 мг на животное.

Экспериментально зараженных овец опытных и контрольных груш содержали в течение 10 мес и через каждые 30-60 дней исследовали туберкулиновой или симультанной пробами. От животных брали пробы сыворотки крови для серологических исследований.

Аллергены вводили подопытным животным в области локтевой складки, внутренней поверхности бедра, пальпебрально под нижнее веко, отступя от его края на 1,5-2 см, а также в подхвос-товую складку.

Реакцию учитывали через 48 часов после введения аллергенов и оценивали по величине припухлости в крестах от + до ++++.

РСК с комплексным туберкулезным антигеном (КТА) УНИИЭВ и туберкулезным антигеном СибНИВИ ставила согласно "Наставлению по диагноотикэ туберкулеза животных", утвержденному Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 25,02.86 г.

ПатологоакатомнческиЙ метод использовали для послеубойной диагностики туберкулеза овец, определения степени распространения и локализации туберкулезного процесса, специфичности туберкулиновых реакций.

Для бактериологического исследования послеубойный материал консервировали 33^-ным водным раатвором глицерина или замораживанием, для гистологического исследования материал фиксировали в 10#-ном растворе нейтрального формалина.

При бактериоскопическом исследовании готовили мазки-отпечатки из внутренних органов и тканей, высушивали и красили по Дилкь-Нильсвну.

При культуральном исследования патологический материал обрабатывали по методике А.Л.Аликаевой и засевали на яичную питательную среду Левенштейна-Йенсвна. Через 2-3 дня пробки пробирок парафинировали, и посевы культивировали на протяжении 3 месяцев при температуре 3?-38°С. Лосевы просматривали через день в течение первых двух недель, затем один раз в неделю до трех месяцев инкубирования. Окончательный рост культур учитывали через 3 месяца.

Определение вида возбудителя туберкулеза проводили путем заражения чиогой культурой 2-х морских свинок и 2-х кроликов по общепринятой методике.

За зараженными лабораторными животными вели наблюдение в течение 3-х месяцев. Если за этот период они не погибали, проводили эвтаназию морских свинок путем декапитации, кроликов - путем воздушной эмболии.

Материал от зараженных животных исследовали бактериологически я гистологически.

Гистологические исследования патологического материала от убитых овец и лабораторных животных проведены совместно с кандидатом ветеринарных наук В.С.Суворовым.

Полученные в процессе работы цифровые показатели обрабатывали методом вариационной статистики (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962). Рассчитывали ореднив арифметические показатели. Достоверность различий между средними арифметическими определяли с помощью критерия Стьюдента (Шмидт В.М., 1984).

Разработку схемы дифференциальной диагностики провели на основе результатов собственных исследований и данных других авторов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Проявление инфекционного процесса у морских, свинок на фоне воздейдгаид линтоона и которяна. Изучаемые гербициды вводили животным внутрь в препаративной форме (смачивающиеся порошки) в смеси с кормом из расчета на действующее вещество.

Корма, входившие в рацион подопытных животных, подвергали предварительно, до начала их скармливания, исследованиям о целью исключения наличия в них остатков некоторых ядохимикатов, применяемых в растениеводстве. Пробы кормов для исследований брали по принятым правилам отбора средних проб (Лебедев П.Т., Усович А.Т., 1963), Определение уровня содержания ксенобиотиков в кормах проводили по методам их обнаружения, изложенным в соответствующих руководствах по хиыинотоксикологическому анализу в ветеринарии (Николаев A.B., 1968; Башмуран А.Ф., 1968} Дмитров G. и соавт., 1986).

Содержание линурона и которана в организма морских свинок определяли в динамика по методике, разработанной А.В.Ермолиным и утвержденной Главветупром Госагропрома СССР (1986). Анализу подвергали пробы крови и печени.

Для определения количественных показателей гербицидов пользовались калибровочным графиком. Для его построения использовали эталонные навеоки 3,4 - дихлоранилина (ДХА) и трифитор-, метиланилина (Ш.), получаемые путем перегонки, соответственно, чистого линурона и которана).

Содержание линурона и которана в пробах крови и печени (Мг/л, мг/кг) вычисляли по формуле:

с = где:

С - содержание линурона или которана (мг/кг, мг/л);

А - количество 3,4, - ДХА или ТФА, найденное по калибровочному

графику;

К - коэффициент пересчета, равный для линурона 1,54, для которана - 1,44;

У - маоса или объем пробы (г, мл).

Животных заражала трех-четырехнедельной культурой подкожно в области паха в дозе по I мг микобактерай, суспендированных в I мл физиологического раствора.

Животных содержали в условиях вивария экспериментальной базы. Через 30, 60 и 90 дней убивали по 5 морских свинок из каждой группы.

Степень пораженнооти органов морских свинок определяли количеством и величиной пораженных участков по предложенной Ю.К.Вейсфейлером (1975) схеме, согласно которой максимальное поражение составляет ++++, в цифровом выражении 4. Изменения на месте заражения + (инфильтрат) или ++ (язва).

Из гомогенизированной суопензии органов проводили пооевы на питательную среду Левенштейва-Йвксена (по 10 пробирок). Если вырастали единичные колонии (на более 2-3), то оценивали +. При росте множественных изолированных колоний - ++, и при сплошном росте - +++. Количество плюсов переводили в цифры, на основе которых определяли индекс пораженности и индекс содержания микобактерай туберкулеза для каждого животного, а потом средний индекс для каждой группы.

В результате проведенных исследований установили, что при ежедневном скармливании морским свинкам линурона в дозе по 100 мг/голову через 30 дней его содержание в крови животных составляло в среднем 16,5 - 0,7 мг/л, в печени - 18,5 £ 1,53 мг/кг; через 60 суток в крови содержалось в среднем 33,0 ~ 2,71 мг/л, в печени - 37,5 - 1,80 мг/кг; через 90 суток в крови содержалось в среднем 49,5 - 2» 40 да/л, в печени 75,0 - 3,70 мг/кг. Содержание которана через 30 суток после начала его введения в дозе 160 ыг/гол составляло в среднем в крови 17,3 -1,0 мг/л, в печени - 19,4 - 1,0 мг/кг; через 60 суток соответственно 34,5 ± 2,71 мг/л и 37,6 £ 1,89 мг/кг; через 90 суток соответственно 47,3 - 3,40 мг/л и 51,9 £ 3,10 мг/кг (при р< О,05).

Приведенные данные свидетельствуют, что продолжительное поступление гербицидов в организм животных приводит к накоплению их остаточных количеств в крови и печени, уровни которых коррелируют с величиной дозы и сроками поступления препаратов.

У морских свинок, получавших линурон и которан и убитых через 60 дней, на обнаружили патологических изменений.

У морских свинок, которые получали линурон в дозе по 100 мг/гол, зараженных М. ьоу1з и убитых через 30 дней, индекс пораженности составил 2,0, а индекс содержания микобактерий -1,0; у убитых через 60 дней соответственно 2,0 и 3,0 и у убитых через 90 дней соответственно 3,0 и 2,0. У морских свинок, которые получали линурон в дозо по 500 кг/гол, зараженных М. Ьопа и убитых через 30 дней, патологических изменений не выявили, а индекс содержания микобактерий составил 1,0. При

убое животных через 60 дней индекс лораженносхи составил 1,2, индекс содержания микобахтерий - 1,0; при убое животных через 90 дней индекс пораженности составил 2,0 и индекс содержания микобактерий - 1,0 (при р < 0,05).

У морских свинок, которые получали которан в дозе по 160 мг/гол, зараженных M.bovia и убитых через 30 дней после заражения, индекс пораженности составил 1,3, индекс содержания микобактерий - 1,0; у животных, убитых через 60 дней, соответственно 1,2 и 1,2 и у животных, убитых через SO дней - 2,9 и 1,8.

У животных контрольной группы индекс пораженности составил через 60 дной после заражения 3,0 и индекс содержания микобактерий - 3,0; через 90 дней соответственно 10,0 и 3,0.

Результаты исследований показали, что под влиянием лину-рона и которана тормозится развитие патологических изменений, характерных для туберкулеза. Тормозится и рост колоний микобактерий (при р < 0,05).

Проявление инфекционного процесса тубаоктаеза v овеп на Фоне воздействия которана. Опыт провели на 15 овцах. Содержание которана в пробах крови овец определяли так же, как и у морских свинок. Через 30 суток после начала дачи кормов с : нотораном животных всех групп заразили М. bovis и содержали в боксах блока-лаборатории № 3 экспериментальной базы в течение 10 месяцев. Животных до начала опыта и в его процессе через каждые 30-60 дней исследовали туберкулиновой пробой. Через 10 месяцев после заражения животных убили. Оценку влияния которана на проявления инфекции определяли по степени раопро-

страдания и локализации туберкулезного процесса.

Определение которана в крови овец этого препарата показало, что продолжительное поступление которана в организм животных с кормом приводит к накоплении его остаточных количеств в крови, уровни которых коррелируют с величиной дозы и сроками поступления препарата. Так, через 30 дней после начала дачи котор рана в дозе 100 мг/кг корма его содержание в крови составило в среднем 12,2 ± 1,6 мг/л, через 60 дней - 20,4 - 1,8 мг/л, через 90 дней - 30,6 ¿ 2,89 мг/л (при р С 0,05).

При ежедневном введении которана в дозе по 3 мг/кг корма через 30 дней содержание препарата в крови составило в среднем 0,36 - 0,03 мг/л, через 60 дней - 0,61 £ 0,07 и через 90 дней содержание которана составляло 2,6 - 0,21 мг/л (при р < 0,05).

Результаты аллергических и серологических исследований показали, что поступление в организм которана в предельно допустимых концентрациях не влияет на проявление гиперчувотвя-тельнооти замедленного типа и синтез специфических антител. Две овца из группы животных, зараженных М. bovis на фоне воздействия которана в дозе по 3 мг/кг корма, реагировали на пальпебральнуо пробу о 1ВД=туберкулином для млекопитающих через 30 дней после заражения с интенсивностью реакций в ++++, две овцы - в -+-Н-, и одна - в +. Аналогичные результаты были получены при исследовании овец через 105, 153, 185, 226 и 262 дня после заражения. Положительные показания РСК о антигеном . СибНИВИ выявлены через 153 дня после заражения с сыворотками крови 5 овец, с антигеном УНШЭВ - о сывороткой крови одного животного.

У животных, зараженных М.bovis на фоне воздействия кото-рана в дозе по 100 мг/кг корма, реакции на туберкулин проявлялись позже и бшш вначале менее интенсивными. Овцы реагировали на туберкулин через IÜ5 дней после заражения с интенсивностью реакции в +, а через 153 дня - в ++ - +++■. Положительные показания РСК с КТА УНИИЭ8 установлены с сыворотками крови двух овац, через 185 дней после заражения.

Животные контрольной группы реагировали на пальпебральную пробу с туберкулином через 30 дней после заражения с интенсивностью реакций в +-н- и ++++. Положительные показания РСК с КТА УНИИЭВ и туберкулезным антигеном СибНПВИ установили с сыворотками крови двух овец через 153 дня после заражения, у двух других животных - через 185 дней и еще у одной овцы -через 226 дней.

У овец, зараженных М. bovis на фоне воздействия которана, тормозилось развитие патологического процесса. С увеличением дозы препарата усиливалось тормозящее влияние. Так, при заражении овец М.bovis на фоне введения которана в дозе по 3 мг на кг корма, у всех подопытных животных обнаружены патологические изменения в легких и печени в виде единичных узелков. Гистологическими исследованиями подтверждена специфичность поражений для туберкулеза. При заражении овец М.bovis на фоне введения которана в дозе по 100 мг на кг корма, у одной овцы из пяти установлены единичные очажки в срадостенных лимфатических узлах. В остальных 4 случаях не выявили патологоана-томических и патоморфологических изменений, характерных для туберкулеза.

В то же время у 5 овец контрольной группы выявлена генерализованная форма туберкулеза (поражения легких, предлопа точных, заглоточных и средостонных лимфатических узлов).

Восприимчивость овей к аищцчрьда ¡дацо0а_цу,орлта. В последние годы участились сообщения о шзтогешгасти атипичных ми-кобактерий для человока и животных. Довольно часто их выделяют из неизмененных органов.и лимфатических узлов сельскохозяйственных животных. Но патогенность отдельных видов атипичных микобактерий изучена недостаточно.

Нами проведен опыт по изучению патогенности для овец М. капзазИ и М. асго^1асеша . ОПЫТ Провели на 15 ОВЦЭХ ПОлугрубошерстной породы о массой тела в среднем 45 кг. Животных порвой группы (5 овец) заражали М. капзази, второй группы (5 овец) - М. асго?и1асеша . Третья группа животных была контрольной. Каждому животному первой и второй группы ввели по 360 мг бакмассы соответствующих культур. Опыт продолжался в течение 10 месяцев.

животных через каждые 30-60 дней исследовали симультанной аллергической пробой с 1Щ=зуберкулином для млекопитающих я комплексным аллергеном из атипичных микобактерий. Сыворотки крови животных исследовали в РСК о КТА УШИЭВ и туберкулезным антигеном СибНИВИ.

При аллергическом исследовании пальпебральной пробой овец, зараженных М. капэааи •, животные реагировали как на ЩЦ=ту-беркулин для млекопитающих, так и на комплексный аллерген из атипичных микобактерий, но интенсивность реакций была разной. Через 30 дней после заражения на ШЩ=тубвркулин для илекошпав-

щах реагировали 4 овцы с интенсивностью реакций в -н- и ++++, на KAM реагировали 5 овец о интенсивностью реакций в +++ и ++++-. Животные реагировали на туберкулин и при последующих исследованиях через 105, 153, 185, 226 и 262 дня после заражения.

При серологическом исследовании проб сывороток крови от зараженных овец в РСК с КТА УНШЭВ и туберкулезным антигеном СибШВИ, показания РСК были положительными в одном случае - с туберкулезным антигеном СибНИВИ.

При послеубойном осмотре овец не выявили патологических изменений, типичных для туберкулеза. Результаты гистологических исследований послеубойного материала били отрицательными. Бактериологическим исследованием выделили две культуры M.kunsa sii

Таким образом, экспериментальное заражение показало, что М, kansasü персистируют в организме овец и сенсибилизируют его к туберкулину для млекопитающих и KAM, не вызывая патологических изменений.

Аллергическое исследование пальпебральной пробой овец, зараженных M. scrofulaceua , показало, что животные реагируют ' как на 111Щтуберкулин для млекопитающих, так и на комплексный аллерген из атипичных микобактерий, но реакции на KAM были интенсивнее. Интенсивность реакций на туберкулин уменьшалась при повторных исследованиях. Так, через 30 суток после заражения на туберкулин реагировали все 5 подопытных овец, о ия->

тенсивностью реакций в + (2 гол.), -н- (2 гол.), +++ (I гол.) и ++++ (4 гол.). При исследовании животных через пять месяцев на туберкулин реагировали только три овцы с интенсивностью реакций в + (2 гол.) и -н- (I гол.). На KAM реагировали все 5

подопытных животных о интенсивностью реакций в ++++.

При исследовании проб сывороток крови в РСК с КТА УШШЭВ и туберкулезным антигеном СибШВй положительные показания реакций установили в двух случаях.

При вскрытии убитых овец обнаруживали множественные инкапсулированные и обызвествлешше очаги некроза величиной от макового зерна до лесного ореха. Большинство этих очагов имело округлую форму, очаги находились на расстоянии друг от друга и не формировали конгломератов. Отмеченные поражения локализовались в верхушечных и верхних отделах диафрагмалышх долей легких. Региональные бронхиальные лимфатические узлы были увеличены. Гистологически в легких обнаружили множественные участки творожистого некроза. В центре таких участков наблюдали отложения извести. По периферии они были окружены отдельными гигантскими, изредка эпителиоидными клетками. Тенденции к распространению данные очаги не имели и были окружены соединительнотканной капсулой.

Бактериологическим исследованием послеубойного материала от овец культуру М. зоготасеиш выделить не удалось.

Таким образом, экспериментальное исследование показало, что М. зсго^Хасешп обусловливают у овец патологоанатомичес-кие изменения, сходные с туберкулезными.

Проявление инФекпионного процесса у овен, зараженных М. асго^1асешд на Фоне воздействия которана. Опыт провели на 15 овцах. Животные первой грушш (5 гол) получали ежедневно в течение 30 суток которая в доза по 3 мг, второй (5 гол) -по 100 мг на кг корма. Животные третьей грушш которая не по-

лучали. Содержание которана в пробах крови овец определяли так же, как и у морских свинок. Через 30 суток животных всех групп заразили однократно антратрахоально и трехкратно с интервалом в 7 дней - орально культурой M.scrofuiaceum в дозе по 120 мг на животное. Через 10 месяцев после заражения животных убили. Оценку влияния которана определяли по степени распространения и локализации патологического процесса.

Определение которана в крови овец показало, что через 30 дней после начала его дачи в дозе 100 мг/кг корма содержание препарата в крови составляло в среднем 12,2 - 1,6 мг/л, через 60 дней - 20,4 ± 1,8 мг/л, через 90 дней - 30,6 * 2,89 мг/л (нра р <£. 0,05). У овец, получавших которан в дозе по 3 мг/кг корма, через 30 дней содержание препарата в крови было в среднем 0,36 - 0,03 мг/л, через 60 дней - 0,61 ± 0,07 и через 90 дней - 2,6 ± 0,21 мг/л (при 0,95).

При аллергических исследованиях, которые проводили через каждые 60 дней, животные реагировали, в основном, на KAM.

Через 30 дней после заражения на ШЩ=туберкулин для млекопитающих реагировали два овцы из группы животных, получающих которан в дозе по 3 мг/кг корма, и два овцы из контрольной группы о равной интенсивностью реакций (++•). На KAM реагировали все овцы из группы животных, получающих которан в дозе по 3 мг/кг корма, вое овцы контрольной группы и 3 из 5 овец, получающих которан в дозе по 100 мг/кг корда.

Реакции на туберкулин не проявлялись при исследованиях через 180 и 240 суток. Интенсивность реакций на KAiM снижалась. Не установлено статистически значимых различий в частоте и

интенсивности реакций у животных опытных и контрольной групп (Р-С 0,05).

При исследованиях проб сывороток крови в РСК с туберкулев-ными антигенами комплеменгсвязывающие антитела в диагностических тиграх выявляли у животных подопытных и контрольной групп через 30 дней после заражения. Не установлено различий в частота выявления животных с положительными показания;.® РСК и в ^титрах антител (р < 0,05).

Положительные показания РСК с КТА УНИИЭВ и туберкулезным антигеном СибНИВИ получили о сыворотками крови всех овец, получающих которая в дозе по 3 мг/кг корма, и с сыворотками крови животных контрольной группы. С сыворотками крови овец, получающих которан в дозе по 100 мг/кг корма, положительные показания РСК с КТА УНИИЭВ получили в двух случаях, а положительные показания с туберкулеэным антигеном СибНИВИ - в пяти случаях.

Патологические изменения, сходные с туберкулезными, выявили в печени и легких, причем, изменения у животных всех групп бшш идентичными. При гистологическом исследовании обнаружила множественные инкапсулированные некрозы с отложением извести.

йезультаты исследований показывают, что которан в дозах по 3 мг и 100 мг на кг корма не- повлиял на проявления инфекционного процесса микобактериоза овец, обусловленного М. зсгоГи-1аоеша.

Сравнительное изучение влияния которакз на выраженность адлерги^еских реакций о учетом места введения туберкулина. Аллергическая диагностика туберкулеза у овец осуществляется пу-

там внутракожкой туберкулиновой пробы в области внутренней поверхности бедра или локтевой складки. В литературе имеются сообщения об эффективности интрапальпебрального введения туберкулина в нижнее веко (Шаров А.Н., 1986). Отсутствуют данные о влиянии пестицидов на проявление аллергических реакций при введении туберкулина в разные участки тела животного.

Нами проведена сравнительная оценка эффективности симультанной аллергической пробы в зависимости от меот введения туберкулина (в локтевую и коленную складки, пальпебрально в в области подхвостовой складки). Исследования провели на овцах, зараженных разными видами микобактерий.

Результаты исследований экспериментально зараженных овец показали, что которан, поступающих в организм животных в предельно допустимых концентрациях, не влиял на проявление аллергических реакций на туберкулин. Зараженные овцы, получающие которан в дозах по 3 мг/кг и по 100 мг/кг корма, реагировали на туберкулин о такой же интенсивностью реакций (-н-н-), как и овцы, зараженные М. bovis (++++) или М. tubercuioais

Овцы, получающие которан в дозе по 100 мг/кг корма и зараженные М. bovis , не реагировали на KAM.

Аллергические реакции были интенсивнее при пальпебральном введении туберкулина или KAM и проявлялись у всех подопытных животных. Из 5 овец, зараженных М. bovis , на пальпебральное введение туберкулина реагировали 5 животных с интенсивностью реакций в -н-н-; на введение туберкулина в локтевую складку -2 овцы с интенсивностью в ++++ и 2 овцы с интенсивностью в +++;

на введение туберкулина в коленнуа складку - 2 овцы о интенсивностью в ++++, и 2 овцы с интенсивностью в +; на введение в подхвосговую складку - 2 овцы с интенсивностью в -н-н- и I овца о интенсивностью в -н-.

На пальпебральное введение KAM реагировали 5 овец, зараженных М. bovis (I овца о интенсивностью реакции в -н-н-, две -в +++ и одна - в +), на введение в локтевую складку реагировали 2 овцы (-ьи- и ++++), на введение в колонную складку - 2 овцы (+ н -й-), на введение в подхвостовую складку реагировала одна овца (+).

Из 5 овец, зараженных М. tuberculosis , на пальпебральное введение KAM реагировали 3, на введение в локтевую окладну -2 (++, -н-н-), в коленную складку - 2 (+, -н-), в подхвосговую складку - 2 (+) овцы.

Из числа овец, зараженных М. avium , 5 реагировали на пальпебральное введение KAM (+++■+)» 3 - на введение в коленную складку (+++) и 5 - на введение аллергена в подхвосговую складку (++).

Из числа овец, зараженных М. kansasü , 5 реагировали на пальпебральное введение KAM, по 2 овцы - йа введение туберкулина в локтевую и коленную складки и 5 овац - на введение аллергена в подхвостовута окладку.

Из 15 овец, зараженных М. acrofulaceura , все животные реагировали на пальпебральное введение KAM, 5 овец - на введение в локтевую, одна - на введение в коленную и 6 овец - на введение аллергена в подхвосговую складки.

Таким образом, подтверждено преимущество пальпебрального введения туберкулина для диагностики тубёрнулеза у овец и паль-

пебральной аллергической пробы с ПЩ=туберкулином для млекопитающих и KAM в целях дифференциации специфических и параспе-цифических реакций.

Схзмз ДИФФвренциздЕдой тогдорзди тхбщщзщ и другие

fiKQJUgff. М .дзоторфодогичерцому ДР. ОТМЕНЯЙ ,QM«._

Сходные патологические изменения наблюдают при разных болезнях овец (туберкулез, псевдотуберкулез, паратуберкулез, микотичес-кие и паразитарные поражения, новообразования). Их трудно дифференцировать при послеубойном осмотре.

В предложенной схеме учтены особенности проявления патологии при каждйй из указанных болезней, но специфичность изменений должна быть подтверждена гистологическими исследованиями.

Для туберкулезных гранулем характерно наличие зоны некроза, имеющего тенденцию к проникновению в специфическую капсулу, зоны эплтелиоидных и гигантских клеток, вала лимфоидных клеток. При поевдотуберкулезе в лимфатических узлах обнаруживают участки некроза с вкроплениями неравномерно расположенной извести. Эти участки окружены мощной соединительнотканной капсулой, иногда гиалинизированной. Гигантские клетки отсутствуют.

Для паратуберкулеза характерно наличие огромного количества палочек красного цвета и измененных участках брыжеечных лимфатических узлах. При микотических поражениях в центральной части гранулемы обнаруживают друзы возбудителя. Паразитарную гранулему в части случаев можно дифференцировать макроскопически. В центре ее виден паразит или личинка. При гистологическом исследовании следует ориентироваться на наличие инфильтрата, образованного эозинофилами, найтрофилама и лимфо-

ндными клетками.

Опухоли, за малым исключением, построены по типу органа, то есть имеют паренхиму и строму.

ВЫВОДЫ

1. Длительное поступление с кормом в организм животных гербицидов линурона и которана в переносимой дозе и предельно допустимой концентрации приводит к умеренному накоплению этих препаратов в организме, что влияет на проявление инфекционного процесса туберкулеза и других ыикобактериозов* Характер влияния зависит от вида животных, количества поступившего гербицида и вида микобактерий.

2. Линурон и которая при поступление о кормом в максимально переносимых дозах сдерживают развитие патологического процесса у морских свинок, зараженных М.Ьоу13 . .

3. Которая, содержащийся в кормах в предельно допустимых концентрациях, угнетает развитие патологического процесса у овец, зараженных М. Ьот1а , а не оказывает влияния на инфекционный процесс при микобактериозе, обусловленном М.зогоГи1асвш

4. Яри скармливании овцам которана в предельно допустимых концентрациях не установлено изменений в проявлении реакций

на введение 1Щ=туберкулина Для млекопитающих и' комплексного аллергена из атипичных микобактерий, а также отрицательного влияния на синтез специфических антител.

5. Экспериментальное заражение показало, что м.капзаз11 перси с тируют в организме овец и сенсибилизируют его к 1Щ=ту-беркулину для млекопитающих и КАМ, не вызывая патологических изменений.

6. Экспериментальное заражение овец М.всгоГи1аоеит обусловило развитие патологических изменений сходных с туберкулезными, в легких и печени при отсутствии поражения лимфатических узлов.

7. Но диагностической значимости пальпвбральная туберкулиновая проба у овец имеет явные преимущества над внутрикож-ным введением аллергена в локтевую, коленную и подхвостовую складки.

8. Оценка и сравнение патологоанатомических и патоморфо-логических изменений позволяет дифференцировать туберкулез от других болезней овец.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДЛСЖЕШ1Я

1. Для аллергической диагностики туберкулеза у овец следует применять пальпебральную пробу с НЩ=туберкулином для млекопитающих.

2. Для дифференциации специфических и параспецифических реакций на туберкулин у овец целесообразно использовать симультанную пробу о ШЩ=тубэркулином для млекопитающих и КАМ.

3. Диагноз на туберкулез у овец необходимо устанавливать по результатам бактериологического и гистологического исследований биоматериала, независимо от характера патологических изменений, обнаруженных в органах и тканях животных.

4. Разработана схема, обеспечивающая дифференциацию туберкулеза от других сходных по патологоанатоническому и пато-морфологическому проявлению болезней овец.

Предложения одобрены методической комиссией ВИЭВ и включены в проект "Наставления по применению очищенных туберкулинов

для диагностики туберкулеза у млекопитающих и птиц" и в проект "Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза", представленных Департаменту ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации (1995 г.).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Овдиенко Н.П., Найманов A.I., Толстенко Н.Г., Энгишев

A.A., Вельмискин И.Е., Насынов Б.Б., Суворов B.C., Пыталев H.H., Григорьева Н.И. Микобактериальные инфекции овец и коз //Сборник трудов П (ХП) съезда фтизиатров - Саратов, 1994. 32 с.

2. Толстенко Н.Г., Овдиенко Н.П., Косенко В.И., Вельмискин И.Е., Суворов B.C., Быкова С.Ю. Экспериментальное изучение па-тогенности атипичных микобактерий //Сборник трудов II (ХП) съезда фтизиатров- Саратов. 1994. 243 с.

3. Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Вельмискин И.Е., Суворов

B.C., Энгишев A.A. Туберкулез овец //Ветеринария. 1995 (в печати). /7