Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Индикация микрофлоры воздуха закрытых помещений и ее влияние на чувствительность организма

На правах рукописи

Морозов Виталий Юрьевич

ИНДИКАЦИЯ МИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА ЗАКРЫТЫХ ПОМЕЩЕНИЙ И ЕЕ ВЛИЯНИЕ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ОРГАНИЗМА

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Ставрополь — 2005

Диссертация выполнена на кафедре эпизоотологии и микробиологии в ФГОУ ВПО Ставропольском государственном аграрном университете

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Дмитриев Анатолий Федорович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Майский Виктор Григорьевич

доктор ветеринарных наук Николаенко Василий Павлович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Донской государственный

аграрный университет»

Защита состоится «¿>У» 2005 г. в /О часов

на заседании диссертационного совета Д 220.062.02 при ФГОУ ВПО Ставропольском государственном аграрном университете по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО Ставропольского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан « » Щи^окЯ 2005 г.

Ученый секретарь я /О

диссертационного совета О» —>— Квочко А.Н.

15 tM

в

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Важным направлением профилактической работы в условиях животноводческих комплексов является создание высокого уровня ветеринарно-санитарной культуры и охраны ферм от заноса и распространения возбудителей болезней (Н.М. Федоров, 1989). Что касается условно-патогенной микрофлоры, то она очень широко распространена в природе, встречается в организме здоровых животных и в основных элементах внешней среды (Е.М. Сивак, 1984; В.А. Баранов, В.М. Федорова, 1985; О.В. Шимко и др., 1998; О.В. Вавина и др., 1999; J. Vengglovsky, P. Juris, 1989). Достичь полного уничтожения этой микрофлоры очень трудно, да и нецелесообразно. Микромир животноводческого помещения с содержащимися в нем животными представляет единое целое (В.В. Шимко и др., 1998). На каждой животноводческой ферме создается своя экологическая среда со сложным и чрезвычайно широким диапазоном патогенных воздействий на организм животных (О.В. Вавина и др., 1999).

Своевременная индикация микроорганизмов в организме животных и основных элементах внешней среды, количественная и качественная оценка популяций позволет предвидеть возможность возникновения, развития и распространения болезней. Систематический контроль обсемененности воздушной среды микроорганизмами, снижение их пороговой численности является необходимым условием научной организации ветеринарно-санитарных мероприятий на животноводческих фермах (Ш.Э. Каришев, 1993; А.И. Баранков, В.А. Недо-секов, Б.А. Крыштон, 1999; А.Ф. Гудкин, 1999; С. Лумбунов и др.,

Условно-патогенной микрофлоре, а также представителям естественной флоры воздуха (споры микроскопических грибов, другие сапрофита) не уделяется должного внимания (АИ. Олефгер, 1985; СА Мищенко, 1987; В.А. Немилов, 1981; Т.И. Нужнова, 1991). Между тем, эта микрофлора (даже убитая) может оказывать весьма существенное влияние на иммунную систему животного организма (А. А. Прокопенко, 1997). В одном случае, она стимулирует защитные реакции организма, в другом, наоборот, угнетает или обусловливает возникновение иммунопатологических состояний (А.А. Обгольц, 1980; А.Ф. Могиленко, 1990). Чем интенсивнее антигенное воздействие на организм, тем шире круг систем, находящихся в состоянии деструкции, и тем многограннее приспособительные процессы со стороны неповрежденных структур, обеспечивающие сохранение жизни (Ф. к^чач. 105Ш Прг.п<»ге функционального

1999).

РОС НАЦИвИАЛЬМА*

ВИБЛМОТеКА

становления иммунной системы (приобретение специфических свойств защиты) осуществляется под непосредственным влиянием естественных антигенных стимулов, в качестве которых выступают микроорганизмы. Это становление затрагивает все уровни иммунной системы и характеризуется динамической беспрерывностью в связи с необходимостью постоянного обновления клеточных популяций, участвующих в иммунном ответе (А.А. Обгольц, 1980). Принцип профилактики заболеваний, обусловленных условнопатогенной микрофлорой, должен базироваться на знании допустимого количества и свойств этой микрофлоры в окружающей среде (А. И. Олефгер, 1985; Б.Л. Дубовой, 1986; В. В. Дианов, 1987; А.А. Прокопенко, 1997; В.А. Недосеков, 1999).

Применение современных и наиболее эффективных методов обнаружения микроорганизмов, знание динамики накопления их в воздухе закрытых помещений, а также степени влияния микрофлоры воздуха на животных представляет определенный научный интерес и практическую значимость. Это обусловливает необходимость создания и освоения новых высокоэффективных устройств и оригинальных методик по определению микроорганизмов в воздухе закрытых помещений

Целью наших исследований явилась разработка прибора для улавливания микроорганизмов, изучение количественного и качественного состава микрофлоры воздуха животноводческого помещения и ее влияние на становление иммунного статуса животных.

В связи с этим перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Провести оценку существующих методов и устройств для индикации микрофлоры в воздушной среде.

2. Разработать прибор для улавливания микроорганизмов из воздуха и методику его применения.

3. Провести сравнительные испытания предлагаемого устройства и известных устройств.

4. Изучить качественный и количественный состав микроорганизмов воздушной среды различных животноводческих помещений.

5. Определить чувствительность организма крыс к микрофлоре воздуха, накапливающейся в помещениях.

Научная новизна. Разработано устройство «Прибор для улавливания микроорганизмов» (Патент на полезную модель №37097; Патент РФ на изобретение №2250257); разработана и утверждена методика по определению микрофлоры в воздушной среде; установлено влияние микроорганизмов воздушной среды на чувствительность организма молодняка крыс.

Практическая и теоретическая ценность работы. Изготовлено и испытано устройство и методика качественного и количественного определе-

ния микрофлоры в воздухе помещений, позволяющее проводить оценку микробного пейзажа воздушной среды. Устройство может использоваться при разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности воздуха помещений, в которых по условиям технологии требуется определенная степень чистоты, и при разработке систем мероприятий, направленных на оздоровление воздушной среды. Изданы методические рекомендации «Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений», которые одобрены и утверждены научно-техническим советом МСХ Ставропольского края. Изучена микробная обсемененность различных типов помещений.

Данные по чувствительности организма животных могут использоваться для определения пороговой численности микроорганизмов воздушной среды закрытых помещений.

Реализация результатов исследований. Основные результаты научных исследований вошли в отчеты по научно-исследовательской работе Ставропольского государственного аграрного университета за 2002-2004 гг.

Материалы исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий, научных исследований в Ставропольском государственном аграрном университете.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены, одобрены на научных конференциях: XI итоговой (межвузовской) научной конференции молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2003); II Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных» (Ставрополь, 2003); X ежегодной Международной научной конференции «Медико-биологические проблемы экологической безопасности агропромышленного комплекса» (Москва, Сергиев Посад, 2004); V межрегиональной научной конференции «Студенческая наука — экономике России», (Ставрополь, 2005); 68-й и 69-й научно-практических конференциях «Наука -региону» (Ставрополь, 2004—2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано три научных статьи, один информационный листок, получен один патент на полезную модель и один патент РФ на изобретение, изданы методические рекомендации, утвержденные методическим советом МСХ Ставропольского края.

Положения, выносимые на защиту:

1. Устройство для улавливания микроорганизмов, которое обеспечивает повышение количества выделяемых микроорганизмов из воздуха и степени его очистки.

2. Методика индикации микроорганизмов и определение коли-индекса воздуха.

pa для улавливания микроорганизмов и методики его применения (А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов, 2005), а также методом оседания (седиментации) по Коху (1881).

Чувствительность крысят к микрофлоре воздуха определяли путем:

1. Определения антигенного воздействия микрофлоры воздуха на организм крысят (в течение 4 недель) с помощью реакции специфического лизиса лейкоцитов (PCJIJI) в модификации J1.A. Дуевой (1966).

2. Постановки реакции гемолиза эритроцитов с антигеном, приготовленным из микрофлоры воздуха.

I Антигены готовились из микрофлоры, содержащейся в воздухе дан-

ного помещения. Для этого брали пробу воздуха и делали посевы на МПА. После инкубирования в термостате в течение 24 часов с поверхности агара делали смыв выросших колоний стерильным физиологическим раствором. Затем смыв микробной культуры фильтровали через вату и инактивировали в водяной бане при температуре 70 °С в течение 30 минут. После этого взвесь микробов дезинтегрировали ультразвуком в течение 5 часов. Использовали аппарат типа УТП-Зм (ультразвуковой терапевтический переносной аппарат).

Выходная мощность, измеряемая произведением активной площади ультразвукового излучателя (4 см) на интенсивность в Вт, составляла 12 Вт/см2.

Антиген из группы кишечных бактерий или гемолитических коков готовился аналогичным способом.

Содержимое пробирок тщательно перемешивали и ставили в термостат на 2 часа при 37 °С. При этом каждые 30 минут помешивали пробы путем наклона штатива. По истечении 2 часов пробы крови помещали на 24 часа в холодильник при5 °С.

Учет реакции осуществляли в крестах.

3. Определения количества циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови крысят проводили по методике Digeon

г (1977) в течение 4 недель.

Состояние факторов неспецифической защиты крыс оценивали два раза в неделю по показателям: лизоцимной, бактерицидной актив' ность сыворотки крови, показателю общего белка в сыворотке крови, морфологической картине крови, скорости оседания эритроцитов):

1. Лизоцимную активность сыворотки крови крысят определяли по методу В.Г. Дорофейчука (1968) в модификации В.И. Сто-гник, В.П. Голик, (1989). В качестве индикатора лизоцима применяли стандартный порошок суточной культуры Micrococcus lysodeicticus, штамм 2665.

2. Бактерицидную активность сыворотки крови по отношению к суточной агаровой культуре Escherichia coli штамма 078 определяли фотонефелометрическим методом по О. В. Смирновой, ТА Кузми-ной (1966).

3. Определение общего белка в сыворотке крови крыс осуществляли рефрактометрическим методом, альбуминов и глобулинов -методом высаливания.

4. Морфологическую картину крови определяли общепринят ыми « меюдиками с использованием микроскопа и камеры Горяева.

5. Скорость оседания эритроцитов определяли с помощью аппарата Панченкова. *

Для определения времени появления реакции организма на воздушную микрофлору 10-дневных крысят содержали в помещении, насыщенном микрофлорой (телятник), где в течение 7 дней брали кровь (по 5 голов) и ставили реакцию гемолиза эритроцитов с антигеном из микрофлоры воздуха.

Полученные данные были подвергнуты статистической обработке. Достоверность различия между показателями оценивали по критерию Стъюдента (С. Гланц, 1998).

Приводимый графический материал полученных результатов (графики, диаграммы) был получен с использованием программы Exel. Для статистической обработки результатов использовалась программа «Био-стат».

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Конструктивное совершенствование улавливателя микроорганизмов

Улавливатель микроорганизмов основан на использовании в приборе улавливающей жидкости, конической емкости и бактериального фильтра. В приборе создается замкнутая для микроорганизмов, но проницаемая для воздуха камера. Разработанное устройство «Прибор для улавливания микроорганизмов» (Патент на полезную модель №37097; Патент РФ на изобретение №2250257) состоит из конусообразной емкости /(рис. 1), в нижнюю часть которой заливают улавливающую ' жидкость 2, а в верхней части под сеткой 3 устанавливают рабочий фильтр 4, и с помощью эластичного уплотнительного кольца 5 прижимают крышкой 6. Верхняя часть крышки 6 выполнена в форме штуцера. В средней части конусообразной емкости 1 выполнено отверстие малого диаметра 7под острым углом, например 45° к вертикальной оси конусообразной емкости 1.

К конусообразной емкости 1, в средней ее части, напротив отверстия 7 при помощи резьбового соединения присоединяется съемная насадка 8, оснашенная вспомогательным фильтром 9, который фиксируется в дополнительной съемной насадке 8с помощью эластичного уплотнительного кольца 10 и крышки 11.

В сравнении с другими улавливателями, основанными на фильтрации воздуха через жидкости, растворимые вещества (прибор Дьяконова, Киктенко, улавливатели Соколинского), фильтры (прибор Милявской), предлагаемый улавливатель позволяет осуществлять двойную фильтрацию воздуха: на входе через улавливающую жидкость и на выходе через фильтр, а также осаждение микроорганизмов в конической емкости под действием гравитации.

Предлагаемое устройство, по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями, имеет следующие преимущества:

— данный прибор позволяет проводить исследования без использования стерильного бокса во внелабораторных условиях;

— устройство обладает повышенной эффективностью улавливания микроорганизмов, так как позволяет осуществлять двойную фильтрацию воздуха: на входе через жидкость и на выходе через фильтр;

— предлагаемый улавливатель легко стерилизуется всеми общепринятыми способами;

— данный прибор прост в изготовлении и эксплуатации.

2.2.2. Методика определения общей бактериальной обсемененности и коли-индекса воздуха

Конструктивные особенности улавливателя позволяют проводить различные варианты анализа воздуха: общее количество микроорганизмов путем высева улавливающей жидкости на питательную среду и метод прямого счета микроорганизмов на поверхности фильтра, что обеспечивает возможность определения санитарно-показательных микроорганизмов (коли-индекса воздуха, количество гемолитических кокков и др.).

Сущность метода определения общего количества микроорганизмов заключается в концентрации микроорганизмов в улавливающей жидкости, ее высеве с последующим подсчетом и дифференциацией микроорганизмов.

Сущность метода прямого счета заключается в концентрировании на мембранном фильтре микроорганизмов, содержащихся в пробе воздуха, окрашивании их карболовым эритрозином непосредственно на фильтре и определения их количества под микроскопом с помощью окулярной сетки.

Сущность определения коли-индекса воздуха заключается в фильтрации улавливающей жидкости через фильтр, находящийся в улавливателе, концентрировании микроорганизмов на поверхности фильтра, выращивании их при 37 °С на среде Эндо, дифференцировании выросших колоний и подсчете количества бактерий группы кишечных палочек в определенном объеме воздуха.

2.2.3. Результаты испытания нового устройства и способа бактериологического анализа воздуха

Как видно из таблицы 1, во всех опытах концентрация микроорганизмов, установленная с помощью предлагаемого устройства, значительно выше, чем с помощью седиментационного способа определения микроорганизмов. Качество улавливания микроорганизмов повышается от 3 до 7 раз. 10

Повышение качества улавливания микроорганизмов мы объясняем наличием некоторых положительных эффектов у предлагаемого устройства и отсутствием их у известных устройств. Это прежде всего наличие ударного действия воздушной струи в жидкость, осаждения микроорганизмов в конической емкости под действием фавитации, наличие фильтра, который задерживает микроорганизмы, отделяя их от газовой фазы. Состав задерживаемых микроорганизмов определяется характеристикой фильтров, используемых в улавливателе. Размещение фильтра на последнем этапе движения воздушного потока обеспечивает заключительную фильтрацию воздуха и сохранение микроорганизмов, исключая возможность их контакта с наружным воздухом.

Таблица 1

Сравнительные данные определения концентрации микроорганизмов

Метод определения Количество проб воздуха Количество микроорганизмов в 1 л М±ш

Предлагаемый Известный 5 5 336,0 ±15,28* 57,4 ±7,16*

Предлагаемый Известный 5 5 228,0 ± 22,43* 30,6 ± 7,02*

Предлагаемый Известный 5 5 608,4 ± 47,46* 84,0 ± 6,08*

Предлагаемый Известный 5 5 195,0 ± 17,03* 57,8 ±5,89*

Примечание: *Р < 0,005

2.2.4. Количественный и качественный состав микроорганизмов воздуха различных помещений

Общая бактериальная обсемененность (рис. 2) воздуха вивария в течение года колебалась от 20,77±0,65 (февраль) до 42,67±3,05 (август) микробных тел в одном литре, а в воздухе телятника эти колебания находились в пределах от 51,67±2,51 (октябрь) до 131,0±3,60 (июнь) микробных тел в одном литре воздуха. Подобные колебания количества микроорганизмов в воздухе животноводческих помещений объясняются температурными изменениями окружающей среды, высокой влажностью животноводческих помещений, разным уровнем солнечной активности — летний период и характерным накоплением микрофлоры — зимний стойловый период.

И

Рис. 2. Общая бактериальная обсемененность в воздухе вивария и телятника (мк.т./л)

Коли-индекс воздуха изменялся в течение всего периода исследования в пределах от 2,92 до 8,83 м.т./л. в воздухе вивария, максимальное количество наблюдалось в период с марта по июль. В воздухе телятника колли-индекс составлял от 4,41 до 12,03 м.т./л. Пик нарастания концентрации кишечной палочки наблюдался с января по февраль в период стойлового содержания и большой концентрации телят в помещениях (январь, февраль, март, апрель) и с апреля по июнь. Содержание микроорганизмов группы кишечной палочки напрямую зависело от общего количества микроорганизмов. Соотношение общего количества микроорганизмов и кишечной палочки составляло приблизительно 10: 1.

Как видно из диаграммы (рис. 3), в периоды (апрель—июль, декабрь—февраль) отмечалось накопление содержания кишечной палочки в одном литре воздуха.

Гемолитические кокки обнаруживали на протяжении всего периода исследования, их количество составляло в виварии от 1,30±0,06 мк.т./л (ноябрь) до 4,49+0,07 мк.т./л (август) наибольшее их количество отмечалось в период с мая по сентябрь. В телятнике же наибольшее количество гемолитических кокков наблюдалось с апреля по октябрь: от 1,74±0,09 мк.т/л до 4,70±0,20 мк.т/л.

Из других видов микроорганизмов отмечен рост белого и золотистого стафилококков.

Рис. 3. Коли-индекс воздуха вивария и телятника (мк.т./л)

В течение всего периода исследования отмечали колебания в содержании микроорганизмов в обоих помещениях. Однако следует отметить, что теплое время года является благоприятным для размножения всех микроорганизмов. В целом отмечается тенденция количественного увеличения микрофлоры воздуха помещений телятника и вивария в теплое и незначительное количественное снижение в холодное время года.

2.2.5. Чувствительность организма животного к антигенам микрофлоры воздуха

Результаты исследований, приведенные в таблице 2, показывают, что повреждающее действие антигенов из микрофлоры воздуха, а также из отдельных физиологических групп микроорганизмов значительное. Повреждению подвергалось до 47,76±1,69% лейкоцитов.

Наибольшим повреждающим действием на лейкоциты крыс, помещенных в телятник, обладают антигены из гемолитических бактерий, выделенных в телятнике (16,90+0,88 - 47,76+1,69%), сложный антиген из микрофлоры воздуха телятника (11,0±0,70 - 35,69±1,63%). Антиген из кишечной палочки телятника вызывал меньшее разрушение лейкоцитов опытных крысят (7,10±0,60 — 25,62+1,67%).

На лейкоциты крыс, содержащихся в виварии, наибольшее повреждающее действие оказывал сложный антиген из микрофлоры воздуха (9,26+0,50 - 24,96±2,22%), антиген из кишечной палочки

(6,57+0,67 - 19,21 ±1,34%). Антиген из гемолитических бактерий оказывал менее интенсивное повреждающее действие (11,0+0,66 — 16,98±1,03%).

Таблица 2

Аллергическая альтерация лейкоцитов у подопытных крысят (%)

Природа антигена Помещение в котором содержались исследуемые животные Аллергическая альтерация лейкоцитов в (%) М±гп, п=5

Время исследования (июль-август, 2004 г.)

1 неделя 2 неделя 3 неделя 4 неделя

Сложный антиген Телятник 11,0±0,70 24,8±0,9 35,69±1,63 32,78±1,5*

Виварий 9,26±0,50 20,96±1,04 24,96±2,22 20,56±4,41*

Антигены кишечной палочки Телятник 7,1 ±0,60 16,88±0,97 19,74±0,67 25,62±1,67*

Виварий 6,57±0,67 12,66±0,54 17,96±0,68 19,21 ±1,34*

Антигены гемолитических кокков Телятник !6,9±0,88 32,88±1,61 47,76±1,69 35,32±1,3*

Виварий 11,0±0,66 16,98±1,03 13,38±1,38 15,18±1,25*

Примечание: *Р < 0,001

Результаты исследований свидетельствуют о том, что процент аллергической альтерации лейкоцитов крови крыс, помещенных в условия с более высоким содержанием микроорганизмов, соответственно в телятнике — 116,3 мк.т./л, виварии - 42,33 мк.т./л значительно выше. Более выраженное влияние оказывали гемолитические антигены и сложный антиген из микрофлоры телятника. Как следует из графика на рисунке 4 наибольший процент аллергической альтерации лейкоцитов наблюдали через 3 недели содержания.

Сенсибилизация к микрофлоре воздуха наблюдается и у животных, содержащихся в виварии (рис. 5), однако степень антигенного воздействия выражена гораздо ниже, что связано, по нашему мне-

нию, с более низким содержанием микрофлоры в воздухе помещений. Полученные данные говорят о нарастании сенсибилизации организма животного к микрофлоре животноводческого помещения, причем степень влияния зависит от количественного и качественного состава микрофлоры окружающей среды.

60 п

50

_____'Г Л ¿умь;------

20 -

о

.Сложный антиген (микрофлора те л я тни к а )

-Антиген группы кишечной палочки (микрофлора телятника) А н ти ге н

гемолитический (микрофлора те л я тн и к а )

1 неделя 2 неделя 3 неделя 4 неделя

Рис. 4, Аллергическая альтерация лейкоцитов крыс, содержащихся в телятнике (%)

30

1 5

ч. * I гг 7 - -г -

1 неделя 2 неделя 3 неделя 4 неделя

-Сложный антиген (микрофлора вивария)

-Антиген группы кишечной лапочки (м и крофло ра вивария) ' А нтиген гем оли тиче с кий (микрофлора вивария)

Рис. 5. Аллергическая альтерация лейкоцитов крыс, содержащихся в виварии (%)

Таблица 3

Показатели чувствительности крыс к микрофлоре воздуха телятника в процессе опыта М±ш, п=5

Показатели I неделя 2 неделя 3 неделя 4 неделя

Аллергическая альтерация лейкоцитов, в % (сложный антиген) 11,0+0,70 24,8±0,9 35,69±1,63 32,78+1,5*

ЦИК, у.е. 54 ±3,2 75 ±4,7 110 ±6,2 77,5 ±6,1*

Количество лейкоцитов, 10% 6,8±0,8 5,2±0,4 4,8±0,3 4,6±0,5*

Количество эритроцитов, 10|2/л 5,8±0,3 5,9±0,4 6,2±0,4 6,7±0,4**

СОЭмм 4,9±0,27 5,2±0,3 6,0±0,42 7,8±0,5#

Примечание: *"Р < 0,001; ** Р < 0,01

Как видно из таблицы 3, показатель аллергической альтерации лейкоцитов у крыс в начале опыта составил 11,0±0,70%. Это означает, что только 11% лейкоцитов крови повреждалось в присутствии антигена, приготовленного из воздушной микрофлоры. К концу периода содержания показатель повреждаемости лейкоцитов составил 35,б9±1,63%. Имеет место значительное увеличение чувствительности (в 3,2 раза) лейкоцитов к микрофлоре воздуха, которая накапливается в животноводческом помещении.

Уровень циркулирующих иммунных комплексов (рис. 6) в течение опыта у подопытных крыс возрастал с 54 у.е. до 110 у.е., что объясняется возрастанием образовавшихся комплексов антиген+антитело. Далее наблюдается спад ЦИКдо 77,5 у.е.; это, в свою очередь, объясняется истощением иммунной системы и развитием так называемого микробного стресса.

По показателям морфологического состава крови у крыс (табл. 3) установлены различия в содержании лейкоцитов в 1 мл3 крови в начале и конце опыта. Причем к концу стойлового периода содержания их количество снизилось с 6,8+0,8*109/л до 4,6±0,5*109/л. -

К концу опыта у крыс повышалась скорость оседания эритроцитов -с 4,90±0,27 до 7,80±0,50 мм. Отмечено также и повышение количества эритроцитов - с 5,8±0,3*1012/л до 6,7±0,4*1012/л.

Интересно отметить, что перестройка в организме крыс имела место и связана она с сенсибилизацией клеточных элементов крови и повышенной их повреждаемостью. Снижение количества лейкоцитов к концу опытного периода содержания можно объяснить их сенсибилизацией и повышенной повреждаемостью.

12 3 2

неделя неделя неделя месяца

Рис. 6. Сравнительная динамика показателей аллергической альтерации лейкоцитов и уровня циркулирующих иммунных комплексов у крыс (телятник)

Количество эритроцитов в крови животных изменялось несущественно, однако данные по показателям аллергической альтерации лейкоцитов и скоростью оседания эритроцитов указывают на то, что имеет место высокая повреждаемость эритроцитов.

Содержание общего белка в сыворотке крови крыс (табл. 4) содержащихся в телятнике, по ходу опыта увеличивалось с 4,37±0,10 до 4,94±0,13 г% при (Р < 0,001). У крыс, содержавшихся в виварии, общий белок изменялся с 4,44±0,09 до 6,03±0,49 г%. Однако альбу-мин-глобулиновый коэффициент был различен.

Таблица 4

Динамика содержания белка и его фракций в сыворотке крови крыс в (г%)

Время исследования Показатели А/Г коэффициен!

Общин белок М±ш Альбумины М±гп Глобулины М±ш

1 2 3 4 5

Крысы, содержащиеся в телятнике (5 гол.)

1 неделя 4,37±0,10* 0,59+0,08* 3,83+0,12 0,17+0,02*

2 неделя 4,34±0,07 0,66±0,09 3,74±0,09 0,18±0,02

1 2 3 4 5

3 неделя 4,69±0,32 1,58±0,21 3,11 ±0,30 0,54±0,12

4 неделя 4,94±0,13* 2,59±0,89* 2,90±0,12 1,09±0,16*

Крысы, содержащиеся в виварии (5 гол.)

1 неделя 4,44±0,09* 0,81 ±0,09* 3,71 ±0,09 0,22±0,03

2 неделя 4,86±0,09 0,55±0,03 4,31 ±0,13 0,92±0,03

3 неделя 4,75±0,25 2,06±0,72 2,87±0,27 0,73±0,26

4 неделя 6,03±0,49* 1,55±0,08* 4,13±0,13 0,58±0,02

Примечание: * Р < 0,00!

У крыс, содержавшихся в телятнике, он изменялся с 0,17 до 1,09, в то время как в виварии альбумин-глобулиновый коэффициент изменялся с 0,22 до 0,58. Такие различия связаны с повышением чувствительности организма крысят на чрезмерное содержание микрофлоры в воздухе телятника и повышением уровня ЦИК.

Результаты исследования лизоцимной активности крыс, содержавшихся в телятнике (табл. 5), свидетельствуют о том, что лизоцимная активность сыворотки крови повышается с первой (12,08%) по третью неделю измерений (15,08%), в последнюю неделю периода — идет снижение (9,7%).

Вероятно, это обусловлено особенностями реакции крыс на изменения условий внешней среды и общую обсемененность помещений, так как лизоцим является универсальным ферментом, обладающим выраженным действием на многие виды микроорганизмов.

Таблица 5

Бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови крыс (М±т; в %)

Время исслсловаиия Показатели активности

бактерицидной лизоцимной

1 2 3

Крысы, содержащиеся в телятнике (5 гол.)

1 неделя 57,0±2,07* 12,08±1,07

2 неделя 62,3±2,63 24,37±3,45

3 неделя 66,18+2,36 15,08±1,48

4 неделя 23,0±0,80* 9,70±0,90

таты — жидкость бесцветная с содержанием обильного осадка эритроцитов. На 12-й день отмечается ясная задержка гемолиза эритроцитов -жидкость бесцветная с содержанием осадка эритроцитов. На 13-й и 14-й день наблюдается частичный гемолиз эритроцитов — жидкость имела слабое розовое помутнение. На 15-й день отмечали задержку гемолиза эритроцитов — жидкость имела розовый цвет и слабый осадок. На 16-й день отмечали слабые следы задержки гемолиза, т.е. сильный гемолиз и отсутствие осадка. На 17-й день — полный гемолиз - жидкость имела интенсивный розовый цвет и отсутствие осадка эритроцитов.

На основании полученных данных можно предположить, что иммунный ответ организма крыс на микрофлору воздуха наступает на 16—17 день.

Таблица 6

Время проявления иммунной реакции у крысят к микрофлоре воздуха (реакция гемолиза эритроцитов)

Возраст крыс (в днях) Степень гемолша эритроцитов

Номера животных

1 2 3 4 5

10 - - - - -

11 - - - - -

12 ± ± ± ± ±

13 + + + + +

14 + + + + +

15 ++ ++ ++ ++ ++

16 +++ +++ +++ +++ +++

17 -Н-Н- ++++ ++++ ++++ ++++

Примечание: - - полная задержка гемолиза; ± ясная задержка гемолиза; + частная задержка гемолиза; ++ слабая задержка гемолиза; +++ следы задержки гемолиза; ++++ полный гемолиз.

ВЫВОДЫ

1. Новое устройство обеспечивает более качественное улавливание микроорганизмов из воздуха животноводческого помещения за счет наличия конусообразной емкости с крышкой, в верхней части которой установлен фильтр, а в средней части конусооб-

разной емкости выполнено отверстие малого диаметра под острым углом к вертикальной оси конусообразной емкости, при этом прибор снабжен съемной насадкой с крышкой и вспомогательным фильтром, последний выполнен с возможностью фиксации с помощью уплотнительного кольца и крышки.

2. Конструктивные особенности прибора обеспечивают возможность определения общего количества микроорганизмов, санитарно-показательных микроорганизмов. Сущность метода заключается в фильтрации улавливающей жидкости через фильтр, находящийся в улавливателе, и концентрировании микроорганизмов на поверхности фильтра, выращивании их при 37 °С на среде Эндо, дифференцировании выросших колоний и подсчете количества кишечных палочек в определенном объеме воздуха.

3. Показатели бактериальной обсемененности воздушной среды при использовании нашего прибора в 3—7 раз выше, чем при использовании известных седиментационных методов (по Коху).

4. Микробная контаминация воздуха исследуемых помещений изменялась по количественным и качественным показателям. Так, в телятнике общее количество микроорганизмов колебалось от 51,67+2,51 мк.т./л до 131,0±3,60 мк.т./л, коли-индекс составлял от 4,41+0,40 мк.т./л до 12,03±0,60 мк.т./л, содержание гемолитических кокков варьировало от 1,74±0,09 мк.т./л до 4,70±0,20 мк.т./л В виварии общее количество микроорганизмов колебалось от 20,77±0,65 мк.т/л до 42,67±3,05 мк.т/л, коли-индекс - от 2,92+0,07 мк.т./л до 8,83+0,25 мк.т./л, гемолитические кокки - от 1,ЗОЮ,06 мк.т./л до 4,49±0,07 мк.т/л.

5. Аллергическая альтерация лейкоцитов у крыс, помещенных в телятник в течение опыта, на сложный антиген увеличилася в 2,98 раза. У крыс, содержащихся в виварии, повреждение лейкоцитов увеличилось в 2 раза. Антиген из гемолитических бактерий к концу опыта в телятнике вызывал увеличение повреждения в 2,8 раза, в то время как крысы, содержавшиеся в виварии реагировали на подобный антиген менее интенсивно; увеличение составило в 1,5 раза. Антиген из кишечной палочки вызывал наибольшую альтерацию лейкоцитов. У крысят из телятника повреждение увеличилось в 3,6 раза, а у сверстников из вивария — в 2,92 раза.

6. В процессе исследования имело место увеличение ЦИК на 59,4%; если в начале показатель был 54 у.е., то в конце исследования -110у.е.

7. У крыс, содержавшихся в телятнике, наблюдалось достоверное снижение содержания лейкоцитов с 6,8±0,8х109/л до 4,6±0,5х109/л. Отмечено повышение количества эритроцитов с 5,85±0,3х1012/л до 6,7±0,4х1012/л. К концу опыта (4-я неделя)

наблюдали повышение скорости оседания эритроцитов с 4,9±0,27 до 7,8+0,5 мм/час.

8. Общий белок увеличивался независимо от способа содержания крыс. Наблюдали увеличение альбуминов и снижение глобулинов в сыворотке крови исследуемых животных, содержавшихся в телятнике, и увеличение глобулинов у животных, содержащихся в виварии. По бактерицидной и лизоцимной активности существенных различий между группами не установлено.

9. Иммунные реакции организма крыс на микрофлору окружающего воздуха начинают проявляться на 12-й день и становятся выраженными на 17-й день после рождения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Прибор для улавливания микроорганизмов (Пат. №2250257, МПК7 С 12 M 1/00, С 12 N 1 /00. / А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов, C.B. Труфанов; Пат. №37097, МПК7С12Ы 1/00 /АФ. Дмитриев, В.Ю. Морозов, Ю.В. Краснощекова).

2. Методические рекомендации «Исследование микробной обсеме-ненности воздуха животноводческих помещений» одобрены и утверждены научно-техническим советом МСХ Ставропольского края.

3. Разработанные нами устройства и методика для индикации и количественной оценки популяций могут использоваться при разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности животноводческих помещений.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Дмитриев, А.Ф., Морозов, В.Ю. Чувствительность организма телят к антигенам микрофлоры воздуха /А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов: Материалы II Международной научно-практической конференции. - Ставрополь, 2003. - С. 306—309.

2. Дмитриев, А.Ф., Морозов, В.Ю. Новая методика определения микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений / А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов: Материалы V Межрегиональной научной конференции «Студенческая наука — экономике России». - Ставрополь, 2005. - С. 198-199.

3. Дмитриев, А.Ф., Морозов В.Ю. Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений: Методические рекомендации / А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов - Ставрополь: Изд-во «АГРУС», 2005. - 28 с.

4. Морозов, В.Ю. Совершенствование устройства для микробиологического анализа воздуха / В.Ю. Морозов //Актуальные про-

блемы современной науки: Сб. науч. тр. / СтГАУ. - Ставрополь, 2004. - С. 99-103.

5. Пат. №2250257 Российская Федерация, МПК7 С 12 M 1/00, С 12 N 1/00. Прибор для улавливания микроорганизмов / А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов, C.B. Труфанов; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Ставропольский государственный аграрный университет. - №2003124273/13; заявл. 04.08.2003 г.; опубл. 20.04.2005, Бюл. №11 - 5 с.

6. Пат. №37097 Российская Федерация, МПК7 C12N 1/00. Прибордля улавливания микроорганизмов/А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов, Ю.В. Краснощекова; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Ставропольский государственный аграрный университет. — №2003134772/20; заявл. 01.12.2003; опубл. 10.04.2004, Бюл. №10 (1Уч). - 1 с.

7. Дмитриев, А.Ф., Морозов, В.Ю., Краснощекова, Ю.В. Прибор для улавливания микроорганизмов: Информ. листок №63-026-04 / ЦНТИ. - Ставрополь, 2004. - 3 с.

0164 99 ,

РНБ Русский фонд

2006-4 15140

Подписано в печать 30.08.2005 Формат 60x84'/,6 Бумага офсетная Гарнитура «Times». Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,4. Тираж 120 экз. Заказ №490.

Налоговая льгота — Общероссийский классификатор продукции ОК 005-93-953000.

Издательство Ставропольского государственного аграрного университета «АГРУС», г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12. Тел./факс (8652) 35-06-94. E-mail: agrus@stgau.ru; http://www.agrus.stgau.ru

Отпечатано в типографии издательско-полиграфического комплекса СтГАУ «АГРУС», г. Ставрополь, ул. Мира, 302.

Научно-технический прогресс, затрагивающий все стороны жизни общества, высокие темпы развития производства, рост городов, расширяющееся использование атмосферы и возрастающие масштабы воздействия человека на окружающую среду требуют повышенного внимания к охране атмосферного воздуха (Репин В. и др., 1986; Рыбаков Ю.А., 1997; Баранков А.И. и др., 1999; Павлова И.Б., 1999; Медведева М.В., 2003).

Атмосферный воздух является одним из основных жизненно важных элементов окружающей среды. В связи с этим необходимо предусматривать ряд мер по его охране от загрязнения (Елманов В.И., Терновская Г.Г., 1984; Иванов А.Н., 1985; Шимко О.В. и др., 1998; Сагг 1994).

V .

По оценке Всемирной организации здравоохранения, в настоящее время общее количество выбросов, ежегодно поступающих в атмосферу, оценивается в 3 млрд тонн пыли, причем антропогенные аэрозоли составляют 10-20%, а к 2009 году доля аэрозоля, обусловленная деятельностью человека, может возрасти более чем в 2 раза.

Большую опасность для животных и человека представляет биологическое загрязнение (контаминация) воздуха. К биологическим загрязнителям атмосферного воздуха, прежде всего, следует отнести живые микроорганизмы (Баранов В.А., Федорова В.М., 1985; МеШищ W., 1985; РюкгеШ., 1991).

В связи с интенсификацией животноводства, концентрацией поголовья на крупных промышленных комплексах создаются опасные предпосылки биологического загрязнения воздуха. Случаи загрязнения воздушного бассейна различными органическими веществами и микроорганизмами, выбросами ферм промышленного типа и комплексов из-за несовершенства технологических процессов или несоблюдения санитарно-гигиенических норм и требований довольно часты (Дубовой Б.Л., 1986; Дианов В.В., 1989; Гущин В.Н. и др., 1999; Dobrzanski Z., Mazurkiewicz М., 1986; Ducha J., Lara С., Rodriguez A.A., 1989; Pickrell J., 1991). На животноводческих объектах, особенно в специализированных хозяйствах, комплексах и птицефабриках с высокой плотностью размещения животных и птицы на ограниченных площадях воздушный бассейн ферм и окружающая их территория загрязняются в результате выброса из помещений во внешнюю среду пыли, микроорганизмов и газов. В воздухе закрытых животноводческих и птицеводческих помещений содержатся аммиак, сероводород, токсические продукты гниения и брожения органических веществ (индол, скатол, меркаптаны, кетоны, амидосоединения, метан, пропан, бутан, сульфиды), микроорганизмы, пыль (Батурина Ф.М., Сухоруков А.П., 1997г.; Dobrzanski Z., Latala A., Grzegorzak А., 1986; Hauser R.H., Folsch D.W., 1988; Pickrell J., 1991)

По мнению многих ученых (Кобозев В.И., Карташова А.Н., Нужнова Т.И., 1991; Гущин В.Н. 1999; Adam Т., Erter L., Mauer G., 1983; Blom J.Y., 1984), от условий содержания животных во многом зависит как их резистентность, так и экономическая эффективность ведения той или иной отрасли животноводства, поэтому при санитарно-гигиенической оценке помещений особое внимание уделяется микробной обсемененности воздуха (Байков Б.Д., Петков Г., 1987; Баранков А.И. и др., 1999). Наибольшую опасность загрязнения воздушного бассейна представляет навоз. При отсутствии навозохранилищ на территории ферм, как правило, накапливается значительное количество необеззараженного навоза. Из-за неблагополучия многих хозяйств Южного федерального округа по хроническим инфекциям навоз оказывается контаминированным их возбудителями. Высокая засушливость и сильные ветры, характерные для этого региона, способствуют загрязнению воздушного бассейна (Батурина Ф.М., Сухоруков А.П., 1997). Все • это осложняет эпизоотическую и эпидемическую обстановку.

Значительное количество биологических загрязнений выбрасывается в атмосферу вытяжной вентиляционной системой крупных животноводческих комплексов и птицефабрик (Иванов А.Н., 1985; Артюх О.М., Наплекова H.H., 1986; Меркулов Б., Меркулов К., 1986; Дианов В.В., 1987; Байков Б.Д., ПетковГ., 1987; Гизатулин А.Н., 1996; Рыбаков Ю.А., 1997; Бригадиров Ю.Н., 1999; Вильданов Р.Х., 2003; Raczkiewicz J., Dudkiewicz J., Mardarowicz L., Obal H., 1984). Высокая степень обсемененности воздушной среды и других объектов животноводческих помещений является характерной для современных ферм, а особенно при длительном стойловом содержании ^ животных.

Важным направлением профилактической работы в условиях животноводческих комплексов является создание высокого уровня ветеринарно-санитарной культуры и охраны ферм от заноса и распространения возбудителей болезней (Федоров Н.М., 1989). Что касается условно-патогенной микрофлоры, то она очень широко распространена в природе, встречается в организме здоровых животных и, в основных элементах внешней среды (Сивак Е.М., 1984; Баранов В.А., Федорова В.М., 1985; Шимко О.В. и др., 1998; Вавина О.В. и др., 1999; Vengglovsky J., Juris Р., 1989). Достичь полного уничтожения этой микрофлоры очень трудно да и нецелесообразно. Микромир животноводческого помещения с содержащимися в нем, животными ^ представляет единое целое (Шимко В.В. и др., 1998). На каждой животноводческой ферме создается своя экологическая среда со сложным и чрезвычайно широким диапазоном патогенных воздействий на организм животных (Вавина О.В. и др., 1999).

Своевременная индикация микроорганизмов в организме животных и основных элементах внешней среды, количественная и качественная оценка популяций позволит предвидеть возможность возникновения, развития и распространения болезней. Систематический контроль обсемененности воздушной среды микроорганизмами, снижение их пороговой численности является необходимым условием научной организации ветеринарно-санитарных мероприятий на животноводческих фермах (Каришев Ш.Э., 1993; Баранков А.И., Недосеков В.А., Крыштон Б.А. 1999; Гудкин А.Ф., 1999; Лумбунов С. и др., 1999).

Объективная оценка микробного фона воздушной среды может быть проведена в результате применения эффективных методов обнаружения и анализа биологических аэрозолей (Евдокимов B.JI. и др., 1980; Боровик Э.Б. и др., 1983; Игнаткин В.И., 1987; Кизеров A.A., 1987; Кобозев В.И., Карташова А.Н., 1991; Соколов Г.А., Кобозев В.И., Закревский М.И., 1996; Нифонтов И.О. и др., 2000; Дмитриев А.Ф., Морозов В.Ю., 2005; Moll G., Staudt В., Mickwitz G., 1990).

В настоящей работе предпринята попытка обобщить данные, касающиеся микробиологической оценки воздуха животноводческих помещений. При этом имеется в виду, что роль микрофлоры .сводится к возникновению у животных микробных стрессов, или «стойловых истощений» (Могиленко А.Ф., 1990; Апатенко В.М., 1992; Буянов A.A., 1993; Баранников В.Д., 1998; Вавина О.В. и др., 1999; VischerL.W.A., 1987).

Экология ветеринарно-значимых микроорганизмов, особенно условно-патогенных, не приобрела пока четко обозначенного научного направления

Данилевский В.М., 1981; Батурина Ф.М., Сухоруков А.П., 1997). ;

Животноводческое помещение и содержащиеся в нем животные представляют собой экологическую систему с совокупностью совместно обитающих микрои макроорганизмов и условий их существования, находящихся в закономерной связи друг с другом (Шишко В.В. и др., 1998) Значению условно-патогенной микрофлоре, а также представителям естественной микрофлоры воздуха (споры микроскопических грибов, другие сапрофиты) в настоящее время не уделяется должного внимания (Олефгер А.И., 1985; Мищенко С.А., 1987; Немилов В.А., 1981; Нужнова Т.И., 1991). А между тем, эта микрофлора (даже убитая) может оказывать весьма существенное влияние на иммунную систему животного организма (Прокопенко A.A., 1997). В одном случае, она стимулирует защитные реакции организма, в другом, наоборот, угнетает или обусловливает возникновение иммунопатологических состояний (Обгольц A.A., 1980; Могиленко А!Ф., 1990). Чем интенсивнее антигенное воздействие на организм, тем шире круг систем, находящихся в состоянии деструкции, и тем многограннее приспособительные процессы со стороны неповрежденных структур, обеспечивающих сохранение жизни (Ковач Ф., 1984). Неблагоприятные факторы ослабляют устойчивость к экстремальных факторам внешней среды и снижают «порог» заражения, в том числе и к условно-патогенным микроорганизмам (Серегин И., Логинов И., Малявин А., Цириди Г., 1982). Процесс функционального становления иммунной системы, т.е. приобретение специфических свойств защиты, осуществляется под непосредственным влиянием естественных антигенных стимулов, в качестве которых выступают микроорганизмы. Это становление затрагивает все уровни иммунной системы и характеризуется динамической беспрерывностью в связи с необходимостью постоянного обновления клеточных популяций, участвующих в иммунном ответе (Обгольц A.A., 1980). Таким образом, развитие процессов адаптации условно стирает грань между нормой и патологией (Ковач Ф., 1983). Особое значение эти вопросы приобретают при длительном стойловом содержании животных, отсутствии условий для проведения тщательной санации животноводческих помещений и степени f s изменений чувствительности животных к различным физиологическим группам микроорганизмов. Принцип профилактики заболеваний, обусловленных условно-патогенной микрофлорой, должен базироваться на знании допустимого количества и свойств этой микрофлоры в окружающей среде (Олефгер А.И., 1985; Дубовой Б.Л., 1986; Дианов В.В., 1987; Прокопенко A.A., 1997; Недосеков В.А., 1999).

Особый интерес представляет изучение микрофлоры воздуха помещений для новорожденных животных (Емельяненко П.А., 1999), так как она оказывает j существенное влияние не только на'формирование иммунного статуса, но и на возникновение заболеваний с массовым охватом поголовья.

Целью наших исследований является разработка прибора для улавливания микроорганизмов, изучение количественного и качественного состава микрофлоры воздуха животноводческого помещения и ее влияние на становление иммунного статуса животных. i

В связи с этим перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ существующих методов и устройств для индикации микрофлоры в воздушной среде.

2. Разработать прибор для улавливания микроорганизмов из воздуха и методику его применения.

3. Провести сравнительные испытания предлагаемого устройства с известными.

4. Изучить качественный и количественный состав микроорганизм воздушной среды различных животноводческих помещений.

5. Определить чувствительность организма молодняка крыс к воздушной микрофлоре, накапливающейся в помещениях.

Научная новизна. Разработано устройство «Прибор для улавливания микроорганизмов» (Патент на полезную модель № 37097; Патент РФ на изобретение №2250257); разработана и утверждена методика по определению микрофлоры в воздушной среде, установлено влияние микроорганизмов воздушной среды на становление иммунного статуса молодняка животных.

Практическая ценность работы. Изготовлено, испытано устройство и методика качественного и количественного определения микрофлоры в воздухе помещений, позволяющее быстро провести оценку микробного пейзажа воздушной среды. Устройство может использоваться при разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности воздуха помещений, в которых по условиям технологии требуется определенная степень' чистоты, и при разработке систем мероприятий, направленных на оздоровление воздушной среды. При изучении иммунобиологического ответа на микрофлору воздуха животноводческого помещения установлена возможность применения уровня циркулирующих иммунокомплексов крови для определения степени антигенного влияния микрофлоры воздуха на организм молодняка и может применяться в качестве критерия при разработке научнообоснованных мер по профилактике заболеваний молодняка и повышению его сохранности.

Положения, выносимые на защиту:

1. Устройство для улавливания микроорганизмов, которое обеспечивает повышение количества выделяемых микроорганизмов из воздуха и степени его очистки.

2. Методика индикации микроорганизмов и определение коли-индекса воздуха.

3. Микрофлора, накапливающаяся в воздухе животноводческих V помещений является фактором, повышающим чувствительность организма к микробным антигенам.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены, одобрены на научных конференциях: XI итоговой (межвузовской) научной конференции молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2003); II Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных», (Ставрополь, 2003); X ежегодной международной научной конференции «Медико-биологические проблемы экологической безопасности агропромышленного комплекса», (Москва, Сергиев Посад, 2004); V межрегиональной научной конференции «Студенческая наука - экономике РОССИИ», (Ставрополь, 2005); 68-ой и 69-ой научно-практических конференциях «Наука - региону», (Ставрополь, 20042005). *

Публикация. По теме диссертации опубликовано три научные статьи, один информационный листок, получено один патент на полезную модель и один патент на изобретение,' изданы методические рекомендации утвержденные методическим советом МСХ Ставропольского края.

Структура диссертации. Работа изложена на 130 страницах состоит из: введения, аналитического обзора, собственных исследований, выводов и практических предложений, приложений. Диссертация содержит 10 рисунков и 9 таблиц. Список использованной литературы включает 185 источников, в том числе 24 зарубежных.

2. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР

4. Выводы

1. Новое устройство обеспечивает более качественное улавливание микроорганизмов из воздуха животноводческого помещения за счёт наличия конусообразной ёмкости с крышкой, в верхней части которой установлен фильтр, а в средней части конусообразной ёмкости выполнено отверстие малого диаметра под острым углом к вертикальной оси конусообразной ёмкости, при этом прибор снабжён съёмной насадкой с крышкой и вспомогательным фильтром, последний выполнен с возможностью, фиксации с помощью уплотнительного кольца и крышки.

2. Конструктивные особенности прибора обеспечивают возможность определения общего количества микроорганизмов, санитарно-показательных микроорганизмов и определение коли-индекса воздуха. Сущность метода заключается в фильтрации улавливающей жидкости через фильтр, находящийся в улавливателе, и концентрировании микроорганизмов на поверхности фильтра, выращивании их при 37°С на среде Эндо, дифференцировании выросших колоний и подсчете количества кишечных палочек в определенном объеме воздуха.

3. Показатели бактериальной обсемененности воздушной среды при использовании нашего прибора в 3-7 раз выше, чем при использовании известных седиментационных методов (по Коху).

4. Микробная контаминация воздуха исследуемых помещений изменялась по количественным и качественным показателям. Так в телятнике общее количество микроорганизмов колебалось от 51,67±2,51 мк.т./л до 131,0±3,60 мк.т./л, коли-индекс составлял от 4,41±0,40 мк.т./л до 12,03±0,60 мк.т./л, содержание гемолитических кокков варьировало от 1,74±0,09 мк.т./л до 4,70±0„20 мк.т./л. В виварии общее количество микроорганизмов колебалось от 20,77±0,65 мк.т/л до 42,67±3,05 мк.т/л, коли-индекс от 2,92±0,07 мк.т./л до 8,83±0,25 мк.т./л, гемолитические кокки от 1,30±0,06 мк.т./л до 4,49±0,07 мк.т/л.

5. Аллергическая альтерация лейкоцитов у крыс, помещённых в телятник I в течение опыта на сложный антиген увеличился в 2,98 раза. У крыс, содержащихся в виварии повреждение лейкоцитов увеличилось в 2 раза. Антиген из гемолитических бактерий к концу опыта в телятнике вызывал увеличение повреждения в 2,8 раза, в то время как крысы, содержавшиеся в виварии реагировали на подобный антиген менее интенсивно, увеличение составило в 1,5 раза. Антиген из кишечной палочки вызывал наибольшую альтерацию лейкоцитов. У крысят из телятника повреждение увеличилось в 3,6 раза, а у сверстников из вивария в 2,92 раза.

6. В процессе исследования имело место увеличение ЦИК на 59,4%, если в начале показатель был 54 у.е., то в конце исследования 110 у.е.

7. У крыс, содержавшихся в телятнике, наблюдалось достоверное снижение содержания лейкоцитов с 6,8±0,8х109/л до 4,6±0,5х109/л.

19

Отмечено повышение количества эритроцитов с 5,85±0,3х10 /л до 10

6,7±0,4х10 /л. К концу опыта (4-я неделя) наблюдали повышение скорости оседания эритроцитов с 4,9±0,27 до 7,8±0,5 мм/час.

8. Общий белок увеличивался, не зависимо от способа содержания крыс. Наблюдали увеличение альбуминов и снижение глобулинов в сыворотке крови исследуемых животных содержавшихся в телятнике и увеличение глобулинов у животных, содержащихся в виварии. По бактерицидной и лизоцимной активности существенных различий между группами не установлено.

9. Иммунные реакции организма крыс на микрофлору окружающего воздуха начинают проявляться на 12-й день и становятся выраженными на 17-й день после рождения.

Практические предложения:

1. Прибор для улавливания микроорганизмов (Пат. №2250257, МПК7 С 12 . М 1/00, С 12 N 1/00 / Дмитриев А. Ф., Морозов В. Ю., Труфанов С. В.;

Пат. №37097, МПК7 С 12 N 1/00 / Дмитриев А. Ф., Морозов В. Ю., Краснощекова Ю. В.).

2. Методические рекомендации «Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений», одобрены и утверждены научно-техническим советом МСХ Ставропольского края.

3. Разработанные нами устройства и методика для индикации и количественной оценки популяций могут использоваться при разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности животноводческих помещений.